JPH0216989A

JPH0216989A - ω６系不飽和脂胞酸含有リン脂質の製造法

Info

Publication number: JPH0216989A
Application number: JP16666988A
Authority: JP
Inventors: Hideo Kikuji; 英雄菊次
Original assignee: Idemitsu Petrochemical Co Ltd
Current assignee: Idemitsu Petrochemical Co Ltd
Priority date: 1988-07-06
Filing date: 1988-07-06
Publication date: 1990-01-19
Anticipated expiration: 2009-01-12
Also published as: JPH062068B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野コ本発明はω６系不飽和脂肪酸含有リン脂質の製造法に関
し、詳しくは特定の微生物を用いてω６系不飽和脂肪酸
を高含量で含むω６系不飽和脂肪酸含有リン脂質を製造
する方法に関する。

［従来の技術及び発明が解決しようとする課題］リン脂
質は高等動物をはじめ各種生物中に含まれ、主として細
胞膜の構成物として生物中で重要な働きをしている。ま
た、各種生物体内で何らかの刺激により、リン脂質に結
合している不飽和脂肪酸が遊離してプロスタグランジン
等の生理活性物質へと変換される。

現在、工業的規模で生産されているリン脂質は大豆リン
脂質と卵黄リン脂質である。これらは天然界面活性剤で
あり、乳化作用１分散作用、湿潤作用などを利用して食
品、医薬品などの分野で使用されている。しかしながら
、これらのリン脂質は生理活性が十分でないという欠点
があった。

ところで、生理活性作用を持った脂肪酸としてγ−リノ
レン酸、ビス−ホモ−γ−リノレン酸。

アラキドン酸などの不飽和脂肪酸が知られている。この
ような不飽和脂肪酸を含有するリン脂質の製造方法とし
ては、モルティエレラ属に属する微生物を炭水化物を炭
素源とする培地で培養して得た菌体により採取された脂
質からγ−リノレン酸含有ホスファチジルコリンを分ｍ
濃縮する方法（特開昭６２−２５４１８９号公報）など
が知られている。

しかし、この方法ではγ−リノレン酸含量が少ないもの
しか得られず、十分な利用が期待できない。

［課題を解決するための手段］そこで、本発明者はω６系の不飽和脂肪酸を高含量で含
むリン脂質を生産する能力を有する微生物について検索
したところ、ムコール属またはコニディオボラス属に属
する微生物が該能力を有していることを見出し、零発咀
を完成した。

すなわち、本発明はムコール腐またはコニディオボラス
属に属し、ω６系不飽和胞肪酸含有胞質生産能を有する
微生物を、炭素源を含む培地に培養し、培養物からω６
系不飽和脂肪酸含有リン脂質を採取することを特徴とす
るω６系不飽和脂肪酸含有リン脂質の製造法を提併する
ものである。

本発明で用いる微生物は、ムコール属またはコニディオ
ボラス属に属し、ω６系不飽和脂肪酸生産能を有する微
生物である。具体的には、ムコール属微生物としてはム
コール・シルシネロイデス１１６２（ＦＥＲＭ　Ｐ−９
３６０）などが挙げられ、フニディオボラス属微生物と
してはコニディオボラス・ヘテロスポラス（Ｃｏｎｉ＋
Ｈｏｂｏｌｕｓ　ｈｅｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）　ＡＴＣ
Ｃ１２９４１、コニディオボラス・グロプリフェラス（
Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ　ｇｌｏｂｕｌｉｆｅｒｏｕ
ｓ）　　ＣＢ３２１８７６４．コニディオボラス・ナノ
デス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ　ｎａｎｏｄｅｓ）Ｃ
Ｂ５１８３／６２などが挙げられる。

本発明には上記微生物のほか、これらから誘導される変
異株であって上記のようにω６系不飽和脂肪酸含有脂質
を生産する能力を有するもの等も等しく使用することが
できる。

上記微生物を培養するための培地は、該微生物が良く生
育して目的とするリン脂質を生産しうるものであればよ
く、炭素源、窒素源、無機塩類および必要により微生物
の生育に好適なアミノ酸等の成分を含むものが用いられ
る。炭素源としてはグルコース、でんぷん、廃糖蜜等の
糖類や酢酸ソーダなどが使用でき、特にグルコース等の
糖類が好適である。さらに、ムコール属の場合にはリノ
ール酸高含有油脂であるサフラワー油、ヒマワリ油など
を、コニディオボラス属の場合にはγ−リノレン酸含有
油脂である月見草油、ムコール属やモルティエレラ属に
属する糸状菌から抽出された微生物油脂、特に炭素数１
８以上の不飽和脂肪酸含有油脂等を必要に応じて加える
と、目的とするリン脂質の生産量を増大させることがで
きる。

また、窒素源としてはアンモニウム塩、酵母エキス、コ
ーン・ステイープ・リカー、ペプトンなどがあり、無機
塩類としてはマグネシウム塩、カルシウム塩、リン酸塩
、鉄塩、銅塩などがある。

培養にあたり、炭素源は培地に最初から全量を加えても
よいが、培養開始後適当な時期に追加することによって
γ−リノレン酸等のω６系不飽和脂肪酸含有リン脂質の
生産量を増大させることができる。グルコース等の炭素
源を培地に最初から加える場合、初発添加量が多過ぎる
と、微生物の生育に悪影響を及ぼすことがあるので、通
常は１０〜２５０　ｇｈとする。また、炭素源を培養中
に追加する場合、その時期１回数などは適宜決定すれば
よい。たとえば、グルコース等の炭素源の初発濃度を１
００〜ｚｏｏｇ＃として培養を行い、炭素源の大部分が
消費されたときに５０−ＩＱＯｇ／ｌ程度の炭素源を追
加（１回もしくは数回に分けて）することにより菌体の
増殖を高め、結果的にω６系不飽和脂肪酸高含量のリン
脂質の生産量を増すことができる。

その他の培養条件、たとえば温度９時間等は使用する微
生物の性質等を考えて目的とするリン脂質の生産量が高
くなるような条件を設定すればよい。通常は２０〜３２
℃、好ましくは２５〜３０ｔ、ｐＨ３〜７、好ましくは
３．５〜６ニテ６０〜１２０時間、好ましくは７０〜１
００時間行えばよい。

ω６系不飽和脂肪酸を含有するリン脂質は通常、微生物
菌体中、特に細胞膜に蓄積されるので、遠心分離法等の
常法により培養液を固・液分離し、該脂質を含む菌体を
得る。このようにして得られたリン脂質中のω６系不飽
和脂肪酸含量は３８〜５６％である。さらに、この菌体
な必要に応じ洗浄、乾燥することもできる。

また、必要により菌体をメタノール、エタノール、ジク
ロロメタン、クロロホルムなどの極性および非極性の有
機溶剤の任意の割合の混合物を用いて脂質抽出を行ない
、分離・精製することもできる。菌体を予めボールミル
で粉砕したのち脂質を抽出したり、有機溶媒中で粉砕し
てリン脂質を抽出することができる。抽出物を脱溶剤し
た後、アセトン分画を行い、アセトンに不溶な物質を集
めれば、リン脂質の粗分−物が得られる。さらに、得ら
れたすべての両分をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーで再分画すると、ω６系不飽和脂肪酸高含量のリン脂
質組成物が得られる。ただし、ここに示した分別法は１
例であり、本発明のリン脂質組成物の分画法がこれに限
定されるものではない。このようにして得られたリン脂
質中のω６系不飽和脂肪酸含量は８０〜９０％という高
い値である。

上述の方法により得られるリン脂質組成物は、ホスファ
チジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、リゾ
ホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノール
アミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン
酸などであり、またその構成脂肪酸はγ−リノレン酸、
ビスーポモγ−リノレン酸、アラキドン酸など炭素数１
８個以上で二重結合が３個以上のω６系高度不飽和脂肪
酸である。

また、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノー
ルアミン等はカラムクロマトグラフィー等の常法（特に
、液体クロマトグラフィーが好ましい。）により、ざら
にω６系不飽和脂肪酸を高含量のものとすることができ
る。例えば、ホスファチジルコリンを分取用液体カラム
クロマトグラフィーにより、各ピークごとにフラクショ
ンコレクターに分画し、得られた画分な各々、常法によ
りケン化分解、メチルエステル化した後、ガスクロマト
グラフィーで脂肪酸組成を測定し、γ−リノレン酸濃度
の高いものを目的物とする。ホスファチジルエタノール
アミンについても、同様にしてγ−リノレン酸濃度の高
いものを得ることができる。また、アラキドン酸、ビス
−ホモ−γ−リノレン酸濃度の高いホスファチジルコリ
ン、ホスファチジルエタノールアミンについても、同様
にして得ることができる。

［実施例］次に、本発明を実施例により説明する。

実施例１第１表に示したムコール用培地（ｐ）１４）８４！を１
０ρ容ジャーファーメンタ−に久れ、この培地にムコー
ル・シルシネロイデスＨＵＴ　１１２１（ＦＥＢＭＰ−
９３５９）を接種し、３０℃で３日間通気攪拌培養を行
なった。

男１表ムコール用培地コニディオボラス用培地グルコース　　　　１５０　　ｇ＃　　　　３０　　ｇ
／ｌ硫酸アンモニウム　１９．８　ｇ／ρ 酵母エキス　　　　　０．６　ｇ７１１　　　５　　ｇ
＃！ＭｇＳＯ４１，Ｏｇ＃　　　　１　　ｇｈＦｅＳＯ
４４０ｍｇ７１　　０．０１ｇ／ｊ！ペプトン　　　　
　　　　　　　　１０ｇ／オＫＨ２ＰＯ４９，Ｏｇ７１
　　　３　　ｇ／ｌ培養終了後、培養液をｔ濾過して菌
体を回収し、湿菌体を得た。この湿菌体７ｋｇをメタノ
ール２０Ｉｌ。

と共に破砕抽出した。得られた抽出液をエバポレーター
で約５００１１１１１まで濃縮し、ジクロロメタン３０
０ＩＩＩＪを加えて二層分離した。次いで、ジクロロメ
タン層を回収し、濃縮して約５０１の濃縮液を得た。こ
れにアセトンを４００ｍＡ加え、沈澱物をｔｐ遇した。

沈澱物は２回アセトンで洗浄し、約２０ｇの白色結晶を
得た。このものの脂肪酸組成を第３表に示す。このうち
２ｇをクロロホルムに溶解し、／／シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム：フコ−
ゲル。和光純薬製）に注入した。展開溶媒はクロロホル
ム／メタノール＝（））４：１（Ｉ＋）　３　：　２．
　　（ＩＩＴ）　１　：　４と分けて行なった。

この結果、（Ｉ）からはホスファチジルエタノールアミ
ンが（ｎ　）からはホスファチジルコリンが、（ＩＩ＋
　）からはその他のリン脂質が分画された。

続いて、ホスファチジルコリン１ｇを分取用液体クロマ
トグラフィー（カラム、　ｏＤｓ　、　ｍ媒；メタノー
ル・水ニアセトニトリルー９０．５ニア・２．５流速；
　１０ｍ１’／ｍ１ｎ）にてＵＶ２０５ｍｍで検出でき
るビ一りごとのフラクションを分取した。薄層クロマト
グラフィーでホスファチジルコリンであることを確認し
た後、ガスクロマトグラフィーにて脂肪酸組成を調べた
ところ、分取したものの中からγ−リノレン酸を９５％
含有したホスファチジルコリン４００ｍｇを得た。また
、ホスファチジルエタノールアミンを分取用液体クロマ
トグラフィーで分取したところ、約２ｏｏｍｇのγ−リ
ノレン酸を９０％以上含んだホスファデジルエタノール
アミンが得られた。この結果を第２表に示す。

第　　２　　表実施例２第１表に示したコニディオボラス用培地にγリルン酸含
有油（モルティエレラ属菌体からの抽出油脂ニオレイン
酸４３％、リノール酸１１％１γ−リノレン酸８％）を
培地に対して３　ｖｏｊ！％　となるように加えた培地
を作製した。この培地にコニディオボラス・ヘテロスポ
ラス八ＴＣＣ１２９４１を接種し、３０℃で２日間振ど
う培養した。

培養終了後、遠心分離により菌体を集菌し、湿菌体を得
た。この湿菌体から、実施例１と同様の方法でリン脂質
を抽出したところ、２０ｇの粗リン脂質が得られた。こ
のものの脂肪酸組成を第３表に示す。

第３表ルコリン２０３ｍｇが得られた。また、ホスファチジル
エタノールアミン１ｇを分取用液体クロマトグラフィー
で分取したところ、ビス−ホモ−γ−リノレン酸を５０
％以上含有したホスファチジルエタノールアミン１２ｍ
ｇとアラキドン酸を８０％以上含有したホスファチジル
エタノールアミン１７８ｍｇが得られた。この結果を第
４表に示す。

第４表得られた粗リン脂質を、実施例１と同様の方法でシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィーにて分画したところ、約
５ｇのホスファチジルコリンと約２ｇのホスファチジル
エタノールアミンが得られた。

得られたホスファチジルコリン１ｇを、実施例１と同様
の方法で分取用液体クロマトグラフィーにて分取したと
ころ、ビス−ホモ−γ−リノレン酸を５０％以上含有し
たホスファチジルコリン２４ｍｇとアラキドン酸を８０
％以上含有したホスファチジ［発明の効果］本発明によれば、ω６系不飽和脂肪酸を高含量で含むリ
ン脂質を得ることができる上に、さらにカラムクロマト
グラフィー等で分画　精製することにより、ω６系不飽
和脂肪酸が高含量のボスファヂシルコリン、ホスファチ
ジルエタノールアミン等のリン脂質を容易に得ることが
できる。

得られたリン脂質は生理活性が高く、医薬品。

リポソームの原料１食品、化粧品等の分野において利用
が期待される。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ムコール属またはコニディオボラス属に属し、ω
６系不飽和胞肪酸含有胞質生産能を有する微生物を、炭
素源を含む培地に培養し、培養物からω６系不飽和脂肪
酸含有リン脂質を採取することを特徴とするω６系不飽
和脂肪酸含有リン脂質の製造法。
（２）ω６系不飽和脂肪酸がγ−リノレン酸、ビス−ホ
モ−γ−リノレン酸およびアラキドン酸のいずれかであ
り、リン脂質がホスファチジルコリンまたはホスファチ
ジルエタノールアミンである請求項１記載の製造法。