JP6120774B2 - 直接的および遅発的効果を有する膣乾燥のための多目的ゲル剤 - Google Patents

Description

本発明は、ウシ初乳から抽出した免疫メディエーター、増殖因子、走化性因子および抗菌性(antibacterial)／抗ウイルス性因子ならびに場合によっては補足的な活性を有する他の成分を含む、ゲル状の膣用局所組成物に関する。

従来技術
生理的条件下において、膣の生態系は、密接に相互依存している因子であるホルモンバランス、ｐＨおよび免疫反応によって調節される微生物叢の動的平衡である。膣壁の細胞は、前記バランス、特に、上皮の表層および中間層の維持において重要な役割を果たし、その増殖および成熟はホルモンと関係がある。

膣粘膜は、血漿漏出液、頸管粘液および前庭腺分泌液からなる透明な分泌液として検査時に視認可能な体液で通常は湿っている。前記体液はまた、保護表面機能を体液に与える抗微生物性（antimicrobial）物質を含む。膣分泌液の５％は膣漏出液からなり、９５％は頸管粘液およびその中に流れ込む分泌液からなる。この粘液は、その粘性および溶出特性を介する機械的作用によって、およびこの粘液は抗体（ＩｇＧおよびＩｇＡ）、サイトカインおよび抗菌性因子を含むことが理由で、微生物の定着化を妨げる。

「膣乾燥」は、閉経期年齢によくある状態である。妊娠可能年齢の患者が膣乾燥に見舞われた場合は、あまり一般的ではないが同様に不快である。

高齢女性では、閉経期の低エストロゲン症および排尿習慣は広く認められる要因であるが、妊娠可能年齢の女性では、その原因はまた、低用量の複合エストロゲン−プロゲストゲン避妊薬の使用、タンポン、ストレスなどで説明することができる。

症状は、特に***中の疼痛、刺痛およびそう痒からなり、持続する傾向がある。バルトリン（Ｂａｒｔｏｌｉｎｉ’ｓ）腺およびスキーン腺は、粘液を産生するのが当然であり、これは「潤滑液」として必要不可欠であり、***を正常に行うのに役立つ。しかし、障害がある場合はこの産生は起こらないため、患者に不快感を生じさせる。膣および外陰部の潤滑が不十分であることによって、刺痛、そう痒および***疼痛などの一連の障害が女性に起こることが多い。適度な刺激物の刺激に対してさえも強い感受性があり、膣症および膣炎のエピソードもより頻繁にある。この障害は、泌尿器の刺痛の形でかなり頻繁に排尿障害に付随する。膣鏡検査で頻繁に見られることとしては、シラー試験時のヨウ素の不規則な取り込みがある。

こうした障害の治療に対して、ホルモンベースの多数の医薬が提案されてきている。残念ながら、こうした生成物の全てに関して***腫瘍、特に面皰癌の発生率増加の疑念がある。植物エストロゲンを基にする多くの生成物が提案されてきているが、こうしたケースにおいて、乳癌の危険性についての科学的証拠も存在する。ダイズイソフラボンは、対照と比較してマウスＭＣＦ−７腫瘍株について９７％の増殖を引き起こす。

国際公開第２０１０／０６０８８６号パンフレット

搾られた時間から凍結中の微生物汚染の増加を示すグラフである。 微生物緯線と防腐剤の濃度との間の関係を示す表である。 防腐剤である安息香酸ナトリウムとソルビン酸カリウムの減少を示すグラフである。 治療後の細胞学的検査の結果を示す。 治療後の細胞学的検査の結果を示す。 治療後の細胞学的検査の結果を示す。 治療後の細胞学的検査の結果を示す。

したがって、天然物質に基づく生成物が必要であり、それは、
− 膣の生態系を変化させないが、バランスを回復し維持するのに役立ち、その防御力を高め、
− 生理的な膣分泌液と類似しており、即座に緩和し、同時に完全な状態の粘膜の再構築および維持を促進する、ゲル製剤中に存在し、
− 活性成分部分をすばやく放出し、かつ次の投与との間の期間をカバーする持続的な治療効果をもたらすために低速放出ベースで(slow-release basis)放出する。

本発明の説明
活性成分として、免疫グロブリン、増殖因子、走化性因子および抗菌性／抗ウイルス性因子が豊富な初乳画分を、一部は遊離即時放出形態で、一部は制御放出形態で、好ましくは粘膜付着性のミクロビーズにカプセル化して含む製剤によって、これらの目的が達成されることがここに判明した。

粘膜付着性のミクロスフェアは、ＳＰＨＥＲＵＬＩＴＥ（登録商標）という名称で市販品として入手可能であり、またはＷＯ２０１００６０８８６（特許文献１）に従って調製することができる。

本発明による組成物は、他の成分、特にパンテノール、ベタイン、セリシン、ビタミンＥ、マカ（Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｍｅｈｅｎｉｉ）抽出物およびアロエベラ（Ａｌｏｅ ｖｅｒａ）を好ましくは含む。

本発明による組成物は、閉経前、閉経期および子宮摘出の女性、１０代の少女、分娩後または母乳保育の女性、ストレス性乾燥を患う女性ならびにアンバランスな局部治療を過剰に用いる女性を治療するのに有利に使用される。

本発明によるゲル剤に使用可能な初乳画分は、ウシ初乳、特にホルスタイン種（フリージアン種）およびガーンジー種の雌ウシから得られうる。これらの雌ウシは、最高濃度の増殖因子、免疫モジュレーター、走化性因子および抗菌性／抗ウイルス性因子を有する初乳を産生することが示されている。雌ウシは、２回または３回目の出産が好ましい。初乳は、出産してから５から６時間後（初乳５Ｈ）の間に集めるのが好ましく、なぜならば最高濃度の活性物質がその期間中に見出されるためである。１時間内に集められた初乳は低濃度の活性物質を含み、一方６時間後からは活性因子は急速に減少する（出産してから２４時間後では、わずか１５％しか存在しない）。

集めた初乳５Ｈを、結核、細胞培養による細胞毒性、マイコプラズマ、プリオンならびにヒトおよびウシのウイルスに関して検査する。

***腔中の初乳は事実上無菌であるが、一度乳を搾られると、あらゆる予防策にもかかわらず高濃度の増殖因子が原因で、凍結融解の間にその細菌数はきわめて急速に増加する。これは、高密度の初乳を考慮すると、最初の数時間内はある程度ゆっくりとした進行である（図１）。

食用に許容される防腐剤濃度ならびに非経口および／または静脈内用途に許容される防腐剤濃度は、細菌数を抑えるのに十分でない。γ線の使用は、１０Ｋｇｙを超える照射を用いる場合は無菌初乳だけを産生するが、これによって活性因子の大部分が破壊され、いずれにしても、この方法は発熱物質の形成を防止せず、その静脈内および／または局所用途は血液およびリンパ節と接触している領域では禁止されている。したがって、防腐剤または発熱物質が存在しない、無菌でアレルゲンを含まない化合物を得るための革新的な収集システムが考案されている。

無菌および発熱物質がないことを保証するのに十分な量の防腐剤を（２５Ｋｇｙで殺菌された空の）滅菌したタンク中に集められた初乳に添加する（図２）。ソルビン酸カリウムおよび安息香酸ナトリウムは、それぞれ（通常の使用、すなわち０．２％よりもはるかに高い濃度である）１２．５％の濃度で好ましくは使用し、あるいは、２．５％濃度のフェノキシエタノールまたは１％濃度のジアゾリジニル尿素を使用する（図３）。

したがって、処理した初乳は活性因子の抽出過程前に凍結保存する必要がなく、これは、生産コストの明らかな節約につながる。

次に、初乳を生理食塩水で希釈する。この希釈によって、フィルター孔の目詰りのないより良好な濾過がもたらされるだけでなく、何よりも、脂肪およびカゼインに結合した活性因子の放出が可能となる。したがって、希釈した初乳をタンジェンシャル精密濾過(tangential microfiltration)(２から６μｍのカットオフを有するセラミック膜、５／２０℃の温度、０．２から２バールの膜間圧力)することによって(これは繰り返して行ってもよい)、カゼイン、脂肪基部および乳タンパク質を含まない乳白色の溶液が得られる。これらの物質全て（カゼイン、脂肪基部および乳タンパク質）で、初乳および雌ウシの乳の９０％を超えるアレルギー性含有物が構成される。次に、この溶液を３００，０００ダルトンのカットオフを有する膜あるいはモレキュラシーブを通過させて、全てが２００，０００ダルトン未満の重さである活性因子をさらに精製する。

次に、この溶液を高圧で限外濾過(１０００／２０００ダルトンのカットオフ)することによって透析(dialysed)して、防腐剤(１５０ダルトン未満の分子量)を完全に除去し、次いで、直ぐに凍結乾燥する（図４）。生成物は、非常に溶解度が高く、最大可能濃度の活性因子を有する、無菌、発熱物質非含有、防腐剤非含有、非アレルギー性の粉末（カゼインおよびラクトアルブミンは、雌ウシの乳に対する９５％を超えるアレルギーの原因となる）である。

以下ＬＩＦＥＩＮＳＩＤＥ(商標)Ｍｕｃｏｓａと称するこの画分は、次の因子を含む：
免疫メディエーター
ＮＥＣ重複感染症の原因となるものもいる多くの細菌およびウイルスに対して天然の特異性を有する、Ｌｉｆｅｉｎｓｉｄｅ(商標)Ｍｕｃｏｓａ量の約６０％の割合(約５０％ＩｇＧ２および約１０％ＩｇＡ)のクラスＩｇＧ２およびＩｇＡ(ａ／ｍｇ)の免疫グロブリン。

補体Ｃ３／Ｃ４：補体は、生体膜および様々な細胞型の表面にある特定の受容体と相互作用することができる循環タンパク質からなり、感染と戦う炎症反応を誘導する。

抗菌性／抗ウイルス性因子
トランスフェリン、
ラクトフェリン、
リゾチーム、
ラクトペルオキシダーゼ。

増殖因子
・ＴＧＦ−β１−形質転換増殖因子：粘膜の免疫防御力に関与するクラスＡ免疫グロブリンの産生を促す。細胞増殖を調節し、細胞外マトリックスの沈着を促す
・ＥＧＦ−上皮増殖因子：粘膜の発達を制御する。上皮細胞形成を促進する
・ＩＧＦ１−インスリン様増殖因子：細胞の増殖、接着および移動を調節し、粘膜の成熟を誘導する
・ＶＥＧＦ−血管内皮増殖因子：血管産生を促す。細胞***促進活性および血管透過性の活性化を呈する
・ＦＧＦ−ｂ−塩基性線維芽細胞増殖因子：線維芽細胞、内皮細胞、星状細胞および角化細胞などの間葉に由来する細胞の増殖を促す。走化性因子およびファイトジェネティック(phytogenetic)因子として作用する
・ＧＨ−成長ホルモン：全組織の一般的な増殖因子
・ＧＨＲＦ−成長ホルモン放出因子
・ＮＧＦ−神経成長因子：交感神経系の活性を促し、その成長分化を制御する
・ＰＲＰ−プロリンリッチタンパク質：Ｔ細胞の成熟を促し、神経系、骨系および粘膜に関して再生作用を有する。

走化性因子
エオタキシン：ケモカイン受容体に結合して、炎症組織へ好酸球をリクルートする
ＩＰ−１０−ケモカイン(Chemochin)リガンド１０：インターフェロンγによって誘導され、炎症細胞を集合させる
ＭＣＰ−１単球走化性因子−１：炎症組織への単球の集合を促進する。

サイトカイン
ＩＬ−２：Ｔリンパ球の増殖を誘導する
ＩＬ−４：抗炎症活性を有する
ＩＬ−６：先天免疫および適応免疫を促す
ＩＬ−９：造血細胞の制御因子であり、細胞増殖を促しアポトーシスを防止する
ＩＬ−１７：ＮＦ−ＫＢ活性を制御し、一酸化窒素（ＮＯ）産生を高める
ＩＬ−１０：免疫制御および炎症において多面的効果を呈する。Ｂ細胞の生存を高め、それによって抗体産生を高める。ノックアウトマウスで行われた研究は、このタンパク質は粘膜の免疫制御に必須であることを示す。インターフェロン−γ：既知の抗ウイルス性、抗腫瘍性および免疫制御活性を呈する。強力なマクロファージ活性化因子であり、細菌およびウイルスに対する細胞性活動を活性化する
ＴＮＦ−α−腫瘍壊死因子：感染部位への好中球および単球の移動を促す。

上に列挙した物質を含む画分は、好都合なことには、補足的な活性または他の有用な活性を有する他の化合物と組み合わせることができる。以下の物質が好ましい。

ベタイン：ベタイン(トリメチルグリシン)は、サトウダイコンから抽出される植物由来の物質である。ベタインは、細胞代謝に必須の生化学的過程である、ある分子から別の分子へメチル基(ＣＨ３)が転移されるメチル基転移に関与する。体内では、ベタインはメチル基を失い、ジメチルグリシン(ビタミンＢ１５)へ変換される。この過程の間にエネルギーが産生されるが、これは、この化合物の有益な効果、すなわち不可解な疲労の消失ならびに循環系、心臓、アレルギーおよび細胞呼吸への好ましい効果に関与していると考えられている。ベタインは、膣粘膜の保湿を即座に促進するのに有用であるその保湿性および湿潤性の特性の点からみて、特に敏感で繊細な皮膚および粘膜用に考案される生成物にとって理想的な成分である。

パンテノール：パントテン酸およびその還元型であるパンテノールは、局所適用で最も広く使用されているビタミンのうちの一つである。軟化剤、保湿剤およびコンディショナーとしての有効性が証明されている。多くのきわめて重要な機能を果たす。

・水分を保持する優れた能力を有し、それによって皮膚を柔らかくかつ弾性にするため、粘膜浸透後に内部活性保湿剤として働き、
・細胞増殖を促し、組織修復を助長し、
・正常な角化を促進し、
・その沈静特性のため、軽い創傷、わずかな擦り傷および小さな火傷の治癒を促進する。

ビタミンＥまたはトコフェロール、有毒な異化産物の形成ならびにフリーラジカルおよび過酸化物の形成が結果として生じるビタミンＡおよび脂肪酸の分解を防止することが可能な顕著な抗酸化活性を有する、脂溶性ビタミン。ビタミンＥは、細胞呼吸過程に入り、血管壁を強化し、生殖器官に対して重要な好ましい効果を有する。

セリシン(ＭＷ４００，０００)：保湿性、膜形成性であり、酸性度緩衝能力を有する。界面活性剤の攻撃性を軽減する。かなりの疎水性タンパク質親和性および優れた水保持能力を有し、そうした特性の両方とも分子量とともに増大する。膣保湿生成物で使用されることが多いヒアルロン酸と異なり、膜形成作用は閉塞性ではない。無処理のセリシンの場合は、好ましい治療的膜形成性作用は、他の因子が膣粘膜によって吸収されることを妨げない。

マカ(Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｍｅｙｅｎｉｉ抽出物)：あまり知られていない植物治療薬であり、高エネルギー食物である。そのエネルギー源、生殖能促進および媚薬効果のため、その人気は増している。マカ抽出物は、化学防御活性を有するグルコシノレートおよびイソチオシアネートを含む。女性では、マカ抽出物は生殖能を促進し、***を促し、閉経に付随する症状を緩和し、月経痛を和らげ、活力を与える効果を有する。

マカの成分は、エストロゲン依存性乳癌(ＭＣＦ−７腫瘍細胞)において示されたように、エストロゲン活性を持たない。

アロエベラ（Ａｌｏｅ ｖｅｒａ）は、再生、タンパク分解、創傷治癒、抗炎症、解熱、鎮痛、湿潤、静菌、ウイルス抑止、殺真菌および抗そう痒という有用な特性を有する。

本発明によるゲル製剤は、従来の賦形剤を用いて、既知の技術によって調製される。遊離型の初乳画分の濃度は、１から１０％の間で変動し得るが、一方カプセル化された制御放出形態のその濃度は、０．１から５％の間で変動する。

他の成分が存在する場合、そのおおよその濃度間隔を以下に述べる：
セリシン：０．５〜５％
パンテノール：０．１〜１％
ベタイン：１〜１０％
Ａｌｏｅ ｖｅｒａ抽出物：１〜５％
ビタミンＥ：０．１〜２％
Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｍｅｙｅｎｉｉ抽出物：１〜５％。

本発明を、例として挙げる以下の実験部分でより詳細に説明する
例１−活性因子を急速放出および低速放出する膣ゲル剤の定性的および定量的組成。

例２−臨床試験
例１で説明した膣ゲル剤を、ホルモン性のまたは機械的な理由、ストレス、アンバランスな局部治療、母乳保育、避妊薬などが原因の膣乾燥を患う、妊娠可能の、閉経前のおよび閉経期の３０人の女性に関して使用した。

表１は、一群の３０人の治療患者および２８人の対照に関する、シラー試験を用いた膣鏡検査の結果を示す。試験終了時の２群間の差異は、統計的に有意であった（ｐ＜０．０５）。

表２は、同一群における膣乾燥の存在および重症度に関する結果を示す。今回も差異は統計的に有意であった（ｐ＜０．０５、１日１回投与による２０日間の治療）。

即時放出と遅延放出との複合型膣ゲル剤の使用によって、膣乾燥に関連する臨床像および症状の明確な改善がもたらされた。対照群では、２０日後にわずか１６．７％の症例しか改善しなかったのに対し、治療群では８６．７％の症例が改善／治癒した。

治療後の細胞学的検査（図４〜７）によって以下が示される
・細胞充実度の増加
・成熟扁平上皮細胞の相対的増加
・基底細胞および傍基底細胞の相対的減少
・トロピズム(ｔｒｏｐｉｓｍ)の増加を示す炎症および多核組織球の存在。

Claims (12)

1. 免疫グロブリン、増殖因子、走化性因子および抗菌性／抗ウイルス性因子が豊富な初乳画分の、ゲル状の膣用局所組成物の製造における有効成分としての使用方法であって、
   前記初乳画分は、出産してから５から６時間後のウシから搾乳から以下の工程：
   − 無菌および無発熱原性を確実にするのに十分な濃度で初乳へ防腐剤を添加するステップ、
   − 生理食塩水で希釈するステップ、
   − ２から６μｍの範囲にわたるカットオフを有するセラミック膜を通して、タンジェンシャル精密濾過を１回または複数回行うステップ、
   − ３００，０００ダルトンのカットオフを有する膜またはモレキュラシーブを通過させるステップ、
   − 防腐剤を完全に除去するまで高圧限外濾過で透析（ｄｉａｌｙｓｉｓ）し、最後に
   凍結乾燥するステップ
   を含む方法により得られたものである
   ことを特徴とする前記初乳画分のゲル状の膣用局所組成物の製造における有効成分としての使用方法。
2. 前記ゲル状の膣用局所組成物が、
   クラスＩｇＧ２およびＩｇＡの免疫グロブリン、補体ｃ３／ｃ４、トランスフェリン、ラクトフェリン、リゾチーム、ラクトペルオキシダーゼ、ＴＧＦ−β１−形質転換増殖因子、ＥＧＦ−上皮増殖因子、ＩＧＦ１−インスリン様増殖因子、ＶＥＧＦ−血管内皮増殖因子、ＦＧＦ−ｂ−塩基性線維芽細胞増殖因子、ＧＨ−成長ホルモン、ＧＨＲＦ−成長ホルモン放出因子、ＮＧＦ−神経成長因子、プロリンリッチタンパク質、エオタキシン、ＩＰ−１０−ケモカインリガンド１０、ＭＣＰ−１ 単球走化性因子１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１７、ＩＬ−１０、インターフェロン−γおよびＴＮＦ−α−腫瘍壊死因子を含む、請求項１に記載の使用方法。
3. 前記初乳がガーンジー種またはホルスタイン種の雌ウシから得られる、請求項１または２に記載の使用方法。
4. 前記ゲル状の膣用局所組成物が、以下の成分、
   ａ）セリシン、
   ｂ）パンテノール、
   ｃ）ベタイン、
   ｄ）アロエベラ（Ａｌｏｅ ｖｅｒａ）抽出物、
   ｅ）ビタミンＥ、
   ｆ）マカ（Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｍｅｙｅｎｉｉ）抽出物
   のうちの１つまたは複数をさらに含む、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の使用方法。
5. 前記ゲル状の膣用局所組成物が膣乾燥を治療するための組成物である、請求項１乃至４のいずか１項に記載の使用方法。
6. 前記ゲル状の膣用局所組成物が、遊離形態と粘膜付着性のミクロビーズにカプセル化されている請求項１乃至５のいずれか１項に記載の使用方法。
7. ゲル状の膣用局所組成物の製剤化のための、免疫グロブリン、増殖因子、走化性因子および抗菌性／抗ウイルス性因子が豊富な初乳画分の製造方法であって、
   − 出産してから５から６時間後のウシから搾乳により初乳を得るステップ、
   − 無菌および無発熱原性を確実にするのに十分な濃度で初乳へ防腐剤を添加するステップ、
   − 生理食塩水で希釈するステップ、
   − ２から６μｍの範囲にわたるカットオフを有するセラミック膜を通して、タンジェンシャル精密濾過を１回または複数回行うステップ、
   − ３００，０００ダルトンのカットオフを有する膜またはモレキュラシーブを通過させるステップ、
   − 防腐剤を完全に除去するまで高圧限外濾過で透析（ｄｉａｌｙｓｉｓ）し、最後に凍結乾燥するステップ
   を有することを特徴とする前記初乳画分の製造方法。
8. 前記ゲル状の膣用局所組成物が、
   クラスＩｇＧ２およびＩｇＡの免疫グロブリン、補体ｃ３／ｃ４、トランスフェリン、ラクトフェリン、リゾチーム、ラクトペルオキシダーゼ、ＴＧＦ−β１−形質転換増殖因子、ＥＧＦ−上皮増殖因子、ＩＧＦ１−インスリン様増殖因子、ＶＥＧＦ−血管内皮増殖因子、ＦＧＦ−ｂ−塩基性線維芽細胞増殖因子、ＧＨ−成長ホルモン、ＧＨＲＦ−成長ホルモン放出因子、ＮＧＦ−神経成長因子、プロリンリッチタンパク質、エオタキシン、ＩＰ−１０−ケモカインリガンド１０、ＭＣＰ−１ 単球走化性因子１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１７、ＩＬ−１０、インターフェロン−γおよびＴＮＦ−α−腫瘍壊死因子を含む、請求項７に記載の製造方法。
9. 前記初乳がガーンジー種またはホルスタイン種の雌ウシから得られる、請求項７または８に記載の製造方法。
10. 前記ゲル状の膣用局所組成物が、以下の成分、
    ａ）セリシン、
    ｂ）パンテノール、
    ｃ）ベタイン、
    ｄ）アロエベラ（Ａｌｏｅ ｖｅｒａ）抽出物、
    ｅ）ビタミンＥ、
    ｆ）マカ（Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｍｅｙｅｎｉｉ）抽出物
    のうちの１つまたは複数をさらに含む、請求項７乃至９のいずれか１項に記載の製造方法。
11. 前記ゲル状の膣用局所組成物が膣乾燥を治療する組成物である、請求項７乃至１０のいずか１項に記載の製造方法。
12. 前記ゲル状の膣用局所組成物が、遊離形態と粘膜付着性のミクロビーズにカプセル化されている請求項７乃至１１のいずれか１項に記載の製造方法。

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