CN113603711B - 一种双吲哚生物碱化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种双吲哚生物碱化合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本申请提供一种双吲哚生物碱化合物及其制备方法和应用，所述双吲哚生物碱化合物具有式I所示结构：
Figure DDA0003229320310000011
其中，R1、R14、R15各自独立地选自氢、COOR'，其中R'选自C1‑10烷基、C2‑10烯基和C2‑10炔基；R2选自氢、羟基，其中羟基可被卤素、C1‑10烷氧基、C2‑10烯基氧基和C2‑10炔基氧基所取代；R3选自氢或氧；R4、R5、R6、R7各自独立地选自氢、羟基、羰基、卤素、C1‑10烷氧基、C2‑10烯基氧基、C2‑10炔基氧基；R8、R9、R10、R11、R12、R13各自独立地选自氢、羟基、卤素、C1‑10烷氧基、C2‑10烯基氧基和C2‑10炔基氧基；所述卤素原子为氟、氯、溴或碘。本发明的化合物具有抑制高糖所致的肾小球系膜细胞异常增殖的活性，可用于治疗糖尿病肾病。

Description

一种双吲哚生物碱化合物及其制备方法和应用
技术领域
本申请涉及医药领域，具体涉及一种双吲哚生物碱化合物及其制备方法和应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本申请的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
***藤(Bousigonia mekongensis)为夹竹桃科***藤属植物，主要分布在我国云南南部，是傣药“百解胶囊”的重要组成药材，具有补气活血、清热解毒、保护肝肾的传统功效，与中医临床以活血化瘀、滋阴清热、补益气血的中药防治糖尿病肾病有一定的相关性。
糖尿病肾病是糖尿病最常见的微血管并发症，其在糖尿病患者中的发病率约为40％，近年来，随着我国糖尿病患者的逐年增加，糖尿病肾病已是导致终末期肾脏病和致死的主要原因之一。研究表明，肾小球系膜细胞异常增殖及其引起的细胞外基质过度沉积是糖尿病肾病及其他原发性肾小球肾炎肾纤维化的始动机制。目前临床上对糖尿病肾病的治疗主要通过控制血糖、逆转胰岛素抵抗、降低尿蛋白、控制血压等方法改善或延缓糖尿病肾病的进展，尚无特效药用于治疗糖尿病肾病。因此，寻找能够有效抑制肾小球系膜细胞异常增殖的先导化合物及药物具有重要意义。
乌苏酸(UA)已证明具有抗肿瘤、抗炎、抗糖尿病的药用价值，有实验研究表明乌苏酸对治疗糖尿病及并发症具有较好的效果。
发明内容
发明人对植物***藤的化学成分进行过深入的研究，在之前的研究中，发明人分离得到过一些化合物，其中也包含吲哚生物碱化合物，比如quebrachamine(在本发明中简称为化合物1)、(-)-isoeburnamine(化合物2)、rhazinilam(化合物3)、tetrahydroalstonine(化合物4)、leuconodine D(化合物5)、(-)-O-ethyleburnamine(化合物6)、(-)-eburnamenine(化合物7)、eburenine(化合物8)。
但是在前期研究中发现，将上述化合物1-8在50μM的给药浓度下，均未显示出拮抗高糖所致的足细胞损伤，而相同条件下阳性对照药黄芪甲苷的EC50值为15.4μM。此外，在之后的研究中，发明人还在植物***藤中分离得到了化合物***藤素甲，该化合物被证实能够拮抗高糖所致的永生小鼠足细胞损伤，EC50为2.5μM，且其治疗效果显著优于阳性药黄芪甲苷。
在此基础上，发明人进一步对植物***藤的化学成分进行研究，并提供了一种具有新型结构的双吲哚生物碱化合物，尤其是提供了化合物***藤素乙，该类化合物经试验证实具有良好的抑制高糖所致肾小球系膜细胞异常增殖的活性，且效果显著优于乌苏酸，具有良好的药用和保健前景。
具体地，本发明提供了下述的技术特征，以下技术特征的一个或多个的结合构成本发明的技术方案。
在本发明第一方面，本发明提供了一种双吲哚生物碱化合物及其药学上可接受的盐，其具有式I所示结构：
Figure BDA0003229320290000031
其中，R1、R14、R15各自独立地选自氢、COOR'，其中R'选自C1-10烷基、C2-10烯基和C2-10炔基；
R2选自氢、羟基，其中羟基可被卤素、C1-10烷氧基、C2-10烯基氧基和C2-10炔基氧基所取代；
R3选自氢或氧；
R4、R5、R6、R7各自独立地选自氢、羟基、羰基、卤素、C1-10烷氧基、C2-10烯基氧基、C2-10炔基氧基；
R8、R9、R10、R11、R12、R13各自独立地选自氢、羟基、卤素、C1-10烷氧基、C2-10烯基氧基和C2-10炔基氧基；
所述卤素原子为氟、氯、溴或碘。
在本发明的实施方式中，较为优选地化合物为***藤素乙，其结构如下所示：
Figure BDA0003229320290000041
***藤素乙的分子量623.9，分子式C39H51N4O3 +；淡黄色粉末；易溶于氯仿、二氯甲烷、甲醇。
在本发明的一些实施方式中，所述药学上可接受的盐为衍生自无机酸和有机酸的酸加成盐；这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物，与一定数量的酸适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。在本申请的一些实施方式中，本申请中所述药学上可接受的盐可以是上文中所述化合物的无机酸盐或有机酸盐，比如所述无机酸包括盐酸、硫酸、磷酸、氢溴酸和氢碘酸；所述有机酸选自柠檬酸、酒石酸、甲酸、乙二酸、甲磺酸、碳酸、琥珀酸、苯甲酸、乙酸、草酸、对甲苯磺酸和对溴苯磺酸。
在本发明的第二方面，本发明提供了一种获得上述第一方面中所述的双吲哚生物碱化合物及其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括提取分离自植物***藤。
进一步地，在本发明的实施方式中，本发明提供了***藤素乙的制备方法，其提取分离自植物***藤。
在本发明中，发明人需要强调的是，从***藤植物中能够获取本发明上述具有式II结构的***藤素乙，以及分离纯化得到的***藤素乙化合物是本发明着重保护的内容，至于从***藤素植物中提取***藤素乙的操作，本领域技术人员可以在得知本发明的上述要点包括化合物结构以及溶解性能后，通过本领域的常规技能以多次试验探索的方式从***藤植物中获取本发明的***藤素乙，以及，或者根据本发明提供的***藤素乙的结构以合成的方式选取适宜的原料制备得到本发明的化合物。
当然，应当知晓的是不同提取分离纯化的方法会影响提取得到的***藤素乙的纯度和得率。为此，本发明还提供了一种较为优异的提取分离方法。
具体地，本发明所述的制备***藤素乙的方法包括：取***藤植物在有机溶剂1中回流提取或浸提后进行萃取处理，得到包含***藤素乙的提取物；
所述萃取处理包括将提取物加水混悬酸化，用有机溶剂2萃取，然后水层碱化，再用有机溶剂3萃取，优选地，萃取后可浓缩有机溶剂；
所述有机溶剂1、有机溶剂2和有机溶剂3各自独立的选自C1-6醇、C3-6酮、C2-6醚、C2-6酯和C1-6卤代烃。
在进一步的技术方案中，所述方法还包括将得到的包含***藤素乙的提取物进一步分离纯化，可分离得到***藤素乙；所述分离纯化的方法优选为柱层析法。
进一步地，在在本发明的一些实施方式中，所述制备方法包括：取***藤植物在有机溶剂1中回流提取或浸提后，加水混悬，酸性条件下用有机溶剂2萃取，然后水层在碱性条件下使用有机溶剂3继续萃取，浓缩有机溶剂萃取层，富集生物碱类物质，进一步经柱层析得到***藤素乙。
在本发明的一些实施方式中，所述C1-6醇选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、正戊醇、异戊醇、正己醇和环己醇；所述C3-6酮选自丙酮、甲乙酮和甲基异丁酮；所述C2-6醚选自甲醚和***；所述C2-6酯选自甲酸乙酯、乙酸乙酯和丙酸乙酯；所述C1-6卤代烃选自二氯甲烷、三氯甲烷和二氯乙烷。
进一步地，所述有机溶剂1为C1-6醇；所述有机溶剂2或有机溶剂3为C1-6卤代烃；优选地，所述有机溶剂1为乙醇，所述有机溶剂2或有机溶剂3为二氯甲烷。
具体地，在本发明的一些实施方式中，所述制备方法包括：取风干后的***藤植物根茎，用有机溶剂1加热回流提取1-4次，每次1-4小时，回收溶剂至无味，加入水混悬后，酸性条件下用有机溶剂2萃取，水层在碱性条件下用有机溶剂3萃取，回收有机溶剂3得总生物碱，然后柱层析，经制备液相得***藤素乙。
在本发明的实施方式中，所述柱层析的洗脱剂优选为甲醇/水或二氯甲烷/甲醇。
进一步地，以甲醇/水为洗脱剂进行洗脱时，甲醇/水的体积比例变化范围为10:1-100:0；
进一步地，以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂进行洗脱时，二氯甲烷/甲醇的体积比例变化范围为80:1-1:1。
在本发明的一些实施方式中，所述柱层析包括：用硅胶拌样，200-300目硅胶柱层析，划分为8段，记为C1～C8段，C3段经ODS-C18柱，以MeOH-H2O为洗脱剂，以体积比10:1至100:0进行梯度洗脱，得8段，记为C3-1～C3-8，C3-4段经硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH为洗脱剂，以体积比80:1至1:1进行梯度洗脱，得5段，记为C3-4A-C3-4E，其中C3-4C段经制备液相，以体积比67:33的MeOH-H2O为洗脱剂，分离得到***藤素乙。
以及，在分离过程中，可通过薄层色谱(TLC)点板或其他本领域常用的检测手段确定需选取的流段然后进行进一步的分离与纯化。
在本发明的第三方面，本发明提供了一种组合物，其包含上述第一方面中所述的双吲哚生物碱化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的一些实施方式中，所述组合物中，本发明第一方面中所述的双吲哚生物碱化合物或其药学上可接受的盐地含量为1-99wt％，优选为不低于10wt％。
在本发明的第四方面，本发明提供了一种制品，其包含上述第一方面中所述的双吲哚生物碱化合物或其药学上可接受的盐，或者包含上述第三方面中所述的组合物；以及，至少一种辅料；其中，所述制品为药品、食品或保健品。
所述药品、食品或保健品中可以包含符合药品、食品会保健品相关添加规定的、安全的辅料，比如赋形剂、填充剂等使其具备一定的形状，矫味剂等使其具有良好的口感。
在本发明的一些实施方式中，本发明所述组合物或制剂为药物组合物或药物制剂时，可以至少胃肠道给药，所述剂型包括但不限于片剂、胶囊剂、丸剂等。常用的药学上可接受的辅料为赋形剂，比如粘合剂、填充剂、润湿剂、崩解剂等，这些可用在口服给药的片剂、胶囊剂、丸剂、糖浆剂中。如有需要，还可加入调味剂、着色剂、稳定剂、润滑剂等其他辅料，或者合适的剂型也可以使用制药学上公知的方法进行包衣。
本发明的一些实施方式中提供了生产药物组合物或药物制剂的方法，所述方法包括将本发明所述的化合物中的一种或多种或其药学上可接受的盐或溶剂合物中的一种或多种与药用辅料或药物载体混合。比如在一些实施方式中，固体或液体制剂可以通过以所需比例均匀混合活性化合物与液体和/或微细粉碎的固体辅料制备，然后如果需要，使所得混合物形成所需的形状。
当然，除此之外，本领域技术人员也可使用本领域公知的其他技术将本发明的化合物配制成药物组合物或药物制剂。比如可根据由沈阳药科大学主编的现代药物制剂丛书进行药物制剂的制备。以及，除本发明中提到的，合适的药用辅料还可以是本领域已知的其他类型，例如作者Paul J Sheskey等人编著的《药用辅料手册》(Handbook ofParmaceutical Excipients)中所记载的，该书目前已修订至第八版，第一版公开于1986年，第八版公开于2017年。
在本发明的第五方面，本发明提供了上述第一方面中所述的双吲哚生物碱化合物或其药学上可接受的盐，或者上述第三方面中所述的组合物，在制备用于预防和/或治疗与高糖所致的肾小球系膜细胞异常增殖相关的疾病或病症的制品中的应用；尤其是，所述与高糖所致的肾小球系膜细胞异常增殖相关的疾病为糖尿病肾病；所述制品为药品、食品或保健品。
在本发明的第六方面，本发明提供了一种治疗糖尿病肾病的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的上述第一方面中所述的双吲哚生物碱化合物或其药学上可接受的盐中的一种或多种或者包含该类化合物中的一种或多种的药物组合物或药物制剂。
其中，所述“受试者”是指已经是治疗、观察或实验的对象的动物，优选指哺乳动物，最优选指人。所述“治疗有效量”是指包括本发明化合物在内的活性化合物或药剂的量，该量可引起研究者、兽医、医生或其他医疗人员所追求的组织***、动物或人的生物学或医学响应，这包括减轻或部分减轻受治疗的疾病、综合征、病症或障碍的症状。
本发明的化合物和药物组合物可对哺乳动物临床使用，包括人和动物，比如可以通过胃肠道等的给药途径。最优选为口服。最佳优选日剂量为0.01-200mg/kg体重，一次性服用，或分次服用。不管用何种服用方法，个人的最佳剂量应依据具体的治疗而定。通常情况下是从小剂量开始，逐渐增加剂量一直到找到最适合的剂量。
相较于现有技术，本发明的优势在于：
本发明提供了式I所示双吲哚生物碱化合物或其药学上可接受的盐，由其提供了化合物***藤素乙，并证明了该类化合物能够抑制高糖所致的肾小球系膜细胞异常增殖的作用，式I所述化合物的IC50在1.0-20.0μM之间，尤其在1.0-8.0μM之间，具有预防或治疗糖尿病肾病的药物开发潜力。比如，***藤素乙抑制高糖所致的大鼠肾小球系膜细胞异常增殖活性IC50低至7.6μM，其活性显著优于阳性对照药乌苏酸(IC50＝12.6μM)。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。以下，结合附图来详细说明本申请的实施方案，其中：
图1为***藤素乙的1H NMR图。
图2为***藤素乙的13C NMR图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本申请。应理解，这些实施例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。本申请所使用的试剂或原料均可通过常规途径购买获得，如无特殊说明，本申请所使用的试剂或原料均按照本领域常规方式使用或者按照产品说明书使用。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本申请方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1
取风干后的***藤植物根茎18kg，用95％乙醇加热回流提取4次，回收溶剂至无醇味，加入水混悬后，以2％HCl调节pH至2，用二氯甲烷萃取4次，水层用10％NaOH调节pH至10，用二氯甲烷萃取4次，回收二氯甲烷得总生物碱，用硅胶拌样，200-300目硅胶柱层析，划分为8段(C1～C8段)，C3经ODS-C18柱，以MeOH-H2O(10:1to 100:0)为洗脱剂，得8段(C3-1～C3-8)，C3-4段经硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH(80:1to 1:1)为洗脱剂，得5段(C3-4A～C3-4E)，其中C3-4C段经制备液相，以MeOH-H2O(67:33)为洗脱剂，得***藤素乙。
Figure BDA0003229320290000101
分子量623.9，分子式C39H51N4O3 +；淡黄色粉末；易溶于氯仿、二氯甲烷、甲醇。
***藤素乙的结构式通过红外光谱、质谱、一维及二维核磁共振谱而确定。红外光谱数据：IR(max,KBr)：3406,3205,2937,2858,1696,1612,1574,1323,756cm–1；质谱数据：HR-ESI-MS(m/z)：623.3962[M]+；1H NMR和13CNMR数据见表1，相应的谱图如图1、图2所示。
以上数据结合2D NMR分析确证了***藤素乙的化学结构如式(II)所示。
表1.***藤素乙的1H NMR和13C NMR数据(CD3OD,*所示为重叠信号)
Figure BDA0003229320290000111
实施例2
按实施例1的方法先得到***藤素乙，加入4％的盐酸溶液，至pH＝4，过滤，干燥，制成盐酸***藤素乙。
实施例3
按实施例1的方法先得到***藤素乙，加入4％的硫酸乙醇溶液，至pH＝4，过滤，干燥，制成硫酸***藤素乙。
实施例4
按实施例1的方法先得到***藤素乙，加入4％的磷酸溶液，至pH＝4，过滤，干燥，制成磷酸***藤素乙。
实施例5
按实施例1的方法先得到***藤素乙，加入4％的柠檬酸溶液，至pH＝4，过滤，干燥，制成柠檬酸***藤素乙。
实施例6
按实施例1的方法先得到***藤素乙，加入4％的酒石酸溶液，至pH＝4，过滤，干燥，制成酒石酸***藤素乙。
实施例7
按实施例1的方法先得到***藤素乙，加入4％的甲酸溶液，至pH＝4，过滤，干燥，制成甲酸***藤素乙。
实施例8
按实施例1的方法先得到***藤素乙，加入4％的乙二酸溶液，至pH＝4，过滤，干燥，制成乙二酸***藤素乙。
实施例9
将***藤素乙(实施例1制备)在适当的温度(-20～30℃)下溶于无水二氯甲烷及三氟乙酸的混合溶剂中，与NBS反应得到10'-溴代***藤素乙，然后将其溶于水，在过渡金属催化下加热至75℃进行反应得到10'-羟基***藤素乙。
实验例对高糖所致的肾小球系膜细胞异常增殖抑制活性试验
试验证明，本发明的式I所示双吲哚生物碱化合物对高糖所致的肾小球系膜细胞异常增殖的半数抑制浓度(IC50)在0.1-100μM之间，具有预防或治疗糖尿病肾病的作用。
试验方法和结果如下：
一、材料与方法：
(1)实验材料
细胞株：大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1，购自北京协和细胞资源中心)。
材料：DMEM低糖培养基(Hyclone，批号：SH30021.01)；DMEM高糖培养基(中乔新舟，批号：09231)胰蛋白酶-EDTA消化液(Solarbio，批号：T1300)；FBS(上海双洳，批号：S711-001S)；CCK-8(Solarbio，批号：CA1210)；DMSO(Solarbio，批号：302A034)；青霉素(Solarbio，批号：119A031)；链霉素(Solarbio，批号：423A054)。
试药：实施例1制备得到的***藤素乙、化合物1-8、***藤素甲。
阳性对照为乌苏酸。
其中，化合物1-8的结构为：
Figure BDA0003229320290000131
***藤素甲的结构为
Figure BDA0003229320290000141
上述化合物1-8均为已知化合物，可按照本领域已知的方法提取或者合成得到，比如，可参见文献王亚兰,张金苹,王志伟,王晓静.***藤吲哚生物碱化学成分研究[J].天然产物研究与开发,2019,31(10):1753-1757.中的记载；***藤素甲的制备及性质研究参见中国专利CN201910398819.0，同时该文献及专利以全文方式引入本申请。
(2)实验方法
HBZY-1细胞为贴壁细胞，置于37℃、5％CO2的恒温恒湿培养箱中使用含有10％的胎牛血清的DMEM低糖培养基培养，待细胞汇合至80％～90％传代，按一传三的比例传代。
取对数期生长的第二代或第三代细胞，胰蛋白酶-EDTA消化液消化后计数，稀释细胞悬液至细胞密度为8000个/mL接种于96孔板中，每孔加100μL稀释后的细胞悬液，每组设置六个复孔，培养24h后，弃去上清，换含有1％FBS的DMEM低糖培养基饥饿培养24h，使细胞同步处于G0期。实验分为空白组：只加DMEM低糖培养基；模型组：加DMEM高糖培养基；给药组：DMEM高糖培养基+不同浓度的试药；阳性对照组：DMEM高糖培养基+不同浓度的乌苏酸。
加药后各组培养28h，每孔加CCK-8溶液10μL，1.5h后在酶标仪下450nm检测，进而计算化合物的IC50值。
注：IC50，即半数抑制浓度(median inhibition concentration)。
二、结果：
***藤素乙抑制高糖所致的大鼠肾小球系膜细胞异常增殖活性IC50为7.6μM，相同条件下化合物1-8未显示出明显的抑制活性，其IC50值均大于100μM，***藤素甲表现出一定的抑制活性，但是其IC50值大于50μM，阳性对照药乌苏酸的IC50为12.6μM，***藤素乙的效果显著优于阳性对照药。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，尽管参照前述实施例对本申请进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (15)

1.一种双吲哚生物碱化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物为***藤素乙，其结构如下所示：
Figure FDA0003586731660000011
2.根据权利要求1所述的双吲哚生物碱化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述药学上可接受的盐为衍生自无机酸和有机酸的酸加成盐。
3.根据权利要求2所述的双吲哚生物碱化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述无机酸选自盐酸、硫酸、磷酸、氢溴酸和氢碘酸。
4.根据权利要求2所述的双吲哚生物碱化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述有机酸选自柠檬酸、酒石酸、甲酸、乙二酸、甲磺酸、碳酸、琥珀酸、苯甲酸、乙酸、草酸、对甲苯磺酸和对溴苯磺酸。
5.权利要求1至4所述的双吲哚生物碱化合物及其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，所述双吲哚生物碱化合物为***藤素乙，其提取分离自植物***藤，制备方法为：取风干后的***藤植物根茎，用有机溶剂1加热回流提取1-4次，每次1-4小时，回收溶剂至无味，加入水混悬后，酸性条件下用有机溶剂2萃取，水层在碱性条件下用有机溶剂3萃取，回收有机溶剂3得总生物碱，然后柱层析，经制备液相得***藤素乙；
所述有机溶剂1为乙醇，所述有机溶剂2或有机溶剂3为二氯甲烷；所述柱层析的洗脱剂为甲醇/水或二氯甲烷/甲醇。
6.根据权利要求5所述的双吲哚生物碱化合物及其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，萃取后可浓缩有机溶剂。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，甲醇/水为洗脱剂进行洗脱时时，甲醇/水的体积比例变化范围为10:1-100:0。
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，二氯甲烷/甲醇为洗脱剂进行洗脱时，二氯甲烷/甲醇的体积比例变化范围为80:1-1:1。
9.据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述柱层析包括：用硅胶拌样，200-300目硅胶柱层析，划分为8段，记为C1～C8段，C3段经ODS-C18柱，以MeOH-H2O为洗脱剂，以体积比10:1至100:0进行梯度洗脱，得8段，记为C3-1～C3-8，C3-4段经硅胶柱，以CH2Cl2-MeOH为洗脱剂，以体积比80:1至1:1进行梯度洗脱，得5段，记为C3-4A-C3-4E，其中C3-4C段经制备液相，以体积比67:33的MeOH-H2O为洗脱剂，分离得到***藤素乙。
10.组合物，其包含权利要求1至4中任一项所述的双吲哚生物碱化合物或其药学上可接受的盐。
11.制品，其包含权利要求1至4中任一项所述的双吲哚生物碱化合物或其药学上可接受的盐，或者包含权利要求10中所述的组合物；以及，至少一种辅料。
12.根据权利要求11所述的制品，其特征在于，所述制品为药品。
13.权利要求1至4中任一项所述的双吲哚生物碱化合物或其药学上可接受的盐，或者权利要求10中所述的组合物，在制备用于与高糖所致的肾小球系膜细胞异常增殖相关的疾病或病症的制品中的应用。
14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述与高糖所致的肾小球系膜细胞异常增殖相关的疾病为糖尿病肾病。
15.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述制品为药品。
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