JP3908856B2 - ラテックス免疫比濁法による免疫測定用フロー測光セル - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、全血を検体としてラテックス免疫比濁法により免疫測定を行うためのフロー測光セルに関する。
【０００２】
【従来の技術】
全血を検体としてラテックス免疫比濁法により免疫測定を行う方法は、既に知られている。この方法では、検体が全血であるから、血清・血漿を検体とする場合のような血液の遠心分離の工程が不要になる反面、赤血球等による濁りが光学的測定の著しい妨げとなり、適当な溶血試薬の添加等、免疫反応に影響しない方法によって全血を強制的に溶血させた試料を用いることが必要とされている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、溶血させた試料中には、血球の残滓が存在し、これがブラウン運動に伴って、フロー測光セルに照射された光束を出入りするから、血球残滓のゆらぎによる測定信号への影響が大きく、測定精度を高めることが困難とされていた。
【０００４】
この発明は、全血を検体としてラテックス免疫比濁法により免疫測定を行うためのフロー測光セルにおいて、血球残滓のゆらぎによる測定信号への影響を減少し、測定精度を向上することを課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
上記課題を解決するために、この発明では、全血を検体としてラテックス免疫比濁法により免疫測定を行うためのフロー測光セルであって、円筒状に形成され、両端に透光窓を有するセル本体が外部光から遮断した状態でホルダーに保持され、このセル本体の両端透光窓に対向する位置に光照射部及び光検出部が設けられており、前記セル本体の内径を１とし、前記ホルダーによって形成されて前記セル本体と光照射部との間に設けたスリットの径をＤ1 、前記ホルダーによって形成されて前記セル本体と光検出部との間に設けたスリットの径をＤ2 としたとき、１＞Ｄ1 ＞０．７５で、且つ、Ｄ2 ＞０．７５となるように設定していることを特徴とする。
【０００６】
上記の構成によれば、スリット径Ｄ1 ，Ｄ2 がセル本体の内径１に対して何れも０．７５以上であり、光照射部からスリットを経てフロー測光セルに照射され、反対側のスリットを経て光検出部へと入射する光束の断面（直径）が、セル本体の内径の割に、比較的広くなっているから、光束全体としての光量に占める血球残滓のゆらぎによる変動の割合が小さくなる（平均化される）。
【０００７】
また、光照射部側のスリット径Ｄ1 がセル本体の内径より大きいと、スリットを経て照射された光の一部がセル本体の肉厚内部を透過して誤差となるが、上記の構成によれば、光照射部側のスリット径Ｄ1 がセル本体の内径以下であるから、このような誤差も生じない。また、光照射部側のスリット径Ｄ1 がセル本体の内径と等しい場合、光照射部、スリット、セル本体の三者を正確に同芯状に配置しないと、光束の一部がセル本体の肉厚内部を透過したり、セル本体の内面で反射して、誤差となる可能性があるが、光照射部側のスリット径Ｄ1 がセル本体の内径以下（１＞Ｄ1 ）であるため、このような不都合も回避される。
【０００８】
従って、血球残滓のゆらぎによる測定信号への影響が減少し、光の一部がセル本体の肉厚内部を透過したり、セル本体の内面で反射することによる誤差も生ぜず、測定精度を向上することができるのである。
【０００９】
尚、光照射部側のスリット径Ｄ1 は、セル本体の内径以下であることが必要不可欠であるが、光検出部には、光照射部側のスリットで絞られた光束以上の断面で入射することがないから、光検出部側のスリット径Ｄ2 には原理的に上限がない。むしろ、フロー測光セルの各部位の製造公差や組立誤差を考慮すると、光検出部側のスリット径Ｄ2 はセル本体の内径より大きくするほうが、フロー測光セルの製造を容易ならしめる点で望ましい。
【００１０】
【発明の実施の形態】
発明の実施の形態を図面を参照しながら説明する。図１〜図９は、この発明に係るラテックス免疫比濁法による免疫測定用フロー測光セルが採用された全血血球免疫測定装置を示す。
【００１１】
まず、図２は、側面パネルを取り外した状態で示す全血血球免疫測定装置の斜視図であり、図３はこの全血血球免疫測定装置の全体の構成を概略的に示す図である。図４は全血血球免疫測定装置の要部を上方から見た図であり、図５は全血血球免疫測定装置の要部の構成を概略的に示す図である。
【００１２】
これらの図において、１は装置ケースで、その前面部２側には、検体としての全血３を収容した検体容器４をセットするための検体セット部５が内方に凹んだ状態で形成されている。６は、検体セット部５を開閉する扉７によって構成された測定キーであり、扉７を閉めることによりオン（スイッチＯＮ）となるように構成されている。前記扉７は、下端側を支点に前後方向へ揺動して開閉するように構成されており、扉７の内側には、サイズの異なる検体容器４を選択してセットできるように上面に複数の穴を形成した検体容器ホルダー８が上下軸芯周りで回転自在で且つ扉７と一体に前後方向へ揺動することが可能な状態に設けられている。
【００１３】
そして、装置ケース１の側面部９の下方には、前面部２に近い側から順に、免疫測定を行う免疫測定部１０と血球測定を行う血球計数測定部１１が前面側から見て一直線状に配置されているとともに、複数の電磁弁１２ａからなる電磁弁部１２が設けられている。また、側面部９の上方には、検体セット部５と血球計数測定部１１との間を、一直線上に配設された免疫測定部１０と血球計数測定部１１に沿うようにして直線的に移動するサンプリング機構としてのプローブユニット部１３が設けられている。
【００１４】
図３において、１４は定注器、１５は希釈液容器、１６は溶血試薬容器、１７は液排出用のポンプであり、これら１５〜１７はいずれも電磁弁部１２に接続されている。１８はポンプ１７に接続された廃液容器である。
【００１５】
前記免疫測定部１０は、この実施の形態においては、ラテックス免疫比濁法によってＣＲＰ（急性期蛋白であるＣ−反応性蛋白）を測定するように構成されている。すなわち、図３、図５において、１９は上面の開口した試薬受容セルであり、試料受容セル１９の底部には、両側に発光ダイオードからなる光照射部２０ａとフォトダイオードからなる光検出部２０ｂを備えたＣＲＰ測定用のフロー測光セル２０が流路２１を介して接続されている。当該フロー測光セル２０の出口側の流路２２には、三方電磁弁１２ｂを介して液移動用の定注器２３が接続されている。三方電磁弁１２ｂの下流側は前記電磁弁部１２を介して前記ポンプ１７に接続されている。２４，２５，２６はＣＲＰ測定に用いられる試薬を収容した試薬容器で、それぞれ、溶血試薬（以下、Ｒ１試薬という）、緩衝液（以下、Ｒ２試薬という）、抗ヒトＣＲＰ感作ラテックス免疫試薬（以下、Ｒ３試薬という）が収容されている。
【００１６】
前記試薬受容セル１９および試薬容器２４〜２６は、検体セット部５における検体容器４のセット位置に対して一直線状に配置され、これら試薬受容セル１９および試薬容器２４〜２６は、ソレノイド２７によって上下方向に揺動する蓋２８によって一括して開閉されるように構成されている。また、２９は例えばペルチェ素子よりなる電子冷却器３０を備えたクーラーボックスで、図示例では試薬Ｒ２，Ｒ３の入った試薬容器２５，２６が収容されている。
【００１７】
また、前記定注器２３は、ＣＲＰ測定時に、試料受容セル１９内の反応液（免疫測定用の試薬および全血試料）をフロー測光セル２０へ流通させる作用を司るだけでなく、試料受容セル１９やフロー測光セル２０等とで、次のような反応液攪拌機構を構成している。すなわち、図６に示すように、試料受容セル１９に反応液が収容された状態で、定注器２３が、ＣＲＰ測定に先行して、数回、摺動することにより、試料受容セル１９内の反応液を試料受容セル１９とフロー測光セル２０とにわたって前後に往復移動させるように構成してある。
【００１８】
より詳しく説明すると、定注器２３は、その摺動ストロークが制御されるように構成されており、試料受容セル１９内に、Ｒ１試薬、Ｒ２試薬、および検体（全血）３が収容された時点で、それらの総量Ｌ1 に対応して設定されたストロークａだけ、定注器２３が数回（例えば、３回）、前記三方電磁弁１２ｂがフロー測光セル２０と定注器２３を連通させた状態において、摺動することにより、反応液を前後に往復移動させて、一回目の反応液の攪拌を行い、反応液にＲ３試薬が加えられた時点で、それらの総量Ｌ2 に対応して設定されたストロークｂ端まで定注器２３が数回（例えば、３回）、摺動することにより、反応液を前後に往復移動させて、二回目の攪拌を行うように構成してある。
【００１９】
尚、ＣＲＰ測定時には、定注器２３がストロークｂ端まで一回だけ摺動して、反応液をフロー測光セル２０に流通させるようになっている。定注器２３のストロークや流路２１、２２の長さは、定注器２３がストロークｂ端まで摺動した際、流路２１、２２内にある反応液の最前端Ｐが、三方電磁弁１２ｂよりも上流側（三方電磁弁１２ｂとフロー測光セル２０の間）に位置し、最後尾Ｑがフロー測光セル２０よりも上流側（図示の例では、流路２１内で且つ試料受容セル１９の出口近く）に位置するように設定されている。そして、この状態で、前記三方電磁弁１２ｂが流路の切り換えを行って、定注器２３を遮断すると共に、三方電磁弁１２ｂ前後の流路（フロー測光セル２０側の流路とポンプ１７側の流路）を連通させると、前記ポンプ１７が流路内の反応液を吸引して、廃液容器１８に排出するように構成してある。
【００２０】
この反応液攪拌機構によれば、反応液が試料受容セル１９とフロー測光セル２０とにわたって前後に往復移動すると、試料受容セル１９と流路２１の接続部、フロー測光セル２０の入口および出口で、夫々、流路断面が変化しているので、反応液には、図６に示すように、流路断面が変化するこれらの部位で乱流が生じ、乱流が生じる部位が多いため、攪拌が効率よく行われることになる。
【００２１】
次に、血球計数測定部１１は、この実施の形態においては、電気抵抗法により、ＷＢＣ（白血球数）、ＲＢＣ（赤血球数）、ＰＬＴ（血小板数）、ＭＣＶ（赤血球容積）、Ｈｃｔ（ヘマトクリット値）を、また、シアンメトヘモグロビン法における吸光光度法によりＨｇｂ（ヘモグロビン濃度）などをそれぞれ測定するように構成されている。すなわち、図３において、３１はＷＢＣ／Ｈｇｂ血球計数測定セル（以下、単にＷＢＣセルという）で、ＷＢＣを測定するための測定電極３１ａ，３１ｂおよびＨｇｂを測定するための光照射部３１ｃ、受光部３１ｄを備えている。３２はＲＢＣ／ＰＬＴ血球計数測定セル（以下、単にＲＢＣセルという）で、ＲＢＣおよびＰＬＴを測定するための測定電極３２ａ，３２ｂを備えている。これらのセル３１，３２は、図４に示すように、免疫測定部１０における試薬受容セル１９および試薬容器２４〜２６と一直線になるように配置されている。また、ＷＢＣセル３１は、後述するサンプリングノズル４０を洗浄するための廃液チャンバを兼ねている。
【００２２】
さらに、プローブユニット部１３は、例えば次のように構成されている。すなわち、図２および図４において、３３はノズルユニットで、このノズルユニット３３は、垂直に立設されたベース部材３４に沿うようにして水平方向に設けられたタイミングベルト３５に対して適宜の連結部材３６によって固定され、これによって水平方向に往復移動できるように構成されている。
【００２３】
より詳しくは、ノズルユニット３３は、検体セット部５から血球測定を行う血球計数測定部１１までの間で、検体容器４、血球計数測定部１１と一直線上に配設された免疫測定部１０の試薬容器２４〜２６、試薬受容セル１９、ＷＢＣセル３１、ＲＢＣセル３２のほぼ真上を往復移動するように構成されている。３７はタイミングベルト３５を駆動するためのモータ、３８はノズルユニット３３に設けられた被ガイド部材３９をガイドする一対のガイド部材で、これらはベース部材３４に適宜の部材を介して取り付けられている。
【００２４】
４０はサンプリングノズルで、ノズルユニット３３内をタイミングベルト４１によって上下方向に移動するノズル保持体４２に取り付けられている。このサンプリングノズル４０の先端側（下端側）は、ノズルユニット３３内に設けられたサンプリングノズル洗浄器４３を挿通し、先端部外周が洗浄されるように構成されている。４４はタイミングベルト４１を駆動するためのモータである。４５はサンプリングノズル４０がホームポジション位置（定位置）にあるか否かを検出するセンサである。
【００２５】
そして、図３において、４６は装置の各部を総合的に制御するとともに免疫測定部１０および血球計数測定部１１からの出力を用いて各種の演算を行う制御・演算装置としてのマイクロコンピュータ（ＭＰＵ）、４７はＭＰＵ４６からの指令に基づいて電磁弁部１２、プローブユニット部１３のモータ３７，４４などに駆動信号を送るドライバ、４８は免疫測定部１０および血球計数測定部１１からの出力信号を処理してＭＰＵ４６に送る信号処理部、４９はＭＰＵ４６において処理されて得られる結果などを表示する装置で、例えばカラーディスプレイであり、５０は出力装置としてのプリンタである。
【００２６】
なお、図３において、点線は検体３や各種の試薬などの流れを示し、また、やや太い一点鎖線は制御信号を、細い一点鎖線は測定によって得られる信号の流れをそれぞれ示している。
【００２７】
この発明の実施の形態では、上記の全血血球免疫測定装置において、前記フロー測光セル２０を、次のように構成しているのである。すなわち、図１に示すように、フロー測光セル２０のセル本体２０Ａは、円筒状に形成されており、両端に透光窓２０Ｂ，２０Ｂを有する。２０Ｃ，２０Ｃはセル本体２０Ａの両端に連設された側管である。セル本体２０Ａと光照射部２０ａとの間、セル本体と光検出部２０ｂとの間には、夫々、セル本体２０Ａを外部光から遮断した状態に保持するホルダー２０Ｄによって形成されたスリットａ，ｂが設けられている。そして、セル本体２０Ａの内径を１とし、セル本体２０Ａと光照射部２０ａとの間に設けたスリットａの径をＤ1 、セル本体２０Ａと光検出部２０ｂとの間に設けたスリットｂの径をＤ2 としたとき、１＞Ｄ1 ＞０．７５で、且つ、Ｄ2 ＞０．７５、好ましくは、Ｄ2 ＞１となるように設定してある。尚、セル本体２０Ａ、透光窓２０Ｂ、側管２０Ｃは、何れも、透明ガラス製である。
【００２８】
上記の構成によれば、スリット径Ｄ1 ，Ｄ2 がセル本体２０Ａの内径１に対して何れも０．７５以上であり、光照射部２０ａからスリットａを経てフロー測光セル２０のセル本体２０Ａに照射され、反対側のスリットｂを経て光検出部２０ｂへと入射する光束の断面（直径）が、セル本体２０Ａの内径の割に、比較的広くなっているから、光束全体としての光量に占める血球残滓のゆらぎによる変動の割合が小さくなる。
【００２９】
また、光照射部２０ａ側のスリット径Ｄ1 がセル本体２０Ａの内径より大きいと、スリットａを経て照射された光束の一部がセル本体２０Ａの肉厚内部を透過して誤差となるが、上記の構成によれば、光照射部２０ａ側のスリット径Ｄ1 がセル本体２０Ａの内径以下であるから、このような誤差は生じない。
【００３０】
光照射部２０ａ側のホルダー２０により形成されるスリット径Ｄ1 がセル本体２０Ａの内径と等しい場合、光照射部２０ａ、スリットａ、セル本体２０Ａの三者を正確に同芯状に配置しないと、光束の一部がセル本体２０Ａの肉厚内部を透過したり、セル本体２０Ａの内面で反射して、誤差となる可能性があるが、光照射部２０ａ側のスリット径Ｄ1 がセル本体２０Ａの内径以下（１＞Ｄ1 ）であるため、このような不都合も生じない。
【００３１】
従って、血球残滓のゆらぎによる測定信号への影響が減少し、光の一部がセル本体２０Ａの肉厚内部を透過したり、セル本体２０Ａの内面で反射することによる誤差も生ぜず、測定精度を向上することができる。
【００３２】
尚、光照射部２０ａ側のホルダー２０により形成されるスリット径Ｄ1 は、セル本体２０Ａの内径以下であることが必要不可欠であるが、光検出部２０ｂには、光照射部２０ａ側のスリットａで絞られた光束以上の断面で入射することがないから、光検出部２０ｂ側のホルダー２０により形成されるスリット径Ｄ2 には原理的に上限がない。むしろ、フロー測光セル２０の各部位の製造公差や組立誤差を考慮すると、光検出部２０ｂ側のスリットｂの径Ｄ2 はセル本体２０Ａの内径より大きくするほうが、フロー測光セル２０の製造を容易ならしめる点で望ましい。
【００３３】
因に、実験によれば、次表の通りの結果が得られた。
【００３４】
【表１】
【００３５】
【表２】
【００３６】
表１，２において、１欄〜１０欄のデータは、１０回の実験により得られた実測値、ＭＥＡＮは、それらの平均値、Ｓ．Ｄ．は、標準偏差を示す。これらの表１，２から、セル本体２０Ａの内径を１とし、セル本体２０Ａと光照射部２０ａとの間に設けたスリットａの径をＤ1 、セル本体２０Ａと光検出部２０ｂとの間に設けたスリットｂの径をＤ2 としたとき、Ｄ2 が１．４３で、且つ、Ｄ1 が０．７７や０．８６である場合、標準偏差が小さいが、Ｄ1 が０．７１や０．６４になると、標準偏差が極端に大きくなり、血球残滓のゆらぎによる測定信号への影響が大きく、実用可能な精度範囲での再現性が得られないこ とがわかる。また、Ｄ1 が０．８６であっても、Ｄ2 が０．７１になると、標準偏差が極端に大きくなり、同様に、実用可能な精度範囲での再現性が得られないことがわかる。
【００３７】
上記構成の全血血球免疫測定装置の動作について、測定手順の一例を示した図７〜図９をも参照しながら説明する。
【００３８】
まず、測定キー６をオンする（ステップＳ１）と、定位置にあるサンプリングノズル４０は、Ｒ２試薬の位置に移動し（ステップＳ２）、Ｒ２試薬を吸引する（ステップＳ３）。この試薬吸引の後、サンプリングノズル４０は、上方に移動し、サンプリングノズル洗浄器４３に供給される洗浄液としての希釈液によってその外面が洗浄される。その後、サンプリングノズル４０は、Ｒ２試薬の位置に復帰する。
【００３９】
次いで、サンプリングノズル４０は、Ｒ１試薬の位置に移動し（ステップＳ４）、Ｒ１試薬を吸引する（ステップＳ５）。この試薬吸引の後、サンプリングノズル４０は、上方に移動し、サンプリングノズル洗浄器４３に供給される洗浄液としての希釈液によってその外面が洗浄される。その後、サンプリングノズル４０はＲ１試薬の位置に復帰する。
【００４０】
そして、サンプリングノズル４０は、検体セット位置に移動し（ステップＳ６）、検体容器４内の検体（全血）３をＣＲＰ測定のために吸引する（ステップＳ７）。この検体吸引の後、サンプリングノズル４０は、上方に移動し、サンプリングノズル洗浄器４３に供給される洗浄液としての希釈液によってその外面が洗浄される。その後、サンプリングノズル４０は検体３の位置に復帰する。
【００４１】
そして、サンプリングノズル４０は、試料受容セル１９位置に移動し（ステップＳ８）、検体３、Ｒ１試薬、Ｒ２試薬を試料受容セル１９内に吐出する（ステップＳ９）。
【００４２】
しかる後、定注器２３が、ストロークａだけ、数回、摺動して、一回目の反応液の攪拌を行う（ステップＳ１０）。
【００４３】
前記吐出を終わったサンプリングノズル４０は、ＷＢＣセル３１位置に移動し（ステップＳ１１）、内部に残留している検体３、Ｒ１試薬、Ｒ２試薬を、ポンプ１７により供給された希釈液とともにＷＢＣセル３１内に吐出する。そして、サンプリングノズル４０は、サンプリングノズル洗浄器４３に供給される洗浄液としての希釈液によってその外面が洗浄される。この洗浄における廃液は、ＷＢＣセル３１に受け止められ、ポンプ１７により廃液容器１８に排出される。再度、サンプリングノズル洗浄器４３より希釈液をＷＢＣセル３１に供給し、ポンプ１７により廃液容器１８に排出することにより、ＷＢＣセル３１を洗浄する。なお、上記廃液の受け止めをＲＢＣセル３２によって行うようにしてもよい。
【００４４】
前記洗浄が終わったサンプリングノズル４０は、検体セット位置に移動し（ステップＳ１２）、検体容器４内の検体３をＣＢＣ測定のために吸引する（ステップＳ１３）。この検体吸引の後、サンプリングノズル４０は、上方に移動し、サンプリングノズル洗浄器４３に供給される洗浄液としての希釈液によってその外面が洗浄される。
【００４５】
前記洗浄が終わったサンプリングノズル４０は、ＷＢＣセル３１内に検体３を吐出する一方、希釈液容器１５内の希釈液が電磁弁部１２を介してＷＢＣセル３１内に所定量注入され、ＣＢＣ検体の一次希釈が行われる（ステップＳ１４）。
【００４６】
ＷＢＣセル３１位置にあるサンプリングノズル４０は、前記一次希釈されたＣＢＣ検体を所定量吸引して、ＲＢＣセル３２に移動し（ステップＳ１５）、前記吸引した一次希釈されたＣＢＣ検体をこのセル３２に吐出する（ステップＳ１６）とともに、希釈液容器１３内の希釈液が電磁弁部１０を介してＲＢＣセル３２内に所定量注入され、ＣＢＣ検体の二次希釈が行われる（ステップＳ１７）。
【００４７】
上記一次希釈、二次希釈を終わった後、溶血剤容器１６内の溶血剤が電磁弁部１２を介してＷＢＣセル３１内に所定量注入され、ＷＢＣとＨｇｂの測定が行われる一方、ＲＢＣセル３２ではＲＢＣとＰＬＴの測定が行われ（ステップＳ１８）、そのときのデータは信号処理部４８を経てＭＰＵ４６に取り込まれる。
【００４８】
前記測定が終わると、ＷＢＣセル３１とＲＢＣセル３２は希釈液で洗浄される（ステップＳ１９）。
【００４９】
上述したように、前記ステップＳ１１〜Ｓ１９は、血球計数測定部１１においてＣＢＣ測定が行われているが、この期間中（約６０秒間）は、試薬受容セル１９内において、検体３、Ｒ１試薬、Ｒ２試薬の間で溶血反応が進行するとともに、妨害物質が除去される。
【００５０】
そして、ＣＢＣ測定が終わると、ＲＢＣセル３２の位置にいたサンプリングノズル４０は、ＷＢＣセル３１の位置に移動し、ポンプ１７によって供給された希釈液でＷＢＣセル３１内面が洗い流すとともに、サンプリングノズル洗浄器４３に供給される洗浄液としての希釈液によってその外面が洗浄される。このときの廃液は、ＷＢＣセル３１に受け止められ、ポンプ１７によって廃液容器１８に排出される。そして、再度、サンプリングノズル洗浄器３９より希釈液をＷＢＣセル３１に供給し、ポンプ１７によって廃液容器１８に排出することでＷＢＣセル３１を洗浄する。その後、サンプリングノズル４０は、Ｒ３試薬の位置に移動し（ステップＳ２０）、Ｒ３試薬を吸引する（ステップＳ２１）。この試薬吸引の後、サンプリングノズル３６は試薬受容セル１９位置に移動し（ステップＳ２２）、Ｒ３試薬を試薬受容セル１９内に吐出し（ステップＳ２３）、Ｒ３試薬が前記検体３、Ｒ１試薬、Ｒ２試薬の反応液内に混入される。
【００５１】
前記Ｒ３試薬の吐出後、サンプリングノズル４０は、ＷＢＣセル３１の位置に移動し、ポンプ１７によって供給された希釈液でＷＢＣセル３１内面を洗い流すとともに、サンプリングノズル洗浄器４３に供給される洗浄液としての希釈液によってその外面が洗浄される。このときの廃液は、ＷＢＣセル３１に受け止められ、ポンプ１７によって廃液容器１８に排出される。そして、再度、サンプリングノズル洗浄器４３より希釈液をＷＢＣセル３１に供給し、ポンプ１７によって廃液容器１８に排出することでＷＢＣセル３１を洗浄する。
【００５２】
そして、定注器２３が、ストロークｂだけ、数回、摺動して、二回目の反応液の攪拌を行い（ステップＳ２４）、免疫反応が生じた時点で定注器２３が、再度、ストロークｂ端まで摺動することにより、反応液をフロー測光セル２０へと流通させて、ＣＲＰ測定が行われ（ステップＳ２５）、そのときのデータは信号処理部４８を経てＭＰＵ４６に取り込まれる。前記測定が終わると、試薬受容セル１９は希釈液で洗浄され（ステップＳ２６）、全ての測定が終わる（ステップＳ２７）。
【００５３】
前記ＭＰＵ４６においては、血球計数測定部１１において行われたＣＢＣ測定によって得られたデータに基づいてＲＢＣ（赤血球数）、赤血球容積（ＭＣＶ）、などの測定値が得られる。また、ＭＰＵ４６においては、免疫測定部１０において行われたＣＲＰ測定によって得られたデータに基づいて、所定時間当たりの吸光度変化を予め既知濃度の血清（または血漿）より求めておいた検量線から、全血中のＣＲＰ濃度が得られる。
【００５４】
この場合、ＣＲＰ測定については、ＣＢＣ測定と同様に検体３として抗凝固剤添加の全血を用いているため、この全血を用いることによって生ずる血漿成分容積誤差を補正する必要がある。そこで、ＣＢＣ測定によって得られるＲＢＣ（赤血球数）と赤血球容積（ＭＣＶ）とからヘマトクリット値（Ｈｃｔ）を求め、このヘマトクリット値を用いて、ＣＲＰ測定によって得られる全血中のＣＲＰ濃度を、下記の補正式によって補正し、血漿中のＣＲＰ濃度を求めるのである。
【００５５】
すなわち、全血中のＣＲＰ濃度をＡとし、ヘマトクリット値をＢとすると、血漿中のＣＲＰ濃度Ｃは、
Ｃ＝Ａ×１００／（１００−Ｂ）
なる式によって求められる。
【００５６】
前記ＭＰＵ４６によって得られた各測定値は、例えばＭＰＵ４６に内蔵されたメモリに記憶される一方、表示装置４９に項目別に表示されたり、プリンタ５０によって出力されたりする。
【００５７】
そして、上述したように、この発明の全血血球免疫測定装置においては、免疫測定部１０において溶血および妨害物質除去反応を起こさせている間に血球計数測定部１１においてＣＢＣ測定を行うようにしているので、ＣＲＰ測定およびＣＢＣ測定のトータル時間を短縮することができるとともに、前述したＣＲＰ測定によって得られる結果を、ＣＢＣ測定によって得られる結果によって行う補正をスムーズに行なえる。
【００５８】
【発明の効果】
この発明によれば、全血を検体としてラテックス免疫比濁法により免疫測定を行うためのフロー測光セルにおいて、血球残滓のゆらぎによる測定信号への影響を減少し、測定精度を向上することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】 この発明に係るラテックス免疫比濁法による免疫測定用フロー測光セルの説明図である。
【図２】 全血血球免疫測定装置の一例を、側面パネルを取り外した状態で示す斜視図である。
【図３】 前記全血血球免疫測定装置の全体の構成を概略的に示す図である。
【図４】 前記全血血球免疫測定装置の要部を上方から見た図である。
【図５】 前記全血血球免疫測定装置の要部の構成を概略的に示す図である。
【図６】 前記全血血球免疫測定装置に採用された反応液攪拌機構の説明図である。
【図７】 図８および図９とともに測定手順の一例を示すフローチャートである。
【図８】 図７に示した部分に続くフローチャートである。
【図９】 図８に示した部分に続くフローチャートである。
【符号の説明】
２０…フロー測光セル、２０Ａ…セル本体、２０Ｄ…ホルダー、２０ａ…光照射部、２０ｂ…光検出部、ａ，ｂ…スリット、Ｄ1 ，Ｄ2 …スリット径。
【発明の属する技術分野】
この発明は、全血を検体としてラテックス免疫比濁法により免疫測定を行うためのフロー測光セルに関する。
【０００２】
【従来の技術】
全血を検体としてラテックス免疫比濁法により免疫測定を行う方法は、既に知られている。この方法では、検体が全血であるから、血清・血漿を検体とする場合のような血液の遠心分離の工程が不要になる反面、赤血球等による濁りが光学的測定の著しい妨げとなり、適当な溶血試薬の添加等、免疫反応に影響しない方法によって全血を強制的に溶血させた試料を用いることが必要とされている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、溶血させた試料中には、血球の残滓が存在し、これがブラウン運動に伴って、フロー測光セルに照射された光束を出入りするから、血球残滓のゆらぎによる測定信号への影響が大きく、測定精度を高めることが困難とされていた。
【０００４】
この発明は、全血を検体としてラテックス免疫比濁法により免疫測定を行うためのフロー測光セルにおいて、血球残滓のゆらぎによる測定信号への影響を減少し、測定精度を向上することを課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
上記課題を解決するために、この発明では、全血を検体としてラテックス免疫比濁法により免疫測定を行うためのフロー測光セルであって、円筒状に形成され、両端に透光窓を有するセル本体が外部光から遮断した状態でホルダーに保持され、このセル本体の両端透光窓に対向する位置に光照射部及び光検出部が設けられており、前記セル本体の内径を１とし、前記ホルダーによって形成されて前記セル本体と光照射部との間に設けたスリットの径をＤ1 、前記ホルダーによって形成されて前記セル本体と光検出部との間に設けたスリットの径をＤ2 としたとき、１＞Ｄ1 ＞０．７５で、且つ、Ｄ2 ＞０．７５となるように設定していることを特徴とする。
【０００６】
上記の構成によれば、スリット径Ｄ1 ，Ｄ2 がセル本体の内径１に対して何れも０．７５以上であり、光照射部からスリットを経てフロー測光セルに照射され、反対側のスリットを経て光検出部へと入射する光束の断面（直径）が、セル本体の内径の割に、比較的広くなっているから、光束全体としての光量に占める血球残滓のゆらぎによる変動の割合が小さくなる（平均化される）。
【０００７】
また、光照射部側のスリット径Ｄ1 がセル本体の内径より大きいと、スリットを経て照射された光の一部がセル本体の肉厚内部を透過して誤差となるが、上記の構成によれば、光照射部側のスリット径Ｄ1 がセル本体の内径以下であるから、このような誤差も生じない。また、光照射部側のスリット径Ｄ1 がセル本体の内径と等しい場合、光照射部、スリット、セル本体の三者を正確に同芯状に配置しないと、光束の一部がセル本体の肉厚内部を透過したり、セル本体の内面で反射して、誤差となる可能性があるが、光照射部側のスリット径Ｄ1 がセル本体の内径以下（１＞Ｄ1 ）であるため、このような不都合も回避される。
【０００８】
従って、血球残滓のゆらぎによる測定信号への影響が減少し、光の一部がセル本体の肉厚内部を透過したり、セル本体の内面で反射することによる誤差も生ぜず、測定精度を向上することができるのである。
【０００９】
尚、光照射部側のスリット径Ｄ1 は、セル本体の内径以下であることが必要不可欠であるが、光検出部には、光照射部側のスリットで絞られた光束以上の断面で入射することがないから、光検出部側のスリット径Ｄ2 には原理的に上限がない。むしろ、フロー測光セルの各部位の製造公差や組立誤差を考慮すると、光検出部側のスリット径Ｄ2 はセル本体の内径より大きくするほうが、フロー測光セルの製造を容易ならしめる点で望ましい。
【００１０】
【発明の実施の形態】
発明の実施の形態を図面を参照しながら説明する。図１〜図９は、この発明に係るラテックス免疫比濁法による免疫測定用フロー測光セルが採用された全血血球免疫測定装置を示す。
【００１１】
まず、図２は、側面パネルを取り外した状態で示す全血血球免疫測定装置の斜視図であり、図３はこの全血血球免疫測定装置の全体の構成を概略的に示す図である。図４は全血血球免疫測定装置の要部を上方から見た図であり、図５は全血血球免疫測定装置の要部の構成を概略的に示す図である。
【００１２】
これらの図において、１は装置ケースで、その前面部２側には、検体としての全血３を収容した検体容器４をセットするための検体セット部５が内方に凹んだ状態で形成されている。６は、検体セット部５を開閉する扉７によって構成された測定キーであり、扉７を閉めることによりオン（スイッチＯＮ）となるように構成されている。前記扉７は、下端側を支点に前後方向へ揺動して開閉するように構成されており、扉７の内側には、サイズの異なる検体容器４を選択してセットできるように上面に複数の穴を形成した検体容器ホルダー８が上下軸芯周りで回転自在で且つ扉７と一体に前後方向へ揺動することが可能な状態に設けられている。
【００１３】
そして、装置ケース１の側面部９の下方には、前面部２に近い側から順に、免疫測定を行う免疫測定部１０と血球測定を行う血球計数測定部１１が前面側から見て一直線状に配置されているとともに、複数の電磁弁１２ａからなる電磁弁部１２が設けられている。また、側面部９の上方には、検体セット部５と血球計数測定部１１との間を、一直線上に配設された免疫測定部１０と血球計数測定部１１に沿うようにして直線的に移動するサンプリング機構としてのプローブユニット部１３が設けられている。
【００１４】
図３において、１４は定注器、１５は希釈液容器、１６は溶血試薬容器、１７は液排出用のポンプであり、これら１５〜１７はいずれも電磁弁部１２に接続されている。１８はポンプ１７に接続された廃液容器である。
【００１５】
前記免疫測定部１０は、この実施の形態においては、ラテックス免疫比濁法によってＣＲＰ（急性期蛋白であるＣ−反応性蛋白）を測定するように構成されている。すなわち、図３、図５において、１９は上面の開口した試薬受容セルであり、試料受容セル１９の底部には、両側に発光ダイオードからなる光照射部２０ａとフォトダイオードからなる光検出部２０ｂを備えたＣＲＰ測定用のフロー測光セル２０が流路２１を介して接続されている。当該フロー測光セル２０の出口側の流路２２には、三方電磁弁１２ｂを介して液移動用の定注器２３が接続されている。三方電磁弁１２ｂの下流側は前記電磁弁部１２を介して前記ポンプ１７に接続されている。２４，２５，２６はＣＲＰ測定に用いられる試薬を収容した試薬容器で、それぞれ、溶血試薬（以下、Ｒ１試薬という）、緩衝液（以下、Ｒ２試薬という）、抗ヒトＣＲＰ感作ラテックス免疫試薬（以下、Ｒ３試薬という）が収容されている。
【００１６】
前記試薬受容セル１９および試薬容器２４〜２６は、検体セット部５における検体容器４のセット位置に対して一直線状に配置され、これら試薬受容セル１９および試薬容器２４〜２６は、ソレノイド２７によって上下方向に揺動する蓋２８によって一括して開閉されるように構成されている。また、２９は例えばペルチェ素子よりなる電子冷却器３０を備えたクーラーボックスで、図示例では試薬Ｒ２，Ｒ３の入った試薬容器２５，２６が収容されている。
【００１７】
また、前記定注器２３は、ＣＲＰ測定時に、試料受容セル１９内の反応液（免疫測定用の試薬および全血試料）をフロー測光セル２０へ流通させる作用を司るだけでなく、試料受容セル１９やフロー測光セル２０等とで、次のような反応液攪拌機構を構成している。すなわち、図６に示すように、試料受容セル１９に反応液が収容された状態で、定注器２３が、ＣＲＰ測定に先行して、数回、摺動することにより、試料受容セル１９内の反応液を試料受容セル１９とフロー測光セル２０とにわたって前後に往復移動させるように構成してある。
【００１８】
より詳しく説明すると、定注器２３は、その摺動ストロークが制御されるように構成されており、試料受容セル１９内に、Ｒ１試薬、Ｒ２試薬、および検体（全血）３が収容された時点で、それらの総量Ｌ1 に対応して設定されたストロークａだけ、定注器２３が数回（例えば、３回）、前記三方電磁弁１２ｂがフロー測光セル２０と定注器２３を連通させた状態において、摺動することにより、反応液を前後に往復移動させて、一回目の反応液の攪拌を行い、反応液にＲ３試薬が加えられた時点で、それらの総量Ｌ2 に対応して設定されたストロークｂ端まで定注器２３が数回（例えば、３回）、摺動することにより、反応液を前後に往復移動させて、二回目の攪拌を行うように構成してある。
【００１９】
尚、ＣＲＰ測定時には、定注器２３がストロークｂ端まで一回だけ摺動して、反応液をフロー測光セル２０に流通させるようになっている。定注器２３のストロークや流路２１、２２の長さは、定注器２３がストロークｂ端まで摺動した際、流路２１、２２内にある反応液の最前端Ｐが、三方電磁弁１２ｂよりも上流側（三方電磁弁１２ｂとフロー測光セル２０の間）に位置し、最後尾Ｑがフロー測光セル２０よりも上流側（図示の例では、流路２１内で且つ試料受容セル１９の出口近く）に位置するように設定されている。そして、この状態で、前記三方電磁弁１２ｂが流路の切り換えを行って、定注器２３を遮断すると共に、三方電磁弁１２ｂ前後の流路（フロー測光セル２０側の流路とポンプ１７側の流路）を連通させると、前記ポンプ１７が流路内の反応液を吸引して、廃液容器１８に排出するように構成してある。
【００２０】
この反応液攪拌機構によれば、反応液が試料受容セル１９とフロー測光セル２０とにわたって前後に往復移動すると、試料受容セル１９と流路２１の接続部、フロー測光セル２０の入口および出口で、夫々、流路断面が変化しているので、反応液には、図６に示すように、流路断面が変化するこれらの部位で乱流が生じ、乱流が生じる部位が多いため、攪拌が効率よく行われることになる。
【００２１】
次に、血球計数測定部１１は、この実施の形態においては、電気抵抗法により、ＷＢＣ（白血球数）、ＲＢＣ（赤血球数）、ＰＬＴ（血小板数）、ＭＣＶ（赤血球容積）、Ｈｃｔ（ヘマトクリット値）を、また、シアンメトヘモグロビン法における吸光光度法によりＨｇｂ（ヘモグロビン濃度）などをそれぞれ測定するように構成されている。すなわち、図３において、３１はＷＢＣ／Ｈｇｂ血球計数測定セル（以下、単にＷＢＣセルという）で、ＷＢＣを測定するための測定電極３１ａ，３１ｂおよびＨｇｂを測定するための光照射部３１ｃ、受光部３１ｄを備えている。３２はＲＢＣ／ＰＬＴ血球計数測定セル（以下、単にＲＢＣセルという）で、ＲＢＣおよびＰＬＴを測定するための測定電極３２ａ，３２ｂを備えている。これらのセル３１，３２は、図４に示すように、免疫測定部１０における試薬受容セル１９および試薬容器２４〜２６と一直線になるように配置されている。また、ＷＢＣセル３１は、後述するサンプリングノズル４０を洗浄するための廃液チャンバを兼ねている。
【００２２】
さらに、プローブユニット部１３は、例えば次のように構成されている。すなわち、図２および図４において、３３はノズルユニットで、このノズルユニット３３は、垂直に立設されたベース部材３４に沿うようにして水平方向に設けられたタイミングベルト３５に対して適宜の連結部材３６によって固定され、これによって水平方向に往復移動できるように構成されている。
【００２３】
より詳しくは、ノズルユニット３３は、検体セット部５から血球測定を行う血球計数測定部１１までの間で、検体容器４、血球計数測定部１１と一直線上に配設された免疫測定部１０の試薬容器２４〜２６、試薬受容セル１９、ＷＢＣセル３１、ＲＢＣセル３２のほぼ真上を往復移動するように構成されている。３７はタイミングベルト３５を駆動するためのモータ、３８はノズルユニット３３に設けられた被ガイド部材３９をガイドする一対のガイド部材で、これらはベース部材３４に適宜の部材を介して取り付けられている。
【００２４】
４０はサンプリングノズルで、ノズルユニット３３内をタイミングベルト４１によって上下方向に移動するノズル保持体４２に取り付けられている。このサンプリングノズル４０の先端側（下端側）は、ノズルユニット３３内に設けられたサンプリングノズル洗浄器４３を挿通し、先端部外周が洗浄されるように構成されている。４４はタイミングベルト４１を駆動するためのモータである。４５はサンプリングノズル４０がホームポジション位置（定位置）にあるか否かを検出するセンサである。
【００２５】
そして、図３において、４６は装置の各部を総合的に制御するとともに免疫測定部１０および血球計数測定部１１からの出力を用いて各種の演算を行う制御・演算装置としてのマイクロコンピュータ（ＭＰＵ）、４７はＭＰＵ４６からの指令に基づいて電磁弁部１２、プローブユニット部１３のモータ３７，４４などに駆動信号を送るドライバ、４８は免疫測定部１０および血球計数測定部１１からの出力信号を処理してＭＰＵ４６に送る信号処理部、４９はＭＰＵ４６において処理されて得られる結果などを表示する装置で、例えばカラーディスプレイであり、５０は出力装置としてのプリンタである。
【００２６】
なお、図３において、点線は検体３や各種の試薬などの流れを示し、また、やや太い一点鎖線は制御信号を、細い一点鎖線は測定によって得られる信号の流れをそれぞれ示している。
【００２７】
この発明の実施の形態では、上記の全血血球免疫測定装置において、前記フロー測光セル２０を、次のように構成しているのである。すなわち、図１に示すように、フロー測光セル２０のセル本体２０Ａは、円筒状に形成されており、両端に透光窓２０Ｂ，２０Ｂを有する。２０Ｃ，２０Ｃはセル本体２０Ａの両端に連設された側管である。セル本体２０Ａと光照射部２０ａとの間、セル本体と光検出部２０ｂとの間には、夫々、セル本体２０Ａを外部光から遮断した状態に保持するホルダー２０Ｄによって形成されたスリットａ，ｂが設けられている。そして、セル本体２０Ａの内径を１とし、セル本体２０Ａと光照射部２０ａとの間に設けたスリットａの径をＤ1 、セル本体２０Ａと光検出部２０ｂとの間に設けたスリットｂの径をＤ2 としたとき、１＞Ｄ1 ＞０．７５で、且つ、Ｄ2 ＞０．７５、好ましくは、Ｄ2 ＞１となるように設定してある。尚、セル本体２０Ａ、透光窓２０Ｂ、側管２０Ｃは、何れも、透明ガラス製である。
【００２８】
上記の構成によれば、スリット径Ｄ1 ，Ｄ2 がセル本体２０Ａの内径１に対して何れも０．７５以上であり、光照射部２０ａからスリットａを経てフロー測光セル２０のセル本体２０Ａに照射され、反対側のスリットｂを経て光検出部２０ｂへと入射する光束の断面（直径）が、セル本体２０Ａの内径の割に、比較的広くなっているから、光束全体としての光量に占める血球残滓のゆらぎによる変動の割合が小さくなる。
【００２９】
また、光照射部２０ａ側のスリット径Ｄ1 がセル本体２０Ａの内径より大きいと、スリットａを経て照射された光束の一部がセル本体２０Ａの肉厚内部を透過して誤差となるが、上記の構成によれば、光照射部２０ａ側のスリット径Ｄ1 がセル本体２０Ａの内径以下であるから、このような誤差は生じない。
【００３０】
光照射部２０ａ側のホルダー２０により形成されるスリット径Ｄ1 がセル本体２０Ａの内径と等しい場合、光照射部２０ａ、スリットａ、セル本体２０Ａの三者を正確に同芯状に配置しないと、光束の一部がセル本体２０Ａの肉厚内部を透過したり、セル本体２０Ａの内面で反射して、誤差となる可能性があるが、光照射部２０ａ側のスリット径Ｄ1 がセル本体２０Ａの内径以下（１＞Ｄ1 ）であるため、このような不都合も生じない。
【００３１】
従って、血球残滓のゆらぎによる測定信号への影響が減少し、光の一部がセル本体２０Ａの肉厚内部を透過したり、セル本体２０Ａの内面で反射することによる誤差も生ぜず、測定精度を向上することができる。
【００３２】
尚、光照射部２０ａ側のホルダー２０により形成されるスリット径Ｄ1 は、セル本体２０Ａの内径以下であることが必要不可欠であるが、光検出部２０ｂには、光照射部２０ａ側のスリットａで絞られた光束以上の断面で入射することがないから、光検出部２０ｂ側のホルダー２０により形成されるスリット径Ｄ2 には原理的に上限がない。むしろ、フロー測光セル２０の各部位の製造公差や組立誤差を考慮すると、光検出部２０ｂ側のスリットｂの径Ｄ2 はセル本体２０Ａの内径より大きくするほうが、フロー測光セル２０の製造を容易ならしめる点で望ましい。
【００３３】
因に、実験によれば、次表の通りの結果が得られた。
【００３４】
【表１】
【００３５】
【表２】
【００３６】
表１，２において、１欄〜１０欄のデータは、１０回の実験により得られた実測値、ＭＥＡＮは、それらの平均値、Ｓ．Ｄ．は、標準偏差を示す。これらの表１，２から、セル本体２０Ａの内径を１とし、セル本体２０Ａと光照射部２０ａとの間に設けたスリットａの径をＤ1 、セル本体２０Ａと光検出部２０ｂとの間に設けたスリットｂの径をＤ2 としたとき、Ｄ2 が１．４３で、且つ、Ｄ1 が０．７７や０．８６である場合、標準偏差が小さいが、Ｄ1 が０．７１や０．６４になると、標準偏差が極端に大きくなり、血球残滓のゆらぎによる測定信号への影響が大きく、実用可能な精度範囲での再現性が得られないこ とがわかる。また、Ｄ1 が０．８６であっても、Ｄ2 が０．７１になると、標準偏差が極端に大きくなり、同様に、実用可能な精度範囲での再現性が得られないことがわかる。
【００３７】
上記構成の全血血球免疫測定装置の動作について、測定手順の一例を示した図７〜図９をも参照しながら説明する。
【００３８】
まず、測定キー６をオンする（ステップＳ１）と、定位置にあるサンプリングノズル４０は、Ｒ２試薬の位置に移動し（ステップＳ２）、Ｒ２試薬を吸引する（ステップＳ３）。この試薬吸引の後、サンプリングノズル４０は、上方に移動し、サンプリングノズル洗浄器４３に供給される洗浄液としての希釈液によってその外面が洗浄される。その後、サンプリングノズル４０は、Ｒ２試薬の位置に復帰する。
【００３９】
次いで、サンプリングノズル４０は、Ｒ１試薬の位置に移動し（ステップＳ４）、Ｒ１試薬を吸引する（ステップＳ５）。この試薬吸引の後、サンプリングノズル４０は、上方に移動し、サンプリングノズル洗浄器４３に供給される洗浄液としての希釈液によってその外面が洗浄される。その後、サンプリングノズル４０はＲ１試薬の位置に復帰する。
【００４０】
そして、サンプリングノズル４０は、検体セット位置に移動し（ステップＳ６）、検体容器４内の検体（全血）３をＣＲＰ測定のために吸引する（ステップＳ７）。この検体吸引の後、サンプリングノズル４０は、上方に移動し、サンプリングノズル洗浄器４３に供給される洗浄液としての希釈液によってその外面が洗浄される。その後、サンプリングノズル４０は検体３の位置に復帰する。
【００４１】
そして、サンプリングノズル４０は、試料受容セル１９位置に移動し（ステップＳ８）、検体３、Ｒ１試薬、Ｒ２試薬を試料受容セル１９内に吐出する（ステップＳ９）。
【００４２】
しかる後、定注器２３が、ストロークａだけ、数回、摺動して、一回目の反応液の攪拌を行う（ステップＳ１０）。
【００４３】
前記吐出を終わったサンプリングノズル４０は、ＷＢＣセル３１位置に移動し（ステップＳ１１）、内部に残留している検体３、Ｒ１試薬、Ｒ２試薬を、ポンプ１７により供給された希釈液とともにＷＢＣセル３１内に吐出する。そして、サンプリングノズル４０は、サンプリングノズル洗浄器４３に供給される洗浄液としての希釈液によってその外面が洗浄される。この洗浄における廃液は、ＷＢＣセル３１に受け止められ、ポンプ１７により廃液容器１８に排出される。再度、サンプリングノズル洗浄器４３より希釈液をＷＢＣセル３１に供給し、ポンプ１７により廃液容器１８に排出することにより、ＷＢＣセル３１を洗浄する。なお、上記廃液の受け止めをＲＢＣセル３２によって行うようにしてもよい。
【００４４】
前記洗浄が終わったサンプリングノズル４０は、検体セット位置に移動し（ステップＳ１２）、検体容器４内の検体３をＣＢＣ測定のために吸引する（ステップＳ１３）。この検体吸引の後、サンプリングノズル４０は、上方に移動し、サンプリングノズル洗浄器４３に供給される洗浄液としての希釈液によってその外面が洗浄される。
【００４５】
前記洗浄が終わったサンプリングノズル４０は、ＷＢＣセル３１内に検体３を吐出する一方、希釈液容器１５内の希釈液が電磁弁部１２を介してＷＢＣセル３１内に所定量注入され、ＣＢＣ検体の一次希釈が行われる（ステップＳ１４）。
【００４６】
ＷＢＣセル３１位置にあるサンプリングノズル４０は、前記一次希釈されたＣＢＣ検体を所定量吸引して、ＲＢＣセル３２に移動し（ステップＳ１５）、前記吸引した一次希釈されたＣＢＣ検体をこのセル３２に吐出する（ステップＳ１６）とともに、希釈液容器１３内の希釈液が電磁弁部１０を介してＲＢＣセル３２内に所定量注入され、ＣＢＣ検体の二次希釈が行われる（ステップＳ１７）。
【００４７】
上記一次希釈、二次希釈を終わった後、溶血剤容器１６内の溶血剤が電磁弁部１２を介してＷＢＣセル３１内に所定量注入され、ＷＢＣとＨｇｂの測定が行われる一方、ＲＢＣセル３２ではＲＢＣとＰＬＴの測定が行われ（ステップＳ１８）、そのときのデータは信号処理部４８を経てＭＰＵ４６に取り込まれる。
【００４８】
前記測定が終わると、ＷＢＣセル３１とＲＢＣセル３２は希釈液で洗浄される（ステップＳ１９）。
【００４９】
上述したように、前記ステップＳ１１〜Ｓ１９は、血球計数測定部１１においてＣＢＣ測定が行われているが、この期間中（約６０秒間）は、試薬受容セル１９内において、検体３、Ｒ１試薬、Ｒ２試薬の間で溶血反応が進行するとともに、妨害物質が除去される。
【００５０】
そして、ＣＢＣ測定が終わると、ＲＢＣセル３２の位置にいたサンプリングノズル４０は、ＷＢＣセル３１の位置に移動し、ポンプ１７によって供給された希釈液でＷＢＣセル３１内面が洗い流すとともに、サンプリングノズル洗浄器４３に供給される洗浄液としての希釈液によってその外面が洗浄される。このときの廃液は、ＷＢＣセル３１に受け止められ、ポンプ１７によって廃液容器１８に排出される。そして、再度、サンプリングノズル洗浄器３９より希釈液をＷＢＣセル３１に供給し、ポンプ１７によって廃液容器１８に排出することでＷＢＣセル３１を洗浄する。その後、サンプリングノズル４０は、Ｒ３試薬の位置に移動し（ステップＳ２０）、Ｒ３試薬を吸引する（ステップＳ２１）。この試薬吸引の後、サンプリングノズル３６は試薬受容セル１９位置に移動し（ステップＳ２２）、Ｒ３試薬を試薬受容セル１９内に吐出し（ステップＳ２３）、Ｒ３試薬が前記検体３、Ｒ１試薬、Ｒ２試薬の反応液内に混入される。
【００５１】
前記Ｒ３試薬の吐出後、サンプリングノズル４０は、ＷＢＣセル３１の位置に移動し、ポンプ１７によって供給された希釈液でＷＢＣセル３１内面を洗い流すとともに、サンプリングノズル洗浄器４３に供給される洗浄液としての希釈液によってその外面が洗浄される。このときの廃液は、ＷＢＣセル３１に受け止められ、ポンプ１７によって廃液容器１８に排出される。そして、再度、サンプリングノズル洗浄器４３より希釈液をＷＢＣセル３１に供給し、ポンプ１７によって廃液容器１８に排出することでＷＢＣセル３１を洗浄する。
【００５２】
そして、定注器２３が、ストロークｂだけ、数回、摺動して、二回目の反応液の攪拌を行い（ステップＳ２４）、免疫反応が生じた時点で定注器２３が、再度、ストロークｂ端まで摺動することにより、反応液をフロー測光セル２０へと流通させて、ＣＲＰ測定が行われ（ステップＳ２５）、そのときのデータは信号処理部４８を経てＭＰＵ４６に取り込まれる。前記測定が終わると、試薬受容セル１９は希釈液で洗浄され（ステップＳ２６）、全ての測定が終わる（ステップＳ２７）。
【００５３】
前記ＭＰＵ４６においては、血球計数測定部１１において行われたＣＢＣ測定によって得られたデータに基づいてＲＢＣ（赤血球数）、赤血球容積（ＭＣＶ）、などの測定値が得られる。また、ＭＰＵ４６においては、免疫測定部１０において行われたＣＲＰ測定によって得られたデータに基づいて、所定時間当たりの吸光度変化を予め既知濃度の血清（または血漿）より求めておいた検量線から、全血中のＣＲＰ濃度が得られる。
【００５４】
この場合、ＣＲＰ測定については、ＣＢＣ測定と同様に検体３として抗凝固剤添加の全血を用いているため、この全血を用いることによって生ずる血漿成分容積誤差を補正する必要がある。そこで、ＣＢＣ測定によって得られるＲＢＣ（赤血球数）と赤血球容積（ＭＣＶ）とからヘマトクリット値（Ｈｃｔ）を求め、このヘマトクリット値を用いて、ＣＲＰ測定によって得られる全血中のＣＲＰ濃度を、下記の補正式によって補正し、血漿中のＣＲＰ濃度を求めるのである。
【００５５】
すなわち、全血中のＣＲＰ濃度をＡとし、ヘマトクリット値をＢとすると、血漿中のＣＲＰ濃度Ｃは、
Ｃ＝Ａ×１００／（１００−Ｂ）
なる式によって求められる。
【００５６】
前記ＭＰＵ４６によって得られた各測定値は、例えばＭＰＵ４６に内蔵されたメモリに記憶される一方、表示装置４９に項目別に表示されたり、プリンタ５０によって出力されたりする。
【００５７】
そして、上述したように、この発明の全血血球免疫測定装置においては、免疫測定部１０において溶血および妨害物質除去反応を起こさせている間に血球計数測定部１１においてＣＢＣ測定を行うようにしているので、ＣＲＰ測定およびＣＢＣ測定のトータル時間を短縮することができるとともに、前述したＣＲＰ測定によって得られる結果を、ＣＢＣ測定によって得られる結果によって行う補正をスムーズに行なえる。
【００５８】
【発明の効果】
この発明によれば、全血を検体としてラテックス免疫比濁法により免疫測定を行うためのフロー測光セルにおいて、血球残滓のゆらぎによる測定信号への影響を減少し、測定精度を向上することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】 この発明に係るラテックス免疫比濁法による免疫測定用フロー測光セルの説明図である。
【図２】 全血血球免疫測定装置の一例を、側面パネルを取り外した状態で示す斜視図である。
【図３】 前記全血血球免疫測定装置の全体の構成を概略的に示す図である。
【図４】 前記全血血球免疫測定装置の要部を上方から見た図である。
【図５】 前記全血血球免疫測定装置の要部の構成を概略的に示す図である。
【図６】 前記全血血球免疫測定装置に採用された反応液攪拌機構の説明図である。
【図７】 図８および図９とともに測定手順の一例を示すフローチャートである。
【図８】 図７に示した部分に続くフローチャートである。
【図９】 図８に示した部分に続くフローチャートである。
【符号の説明】
２０…フロー測光セル、２０Ａ…セル本体、２０Ｄ…ホルダー、２０ａ…光照射部、２０ｂ…光検出部、ａ，ｂ…スリット、Ｄ1 ，Ｄ2 …スリット径。
Claims (1)
- 全血を検体としてラテックス免疫比濁法により免疫測定を行うためのフロー測光セルであって、円筒状に形成され、両端に透光窓を有するセル本体が外部光から遮断した状態でホルダーに保持され、このセル本体の両端透光窓に対向する位置に光照射部及び光検出部が設けられており、前記セル本体の内径を１とし、前記ホルダーによって形成されて前記セル本体と光照射部との間に設けたスリットの径をＤ1 、前記ホルダーによって形成されて前記セル本体と光検出部との間に設けたスリットの径をＤ2 としたとき、１＞Ｄ1 ＞０．７５で、且つ、Ｄ2 ＞０．７５となるように設定していることを特徴とするラテックス免疫比濁法による免疫測定用フロー測光セル。
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