BR112013014081B1 - Composições vaginais tópicas na forma de gel - Google Patents

Abstract

composições vaginais tópicas na forma de gel a presente invenção refere-se a composições vaginais tópicas na forma de gel contendo mediadores imunes, fatores de crescimento, fatores quimiotáticos e fatores antibacteriais/antivirais extraídos de colostro bovino, e, opcionalmente, outros ingredientes com atividade complementar.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSIÇÕES VAGINAIS TÓPICAS NA FORMA DE GEL".

[001] A presente invenção refere-se a composições vaginais tópicas na forma de gel contendo mediadores imunes, fatores de crescimento, fatores quimiotáticos e fatores antibacterial/antiviral extraídos de colostro bovino, e, opcionalmente, outros ingredientes com atividade complementar. Técnica anterior [002] Sob condições fisiológicas, o ecosistema vaginal é um equilíbrio dinâmico de flora microbial modulado por equilíbrio de hormônio, o pH, e a resposta imune, que são fatores intimamente interdependentes. As células da parede vaginal desempenham um papel importante na manutenção do referido equilíbrio, especialmente as camadas superficiais e intermediárias do epitélio, cuja proliferação e maturidade são relacionadas a hormônio.

[003] A mucosa vaginal é normalmente umecedida por fluido, visível na inspeção como uma secreção clara consistindo de transudato de plasma, muco cervical e secreções de glândula vestibular. Referido fluido também contém substâncias antimicrobiais que dão a função de uma interfade protetora. 5% da secreção vaginal consistem de transu-dato vaginal, e 95% de muco cervical, e as secreções que fluem na mesma. O muco impede colonização microbial por meio de ação mecânica, através de suas propriedades de viscosidade e eluição, e porque ele contém anticorpos (IgG e IgA), citocinas, e fatores antibacteri-ais.

[004] “Secura vaginal” é uma condição frequente na idade da menopausa; ela é menos comum, mas igualmente desagradável quando afeta pacientes em idade de procriar.

[005] Enquanto que hipoestrogenismo menopausal e hábitos urinários são os fatores prevalecentes em mulheres mais idosas, em mu lheres em idade de procriar as causas podem também serem representadas pelo uso de contraceptivos de estrogênio-progestogênio combinados de baixa dose, tampões, estresse, etc.

[006] Os sintomas consistem em dor, queimação leve e prurido, particularmente durante relação sexual, e tendem a persistirem. As glândulas de Bartolini e de Skene devem produzir muco; isto é essencial como um “fluido lubrificante”, que é útil para desempenho normal de relação sexual. Contudo, quando o distúrbio está presente, esta produção não ocorre, causando, desse modo, desconforto para o paciente. Lubrificação vaginal e vulvar pobre causa frequentemente uma série de distúrbios nas mulheres, tais como queimação leve, prurido e dispareunia. Existe também maior sensibilidade a estímulo irritante ainda modesto, e episódios mais frequentes de vaginose e vaginite. O distúrbio é muito frequentemente associado com distúrbios de urina-ção, na forma de leve queimação urinária. Uma descoberta de colpos-copia frequente é aceitação de iodo irregular no Teste de Schiller.

[007] Numerosos medicamentos à base de hormônio foram propostos para o tratamento destes distúrbios. Infelizmente, existe é uma suspeita de incidência aumentada de tumores de seio, especialmente comedocarcinoma, para todos estes produtos. Muitos produtos baseados em fitoestrogênios foram propostos, mas evidência científica de um risco de câncer de seio também existe nestes casos: isoflavonas de soja induzem 97% de proliferação da linha de tumor de murina MCF-7 comparada com os controles.

[008] Existe, consequentemente, uma necessidade de um produto baseado em substâncias naturais que: - não alterar o ecosistema vaginal, mas ajudar a restaurar e manter o equilíbrio, e reforçar suas defesas; - são apresentados em uma forma de gelulação similar à secreção vaginal fisiológica e dão alívio imediato, ao mesmo tempo promovendo a reconstrução e manutenção da integridade da mucosa; - liberar parte dos ingredientes ativos rapidamente e parte em uma base de liberação lenta de modo a produzir um efeito terapêutico de longa duração que cobre o período entre administrações sucessivas.

Descrição da invenção [009] Descobriu-se agora que estes objetivos são alcançados por uma formulação contendo, como ingrediente ativo, uma fração de co-lostro enriquecida com imunoglobulinas, fatores de crescimento, fatores quimiotáticos e fatores antibacterial/antiviral, na forma de pronta liberação parcialmente livre e parcialmente na forma de liberação controlada, preferivelmente encapsulada microesferas mucoadesivas.

[0010] As microesferas mucoadesivas são comercialmente disponíveis sob o nome SPHERULITE®, ou podem ser preparadas de acordo com o WO 2010060886.

[0011] As composições, de acordo com a invenção, preferivelmente contêm outros ingredientes, especialmente pantenol, betaína, seri-cina, vitamina E, extrato de Lepidium mehenii (Maca), e Aloe vera.

[0012] As composições, de acordo com a invenção, são vantajosamente usadas para tratar mulheres pré-menopausais, menopausais e histerectomizadas, adolescentes, mulheres alimentado no seio e de pós-parto, mulheres que sofrem de secura relacionada a estresse, e mulheres que fazem uso excessivo de tratamentos locais desequilibrados.

[0013] A fração de colostro utilizável no gel, de acordo com a invenção, é obtida de colostro bovino, em particular, de vacas Holstein (Friesian) e Guernsey. Foi demonstrado que estas vacas produzem o colostro com a concentração mais alta de fatores de crescimento, mo-duladores imunes, fatores quimiotáticos e fatores antibacterial/antiviral. As vacas são preferivelmente em parto pela segunda ou terceira vez. O colostro é preferivelmente coletado entre a 5a e 6a hora após parto (colostro 5H), porque a concentração mais alta de substâncias ativas é encontrada durante este período. O colostro coletado na primeira hora contém uma concentração mais baixa de substâncias ativas, enquanto que a partir da sexta hora em diante, os fatores ativos declinam rapidamente (somente 15% estão presentes 24 horas após parto).

[0014] O colostro 5H coletado é testado para tuberculose, citoxici-dade em culturas de célula, micoplasma, prions e viroses humana e bovina.

[0015] O colostro na cisterna de úbere é praticamente estéril, mas uma vez ordenhado, apesar de todas as precauções, devido a alta concentração de fatores de crescimento, sua contagem de bactéria se eleva muito rapidamente durante congelamento e descongelamento, que são preferivelmente processos lentos em vista da alta densidade de colostro nas primeiras poucas horas (Fig. 1).

[0016] A concentração de conservantes permitida para uso dietéti-co e aquela permitida para uso parenteral e/ou intravenoso não é suficiente para cessar a contagem de bactéria. O uso de raios γ somente produz colostro estéril se radiação excedendo 10 Kgy é usada, mas isto destrói uma grande parte dos fatores ativos, e, em qualquer caso, este método não impede a formação de pirogênios, o uso intravenoso e/ou tópico do qual é proibido em áreas em contato com o sangue e nodos de linfa. Um sistema de coleta inovador foi, portanto, proporcionado para obter um composto livre de alérgeno, estéril, sem conservantes ou pirogênioos.

[0017] Agentes antissépticos em quantidades suficientes para garantir esterilidade e ausência de pirogênios são adicionados ao colos-tro coletado em tanques estéreis (que são esterilizados vazios a 25 Kgy) (Figura 2). Sorbato de potássio e benzoato de sódio são preferivelmente usados, cada um na concentração de 12,5% (uma concen tração muito mais alta do que normalmente usada, a saber, 0,2%), ou alternativamente, fenoxietanol na concentração de 2,5% ou diazolidinil ureia na concentração de 1% (Figura 3).

[0018] O colostro, desse modo, tratado, não necessita ser armazenado congelado antes dos processos de extração de fator ativo, que conduzem a uma economia óbvia de custos industriais.

[0019] O colostro é, em seguida, diluído com solução salina: esta diluição não somente dá melhor filtração sem entupimento dos poros do filtro, mas, acima de tudo, permite a liberação de fatores ativos ligados a gorduras e caseína. O colostro assim diluído suporta microfil-tração tangencial (membranas cerâmicas com um corte entre 2 e 6 pm, temperatura 5/20°C, pressão de transmembrana entre 0,2 e 2 bares), que pode ser repetida, para obter uma solução opalescente livre de caseína, matriz de gordura, e proteínas de leite. Todas estas substâncias constituem acima de 90% do conteúdo alérgico de colostro e leite de vaca. A solução é então passada através das membranas, ou, alternativamente, uma peneira molecular com um corte a 300.000 dál-tons, para purificação adicional dos fatores ativos, todos pesando menos do que 200.000 dáltons.

[0020] A solução é então dialisada por ultrafiltração (corte de 1000/2000 dáltons) a alta pressão para eliminar totalmente os conservantes (peso molecular abaixo de 150 dáltons), e, em seguida, imediatamente congelada-secada (Fig. 4). O resultado é um pó não-alérgico, livre de conservante, livre de pirogênio, estéril (caseína e lactoalbumi-na são responsáveis por acima de 95% de alergias a leite de vaca) de solubilidade muito alta, com a concentração máxima possível de fatores ativos.

[0021] Esta fração, daqui por diante denominada LIFEINSIDE™ Mucosa, contém os seguintes fatores: MEDIADORES IMUNES

[0022] Imunoglobulinas de classe IgG2 e IgA (ã/mg), na proporção de aproximadamente 60% do teor de Lifeinside™ Mucosa (aproximadamente 50% de IgG2 e aproximadamente 10% de IgA), com especificidade natural contra muitas bactérias e vírus, alguns dos quais são responsáveis pela infecção superimposta de NEC.

[0023] COMPLEMENTO C3/C4: O complemento consiste de circulação de proteínas capaz de interagir com as membranas biológicas e com receptores específicos situados na superfície de vários tipos de célula, que induzem reações inflamatórias que ajudam a combater infecção.

FATORES ANTIBACTERIAL/ANTIVIRAL

[0024] Transferrina;

[0025] Lactoferrina;

[0026] Lisozima;

[0027] Lactoperoxidase.

FATORES DE CRESCIMENTO

[0028] TGF-p1- FATOR DE CRESCIMENTO TRANSFORMANTE: estimula a produção de Classe A de imunoglobulinas, que são responsáveis pelas defesas imunes na mucosa. Modulam proliferação de célula e estimulam o depósito de matriz extracelular.

[0029] EGF - FATOR DE CRESCIMENTO EPIDERMAL: regula o desenvolvimento da mucosa. Promove a formação de células epiteli-ais.

[0030] IGF 1 - FATOR DE CRESCIMENTO SIMILAR À INSULINA: modula a proliferação de célula, adesão e migração, e induz maturidade da mucosa.

[0031] VEGF - FATOR DE CRESCIMENTO ENDOTELIAL VASCULAR: estimula produção de vaso sanguineo. Apresenta atividade mitogênica e ativação de permeabilidade vascular.

[0032] FGF-b - FATOR DE CRESCIMENTO DE FIBROBLASTO BÁSICO: estimula a proliferação de células de origem mesenquimal tais como fibroblastos, células endoteliais, artrócitos e queratócitos. Age como um fator quimiotático e fitogenético.

[0033] GH - HORMÔNIO DO CRESCIMENTO: fator de crescimento geral de todos os tecidos.

[0034] GHRF - FATOR DE LIBERAÇÃO DE HORMÔNIO DO CRESCIMENTO.

[0035] NGF - FATOR DE CRESCIMENTO DO NERVO: estimula atividade e regula crescimento e diferenciação do sistema sinpatético.

[0036] PRP- Proteína Rica em Prolina: Estimula maturidade das células T, e tem um efeito de regeneração no sistema nervoso, no sistema de osso, e na mucosa.

FATORES QUIMIOTÁTICOS

[0037] EOTAXIN: se liga a receptores de quimiocina para recrutar eosinófilos a tecidos inflamados.

[0038] IP-10-ligante de quimiocina 10: induzido por interferon ga- ma, e agrega células inflamatórias.

[0039] MCP-1 Fator quimiotático de monócito-1: promove agregação de monócitos em tecidos unflamados.

CITOCINAS

[0040] IL-2: induz proliferação de T linfócitos.

[0041] IL-4: possui atividade anti-inflamatória.

[0042] IL-6: estimula imunidade inata e adaptiva.

[0043] IL-9: regulador de células hemopoiéticas, estimula prolifera- ção de célula e impede apoptose.

[0044] IL-17: regula as atividades de NF-KB e reforça a produção de óxido nítrico (NO).

[0045] IL-10: apresenta efeitos pleiotrópicos em regulação imune e inflamação. Aperfeiçoa a sobrevivência de célula B, e, portanto, produ ção de anticorpo. Estudos conduzidos em camundongos debilitados demonstraram que esta proteína é essencial na regulação imune da mucosa. Interferon-gama: apresenta atividades conhecidas antivirais, antitumorais e imunoregulatórias. É um ativador de macrófago poderoso, e ativa a atividade mediada por célula contra bactéria e vírus.

[0046] TNF-α - Fator de necrose de tumor: estimula a migração de neutrófilos e monócitos ao local de infecção.

[0047] A fração contendo as substâncias listadas acima pode ser vantajosamente associada com outros compostos com atividade complementar, ou, de outro modo, útil. As seguintes substâncias são preferidas: [0048] Betaína: Betaína (trimetilglicina) é uma substância de origem de planta extraída da batata doce. Ela é envolvida na transmetila-ção, o processo biológico essencial para metabolismo de célula, via grupos metil (CH3) que são transferidos de uma molécula para outra. No corpo, a betaína perde um grupo metil e é convertida a dimetilglici-na (vitamina B15); durante este processo, energia é produzida, que é acreditada ser responsável pelos efeitos benéficos deste composto: desaparecimento de cansaço inexplicável e efeito favorável no sistema circulatório, coração, alergias e respiração celular. A betaína é um ingrediente ideal para produtos designados para a pele e mucosa, que são particularmente sensíveis e delicados, em vista de suas propriedades de umedecimento e molhamento, que são úteis para promover umedecimento imediato da mucosa vaginal.

[0049] Pantenol: Ácido pantotênico e a forma reduzida correspon- dente, pantenol, é uma das vitaminas mais amplamente usadas em aplicações tópicas. Ele tem se comprovado como um amaciador, umedecedor e condicionador. Ele realiza um número de funções essenciais: • após penetração na mucosa ele age como um umedece- dor internamente ativo porque ele tem uma excelente capacidade de reter umidade, desse modo, tornando a pele macia e elástica; • ele estimula a proliferação de célula e auxilia no reparo do tecido; • ele promove queratinização normal; • ele promove a cura de ferimentos menores, abrasões leves e pequenas queimaduras devido a suas propriedades de suaviza-ção.

[0050] Vitamina E ou tocoerol, uma vitamina solúvel em gordura com atividade antioxidante marcante capaz de impedir a quebra de vitamina A e ácidos graxos, com consequente formação de catabólitos tóxicos e formação de radicais livres e peróxidos. A vitamina E entra nos processos de respiração celular, fortifica as paredes dos vasos sanguíneos, e tem efeitos favoráveis importantes no aparelho reprodutor.

[0051] Sericina (MW 400.000): formação de película de umecedi-mento com vapacidade de tamponamento de acidez. Reduz a agressividade de surfactantes. Tem uma afinidade considerável para proteínas hidrofóbicas e excelente capacidade de reter água, ambos das quais características aumentam com o peso molecular. Diferente do ácido hialurônico, que é frequentemente usado em produtos de ume-decimento vaginal, o efeito de formação de película não oclusivo. No caso de sericina intacta, o efeito agradável de formação de película terapêutica não impede os outros fatores de serem absorvidos pela mucosa vaginal.

[0052] Maca (extrato de Lepidium meyenii): é um remédio de planta pouco conhecido e alimento de alta energia. Sua popularidade está aumentando devido a seus efeitos de energia, promoção de fertilidade e afrodisíaco. Extratos de Maca contêm glucosinolatos e isotiocianatos com atividade quimiopreventiva. Em mulheres, o extrato de Maca pro move fertilidade, estimula a libido, alivia os sintomas associados com a menopausa, atenua dor menstrual, e tem um efeito de energização. [0053] Os constituintes de Maca não têm atividade oestrogênica, conforme demonstrado em câncer de seio dependente de oestrogênio (MCF-7 tumour cells).

[0054] Aloe vera tem propriedades de regeneração útil, proteolíti-ca, de cura de ferimento, anti-inflamatórias, antipiréticas, analgésicas, de umedecimento, bacteriostáticas, virustáticas, fungicidas e antipruri-do.

[0055] As formulações de gel, de acordo com a invenção, são preparadas de acordo com técnicas conhecidas, usando excipientes convencionais. A concentração de fração de colostro na forma livre pode variar entre 1 e 10%, enquanto que na forma de liberação controlada encapsulada varia entre 0,1 e 5%.

[0056] Os intervalos de concentração aproximados para os outros constituintes, quando presentes, são colocados abaixo: [0057] Sericina: 0,5-5% [0058] Pantenol: 0,1-1% [0059] Betaína: 1-10% [0060] Extrato de Aloe vera: 1-5% [0061] Vitamina E: 0,1-2% [0062] Extrato de Lepidium meyenii: 1-5% [0063] A invenção é descrita em maiores detalhes na seguinte parte experimental, dada por meio de exemplo.

Exemplo 1 - Composição qualitativa e quantitativa de um gel vaginal com liberação rápida e lenta de fatores ativos Examplo 2 - Ensaios Clínicos [0064] O gel vaginal descrito no exemplo 1 foi usado em 30 mulheres férteis, pré-menopausais e menopausais que sofrem de secura vaginal devido a razões hormonais ou mecânicas, estresse, tratamentos locais desequilibrados, alimentação no seio, contraceptivos, etc.

[0065] A Tabela 1 mostra os resultados de colposcopia com o Teste de Schiller em um grupo de 30 pacientes tratados e 28 controles. A diferença entre os dois grupos no final do estudo foi estatisticamente signifi-cante (p < 0,05).

Tabela 1 DISTRIBUIÇÃO DE INDIVÍDUOS ESTUDADOS DE ACORDO COM OS RESULTADOS DE COLPOSCOPIA E BRAÇO DE TRATAMENTO

[0066] A Tabela 2 mostra os resultados da presença e da severidade de secura vaginal nos mesmos grupos. Uma vez novamente, a diferença foi estatisticamente significante (p < 0,05, tratamento com uma administração diária única por 20 dias).

Tabela 2 DISTRIBUIÇÃO DE INDIVÍDUOS ESTUDADOS DE ACORDO COM A PRESENÇA E A SEVERIDADE DE SECURA VAGINAL E BRAÇO DE TRATAMENTO

[0067] Uso de gel vaginal combinado pronto e de liberação retardada conduziu a aperfeiçoamento definitivo no quadro clínico e os sintomas associados com secura vaginal. No grupo de controle, somente 16,7% de casos foi aperfeiçoado após 20 dias, pelo que 86,7% de casos no tratamento foi aperfeiçoado/foram curados.

[0068] O teste citológico após tratamento (Figuras 4-7) demonstra: • celularidade aumentada • um aumento relativo nas células escamosas maduras • uma redução relativa nas células basal e para-basal. • presença de inflamação e histiócitos multinucleares indicando tropismo aumentado.

REIVINDICAÇÕES

Claims (5)

1. Composições vaginais tópicas na forma de gel, caracterizadas pelo fato de que compreendem uma fração de colostro enriquecida com imunoglobulinas, fatores de crescimento, fatores quimiotáti-cos e fatores antimicrobiais/antivirais, parcialmente na forma livre, e parcialmente encapsuladas em microesferas mucoadesivas.

2. Composições de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo fato de que compreendem imunoglobulinas de classe IgG2 e IgA, complemento c3/c4, transferrina, lactoferrina, lisozima, lac-toperoxidase, TGF-βΙ - fator de crescimento transformante , EGF - fator de crescimento epidermal, IGF 1 - fator de crescimento similar à insulina, VEGF - fator de crescimento endotelial vascular, FGF-b - fator de crescimento de fibroblasto básico, GH - hormônio do crescimento, GHRF - fator de liberação de hormônio do crescimento, NGF - fator de crescimento do nervo, proteínas ricas em prolina, eotaxina, IP-10-ligante de quimiocina 10, MCP-1 fator quimiotático de monócito-1, IL-2, IL- 4, IL-6, IL-9, IL-17, IL-10, interferon-gama, e TNF-α- fator de necrose de tumor.

3. Composições de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizadas pelo fato de que a fração de colostro é obtida de colostro bovino ordenhado entre as 5a e 6a horas após parto, e tratado com um processo que compreende: - adição de agentes antissépticos ao colostro em concentrações suficientes para assegurar esterilidade e apirogenicidade; - diluição com solução salina; - uma ou mais etapas de microfiltração tangencial através de membranas cerâmicas com corte variando entre 2 e 6 pm; - passagem através das membranas ou peneiras moleculares com corte de 300,000 Dáltons; - diálise por ultrafiltração de alta pressão até remoção com- pleta dos agentes antissépticos e congelamento/secagem final.

4. Composições de acordo com a reivindicação 3, caracterizadas pelo fato de que o colostro é obtido de vacas Guernsey ou Holstein.

5. Composições de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizadas pelo fato de que também contêm um ou mais dos seguintes ingredientes: a) Sericina; b) Pantenol; c) Betaína; d) extrato de Aloe vera; e) Vitamina E; f) extrato de Lepidium meyenii.