JP6106798B2 - 抗鶏コクシジウム症活性を有するトリアジン化合物 - Google Patents

Description

本発明は、化合物及び化合物の合成に関し、特に抗コクシジウム活性を有するトリアジン類の新化合物及びその調製方法、用途に関する。

鶏コクシジウム症は、世界各地にあまねく発生し、集約化された養鶏場に被害をもたらす重要な病気である。アイメリアが腸の上皮細胞に寄生することによって引き起こされた病気である。

現在、鶏コクシジウム症に対する予防・治療の手段は、主にワクチンとコクシジウムの薬との２つがある。コクシジウム症ワクチン、サブユニットワクチン及び組換えワクチンの開発・応用に関して、一定の効果を達成したものの、コクシジウム症の予防及び治療に関して、依然として薬物が主流である。抗コクシジウム薬物の開発は、鶏コクシジウム症による被害の軽減、養鶏業の損失を減少又は回復させ、及び養鶏業の発展に対して重要な役割を果たす。

しかし、抗コクシジウム薬物の長期の使用によってもたされた薬剤耐性は、終始臨床獣医を悩ませている。特に養鶏業において、コクシジウムに生じた薬剤耐性がさらに普及し、長期間の薬物の使用問題がより顕著であり、コクシジウムの薬剤耐性問題は、もはや養鶏業の抗コクシジウムの最強の敵となっている。研究に示すように、中国の広東地方において、５８％の虫株は、１種類の抗コクシジウム薬物のみに敏感であり、１４％の虫株は、すべての薬物に対して敏感でない。従って、コクシジウムの薬剤耐性は、確かに非常に一般的であり、有効な治療薬物の選択はますます限られ、これは、多くの地域においてコクシジウム症が収まらない主な原因でもある。新型抗コクシジウム薬物の欠如のため、臨床上、シャトル式投薬及びローテーション式投薬等の方法を採用して薬剤耐性のさらなる悪化を避けざるを得ない。これによって、養鶏業の発展が極めて制限され、獣医の臨床において、効果的且つ低毒性を有する新しい抗コクシジウム薬物の登場が望まれている。

トリアジン類の抗コクシジウム薬物は、現在活性が最も高い化学合成の抗寄生虫薬であり、既に全世界に幅広く応用されている。トリアジン類の良好な抗コクシジウム効果について、さらなる研究を続ける価値がある。トリアジン類抗コクシジウム薬物において、最も代表的な薬物は、ジクラズリル（Ｄｉｃｌａｚｕｒｉｌ）及びトルトラズリル（Ｔｏｌｔｒａｚｕｒｉｌ）である。しかし、２０年近く飼料添加物としての使用を経て、この種類の薬物のほとんどに薬剤耐性が発生している。現在、数種類の鶏コクシジウムは、トリアジン類の抗コクシジウム薬のジクラズリル（趙其平氏ら、安徽に所在する２つの鶏場のコクシジウムに対する薬剤耐性のテスト、安徽農業科学、２０１０、３８（２１）：１１１４２ー１１４３２）及びトルトラズリル（王慧珍氏ら、４種類の一般的な抗コクシジウム薬を用いて鶏コクシジウム症に対する治療効果を観察、中国家禽、３１（２４）：５５−５６）に対して一定の薬剤耐性を発生したため、それらの薬の臨床応用が制限されている。

幸いなことに、この種類の化合物の高い抗コクシジウム活性、及び、薬物の間の交差耐性を有さない（例えば、ジクラズリルとトルトラズリルとは交差耐性を有さない）特徴は、この種類の化合物をさらに利用した新薬の開発に可能性を広げる。

中国特許出願（出願番号２００７１００４０９２０．６、特許名称「抗コクシジウム活性を有する新型トリアジン類化合物、調製方法及びその応用」）は、抗コクシジウム活性を有する新型トリアジン類化合物、調製方法及びその応用を開示した。当該化合物は、化学式（ＶＩ）によって表示され、且つ当該化学式を用いて薬学において受け入れ可能な酸塩又はアルカリ塩を形成させる。中では、Ｒ１及びＲ２は、水素、ハロゲン原子、アルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基のうちの１つ又は複数の基群を示し、Ｒ１及びＲ２が示した基群は、同じであってもよく異なってもよい。Ｒ３は、ＣＯＲ７、シクロアルキル、複素環を示し、Ｒ４は、水素原子、アルキル基を示す。前記薬学において受け入れ可能な酸は、塩酸、硫酸、臭化水素酸、リン酸、炭酸、ギ酸、酢酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、酒石酸及びグルコン酸を含む。前記薬学において受け入れ可能なアルカリは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエチルアミン及びｔｅｒｔ−ブチルアミンを含む。これらの化合物は、動物のコクシジウム症に対して良好な制御効果を有する。

中国特許出願（出願番号２００８１０２０２４７０．０、特許名称「抗コクシジウム活性を有するトリアジン類化合物及びその調製方法」）は、抗コクシジウム活性を有するトリアジン類式（ＶＩＩ）の化合物及び、それらによって形成された薬学において受け入れ可能な酸塩又はアルカリ塩を開示した。その中では、Ａは、酸素又は硫黄を示し、Ｒ１及びＲ２は、水素、ハロゲン原子、アルキル基、シクロアルキル、アルコキシ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、トリクロロメチル、ＣＯＲ５、複素環の１つ又は複数の基群を示す。Ｒ１及びＲ２が示した基群は、同じ又は異なる。Ｒ３は、水素原子、アルキル基又はシクロアルキルを示す。Ｒ４は、水素原子、ＣＯ２Ｒ５又はＣＯＮＨＲ６を示す。この種類の化合物は、動物のコクシジウム症に対して良好な制御効果を有する。

中国特許（特許番号２０１１１０２３０８１２．１、特許名称「トリアジン化合物及びそれが鶏コクシジウム症の制御における応用」）は、式（ＩＶ）の化合物及び当該化合物が鶏コクシジウム症の予防・治療における応用を開示し、当該化合物の化学構成には、ニトロ基の構成が存在するため、潜在的な毒性を有する恐れがある。マウスの急性経口毒性試験を介して、改良カーバー法を用いた計算で取得した当該化合物のＬＤ５０は、７６８ｍｇ／ｋｇであり、９５％信頼区間は、６４４〜９１６ｍｇ／ｋｇである。

本発明の目的は、抗コクシジウム活性を有する新トリアジン類化合物及び当該化合物の調製方法、使用を提供することである。

本発明の目的は、下記の記載によって実現される。

トリアジン化合物であって、当該化合物は、以下の構成を有する。

前記化合物の調製方法は、以下のステップを含む。
Ａ、式（ＩＩ）の化合物又はそのナトリウムフェノキシドと、式（ＩＩＩ）の化合物とは、ウィリアムソン合成によって式（ＩＶ）の化合物に縮合・配合される。式（ＩＩＩ）の化合物において、置換基ｘは、ハロゲンである。ウィリアムソン合成法（Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ 合成法）は、つまりアルキロゲンが、アルコキシド又はフェノキシドによって処理され、エーテル類を取得するエーテル結合の一般的な方法である。この反応は１８５２年にすでに発見されたが、いまにも非対称エーテル類を合成する最良の一般的な方法（兪凌チョン編、有機化学においての人名反応 科学出版社、１９８４：３４５）とされている。

Ｂ、式（ＩＶ）の化合物から、ニトロ基を還元することによって式（Ｖ）の化合物を調製して取得する。

Ｃ、式（Ｖ）の化合物から、塩化アセチルが存在する状態において、アミノ基のアシル化によって式（Ｉ）の化合物を調製して取得する。

本発明に係る化合物について、ＵＳ４９６８７９５Ａ（第２２段落の３５〜６６行目）によって公開された方法を参照して取得可能である。

有効量の有効成分とする式（Ｉ）の化合物又は、その薬用塩及び薬用担体を含む抗鶏コクシジウム症の薬物の組成物は、飼料に添加されて使用される際に、添加濃度が１０ｍｇ／ｋｇである状態において、その抗コクシジウム指数は１８９に達する。

背景技術に記載の式（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＩＶ）の化合物のすべては、いままで市場で販売されておらず、その薬効メカニズム及び臨床応用について、いまだ研究中である。これらの薬物の薬効メカニズム及び薬物代謝を研究する過程において、複数の新しい構成の代謝物質（例えば式（ＩＶ）の化合物が鶏体内での代謝物質である式（Ｉ）の化合物及び式（Ｖ）の化合物）を研究し、前記式（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＩＶ）の化合物と異なる化合物であり、つまり式（Ｉ）の化合物（コード：ＡＺＬ）である。ＡＺＬは、予期しない良い効果抗コクシジウムの効果を有することが表示されている。それを飼料に添加して使用する際に、添加濃度が１０ｍｇ／ｋｇである状態において、その抗コクシジウム指数は１８９に達する。ＡＺＬが式（ＩＶ）の代謝物質であるため、その毒性もさらに低下し、ラットの急性経口毒性試験を介して、改良カーバー法を用いた計算で取得した化合物ＡＺＬのＬＤ５０は、４７４３ｍｇ／ｋｇであり、９５％信頼区間は、３７５４〜５９９３ｍｇ／ｋｇである。

薬物代謝は、薬物分子が有機体によって吸収された後、有機体酵素の作用によって発生した一連の化学反応を指し、生体内変化とも称する。長期の進化の過程において、有機体は、発展して生み出した一定の自己保護能力によって、薬物及び毒物を含む外因性物質が化学処理され、体外へ容易に排出することで、有機体がこれらの物質によるダメージを受けることが回避される。薬物代謝に関与する反応は、２大タイプに分かれる。１つは、官能基化反応であり、第Ｉ相反応とも呼ばれる。もう１つは、結合反応であり、第ＩＩ相反応とも呼ばれる。薬物分子又は体内代謝の官能基化反応を経た後の代謝物における、ヒドロキシ及びアミノ基などのような極性基群は、酵素の触媒反応を介して、グルクロニド、硫酸及びアミノ酸などのような活性化の内因性の小分子と結合することができる。この過程は結合反応と呼ばれる。ほとんどの芳香族第一級アミン薬物は、代謝の際にアセチル化結合される。芳香族ニトロ基の薬物が還元された後に形成したアミノ基のすべては、アセチル化結合が行われる可能性がある。薬物は、Ｎ−アセチル化を経たあと、ほとんどが不活性又は活性の小さい産物を生成するため、効果的な解毒経路となっている（尤啓冬 主筆、薬物化学（第２版）、化学工業出版社、２００８、５９〜６６）。

予想しないことに、本発明に係る化合物ＡＺＬには、活性の低下が発生しない結果となり、同様に良好な抗コクシジウム効果を有する。化合物ＡＺＬを飼料に添加して使用する際に、添加濃度が１０ｍｇ／ｋｇである状態において、その抗コクシジウム指数は１８９に達する。代謝の過程で生成した新しい化合物であるため、その毒性研究によれば、その毒性がさらに低下していることが判明された。ラットの急性経口毒性試験を介して、改良カーバー法を用いた計算で取得した化合物ＡＺＬのＬＤ５０は、４７４３ｍｇ／ｋｇであり、９５％信頼区間は、３７５４〜５９９３ｍｇ／ｋｇである。

以下の実施例は、本発明について列挙して説明するためであり、本発明がほかの一般的な方式によって実現されることを制限しない。

＜実施例１＞
２−｛３−メチル−４−（４’−ニトロフェノキシ基）フェニル基｝−１、２、４−トリアジン−３、５（２Ｈ、４Ｈ）−ウコンジオン（式（ＩＶ）の化合物）の調製

式（ＩＩ）の化合物ＩＩ（１５グラム、０．０６８ｍｏｌ）、無水炭酸ナトリウム（７．９グラム、０．０７５ｍｏｌ）、パラ‐ニトロクロロベンゼン（１１．８グラム、０．０７５ｍｏｌ）及びＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）（１５０ｍｌ）を４つのフラスコに入れ、１２０℃まで加熱し、１０時間反応させる。温度が室温まで下がったあと、反応液を１０００ｍｌの水に注入し、１０％の希塩酸でＰＨ＝３まで調整し、淡黄色固体を析出し、そして濾過、水洗い及び乾燥を経て式（Ｉ）の化合物（１６．２グラム、６９．５％）を取得する。

ｍｐ： １６９〜１７１．５°ＣＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３９．２（Ｍ−Ｈ）‐、１ＨＮＭＲ（ＣＤＣＬ３）： ２．２５（ｓ、３Ｈ）、７．００（ｄ、２Ｈ）、７．０９（ｄ、１Ｈ）、７．４４（ｄ、１Ｈ）、７．５０（ｓ、１Ｈ）、７．６０（ｓ、１Ｈ）、８．２２（ｄ、２Ｈ）、９．６９（ｓ、１Ｈ）。

＜実施例２＞
２−｛３−メチル−４−（４’−アミノフェノキシ基）フェニル基｝−１、２、４−トリアジン−３、５（２Ｈ、４Ｈ）−ウコンジオン（式（Ｖ）の化合物）の調製

還元鉄粉（９．８ｇ、１．７５ｍｏｌ）、水（５０ｍｌ）及び塩化アンモニウム（３．７５ｇ、７０ｍｍｏｌ）を反応フラスコに入れて、６０°Ｃまで加熱する。式（ＩＶ）の化合物ＩＶ（１１．９ｇ、３５ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（１００ｍｌ）の溶液を反応液に滴らす。加えた後、還流状態において６〜７時間反応させ、濾過し、濾液から有機相を分離し、酢酸エチルを用いて水相を抽出し、有機相を混合させ、中性になるまで水洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧蒸留によって除去し、カーキ色の個体（式（Ｖ）の化合物）（８．６８ｇ、収率８０％）を取得する。

ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）： ３０９．２（Ｍ−Ｈ）‐、１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ： ２．２７（ｓ、３Ｈ）、６．６０（ｄ、２Ｈ）、６．６８（ｄ、１Ｈ）、６．７５（ｄ、２Ｈ）、７．１９（ｄ、１Ｈ）、７．３４（ｓ、１Ｈ）、７．５９（ｓ、１Ｈ）。

＜実施例３＞
２−｛３−メチル−４−（４’−アセチルアミノフェノキシ基）フェニル基｝−１、２、４−トリアジン−３、５（２Ｈ、４Ｈ）−ウコンジオン（式（Ｉ）の化合物）の調製

式（Ｖ）の化合物（１５．０ｇ、４８ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（９．１ｇ、９０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）（６０ｍｌ）に溶解させ、温度が５°Ｃ以下まで下がるように氷浴につけ、塩化アセチル（６．０ｇ、７７ｍｍｏｌ）をゆっくり加える。加えた後、氷浴によって５°Ｃ以下に保温された状態で３０ｍｉｎ反応させ、次に温度を室温まで上げて３ｈ反応させる。反応終了後、適量の水を加えて撹拌し、濾過し、濾過ケーキを中性になるまで水洗浄する。そしてメタノール／水を用いて再結晶させ、乾燥させ、１５．０ｇ且つ収率が８８．７％の白い個体を取得する。

融点２１５〜２１８°ＣＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）： ３５１．１（Ｍ−Ｈ）‐、１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ： ２．０３（ｓ、３Ｈ）、２．２４（ｓ、３Ｈ）、６．８６（ｄ、１Ｈ）、６．９４（ｄ、２Ｈ）、７．２８（ｄ、１Ｈ）、７．４１（ｄ、１Ｈ）、７．５８（ｓ、１Ｈ）、７．６１（ｄ、２Ｈ）、９．９４（ｓ、１Ｈ）、１２．３１（ｓ、１Ｈ）。

＜実施例４＞
ＡＺＬプレミックスの調製

５０ｇのＡＺＬを１００００ｇの大豆粕に加え、均一に撹拌すればＡＺＬプレミックスを取得することができる。使用する直前に、適量を取り、適量の鶏の配合飼料に加え、均一に撹拌すれば、必要な濃度のＡＺＬ飼料の調製が仕上がる。

＜実施例５＞
ＡＺＬの鶏のアイメリア・テネラ症の予防における使用

１材料及び方法
１．１動物
１日齢の浦東黄羽若いおんどり

１．２薬物
ＡＺＬ、含有量：９９．１０％、中国農業科学院上海獣医研究所自製。

使用する直前に、それをほかの薬物が含まれていない鶏の配合飼料に加え、均一に混ぜ、それぞれ濃度が５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇのＡＺＬを含む薬物混合飼料を調製する。

式（Ｖ）の化合物、含有量：９９．５８％、中国農業科学院上海獣医研究所自製。

使用する直前に、それをほかの薬物が含まれていない鶏の配合飼料に加え、均一に混ぜ、それぞれ濃度が５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの式（Ｖ）の化合物を含む薬物混合飼料を調製する。

式（ＩＶ）の化合物、含有量：９９．２６％、中国農業科学院上海獣医研究所自製。

使用する直前に、それをほかの薬物が含まれていない鶏の配合飼料に加え、均一に混ぜ、それぞれ濃度が５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの式（ＩＶ）の化合物を含む薬物混合飼料を調製する。

使用する直前に、ジクラズリル原料薬をほかの薬物が含まれていない鶏の配合飼料に加え、均一に混ぜ、濃度が１ｍｇ／ｋｇのジクラズリルを含む薬物混合飼料を調製する。

１．３実験方法
１．３．１実験グループ化
テスト中に１日齢の浦東黄羽の若いおんどりを９０羽使用して、動物実験室で１４日間飼育した後、８グループにランダムに分ける。グループごとに１０羽を有する。うちの１グループは、健康対照グループである。ＡＺＬ飼料添加グループは、濃度がそれぞれ５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの各１グループを設ける。式（ＩＶ）の化合物飼料添加グループは、濃度がそれぞれ５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの各１グループを設ける。式（Ｖ）の化合物飼料添加グループは、濃度がそれぞれ５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの各１グループを設ける。薬物対照グループは、ジクラズリル飼料添加グループであり、濃度が１ｍｇ／ｋｇである。また、１つの感染対照グループを別に設ける。

１．３．２投薬方法及びコクシジウム感染
グループ化が完成後、ＡＺＬ飼料添加グループ、式（ＩＶ）の化合物飼料添加グループ、式（Ｖ）の化合物飼料添加グループ及びジクラズリル薬物対照グループには、直ちに指定された薬物が添加された飼料を与え、飼育し始める。感染対照グループ及び健康対照グループには、薬物が添加されていない飼料を与える。各グループは、正常に水を飲む。１５日齢時、健康対照グループを除いて、各グループの鶏ごとにアイメリア・テネラの胞子形成オーシストを８００００個人工感染させる。

１．４臨床観察
試験期間中に、毎日被験鶏の飼料・飲水の摂取状況、精神状態、発病及び血便などを観察して記録する。感染後５日目、６日目及び７日目に、各グループの鶏の糞便を収集して、糞便中のオーシストをカウントし、最高値をＡＣＩ（Ａｎｔｉｃｏｃｃｉｄｉａｌ Ｉｎｄｅｘ）の計算に記入する。試験期間中に、毎日被験鶏の死亡状況を観察し、且つ剖検検証を行う。８日目に、各グループそれぞれの重さを量り且つすべての鶏を解剖し、被験鶏の体重増加及び盲腸病変の状況を観察して記録する。

１．５薬効評価
１．５．１死亡率： コクシジウムの感染によって死亡した鶏の数が被験鶏数に占める割合。

１．５．２相対増体率：各感染グループの被験鶏の体重増加平均値と健康対照グループの体重増加平均値とのパーセンテージ。

１．５．３盲腸病変値 Ｊｏｈｓｏｎ及びＲｅｉｄ （Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｊ，Ｒｅｉｄ Ｗ Ｍ．に基づく Ａｎｔｉｃｏｃｃｉｄｉａｌ ｄｒｕｇｓ ｌｅｉｓｉｏｎ ｓｃｏｒｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ ｂａｔｔｅｒｙ ａｎｄ ｆｌｏｏｒ −ｐａｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｉｃｋｅｎｓ．
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ、１９７０、２８（１）：３０−３６）の方法で盲腸病変スコアを行い、病変値＝全グループ平均病変スコア×１０。

１．５．４オーシスト値：各グループの盲腸内容物をホモジネートして混合させ、マックマスター法を用いて１グラムの盲腸内容物のオーシスト数（ＯＰＧ）を計算する。オーシストの比＝（陰性対照グループ又は投薬グループのオーシスト数÷陽性対照グループのオーシスト数）×１００％。オーシストのオッズが０〜１％である場合、オーシスト値は０であり；オーシストのオッズが２％〜２５％である場合、オーシスト値は５であり；オーシストのオッズが２６％〜５０％である場合、オーシスト値は１０であり；オーシストのオッズが５１％〜７５％である場合、オーシスト値は２０であり；オーシストのオッズが６％〜１００％である場合、オーシスト値は４０である。

１．５．５抗コクシジウム指数（ＡＣＩ）：ＡＣＩ＝（相対増体率＋生存率）−（病変値＋オーシスト値）

１．５．６判定基準ＡＣＩ値が１２０以下であれば、効力なしを指し、１２０〜１６０の間であれば、効力が低いことを指し、１６０〜１８０の間であれば、中程度の効力を指し、１８０以上であれば、高い効力を指す（農業部動物用医薬品評価委員会事務局／動物用医薬品試験の技術仕様集、中国農業科学技術出版社、２００１、２２〜２３）。

１．６結果
結果として、ＡＺＬが２つの異なる添加濃度において、両方とも良好な抗コクシジウム効果を有することが示されている（表１）。

＜実施例６＞
ＡＺＬのラットに対する急性毒性試験（ＬＤ５０）

１．１試薬
ＡＺＬ、含有量：９９．１０％、中国農業科学院上海獣医研究所自製。
薬物溶媒：０．５％のカルボキシルメチルセルロースナトリウム
投薬の前に、ＡＺＬを０．５％のカルボキシルメチルセルロースナトリウムに加えて、複数の濃度の懸濁液を調製する。

１．２実験動物雌雄半々のＳＰＦのＳＤラットを、西普爾ー必凱実験動物有限公司から購入し、許可書番号ＳＣＸＫ（滬）は、２００８ー００１６である。実験ラットの購入後、雌雄に分けて別々に飼育する。正式実験の前に、適応性のために４日間以上飼育する。

１．３急性毒性試験
予備試験を繰り返すことによってＬＤ０〜ＬＤ１００の区間範囲を確定し、且つそれによってグループ化し、グループの間の比を確定する。正式試験では、１８０〜２２０ｇのラットを８０匹を使用し、８グループにランダムに分け、各グループは、雌雄半々で合わせて１０匹を有し、うちの７グループの各薬剤投与量は、それぞれ２３５８ｍｇ／ｋｇ体重、３０００ｍｇ／ｋｇ体重、３８１７ｍｇ／ｋｇ体重、４８５６ｍｇ／ｋｇ体重、６１７８ｍｇ／ｋｇ体重、７８６０ｍｇ／ｋｇ体重、１００００ｍｇ／ｋｇ体重であり、ラットに１回で経口投与し、残りの１グループには、陰性対照グループとして薬物溶媒を投与し、投薬後１４日間観察し続け、死亡率を統計し、改良カーバー法を用いてＬＤ５０値及びその９５％信頼区間を計算する。

１．４結果
具体的な実験結果は、表２に示し、改良カーバー法を用いて計算した結果、ＬＤ５０値は、４７４３ｍｇ／ｋｇであり、９５％信頼区間は、３７５４〜５９９３ｍｇ／ｋｇである。

Claims (4)

1. 抗鶏コクシジウム症活性を有するトリアジン化合物であって、以下の構成を有することを特徴とする化合物。
   
2. 前記化合物が抗鶏コクシジウム症の薬物の調製に使用されることを特徴とする請求項１に記載の化合物の使用。
3. 抗鶏コクシジウム症の薬物の組成物であって、当該組成物には、有効量の有効成分とす
   る請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又は、その薬用塩及び薬用担体が含まれていること
   を特徴とする組成物。
4. 式（ＩＩ）の化合物又はそのナトリウムフェノキシドと、式（ＩＩＩ）の化合物（式（
   ＩＩＩ）の化合物において、置換基ｘがハロゲンである。）とは、ウィリアムソン合成に
   よって式（ＩＶ）の化合物に縮合・調製されるステップＡと、
   式（ＩＶ）の化合物から、ニトロ基を還元することによって式（Ｖ）の化合物を調製し
   て取得するステップＢと、
   式（Ｖ）の化合物から、塩化アセチルが存在する状態において、アミノ基のアシル化に
   よって式（Ｉ）の化合物を調製して取得するステップＣとを含むことを特徴とする請求項
   １に記載の化合物の調製方法。