JP2023175681A - がんの治療のためのｉｉ型抗ｃｄ２０抗体及び抗ｃｄ２０／ｃｄ３０二重特異性抗体 - Google Patents

がんの治療のためのｉｉ型抗ｃｄ２０抗体及び抗ｃｄ２０／ｃｄ３０二重特異性抗体 Download PDF

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Abstract

【課題】Ｔ細胞活性化治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を減少させるための方法において使用する抗体を提供する。【解決手段】個体のがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であって、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせて使用される、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を提供する。前記抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及び前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、単一の組成物で一緒に投与されるか、又は２つ以上の異なる組成物で別々に投与される。【選択図】なし

Description

本発明は、疾患、特にＢ細胞増殖性疾患を治療する方法、及びＴ細胞活性化治療剤の投与に応答した有害作用を低減するための方法に関する。本発明はさらに、疾患を治療する併用治療法及びそのような方法における使用のための抗体に関する。
Ｂ細胞増殖性疾患は、白血病とリンパ腫の両方を含む悪性腫瘍の異種グループを記述する。リンパ腫はリンパ細胞から発生し、主に２つのカテゴリー：ホジキンリンパ腫（ＨＬ）及び非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）が含まれる。米国においては、Ｂ細胞由来のリンパ腫はすべての非ホジキンリンパ腫症例の約８０－８５％を占めており、起源のＢ細胞における遺伝子型及び表現型発現パターンに基づいて、Ｂ細胞サブセット内にはかなりの異質性がある。例えば、Ｂ細胞リンパ腫サブセットには、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）又は慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）などの進行の遅い緩徐進行型で不治の疾患、並びにより攻撃的なサブタイプ、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）が含まれる。
Ｂ細胞増殖性疾患の治療のためのさまざまな薬剤の利用可能性にもかかわらず、患者の寛解を延長し、治癒率を向上させるための安全で効果的な治療法の開発のための継続的な必要性がある。
現在調査されている戦略は、悪性Ｂ細胞に対するＴ細胞の関与である。悪性Ｂ細胞に対してＴ細胞を効果的に関与させるために、最近２つの手法が開発された。これらの２つの手法は次のとおりである：１）生体外で腫瘍細胞を認識するように操作されたＴ細胞の投与（キメラ抗原受容体改変Ｔ細胞療法［ＣＡＲ－Ｔ細胞］としても知られる）（Maude et al., N Engl J Med (2014) 371,1507-1517）；及び、２）二重特異性抗体など、内因性Ｔ細胞を活性化する薬剤の投与（Oak and Bartlett, Expert Opin Investig Drugs (2015) 24, 715-724）。
第１の手法の例は、Ｍａｕｄｅらによる研究で報告されており、そこでは３０人の成人及び小児患者が、ＣＤ１９指向性キメラ抗原受容体レンチウイルスベクターで形質導入された自己Ｔ細胞（ＣＴＬ０１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞）で治療された。その結果、６か月のイベントフリー生存率６７％及び全生存率７８％に基づく持続的な寛解が得られた。しかしながら、すべての患者がサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）（腫瘍負荷に関連する）を患っており、患者の２７％が重度のＣＲＳを患っていた。原因不明の中枢神経系毒性も高頻度で認められた。
対照的に、腫瘍標的を認識するために内因性Ｔ細胞を活性化することを含む第２の手法は、このスケーラビリティのハードルを回避し、競合的有効性、安全性データ、及び潜在的に長期の応答期間も提供することができる。異なるＣＤ２０＋血液悪性腫瘍において、この手法は、微小残存病変陽性の急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を有する患者のために最近承認された、ＣＤ１９ ＣＤ３標的指向性Ｔ細胞二重特異性分子であるブリナツモマブによって最もよく実証されている（Bargou et al., Science (2008) 321, 974-977）。２つの単鎖Ｆｖ断片（いわゆるＢｉＴＥ（登録商標）フォーマット）からなるこの化合物は、細胞溶解性Ｔ細胞によるＣＤ１９＋細胞の溶解を指示する。ブリナツモマブの主な制約は、その短い半減期（約２時間）であり、４－８週間にわたってポンプを介して継続的に注入する必要がある。それにもかかわらず、ブリナツモマブは、再発／難治性の非ホジキンリンパ腫（ｒ／ｒ ＮＨＬ）とＡＬＬの両方を有する患者において、重度のサイトカイン放出症候群及びＣＮＳ毒性を緩和するために必要なステップアップ投薬（ＳＵＤ）により、強力な有効性を有している（Nagorsen and Baeuerle, Exp Cell Res (2011) 317, 1255-1260）。
ＣＤ２０ ＣＤ３標的指向性Ｔ細胞二重特異性分子、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢは、次世代のＢ細胞標的指向性抗体の別の例である。ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢは、Ｂ細胞に発現するＣＤ２０及びＴ細胞に存在するＣＤ３イプシロン鎖（ＣＤ３ｅ）を標的とするＴ細胞二重特異性（ＴＣＢ）抗体である。
ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの作用機序は、ＣＤ２０＋ Ｂ細胞及びＣＤ３＋ Ｔ細胞への同時結合を含み、Ｔ細胞活性化及びＢ細胞のＴ細胞媒介性死滅をもたらす。ＣＤ２０＋ Ｂ細胞の存在下では、循環又は組織常在性であるかにかかわらず、薬理学的に活性な用量は、Ｔ細胞の活性化及び関連するサイトカイン放出を誘発する。ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢは、非臨床モデルにおいて競合的Ｔ細胞結合剤よりも高い効力を示しており、ＩｇＧベースのフォーマットであるため、ブリナツモマブよりも大幅に改善された半減期を有する。
サイトカイン放出は、Ｔ細胞の活性化の結果である。ＴｅＧｅｎｅｒｏにより実施された第１相試験において（Suntharalingam et al., N Engl J Med (2006) 355,1018-1028）、６人の健常ボランティア全員が、不適切に投与されたＴ細胞刺激スーパーアゴニスト抗ＣＤ２８モノクローナル抗体の注入後直ちに、ほぼ致命的な重度のサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を経験した。より最近では、再発性ＡＬＬを有する患者のＣＤ１９標的指向性、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）治療に関するＭａｕｄｅらによる上記の研究では、３０人の患者全員がサイトカイン放出を有し、これは患者の２７％において重度として分類された。ＣＲＳは、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の一般的であるが重度の合併症である（Xu and Tang, Cancer Letters (2014) 343, 172-178に総説される）。
ＣＤ１９－ＣＤ３ Ｔ細胞二重特異性薬剤、ブリナツモマブにより、重度のＣＲＳ及びＣＮＳ毒性も頻繁に観察されている（Klinger et al., Blood. 2012;119(26):6226-6233）。すべての臨床試験においてブリナツモマブを投与された患者では、患者の約５０％において神経毒性が発生しており、観察された毒性の種類は添付文書において明確に定義されている。
ＣＮＳ毒性がサイトカインの早期放出又はＴ細胞活性化に関連するかどうか、又はどのように関連するかはよく理解されていない。ブリナツモマブと同様に、ＣＤ１９標的指向性ＣＡＲ－Ｔ細胞で治療されたｒ／ｒ ＡＬＬ患者の４３％（１３／３０）について、ＣＮＳ ＡＥ（せん妄からグローバル脳症まで）が報告された（Maude et al., N Engl J Med (2014) 371,1507-1517; Ghorashian et al., Br J Haematol (2015) 169, 463-478）。神経毒性作用は、典型的には、ＣＲＳの症状がピークに達し、消散し始めた後に発生した；しかしながら、重度のＣＲＳとの直接的で明確な関連性は見いだされなかった。著者らは、神経毒性のメカニズムが、直接的なＣＡＲ－Ｔ細胞媒介性毒性を引き起こし得るか、又はそれがサイトカイン媒介性であり得ることを提案した。対照的に、ＣＤ１９標的指向性ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の別の研究においては、重度のＣＲＳと神経毒性（脳症など）の間の関連が示唆されており（Davila et al., Sci Transl Med (2014) 6, 224ra25）、直接的なＣＡＲ－Ｔ誘導性障害と対比して、一般的なＴ細胞の活性化に起因するものと推測されている。
サイトカイン放出及び／又はＣＮＳ関連毒性は、ＣＤ３＋細胞を組織特異的（すなわち、非循環）標的細胞に連結する他のＴ細胞二重特異性抗体と比較して、ＣＤ３＋細胞をＢ細胞に連結するＴ細胞二重特異性抗体において特に明白である。
したがって、ＮＨＬ及びＣＬＬなどのＢ細胞増殖性疾患を有する患者の治療に対して有意に寄与する可能性を有するこれらの有望な薬剤のそのような副作用を低減又は防止する方法が必要とされている。
本発明は、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢなどのＴ細胞活性化治療剤の対象への投与に関連するサイトカイン放出が、オビヌツズマブなどのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体による前記対象の前治療によって有意に減少させることができるという驚くべき発見に基づいている。
オビヌツズマブは、ＣＤ２０抗原に高親和性で結合する、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、低い補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性、及び高い直接細胞死誘導を誘導する、ヒト化糖鎖操作ＩＩ型抗ＣＤ２０ ｍＡｂである。
理論に縛られることを望まないが、ＧＡＺＹＶＡ（登録商標）前治療（Ｇｐｔ）の使用は、腫瘍細胞の消失を媒介するために、投薬の開始から十分高いＴ細胞活性化治療剤の曝露レベルをサポートしつつ、Ｔ細胞活性化治療剤による強力な全身性Ｔ細胞活性化からの関連性の高い有害事象（ＡＥ）（例えば、ＣＲＳ）のリスクが低減されるように、末梢血及び二次リンパ器官の両方においてＢ細胞の急速な枯渇を助けるはずである。現在まで、オビヌツズマブの安全性プロファイル（サイトカイン放出を含む）は、現在進行中のオビヌツズマブ臨床試験の何百人もの患者において評価及び管理されている。最後に、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢなどのＴ細胞活性化治療剤の安全性プロファイルをサポートすることに加えて、Ｇｐｔはこれらの固有の分子に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成の防止にも役立つはずである。
患者のために、Ｇｐｔは安全性プロファイルが強化され、より良好な薬物曝露につながるはずである。
Ｇｐｔは、ステップアップ投薬（ＳＵＤ）など、Ｔ細胞二重特異性薬剤により使用される他の方法と比較して、上記の目標を達成するのにより効果的である。オビヌツズマブの単一用量により、再発／難治性の患者は、ステップアップ投薬からの時間遅延なしに、一度決定されたＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢなどのＴ細胞活性化治療剤の全治療用量を受けることができるはずである。例えば、最近、進行中の第２相試験におけるｒ／ｒ ＤＬＢＣＬの患者に対するブリナツモマブ投与レジメンは、ダブルステップアップ手法（すなわち、９→２８→１１２μｇ／ｍ２／日）を組み込んでおり、したがって、最大用量１１２μｇ／ｍ２／日に達するために１４日間を必要とすると報告されている（Viardot el at., Hematol Oncol (2015) 33, 242(Abstract 285）。
実施例に示すように、オビヌツズマブによる前治療後、カニクイザルへのＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの投与は、Ｇｐｔなしで許容されるレベルよりも１０倍高いレベルまで許容された。
第１のＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ注射に関連する末梢血中のサイトカイン放出の大幅な減少と共に、効率的な末梢血Ｂ細胞の枯渇と抗腫瘍活性がＧｐｔによって観察された。
したがって、第１の態様では、本発明は、対象におけるＴ細胞活性化治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を減少させるための方法であって、治療剤の投与前の対象へのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与を含む方法を提供する。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である。
さらなる態様では、本発明は、対象における疾患を治療する方法を提供し、該方法は、
（ｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象への投与、
及び連続して一定期間後に
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化治療剤の対象への投与
を含む治療レジメンを含み、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である。
一実施態様では、治療レジメンは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、対象における治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を効果的に減少させる。
さらなる態様では、本発明は、治療剤の投与前の対象へのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与を含む、対象におけるＴ細胞活性化治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を減少させるための方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を提供する。
一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間は、ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である。
さらなる態様では、本発明は、対象における疾患を治療する方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を提供し、該方法は、
（ｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象への投与、
及び連続して一定期間後に
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化治療剤の対象への投与
を含む治療レジメンを含み、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である。
一実施態様では、治療レジメンは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、対象における治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を効果的に減少させる。
さらなる態様では、本発明は、対象におけるＴ細胞活性化治療剤の投与に関連するサイトカイン放出の減少のための医薬の製造におけるＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の使用を提供し、
ここで該医薬は、
（ｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象への投与、
及び連続して一定期間後に
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化治療剤の対象への投与
を含む治療レジメンにおいて使用されるべきであり、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である。
一実施態様では、治療レジメンは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、対象におけるＴ細胞活性化治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を効果的に減少させる。
なおさらなる態様では、本発明は、対象におけるＴ細胞活性化治療剤の投与に関連するサイトカイン放出の減少のためのキットを提供し、該キットは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体組成物と、
（ｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体組成物の対象への投与、
及び連続して一定期間後に
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化治療剤の対象への投与
を含む治療レジメンにおいてＩＩ型抗ＣＤ２０抗体組成物を使用するための説明書とを含むパッケージを含み、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体組成物の投与と治療剤の投与との間の期間は、ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である。
一実施態様では、治療レジメンは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体組成物の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、対象におけるＴ細胞活性化治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を効果的に減少させる。一実施態様では、キットは治療剤組成物をさらに含む。
さらなる態様では、本発明は、対象における疾患を治療する方法における使用のためのＴ細胞活性化治療剤を提供し、該方法は、
（ｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象への投与、
及び連続して一定期間後に
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化治療剤の対象への投与
を含む治療レジメンを含み、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間は、ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である。
一実施態様では、治療レジメンは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、対象におけるＴ細胞活性化治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を効果的に減少させる。
本発明は、なおさらなる態様では、対象における疾患の治療のための医薬の製造におけるＴ細胞活性化治療剤の使用を提供し、ここで治療は、
（ｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象への投与、
及び連続して一定期間後に
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化治療剤の対象への投与
を含む治療レジメンを含み、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である。
一実施態様では、治療レジメンは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、対象におけるＴ細胞活性化治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を効果的に減少させる。
本発明は、さらなる態様では、対象における疾患の治療のためのキットを提供し、該キットは、Ｔ細胞活性化治療剤組成物と、
（ｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象への投与、
及び連続して一定期間後に
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化治療剤組成物の対象への投与
を含む治療レジメンにおいて治療剤組成物を使用するための説明書とを含むパッケージを含み、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤組成物の投与との間の期間は、ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である。
一実施態様では、治療レジメンは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体組成物の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、対象におけるＴ細胞活性化治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を効果的に減少させる。一実施態様では、キットはＩＩ型抗ＣＤ２０抗体組成物をさらに含む。
本発明の方法、使用、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、治療剤及びキットは、以下に記載される特徴のいずれかを単独で又は組み合わせて組み込むことができる。
一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。
より具体的な実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体である。
一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、非操作抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の増加した割合を有するように操作される。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約４０％が非フコシル化されている。
特定の実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブである。
一実施態様では、Ｔ細胞活性化治療剤は、抗体、特に多重特異性（例えば、二重特異性）抗体を含む。
一実施態様では、抗体は、活性化Ｔ細胞抗原に特異的に結合する。
一実施態様では、抗体は、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、及びＣＤ１２７の群から選択される抗原に特異的に結合する。
一実施態様では、抗体は、ＣＤ３、特にＣＤ３εに特異的に結合する。
一実施態様では、抗体は、配列番号１２の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号１４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号１５の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。
一実施態様では、抗体は、配列番号１８の重鎖可変領域配列及び配列番号１９の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施態様では、抗体は、Ｂ細胞抗原、特に悪性Ｂ細胞抗原に特異的に結合する。
一実施態様では、抗体は、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５からなる群から選択される抗原、特にＣＤ２０又はＣＤ１９に特異的に結合する。
一実施態様では、抗体はＣＤ２０に特異的に結合する。
一実施態様では、抗体は、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。
一実施態様では、抗体は、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施態様では、抗体は多重特異性抗体、特に二重特異性抗体である。
一実施態様では、多重特異性抗体は、（ｉ）活性化Ｔ細胞抗原及び（ｉｉ）Ｂ細胞抗原に特異的に結合する。
一実施態様では、多重特異性抗体は、（ｉ）ＣＤ３並びに（ｉｉ）ＣＤ２０及びＣＤ１９から選択される抗原に特異的に結合する。
一実施態様では、多重特異性抗体は、ＣＤ３及びＣＤ２０に特異的に結合する。
一実施態様では、治療剤は、
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合し、かつ、配列番号１２の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号１４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号１５の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合部分；並びに
（ｉｉ）ＣＤ２０に特異的に結合し、かつ、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合部分
を含む二重特異性抗体を含む。
特定の実施態様では、治療剤はＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢを含む。
一実施態様では、治療剤は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、又はＣＡＲを発現するＴ細胞、特にＢ細胞抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現するＴ細胞、より具体的にはＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５の群から選択される抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現するＴ細胞を含む。
一実施態様では、疾患はＢ細胞増殖性疾患、特にＣＤ２０陽性Ｂ細胞疾患である。
一実施態様では、疾患は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、及びホジキンリンパ腫（ＨＬ）からなる群から選択される。
さらなる態様では、本発明は、個体のがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を提供する。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせて使用される。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、単一の組成物で一緒に投与されても、又は２つ以上の異なる組成物で別々に投与されてもよい。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、２つ以上の異なる組成物で投与されてもよい。２つ以上の異なる組成物は、異なる時点で投与されてもよい。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み得る。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域をさらに含み得る。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含み得る。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体であり得る。抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約４０％は、非フコシル化されていてもよい。
特に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブである。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と同時に、その前に、又はその後に投与され得る。
さらに、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、好ましくはアテゾリズマブが投与され得る。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の少なくとも１つと別々に、又は組み合わせて投与され得る。ここで、「の少なくとも１つと組み合わせて（in combination with at least one of）」とは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体が抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と一緒に、又はＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と一緒に、又は両方と一緒に投与されることを意味する。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合ドメイン、及びＣＤ２０に結合する第２の抗原結合ドメインを含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）及び軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含む第１の抗原結合ドメイン、並びに重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）及び軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含む第２の抗原結合ドメインを含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、配列番号９７のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号９８のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号９９のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）；並びに／又は配列番号１００のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１０１のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号１０２のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）、及び／又は配列番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、配列番号４のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号６のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）；並びに／又は配列番号７のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）、及び／又は配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ２０に結合する第３の抗原結合ドメインを含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインは、配列番号４のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号６のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）；並びに／又は配列番号７のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含む。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）、及び／又は配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、クロスＦａｂ分子であってもよく、ここで、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメイン又は定常ドメインが交換され、かつ第２及び第３の抗原結合ドメインは、存在する場合、従来のＦａｂ分子であり得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含み得る。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合及び／又はエフェクター機能を低減させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含み得る。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、第３の抗原結合ドメインを含んでもよく、ここで、（ｉ）抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、かつ抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。あるいは、（ｉｉ）抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、かつ抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。
ＩＩ型ＣＤ２０抗体及び抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の組み合わせは、約１週間から３週間の間隔で投与され得る。
さらに、併用治療の前に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブによる前治療を実施してもよい。前治療と併用治療との間の期間は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブに応答した、個体におけるＢ細胞の減少のために十分であり得る。前治療において使用されるＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、上記及び下記のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つ又は複数の特徴を有し得る。
本発明のさらなる態様は、個体における増殖性疾患、特にがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法に関する。本方法は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体を投与することを含み、ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、単一の組成物又は２つ以上の組成物で投与される。
本発明のさらなる態様は、併用治療における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び任意の薬学的に許容される担体と、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む第２の医薬と、任意で、疾患、特にがんの併用治療における使用のための、抗ＰＤ－Ｌ１抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む第３の医薬とを含む薬学的組成物に関する。薬学的組成物の要素は、併用治療において連続的に又は同時に使用され得る。
本発明のさらなる態様は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む第１の医薬、並びに疾患、特にがんの併用治療における使用のための、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む第２の医薬を含むキットに関する。任意で、キットは、疾患、特にがんの前述の併用治療における使用のための、抗ＰＤ－Ｌ１抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む第３の医薬を含む。キットの要素は、併用治療において連続的に又は同時に使用され得る
キットはさらに、個体におけるがんを治療する又はその進行を遅延させるための第１の医薬及び第２の医薬及び任意で第３の医薬の使用説明書を含み得る。使用説明書は添付文書であり得る。
本発明のさらなる態様は、好ましくは、個体における増殖性疾患、特にがんを治療する又はその進行を遅延させるための、治療応用のための医薬の製造における、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体との組み合わせの使用に関する。
本発明のさらなる態様は、個体におけるがんを治療する又はその進行を遅延させるための医薬の製造におけるＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の使用に関し、ここで、医薬はＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含み、かつ治療は抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた医薬の投与を含む。
本発明のさらなる態様は、個体におけるがんを治療する又はその進行を遅延させるための医薬の製造における抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の使用に関し、ここで、医薬は抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含み、かつ治療は抗ＣＤ２０抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた医薬の投与を含む。
本発明のさらなる態様は、個体のがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法における使用のための抗ＣＤ２０抗体の製造に関し、ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせて使用される。
本発明のさらなる態様は、個体のがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の製造に関し、ここで、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて使用される。
本発明のさらなる態様は、個体に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を投与すること、及び抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体を投与することを含む、個体におけるがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法に関する。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３０二重特異性抗体は、両方の組み合わせが有効量を表すように投与される。逆に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体自体は有効量で投与されず、かつ抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３０二重特異性抗体自体は有効量で投与されない。しかし、両方の組み合わせは有効量につながる。
加えて、抗ＰＤ－Ｌ１抗体が個体に投与され得る。ＰＤ－Ｌ１抗体を含む組み合わせは、有効量を表す。
本発明のさらなる態様は、個体のがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体に関する。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて使用される。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、単一の組成物で一緒に投与されても、又は２つ以上の異なる組成物で別々に投与されてもよい。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、２つ以上の異なる組成物で投与されてもよい。２つ以上の異なる組成物は、異なる時点で投与されてもよい。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み得る。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域をさらに含み得る。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含み得る。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体であり得る。抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約４０％は、非フコシル化されていてもよい。
特に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブである。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と同時に、その前に、又はその後に投与され得る。
さらに、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、好ましくはアテゾリズマブが投与され得る。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の少なくとも１つと別々に、又は組み合わせて投与され得る。ここで、「の少なくとも１つと組み合わせて（in combination with at least one of）」とは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体が抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と一緒に、又はＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と一緒に、又は両方と一緒に投与されることを意味する。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合ドメイン、及びＣＤ２０に結合する第２の抗原結合ドメインを含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）及び軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含む第１の抗原結合ドメイン、並びに重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）及び軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含む第２の抗原結合ドメインを含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、配列番号９７のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号９８のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号９９のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）；並びに／又は配列番号１００のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１０１のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号１０２のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）、及び／又は配列番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、配列番号４のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号６のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）；並びに／又は配列番号７のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）、及び／又は配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ２０に結合する第３の抗原結合ドメインを含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインは、配列番号４のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号６のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）；並びに／又は配列番号７のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）、及び／又は配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、クロスＦａｂ分子であってもよく、ここで、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメイン又は定常ドメインが交換され、かつ第２及び第３の抗原結合ドメインは、存在する場合、従来のＦａｂ分子であり得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含み得る。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合及び／又はエフェクター機能を低減させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含み得る。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、第３の抗原結合ドメインを含んでもよく、ここで、（ｉ）抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、かつ抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。あるいは、（ｉｉ）抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、かつ抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。
ＩＩ型ＣＤ２０抗体及び抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の組み合わせは、約１週間から３週間の間隔で投与され得る。
さらに、併用治療の前に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブによる前治療が実施される。前治療と併用治療との間の期間は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブに応答した、個体におけるＢ細胞の減少のために十分であり得る。前治療において使用されるＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、上記及び下記のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つ又は複数の特徴を有し得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、単一の組成物で一緒に投与されても、又は２つ以上の異なる組成物で別々に投与されてもよい。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、２つ以上の異なる組成物で投与されてもよく、ここで、２つ以上の異なる組成物は、異なる時点で投与される。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み得る。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含み得る。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体であり得、ここで抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約４０％が非フコシル化されている。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブであり得る。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と同時に、その前に、又はその後に投与され得る。
さらに、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、好ましくはアテゾリズマブが投与され得る。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の少なくとも１つと別々に、又は組み合わせて投与され得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合ドメイン、及びＣＤ２０に結合する第２の抗原結合ドメインを含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）及び軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含む第１の抗原結合ドメイン、並びに重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）及び軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含む第２の抗原結合ドメインを含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、配列番号９７のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号９８のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号９９のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）；並びに／又は配列番号１００のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１０１のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号１０２のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）、及び／又は配列番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、配列番号４のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号６のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）；並びに／又は配列番号７のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）、及び／又は配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ２０に結合する第３の抗原結合ドメインを含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインは、配列番号４のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号６のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）；並びに／又は配列番号７のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）、及び／又は配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、クロスＦａｂ分子であってもよく、ここで、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメイン又は定常ドメインが交換され、かつ第２及び第３の抗原結合ドメインは、存在する場合、従来のＦａｂ分子であり得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含み得る。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合及び／又はエフェクター機能を低減させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含み得る。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）を含み得る。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、第３の抗原結合ドメインを含む。（ｉ）抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合されてもよく、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合されてもよく、かつ抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合されてもよい。あるいは、（ｉｉ）抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合されてもよく、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合されてもよく、かつ抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合されてもよい。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型ＣＤ２０抗体の組み合わせは、約１週間から３週間の間隔で投与され得る。
併用治療の前に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブによる前治療を実施してもよい。前治療と併用治療との間の期間は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブに応答した、個体におけるＢ細胞の減少のために十分であり得る。前治療において使用されるＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、上記及び下記のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つ又は複数の特徴を有し得る。
本発明のさらなる態様は、併用治療における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及び任意の薬学的に許容される担体と、疾患、特にがんの併用治療における使用のための、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む第２の医薬と、任意で、抗ＰＤ－Ｌ１抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む第３の医薬とを含む薬学的組成物に関する。薬学的組成物の要素は、併用治療において連続的に又は同時に使用され得る。
本発明のさらなる態様は、前述の本発明に関する。
本発明のＴ細胞活性化二重特異性抗原結合分子（ＴＣＢ）の例示的立体配置。（Ａ、Ｄ）「１＋１ ＣｒｏｓｓＭａｂ」分子の図。（Ｂ、Ｅ）別の順序でＣｒｏｓｓｆａｂ及びＦａｂ成分を有する（「反転型」）「２＋１ ＩｇＧ Ｃｒｏｓｓｆａｂ」分子の図。（Ｃ、Ｆ）「２＋１ ＩｇＧ Ｃｒｏｓｓｆａｂ」分子の図。黒い点：ヘテロ二量体化を促進するＦｃドメインにおける任意の修飾。＋＋、－－：ＣＨ１及びＣＬドメインに任意に導入された反対電荷のアミノ酸。ＣｒｏｓｓＦａｂ分子は、ＶＨ及びＶＬ領域の交換を含むものとして示されているが、－ＣＨ１及びＣＬドメインに電荷修飾が導入されていない実施態様においては－代替的にＣＨ１及びＣＬドメインの交換を含む場合がある。 本発明のＴ細胞活性化二重特異性抗原結合分子（ＴＣＢ）の例示的立体配置。（Ｇ、Ｋ）別の順序でＣｒｏｓｓｆａｂ及びＦａｂ成分を有する（「反転型」）「１＋１ ＩｇＧ Ｃｒｏｓｓｆａｂ」分子の図。（Ｈ、Ｌ）「１＋１ ＩｇＧ Ｃｒｏｓｓｆａｂ」分子の図。（Ｉ、Ｍ）２つのＣｒｏｓｓＦａｂを有する「２＋１ ＩｇＧ Ｃｒｏｓｓｆａｂ」分子の図。（Ｊ、Ｎ）２つのＣｒｏｓｓＦａｂを有し、かつ別の順序でＣｒｏｓｓｆａｂ及びＦａｂ成分を有する（「反転型」）「２＋１ ＩｇＧ Ｃｒｏｓｓｆａｂ」分子の図。黒い点：ヘテロ二量体化を促進するＦｃドメインにおける任意の修飾。＋＋、－－：ＣＨ１及びＣＬドメインに任意に導入された反対電荷のアミノ酸。ＣｒｏｓｓＦａｂ分子は、ＶＨ及びＶＬ領域の交換を含むものとして示されているが、－ＣＨ１及びＣＬドメインに電荷修飾が導入されていない実施態様においては－代替的にＣＨ１及びＣＬドメインの交換を含む場合がある。 本発明のＴ細胞活性化二重特異性抗原結合分子（ＴＣＢ）の例示的立体配置。（Ｏ、Ｓ）「Ｆａｂ－Ｃｒｏｓｓｆａｂ」分子の図。（Ｐ、Ｔ）「Ｃｒｏｓｓｆａｂ－Ｆａｂ」分子の図。（Ｑ、Ｕ）「（Ｆａｂ）２－Ｃｒｏｓｓｆａｂ」分子の図。（Ｒ、Ｖ）「Ｃｒｏｓｓｆａｂ－（Ｆａｂ）２」分子の図。黒い点：ヘテロ二量体化を促進するＦｃドメインにおける任意の修飾。＋＋、－－：ＣＨ１及びＣＬドメインに任意に導入された反対電荷のアミノ酸。ＣｒｏｓｓＦａｂ分子は、ＶＨ及びＶＬ領域の交換を含むものとして示されているが、－ＣＨ１及びＣＬドメインに電荷修飾が導入されていない実施態様においては－代替的にＣＨ１及びＣＬドメインの交換を含む場合がある。 本発明のＴ細胞活性化二重特異性抗原結合分子（ＴＣＢ）の例示的立体配置。（Ｗ、Ｙ）「Ｆａｂ－（Ｃｒｏｓｓｆａｂ）２」分子の図。（Ｘ、Ｚ）「（Ｃｒｏｓｓｆａｂ）２－Ｆａｂ」分子の図。黒い点：ヘテロ二量体化を促進するＦｃドメインにおける任意の修飾。＋＋、－－：ＣＨ１及びＣＬドメインに任意に導入された反対電荷のアミノ酸。ＣｒｏｓｓＦａｂ分子は、ＶＨ及びＶＬ領域の交換を含むものとして示されているが、－ＣＨ１及びＣＬドメインに電荷修飾が導入されていない実施態様においては－代替的にＣＨ１及びＣＬドメインの交換を含む場合がある。 異なる治療群における末梢血中のＢ細胞及びＴ細胞の数。第１及び第２のＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ投与の２４時間後と７２時間後の、ビヒクル及びＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢで治療した完全ヒト化ＮＯＧマウスの末梢血中のＣＤ１９＋ Ｂ細胞（Ａ）及びＣＤ３＋ Ｔ細胞（Ｂ）のフローサイトメトリー分析。黒い矢印は、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ投与の日を示している。 異なる治療群の間で末梢血中に放出されるサイトカイン。ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの第１及び第２の投与から２４時間後及び７２時間後の、ビヒクル及び治療マウスの血液中のサイトカインの多重分析。ヒストグラムバーは５匹の動物の平均を表し、エラーバーは標準偏差を示す。ＩＦＮγ、ＴＮＦα及びＩＬ－６の代表的なグラフが示されている。ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの第１の注射のサイトカイン放出を、オビヌツズマブ前治療ありとなしで比較する（比較されるべきバーは、接続線で示される）。 ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ、オビヌツズマブ、及びＧｐｔ＋ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの抗腫瘍活性。完全ヒト化ＮＯＧマウスにおける、単独療法としてのＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ及びオビヌツズマブ、又はＧｐｔ＋ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの抗腫瘍活性。黒い矢印は治療の開始を示す。（８＜ｎ＜１０）。腫瘍モデル：ＷＳＵ－ＤＬＣＬ２。 ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ及びＧｐｔ＋ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ治療による投薬後のカニクイザルの末梢血中に放出されるサイトカイン。 （Ａ－Ｂ）中悪性度リンパ腫モード（ＷＳＵ－ＤＬＣＬ２腫瘍）を保有するヒト造血幹細胞ヒト化マウス（ＨＳＣ－ＮＳＧマウス）における、抗ＣＤ２０／ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブ又はアテゾリズマブとの併用治療における抗腫瘍活性の分析。（Ａ）ビヒクルの有効性、（Ｂ）抗ＣＤ２０－抗ＣＤ３ Ｔ細胞二重特異性抗体の治療の有効性。 （Ｃ－Ｄ）中悪性度リンパ腫モード（ＷＳＵ－ＤＬＣＬ２腫瘍）を保有するヒト造血幹細胞ヒト化マウス（ＨＳＣ－ＮＳＧマウス）における、抗ＣＤ２０／ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブ又はアテゾリズマブとの併用治療における抗腫瘍活性の分析。（Ｃ）オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ（登録商標））の治療の有効性、（Ｄ）抗ＣＤ２０／ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ（登録商標））の併用治療の有効性。 （Ｅ－Ｆ）中悪性度リンパ腫モード（ＷＳＵ－ＤＬＣＬ２腫瘍）を保有するヒト造血幹細胞ヒト化マウス（ＨＳＣ－ＮＳＧマウス）における、抗ＣＤ２０／ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブ又はアテゾリズマブとの併用治療における抗腫瘍活性の分析。（Ｅ）抗ＣＤ２０／ＣＤ３二重特異性抗体とアテゾリズマブの併用治療の有効性、（Ｆ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体の治療の有効性。 （Ａ－Ｂ）中悪性度リンパ腫モデル（ＯＣＩ－Ｌｙ１８腫瘍）を保有するヒト造血幹細胞ヒト化マウス（ＨＳＣ－ＮＳＧマウス）における、抗ＣＤ２０／ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブの併用治療における抗腫瘍活性の分析。（Ａ）ビヒクル、抗ＣＤ２０／ＣＤ３二重特異性抗体、オビヌツズマブ、及び抗ＣＤ２０／ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブの組み合わせの有効性。（Ｂ）抗ＣＤ２０／ＣＤ３二重特異性抗体、オビヌツズマブ、及び抗ＣＤ２０／ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブの組み合わせの個々のマウスの有効性。
定義
本明細書の用語は、以下で特に定義されない限り、当該技術分野で一般的に使われるように使用される。
ＣＤ２０（Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ－１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、及びＬＦ５としても知られ；ヒトタンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔデータベースエントリＰ１１８３６において特徴づけられる）は、プレＢリンパ球及び成熟Ｂリンパ球上に発現する分子量約３５ｋＤの疎水性膜貫通タンパク質である（Valentine, M.A. et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287; Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212; Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980; Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717; Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568）。対応するヒト遺伝子は、ＭＳ４Ａ１としても知られている、膜貫通４ドメイン、サブファミリーＡ、メンバー１である。この遺伝子は膜貫通４Ａ遺伝子ファミリーのメンバーをコードする。この新生タンパク質ファミリーのメンバーは、共通の構造的特徴及び類似のイントロン／エクソンのスプライス境界により特徴づけられ、造血細胞及び非リンパ系組織間で固有の発現パターンを示す。この遺伝子はＢ細胞の形質細胞への発生及び分化において役割を果たしているＢリンパ球表面分子をコードする。このファミリーメンバーは、ファミリーメンバーのクラスターの中で１１ｑ１２に局在している。この遺伝子の選択的スプライシングは、同じタンパク質をコードする２つの転写変異体をもたらす。
特に断らない限り、本明細書で使用する用語「ＣＤ２０」は、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス、ラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来の任意の天然のＣＤ２０を指す。その用語は、「完全長」で未処理のＣＤ２０、並びに細胞内でのプロセシングから生じた任意の形態のＣＤ２０を含む。その用語はまた、ＣＤ２０の天然に生じる変異体、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子変異体を含む。一実施態様では、ＣＤ２０はヒトＣＤ２０である。例示的なヒトＣＤ２０のアミノ酸配列は、配列番号１に示される。
用語「抗ＣＤ２０抗体」及び「ＣＤ２０に結合する抗体」は、抗体がＣＤ２０を標的とする診断薬及び／又は治療剤として有用であるように、十分な親和性でＣＤ２０に結合することができる抗体を指す。一実施態様では、抗ＣＤ２０抗体の、無関係な、非ＣＤ２０タンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、抗体のＣＤ２０への結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、ＣＤ２０に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍから１０－１３Ｍ、例えば１０－９Ｍから１０－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施態様では、抗ＣＤ２０抗体は、異なる種由来のＣＤ２０間で保存されているＣＤ２０のエピトープに結合する。
「ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体」とは、Cragg et al., Blood 103 (2004) 2738-2743; Cragg et al., Blood 101 (2003) 1045-1052, Klein et al., mAbs 5 (2013), 22-33に記載され、以下の表１に要約されるように、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の結合特性及び生物学的活性を有する抗ＣＤ２０抗体を意味する。
表１．Ｉ型及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の特性
Figure 2023175681000001
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例は、例えば、オビヌツズマブ（ＧＡ１０１）、トシツムマブ（Ｂ１）、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体ＩｇＧ１（国際公開第２００５／０４４８５９号に開示されるキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、１１Ｂ８ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号に開示）及びＡＴ８０ ＩｇＧ１を含む。
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例は、例えば、リツキシマブ、オファツムマブ、ベルツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、ＰＲＯ１３１９２１、ウブリツキシマブ、ＨＩ４７ ＩｇＧ３（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ）、２Ｃ６ ＩｇＧ１（国際公開第２００５／１０３０８１号に開示）、２Ｆ２ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号及び国際公開第２００５／１０３０８１号に開示）及び２Ｈ７ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０５６３１２号に開示）を含む。
用語「ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体」は、ＩｇＧ１由来のヒト定常ドメインとのキメラ化及びその後のヒト化によって、マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ－Ｌｙ１（マウス重鎖の可変領域（ＶＨ）：配列番号２；マウス軽鎖の可変領域（ＶＬ）：配列番号３）（Poppema, S. and Visser, L., Biotest Bulletin 3(1987)131-139を参照）から得られた、国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号に開示されているヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体を指す（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号を参照）。これらの「ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体」は、国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号に詳細に開示されている。
本明細書で使用される用語「サイトカインの放出」又は「サイトカイン放出」は、「サイトカインストーム」又は「サイトカイン放出症候群」（「ＣＲＳ」と略される）と同義であり、治療剤の投与中又は投与直後（例えば、１日以内）の対象の血液中のサイトカイン、特に腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）及び／又はインターロイキン－８（ＩＬ－８）のレベルの増加を指し、有害な症状をもたらす。サイトカイン放出は注入関連反応（ＩＲＲ）の一種であり、治療剤に対する一般的な薬物有害反応であり、治療剤の投与にタイムリーに関連している。ＩＲＲは、典型的には、治療剤の投与中又はその直後に、すなわち、典型的には注入後２４時間以内に、主に第１の注入時に発生する。場合によっては、例えばＣＡＲ－Ｔ細胞の投与後、ＣＲＳは後でのみ、例えばＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖時に投与後数日で、発生する可能性がある。通常、発生率及び重症度は、典型的にはその後の注入により低下する。症状は、症候性の不快感から致命的な事象まで及び、発熱、悪寒、めまい、高血圧、低血圧、呼吸困難、落ち着きのなさ、発汗、潮紅、皮膚発疹、頻脈、頻呼吸、頭痛、腫瘍痛、吐き気、嘔吐及び／又は臓器不全を含み得る。
本明細書で使用される用語「アミノ酸変異」は、アミノ酸の置換、欠失、挿入、及び修飾を包含することを意図している。最終構築物が所望の特性、例えば、Ｆｃ受容体への結合の低減を有することを条件として、置換、欠失、挿入、及び修飾の任意の組み合わせを行って、最終構築物に到達させることができる。アミノ酸配列の欠失及び挿入には、アミノ末端及び／又はカルボキシ末端の欠失、並びにアミノ酸の挿入が含まれる。特定のアミノ酸変異はアミノ酸の置換である。例えばＦｃ領域の結合特性を変更する目的で、非保存的アミノ酸置換、すなわち、１つのアミノ酸を異なる構造的及び／又は化学的性質を有する別のアミノ酸で置換することが特に好ましい。アミノ酸置換には、２０種類の標準アミノ酸の、天然に存在しないアミノ酸又は天然に存在するアミノ酸誘導体（例えば、４－ヒドロキシプロリン、３－メチルヒスチジン、オルニチン、ホモセリン、５－ヒドロキシリジン）による置換が含まれる。アミノ酸変異は、当該技術分野で良く知られた遺伝学的方法又は化学的方法を用いて生成することができる。遺伝学的方法には、部位特異的突然変異誘発、ＰＣＲ、遺伝子合成などが含まれ得る。化学修飾などの遺伝子工学以外の方法によって、アミノ酸の側鎖基を変更する方法も有用であり得ると考えられる。本明細書では、同じアミノ酸変異を示すためにさまざまな命名が使用され得る。例えば、Ｆｃ領域の３２９位のプロリンからグリシンへの置換は、３２９Ｇ、Ｇ３２９、Ｇ３２９、Ｐ３２９Ｇ、又はＰｒｏ３２９Ｇｌｙとして示される。
「親和性」は、分子（例えば、受容体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、リガンド）との間の共有結合性相互作用の総和の強度を指す。本明細書で使用される場合、特に断らない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、受容体とリガンド）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する本質的な結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、通常、解離定数（ＫＤ）によって表され、この解離定数（ＫＤ）は、解離速度定数と会合速度定数（それぞれ、ｋｏｆｆ及びｋｏｎ）の比である。したがって、等価な親和性は、速度定数の比が同じままである限り、異なる速度定数を含み得る。親和性は、当該技術分野で知られた十分に確立された方法によって測定することができる。親和性を測定するための特定の方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である。
「減少（reduction）」（及び「減少する（reduce）」又は「減少する（reducing）」などの文法的変形）、例えば、Ｂ細胞の数又はサイトカイン放出の減少は、当該技術分野で知られた適切な方法によって測定される、それぞれの量の減少を指す。明確に示すために、用語はゼロ（又は分析方法の検出限界を下回る値）への減少、すなわち完全な消失（abolishment）及び除去（elimination）も含む。逆に、「増加（increased）」は、それぞれの量の増加を指す。
本明細書で使用される場合、用語「抗原結合部分」は、抗原決定基に特異的に結合するポリペプチド分子を指す。一実施態様では、抗原結合部分は、それが結合する実体（例えば、サイトカイン又は第２の抗原結合部分）を標的部位へ、例えば特定の型の腫瘍細胞又は抗原決定基を保有する腫瘍間質へと指向させることができる。抗原結合部分には、本明細書でさらに定義される抗体及びその断片が含まれる。好ましい抗原結合部分には、抗体重鎖可変領域及び抗体軽鎖可変領域を含む、抗体の抗原結合ドメインが含まれる。特定の実施態様では、抗原結合部分は、本明細書でさらに定義され、かつ当技術分野において既知であるように、抗体定常領域を含むことができる。有用な重鎖定常領域は、５つのアイソタイプ：α、δ、ε、γ、又はμのいずれかを含む。有用な軽鎖定常領域は、２つのアイソタイプ：κ及びλのいずれかを含む。
「特異的に結合する」とは、結合が、抗原について選択的であり、望ましくない相互作用又は非特異的相互作用とは区別可能であることを意味する。抗原結合部分の、特定の抗原決定基への結合能は、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）又は当業者によく知られた他の技術、例えば表面プラズモン共鳴技術（ＢＩＡｃｏｒｅ装置における解析）（Liljeblad et al., Glyco J 17, 323-329 (2000)）、及び古典的結合アッセイ（Heeley, Endocr Res 28, 217-229 (2002)）により測定することができる。一実施態様では、抗原結合部分の無関係なタンパク質への結合の程度は、例えばＳＰＲによって測定される場合、抗原結合部分の抗原への結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、抗原に結合する抗原結合部分、又は抗原結合部分を含む抗原結合分子は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。
「結合の減少」、例えばＦｃ受容体への結合の減少とは、例えばＳＰＲによって測定されるように、各相互作用に対する親和性の減少を指す。明確に示すために、用語はゼロ（又は分析方法の検出限界を下回る値）への親和性の減少、すなわち相互作用の完全な消失も含む。逆に、「結合の増加」は、各相互作用に対する親和性の増加を指す。
本明細書において使用される用語「抗原結合分子」は、その最も広い意味において、抗原決定基に特異的に結合する分子を指す。抗原結合分子の例は、免疫グロブリン及び誘導体、例えば、その断片である。
本明細書において使用される用語「抗原決定基」は、「抗原」及び「エピトープ」と同義であり、抗原結合部分が結合し、抗原結合部分－抗原複合体を形成するポリペプチド巨大分子上の部位（例えば、アミノ酸の連続的区間又は非連続的アミノ酸の異なる領域から形成される立体構造配置）を指す。有用な抗原決定基は、例えば、腫瘍細胞の表面に、ウイルス感染細胞の表面に、他の疾患細胞の表面に、血清中に遊離した状態で、及び／又は細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に見いだすことができる。特に断らない限り、本明細書において抗原と呼ばれるタンパク質（例えばＣＤ３）は、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来のタンパク質の任意の天然形態を指す。特定の実施態様では、抗原はヒトタンパク質である。本明細書において特定のタンパク質が言及される場合、その用語は「完全長」の未処理のタンパク質と、細胞内でのプロセシングにより得られる任意の形態のタンパク質とを包含する。その用語はまた、天然に存在するタンパク質の変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体を包含する。抗原として有用な例示的なヒトタンパク質は、ＣＤ３、特にＣＤ３のイプシロンサブユニットである（ヒト配列についてＵｎｉＰｒｏｔ ｎｏ．Ｐ０７７６６（バージョン１３０）、ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ ｎｏ．ＮＰ＿０００７２４．１、配列番号１０５を；カニクイザル［Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ］配列についてはＵｎｉＰｒｏｔ ｎｏ．Ｑ９５ＬＩ５（バージョン４９）、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ ｎｏ．ＢＡＢ７１８４９．１、配列番号１０６を参照）。特定の実施態様では、本発明のＴ細胞活性化二重特異性抗原結合分子は、異なる種由来のＣＤ３又は標的細胞抗原間で保存されている、ＣＤ３又は標的細胞抗原のエピトープに結合する。
本明細書において使用される用語「ポリペプチド」は、アミノ結合（ペプチド結合としても知られる）により線形に結合したモノマー（アミノ酸）からなる分子を指す。用語「ポリペプチド」は、２つ以上のアミノ酸の任意の鎖を指し、特定の長さの生成物を指すものではない。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、又は２つ以上のアミノ酸の鎖を指す他のいずれの用語も「ポリペプチド」の定義に含まれ、用語「ポリペプチド」は、これら用語のいずれかの代わりに、又はいずれかと交換可能に、使用することができる。用語「ポリペプチド」は、ポリペプチドの発現後修飾の生成物を指すことも意図しており、このような生成物には、限定されないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解切断、又は天然に存在しないアミノ酸による修飾が含まれる。ポリペプチドは、天然の生物学的供給源に由来する場合もあれば、組換え技術によって産生される場合もあるが、必ずしも指定された核酸配列から翻訳されるわけではない。ポリペプチドは化学合成によるものを含め、どのような方法で生成されてもよい。本発明のポリペプチドは、約３以上、５以上、１０以上、２０以上、２５以上、５０以上、７５以上、１００以上、２００以上、５００以上、１０００以上、又は２０００以上の大きさのアミノ酸からなってよい。ポリペプチドは、定義された三次元構造を有し得るが、必ずしもそのような構造を有するものではない。定義された三次元構造を有するポリペプチドは、折り畳まれていると言われ、定義された三次元構造を有しないが、多数の異なる立体構造をとることができるポリペプチドは折り畳まれていないと言われる。
「単離された」ポリペプチド若しくは変異体、又はその誘導体とは、その自然の環境にないポリペプチドを意味する。特定のレベルの精製は必要でない。例えば、単離されたポリペプチドは、その天然又は自然の環境から除去することができる。宿主細胞に発現される、組換えにより産生されたポリペプチド及びタンパク質を、任意の適切な技術により分離、分画、又は部分的若しくは実質的に精製された天然又は組換えポリペプチドのように、本発明のために単離することが考慮される。
参照ポリペプチド配列に対する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、最大の配列同一性パーセントを得るように配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後の、いかなる保存的置換も配列同一性の一部とみなさない、参照ポリペプチドのアミノ酸残基と同一である候補配列のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当該技術分野の範囲内にあるさまざまな方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較される配列の完全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、ジェネンテック社によって著作され、ソースコードは米国著作権庁、ワシントンＤ．Ｃ．，２０５５９に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、ジェネンテック社（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）のＶ４．０Ｄを含む、ＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステムで使用するためにコンパイルする必要がある。すべての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定され変動しない。アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ－２が用いられる状況では、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂと、又はそれに対して特定の％アミノ酸配列同一性を有する又は含む所与のアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
１００×分率Ｘ／Ｙ
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ－２により、ＡとＢのそのプログラムのアラインメントにおいて同一の一致としてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。特に断らない限り、本明細書で使用されるすべての％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して、前段落で説明したように得られる。
本明細書における用語「抗体」は最も広い意味で用いられ、さまざまな抗体構造を包含し、限定されるものではないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含む。
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」は、本明細書中で互換的に使用され、天然の抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部分を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、限定されるものではないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれる。本明細書で使用される用語「抗体断片」は、単一ドメイン抗体も包含する。
用語「免疫グロブリン分子」は、天然に存在する抗体の構造を有するタンパク質を指す。例えば、ＩｇＧクラスの免疫グロブリンは、ジスルフィド結合している２つの軽鎖と２つの重鎖からなる約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に、各重鎖は可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、その後に重鎖定常領域とも呼ばれる３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）が続いている。同様に、Ｎ末端からＣ末端に、各軽鎖は可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、その後に軽鎖定常領域とも呼ばれる定常軽鎖（ＣＬ）ドメインが続いている。免疫グロブリンの重鎖は、α（ＩｇＡ）、δ（ＩｇＤ）、ε（ＩｇＥ）、γ（ＩｇＧ）、又はμ（ＩｇＭ）と呼ばれる５つのクラスのうちの１つに割り当てることができ、それらのいくつかはさらにサブタイプ、例えばγ１（ＩｇＧ１）、γ２（ＩｇＧ２）、γ３（ＩｇＧ３）、γ４（ＩｇＧ４）、α１（ＩｇＡ１）及びα２（ＩｇＡ２）に分けられる。免疫グロブリンの軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる、２つの種類のうちの１つに割り当てることができる。免疫グロブリンは、本質的に、免疫グロブリンのヒンジ領域を介して連結された２つのＦａｂ分子とＦｃドメインからなる。
用語「抗原結合ドメイン」は、抗原の一部又は全部に特異的に結合し、かつ相補的である領域を含む抗体の部分を指す。抗原結合ドメインは、例えば、１つ又は複数の抗体可変ドメイン（抗体可変領域とも呼ばれる）により提供され得る。好ましくは、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）及び抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。通常、天然の抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、各々が４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む類似構造を有する。例えば、Kindt et al., Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)を参照。抗原結合特異性を付与するには、単一のＶＨ又はＶＬドメインで十分であり得る。
「ヒト抗体」とは、ヒト若しくはヒト細胞により産生される抗体、又はヒト抗体レパートリー若しくは他のヒト抗体をコードする配列を利用する非ヒト起源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の実施態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）のすべて又は実質的にすべてが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲのすべて又は実質的にすべてが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を遂げた抗体を指す。
本明細書で用いられる用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列が超可変である抗体可変ドメインの領域（「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」）及び／又は構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの領域及び／又は抗原に接触する残基（「抗原コンタクト（antigen contact）」を含有する抗体可変ドメインの領域のそれぞれを指す。一般的に、抗体は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、ＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の計６つのＨＶＲを含む。本明細書において、例示的なＨＶＲは、
（ａ）アミノ酸残基２６－３２（Ｌ１）、５０－５２（Ｌ２）、９１－９６（Ｌ３）、２６－３２（Ｈ１）、５３－５５（Ｈ２）、及び９６－１０１（Ｈ３）に生じる超可変ループ（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）；
（ｂ）アミノ酸残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、８９－９７（Ｌ３）、３１－３５ｂ（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）、及び９５－１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)）；
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ－３６（Ｌ１）、４６－５５（Ｌ２）、８９－９６（Ｌ３）、３０－３５ｂ（Ｈ１）、４７－５８（Ｈ２）、及び９３－１０１（Ｈ３）に生じる抗原コンタクト（MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)）；及び
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６－５６（Ｌ２）、４７－５６（Ｌ２）、４８－５６（Ｌ２）、４９－５６（Ｌ２）、２６－３５（Ｈ１）、２６－３５ｂ（Ｈ１）、４９－６５（Ｈ２）、９３－１０２（Ｈ３）、及び９４－１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／又は（ｃ）の組み合わせ
を含む。
特に断らない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書では上掲のＫａｂａｔらに従って番号付けされる。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ配列及びＦＲ配列は、一般にＶＨ（又はＶＬ）の以下の配列に現れる：ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４。
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体には５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、これらのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩＧＡ１、及びＩｇＡ２に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
本明細書の用語「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域と変異型Ｆｃ領域を含む。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界はわずかに異なる可能性があるが、通常、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端まで伸びると定義される。しかし、宿主細胞によって産生される抗体は、重鎖のＣ末端から１つ又は複数の、特に１つ又は２つのアミノ酸の翻訳後切断を受ける可能性がある。したがって、完全長重鎖をコードする特定の核酸分子の発現によって宿主細胞によって産生される抗体には、完全長重鎖が含まれ得るか、完全長重鎖の切断された変異体（本明細書では「切断された変異型重鎖」とも呼ばれる）が含まれ得る。これは、重鎖の最後の２つのＣ末端アミノ酸がグリシン（Ｇ４４６）とリジン（Ｋ４４７、Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）である場合に当てはまる。したがって、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）、又はＣ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）とリジン（Ｋ４４７）は、存在してもしなくてもよい。本明細書に別途指定のない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991（上記も参照）。本明細書において使用されるＦｃドメインの「サブユニット」は、二量体Ｆｃドメインを形成する２つのポリペプチドの一方、すなわち、免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含み、安定な自己会合能を有するポリペプチドを指す。例えば、ＩｇＧ Ｆｃドメインのサブユニットは、ＩｇＧ ＣＨ２及びＩｇＧ ＣＨ３定常ドメインを含む。
「Ｆｃドメインの第１及び第２のサブユニットの会合を促進する修飾」とは、Ｆｃドメインのサブユニットを含むポリペプチドの、同一のポリペプチドとの会合によるホモ二量体の形成を低減又は抑制する、ペプチド骨格の操作又はＦｃドメインサブユニットの翻訳後修飾である。本明細書において使用される会合を促進する修飾には、特に、会合することが望ましい２つのＦｃドメインサブユニット（すなわち、Ｆｃドメインの第１及び第２のサブユニット）の各々に対して行われる別々の修飾が含まれ、これらの修飾は、２つのＦｃドメインサブユニットの会合を促進するために互いに相補的である。例えば、会合を促進する修飾は、Ｆｃドメインサブユニットの一方又は両方の構造又は電荷を変化させることにより、それらの会合を、それぞれ立体的に又は静電的に好ましいものにすることができる。このように、（ヘテロ）二量体化は、第１のＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドと、第２のＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドとの間で起こり、これらのポリペプチドは、サブユニットの各々に融合したさらなる成分（例えば、抗原結合部分）が同じでないという意味で非同一であり得る。いくつかの実施態様では、会合を促進する修飾は、Ｆｃドメイン内におけるアミノ酸変異、特にアミノ酸置換を含む。特定の実施態様では、会合を促進する修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの各々における別々のアミノ酸変異、具体的にはアミノ酸置換を含む。
「活性化Ｆｃ受容体」は、抗体のＦｃ領域の結合に続いて、エフェクター機能を実行するように受容体保有細胞を刺激するシグナル伝達現象を生じさせるＦｃ受容体である。活性化Ｆｃ受容体には、ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ３２）、及びＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）が含まれる。
用語「エフェクター機能」は、抗体に関連して使用される場合、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指し、これは抗体アイソタイプによって異なる。抗体エフェクター機能の例には：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、サイトカイン分泌、抗原提示細胞による免疫複合体媒介性抗原取り込み、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、及びＢ細胞活性化が含まれる。
本明細書で使用される用語「エフェクター細胞」は、エフェクター部分受容体、例えばサイトカイン受容体、及び／又はエフェクター部分、例えばサイトカイン、及び／又は抗体のＦｃ領域と結合する表面上のＦｃ受容体を提示し、標的細胞、例えば腫瘍細胞の破壊に寄与するリンパ球の集団を指す。エフェクター細胞は、例えば、細胞傷害作用又は食細胞作用を媒介し得る。エフェクター細胞には、限定されないが、エフェクターＴ細胞、例えば、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、γδＴ細胞、ＮＫ細胞、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞及びマクロファージ／単球などが含まれる。
本明細書において使用される場合、用語「操作する（engineer）、操作された（engineered）、操作（engineering）」は、ペプチド骨格の任意の操作、又は天然に存在するポリペプチド若しくは組換えポリペプチド若しくはその断片の翻訳後修飾を含むと考慮される。操作には、アミノ酸配列、グリコシル化パターン、又は個々のアミノ酸の側鎖基の修飾、及びこれらの手法の組み合わせが含まれる。「操作」、特に接頭辞「糖鎖」を伴うもの、及び用語「グリコシル化操作」には、細胞内で発現される糖タンパク質の改変されたグリコシル化を達成するためのオリゴ糖合成経路の遺伝子操作を含む、細胞のグリコシル化機構の代謝操作が含まれる。さらに、グリコシル化操作は、グリコシル化における突然変異及び細胞環境の影響を含む。一実施態様では、グリコシル化操作は、グリコシルトランスフェラーゼ活性の改変である。特定の実施態様では、操作は、グルコサミニルトランスフェラーゼ活性及び／又はフコシルトランスフェラーゼ活性の改変をもたらす。グリコシル化操作を使用して、「ＧｎＴＩＩＩ活性が増加した宿主細胞」（例えば、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）活性を有する１つ又は複数のポリペプチドの増加したレベルを発現するように操作された宿主細胞）、「ＭａｎＩＩ活性が増加した宿主細胞」（例えば、α－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）活性を有する１つ又は複数のポリペプチドの増加したレベルを発現するように操作された宿主細胞）、又は「α（１，６）フコシルトランスフェラーゼ活性が低下した宿主細胞」（例えば、α（１，６）フコシルトランスフェラーゼの減少したレベルを発現するように操作された宿主細胞）を得ることができる。
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養物」は、互換的に使用され、外因性の核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、それには初代形質転換細胞及び、継代の数に関係なく、それに由来する子孫が含まれる。子孫は親細胞と核酸含量が完全に同一でなくてもよく、突然変異を含んでいてもよい。最初に形質転換された細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異型子孫が本明細書において含まれる。宿主細胞は、本発明のために使用されるタンパク質を生成するために使用され得る任意の種類の細胞系である。一実施態様では、宿主細胞は、修飾されたオリゴ糖を有する抗体の産生を可能にするように操作される。特定の実施態様では、宿主細胞は、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）活性を有する１つ又は複数のポリペプチドの増加したレベルを発現するように操作されている。特定の実施態様では、宿主細胞は、α－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）活性を有する１つ又は複数のポリペプチドの増加したレベルを発現するようにさらに操作されている。宿主細胞は、培養細胞、例えばいくつか例を挙げると、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＹＯ骨髄腫細胞、Ｐ３Ｘ６３マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、又はハイブリドーマ細胞といった哺乳動物の培養細胞、酵母細胞、昆虫細胞、及び植物細胞を含み、さらには、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物、又は培養された植物若しくは動物組織内部に含まれる細胞も含む。
本明細書で使用される場合、用語「ＧｎＴＩＩＩ活性を有するポリペプチド」は、Ｎ－結合型オリゴ糖のトリマンノシルコアのβ－結合マンノシドへのβ－１，４結合におけるＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）残基の付加を触媒することができるポリペプチドを指す。これには、特定の生物学的アッセイで測定される場合、用量依存性の有無にかかわらず、国際生化学分子生物学連合（ＮＣ－ＩＵＢＭＢ）の命名委員会による、β－１，４－マンノシル糖タンパク質の４－β－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（ＥＣ ２．４．１．１４４）としても知られるβ（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩの活性に類似しているが必ずしも同一ではない酵素活性を示す融合ポリペプチドが含まれる。用量依存性が存在する場合、ＧｎＴＩＩＩのそれと同一である必要はなく、ＧｎＴＩＩＩと比較して、所定の活性における用量依存性とかなり実質的に類似している必要がある（すなわち、候補ポリペプチドは、ＧｎＴＩＩＩと比較して、より高い活性、又は約２５倍以下、好ましくは約１０倍以下の活性、最も好ましくは約３倍以下の活性を示す）。特定の実施態様では、ＧｎＴＩＩＩ活性を有するポリペプチドは、ＧｎＴＩＩＩの触媒ドメインと異種ゴルジ常在性ポリペプチドのゴルジ局在化ドメインとを含む融合ポリペプチドである。特に、ゴルジ局在化ドメインは、マンノシダーゼＩＩ又はＧｎＴＩの局在化ドメイン、最も具体的にはマンノシダーゼＩＩの局在化ドメインである。あるいは、ゴルジ局在化ドメインは、マンノシダーゼＩの局在化ドメイン、ＧｎＴＩＩの局在化ドメイン、及びα１，６コアフコシルトランスフェラーゼの局在化ドメインからなる群から選択される。そのような融合ポリペプチドを生成し、それらを使用してエフェクター機能が増加した抗体を産生する方法は、国際公開第２００４／０６５５４０号、米国仮特許出願第６０／４９５１４２号及び米国特許出願公開第２００４／０２４１８１７号に開示されており、その内容全体が、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
本明細書で使用される場合、用語「ゴルジ局在化ドメイン」は、ポリペプチドをゴルジ複合体内の位置に固定することに関与するゴルジ常在性ポリペプチドのアミノ酸配列を指す。一般的に、局在化ドメインは、酵素のアミノ末端「テール」を含む。
本明細書で使用される場合、用語「ＭａｎＩＩ活性を有するポリペプチド」は、Ｎ－結合型オリゴ糖の分岐ＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２マンノース中間体における末端１，３－及び１，６－結合α－Ｄ－マンノース残基の加水分解を触媒できるポリペプチドを指す。これには、国際生化学分子生物学連合（ＮＣ－ＩＵＢＭＢ）の命名委員会による、マンノシルオリゴ糖１，３－１，６－α－マンノシダーゼＩＩ（ＥＣ ３．２．１．１１４）としても知られるゴルジα－マンノシダーゼＩＩの活性に類似しているが必ずしも同一ではない酵素活性を示すポリペプチドが含まれる。
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は、免疫エフェクター細胞による抗体被覆標的細胞の溶解を引き起こす免疫機構である。標的細胞は、Ｆｃ領域を含む抗体又はその断片が、一般にＦｃ領域のＮ末端にあるタンパク質部分を介して、特異的に結合する細胞である。本明細書で使用される場合、用語「増加した／減少したＡＤＣＣ」は、標的細胞を取り囲む媒質中の所定の抗体濃度において、上記で定義されたＡＤＣＣの機構による、所定の時間内に溶解される標的細胞の数の増加／減少、及び／又は、ＡＤＣＣの機構により、所定の時間内に所定の数の標的細胞の溶解を達成するために必要な、標的細胞を囲む媒質中の抗体濃度の減少／増加のいずれかとして定義される。ＡＤＣＣの増加／減少は、同じ標準的な産生方法、精製方法、製剤化法、及び貯蔵方法（当業者に知られている）を使用して、ただし操作されていない、同じ型の宿主細胞によって産生される同じ抗体によって媒介されるＡＤＣＣに対して相対的なものである。例えば、本明細書に記載の方法により、グリコシル化の改変したパターンを有するように（例えば、グリコシルトランスフェラーゼ、ＧｎＴＩＩＩ、又は他のグリコシルトランスフェラーゼを発現するように）操作された宿主細胞により産生される抗体により媒介されるＡＤＣＣの増加は、同じ型の非操作宿主細胞により産生される同じ抗体により媒介されるＡＤＣＣに対して相対的なものである。
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）が増加／減少した抗体」とは、当業者に知られた任意の適切な方法により決定されるようにＡＤＣＣが増加／減少した抗体を意味する。１つの受け入れられているｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイは、以下の通りである：
１）アッセイは、抗体の抗原結合領域によって認識される標的抗原を発現することが知られている標的細胞を使用する；
２）アッセイは、エフェクター細胞として、無作為に選択された健常なドナーの血液から単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する；
３）アッセイは、以下のプロトコールに従って実行される：
ｉ）ＰＢＭＣは、標準的な密度の遠心分離手順を使用して単離され、ＲＰＭＩ細胞培養培地に５×１０６細胞／ｍｌで懸濁される。
ｉｉ）標的細胞を標準的な組織培養法により増殖させ、９０％を超える生存率の指数増殖期から回収し、ＲＰＭＩ細胞培養培地で洗浄し、１００マイクロキュリーの５１Ｃｒで標識し、細胞培養培地で２回洗浄し、１０５個の細胞／ｍｌの密度で細胞培養培地に再懸濁させる；
ｉｉｉ）１００マイクロリットルの上記の最終標的細胞懸濁物を９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに移す；
ｉｖ）抗体を細胞培養培地で４０００ｎｇ／ｍから０．０４ｎｇ／ｍｌに段階希釈し、５０マイクロリットルの得られた抗体溶液を９６ウェルマイクロタイタープレート中の標的細胞に添加し、上記の濃度範囲全体をカバーするさまざまな抗体濃度で３重試験する。
ｖ）最大放出（ＭＲ）コントロールのために、標識された標的細胞を含むプレート中の３つの追加のウェルに、抗体溶液（上記のｉｖ項）の代わりに非イオン性界面活性剤（Ｎｏｎｉｄｅｔ，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）の２％（Ｖ／Ｖ）水溶液５０マイクロリットルを入れる；
ｖｉ）自然放出（ＳＰ）コントロールのために、標識された標的細胞を含むプレート中の３つの追加のウェルに、抗体溶液（上記のｉｖ項）の代わりにＲＰＭＩ細胞培地５０マイクロリットルを入れる；
ｖｉｉ）次いで、９６ウェルマイクロタイタープレートを５０ｘｇで１分間遠心分離し、４℃で１時間インキュベートする。
ｖｉｉｉ）５０マイクロリットルのＰＢＭＣ懸濁液（上記のｉ項）を各ウェルに加えて、エフェクター：標的細胞比を２５：１にし、プレートを３７℃で４時間、５％ＣＯ２雰囲気下のインキュベーターに入れる；
ｉｘ）各ウェルから無細胞上清を回収し、ガンマカウンターを使用して実験的に放出された放射活性（ＥＲ）を定量する；
ｘ）特異的溶解の百分率を、各抗体濃度について、式（ＥＲ－ＭＲ）／（ＭＲ－ＳＲ）×１００［式中、ＥＲはその抗体濃度について定量された平均放射活性（上記ｉｘ項参照）であり、ＭＲはＭＲコントロール（上記ｖ項参照）について定量された平均放射活性（上記ｉｘ項参照）であり、ＳＲはＳＲコントロール（上記ｖｉ項参照）について定量された平均放射活性（上記ｉｘ項参照）である］に従って計算する。
４）「増加した／減少したＡＤＣＣ」は、上記の試験された抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大百分率の増加／減少、及び／又は上記の試験された抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大百分率の半分を達成するのに必要な抗体濃度の減少／増加のいずれかとして定義される。ＡＤＣＣの増加／減少は、上記のアッセイで測定され、当業者に知られている、同じ標準的な産生方法、精製方法、製剤化法、及び貯蔵方法を使用して、ただし操作されていない、同じ型の宿主細胞によって産生される同じ抗体によって媒介されるＡＤＣＣに対して相対的なものである。
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味し、すなわち、例えば、天然に生じる突然変異を含むか又はモノクローナル抗体調製物の製造時に発生し、一般的に少量で存在している可能性のある変異体抗体を除いて、集団を構成する個々の抗体は同一であり、かつ／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を通常含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。したがって、修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均質な集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定されるものではないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含むさまざまな技術によって作製することができ、モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法及び他の例示的な方法は本明細書に記載されている。
本明細書で使用される場合、抗原結合部分などに関する用語「第１」、「第２」、「第３」などは、各型の部分が複数存在するとき、区別する便宜のために使用される。これらの用語の使用は、特に明記されていない限り、特定の順序又は配向を付与することを意図しているのではない。
用語「多重特異性」及び「二重特異性」は、抗原結合分子が少なくとも２つの異なる抗原決定基に特異的に結合することができることを意味する。典型的には、二重特異性抗原結合分子は２つの抗原結合部位を含み、その各々は異なる抗原決定基に対して特異的である。特定の実施態様では、二重特異性抗原結合分子は、２つの抗原決定基、特に２つの別個の細胞上に発現した２つの抗原決定基に同時に結合することができる。
本明細書において使用される用語「価」は、抗原結合分子内における特定数の抗原結合部位の存在を意味する。このように、用語「抗原に対する一価の結合」は、抗原結合分子における抗原に特異的な１つの（かつ１つを超えない）抗原結合部位の存在を意味する。
「抗原結合部位」は、抗原との相互作用を提供する抗原結合分子の部位、すなわち１つ又は複数のアミノ酸残基を指す。例えば、抗体の抗原結合部位は、相補性決定領域（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含む。天然の免疫グロブリン分子は通常２つの抗原結合部位を有し、Ｆａｂ分子は通常１つの抗原結合部位を有する。
本明細書で使用される「Ｔ細胞活性化治療剤」は、対象においてＴ細胞活性化を誘導することができる治療剤、特に対象においてＴ細胞活性化を誘導するために設計された治療剤を指す。Ｔ細胞活性化治療剤の例には、ＣＤ３などの活性化Ｔ細胞抗原、及びＣＤ２０又はＣＤ１９などの標的細胞抗原に特異的に結合する二重特異性抗体が含まれる。さらなる例には、Ｔ細胞活性化ドメイン及びＣＤ２０又はＣＤ１９などの標的細胞抗原に特異的に結合する抗原結合部分を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が含まれる。
本明細書で使用される「活性化Ｔ細胞抗原」は、抗原結合分子との相互作用の際にＴ細胞活性化を誘導又は増強することができる、Ｔリンパ球、特に細胞傷害性Ｔリンパ球によって発現される抗原決定基を指す。具体的には、抗原結合分子と活性化Ｔ細胞抗原との相互作用は、Ｔ細胞受容体複合体のシグナル伝達カスケードをトリガーすることにより、Ｔ細胞活性化を誘導することができる。例示的な活性化Ｔ細胞抗原はＣＤ３である。特定の実施態様では、活性化Ｔ細胞抗原はＣＤ３、特にＣＤ３のイプシロンサブユニットである（ヒト配列についてＵｎｉＰｒｏｔ ｎｏ．Ｐ０７７６６（バージョン１３０）、ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ ｎｏ．ＮＰ＿０００７２４．１、配列番号１０５を；カニクイザル［Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ］配列についてはＵｎｉＰｒｏｔ ｎｏ．Ｑ９５ＬＩ５（バージョン４９）、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ ｎｏ．ＢＡＢ７１８４９．１、配列番号１０６を参照）。
本明細書で使用される「Ｔ細胞活性化」は、増殖、分化、サイトカイン分泌、細胞傷害性エフェクター分子放出、細胞傷害性活性、及び活性化マーカーの発現から選択される、Ｔリンパ球、特に細胞傷害性Ｔリンパ球の１つ又は複数の細胞応答を指す。本発明で使用されるＴ細胞活性化治療剤は、Ｔ細胞活性化を誘導することができる。Ｔ細胞活性化を測定するための適切なアッセイは、本明細書に記載の当該技術分野で知られている。
本明細書において使用される「標的細胞抗原」は、標的細胞、例えばがん細胞又は腫瘍間質の細胞などの腫瘍内細胞の表面に提示される抗原決定基を指す。特定の実施態様では、標的細胞抗原はＣＤ２０、特にヒトＣＤ２０である（ＵｎｉＰｒｏｔ ｎｏ．Ｐ１１８３６を参照）。
本明細書で使用される「Ｂ細胞抗原」は、Ｂリンパ球、特に悪性Ｂリンパ球の表面に提示される抗原決定基を指す（その場合、抗原は「悪性Ｂ細胞抗原」とも呼ばれる）。
本明細書で使用される「Ｔ細胞抗原」は、Ｔリンパ球、特に細胞傷害性Ｔリンパ球の表面に提示される抗原決定基を指す。
「Ｆａｂ分子」とは、免疫グロブリンの重鎖のＶＨ及びＣＨ１ドメイン（「Ｆａｂ重鎖」）並びに軽鎖のＶＬ及びＣＬドメイン（「Ｆａｂ軽鎖」）からなるタンパク質を指す。
「キメラ抗原受容体」又は「ＣＡＲ」とは、抗原結合部分、例えば、標的抗体の単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、膜貫通ドメイン、細胞内Ｔ細胞活性化シグナル伝達ドメイン（Ｔ細胞受容体のＣＤ３ゼータ鎖など）、及び任意で１つ又は複数の細胞内共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、Ｏｘ４０）を含む遺伝子操作された受容体タンパク質を意味する。ＣＡＲは、抗原認識、Ｔ細胞の活性化、及び－第二世代ＣＡＲの場合－Ｔ細胞の機能性と持続性を増強するための共刺激を媒介する。総説としては、Jackson et al., Nat Rev Clin Oncol (2016) 13, 370-383を参照。
「Ｂ細胞増殖性疾患」とは、患者におけるＢ細胞の数が健常な対象におけるＢ細胞の数と比較して増加し、特にＢ細胞の数の増加が疾患の原因又は特徴である疾患を意味する。「ＣＤ２０陽性Ｂ細胞増殖性疾患」は、Ｂ細胞、特に悪性Ｂ細胞（正常Ｂ細胞に加えて）が、ＣＤ２０を発現するＢ細胞増殖性疾患である。
例示的なＢ細胞増殖疾患は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、並びに一部の型の多発性骨髄腫（ＭＭ）及びホジキンリンパ腫（ＨＬ）が挙げられる。
「融合された」とは、成分（例えば、Ｆａｂ分子及びＦｃドメインサブユニット）が、直接又は１つ若しくは複数のペプチドリンカーを介してペプチド結合によって連結されることを意味する。
薬剤の「有効量」とは、それが投与される細胞又は組織中に生理学的変化をもたらすのに必要な量を指す。
薬剤、例えば、薬学的組成物の「治療的有効量」とは、所望の治療的又は予防的結果を達成するために必要な投与量及び期間において有効な量を指す。治療的有効量の薬剤は、疾患の有害作用を、例えば、排除する、減少させる、遅延させる、最小化する、又は防止する。
「治療剤」とは、例えば、治療されている対象における疾患の自然経過を変えようとして対象に投与され、予防のため又は臨床病理学の過程において実施され得る薬学的組成物の有効成分を意味する。「免疫療法剤」は、例えば、腫瘍に対する対象の免疫応答を回復又は増強する試みにおいて対象に投与される、治療剤を指す。
「個体」又は「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物は、限定されないが、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれる。好ましくは、個体又は対象はヒトである。
用語「薬学的組成物」は、その中に含まれる活性成分の生物学的活性が有効であることを可能にするような形態であって、組成物が投与されるであろう対象にとって許容できないほど毒性である付加的成分を含まない調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」は、対象に対して非毒性である、有効成分以外の薬学的組成物の成分を指す。薬学的に許容される担体は、限定されないが、緩衝剤、賦形剤、安定剤又は保存剤を含む。
本明細書で用いられる場合、「治療（treatment）」（及び「治療する（treat）」又は「治療する（treating）」など、その文法的変形）は、治療されている個体における疾患の自然経過を変えようと試みる臨床的介入を指し、予防のため、又は臨床病理の過程において実施され得る。治療の望ましい効果は、限定されないが、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の緩和、疾患の直接的又は間接的な病理学的帰結の縮小、転移を予防すること、疾患の進行の速度を遅らせること、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善が含まれる。いくつかの実施態様では、本発明の方法は、疾患の発症を遅延させるか、又は疾患の進行を遅らせるために使用される。
用語「添付文書」又は「使用説明書」は、治療製品の商品包装に通例含まれる説明書を指すのに用いられ、そのような治療製品の適応症、用法、用量、投与、併用治療、使用に関する禁忌及び／又は注意事項についての情報を含む。
本明細書で言及される用語「併用治療」は、併用投与（ここでは２つ以上の治療剤が同一又は別々の製剤に含まれる）、及び本明細書で報告される抗体の投与が、さらなる治療剤（複数可）、好ましくは抗体（複数可）の投与の前、投与と同時、及び／又は投与の後に起こり得る個別投与を包含する。
「ＣＤ３」は、特に断らない限り、霊長類（例えばヒト）、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）及びげっ歯類（例えばマウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来の任意の天然のＣＤ３を指す。その用語は、「完全長」で未処理のＣＤ３、並びに細胞内でのプロセシングから生じた任意の形態のＣＤ３を含む。その用語はまた、ＣＤ３の天然に生じる変異体、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子変異体を含む。一実施態様では、ＣＤ３は、ヒトＣＤ３、特にヒトＣＤ３のイプシロンサブユニット（ＣＤ３ε）である。ヒトＣＤ３のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）の受入番号Ｐ０７７６６（バージョン１４４）、又はＮＣＢＩ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿０００７２４．１に示されている。配列番号９１も参照。カニクイザル［Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ］ＣＤ３εのアミノ酸配列が、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ ｎｏ．ＢＡＢ７１８４９．１に示されている。配列番号９２も参照。
特に断りのない限り、「ＣＤ１９」は、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４又はＴ細胞表面抗原Ｌｅｕ－１２としても知られているＢリンパ球抗原ＣＤ１９を指し、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳類を含む任意の脊椎動物源由来の任意の天然のＣＤ１９を含む。その用語は、「完全長」で未処理のＣＤ１９、並びに細胞内でのプロセシングから生じた任意の形態のＣＤ１９を含む。その用語はまた、ＣＤ１９の天然に生じる変異体、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子変異体を含む。一実施態様では、ＣＤ１９はヒトＣＤ１９である。例示的なヒトＣＤ１９のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）受入番号Ｐ１５３９１（バージョン１７４）、又はＮＣＢＩ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿００１７７０．５、及び配列番号９３に示される。
「クロスオーバー」Ｆａｂ分子（「Ｃｒｏｓｓｆａｂ」とも呼ばれる）とは、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメイン又は定常ドメインが交換されている（すなわち、互いに置換されている）Ｆａｂ分子を意味し、すなわち、クロスオーバーＦａｂ分子は、軽鎖可変ドメインＶＬ及び重鎖定常ドメイン１ ＣＨ１（ＶＬ－ＣＨ１、ＮからＣ末端方向）からなるペプチド鎖と、重鎖可変ドメインＶＨ及び軽鎖定常ドメインＣＬ（ＶＨ－ＣＬ、ＮからＣ末端方向）からなるペプチド鎖を含む。明確にするために、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変ドメインが交換されたクロスオーバーＦａｂ分子では、重鎖定常ドメイン１ ＣＨ１を含むペプチド鎖は、本明細書では（クロスオーバー）Ｆａｂ分子の「重鎖」と呼ばれる。逆に、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の定常ドメインが交換されたクロスオーバーＦａｂ分子では、重鎖可変ドメインＶＨを含むペプチド鎖は、本明細書では（クロスオーバー）Ｆａｂ分子の「重鎖」と呼ばれる。
それとは対照的に、「従来の」Ｆａｂ分子とは、その天然フォーマットのＦａｂ分子、すなわち、重鎖可変及び定常ドメインからなる重鎖（ＶＨ－ＣＨ１、ＮからＣ末端方向）と、軽鎖可変及び定常ドメインからなる軽鎖（ＶＬ－ＣＬ、ＮからＣ末端方向）を含むＦａｂ分子を意味する。
用語「ポリヌクレオチド」は、単離された核酸分子又は構築物、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ウイルス由来ＲＮＡ、又はプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を指す。ポリヌクレオチドは、一般的なホスホジエステル結合又は非一般的な結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）に見られるようなアミド結合）を含み得る。用語「核酸分子」は、ポリヌクレオチド中に存在する、任意の１つ又は複数の核酸セグメント、例えばＤＮＡ又はＲＮＡ断片を指す。
「単離された」核酸分子又はポリヌクレオチドとは、その天然環境から取り出された核酸分子、ＤＮＡ又はＲＮＡを意味する。例えば、ベクターに含まれるポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチドを、本発明の目的のために単離することが考慮される。単離されたポリヌクレオチドのさらなる例には、異種宿主細胞内に維持される組換えポリヌクレオチド、又は溶液中の（部分的に又は実質的に）精製されたポリヌクレオチドが含まれる。単離されたポリヌクレオチドは、通常そのポリヌクレオチド分子を含む細胞に含まれるポリヌクレオチド分子を含むが、そのポリヌクレオチド分子は染色体外に又はその天然の染色***置とは異なる染色***置に存在する。単離されたＲＮＡ分子は、ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏの本発明のＲＮＡ転写物、並びにプラス鎖形式及びマイナス鎖形式、及び二重鎖形式を含む。本発明の単離されたポリヌクレオチド又は核酸は、合成により生成されたそのような分子をさらに含む。加えて、ポリヌクレオチド又は核酸は、プロモーター、リボソーム結合部位、又は転写ターミネーターなどの調節エレメントであり得るか又はそれらを含み得る。
本発明の参照ヌクレオチド配列と少なくとも、例えば、９５％「同一」であるヌクレオチド配列を有する核酸又はポリヌクレオチドにより、ポリヌクレオチド配列がその参照ヌクレオチド配列の１００ヌクレオチドごとに５個までの点突然変異を含み得ることを除いて、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列がその参照配列と同一であることが意図される。換言すれば、参照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列中最大５％のヌクレオチドが削除され又は別のヌクレオチドで置換されてもよく、又は参照配列に含まれるすべてのヌクレオチドの最大５％までの複数のヌクレオチドが参照配列に挿入されてもよい。参照配列のこのような改変は、参照ヌクレオチド配列の５’又は３’末端の位置で、又はそれらの末端位置の間の任意の場所で、参照配列中の残基の間に個別に散在して、又は参照配列内部の１つ又は複数の連続する群において散在して生じ得る。特定の事項として、任意の特定のポリヌクレオチド配列が、本発明のヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるかどうかは、ポリペプチドについて上述したもの（例えばＡＬＩＧＮ－２）などの既知のコンピュータープログラムを使用して常套的に決定することができる。
用語「発現カセット」は、標的細胞中の特定の核酸の転写を可能にする一連の特定の核酸エレメントを用いて、組換え的又は合成的に生成されたポリヌクレオチドを指す。組換え発現カセットは、プラスミド、染色体、ミトコンドリアＤＮＡ、プラスチドＤＮＡ、ウイルス、又は核酸断片中に取り込むことができる。典型的には、発現ベクターの組換え発現カセット部分には、他の配列の中でも、転写される核酸配列及びプロモーターが含まれる。特定の実施態様では、本発明の発現カセットは、本発明の二重特異性抗原結合分子をコードするポリヌクレオチド配列又はその断片を含む。
用語「ベクター」又は「発現ベクター」は、「発現構築物」と同義であり、標的細胞内においてそれが作動可能に結合する特定の遺伝子の発現を導入及び誘導するために使用されるＤＮＡ分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、並びにそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。本発明の発現ベクターは、発現カセットを含む。発現ベクターは、大量の安定なｍＲＮＡの転写を可能にする。発現ベクターが標的細胞内部に入ると、遺伝子によってコードされるリボ核酸分子又はタンパク質が、細胞の転写及び／又は翻訳機構により産生される。一実施態様では、本発明の発現ベクターは、本発明の二重特異性抗原結合分子をコードするポリヌクレオチド配列又はその断片を含む発現カセットを含む。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体
ＣＤ２０分子（ヒトＢリンパ球限定分化抗原又はＢｐ３５とも呼ばれる）は、悪性及び非悪性プレＢ及び成熟Ｂリンパ球の表面に発現される疎水性膜貫通タンパク質であり、広く記載されている（Valentine, M.A., et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287；及びEinfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717；Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212； Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980； Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568）。
ＣＤ２０は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の９０％以上で高度に発現しているが（Anderson, K.C., et al., Blood 63 (1984) 1424-1433）、しかし、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常な形質細胞、又は他の正常な組織には見られない（Tedder, T.F., et al., J, Immunol. 135 (1985) 973- 979）。
ＣＤ２０結合の様式及び生物活性が著しく異なる２つの異なる型の抗ＣＤ２０抗体が存在する（Cragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743；及びCragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052）。Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は主に補体を利用して標的細胞を死滅させるが、ＩＩ型抗体は主に細胞死の直接誘導を介して機能する。
Ｉ型及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体とそれらの特性が、例えば、Klein et al., mAbs 5 (2013), 22-33に総説されている。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＣＤ２０を脂質ラフトに局在化せず、低いＣＤＣ活性を示し、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体と比較して、Ｂ細胞への結合能力は約半分しか示さず、同型凝集及び直接細胞死を誘導する。それとは対照的に、Ｉ型抗体はＣＤ２０を脂質ラフトに局在化させ、高いＣＤＣ活性、Ｂ細胞への完全な結合能力を示し、同型凝集及び直接細胞死の弱い誘導のみを示す。
オビヌツズマブ及びトシツムマブ（ＣＡＳ番号１９２３９１－４８）は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例であり、一方リツキシマブ、オファツムマブ、ベルツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、ＰＲＯ１３１９２１、及びウブリツキシマブは、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例である。
本発明によれば、抗ＣＤ２０抗体はＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である。本発明による一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、対象におけるＢ細胞の数を減少させることができる。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体である。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は完全長抗体である。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、Ｆｃ領域、特にＩｇＧ Ｆｃ領域、又はより具体的にはＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体である。特に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、マウスＢ－Ｌｙ１抗体の結合特異性を有するヒト化ＩｇＧクラスＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である（Poppema and Visser, Biotest Bulletin 3, 131-139 (1987）；配列番号２及び３）。
一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。特に、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の重鎖可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）ＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３は、ＶＨ１＿１０ヒト生殖系列配列によってコードされるヒトＦＲ配列であり、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の重鎖可変領域ＦＲ４は、ＪＨ４ヒト生殖系列配列によってコードされるヒトＦＲ配列であり、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の軽鎖可変領域ＦＲ、ＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３は、ＶＫ＿２＿４０ヒト生殖系列配列によってコードされるヒトＦＲ配列であり、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の軽鎖可変領域ＦＲ４は、ＪＫ４ヒト生殖系列配列によってコードされるヒトＦＲ配列である。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む。
特定の実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブ（推奨ＩＮＮ、WHO Drug Information, Vol. 26, No. 4, 2012, p. 453）である。本明細書で使用される場合、オビヌツズマブは、ＧＡ１０１の同義語である。商品名は、ＧＡＺＹＶＡ（登録商標）又はＧＡＺＹＶＡＲＯ（登録商標）である。これは以前のすべてのバージョン（例えば、Vol. 25, No. 1, 2011, p.75-76）を置き換え、以前はアフツズマブ（推奨ＩＮＮ、WHO Drug Information, Vol. 23, No. 2, 2009, p. 176; Vol. 22, No. 2, 2008, p. 124）として知られている。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体はトシツモマブである。
本発明において有用なＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、対応する非操作抗体と比較して、エフェクター機能が増加するように操作され得る。一実施態様では、エフェクター機能が増加するように操作された抗体は、対応する非操作抗体と比較して、少なくとも２倍、少なくとも１０倍、又は少なくとも１００倍増加したエフェクター機能を有する。エフェクター機能の増加は、限定されないが、Ｆｃ受容体結合の増加、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の増加、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の増加、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）の増加、サイトカイン分泌の増加、抗原提示細胞による免疫複合体媒介性抗原取り込みの増加、ＮＫ細胞への結合の増加、マクロファージへの結合の増加、単球への結合の増加、多形核細胞への結合の増加、アポトーシスを誘導する直接シグナル伝達の増加、標的結合抗体の架橋の増加、樹状細胞成熟の増加、又はＴ細胞プライミングの増加のうちの１つ又は複数を挙げることができる。
一実施態様では、エフェクター機能の増加は、Ｆｃ受容体結合の増加、ＣＤＣの増加、ＡＤＣＣの増加、ＡＤＣＰの増加、及びサイトカイン分泌の増加から選択される１つ又は複数である。一実施態様では、エフェクター機能の増加は、活性化Ｆｃ受容体への結合の増加である。そのような一実施態様では、活性化Ｆｃ受容体への結合親和性は、対応する非操作抗体の結合親和性と比較して、少なくとも２倍、特に少なくとも１０倍増加する。特定の実施態様では、活性化Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩ、及びＦｃγＲＩＩａからなる群から選択される。一実施態様では、活性化Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲＩＩＩａ、特にヒトＦｃγＲＩＩＩａである。別の実施態様では、エフェクター機能の増加はＡＤＣＣの増加である。そのような一実施態様では、ＡＤＣＣは、対応する非操作抗体によって媒介されるＡＤＣＣと比較して、少なくとも１０倍、特に少なくとも１００倍増加する。さらに別の実施態様では、エフェクター機能の増加は、活性化Ｆｃ受容体への結合の増加及びＡＤＣＣの増加である。
エフェクター機能の増加は、当該技術分野で知られた方法により測定され得る。ＡＤＣＣを測定するための適切なアッセイは本明細書に記載される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの他の例が、米国特許第５５００３６２号；Hellstrom et al. Proc Natl Acad Sci USA 83, 7059-7063 (1986) 及びHellstrom et al., Proc Natl Acad Sci USA 82, 1499-1502 (1985)；米国特許第５８２１３３７号； Bruggemann et al., J Exp Med 166, 1351-1361 (1987)に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えばフローサイトメトリー用のＡＣＴＩＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照）。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、又はさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al., PNAS USA 95:652-656 (1998)に開示されるように、例えば動物モデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏで評価することができる。Ｆｃ受容体への結合は、例えばＥＬＩＳＡによって、又はＢＩＡｃｏｒｅ装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）などの標準的な機器を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって、及び組換え発現によって得ることができるＦｃ受容体を使用して、容易に決定することができる。特定の実施態様によれば、活性化Ｆｃ受容体への結合親和性は、２５℃でＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｔ１００装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用した表面プラズモン共鳴によって測定される。あるいは、ＦｃγＩＩＩａ受容体を発現するＮＫ細胞などの特定のＦｃ受容体を発現することが知られている細胞株を使用して、Ｆｃ受容体に対する抗体の結合親和性を評価してもよい。抗体がＣ１ｑに結合できるかどうか、したがってＣＤＣ活性があるかどうかを判断するために、Ｃ１ｑ結合アッセイも実施することができる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, et al., Blood 101:1045-1052 (2003)；及びCragg, and Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照）。
エフェクター機能の増加は、例えば、抗体のＦｃ領域の糖鎖操作又は抗体のＦｃ領域におけるアミノ酸変異の導入に起因し得る。一実施態様では、抗ＣＤ２０抗体は、Ｆｃ領域に１つ又は複数のアミノ酸変異を導入することにより操作される。特定の実施態様では、アミノ酸変異はアミノ酸置換である。さらにより具体的な実施態様では、アミノ酸置換は、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／又は３３４にある（残基はＥＵ番号付け）。さらに適切なアミノ酸変異は、例えば、Shields et al., J Biol Chem 9(2), 6591-6604 (2001)；米国特許第６７３７０５６号；国際公開第２００４／０６３３５１号及び国際公開第２００４／０９９２４９号に記載されている。変異体Ｆｃ領域は、当該技術分野で良く知られた遺伝学的方法又は化学的方法を使用して、アミノ酸の欠失、置換、挿入又は修飾により調製することができる。遺伝学的方法は、コード化ＤＮＡ配列の部位特異的突然変異、ＰＣＲ、遺伝子合成などを含み得る。正確なヌクレオチドの変化は、例えば配列決定により検証することができる。
別の実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、Ｆｃ領域におけるグリコシル化の修飾により操作される。特定の実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、非操作抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の増加した割合を有するように操作される。抗体のＦｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の割合の増加は、エフェクター機能が増加した抗体、特にＡＤＣＣが増加した抗体をもたらす。
より具体的な実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００％、好ましくは少なくとも約４０％が非フコシル化されている。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の約４０％から約８０％が非フコシル化されている。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の約４０％から約６０％が非フコシル化されている。非フコシル化オリゴ糖は、ハイブリッド型又は複合型であり得る。
別の特定の実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、非操作抗体と比較して、Ｆｃ領域における二分されたオリゴ糖の割合が増加するように操作される。より具体的な実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００％、好ましくは少なくとも約４０％が二分されている。一実施態様では、抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の約４０％から約８０％が二分されている。一実施態様では、抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の約４０％から約６０％が二分されている。二分されたオリゴ糖は、ハイブリッド型又は複合型であり得る。
さらに別の特定の実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、非操作抗体と比較して、Ｆｃ領域において、二分された非フコシル化オリゴ糖の増加した割合を有するように操作される。より具体的な実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００％、好ましくは少なくとも約１５％、より好ましくは少なくとも約２５％が、二分され、非フコシル化されている。二分された非フコシル化オリゴ糖は、ハイブリッド型又は複合型であり得る。
抗体Ｆｃ領域におけるオリゴ糖構造は、当該技術分野で良く知られた方法、例えば、Umana et al., Nat Biotechnol 17, 176-180 (1999)又はFerrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)に記載されるように、ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ質量分析により分析することができる。非フコシル化オリゴ糖の割合は、Ａｓｎ２９７に結合したすべてのオリゴ糖（例えば、複合型、ハイブリッド及び高マンノース構造）に対する、フコース残基を欠くオリゴ糖の量であり、Ｎ－グリコシダーゼＦで処理した試料においてＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＭＳにより同定された。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域中のおよそ２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、しかし、Ａｓｎ２９７は、抗体のわずかな配列変異に起因して、２９７位のおよそ±３アミノ酸上流又は下流に、すなわち２９４位から３００位に位置する場合もある。二分された、又は二分された非フコシル化オリゴ糖の割合も同様に決定される。
一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、１つ又は複数のグリコシルトランスフェラーゼの活性が改変された宿主細胞において抗体を産生することにより、非操作抗体と比較して、Ｆｃ領域中に修飾されたグリコシル化を有するように操作される。グリコシルトランスフェラーゼには、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）、β（１，４）－ガラクトシルトランスフェラーゼ（ＧａｌＴ）、β（１，２）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩ（ＧｎＴＩ）、β（１，２）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩ（ＧｎＴＩＩ）及びα（１，６）－フコシルトランスフェラーゼが含まれる。特定の実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、増加したβ（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）活性を有する宿主細胞中で抗体を産生することにより、非操作抗体と比較して、Ｆｃ領域において非フコシル化オリゴ糖の割合が増加するように操作される。さらにより具体的な実施態様では、宿主細胞はさらにα－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）活性が増加している。本発明に有用な抗体を操作するために使用することができる糖鎖工学方法論は、Umana et al., Nat Biotechnol 17, 176-180 (1999); Ferrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)；国際公開第９９／５４３４２号（米国特許第６６０２６８４号；欧州特許第１０７１７００号）；国際公開第２００４／０６５５４０号（米国特許出願公開第２００４／０２４１８１７号；欧州特許第１５８７９２１号）、国際公開第０３／０１１８７８号（米国特許出願公開第２００３／０１７５８８４号）に詳細に記載されており、それぞれの内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。この方法論を使用して糖鎖操作された抗体は、本明細書においてＧｌｙｃｏＭａｂと呼ばれる。
一般的に、本明細書において議論される細胞株を含む任意の型の培養細胞株を使用して、改変されたグリコシル化パターンを有する抗ＴＮＣ Ａ２抗体の産生のための細胞株を生成することができる。特定の細胞株には、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＹＯ骨髄腫細胞、Ｐ３Ｘ６３マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞又はハイブリドーマ細胞、及び他の哺乳動物細胞が含まれる。特定の実施態様では、宿主細胞は、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）活性を有する１つ又は複数のポリペプチドの増加したレベルを発現するように操作されている。特定の実施態様では、宿主細胞は、α－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）活性を有する１つ又は複数のポリペプチドの増加したレベルを発現するようにさらに操作されている。特定の実施態様では、ＧｎＴＩＩＩ活性を有するポリペプチドは、ＧｎＴＩＩＩの触媒ドメインと異種ゴルジ常在性ポリペプチドのゴルジ局在化ドメインとを含む融合ポリペプチドである。特に、前記ゴルジ局在化ドメインは、マンノシダーゼＩＩのゴルジ局在化ドメインである。そのような融合ポリペプチドを生成し、それらを使用してエフェクター機能が増加した抗体を産生する方法は、Ferrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)及び国際公開第２００４／０６５５４０号に開示されており、その内容全体が、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
本発明に有用な抗体のコード配列及び／又はグリコシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドのコード配列を含み、生物学的に活性な遺伝子産物を発現する宿主細胞は、例えば、ＤＮＡ－ＤＮＡ又はＤＮＡ－ＲＮＡハイブリダイゼーション；「マーカー」遺伝子機能の有無；宿主細胞におけるそれぞれのｍＲＮＡ転写物の発現により測定されるような転写レベルの評価；又はイムノアッセイにより若しくはその生物活性により（当該技術分野で良く知られた方法により）測定されるような遺伝子産物の検出により、同定することができる。ＧｎＴＩＩＩ又はＭａｎＩＩ活性は、例えば、それぞれＧｎＴＩＩＩ又はＭａｎＩＩの生合成産物に結合するレクチンを使用することにより検出することができる。そのようなレクチンの例は、二分するＧｌｃＮＡｃを含むオリゴ糖に優先的に結合するＥ４－ＰＨＡレクチンである。ＧｎＴＩＩＩ又はＭａｎＩＩ活性を有するポリペプチドの生合成産物（すなわち、特定のオリゴ糖構造）は、前記ポリペプチドを発現する細胞によって産生される糖タンパク質から放出されるオリゴ糖の質量分析によっても検出することができる。あるいは、ＧｎＴＩＩＩ又はＭａｎＩＩ活性を有するポリペプチドにより操作された細胞により産生された抗体により媒介される、増加したエフェクター機能、例えば、増加したＦｃ受容体結合を測定する機能アッセイを使用してもよい。
別の実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、減少したα（１，６）－フコシルトランスフェラーゼ活性を有する宿主細胞中で抗体を産生することにより、非操作抗体と比較して、Ｆｃ領域において非フコシル化オリゴ糖の割合が増加するように操作される。減少したα（１，６）－フコシルトランスフェラーゼ活性を有する宿主細胞は、α（１，６）－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子が破壊又は不活性化され、例えばノックアウトされた細胞であり得る（Yamane-Ohnuki et al., Biotech Bioeng 87, 614 (2004)； Kanda et al., Biotechnol Bioeng, 94(4), 680-688 (2006); Niwa et al., J Immunol Methods 306, 151-160 (2006)を参照）。
脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の他の例には、タンパク質のフコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞が含まれる（Ripka et al., Arch Biochem Biophys 249, 533-545 (1986)；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；及び国際公開第２００４／０５６３１２号、特に実施例１１）。あるいは、本発明において有用な抗体は、欧州特許第１１７６１９５（Ａ１）号、国際公開第０３／０８４５７０号、国際公開第０３／０８５１１９号及び米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、２００４／０９３６２１号、２００４／１１０２８２号、２００４／１１０７０４号、２００４／１３２１４０号、米国特許第６９４６２９２号（Ｋｙｏｗａ）に開示される技術に従って、例えば、抗体産生に使用される宿主細胞内のＧＤＰ－フコース輸送体タンパク質の活性を低下又は消失させることにより、Ｆｃ領域においてフコース残基が減少するように糖鎖操作され得る。
本発明において有用な糖鎖操作抗体は、国際公開第０３／０５６９１４号（ＧｌｙｃｏＦｉ，Ｉｎｃ．）又は国際公開第２００４／０５７００２号及び国際公開第２００４／０２４９２７号（Ｇｒｅｅｎｏｖａｔｉｏｎ）に教示されるような修飾された糖タンパク質を産生する発現系においても産生され得る。
Ｔ細胞活性化治療剤
本発明は、さまざまな治療剤、特に対象におけるＴ細胞を活性化する、すなわち対象におけるＴ細胞活性化を誘導する能力を有する治療剤に関連して有用である。そのような治療剤には、例えば、Ｔ細胞抗原（特に活性化Ｔ細胞抗原）に対する抗体、又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくは組換えＴ細胞受容体（ＴＣＲ）により修飾されたＴ細胞が含まれる。本発明は、Ｂ細胞標的化Ｔ細胞活性化治療剤に関連して特に有用である。
一実施態様では、治療剤は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの治療レジメンにおいて対象に投与されると、対象においてサイトカイン放出を誘導する。
一実施態様では、治療剤は、生物学的薬剤である。一実施態様では、治療剤は、ポリペプチド、特に組換えポリペプチドを含む。一実施態様では、治療剤は、対象において自然には生じないポリペプチドを含む。一実施態様では、治療剤は全身投与される。一実施態様では、治療剤は、注入、特に静脈内注入によって投与される。
一実施態様では、治療剤は、抗原結合ポリペプチドを含む。一実施態様では、治療剤は、抗体、抗体断片、抗原受容体又はその抗原結合断片、及び受容体リガンド又はその受容体結合断片の群から選択されるポリペプチドを含む。一実施態様では、治療剤は抗体を含む。一実施態様では、抗体はモノクローナル抗体である。一実施態様では、抗体はポリクローナル抗体である。一実施態様では、抗体はヒト抗体である。一実施態様では、抗体はヒト化抗体である。一実施態様では、抗体はキメラ抗体である。一実施態様では、抗体は完全長抗体である。一実施態様では、抗体はＩｇＧクラスの抗体、特にＩｇＧ１サブクラスの抗体である。一実施態様では、抗体は組換え抗体である。
特定の実施態様では、治療剤は抗体断片を含む。抗体断片は、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、並びに下記の他の断片を含む。特定の抗体断片の総説については、Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)を参照。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)を参照；また、国際公開第９３／１６１８５号；及び米国特許第５５７１８９４号及び第５５８７４５８号も参照のこと。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ ｖｉｖｏでの半減期を増加させたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照。一実施態様では、抗体断片は、Ｆａｂ断片又はｓｃＦｖ断片である。
ダイアボディは、二価又は二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開第１９９３／０１１６１号； Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)；及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)を参照。トリアボディ及びテトラボディも、Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載される。
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべて若しくは一部、又は軽鎖可変ドメインのすべて若しくは一部を含む抗体断片である。特定の実施態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６２４８５１６（Ｂ１）号を参照）。
抗体断片は、本明細書に記載されるように、インタクトな抗体のタンパク質分解消化及び組換え宿主細胞（例えば、大腸菌又はファージ）による産生を含むがこれらに限定されないさまざまな技術によって作製することができる。
特定の実施態様では、治療剤はキメラ抗体を含む。特定のキメラ抗体が、例えば米国特許第４８１６５６７号及びMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサル等の非ヒト霊長類由来の可変領域）とヒト定常領域とを含む。さらなる例において、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のものから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
特定の実施態様では、治療剤はヒト化抗体を含む。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持したままヒト化されている。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ、（又はその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、１つ又は複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、場合によってヒト定常領域の少なくとも一部を含むであろう。いくつかの実施態様では、ヒト化抗体のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を回復又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
ヒト化抗体及びそれらの製造方法は、例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)にて総説されており、さらにRiechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)；Queen et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)、米国特許第５８２１３３７号、第７５２７７９１号、第６９８２３２１号、及び第７０８７４０９号、Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005)（特異性決定領域（ＳＤＲ）のグラフティングを記述）、Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)（「リサーフェシング」を記述）、Dall’Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005)（「ＦＲシャッフリング」を記述）、並びにOsbourn et al., Methods 36:61-68(2005)及びKlimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260(2000)（ＦＲシャッフリングに対する「誘導選択」手法を記述）に記載されている。
ヒト化に用いられ得るヒトフレームワーク領域には、限定されないが、「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えば、Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)を参照）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；及びPresta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照）；及びＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)及びRosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)を参照）が含まれる。
特定の実施態様では、治療剤はヒト抗体を含む。ヒト抗体は、当該技術分野で知られるさまざまな技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は、van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001)及びLonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)に一般的に記載されている。
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してインタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を生成するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって調製することができる。このような動物は、典型的には内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換するか、又は染色体外に存在するか若しくは動物の染色体にランダムに組み込まれているヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべて又は一部を含む。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、通常は不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)を参照。また、例えばＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ技術を記載している米国特許第６０７５１８１号及び第６１５０５８４号、ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載している米国特許第５７７０４２９号、Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７０４１８７０号、及びＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照。このような動物により生成されるインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、さらに改変され得る。
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984)；Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；及びBoerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)を参照）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されるヒト抗体も、Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)に記載されている。さらなる方法は、例えば米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）及びNi, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載している）に記載されているものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）もまた、Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005)及びVollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)に記載されている。
ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。次いで、そのような可変ドメイン配列を所望のヒト定常ドメインと組み合わせることができる。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。
治療剤に含まれる抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするためのさまざまな方法が当該技術分野で知られている。そのような方法は、例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) and further described, e.g., in the McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 及びLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)に総説される。
特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、ファージライブラリーにおいてランダムに再結合され、その後、Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片のいずれかとして抗体断片を提示する。免疫化された供給源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。あるいは、Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)に記載されるように、ナイーブレパートリーをクローン化して（例えば、ヒトから）、免疫化なしで広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対する抗体の単一供給源を提供することができる。最後に、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)によって記載されているように、幹細胞由来の再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して高度に可変なＣＤＲ３領域をコードし、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの再配列を達成することにより、ナイーブライブラリーを合成的に作成することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記述する特許公報は、例えば、米国特許第５７５０３７３号、及び米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号及び同第２００９／０００２３６０を含む。
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書においてヒト抗体又はヒト抗体断片とみなされる。特定の実施態様では、治療剤は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体を含む。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。特定の実施態様では、結合特異性は異なる抗原に対するものである。特定の実施態様では、結合特異性は、同じ抗原上の異なるエピトープに対するものである。二重特異性抗体はまた、抗原を発現する細胞に細胞傷害性剤を局在化させるために使用することもできる。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
多重特異性抗体を作製するための技術には、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組換え共発現（Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)、国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)を参照）及び「ノブ・イン・ホール」エンジニアリング（例えば米国特許第５７３１１６８号を参照）が含まれる。多重特異抗体はまた、抗体のＦｃヘテロ二量体分子を作成するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４（Ａ１）号）；２つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば米国特許第４６７６９８０号、及びBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)を参照）；二重特異性抗体を産生するためにロイシンジッパーを使用すること（例えば、Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)を参照）；二重特異性抗体断片を作製するために「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)を参照）；単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)を参照）；及び、例えば、Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによって作成することができる。
「オクトパス抗体（Ｏｃｔｏｐｕｓ抗体）」を含む３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作抗体も本明細書に含まれる（例えば、米国特許公開第２００６／００２５５７６号を参照）。
本明細書における抗体又は断片はまた、２つの異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」を含む（例えば、米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号を参照）。
「Ｃｒｏｓｓｍａｂ」抗体も本明細書に含まれる（例えば、国際公開第２００９０８０２５１号、国際公開第２００９０８０２５２号、国際公開第２００９０８０２５３号、国際公開第２００９０８０２５４号を参照）。
二重特異性抗体断片を作製するための別の技術は、「二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー」又はＢｉＴＥ（登録商標）手法である（例えば、国際公開第２００４／１０６３８１号、国際公開第２００５／０６１５４７号、国際公開第２００７／０４２２６１号、及び２００８／１１９５６７号を参照）。この手法は、単一のポリペプチド上に配置された２つの抗体可変ドメインを利用する。例えば、単一ポリペプチド鎖は、２つのドメイン間の分子内結合を可能にするために、各々が十分な長さのポリペプチドリンカーによって分離された可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを有する、２つの単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片を含む。この単一ポリペプチドは、２つのｓｃＦｖ断片の間にポリペプチドスペーサー配列をさらに含む。各ｓｃＦｖは、異なるエピトープを認識し、これらのエピトープは、それぞれのｓｃＦｖがその同族エピトープと結合されるときに、２つの異なる細胞型の細胞を近接させ又は繋がれるように、異なる細胞型に対して特異的であり得る。この手法の特定の一実施態様には、例えば、悪性細胞又は腫瘍細胞などの標的細胞によって発現される細胞表面抗原を認識する別のｓｃＦｖに連結されたＴ細胞上のＣＤ３ポリペプチドなどの、免疫細胞によって発現される細胞表面抗原を認識するｓｃＦｖが含まれる。
単一のポリペプチドであるため、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーは、当該技術分野で知られた任意の原核細胞又は真核生物細胞発現系、例えばＣＨＯ細胞系を使用して発現させることができる。しかしながら、単量体の二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーを、単量体の意図された活性以外の生物活性を有し得る、他の多量体種から分離するために、特定の精製技術（例えば、欧州特許第１６９１８３３号を参照）が必要な場合がある。１つの例示的な精製スキームにおいて、分泌されたポリペプチドを含む溶液は、最初に金属アフィニティークロマトグラフィーにかけられ、ポリペプチドはイミダゾール濃度の勾配で溶出される。この溶出液は陰イオン交換クロマトグラフィーを使用してさらに精製され、ポリペプチドは塩化ナトリウム濃度の勾配を使用して溶出される。最後に、この溶出液をサイズ排除クロマトグラフィーにかけ、多量体種からモノマーを分離する。
二価より多い抗体も考えられる。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Tuft et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)。
特定の実施態様では、治療剤に含まれる抗体は、当該技術分野で知られており、容易に入手可能な付加的な非タンパク質部分を含むようにさらに修飾されてもよい。抗体の誘導体化に適した部分は、限定されないが、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例は、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のために製造上の利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量であってよく、分枝状でも非分枝状でもよい。抗体に付着するポリマーの数は変化してもよく、１つを超えるポリマーが付着する場合、それらは同じ分子でも異なる分子でもよい。一般的に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は種類は、改善されるべき抗体の特定の特性又は機能、その抗体誘導体が限定条件の下での治療に使用されるかどうかを含む（但し、これらに限定されない）考慮事項に基づいて決定することができる。
治療剤はまた、１つ又は複数の細胞傷害性剤、例えば、化学療法剤若しくは薬物、増殖阻害剤、毒素（例えばタンパク質毒素、細菌、真菌、植物若しくは動物起源の酵素的に活性な毒素又はその断片）又は放射性同位体にコンジュゲートした抗体を含み得る。
一実施態様では、治療剤は、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であり、その中で抗体は、メイタンシノイド（米国特許第５２０８０２０号、第５４１６０６４号、及び欧州特許（ＥＰ）第０４２５２３５号を参照）；アウリスタチン、例えばモノメチルアウリスタチン薬物部分であるＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５６３５４８３号、第５７８０５８８号、及び第７４９８２９８号を参照）；ドラスタチン；カリケアマイシン又はその誘導体（米国特許第５７１２３７４号、第５７１４５８６号、第５７３９１１６号、第５７６７２８５号、第５７７０７０１号、第５７７０７１０号、第５７７３００１号、及び第５８７７２９６号；Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993)；及びLode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)を参照）；アントラサイクリン、例えばダウノマイシン又はドキソルビシン（Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006);Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006);Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005);Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000);Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002);King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002)；及び米国特許第６６３０５７９号を参照）；メトトレキサート；ビンデシン；タキサン、例えばドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル（ｌａｒｏｔａｘｅｌ）、テセタキセル（ｔｅｓｅｔａｘｅｌ）、及びオルタタキセル（ｏｒｔａｔａｘｅｌ）；トリコテセン；及びＣＣ１０６５を含む（ただし、これらに限定されない）１つ又は複数の薬物にコンジュゲートしている。
別の実施態様では、治療剤は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、（緑膿菌からの）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ）、ニガウリ阻害剤、クルシン、クロチン、サポンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、及びトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）を含む（ただし、これらに限定されない）酵素的に活性な毒素又はその断片にコンジュゲートしている、本明細書に記載の抗体を含む。
別の実施態様では、治療剤は、放射性原子にコンジュゲートして放射性コンジュゲートを形成する、本明細書に記載の抗体を含む。種々の放射性同位体が、放射性コンジュゲートの製造のために入手可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体を含む。放射性コンジュゲートは、検出用に使用される場合、シンチグラフ検査のための放射性原子、例えばＴｃ９９ｍ若しくはＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ＭＲＩとしても知られる）のためのスピン標識、例えば、再びヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含み得る。
抗体と細胞傷害性剤とのコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばＮ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えばアジプイミド酸ジメチルＨＣｌ）、活性エステル（例えばスベリン酸ジサクシンイミジル）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物（例えばビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス－ジアゾニウム誘導体（例えばビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えばトルエン ２，６－ジイソシアネート）、及びビス－活性フッ素化合物（例えば１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン）を使用して作製することができる。例えば、リシンイムノトキシンは、Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)に記載のようにして調製することができる。炭素－１４－標識１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲーションのための例示的なキレート剤である。国際公開第９４／１１０２６号を参照。リンカーは、細胞内で細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー（Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992)；米国特許第５２０８０２０号）が使用され得る。
一実施態様では、治療剤は、がんの治療のために適応した抗体を含む。一実施態様では、治療剤は、がんの治療のために適応される。一実施態様では、がんは、Ｂ細胞増殖性疾患である。一実施態様では、がんは、ＣＤ２０陽性Ｂ細胞増殖性疾患である。一実施態様では、がんは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、及びホジキンリンパ腫（ＨＬ）からなる群から選択される。一実施態様では、治療剤は、免疫療法剤である。
いくつかの実施態様では、治療剤は、活性化Ｔ細胞抗原に特異的に結合する抗体を含む。一実施態様では、治療剤は、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、及びＣＤ１２７の群から選択される抗原に特異的に結合する抗体を含み得る。
一実施態様では、抗体は、ＣＤ３、特にＣＤ３εに特異的に結合する抗体を含む。
一実施態様では、治療剤は、抗体Ｈ２Ｃであるか又はそれと結合に関して競合することができる抗体（ＰＣＴ公開番号国際公開第２００８／１１９５６７号）、抗体Ｖ９（Rodrigues et al., Int J Cancer Suppl 7, 45-50 (1992)及び米国特許第６０５４２９７号）、抗体ＦＮ１８（Nooij et al., Eur J Immunol 19, 981-984 (1986)）、抗体ＳＰ３４（Pessano et al., EMBO J 4, 337-340 (1985)）、抗体ＯＫＴ３（Kung et al., Science 206, 347-349 (1979)）、抗体ＷＴ３１（Spits et al., J Immunol 135, 1922 (1985)）、抗体ＵＣＨＴ１（Burns et al., J Immunol 129, 1451-1457 (1982)）、抗体７Ｄ６（Coulie et al., Eur J Immunol 21, 1703-1709 (1991)）又は抗体Ｌｅｕ－４を含む。いくつかの実施態様では、治療剤はまた、国際公開第２００５／０４０２２０号、国際公開第２００５／１１８６３５号、国際公開第２００７／０４２２６１号、国際公開第２００８／１１９５６７号、国際公開第２００８／１１９５６５号、国際公開第２０１２／１６２０６７号、国際公開第２０１３／１５８８５６号、国際公開第２０１３／１８８６９３号、国際公開第２０１３／１８６６１３号、国際公開第２０１４／１１０６０１号、国際公開第２０１４／１４５８０６号、国際公開第２０１４／１９１１１３号、国際公開第２０１４／０４７２３１号、国際公開第２０１５／０９５３９２号、国際公開第２０１５／１８１０９８号、国際公開第２０１５／００１０８５号、国際公開第２０１５／１０４３４６号、国際公開第２０１５／１７２８００号、国際公開第２０１６／０２０４４４号、又は国際公開第２０１６／０１４９７４号に記載されるようにＣＤ３に特異的に結合する抗体を含み得る。
一実施態様では、治療剤は、Ｂ細胞抗原、特に悪性Ｂ細胞抗原に特異的に結合する抗体を含み得る。一実施態様では、治療剤は、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５からなる群から選択される抗原、特にＣＤ２０又はＣＤ１９に特異的に結合する抗体を含み得る。
いくつかの実施態様では、治療剤は、リツキシマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、オカラツズマブ、ベルツズマブ、及びウブリツキシマブから選択される抗体を含み得る。
いくつかの実施態様では、治療剤は、多重特異性抗体、特に二重特異性抗体を含み得る。いくつかの実施態様では、治療剤は、Ｔ細胞及び標的細胞、例えば腫瘍細胞に結合することができる二重特異性抗体を含み得る。いくつかの実施態様では、標的細胞はＢ細胞、特に悪性Ｂ細胞である。いくつかの実施態様では、治療剤は、（ｉ）活性化Ｔ細胞抗原及び（ｉｉ）Ｂ細胞抗原に特異的に結合する二重特異性抗体を含み得る。いくつかの実施態様では、治療剤は、Ｔ細胞上のＣＤ３及び標的細胞抗原に特異的に結合する二重特異性抗体を含み得る。いくつかの実施態様では、標的細胞抗原は、Ｂ細胞抗原、特に悪性Ｂ細胞抗原である。いくつかの実施態様では、治療剤は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ（登録商標））を含み得る。
いくつかの実施態様では、治療剤は、ＣＤ３及びＣＤ２０に対する二重特異性抗体を含み得る。一実施態様では、二重特異性抗体はＸｍＡｂ（登録商標）１３６７６である。一実施態様では、二重特異性抗体はＲＥＧＮ１９７９である。一実施態様では、二重特異性抗体はＦＢＴＡ０５（リンフォムン（Ｌｙｍｐｈｏｍｕｎ））である。
いくつかの実施態様では、治療剤は、ＣＤ３及びＣＤ１９に対する二重特異性抗体を含み得る。一実施態様では、二重特異性抗体はブリナツモマブ（ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標））である。一実施態様では、二重特異性抗体はＡＦＭ１１である。一実施態様では、二重特異性抗体はＭＧＤ０１１（ＪＮＪ－６４０５２７８１）である。
いくつかの実施態様では、治療剤は、ＣＤ３及びＣＤ３８に対する二重特異性抗体を含み得る。一実施態様では、二重特異性抗体は、ＸｍＡｂ（登録商標）１３５５１、ＸｍＡｂ（登録商標）１５４２６、又はＸｍＡｂ（登録商標）１４７０２である。
いくつかの実施態様では、治療剤は、ＣＤ３及びＢＣＭＡに対する二重特異性抗体を含み得る。一実施態様では、二重特異性抗体はＢＩ８３６９０９である。
いくつかの実施態様では、治療剤は、ＣＤ３及びＣＤ３３に対する二重特異性抗体を含み得る。一実施態様では、二重特異性抗体はＡＭＧ３３０である。
いくつかの実施態様では、治療剤は、ＣＤ３及びＣＤ１２３に対する二重特異性抗体を含み得る。一実施態様では、二重特異性抗体はＭＧＤ００６である。一実施態様では、二重特異性抗体はＸｍＡｂ（登録商標）１４０４５である。一実施態様では、二重特異性抗体はＪＮＪ－６３７０９１７８である。
いくつかの実施態様では、治療剤は、組換え受容体又はその断片を含み得る。いくつかの実施態様では、受容体はＴ受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの実施態様では、治療剤はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み得る。
いくつかの実施態様では、治療剤は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞又はＣＴＬ）を含み得る。いくつかの実施態様では、治療剤は、組換えＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するＴ細胞を含み得る。
一実施態様では、治療剤は、Ｂ細胞抗原、特に悪性Ｂ細胞抗原に特異的に結合するＣＡＲを含み得る。一実施態様では、治療剤は、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５からなる群から選択される抗原、特にＣＤ２０又はＣＤ１９に特異的に結合するＣＡＲを含み得る。
いくつかの実施態様では、治療剤は、ＣＤ１９に向けられたＣＡＲ、又はＣＤ１９に向けられたＣＡＲを発現するＴ細胞を含み得る。いくつかの実施態様では、治療剤は、ＫＴＥ－Ｃ１９、ＣＴＬ０１９、ＪＣＡＲ－０１４、ＪＣＡＲ－０１５、ＪＣＡＲ－０１７、ＢＰＸ－４０１、ＵＣＡＲＴ１９を含み得る。
いくつかの実施態様では、治療剤は、ＣＤ２２に向けられたＣＡＲ、又はＣＤ２２に向けられたＣＡＲを発現するＴ細胞を含み得る。いくつかの実施態様では、治療剤は、ＪＣＡＲ－０１８又はＵＣＡＲＴ２２を含み得る。
いくつかの実施態様では、治療剤は、Ｔ細胞活性化共刺激分子に対するアゴニストを含み得る。いくつかの実施態様では、Ｔ細胞活性化共刺激分子は、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、又はＣＤ１２７を含み得る。いくつかの実施態様では、Ｔ細胞活性化共刺激分子に対するアゴニストは、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、又はＣＤ１２７に結合するアゴニスト抗体である。いくつかの実施態様では、治療剤は、ＧＩＴＲを標的とする抗体を含み得る。いくつかの実施態様では、ＧＩＴＲを標的とする抗体はＴＲＸ５１８である。
いくつかの実施態様では、治療剤は、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９、４－１ＢＢ、又はＩＬＡとしても知られる）に対するアゴニスト、例えば活性化抗体を含み得る。いくつかの実施態様では、治療剤は、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３としても知られる）を含み得る。いくつかの実施態様では、治療剤は、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９、４－１ＢＢ、又はＩＬＡとしても知られる）のリガンド、例えば４－１ＢＢＬを含み得る。いくつかの実施態様では、治療剤は、ＣＤ４０に対するアゴニスト、例えば活性化抗体を含み得る。いくつかの実施態様では、治療剤はＣＰ－８７０８９３を含み得る。いくつかの実施態様では、治療剤は、ＯＸ４０（ＣＤ１３４としても知られる）に対するアゴニスト、例えば活性化抗体を含み得る。いくつかの実施態様では、治療剤は、抗ＯＸ４０抗体（例えばＡｇｏｎＯＸ）を含み得る。いくつかの実施態様では、治療剤は、ＯＸ４０のリガンド、例えばＯＸ４０Ｌを含み得る。いくつかの実施態様では、治療剤は、ＣＤ２７に対するアゴニスト、例えば活性化抗体を含み得る。いくつかの実施態様では、治療剤はＣＤＸ－１１２７を含み得る。
いくつかの実施態様では、治療剤は、本明細書で命名された薬剤、例えば抗体のジェネリック、バイオシミラー、又は比較不可能な生物学的バージョンを含み得る。
一実施態様では、治療剤はオビヌツズマブを含まない。
いくつかの実施態様では、治療剤は、ＣＤ３、特にＣＤ３イプシロンに特異的に結合する抗体を含む。一実施態様では、ＣＤ３に特異的に結合する抗体は、配列番号１２の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号１４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号１５の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施態様では、ＣＤ３に特異的に結合する抗体は、配列番号１８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域配列及び配列番号１９の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域配列を含む。さらなる実施態様では、ＣＤ３に特異的に結合する抗体は、配列番号１８の重鎖可変領域配列及び配列番号１９の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施態様では、ＣＤ３に特異的に結合する抗体は完全長の抗体である。一実施態様では、ＣＤ３に特異的に結合する抗体は、ヒトＩｇＧクラスの抗体、特にヒトＩｇＧ１クラスの抗体である。一実施態様では、ＣＤ３に特異的に結合する抗体は、抗体断片、特にＦａｂ分子又はｓｃＦｖ分子、より具体的にはＦａｂ分子である。特定の実施態様では、ＣＤ３に特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメイン又は定常ドメインが交換される（すなわち、互いに置換される）クロスオーバーＦａｂ分子である。一実施態様では、ＣＤ３に特異的に結合する抗体はヒト化抗体である。
一実施態様では、治療剤は、多重特異性抗体、特に二重特異性抗体を含む。一実施態様では、多重特異性抗体は、（ｉ）活性化Ｔ細胞抗原及び（ｉｉ）Ｂ細胞抗原に特異的に結合する。特定の二重特異性抗体は、ＰＣＴ公開番号国際公開第２０１６／０２０３０９号及び欧州特許出願番号ＥＰ１５１８８０９３及びＥＰ１６１６９１６０（それぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。
一実施態様では、二重特異性抗体は、ＣＤ３及びＣＤ２０に特異的に結合する。一実施態様では、二重特異性抗体は、ＣＤ２０に特異的に結合する抗原結合部分、及びＣＤ３に特異的に結合する抗原結合部分を含む。一実施態様では、二重特異性抗体は、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部分、及びＣＤ２０に特異的に結合する第２及び第３の抗原結合部分を含む。一実施態様では、第１の抗原結合部分はクロスオーバーＦａｂ分子であり、第２及び第１の抗原結合部分はそれぞれ従来のＦａｂ分子である。一実施態様では、二重特異性抗体はさらにＦｃドメインを含む。二重特異性抗体は、本明細書に記載されるように、Ｆｃ領域及び／又は抗原結合部分において修飾を含んでもよい。
一実施態様では、治療剤は、
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合し、かつ、配列番号１２の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号１４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号１５の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合部分；並びに
（ｉｉ）ＣＤ２０に特異的に結合し、かつ、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合部分
を含む二重特異性抗体を含む。
一実施態様では、治療剤は、
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合し、かつ、配列番号１８の重鎖可変領域；及び配列番号１９の軽鎖可変領域を含む抗原結合部分；及び
（ｉｉ）ＣＤ２０に特異的に結合し、かつ、配列番号１０の重鎖可変領域；及び配列番号１１の軽鎖可変領域を含む抗原結合部分
を含む二重特異性抗体を含む。
特定の実施態様では、治療剤は、
ａ）第１の抗原に特異的に結合する第１のＦａｂ分子；
ｂ）第２の抗原に特異的に結合する第２のＦａｂ分子であって、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬ及びＶＨが互いに置換されている第２のＦａｂ分子；
ｃ）第１の抗原に特異的に結合する第３のＦａｂ分子；及び
ｄ）安定に結合することができる第１及び第２のサブユニットからなるＦｃドメイン
を含む二重特異性抗体であって、
ここで、
（ｉ）第１の抗原がＣＤ２０であり、かつ第２の抗原がＣＤ３、特にＣＤ３イプシロンであり；
（ｉｉ）ａ）による第１のＦａｂ分子及びｃ）による第３のＦａｂ分子が、それぞれ、配列番号４の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５の重鎖ＣＤＲ２、配列番号６の重鎖ＣＤＲ３、配列番号７の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８の軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号９の軽鎖ＣＤＲ３を含み；かつｂ）による第２のＦａｂ分子が、配列番号１２の重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３の重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４の重鎖ＣＤＲ３、配列番号１５の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１６の軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号１７の軽鎖ＣＤＲ３を含み；
（ｉｉｉ）ａ）による第１のＦａｂ分子及びｃ）による第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、リジン（Ｋ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位のアミノ酸が、リジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）、特にアルギニン（Ｒ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、かつａ）による第１のＦａｂ分子及びｃ）による第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）；
（ｉｖ）ａ）による第１のＦａｂ分子が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてｂ）による第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、ｂ）による第２のＦａｂ分子及びｃ）による第３のＦａｂ分子が、それぞれ、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてｄ）によるＦｃドメインのサブユニットの１つのＮ末端に融合している、
二重特異性抗体を含む。
一実施態様では、ａ）による第１のＦａｂ分子及びｃ）による第３のＦａｂ分子は、それぞれ、配列番号１０の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域、及び配列番号１１の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域を含む。
一実施態様では、ａ）による第１のＦａｂ分子及びｃ）による第３のＦａｂ分子は、それぞれ、配列番号１０の重鎖可変領域配列、及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施態様では、ｂ）による第２のＦａｂ分子は、配列番号１８の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域、及び配列番号１９の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域を含む。
さらなる実施態様では、ｂ）による第２のＦａｂ分子は、配列番号１８の重鎖可変領域配列及び配列番号１９の軽鎖可変領域配列を含む。
特定の実施態様では、二重特異性抗体は、配列番号２０の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるポリペプチド、配列番号２１の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるポリペプチド、配列番号２２の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるポリペプチド、及び配列番号２３の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるポリペプチドを含む。さらに特定の実施態様では、二重特異性抗体は、配列番号２０のポリペプチド配列、配列番号２１のポリペプチド配列、配列番号２２のポリペプチド配列、及び配列番号２３のポリペプチド配列を含む。（ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ）
一実施態様では、二重特異性抗体は、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合部分、及びＣＤ３に特異的に結合する抗原結合部分を含む。一実施態様では、二重特異性抗体は、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部分、及びＣＤ１９に特異的に結合する第２及び第３の抗原結合部分を含む。一実施態様では、第１の抗原結合部分はクロスオーバーＦａｂ分子であり、第２及び第１の抗原結合部分はそれぞれ従来のＦａｂ分子である。一実施態様では、二重特異性抗体はさらにＦｃドメインを含む。二重特異性抗体は、本明細書に記載されるように、Ｆｃ領域及び／又は抗原結合部分において修飾を含んでもよい。
一実施態様では、治療剤は、
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合し、かつ、配列番号１２の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号１４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号１５の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合部分；並びに
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合し、かつ、配列番号２４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２５のＨＣＤＲ２、及び配列番号２６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号２７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号２８のＬＣＤＲ２、及び配列番号２９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合部分
を含む二重特異性抗体を含む。
一実施態様では、治療剤は、
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合し、かつ、配列番号１８の重鎖可変領域；及び配列番号１９の軽鎖可変領域を含む抗原結合部分；及び
（ｉｉ）ＣＤ１９に特異的に結合し、かつ、配列番号３０の重鎖可変領域；及び配列番号３１の軽鎖可変領域を含む抗原結合部分
を含む二重特異性抗体を含む。
特定の実施態様では、治療剤は、
ａ）第１の抗原に特異的に結合する第１のＦａｂ分子；
ｂ）第２の抗原に特異的に結合する第２のＦａｂ分子であって、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬ及びＶＨが互いに置換されている第２のＦａｂ分子；
ｃ）第１の抗原に特異的に結合する第３のＦａｂ分子；及び
ｄ）安定に結合することができる第１及び第２のサブユニットからなるＦｃドメイン
を含む二重特異性抗体であって、
ここで、
（ｉ）第１の抗原がＣＤ１９であり、かつ第２の抗原がＣＤ３、特にＣＤ３イプシロンであり；
（ｉｉ）ａ）による第１のＦａｂ分子及びｃ）による第３のＦａｂ分子が、それぞれ、配列番号２４の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２５の重鎖ＣＤＲ２、配列番号２６の重鎖ＣＤＲ３、配列番号２７の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２８の軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号２９の軽鎖ＣＤＲ３を含み；かつｂ）による第２のＦａｂ分子が、配列番号１２の重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３の重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４の重鎖ＣＤＲ３、配列番号１５の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１６の軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号１７の軽鎖ＣＤＲ３を含み；
（ｉｉｉ）ａ）による第１のＦａｂ分子及びｃ）による第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、リジン（Ｋ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位のアミノ酸が、リジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）、特にアルギニン（Ｒ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、かつａ）による第１のＦａｂ分子及びｃ）による第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）；
（ｉｖ）ａ）による第１のＦａｂ分子が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてｂ）による第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、ｂ）による第２のＦａｂ分子及びｃ）による第３のＦａｂ分子が、それぞれ、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてｄ）によるＦｃドメインのサブユニットの１つのＮ末端に融合している、
二重特異性抗体を含む。
一実施態様では、ａ）による第１のＦａｂ分子及びｃ）による第３のＦａｂ分子は、それぞれ、配列番号３０の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域、及び配列番号３１の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域を含む。
一実施態様では、ａ）による第１のＦａｂ分子及びｃ）による第３のＦａｂ分子は、それぞれ、配列番号３０の重鎖可変領域配列、及び配列番号３１の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施態様では、ｂ）による第２のＦａｂ分子は、配列番号１８の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域、及び配列番号１９の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域を含む。
さらなる実施態様では、ｂ）による第２のＦａｂ分子は、配列番号１８の重鎖可変領域配列及び配列番号１９の軽鎖可変領域配列を含む。
特定の実施態様では、二重特異性抗体は、配列番号２３の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるポリペプチド、配列番号３２の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるポリペプチド、配列番号３３の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるポリペプチド、及び配列番号３４の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるポリペプチドを含む。さらに特定の実施態様では、二重特異性抗体は、配列番号２３のポリペプチド配列、配列番号３２のポリペプチド配列、配列番号３３のポリペプチド配列、及び配列番号３４のポリペプチド配列を含む。
抗体フォーマット
治療剤に含まれる抗体、特に多重特異性抗体の成分は、さまざまな立体配置で互いに融合することができる。例示的な立体配置を図１に示す。
特定の実施態様では、抗体に含まれる抗原結合部分はＦａｂ分子である。そのような実施態様では、第１、第２、第３（など）の抗原結合部分は、本明細書において、それぞれ第１、第２、第３（など）のＦａｂ分子と呼ばれことがある。さらに、特定の実施態様では、抗体は、安定に会合することができる第１及び第２のサブユニットからなるＦｃドメインを含む。
いくつかの実施態様では、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１又は第２のサブユニットのＮ末端に融合している。
そのような一実施態様では、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。特定のそのような実施態様では、抗体は、本質的に、第１及び第２のＦａｂ分子、第１及び第２のサブユニットからなるＦｃドメイン、及び任意で１つ又は複数のペプチドリンカーからなり、ここで、第１のＦａｂ分子はＦａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１又は第２のサブユニットのＮ末端に融合している。そのような立体配置は、図１Ｇ及び１Ｋに模式的に示されている。任意で、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖と第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖は、さらに互いに融合していてもよい。
別のそのような実施態様では、第１のＦａｂ分子はＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１又は第２のサブユニットのＮ末端に融合している。特定のそのような実施態様では、抗体は、本質的に、第１及び第２のＦａｂ分子、第１及び第２のサブユニットからなるＦｃドメイン、及び任意で１つ又は複数のペプチドリンカーからなり、ここで、第１及び第２のＦａｂ分子はそれぞれ、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインのサブユニットの１つのＮ末端に融合している。そのような立体配置は、図１Ａ及び１Ｄに模式的に示されている。第１及び第２のＦａｂ分子は、直接又はペプチドリンカーを介してＦｃドメインに融合されてもよい。特定の実施態様では、第１及び第２のＦａｂ分子はそれぞれ、免疫グロブリンのヒンジ領域を介してＦｃドメインに融合している。特定の実施態様では、免疫グロブリンのヒンジ領域は、特にＦｃドメインがＩｇＧ１のＦｃドメインである場合、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域である。
他の実施態様では、第１のＦａｂ分子はＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１又は第２のサブユニットのＮ末端に融合している。
そのような一実施態様では、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。特定のそのような実施態様では、抗体は、本質的に、第１及び第２のＦａｂ分子、第１及び第２のサブユニットからなるＦｃドメイン、及び任意で１つ又は複数のペプチドリンカーからなり、ここで、第２のＦａｂ分子はＦａｂ重鎖のＣ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１又は第２のサブユニットのＮ末端に融合している。そのような立体配置は、図１Ｈ及び１Ｌに模式的に示されている。任意で、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖と第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖は、さらに互いに融合していてもよい。
Ｆａｂ分子は、Ｆｃドメインに、又は互いに、直接又は１つ以上のアミノ酸、典型的には約２－２０個のアミノ酸を含むペプチドリンカーを介して融合されてもよい。ペプチドリンカーは当該技術分野において知られており、本明細書に記載される。適切な非免疫原性ペプチドリンカーには、例えば、（Ｇ４Ｓ）ｎ、（ＳＧ４）ｎ、（Ｇ４Ｓ）ｎ又はＧ４（ＳＧ４）ｎペプチドリンカーが含まれる。「ｎ」は通常１から１０、典型的には２から４の整数である。一実施態様では、前記ペプチドリンカーは、少なくとも５のアミノ酸長を、一実施態様では５から１００、さらなる実施態様では１０から５０のアミノ酸長を有する。一実施態様では、前記ペプチドリンカーは、（ＧｘＳ）ｎ又は（ＧｘＳ）ｎＧｍ［式中、Ｇ＝グリシン、Ｓ＝セリン、（ｘ＝３、ｎ＝３、４、５又は６、ｍ＝０、１、２又は３）又は（ｘ＝４、ｎ＝２、３、４又は５、ｍ＝０、１、２又は３）］であり、一実施態様では、ｘ＝４、ｎ＝２又は３であり、さらなる実施態様ではｘ＝４、ｎ＝２である。一実施態様では、前記ペプチドリンカーは（Ｇ４Ｓ）２である。第１及び第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖を互いに融合するのに特に適したペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）２である。第１及び第２のＦａｂ断片のＦａｂ重鎖を連結するのに適した例示的なペプチドリンカーは、配列（Ｄ）－（Ｇ４Ｓ）２（配列番号９５及び９６）を含む。別の適切なそのようなリンカーは、配列（Ｇ４Ｓ）４を含む。加えて、リンカーは免疫グロブリンヒンジ領域（の一部）を含んでもよい。特に、Ｆａｂ分子がＦｃドメインサブユニットのＮ末端に融合している場合、付加的なペプチドリンカーの有無にかかわらず、免疫グロブリンヒンジ領域又はその一部を介して融合されてもよい。
標的細胞抗原に特異的に結合することができる単一の抗原結合部分（例えばＦａｂ分子）を有する抗体（例えば、図１Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌに示される）は、特に高親和性抗原結合部分の結合に続いて標的細胞抗原の内部移行が予想される場合に有用である。そのような場合、標的細胞抗原に特異的な複数の抗原結合部分の存在は、標的細胞抗原の内部移行を亢進し、それによりその利用可能性を低下させ得る。
しかしながら、他の多くの場合、標的細胞抗原に特異的な２つ以上の抗原結合部分（Ｆａｂ分子など）を含む抗体（図１Ｂ、１Ｃ、１Ｅ、１Ｆ、１Ｉ、１Ｊ、１Ｍ又は１Ｎに示されている例を参照）を有することは、例えば、標的部位への標的化を最適化するため、又は標的細胞抗原の架橋を可能にするために有利であろう。
したがって、特定の実施態様では、抗体は、第１の抗原に特異的に結合する第３のＦａｂ分子をさらに含む。第１の抗原は、好ましくは、標的細胞抗原である。一実施態様では、第３のＦａｂ分子は従来のＦａｂ分子である。一実施態様では、第３のＦａｂ分子は第１のＦａｂ分子と同一である（すなわち、第１及び第３のＦａｂ分子は、同じ重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を含み、ドメインの同じ配置（すなわち、従来型又はクロスオーバー）を有する）。特定の実施態様では、第２のＦａｂ分子は、活性化Ｔ細胞抗原、特にＣＤ３に特異的に結合し、第１及び第３のＦａｂ分子は標的細胞抗原に特異的に結合する。
別の実施態様では、抗体はさらに、第２の抗原に特異的に結合する第３のＦａｂ分子を含む。これらの実施態様では、第２の抗原は、好ましくは標的細胞抗原である。そのような一実施態様では、第３のＦａｂ分子はクロスオーバーＦａｂ分子（Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメインＶＨ及びＶＬ又は定常ドメインＣＬ及びＣＨ１が互いに交換／置換されているＦａｂ分子）である。そのような一実施態様では、第３のＦａｂ分子は、第２のＦａｂ分子と同一である（すなわち、第２及び第３のＦａｂ分子は、同じ重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を含み、ドメインの同じ配置（すなわち、従来型又はクロスオーバー）を有する）。そのような一実施態様では、第１のＦａｂ分子は活性化Ｔ細胞抗原、特にＣＤ３に特異的に結合し、第２及び第３のＦａｂ分子は標的細胞抗原に特異的に結合する。
一実施態様では、第３のＦａｂ分子はＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１又は第２のサブユニットのＮ末端に融合している。
特定の実施態様では、第２及び第３のＦａｂ分子はそれぞれ、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインのサブユニットの１つのＮ末端に融合しており、第１のＦａｂ分子はＦａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。特定のそのような実施態様では、抗体は、本質的に、第１、第２及び第３のＦａｂ分子、第１及び第２のサブユニットからなるＦｃドメイン、及び任意で１つ又は複数のペプチドリンカーからなり、ここで、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３のＦａｂ分子はＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。そのような立体配置は、図１Ｂ及び１Ｅ（第３のＦａｂ分子が従来のＦａｂ分子であり、好ましくは第１のＦａｂ分子と同一である特定の実施態様）と、図１Ｉ及び１Ｍ（第３のＦａｂ分子がクロスオーバーＦａｂ分子であり、好ましくは第２のＦａｂ分子と同一である代替的実施態様）に模式的に示されている。第２及び第３のＦａｂ分子は、直接又はペプチドリンカーを介してＦｃドメインに融合されてもよい。特定の実施態様では、第２及び第３のＦａｂ分子はそれぞれ、免疫グロブリンのヒンジ領域を介してＦｃドメインに融合している。特定の実施態様では、免疫グロブリンのヒンジ領域は、特にＦｃドメインがＩｇＧ１のＦｃドメインである場合、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域である。任意で、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖と第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖は、さらに互いに融合していてもよい。
別の実施態様では、第１及び第３のＦａｂ分子はそれぞれ、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインのサブユニットの１つのＮ末端に融合しており、第２のＦａｂ分子はＦａｂ重鎖のＣ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。特定のそのような実施態様では、抗体は、本質的に、第１、第２及び第３のＦａｂ分子、第１及び第２のサブユニットからなるＦｃドメイン、及び任意で１つ又は複数のペプチドリンカーからなり、ここで、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３のＦａｂ分子はＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。そのような立体配置は、図１Ｃ及び１Ｆ（第３のＦａｂ分子が従来のＦａｂ分子であり、好ましくは第１のＦａｂ分子と同一である特定の実施態様）と、図１Ｊ及び１Ｎ（第３のＦａｂ分子がクロスオーバーＦａｂ分子であり、好ましくは第２のＦａｂ分子と同一である代替的実施態様）に模式的に示されている。第１及び第３のＦａｂ分子は、直接又はペプチドリンカーを介してＦｃドメインに融合されてもよい。特定の実施態様では、第１及び第３のＦａｂ分子はそれぞれ、免疫グロブリンのヒンジ領域を介してＦｃドメインに融合している。特定の実施態様では、免疫グロブリンのヒンジ領域は、特にＦｃドメインがＩｇＧ１のＦｃドメインである場合、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域である。任意で、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖と第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖は、さらに互いに融合していてもよい。
Ｆａｂ分子がＦａｂ重鎖のＣ末端において免疫グロブリンのヒンジ領域を介してＦｃドメインのサブユニットの各々のＮ末端に融合している抗体の立体配置において、２つのＦａｂ分子、ヒンジ領域及びＦｃドメインは、本質的に免疫グロブリン分子を形成する。特定の実施態様では、免疫グロブリン分子はＩｇＧクラスの免疫グロブリンである。さらに特定の実施態様では、免疫グロブリンはＩｇＧ１サブクラスの免疫グロブリンである。別の実施態様では、免疫グロブリンはＩｇＧ４サブクラスの免疫グロブリンである。さらに特定の実施態様では、免疫グロブリンはヒト免疫グロブリンである。他の実施態様では、免疫グロブリンは、キメラ免疫グロブリン又はヒト化免疫グロブリンである。
抗体のいくつかでは、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖と第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖は、任意でペプチドリンカーを介して互いに融合している。第１及び第２のＦａｂ分子の立体配置に応じて、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖は、そのＣ末端において、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖のＮ末端に融合されてもよく、又は第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖は、そのＣ末端において、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖のＮ末端に融合されてもよい。第１及び第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖の融合により、不一致のＦａｂ重鎖と軽鎖の誤対合をさらに減少させ、また抗体のいくつかの発現に必要なプラスミドの数を減少させる。
特定の実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子が、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、Ｆｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（２）－ＣＨ１（２）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖がＦｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（１）－ＣＨ１（１）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（２）－ＣＬ（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。特定の実施態様では、ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合により、共有結合している。
特定の実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子が、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、Ｆｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（２）－ＣＬ（２）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖がＦｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（１）－ＣＨ１（１）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（２）－ＣＨ１（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。特定の実施態様では、ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合により、共有結合している。
いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子が、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、Ｆｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（２）－ＣＨ１（２）－ＶＨ（１）－ＣＨ１（１）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））を含む。他の実施態様では、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子は、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、Ｆｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（１）－ＣＨ１（１）－ＶＬ（２）－ＣＨ１（２）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））を含む。
これらの実施態様のいくつかでは、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有する第２のＦａｂ分子のクロスオーバーＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＨ（２）－ＣＬ（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。これら実施態様のその他では、抗体は、必要に応じて、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチドとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（２）－ＣＬ（２）－ＶＬ（１）－ＣＬ（１））、又は第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチドが、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１）－ＶＨ（２）－ＣＬ（２））をさらに含む。
これらの実施態様による抗体はさらに、（ｉ）Ｆｃドメインサブユニットポリペプチド（ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））、又は（ｉｉ）第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、Ｆｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（３）－ＣＨ１（３）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））、及び第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（３）－ＣＬ（３））を含み得る。特定の実施態様では、ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合により、共有結合している。
いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子が、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、Ｆｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（２）－ＣＬ（２）－ＶＨ（１）－ＣＨ１（１）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））を含む。他の実施態様では、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子は、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、Ｆｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（１）－ＣＨ１（１）－ＶＨ（２）－ＣＬ（２）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））を含む。
これらの実施態様のいくつかでは、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有する第２のＦａｂ分子のクロスオーバーＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（２）－ＣＨ１（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。これら実施態様のその他では、抗体は、必要に応じて、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチドとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（２）－ＣＨ１（２）－ＶＬ（１）－ＣＬ（１））、又は第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチドが、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１）－ＶＨ（２）－ＣＬ（２））をさらに含む。
これらの実施態様による抗体はさらに、（ｉ）Ｆｃドメインサブユニットポリペプチド（ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））、又は（ｉｉ）第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、Ｆｃドメインサブユニットとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（３）－ＣＨ１（３）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））、及び第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（３）－ＣＬ（３））を含み得る。特定の実施態様では、ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合により、共有結合している。
いくつかの実施態様では、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。特定のそのような実施態様では、抗体はＦｃドメインを含まない。特定の実施態様では、抗体は、本質的に第１及び第２のＦａｂ分子から、及び任意で１つ又は複数のペプチドリンカーからなり、ここで、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。そのような立体配置は、図１Ｏ及び１Ｓに模式的に示されている。
他の実施態様では、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。特定のそのような実施態様では、抗体はＦｃドメインを含まない。特定の実施態様では、抗体は、本質的に第１及び第２のＦａｂ分子から、及び任意で１つ又は複数のペプチドリンカーからなり、ここで、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。そのような立体配置は、図１Ｐ及び１Ｔに模式的に示されている。
いくつかの実施態様では、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、抗体は第３のＦａｂ分子をさらに含み、ここで、前記第３のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。特定のそのような実施態様では、前記第３のＦａｂ分子は従来のＦａｂ分子である。他のそのような実施態様では、前記第３のＦａｂ分子は、本明細書に記載のクロスオーバーＦａｂ分子、すなわち、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメインＶＨ及びＶＬ又は定常ドメインＣＬ及びＣＨ１が互いに交換／置換されているＦａｂ分子である。特定のそのような実施態様では、抗体は、本質的に、第１、第２、及び第３のＦａｂ分子、及び任意で１つ又は複数のペプチドリンカーからなり、ここで、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第３のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。そのような立体配置は、図１Ｑ及び１Ｕに模式的に示されている（第３のＦａｂ分子が、従来のＦａｂ分子であり、好ましくは第１のＦａｂ分子と同一である特定の実施態様）。
いくつかの実施態様では、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、抗体は第３のＦａｂ分子をさらに含み、ここで、前記第３のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＮ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＣ末端に融合している。特定のそのような実施態様では、前記第３のＦａｂ分子は、本明細書に記載のクロスオーバーＦａｂ分子、すなわち、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメインＶＨ及びＶＬ又は定常ドメインＣＨ１及びＣＬが互いに交換／置換されているＦａｂ分子である。他のそのような実施態様では、前記第３のＦａｂ分子は従来のＦａｂ分子である。特定のそのような実施態様では、抗体は、本質的に、第１、第２、及び第３のＦａｂ分子、及び任意で１つ又は複数のペプチドリンカーからなり、ここで、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第３のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＮ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＣ末端に融合している。そのような立体配置は、図１Ｗ及び１Ｙに模式的に示されている（第３のＦａｂ分子が、クロスオーバーＦａｂ分子であり、好ましくは第２のＦａｂ分子と同一である特定の実施態様）。
いくつかの実施態様では、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、抗体は第３のＦａｂ分子をさらに含み、ここで、前記第３のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＮ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＣ末端に融合している。特定のそのような実施態様では、前記第３のＦａｂ分子は従来のＦａｂ分子である。他のそのような実施態様では、前記第３のＦａｂ分子は、本明細書に記載のクロスオーバーＦａｂ分子、すなわち、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメインＶＨ及びＶＬ又は定常ドメインＣＨ１及びＣＬが互いに交換／置換されているＦａｂ分子である。特定のそのような実施態様では、抗体は、本質的に、第１、第２、及び第３のＦａｂ分子、及び任意で１つ又は複数のペプチドリンカーからなり、ここで、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第３のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＮ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＣ末端に融合している。そのような立体配置は、図１Ｒ及び１Ｖに模式的に示されている（第３のＦａｂ分子が、従来のＦａｂ分子であり、好ましくは第１のＦａｂ分子と同一である特定の実施態様）。
いくつかの実施態様では、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、抗体は第３のＦａｂ分子をさらに含み、ここで、前記第３のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。特定のそのような実施態様では、前記第３のＦａｂ分子は、本明細書に記載のクロスオーバーＦａｂ分子、すなわち、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメインＶＨ及びＶＬ又は定常ドメインＣＨ１及びＣＬが互いに交換／置換されているＦａｂ分子である。他のそのような実施態様では、前記第３のＦａｂ分子は従来のＦａｂ分子である。特定のそのような実施態様では、抗体は、本質的に、第１、第２、及び第３のＦａｂ分子、及び任意で１つ又は複数のペプチドリンカーからなり、ここで、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第３のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。そのような立体配置は、図１Ｘ及び１Ｚに模式的に示されている（第３のＦａｂ分子が、クロスオーバーＦａｂ分子であり、好ましくは第１のＦａｂ分子と同一である特定の実施態様）。
特定の実施態様では、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有する（すなわち、第２のＦａｂ分子は、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）ポリペプチド（ＶＨ（１）－ＣＨ１（１）－ＶＬ（２）－ＣＨ１（２））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（２）－ＣＬ（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。
特定の実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子が、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（２）－ＣＨ１（２）－ＶＨ（１）－ＣＨ１（１））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（２）－ＣＬ（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。
特定の実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子が、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（２）－ＣＬ（２）－ＶＨ（１）－ＣＨ１（１））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（２）－ＣＨ１（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。
特定の実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有する（すなわち、第２のＦａｂ分子は、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）ポリペプチド（ＶＨ（３）－ＣＨ１（３）－ＶＨ（１）－ＣＨ１（１）－ＶＬ（２）－ＣＨ１（２））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（２）－ＣＬ（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（３）－ＣＬ（３））をさらに含む。
特定の実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有する（すなわち、第２のＦａｂ分子は、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）ポリペプチド（ＶＨ（３）－ＣＨ１（３）－ＶＨ（１）－ＣＨ１（１）－ＶＨ（２）－ＣＬ（２））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（２）－ＣＨ１（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（３）－ＣＬ（３））をさらに含む。
特定の実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子が、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（２）－ＣＨ１（２）－ＶＨ（１）－ＣＨ１（１）－ＶＨ（３）－ＣＨ１（３））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（２）－ＣＬ（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（３）－ＣＬ（３））をさらに含む。
特定の実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子が、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（２）－ＣＬ（２）－ＶＨ（１）－ＣＨ１（１）－ＶＨ（３）－ＣＨ１（３））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（２）－ＣＨ１（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（３）－ＣＬ（３））をさらに含む。
特定の実施態様では、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子は、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有する（すなわち、第３のＦａｂ分子は、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）ポリペプチド（ＶＨ（１）－ＣＨ１（１）－ＶＬ（２）－ＣＨ１（２）－ＶＬ（３）－ＣＨ１（３））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（２）－ＣＬ（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（３）－ＣＬ（３））をさらに含む。
特定の実施態様では、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子は、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有する（すなわち、第３のＦａｂ分子は、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）ポリペプチド（ＶＨ（１）－ＣＨ１（１）－ＶＨ（２）－ＣＬ（２）－ＶＨ（３）－ＣＬ（３））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（２）－ＣＨ１（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（３）－ＣＨ１（３））をさらに含む。
特定の実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第３のＦａｂ分子は、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子は、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（３）－ＣＨ１（３）－ＶＬ（２）－ＣＨ１（２）－ＶＨ（１）－ＣＨ１（１））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（２）－ＣＬ（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（３）－ＣＬ（３））をさらに含む。
特定の実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第３のＦａｂ分子は、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し、これが次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子は、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置換されているクロスオーバーＦａｂ重鎖を含む）、これが次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＨ（３）－ＣＬ（３）－ＶＨ（２）－ＣＬ（２）－ＶＨ（１）－ＣＨ１（１））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（２）－ＣＨ１（２））と、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ（１）－ＣＬ（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域とカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド（ＶＬ（３）－ＣＨ１（３））をさらに含む。
上記の実施態様のいずれかによれば、抗体の成分（例えば、Ｆａｂ分子、Ｆｃドメイン）は、直接融合され得るか、又は本明細書に記載されているか若しくは当該技術分野で知られている、さまざまなリンカー、特に１つ又は複数のアミノ酸、典型的には約２－２０個のアミノ酸を含むペプチドリンカーを介して融合され得る。適切な非免疫原性ペプチドリンカーには、例えば、（Ｇ４Ｓ）ｎ、（ＳＧ４）ｎ、（Ｇ４Ｓ）ｎ又はＧ４（ＳＧ４）ｎペプチドリンカーが含まれ、ここでｎは通常１から１０、典型的には２から４の整数である。
Ｆｃドメイン
抗体、例えば治療剤に含まれる二重特異性抗体は、抗体分子の重鎖ドメインを含むポリペプチド鎖の対からなるＦｃドメインを含み得る。例えば、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）分子のＦｃドメインは二量体であり、その各サブユニットはＣＨ２及びＣＨ３ ＩｇＧ重鎖定常ドメインを含む。Ｆｃドメインの２つのサブユニットは、互いに安定に会合することができる。
一実施態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ Ｆｃドメインである。特定の一実施態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。別の実施態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。より特定の実施態様では、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８（Ｋａｂａｔ番号付け）の位置にアミノ酸置換を、特にアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含む、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。このアミノ酸置換は、ＩｇＧ４抗体のｉｎ ｖｉｖｏでのＦａｂアーム交換を減少させる（Stubenrauch et al., Drug Metabolism and Disposition 38, 84-91 (2010)を参照）。さらに特定の実施態様では、Ｆｃドメインはヒトである。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の例示的な配列は、配列番号９４に示されている。
（ｉ）ヘテロ二量体化を促進するＦｃドメイン修飾
治療剤に含まれる抗体、特に二重特異性抗体は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの一方又は他方に融合した異なる成分（例えば、抗原結合ドメイン）を含むことができ、したがって、Ｆｃドメインの２つのサブユニットは、通常、２つの非同一ポリペプチド鎖に含まれる。これらのポリペプチドの組換え同時発現及びその後の二量体形成は、２つのポリペプチドの複数の可能な組み合わせをもたらす。したがって、組換え産生におけるそのような抗体の収率及び純度を改善するために、抗体のＦｃドメインに所望のポリペプチドの会合を促進する修飾を導入することが有利であろう。
したがって、特定の実施態様では、Ｆｃドメインは、Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットの会合を促進する修飾を含む。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインの２つのサブユニット間の最も広範なタンパク質－タンパク質相互作用の部位は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメインにある。したがって、一実施態様では、前記修飾はＦｃドメインのＣＨ３ドメインにある。
ヘテロ二量体化を実施するために、ＦｃドメインのＣＨ３ドメインにおける修飾のための複数の手法が存在し、それらは例えば、国際公開第９６／２７０１１号、国際公開第９８／０５０４３１号、欧州特許第１８７０４５９号、国際公開第２００７／１１０２０５号、国際公開第２００７／１４７９０１号、国際公開第２００９／０８９００４号、国際公開第２０１０／１２９３０４号、国際公開第２０１１／９０７５４号、国際公開第２０１１／１４３５４５号、国際公開第２０１２０５８７６８号、国際公開第２０１３１５７９５４号、国際公開第２０１３０９６２９１号に詳細に説明されている。典型的には、すべてのそのような手法において、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインとＦｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインが両方とも相補的様式で操作されており、したがって、各ＣＨ３ドメイン（又はそれを含む重鎖）はそれ自体とホモ二量体化できなくなり、相補的に操作された他のＣＨ３ドメインとヘテロ二量体化することを余儀なくされる（したがって、第１及び第２のＣＨ３ドメインはヘテロ二量体化し、２つの第１又は２つの第２のＣＨ３ドメイン間にホモ二量体は形成されない）。重鎖ヘテロ二量体化を改善するためのこれらの異なる手法は、軽鎖の誤対合及びベンス・ジョーンズ型副生成物を減少させる、重鎖－軽鎖修飾（例えば、Ｆａｂアームにおける可変又は定常領域の交換／置換、又はＣＨ１／ＣＬ接触面における反対の電荷を持つ荷電アミノ酸の置換の導入）と組み合わせた異なる選択肢として考えられている。
特定の実施態様では、Ｆｃドメインの第１及び第２のサブユニットの会合を促進する前記修飾は、いわゆる「ノブ－イントゥ－ホール（ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）」修飾であり、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの一方に「ノブ」修飾を、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの他方に「ホール」修飾を含む。
ノブ－イントゥ－ホール技術は、例えば、米国特許第５７３１１６８号；同第７６９５９３６号；Ridgway et al., Prot Eng 9, 617-621 (1996) and Carter, J Immunol Meth 248, 7-15 (2001)に記載されている。一般に、この方法は、第１のポリペプチドの接触面において***（「ノブ」）及び第２のポリペプチドの接触面において対応する空洞（「ホール」）を導入することを含み、その結果、ヘテロ二量体形成を促進し、かつホモ二量体形成を妨げるように、***が空洞内に配置することができる。***は、第１のポリペプチドの接触面からの小さなアミノ酸側鎖をより大きな側鎖（例えば、チロシン又はトリプトファン）と置換することによって構築される。***と同じか又は同様のサイズの相補的空洞が、大きなアミノ酸側鎖を小さいもの（例えばアラニン又はスレオニン）で置換することによって、第２のポリペプチドの接触面に作り出される。
したがって、特定の実施態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインにおいて、アミノ酸残基がそれよりも大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置換され、それにより、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部に、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部の空洞内に配置可能な***が生成され、かつ、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内において、アミノ酸残基がそれよりも小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置換され、それにより、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部に、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部の***を配置可能な空洞が生成される。
好ましくは、より大きい側鎖体積を有する前記アミノ酸残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される。
好ましくは、より小さい側鎖体積を有する前記アミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、及びバリン（Ｖ）からなる群から選択される。
***と空洞は、ポリペプチドをコードする核酸を、例えば部位特異的変異誘発により、又はペプチド合成により、変化させることにより作り出すことができる。
特定の実施態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニット（「ノブ」サブユニット）のＣＨ３ドメインにおいて、３６６位のスレオニン残基がトリプトファン残基で置換され（Ｔ３６６Ｗ）、Ｆｃドメインの第２のサブユニット（「ホール」サブユニット）のＣＨ３ドメインにおいて、４０７位のチロシン残基がバリン残基で置換される（Ｙ４０７Ｖ）。一実施態様では、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいてさらに、３６６位のスレオニン残基がセリン残基で置換され（Ｔ３６６Ｓ）、３６８位のロイシン残基がアラニン残基で置換される（Ｌ３６８Ａ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
さらなる実施態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいてさらに、３５４位のセリン残基がシステイン残基で置換され（Ｓ３５４Ｃ）、又は３５６位のグルタミン酸残基がシステイン残基で置換され（Ｅ３５６Ｃ）、かつＦｃドメインの第２のサブユニットにおいてさらに、３４９位のチロシン残基がシステイン残基で置換される（Ｙ３４９Ｃ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。これらの２つのシステイン残基の導入は、Ｆｃドメインの２つのサブユニット間のジスルフィド架橋の形成をもたらし、二量体をさらに安定化する（Carter, J Immunol Methods 248, 7-15 (2001)）。
特定の実施態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットは、アミノ酸置換Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗを含み、かつＦｃドメインの第２のサブユニットは、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）を含む。
特定の実施態様では、本明細書に記載のＣＤ３抗原結合部分は、Ｆｃドメインの第１のサブユニット（「ノブ」修飾を含む）に融合している。理論に縛られることを望まないが、ＣＤ３抗原結合部分の、Ｆｃドメインのノブ含有サブユニットへの融合は、（さらに）２つのＣＤ３抗原結合部分を含む二重特異性抗体の生成を最小限に抑えるであろう（２つのノブ含有ポリペプチドの立体的衝突）。
ヘテロ二量体化を強制するためのＣＨ３修飾の他の技術が、本発明による代替法として考慮されており、例えば国際公開第９６／２７０１１号、国際公開第９８／０５０４３１号、欧州特許第１８７０４５９号、国際公開第２００７／１１０２０５号、国際公開第２００７／１４７９０１号、国際公開第２００９／０８９００４号、国際公開第２０１０／１２９３０４号、国際公開第２０１１／９０７５４号、国際公開第２０１１／１４３５４５号、国際公開第２０１２／０５８７６８号、国際公開第２０１３／１５７９５４号、国際公開第２０１３／０９６２９１号に記載されている。
一実施態様では、欧州特許第１８７０４５９号に記載されたヘテロ二量体化手法が代替的に使用される。この手法は、Ｆｃドメインの２つのサブユニット間のＣＨ３／ＣＨ３ドメイン接触面内の特定のアミノ酸位置に、反対の電荷を有する荷電アミノ酸を導入することに基づいている。１つの好ましい実施態様は、（Ｆｃドメインの）２つのＣＨ３ドメインの一方におけるアミノ酸変異Ｒ４０９Ｄ；Ｋ３７０Ｅ、及びＦｃドメインのＣＨ３ドメインの他方におけるアミノ酸変異Ｄ３９９Ｋ；Ｅ３５７Ｋである（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
別の実施態様では、抗体は、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内にアミノ酸変異Ｔ３６６Ｗ、及びＦｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内にアミノ酸変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖを含み、さらにはＦｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内にアミノ酸変異Ｒ４０９Ｄ；Ｋ３７０Ｅ、及びＦｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内にアミノ酸変異Ｄ３９９Ｋ；Ｅ３５７Ｋを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
別の実施態様では、抗体は、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内にアミノ酸変異Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＦｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内にアミノ酸変異Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖを含み、又は、抗体は、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内にアミノ酸変異Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＦｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内にアミノ酸変異Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖと、さらにＦｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内にアミノ酸変異Ｒ４０９Ｄ；Ｋ３７０Ｅ、及びＦｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内にアミノ酸変異Ｄ３９９Ｋ；Ｅ３５７Ｋを含む（すべてＫａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
一実施態様では、国際公開第２０１３／１５７９５３号に記載されたヘテロ二量体化手法が代替的に使用される。一実施態様では、第１のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｔ３６６Ｋを含み、第２のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｌ３５１Ｄを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。さらなる実施態様では、第１のＣＨ３ドメインはさらなるアミノ酸変異Ｌ３５１Ｋを含む。さらなる実施態様では、第２のＣＨ３ドメインは、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｄ及びＬ３６８Ｅから選択されるアミノ酸変異（好ましくはＬ３６８Ｅ）をさらに含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
一実施態様では、国際公開第２０１２／０５８７６８号に記載されたヘテロ二量体化手法が代替的に使用される。一実施態様では、第１のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｌ３５１Ｙ、Ｙ４０７Ａを含み、第２のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｔ３６６Ａ、Ｋ４０９Ｆを含む。さらなる実施態様では、第２のＣＨ３ドメインは、Ｔ４１１、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｆ４０５、Ｎ３９０、又はＫ３９２の位置に、例えばａ）Ｔ４１１Ｎ、Ｔ４１１Ｒ、Ｔ４１１Ｑ、Ｔ４１１Ｋ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ又はＴ４１１Ｗ、ｂ）Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｗ、Ｄ３９９Ｙ又はＤ３９９Ｋ、ｃ）Ｓ４００Ｅ、Ｓ４００Ｄ、Ｓ４００Ｒ、又はＳ４００Ｋ、ｄ）Ｆ４０５Ｉ、Ｆ４０５Ｍ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｓ、Ｆ４０５Ｖ又はＦ４０５Ｗ、ｅ）Ｎ３９０Ｒ、Ｎ３９０Ｋ又はＮ３９０Ｄ、ｆ）Ｋ３９２Ｖ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｒ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｆ又はＫ３９２Ｅから選択される、さらなるアミノ酸変異を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。さらなる実施態様では、第１のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｌ３５１Ｙ、Ｙ４０７Ａを含み、第２のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｔ３６６Ｖ、Ｋ４０９Ｆを含む。さらなる実施態様では、第１のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｙ４０７Ａを含み、第２のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｔ３６６Ａ、Ｋ４０９Ｆを含む。さらなる実施態様では、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸変異Ｋ３９２Ｅ、Ｔ４１１Ｅ、Ｄ３９９Ｒ及びＳ４００Ｒをさらに含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
一実施態様では、例えば３６８及び４０９からなる群から選択される位置でのアミノ酸修飾を伴う、国際公開第２０１１／１４３５４５号に記載されたヘテロ二量体化手法が代替的に使用される（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
一実施態様では、上述のノブ・イントゥー・ホール技術をやはり使用する、国際公開第２０１１／０９０７６２号に記載されるヘテロ二量体化手法が代替的に使用される。一実施態様では、第１のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｔ３６６Ｗを含み、第２のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｙ４０７Ａを含む。一実施態様では、第１のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｔ３６６Ｙを含み、第２のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｙ４０７Ｔを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
一実施態様では、抗体又はそのＦｃドメインはＩｇＧ２サブクラスのものであり、国際公開第２０１０／１２９３０４号に記載されたヘテロ二量体化手法が代替的に使用される。
別の実施態様では、Ｆｃドメインの第１及び第２のサブユニットの会合を促進する修飾は、例えば、ＰＣＴ公開番号国際公開第２００９／０８９００４号に記載されているような静電ステアリング効果を媒介する修飾を含む。一般に、この方法は、ホモ二量体形成は静電的に不利になるが、ヘテロ二量体は静電的に有利になるように、２つのＦｃドメインサブユニットの接触面での、荷電したアミノ酸残基による１つ又は複数のアミノ酸残基の置換を含む。そのような一実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、負に荷電したアミノ酸（例えばグルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）、好ましくはＫ３９２Ｄ又はＮ３９２Ｄ）によるＫ３９２又はＮ３９２のアミノ酸置換を含み、第２のＣＨ３ドメインは、正に荷電したアミノ酸（例えばリジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）、好ましくはＤ３９９Ｋ、Ｅ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｋ、又はＥ３５７Ｋ、さらに好ましくはＤ３９９Ｋ及びＥ３５６Ｋ）によるＤ３９９、Ｅ３５６、Ｄ３５６、又はＥ３５７のアミノ酸置換を含む。さらなる実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、負に荷電したアミノ酸（例えばグルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）、好ましくはＫ４０９Ｄ又はＲ４０９Ｄ）によるＫ４０９又はＲ４０９のアミノ酸置換をさらに含む。さらなる実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、負に荷電したアミノ酸（例えばグルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ））によるＫ４３９及び／又はＫ３７０のアミノ酸置換を、さらに又は代替的に含む（すべてＫａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
またさらなる一実施態様では、国際公開第２００７／１４７９０１号に記載されたヘテロ二量体化手法が代替的に使用される。一実施態様では、第１のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｋ２５３Ｅ、Ｄ２８２Ｋ、及びＫ３２２Ｄを含み、第２のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｄ２３９Ｋ、Ｅ２４０Ｋ、及びＫ２９２Ｄを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
さらに別の実施態様では、国際公開第２００７／１１０２０５号に記載されたヘテロ二量体化手法を代替的に使用することができる。
一実施態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットは、アミノ酸置換Ｋ３９２Ｄ及びＫ４０９Ｄを含み、Ｆｃドメインの第２のサブユニットは、アミノ酸置換Ｄ３５６Ｋ及びＤ３９９Ｋを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
（ｉｉ）Ｆｃ受容体結合及び／又はエフェクター機能を低減させるＦｃドメインの修飾
Ｆｃドメインは、二重特異性抗体などの抗体に対し、標的組織中への良好な蓄積に貢献する長い血清半減期、及び望ましい組織－血液分布比を含む望ましい薬物動態特性を付与する。しかしながら、同時に、好ましい抗原保有細胞よりはむしろＦｃ受容体を発現する細胞への抗体の望ましくない標的化を導く可能性がある。さらに、Ｆｃ受容体シグナル伝達経路の同時活性化は、サイトカイン放出の原因となり得、これは、抗体が有し得る他の免疫賦活特性及び抗体の長い半減期と組み合わさって、サイトカイン受容体の過剰な活性化をもたらし、全身投与されると重篤な副作用をもたらす。
したがって、特定の実施様態では、治療剤に含まれる抗体、特に二重特異性抗体のＦｃドメインは、天然のＩｇＧ１ Ｆｃドメインと比較して、Ｆｃ受容体に対する結合親和性の低下及び／又はエフェクター機能の低減を示す。そのような一実施態様では、Ｆｃドメイン（又は前記Ｆｃドメインを含む分子、例えば抗体）は、天然のＩｇＧ１ Ｆｃドメイン（又は天然のＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含むそれに対応する分子）と比較して、Ｆｃ受容体への結合親和性の５０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、最も好ましくは５％未満を示し、かつ／又は天然のＩｇＧ１ Ｆｃドメインドメイン（又は天然のＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含むそれに対応する分子）と比較して、エフェクター機能の５０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、最も好ましくは５％未満を示す。一実施態様では、Ｆｃドメイン（又は前記Ｆｃドメインを含む分子、例えば抗体）は、Ｆｃ受容体に実質的に結合せず、かつ／又はエフェクター機能を誘導しない。特定の実施態様では、Ｆｃ受容体はＦｃγ受容体である。一実施態様では、Ｆｃ受容体はヒトＦｃ受容体である。一実施態様では、Ｆｃ受容体は活性化Ｆｃ受容体である。特定の実施態様では、Ｆｃ受容体は活性化ヒトＦｃγ受容体であり、より具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩ又はＦｃγＲＩＩａ、最も具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａである。一実施態様では、エフェクター機能は、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びサイトカイン分泌の群から選択される１つ又は複数である。特定の実施態様では、エフェクター機能はＡＤＣＣである。一実施態様では、Ｆｃドメインは、天然のＩｇＧ１ Ｆｃドメインドメインと比較して、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対して実質的に同様の結合親和性を示す。ＦｃＲｎへの実質的に同様の結合は、Ｆｃドメイン（又は前記Ｆｃドメインを含む分子、例えば抗体）が、天然のＩｇＧ１ Ｆｃドメイン（又は天然のＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含むそれに対応する分子）のＦｃＲｎへの結合親和性の約７０％超、特に約８０％超、より具体的には約９０％超の結合親和性を示すときに達成される。
特定の実施態様では、Ｆｃドメインは、非操作Ｆｃドメインと比較して、低減したＦｃ受容体への結合親和性及び／又はエフェクター機能を有するように操作される。特定の実施態様では、Ｆｃドメインは、ＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性及び／又はエフェクター機能を低減させる１つ又は複数のアミノ酸変異を含む。典型的には、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのそれぞれに同じ１つ又は複数のアミノ酸変異が存在する。一実施態様では、アミノ酸変異はＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性を低下させる。一実施態様では、アミノ酸変異は、ＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性を、少なくとも２分の１、少なくとも５分の１、又は少なくとも１０分の１に低下させる。ＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性を低下させる複数のアミノ酸変異が存在する実施態様では、これらアミノ酸変異の組み合わせにより、ＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性が、少なくとも１０分の１、少なくとも２０分の１、又は少なくとも５０分の１まで低下する。一実施態様では、操作されたＦｃドメインを含む分子、例えば抗体は、操作されていないＦｃドメインを含むそれに対応する分子と比較して、Ｆｃ受容体に対する結合親和性の２０％未満、特に１０％未満、より具体的には５％未満を示す。特定の実施態様では、Ｆｃ受容体はＦｃγ受容体である。いくつかの実施態様では、Ｆｃ受容体はヒトＦｃ受容体である。いくつかの実施態様では、Ｆｃ受容体は活性化Ｆｃ受容体である。特定の実施態様では、Ｆｃ受容体は活性化ヒトＦｃγ受容体であり、より具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩ又はＦｃγＲＩＩａ、最も具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａである。好ましくは、これらの受容体の各々への結合は低減する。いくつかの実施態様では、補体成分に対する結合親和性、特にＣ１ｑに対する結合親和性も低下する。一実施態様では、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する結合親和性は低下しない。ＦｃＲｎへの実質的に同様の結合、すなわち、前記受容体に対するＦｃドメインの結合親和性の保存は、Ｆｃドメイン（又は前記Ｆｃドメインを含む分子、例えば抗体）が、Ｆｃドメインの非操作形態（又はＦｃドメインの前記非操作形態を含むそれに対応する分子）のＦｃＲｎに対する結合親和性の約７０％超の結合親和性を示すときに達成される。Ｆｃドメイン、又は前記Ｆｃドメインを含む分子（例えば抗体）は、そのような親和性の約８０％超、さらには約９０％超を示し得る。特定の実施態様では、Ｆｃドメインは、非操作Ｆｃドメインと比較して、エフェクター機能を低減させるように操作される。エフェクター機能の低減は、限定されないが、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の低減、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の低減、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）の低減、サイトカイン分泌の低減、抗原提示細胞による免疫複合体媒介性抗原取り込みの低減、ＮＫ細胞への結合の低減、マクロファージへの結合の低減、単球への結合の低減、多形核細胞への結合の低減、アポトーシスを誘導する直接シグナル伝達の低減、標的結合抗体の架橋の低減、樹状細胞成熟の低減、又はＴ細胞プライミングの低減のうちの１つ又は複数を挙げることができる。一実施態様では、エフェクター機能の低減は、ＣＤＣの低減、ＡＤＣＣの低減、ＡＤＣＰの低減、及びサイトカイン分泌の低減からなる群から選択される１つ又は複数である。特定の実施態様では、エフェクター機能の低減はＡＤＣＣの低減である。一実施態様では、低減したＡＤＣＣは、非操作Ｆｃドメイン（又は非操作Ｆｃドメインを含むそれに対応する分子）によって誘導されるＡＤＣＣの２０％未満である。
一実施態様では、ＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性及び／又はエフェクター機能を低減させるアミノ酸変異は、アミノ酸置換である。一実施態様では、Ｆｃドメインは、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７、Ｐ３３１及びＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。より具体的な実施態様では、Ｆｃドメインは、Ｌ２３４、Ｌ２３５及びＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。いくつかの実施態様では、Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。そのような一実施態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。一実施態様では、ＦｃドメインはＰ３２９の位置にアミノ酸置換を含む。より具体的な実施態様では、アミノ酸置換は、Ｐ３２９Ａ又は Ｐ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇである（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。一実施態様では、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９の位置にアミノ酸置換を含み、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７及びＰ３３１から選択される位置にさらなるアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。より具体的な実施態様では、さらなるアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ又はＰ３３１Ｓである。特定の実施態様では、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９、Ｌ２３４及びＬ２３５の位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。より特定の実施態様では、Ｆｃドメインは、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」）を含む。そのような一実施態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。アミノ酸置換の「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」の組み合わせは、参照によりその全体が本明細書に取り込まれるＰＣＴ公開番号国際公開第２０１２／１３０８３１号に記載のように、ヒトＩｇＧ１ ＦｃドメインのＦｃγ受容体（並びに補体）結合をほぼ完全に消失させる。国際公開第２０１２／１３０８３１号には、そのような変異Ｆｃドメインを調製する方法、及びＦｃ受容体結合又はエフェクター機能などのその特性を決定するための方法も記載されている。
ＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１抗体と比較して、Ｆｃ受容体に対する結合親和性の低下及びエフェクター機能の低減を示す。したがって、いくつかの実施態様では、ＦｃドメインはＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。一実施態様では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、位置Ｓ２２８におけるアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。Ｆｃ受容体に対するその結合親和性及び／又はそのエフェクター機能をさらに低減させるために、一実施態様では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、位置Ｌ２３５におけるアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｌ２３５Ｅを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。別の実施態様では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、位置Ｐ３２９におけるアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｐ３２９Ｇを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。特定の実施態様では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、位置Ｓ２２８、Ｌ２３５及びＰ３２９におけるアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ及びＰ３２９Ｇを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。そのようなＩｇＧ４ Ｆｃドメインの変異体及びそれらのＦｃγ受容体結合特性は、ＰＣＴ公開番号国際公開第２０１２／１３０８３１号に記載されており、これは参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。
特定の実施態様では、天然のＩｇＧ１ Ｆｃドメインと比較してＦｃ受容体に対する結合親和性の低下及び／又はエフェクター機能の低減を示すＦｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及び任意でＰ３２９Ｇを含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインであるか、又はアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ及び任意でＰ３２９Ｇを含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインである（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
特定の実施態様では、ＦｃドメインのＮグリコシル化は排除されている。そのような一実施態様では、Ｆｃドメインは位置Ｎ２９７におけるアミノ酸置換、具体的にはアスパラギンをアラニン（Ｎ２９７Ａ）又はアスパラギン酸（Ｎ２９７Ｄ）又はグリシン（Ｎ２９７Ｇ）に置換するアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
本明細書及びＰＣＴ公開番号国際公開第２０１２／１３０８３１号において記載されるＦｃドメインに加えて、Ｆｃ受容体結合及び／又はエフェクター機能が低減したＦｃドメインは、Ｆｃドメイン残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９のうちの１つ又は複数の置換を有するものも含む（米国特許第６７３７０５６号）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含め、アミノ酸の位置２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７のうちの２つ以上にて置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７３３２５８１号）。
変異体Ｆｃドメインは、当該技術分野で良く知られた遺伝学的又は化学的方法を用いたアミノ酸の欠失、置換、挿入、又は修飾により調製することができる。遺伝学的方法には、コード化ＤＮＡ配列の部位特異的突然変異誘発、ＰＣＲ、遺伝子合成などが含まれ得る。正確なヌクレオチドの変化は、例えば配列決定により検証することができる。
Ｆｃ受容体への結合は、例えばＥＬＩＳＡによって、又はＢＩＡｃｏｒｅ装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）などの標準的な機器を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって、及び組換え発現によって得ることができるＦｃ受容体を使用して、容易に決定することができる。あるいは、Ｆｃドメイン、又はＦｃドメインを含む分子のＦｃ受容体に対する結合親和性は、特定のＦｃ受容体を発現することが知られている細胞株、例えばＦｃγＩＩＩａ受容体を発現するヒトＮＫ細胞を使用して評価してもよい。
Ｆｃドメイン、又はＦｃドメインを含む分子（例えば抗体）のエフェクター機能は、当該技術分野で知られた方法により測定することができる。ＡＤＣＣを測定するための適切なアッセイは本明細書に記載される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの他の例が、米国特許第５５００３６２号；Hellstrom et al. Proc Natl Acad Sci USA 83, 7059-7063 (1986)及びHellstrom et al., Proc Natl Acad Sci USA 82, 1499-1502 (1985)；米国特許第５８２１３３７号；Bruggemann et al., J Exp Med 166, 1351-1361 (1987)に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えばフローサイトメトリー用のＡＣＴＩＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（CellTechnology, Inc. Mountain View, CA；及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照）。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、又はさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al., PNAS USA 95:652-656 (1998)に開示されるように、例えば動物モデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏで評価することができる。
いくつかの実施態様では、補体成分へのＦｃドメインの結合、特にＣ１ｑへの結合が低減する。したがって、Ｆｃドメインがエフェクター機能を低減させるように操作されているいくつかの実施態様では、前記エフェクター機能の低減はＣＤＣの低減を含む。Ｃ１ｑ結合アッセイが、Ｆｃドメイン、又はＦｃドメインを含む分子（例えば抗体）がＣ１ｑに結合できるかどうか、それによりＣＤＣ活性を有するかどうかを決定するために実行され得る。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)；Cragg, et al., Blood 101:1045-1052 (2003)；及びCragg, and Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照）。
抗原結合部分
治療剤に含まれる抗体は二重特異性であってもよく、すなわち、２つの異なる抗原決定基に特異的に結合できる少なくとも２つの抗原結合部分を含む。特定の実施態様によれば、抗原結合部分はＦａｂ分子（すなわち、各々が可変及び定常ドメインを含む重鎖と軽鎖とからなる抗原結合ドメイン）である。一実施態様では、前記Ｆａｂ分子はヒトである。別の実施態様では、前記Ｆａｂ分子はヒト化されている。また別の実施態様では、前記Ｆａｂ分子はヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインを含む。
いくつかの実施態様では、抗原結合部分の少なくとも１つはクロスオーバーＦａｂ分子である。このような修飾は、異なるＦａｂ分子由来の重鎖と軽鎖との誤対合を減少させ、それにより組換え産生において抗体の収率及び純度を向上させる。抗体に有用な特定のクロスオーバーＦａｂ分子では、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変ドメイン（それぞれＶＬ及びＶＨ）が交換されている。しかしながら、このようなドメイン交換によっても、抗体の調製は、誤対合した重鎖と軽鎖間のいわゆるベンス・ジョーンズ型相互作用に起因する特定の副生成物を含み得る（Schaefer et al, PNAS, 108 (2011) 11187-11191を参照）。異なるＦａｂ分子からの重鎖と軽鎖の誤対合をさらに減少させ、したがって所望の抗体の純度及び収率を向上させるために、反対の電荷を有する荷電アミノ酸を、標的細胞抗原に特異的に結合するＦａｂ分子（複数可）又は活性化Ｔ細胞抗原に特異的に結合するＦａｂ分子のＣＨ１及びＣＬドメイン中の特定のアミノ酸位置に導入することができる。電荷修飾は、抗体に含まれる従来のＦａｂ分子（複数可）（例えば図１Ａ－Ｃ、Ｇ－Ｊに示される）、又は抗体に含まれるＶＨ／ＶＬクロスオーバーＦａｂ分子（複数可）（例えば図１Ｄ－Ｆ、Ｋ－Ｎに示される）のいずれかで行われる（但し両方で行われることはない）。特定の実施態様では、電荷修飾は、抗体に含まれる従来のＦａｂ分子（複数可）（特定の実施態様においては、標的細胞抗原に特異的に結合するもの）において行われる。
本発明による特定の実施態様では、抗体は、標的細胞抗原、特に腫瘍細胞抗原、及び活性化Ｔ細胞抗原、特にＣＤ３に同時結合することができる。一実施態様では、抗体は、標的細胞抗原及び活性化Ｔ細胞抗原に同時結合することにより、Ｔ細胞と標的細胞を架橋することができる。さらに特定の実施態様では、そのような同時結合は、標的細胞、特に腫瘍細胞の溶解をもたらす。一実施態様では、そのような同時結合は、Ｔ細胞の活性化をもたらす。他の実施態様では、そのような同時結合は、増殖、分化、サイトカイン分泌、細胞傷害性エフェクター分子放出、細胞傷害性活性、及び活性化マーカーの発現の群から選択されるＴリンパ球、特に細胞傷害性Ｔリンパ球の細胞応答をもたらす。一実施態様では、標的細胞抗原への同時結合を伴わない、活性化Ｔ細胞抗原、特にＣＤ３への抗体の結合は、Ｔ細胞活性化をもたらさない。
一実施態様では、抗体は、Ｔ細胞の細胞傷害活性を標的細胞に再指向させることができる。特定の実施態様では、前記再指向は、標的細胞によるＭＨＣ媒介性ペプチド抗原の提示及び／又はＴ細胞の特異性と無関係である。
特に、本発明の実施態様のいずれかによるＴ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。いくつかの実施態様では、Ｔ細胞はＣＤ４＋又はＣＤ８＋ Ｔ細胞、特にＣＤ８＋ Ｔ細胞である。
（ｉ）活性化Ｔ細胞抗原結合部分
いくつかの実施態様では、治療剤に含まれる抗体、特に二重特異性抗体は、活性化Ｔ細胞抗原に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部分、特にＦａｂ分子（本明細書では「活性化Ｔ細胞抗原結合部分、又は活性化Ｔ細胞抗原結合Ｆａｂ分子」とも呼ばれる）を含む。特定の実施態様では、抗体は、活性化Ｔ細胞抗原に特異的に結合することができる１つを超えない抗原結合部分を含む。一実施態様では、抗体は、活性化Ｔ細胞抗原への一価の結合を提供する。
特定の実施態様では、活性化Ｔ細胞抗原に特異的に結合する抗原結合部分は、本明細書に記載のクロスオーバーＦａｂ分子、すなわち、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメインＶＨ及びＶＬ又は定常ドメインＣＨ１及びＣＬが互いに交換／置換されているＦａｂ分子である。そのような実施態様では、標的細胞抗原に特異的に結合する抗原結合部分（複数可）は、好ましくは従来のＦａｂ分子である。抗体に含まれる、標的細胞抗原に特異的に結合する複数の抗原結合部分、特にＦａｂ分子が存在する実施態様では、活性化Ｔ細胞抗原に特異的に結合する抗原結合部分は好ましくはクロスオーバーＦａｂ分子であり、標的細胞抗原に特異的に結合する抗原結合部分は従来のＦａｂ分子である。
代替的な実施態様では、活性化Ｔ細胞抗原に特異的に結合する抗原結合部分は従来のＦａｂ分子である。そのような実施態様では、標的細胞抗原に特異的に結合する抗原結合部分（複数可）は、本明細書に記載のクロスオーバーＦａｂ分子、すなわち、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメインＶＨ及びＶＬ又は定常ドメインＣＨ１及びＣＬが互いに交換／置換されているＦａｂ分子である。
一実施態様では、活性化Ｔ細胞抗原は、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、及びＣＤ１２７からなる群から選択される。
特定の実施態様では、活性化Ｔ細胞抗原は、ＣＤ３、特にヒトＣＤ３（配列番号９１）又はカニクイザルＣＤ３（配列番号９２）、最も具体的にはヒトＣＤ３である。特定の実施態様では、活性化Ｔ細胞抗原結合部分は、ヒト及びカニクイザルのＣＤ３に対して交差反応性である（すなわち、特異的に結合する）。いくつかの実施態様では、活性化Ｔ細胞抗原は、ＣＤ３のイプシロンサブユニット（ＣＤ３イプシロン）である。
いくつかの実施態様では、活性化Ｔ細胞抗原結合部分はＣＤ３、特にＣＤ３イプシロンに特異的に結合し、配列番号１２、配列番号１３、及び配列番号１４からなる群から選択される少なくとも１つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、並びに配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７の群から選択される少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲを含む。
一実施態様では、ＣＤ３結合抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、配列番号１２の重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３の重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４の重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１５の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１６の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１７の軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。
一実施態様では、ＣＤ３結合抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、配列番号１８と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列、及び配列番号１９と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列を含む。
一実施態様では、ＣＤ３結合抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一実施態様では、ＣＤ３結合抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、配列番号１８の重鎖可変領域配列及び配列番号１９の軽鎖可変領域配列を含む。
（ｉｉ）標的細胞抗原結合部分
いくつかの実施態様では、治療剤に含まれる抗体、特に二重特異性抗体は、標的細胞抗原に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部分、特にＦａｂ分子を含む。特定の実施態様では、抗体は、標的細胞抗原に特異的に結合する２つの抗原結合部分、特にＦａｂ分子を含む。特定のそのような実施態様では、これらの抗原結合部分の各々は、同じ抗原決定基に特異的に結合する。さらに特定の実施態様では、これらの抗原結合部分のすべては同一であり、すなわちそれらは、本明細書に記載されるようにＣＨ１及びＣＬドメイン内に同じアミノ酸置換（もしあれば）を含む同じアミノ酸配列を含む。一実施態様では、抗体は、標的細胞抗原に特異的に結合する免疫グロブリン分子を含む。一実施態様では、抗体は、標的細胞抗原に特異的に結合する２つを超えない抗原結合部分、特にＦａｂ分子を含む。
特定の実施態様では、標的細胞抗原に特異的に結合する抗原結合部分（複数可）は、従来のＦａｂ分子である。そのような実施態様では、活性化Ｔ細胞抗原に特異的に結合する抗原結合部分（複数可）は、本明細書に記載のクロスオーバーＦａｂ分子、すなわち、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメインＶＨ及びＶＬ又は定常ドメインＣＨ１及びＣＬが互いに交換／置換されているＦａｂ分子である。
代替的な実施態様では、標的細胞抗原に特異的に結合する抗原結合部分（複数可）は、本明細書に記載のクロスオーバーＦａｂ分子、すなわち、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメインＶＨ及びＶＬ又は定常ドメインＣＨ１及びＣＬが互いに交換／置換されているＦａｂ分子である。そのような実施態様では、活性化Ｔ細胞抗原に特異的に結合する抗原結合部分（複数可）は、従来のＦａｂ分子である。
標的細胞抗原結合部分は、抗体を標的部位、例えば標的細胞抗原を発現する特定の種類の腫瘍細胞に指向させることができる。
一実施態様では、標的細胞抗原は、Ｂ細胞抗原、特に悪性Ｂ細胞抗原である。一実施態様では、標的細胞抗原は、細胞表面抗原である。一実施態様では、標的細胞抗原は、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５からなる群から選択される。
一実施態様では、標的細胞抗原は、ＣＤ２０、特にヒトＣＤ２０である。
一実施態様では、ＣＤ２０に特異的に結合する抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、配列番号４の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５の重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６の重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号７の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９の軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施態様では、ＣＤ２０に特異的に結合する抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、配列番号１０の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域、及び配列番号１１の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域を含む。なおさらなる実施態様では、ＣＤ２０に特異的に結合する抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、配列番号１０の重鎖可変領域配列、及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む。
一実施態様では、標的細胞抗原は、ＣＤ１９、特にヒトＣＤ１９である。
一実施態様では、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、配列番号２４の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２５の重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２６の重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２７の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２８の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２９の軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施態様では、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、配列番号３０の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域、及び配列番号３１の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域を含む。なおさらなる実施態様では、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、配列番号３０の重鎖可変領域配列、及び配列番号３１の軽鎖可変領域配列を含む。
別の実施態様では、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、配列番号３５の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号３６の重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３７の重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号３８の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３９の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４０の軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。さらなる実施態様では、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、配列番号４１の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域、及び配列番号４２の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域を含む。なおさらなる実施態様では、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、配列番号４１の重鎖可変領域配列、及び配列番号４２の軽鎖可変領域配列を含む。
別の実施態様では、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、
（ｉ）配列番号４３の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４４の重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４５の重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号４６の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４７の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４８の軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉ）配列番号５１の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５２の重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５３の重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号５４の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５５の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５６の軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉｉ）配列番号５９の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６０の重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６１の重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号６２の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号６３の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６４の軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｖ）配列番号６７の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６８の重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６９の重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号７０の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７１の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７２の軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖ）配列番号７５の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号７６の重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７７の重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号７８の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７９の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８０の軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；又は
（ｖｉ）配列番号８３の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号８４の重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８５の重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに配列番号８６の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８７の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８８の軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む。
さらなる実施態様では、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、
（ｉ）配列番号４９の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域、及び配列番号５０の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域；
（ｉｉ）配列番号５７の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域、及び配列番号５８の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域；
（ｉｉｉ）配列番号６５の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域、及び配列番号６６の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域；
（ｉｖ）配列番号７３の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域、及び配列番号７４の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域；
（ｖ）配列番号８１の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域、及び配列番号８２の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域；又は
（ｖｉ）配列番号８９の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域、及び配列番号９０の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域
を含む。
さらなる実施態様では、ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合部分、特にＦａｂ分子は、
（ｉ）配列番号４９の重鎖可変領域配列、及び配列番号５０の軽鎖可変領域配列；
（ｉｉ）配列番号５７の重鎖可変領域配列、及び配列番号５８の軽鎖可変領域配列；
（ｉｉｉ）配列番号６５の重鎖可変領域配列、及び配列番号６６の軽鎖可変領域配列；
（ｉｖ）配列番号７３の重鎖可変領域配列、及び配列番号７４の軽鎖可変領域配列；
（ｖ）配列番号８１の重鎖可変領域配列、及び配列番号８２の軽鎖可変領域配列；又は
（ｖｉ）配列番号８９の重鎖可変領域配列、及び配列番号９０の軽鎖可変領域配列
を含む。
電荷修飾
治療剤に含まれる抗体、特に多重特異性抗体は、その中に含まれるＦａｂ分子に、それらの結合アームの１つ（又は、２つを超える抗原結合Ｆａｂ分子を含む分子の場合には複数）においてＶＨ／ＶＬ交換を有するＦａｂベースの二重／多重特異性抗原結合分子の生成において生じ得る、軽鎖と不一致重鎖の誤対合（ベンス・ジョーンズ型副生成物）を減少させるのに特に有効なアミノ酸置換を含んでもよい（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開番号国際公開第２０１５／１５０４４７号、特にその中の実施例を参照）。
したがって、特定の実施態様では、治療剤に含まれる抗体は、
（ａ）第１の抗原に特異的に結合する第１のＦａｂ分子
（ｂ）第２の抗原に特異的に結合する第２のＦａｂ分子であって、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬ及びＶＨが互いに置換されている第２のＦａｂ分子
を含み、ここで、第１の抗原が活性化Ｔ細胞抗原であり、第２の抗原が標的細胞抗原であるか、又は第１の抗原が標的細胞抗原であり、第２の抗原が活性化Ｔ細胞抗原であり；かつ
ここで、
ｉ）ａ）による第１のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が正に荷電したアミノ酸（Ｋａｂａｔによる番号付け）によって置換されており、かつａ）による第１のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸又は２１３位のアミノ酸が、負に荷電したアミノ酸（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）によって置換されており；又は
ｉｉ）ｂ）による第２のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が正に荷電したアミノ酸（Ｋａｂａｔによる番号付け）によって置換されており、かつｂ）による第２のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸又は２１３位のアミノ酸が、負に荷電したアミノ酸（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）によって置換されている。
抗体は、ｉ）及びｉｉ）において述べられた両方の修飾を含まない。第２のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬ及びＣＨ１は、互いに置換されていない（すなわち、交換されないままである）。
一実施態様では、ａ）による第１のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）（好ましい一実施態様では、独立して、リジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）により）、かつａ）による第１のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸又は２１３位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
さらなる実施態様では、ａ）による第１のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、かつａ）による第１のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
特定の実施態様では、ａ）による第１のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）（好ましい一実施態様では、独立して、リジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）により）、１２３位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）（好ましい一実施態様では、独立して、リジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）により）、かつａ）による第１のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
より特定の実施態様では、ａ）による第１のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、リジン（Ｋ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位のアミノ酸が、リジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、かつａ）による第１のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
さらにより特定の実施態様では、ａ）による第１のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、リジン（Ｋ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位のアミノ酸が、アルギニン（Ｒ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、かつａ）による第１のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
特定の実施態様では、ａ）による第１のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬは、カッパアイソタイプである。
代替的に、上記実施態様によるアミノ酸置換は、ａ）による第１のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬ及び定常ドメインＣＨ１の代わりに、ｂ）による第２のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬ及び定常ドメインＣＨ１で行われてもよい。特定のそのような実施態様では、ｂ）による第２のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬは、カッパアイソタイプのものである。
抗体は、第１の抗原に特異的に結合する第３のＦａｂ分子をさらに含んでもよい。特定の実施態様では、前記第３のＦａｂ分子は、ａ）による第１のＦａｂ分子と同一である。これらの実施態様では、上記実施態様によるアミノ酸置換は、第１のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子の各々の定常ドメインＣＬ及び定常ドメインＣＨ１において行われるであろう。代替的に、上記実施態様によるアミノ酸置換は、ｂ）による第２のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬ及び定常ドメインＣＨ１において行われてもよいが、第１のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬ及び定常ドメインＣＨ１では行われない。
特定の実施態様では、抗体はさらに、安定に会合することができる第１及び第２のサブユニットからなるＦｃドメインを含む。
治療レジメン
本発明によれば、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び治療剤は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が治療剤より前に投与され、かつ、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与が、治療剤が投与されるまでに、治療される対象においてＢ細胞の数の減少を効果的に誘導する限り、（例えば、投与経路、用量及び／又はタイミングに関して）さまざまな方法で投与され得る。
理論に縛られることを望まないが、治療剤の投与前の対象におけるＢ細胞の数の減少は、治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を減少させるか又は防止し、したがって、治療剤の投与に関連する対象における有害事象（ＩＲＲなど）を低減させるか又は防止するであろう。
一実施態様では、治療レジメンは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、治療剤の投与に関連する対象におけるサイトカイン放出を効果的に減少させる。一実施態様では、サイトカイン放出は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、少なくとも２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１に減少する。一実施態様では、サイトカイン放出は本質的に防止される。一実施態様では、サイトカイン放出の減少又は防止は、治療剤の投与後、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３又は２４時間である。一実施態様では、サイトカイン放出の減少又は防止は、治療剤の投与後最初の２４時間以内である。
一実施態様では、治療剤の投与後の対象におけるサイトカイン濃度（例えば、対象から採取した血液試料において測定される）は、治療剤の投与前の対象におけるサイトカイン濃度を超えない。一実施態様では、治療剤の投与後の対象におけるサイトカイン濃度は、治療剤の投与前の対象におけるサイトカイン濃度の１．１倍超、１．２倍超、１．５倍超、２倍超、３倍超、４倍超、５倍超、１０倍超、２０倍超、５０倍超、又は１００倍超を超えない。一実施態様では、治療剤の投与後の対象におけるサイトカイン濃度は、治療剤の投与前の対象におけるサイトカイン濃度と比較して、１．１倍未満、１．２倍未満、１．５倍未満、２倍未満、３倍未満、４倍未満、５倍未満、１０倍未満、２０倍未満、５０倍未満、又は１００倍未満、増加する。一実施態様では、治療剤の投与後の対象におけるサイトカイン濃度は、治療剤の投与後、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３又は２４時間でのサイトカイン濃度である。一実施態様では、治療剤の投与後の対象におけるサイトカイン濃度は、治療剤の投与後、最初の２４時間以内のサイトカイン濃度である。
一実施態様では、本質的に、サイトカインの濃度の増加は、治療剤の投与後、特に治療剤の投与後、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３又は２４時間で対象において検出されない。
サイトカインは、例えばＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ又はＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）アッセイなどの当該技術分野で知られている方法によって検出することができる。
サイトカインは、例えば、対象から採取した血液試料中で検出できる。一実施態様では、サイトカイン濃度は対象の血液中のものである。
いくつかの実施態様では、サイトカインは、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）及びインターロイキン－８（ＩＬ－８）からなる群、特に、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ及びＩＬ－６からなる群から選択される１つ又は複数のサイトカインである。いくつかの実施態様では、サイトカインはＴＮＦ－αである。いくつかの実施態様では、サイトカインはＩＦＮ－γである。いくつかの実施態様では、サイトカインはＩＬ－６である。いくつかの実施態様では、サイトカインはＩＬ－１０である。いくつかの実施態様では、サイトカインはＩＬ－２である。いくつかの実施態様では、サイトカインはＩＬ－８である。
いくつかの実施態様では、治療レジメンは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、治療剤の安全性を向上させる。いくつかの実施態様では、治療レジメンは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、対象における有害事象を低減させる。いくつかの実施態様では、治療レジメンは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、治療剤の有効性を増加させる。いくつかの実施態様では、治療レジメンは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、治療剤の血清半減期を増加させる。いくつかの実施態様では、治療レジメンは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、治療剤の毒性を低減させる。
本発明によれば、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間は、ＩＩ型ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である。
一実施態様では、期間は、３日から２１日間、５日から２０日間、７日から２１日間、７日から１４日間、５日から１５日間、７日から１５日間、８日から１５日間、１０日から２０日間、１０日から１５日間、１１日から１４日間、又は１２日から１３日間である。一実施態様では、期間は７日から１４日間である。一実施態様では、期間は５日から１０日間である。特定の実施態様では、期間は７日間である。
一実施態様では、期間は、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、約２４日間、約２５日間、約２６日間、約２７日間、約２８日間、約２９日間、又は約３０日間である。
一実施態様では、期間は、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、又は少なくとも１５日間である。特定の実施態様では、期間は少なくとも５日間である。さらに特定の実施態様では、期間は少なくとも７日間である。
一実施態様では、期間は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の最後の投与と治療剤の（数回の場合、最初の）投与との間である。一実施態様では、その期間中に治療剤の投与は行われない。
特定の実施態様では、Ｂ細胞の数の減少は、対象の血液中においてである。一実施態様では、Ｂ細胞は末梢血Ｂ細胞である。一実施態様では、Ｂ細胞は悪性Ｂ細胞及び正常Ｂ細胞である。一実施態様では、Ｂ細胞は悪性Ｂ細胞である。
いくつかの実施態様では、Ｂ細胞の減少は、対象の組織中においてである。一実施態様では、組織は腫瘍である。一実施態様では、組織はリンパ節である。一実施態様では、組織は脾臓である。一実施態様では、組織は脾臓の辺縁帯である。一実施態様では、Ｂ細胞はリンパ節Ｂ細胞である。一実施態様では、Ｂ細胞は脾臓Ｂ細胞である。一実施態様では、Ｂ細胞は膵臓辺縁帯Ｂ細胞である。一実施態様では、Ｂ細胞はＣＤ２０陽性Ｂ細胞、すなわちその表面にＣＤ２０を発現するＢ細胞である。
一実施態様では、Ｂ細胞の数の減少は、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％の減少である。一実施態様では、Ｂ細胞の数の減少は、Ｂ細胞の完全な消失である。特定の実施態様では、Ｂ細胞の数の減少は、対象の（末梢）血液中のＢ細胞の数の少なくとも９０％、特に少なくとも９５％の減少である。一実施態様では、Ｂ細胞の数の減少は、対象へのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の（数回の場合、最初の）投与前の対象におけるＢ細胞の数と比較した減少である。
対象のＢ細胞の数は、ＣＤ２０、ＣＤ１９、及び／又はＰＡＸ５などのＢ細胞マーカーに対する抗体を使用する、フローサイトメトリー、免疫組織化学、又は免疫蛍光法など、患者の血液又は組織中のＢ細胞を定量するのに適した当該技術分野で知られている任意の方法によって決定することができる。
患者の血液又は組織中のＢ細胞マーカーのタンパク質又はｍＲＮＡレベルの定量化により、Ｂ細胞の数を間接的に決定することもできる。特定のタンパク質レベルの決定のための当該技術分野で知られている適切な方法には、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、又はウエスタンブロットなどの免疫アッセイ法が含まれ、ｍＲＮＡレベルの決定方法には、例えば定量的ＲＴ－ＰＣＲ又はマイクロアレイ技術が含まれる。上記のすべての方法及び技術は、当該技術分野で良く知られており、Ｌｏｔｔｓｐｅｉｃｈ（Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｋ，Ｓｐｅｋｔｒｕｍ Ａｋａｄｅｍｉｓｈｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，１９９８）又はＳａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，Ｕ．Ｓ．Ａ．，２００１）などの標準的な教科書から推論することができる。
特定の実施態様では、Ｂ細胞の数の減少は、対象の血液（例えば、対象から採取された血液試料）中のＢ細胞の定量化により決定される。そのような一実施態様では、Ｂ細胞はフローサイトメトリー分析により定量化される。フローサイトメトリー法（ＦＡＣＳ）は、血液又は組織試料中の細胞の定量化のために当該技術分野で良く知られている。特に、血液又は組織試料（例えば血液試料、又は組織生検（の一部））の細胞の定められた総数の中から特定の抗原（例えばＣＤ２０及び／又はＣＤ１９）を発現する細胞の数を決定することを可能とする。一実施態様では、Ｂ細胞は、抗ＣＤ１９抗体及び／又は抗ＣＤ２０抗体を使用するフローサイトメトリー分析により定量化される。
他の実施態様では、Ｂ細胞の数の減少は、前記個体の組織、例えば腫瘍（例えば、対象から採取された組織生検）中のＢ細胞の定量化により決定される。そのような一実施態様では、Ｂ細胞は、免疫組織化学分析又は免疫蛍光分析によって定量化される。一実施態様では、Ｂ細胞は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体、及び／又は抗ＰＡＸ５抗体を使用した免疫組織化学分析によって定量化される。
本発明の方法は、使用される治療剤に応じて、さまざまな疾患の治療に適用することができる。しかし、この方法は、Ｂ細胞増殖性疾患、特に、（ＣＤ２０陽性）Ｂ細胞が大量に存在する（すなわち、健常な対象と比較して、疾患に罹患している対象において、増加した数のＢ細胞が存在する）ＣＤ２０陽性Ｂ細胞疾患の治療において特に有用である。したがって、一実施態様では、疾患はＢ細胞増殖性疾患、特にＣＤ２０陽性Ｂ細胞疾患である。
一実施態様では、疾患は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、又はホジキンリンパ腫（ＨＬ）からなる群から選択される。一実施態様では、疾患は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）及び辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）からなる群から選択される。
特定の実施態様では、疾患はＮＨＬ、特に再発／難治性（ｒ／ｒ）ＮＨＬである。一実施態様では、疾患はＤＬＢＣＬである。一実施態様では、疾患はＦＬである。一実施態様では、疾患はＭＣＬである。一実施態様では、疾患はＭＺＬである。
当業者は、多くの場合、治療剤は治癒をもたらさず、部分的恩恵をもたらすだけであることを容易に認識する。いくつかの実施態様では、いくつかの恩恵を有する生理学的変化も治療的に有益と考えられる。したがって、いくつかの実施態様では、生理学的変化をもたらす治療剤の量は、「有効量」又は「治療的有効量」と考えられる。
治療を必要とする対象、患者、又は個体は、典型的には哺乳動物であり、より具体的にはヒトである。
特定の実施態様では、対象はヒトである。一実施態様では、対象は、Ｂ細胞増殖性疾患、特に、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、又はホジキンリンパ腫（ＨＬ）に罹患している。
一実施態様では、対象は、再発／難治性（ｒ／ｒ）ＮＨＬに罹患している。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与
本発明によれば、例えば、治療剤の投与前に対象におけるＢ細胞の数を効果的に減少させるために、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間、及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の用量が選択される。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、非経口、肺内、及び鼻腔内を含む任意の適切な手段によって投与することができ、また、局所治療が望まれる場合には病巣内投与であってもよい。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内又は皮下投与が含まれる。投薬は、その投与が短期間又は長期間であるかどうかに部分的に依存して、任意の適切な経路、例えば、静脈内又は皮下注射などの注射により行うことができる。本明細書では、さまざまな時点にわたる単回投与又は複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むがこれらに限定されないさまざまな投薬スケジュールが考慮される。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、非経口的に、特に、例えば静脈内注入により静脈内に投与される。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、医療実施基準に合致する様式で製剤化され、投薬され、投与されるであろう。この文脈で考慮すべき要因は、治療される特定の疾患、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、疾患の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール及び医師にとって既知の他の要因が挙げられる。
一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与は単回投与である。別の実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与は、２回以上の別々の投与である。一実施態様では、２回以上の別々の投与は、２日以上の連続した日においてである。一実施態様では、治療剤の投与の前又は後に、対象に対してＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のさらなる投与は行われない。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与は、単回投与、又は連続する２日間に２回の投与であり、かつＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のさらなる投与は行われない。一実施態様では、期間は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の最後の投与と治療剤の（数回の場合、最初の）投与との間である。
一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与は、対象におけるＢ細胞を減少させるために有効なＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の用量である。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の用量は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間内の、対象におけるＢ細胞の数の減少のために有効である。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間、及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与された用量は、ＩＩ型ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である。
一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与は、約２ｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の用量である。約２ｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の用量は、約２ｇの単回投与として、又は数回の投与として、例えば、各約１ｇの２回投与、若しくは例えば１００ｍｇ、９００ｍｇ及び１０００ｍｇの３回投与として対象に投与されてもよい。一実施態様では、約２ｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１回の投与が対象に行われる。別の実施態様では、約１ｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２回の投与が、それぞれ連続した２日間において対象に行われる。さらに別の実施態様では、（ｉ）約１００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、（ｉｉ）約９００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、及び（ｉｉｉ）約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の３回の投与（（ｉ）から（ｉｉｉ））が、連続した３日間において対象に行われる。一実施態様では、約１ｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２回の投与が、治療剤の投与の１０日前から１５日前までの連続する２日間において対象に行われる。一実施態様では、治療剤の投与の１０日前から１５日前に、約２ｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１回の投与が対象に行われる。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象へのさらなる投与は行われない。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前に（少なくとも同じ治療コースの範囲内ではない）、対象への治療剤の投与は行われない。
一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与は、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の用量である。約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の用量を、約１０００ｍｇの単回投与として、又は数回の投与として、例えば各約５００ｍｇの２回の投与として、対象に投与してもよい。特定の実施態様では、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１回の投与が対象に行われる。別の実施態様では、約５００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の２回の投与が、それぞれ連続した２日間において対象に行われる。一実施態様では、治療剤の投与の７日前に、約１０００ｍｇのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１回の投与が対象に行われる。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象へのさらなる投与は行われない。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前に（少なくとも同じ治療コースの範囲内ではない）、対象への治療剤の投与は行われない。
一実施態様では、治療レジメンは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前の前投薬の投与をさらに含む。実施態様では、前投薬は、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、デキサメタゾン、又はメチルプレドニゾロンなど）、パラセタモール／アセトアミノフェン、及び／又は抗ヒスタミン剤（例えば、ジフェンヒドラミンなど）を含む。一実施態様では、前投薬は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与の少なくとも６０分前に投与される。
一実施態様では、治療レジメンは、治療剤の投与前の、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体以外の免疫抑制剤（及び任意で上記の前投薬）の投与を含まない。一実施態様では、治療レジメンは、治療剤の投与前の、メトトレキサート、アザチオプリン、６－メルカプトプリン、レフルノミド、シクロスポリン、タクロリムス／ＦＫ５０６、ミコフェノール酸モフェチル及びミコフェノール酸ナトリウムの群から選択される薬剤の投与を含まない。一実施態様では、治療レジメンは、治療剤の投与前のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体に加えて、さらなる抗体の投与を含まない。
治療剤の投与
治療剤は、非経口、肺内、及び鼻腔内を含む任意の適切な手段によって投与することができ、また、局所治療が望まれる場合には病巣内投与であってもよい。しかしながら、本発明の方法は、非経口、特に静脈内注入により投与される治療剤に関して特に有用である。
非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内又は皮下投与が含まれる。投薬は、その投与が短期間又は長期間であるかどうかに部分的に依存して、任意の適切な経路、例えば、静脈内又は皮下注射などの注射により行うことができる。本明細書では、さまざまな時点にわたる単回投与又は複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むがこれらに限定されないさまざまな投薬スケジュールが考慮される。一実施態様では、治療剤は、非経口的に、特に静脈内に投与される。特定の実施態様では、治療剤は、静脈内注入によって投与される。
治療剤は、医療実施基準に合致する様式で製剤化され、投薬され、投与されるであろう。この文脈で考慮すべき要因は、治療される特定の疾患、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、疾患の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール及び医師にとって既知の他の要因が挙げられる。治療剤は、必要ではないが任意で、問題の疾患の予防又は治療のために現在使用されている１つ又は複数の薬剤とともに製剤化される。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する治療剤の量、疾患又は治療の種類、及び上記で議論した他の要因に依存する。これらは、一般的に、本明細書に記載されているのと同じ投与量及び投与経路で、又は本明細書に記載された用量の約１％から９９％で、又は経験的／臨床的に適当であると判断された任意の用量及び任意の経路によって使用される。
疾患の予防又は治療のために、治療剤の適切な投与量は（単独で、又は１つ若しくは複数の他の追加の治療剤と組み合わせて使用する場合）、治療する疾患の種類、治療剤の種類、疾患の重症度及び経過、治療剤が予防目的又は治療目的のどちらで投与されるか、治療歴、患者の病歴及び治療剤に対する応答、並びに主治医の裁量に依存するであろう。治療剤は、単回又は一連の治療にわたって患者へ適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば１回以上の個別投与によるか、連続注入によるかに関わらず、約１μｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ）の治療剤が対象への投与のための初期候補用量となり得る。１つの典型的な１日の投与量は、上記の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上の範囲であろう。数日間以上にわたる反復投与の場合には、状態に応じて、治療は疾患症状の望ましい抑制が起こるまで一般に持続されるであろう。治療剤の１つの例示的な投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの１つ又は複数の用量（又はこれらの任意の組み合わせ）が対象に投与され得る。そのような用量は、間欠的に、例えば毎週、２週間ごと又は３週間ごとに（例えば、対象が治療剤の約２から約２０用量、又は例えば約６用量を受けるように）投与され得る。初回のより高い負荷用量と、それに続く１回以上のより低い用量、又は初回のより低い用量と、それに続く１回以上のより高い用量が投与されてもよい。例示的な投薬レジメンは、治療剤の約１０ｍｇの初期用量を投与し、その後に約２０ｍｇの隔週用量を投与することを含む。しかしながら、他の投与レジメンも有用であり得る。この治療の進行は従来の技術及びアッセイによって容易にモニターされる。
一実施態様では、治療剤の投与は単回投与である。特定の実施態様では、治療剤の投与は２回以上の投与である。そのような一実施態様では、治療剤は毎週、２週間ごと、又は３週間ごと、特に２週間ごとに投与される。一実施態様では、治療剤は、治療的有効量で投与される。一実施態様では、治療剤は、約５０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約２００μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約６００μｇ／ｋｇ、約７００μｇ／ｋｇ、約８００μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、又は約１０００μｇ／ｋｇの用量で投与される。一実施態様では、治療剤は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンにおける治療剤の用量よりも多い用量で投与される。一実施態様では、治療剤の投与は、治療剤の第１の用量の初回投与、及び治療剤の第２の用量の１回以上のその後の投与を含み、ここで、第２の用量は第１の用量よりも多い。一実施態様では、治療剤の投与は、治療剤の第１の用量の初回投与、及び治療剤の第２の用量の１回以上のその後の投与を含み、ここで、第１の用量は第２の用量よりも少なくない。
一実施態様では、本発明による治療レジメンにおける治療剤の投与は、（少なくとも同じ治療コースの範囲内で）対象へのその治療剤の第１の投与である。一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与前に対象への治療剤の投与は行われない。
本発明において、治療剤は、単独で、又は他の薬剤と組み合わせて治療において使用することができる。例えば、治療剤は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与されてもよい。特定の実施態様では、追加の治療剤は、免疫療法剤である。
上記のそのような併用治療は、併用投与（２つ以上の治療剤が、同一又は別々の製剤に含まれている）、及び治療剤の投与が、追加の治療剤又は薬剤の投与の前、投与と同時、及び／又は投与の後に起こり得る別々の投与を包含する。一実施態様では、治療剤の投与及び追加の治療剤の投与は、互いに、約１か月以内、又は約１、２若しくは３週間以内、又は１、２、３、４、５若しくは６日間以内に生じる。
製造品
本発明の他の態様では、製造品、例えば本明細書に記載されるように、疾患の治療、予防及び／又は診断、又はサイトカイン放出の減少に有用な物質を含むキットが提供される。製造品は、容器、及び容器上又は容器に付随するラベル又は添付文書を含む。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグなどが含まれる。容器はガラス又はプラスチックなどのさまざまな材料から形成され得る。容器は、状態の治療、予防、及び／又は診断に有効な、単独の又は別の組成物と組み合わせた化合物を収容し、又はサイトカイン放出を減少させるのに有効な組成物を収容し、無菌のアクセスポートを有することができる（例えば、容器は皮下注射針により穿孔可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体又は治療剤である。ラベル又は添付文書には、組成物が、選択した状態を治療するために、及び／又はサイトカイン放出を減少させるために使用されることが示されている。さらに、製造品は、（ａ）本明細書に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む組成物を中に収容する第１の容器；及び（ｂ）本明細書に記載の治療剤を含む組成物を中に収容する第２の容器を含んでもよい。本発明のこの実施態様における製造品は、組成物が、特定の状態を治療するため、及び／又はサイトカイン放出を減少させるために使用され得ることを示す添付文書をさらに含んでもよい。あるいは、又はさらに、製造品は、薬学的に許容される緩衝剤、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液を含む第２（又は第３）の容器をさらに含んでもよい。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及び使用者の観点から望ましい他の物質をさらに含んでもよい。
用語「ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニスト」は、ＰＤ－Ｌ１と、ＰＤ－１、Ｂ７－１などのその結合パートナーのうちの１つ又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、抑制し、又は妨害する分子を指す。いくつかの実施様態では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１のその結合パートナーに対する結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１及び／又はＢ７－１に対する結合を阻害する。いくつかの実施様態では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ－Ｌ１と、ＰＤ－１、Ｂ７－１などの結合パートナーの１つ又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、抑制し、又は妨害する他の分子を含む。一実施態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１を介したＴリンパ球媒介シグナル伝達により発現される細胞表面タンパク質によって又は同タンパク質を介して媒介される負の共刺激シグナルを減少させ、機能障害性のＴ細胞の機能障害性を低下させる（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）。いくつかの実施様態では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。いくつかの実施態様では、抗体はヒト化抗体、キメラ抗体又はヒト抗体である。いくつかの実施態様では、抗体は抗原結合断片である。いくつかの実施様態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖからなる群から選択される。特定の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の特定の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＤＸ－１１０５である。さらに別の特定の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ）である。さらに別の特定の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＤＸ－１１０５である。さらに別の特定の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。さらに別の特定の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）である。さらに別の特定の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブ）である。
いくつかの実施様態では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ－１結合アンタゴニストである。いくつかの実施様態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１の、そのリガンド結合パートナーに対する結合を阻害する。いくつかの実施様態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１に対する結合を阻害する。いくつかの実施様態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ２に対する結合を阻害する。いくつかの実施様態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２両方に対する結合を阻害する。いくつかの実施様態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは抗体である。いくつかの実施様態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＭＤＸ１１０６（ニボルマブ）、ＭＫ－３４７５（ペンブロリズマブ）、ＣＴ－０１１（ピディリズマブ）、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＰＤＲ００１、ＲＥＧＮ２８１０、及びＢＧＢ－１０８からなる群から選択される。
いくつかの実施様態では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストである。いくつかの実施様態では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１に対する結合を阻害する。いくつかの実施様態では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１のＢ７－１に対する結合を阻害する。いくつかの実施様態では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１及びＢ７－１両方に対する結合を阻害する。いくつかの実施様態では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。いくつかの実施様態では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ）、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＤＸ－１１０５、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）、及びＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブ）からなる群から選択される。特定の実施様態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ）である。いくつかの実施態様では、ＭＰＤＬ３２８０Ａは、３週間ごとに約８００ｍｇから約１５００ｍｇ（例えば、３週間ごとに約１０００ｍｇから約１３００ｍｇ、例えば、３週間ごとに約１１００ｍｇから約１２００ｍｇ）の用量で投与される。いくつかの実施様態では、ＭＰＤＬ３２８０Ａは、３週間ごとに約１２００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施様態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号１０７のＨＶＲ－Ｈ１配列、配列番号１０８のＨＶＲ－Ｈ２配列、及び配列番号１０９のＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖；及び／又は配列番号１１０のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号１１１のＨＶＲ－Ｌ２配列、及び配列番号１１２のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施様態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号１１３又は１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施様態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１０／０７７６３４号及び米国特許第８２１７１４９号に記載される抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０の３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／又は抗体ＹＷ２４３５５．Ｓ７０の３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施様態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０の重鎖可変領域配列及び／又は抗体ＹＷ２４３５５．Ｓ７０の軽鎖可変領域配列を含む。
いくつかの実施様態では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施様態では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストは抗体である。いくつかの実施様態では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストはイムノアドヘシンである。
いくつかの実施様態では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストは、抗体（例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、又は抗ＰＤ－Ｌ２抗体）であり、非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）部位の変異を含む。いくつかの実施様態では、非グリコシル化部位の変異は置換変異である。いくつかの実施様態では、置換変異は、アミノ酸残基Ｎ２９７、Ｌ２３４、Ｌ２３５、及び／又はＤ２６５（ＥＵ番号付け）におけるものである。いくつかの実施様態では、置換変異は、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ａからなる群から選択される。いくつかの実施様態では、置換変異は、Ｄ２６５Ａ変異及びＮ２９７Ｇ変異である。いくつかの実施様態では、非グリコシル化部位の変異は、抗体のエフェクター機能を低減させる。いくつかの実施様態では、ＰＤ－１軸結合アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、又は抗ＰＤ－Ｌ２抗体）は、ＥＵ番号付けによる２９７位にＡｓｎからＡｌａへの置換を有するヒトＩｇＧ１である。
用語「ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニスト」は、ＰＤ－Ｌ２と、ＰＤ－１などのその結合パートナーのうちの１つ又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、抑制し、又は妨害する分子を指す。いくつかの実施様態では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ２の、その結合パートナーの１つ又は複数に対する結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ２のＰＤ－１に対する結合を阻害する。いくつかの実施様態では、ＰＤ－Ｌ２アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ－Ｌ２と、ＰＤ－１などのその結合パートナーのうちの１つ又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させ、遮断し、阻害し、抑制し、又は妨害する他の分子を含む。一実施態様では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ２を介したＴリンパ球媒介シグナル伝達により発現される細胞表面タンパク質によって又は同タンパク質を介して媒介される負の共刺激シグナルを減少させ、機能障害性のＴ細胞の機能障害性を低下させる（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）。いくつかの実施様態では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストはイムノアドヘシンである。
本発明のさらなる態様
本発明のさらなる実施態様では、併用治療は、抗ＣＤ２０抗体の少なくとも第１の投与及び抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の少なくとも第２の投与を含み、ここで、少なくとも第１の投与と少なくとも第２の投与との間の期間は、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与に応答した個体におけるＢ細胞の数の減少には不十分である。
さらなる実施態様では、併用治療は、イムノアドヘシン、好ましくは、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２の細胞外又はＰＤ－１結合部分を含むイムノアドヘシン、より好ましくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体の投与を含み得る。一実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ－１１０５、及びＭＥＤＩ４７３６からなる群から選択される。抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０は、国際公開第２０１０／０７７６３４号に記載される抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。ＢＭＳ－９３６５５９としても知られるＭＤＸ－１１０５は、国際公開第２００７／００５８７４号に記載される抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。ＭＥＤＩ４７３６は、国際公開第２０１１／０６６３８９号及び米国特許出願公開第２０１３／０３４５５９号に記載される抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体である。一実施態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はアテゾリズマブである。
実施態様
以下に、本発明の実施態様のいくつかを列挙する。
１．対象における疾患を治療する方法であって、該方法が、
（ｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象への投与、
及び連続して一定期間後に
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化治療剤の対象への投与
を含む治療レジメンを含み、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間が、ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である、方法。
２．治療レジメンが、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、治療剤の投与に関連する対象におけるサイトカイン放出を効果的に減少させる、実施態様１に記載の方法。
３．対象における治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を減少させるための方法であって、治療剤の投与前の対象へのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与を含む、方法。
４．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間が、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である、実施態様３に記載の方法。
５．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様１から４のいずれか１項に記載の方法。
６．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様１から５のいずれか１項に記載の方法。
７．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、ＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体である、実施態様１から６のいずれか１項に記載の方法。
８．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、非操作抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の増加した割合を有するように操作される、実施態様１から７のいずれか１項に記載の方法。
９．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約４０％が非フコシル化されている、実施態様１から８のいずれか１項に記載の方法。
１０．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、実施態様１から９のいずれか１項に記載の方法。
１１．治療剤が、抗体、特に多重特異性抗体を含む、実施態様１から１０のいずれか１項に記載の方法。
１２．抗体が、活性化Ｔ細胞抗原、特に、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、及びＣＤ１２７からなる群から選択される抗原、より具体的にはＣＤ３、最も具体的にはＣＤ３εに特異的に結合する、実施態様１１に記載の方法。
１３．抗体が、配列番号１２の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号１４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号１５の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様１１又は１２に記載の方法。
１４．抗体が、配列番号１８の重鎖可変領域配列及び配列番号１９の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様１１から１３のいずれか１項に記載の方法。
１５．抗体が、Ｂ細胞抗原、特にＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５からなる群から選択される抗原、より具体的にはＣＤ２０又はＣＤ１９、最も具体的にはＣＤ２０に特異的に結合する、実施態様１１から１４のいずれか１項に記載の方法。
１６．抗体が、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様１５に記載の方法。
１７．抗体が、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様１５又は１６に記載の方法。
１８．抗体が、（ｉ）実施態様１２から１４のいずれか１項に定義される抗体及び（ｉｉ）実施態様１５から１７のいずれか１項に定義される抗体を含む二重特異性抗体である、実施態様１から１７のいずれか１項に記載の方法。
１９．治療剤が、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢを含む、実施態様１から１８のいずれか１項に記載の方法。
２０．治療剤が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、特に、Ｂ細胞抗原に特異的に結合するＣＡＲ、より具体的にはＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５の群から選択される抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現するＴ細胞を含む、実施態様１から１０のいずれか１項に記載の方法。
２１．疾患が、Ｂ細胞増殖性疾患、特にＣＤ２０陽性Ｂ細胞疾患であり、かつ／又は非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、及びホジキンリンパ腫（ＨＬ）からなる群から選択される疾患である、実施態様１から２０のいずれか１項に記載の方法。
２２．対象における疾患を治療する方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であって、該方法が、
（ｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象への投与、
及び連続して一定期間後に
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化治療剤の対象への投与
を含む治療レジメンを含み、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間が、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
２３．治療レジメンが、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、治療剤の投与に関連する対象におけるサイトカイン放出を効果的に減少させる、実施態様２２に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
２４．治療剤の投与前の対象へのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与を含む、対象における治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を減少させるための方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
２５．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間が、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である、実施態様２４に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
２６．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様２２から２５のいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
２７．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様２２から２６のいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
２８．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、ＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体である、実施態様２２から２７のいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
２９．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、非操作抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の増加した割合を有するように操作される、実施態様２２から２８のいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
３０．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約４０％が非フコシル化されている、実施態様２２から２９のいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
３１．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、実施態様２２から３０のいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
３２．治療剤が、抗体、特に多重特異性抗体を含む、実施態様２２から３１のいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
３３．治療剤に含まれる抗体が、活性化Ｔ細胞抗原、特に、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、及びＣＤ１２７からなる群から選択される抗原、より具体的にはＣＤ３、最も具体的にはＣＤ３εに特異的に結合する、実施態様３２に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
３４．治療剤に含まれる抗体が、配列番号１２の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号１４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号１５の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様３２又は３３に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
３５．治療剤に含まれる抗体が、配列番号１８の重鎖可変領域配列及び配列番号１９の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様３２から３４のいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
３６．治療剤に含まれる抗体が、Ｂ細胞抗原、特にＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５からなる群から選択される抗原、より具体的にはＣＤ２０又はＣＤ１９、最も具体的にはＣＤ２０に特異的に結合する、実施態様３２から３５のいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
３７．治療剤に含まれる抗体が、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様３６に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
３８．治療剤に含まれる抗体が、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様３６又は３７に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
３９．抗体が、（ｉ）実施態様３３から３５のいずれか１項に定義される抗体及び（ｉｉ）実施態様３６から３８のいずれか１項に定義される抗体を含む二重特異性抗体である、実施態様２２から３８のいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
４０．治療剤が、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢを含む、実施態様２２から３９のいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
４１．治療剤が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、特に、Ｂ細胞抗原に特異的に結合するＣＡＲ、より具体的にはＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５の群から選択される抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現するＴ細胞を含む、実施態様２２から３１のいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
４２．疾患が、Ｂ細胞増殖性疾患、特にＣＤ２０陽性Ｂ細胞疾患であり、かつ／又は非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、及びホジキンリンパ腫（ＨＬ）からなる群から選択される疾患である、実施態様２２から４１のいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
４３．対象におけるＴ細胞活性化治療剤の投与に関連するサイトカイン放出の減少のための医薬の製造におけるＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の使用であって、該医薬が、
（ｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象への投与、
及び連続して一定期間後に
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化治療剤の対象への投与
を含む治療レジメンにおいて使用されるべきであり、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間が、ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である、使用。
４４．対象における疾患の治療のための医薬の製造におけるＴ細胞活性化治療剤の使用であって、ここで治療が、
（ｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象への投与、
及び連続して一定期間後に
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化治療剤の対象への投与
を含む治療レジメンを含み、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間が、ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である、使用。
４５．治療レジメンが、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、対象における治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を効果的に減少させる、実施態様４３又は４４に記載の使用。
４６．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様４３から４５のいずれか１項に記載の使用。
４７．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様４３から４６のいずれか１項に記載の使用。
４８．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、ＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体である、実施態様４３から４７のいずれか１項に記載の使用。
４９．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、非操作抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の増加した割合を有するように操作される、実施態様４３から４８のいずれか１項に記載の使用。
５０．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約４０％が非フコシル化されている、実施態様４３から４９のいずれか１項に記載の使用。
５１．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、実施態様４３から５０のいずれか１項に記載の使用。
５２．治療剤が、抗体、特に多重特異性抗体を含む、実施態様４３から５１のいずれか１項に記載の使用。
５３．抗体が、活性化Ｔ細胞抗原、特に、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、及びＣＤ１２７からなる群から選択される抗原、より具体的にはＣＤ３、最も具体的にはＣＤ３εに特異的に結合する、実施態様５１に記載の使用。
５４．抗体が、配列番号１２の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号１４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号１５の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様５２又は５３に記載の使用。
５５．抗体が、配列番号１８の重鎖可変領域配列及び配列番号１９の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様５２から５４のいずれか１項に記載の使用。
５６．抗体が、Ｂ細胞抗原、特にＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５からなる群から選択される抗原、より具体的にはＣＤ２０又はＣＤ１９、最も具体的にはＣＤ２０に特異的に結合する、実施態様５２から５５のいずれか１項に記載の使用。
５７．抗体が、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様５６に記載の使用。
５８．抗体が、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様５６又は５７に記載の使用。
５９．抗体が、（ｉ）実施態様５３から５５のいずれか１項に定義される抗体及び（ｉｉ）実施態様５６から５８のいずれか１項に定義される抗体を含む二重特異性抗体である、実施態様４３から５８のいずれか１項に記載の使用。
６０．治療剤が、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢを含む、実施態様４３から５９のいずれか１項に記載の使用。
６１．治療剤が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、特に、Ｂ細胞抗原に特異的に結合するＣＡＲ、より具体的にはＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５の群から選択される抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現するＴ細胞を含む、実施態様４３から５１のいずれか１項に記載の使用。
６２．疾患が、Ｂ細胞増殖性疾患、特にＣＤ２０陽性Ｂ細胞疾患であり、かつ／又は非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、及びホジキンリンパ腫（ＨＬ）からなる群から選択される疾患である、実施態様４３から６１のいずれか１項に記載の使用。
６３．対象におけるＴ細胞活性化治療剤の投与に関連するサイトカイン放出の減少のためのキットであって、該キットが、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体組成物と、
（ｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体組成物の対象への投与、
及び連続して一定期間後に
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化治療剤の対象への投与
を含む治療レジメンにおいてＩＩ型抗ＣＤ２０抗体組成物を使用するための説明書とを含むパッケージを含み、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体組成物の投与と治療剤の投与との間の期間が、ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である、キット。
６４．Ｔ細胞活性化治療剤組成物をさらに含む、実施態様６３に記載のキット。
６５．対象における疾患の治療のためのキットであって、該キットが、Ｔ細胞活性化治療剤組成物と、
（ｉｉｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象への投与、
及び連続して一定期間後に
（ｉｖ）Ｔ細胞活性化治療剤組成物の対象への投与
を含む治療レジメンにおいて治療剤組成物を使用するための説明書とを含むパッケージを含み、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤組成物の投与との間の期間が、ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である、キット。
６６．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体組成物をさらに含む、実施態様６５に記載のキット。
６７．治療レジメンが、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体組成物の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、対象における治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を効果的に減少させる、実施態様６３から６６のいずれか１項に記載のキット。
６８．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様６３から６７のいずれか１項に記載のキット。
６９．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様６３から６８のいずれか１項に記載のキット。
７０．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、ＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体である、実施態様６３から６９のいずれか１項に記載のキット。
７１．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、非操作抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の増加した割合を有するように操作される、実施態様６３から７０のいずれか１項に記載のキット。
７２．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約４０％が非フコシル化されている、実施態様６３から７１のいずれか１項に記載のキット。
７３．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、実施態様６３から７２のいずれか１項に記載のキット。
７４．治療剤が、抗体、特に多重特異性抗体を含む、実施態様６３から７３のいずれか１項に記載のキット。
７５．抗体が、活性化Ｔ細胞抗原、特に、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、及びＣＤ１２７からなる群から選択される抗原、より具体的にはＣＤ３、最も具体的にはＣＤ３εに特異的に結合する、実施態様７４に記載のキット。
７６．抗体が、配列番号１２の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号１４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号１５の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様７４又は７５に記載のキット。
７７．抗体が、配列番号１８の重鎖可変領域配列及び配列番号１９の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様７４から７６のいずれか１項に記載のキット。
７８．抗体が、Ｂ細胞抗原、特にＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５からなる群から選択される抗原、より具体的にはＣＤ２０又はＣＤ１９、最も具体的にはＣＤ２０に特異的に結合する、実施態様７４から７７のいずれか１項に記載のキット。
７９．抗体が、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様７８に記載のキット。
８０．抗体が、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様７８又は７９に記載のキット。
８１．抗体が、（ｉ）実施態様７５から７７のいずれか１項に定義される抗体及び（ｉｉ）実施態様７８から８０のいずれか１項に定義される抗体を含む二重特異性抗体である、実施態様７８から８０のいずれか１項に記載のキット。
８２．治療剤が、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢを含む、実施態様６３から８１のいずれか１項に記載のキット。
８３．治療剤が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、特に、Ｂ細胞抗原に特異的に結合するＣＡＲ、より具体的にはＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５の群から選択される抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現するＴ細胞を含む、実施態様６３から７３のいずれか１項に記載のキット。
８４．疾患が、Ｂ細胞増殖性疾患、特にＣＤ２０陽性Ｂ細胞疾患であり、かつ／又は非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、及びホジキンリンパ腫（ＨＬ）からなる群から選択される疾患である、実施態様６３から８３のいずれか１項に記載のキット。
８５．対象における疾患を治療する方法における使用のためのＴ細胞活性化治療剤であって、該方法が、
（ｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象への投与、
及び連続して一定期間後に
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化治療剤の対象への投与
を含む治療レジメンを含み、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間が、ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である、Ｔ細胞活性化治療剤。
８６．治療レジメンが、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、治療剤の投与に関連する対象におけるサイトカイン放出を効果的に減少させる、実施態様８５に記載のＴ細胞活性化治療剤。
８７．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様８５又は８６に記載のＴ細胞活性化治療剤。
８８．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様８５から８７のいずれか１項に記載のＴ細胞活性化治療剤。
８９．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、ＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体である、実施態様８５から８８のいずれか１項に記載のＴ細胞活性化治療剤。
９０．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、非操作抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の増加した割合を有するように操作される、実施態様８５から８９のいずれか１項に記載のＴ細胞活性化治療剤。
９１．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約４０％が非フコシル化されている、実施態様８５から９０のいずれか１項に記載のＴ細胞活性化治療剤。
９２．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、実施態様８５から９１のいずれか１項に記載のＴ細胞活性化治療剤。
９３．治療剤が、抗体、特に多重特異性抗体を含む、実施態様８５から９２のいずれか１項に記載のＴ細胞活性化治療剤。
９４．抗体が、活性化Ｔ細胞抗原、特に、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、及びＣＤ１２７からなる群から選択される抗原、より具体的にはＣＤ３、最も具体的にはＣＤ３εに特異的に結合する、実施態様９３に記載のＴ細胞活性化治療剤。
９５．抗体が、配列番号１２の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号１４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号１５の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様９３又は９４に記載のＴ細胞活性化治療剤。
９６．抗体が、配列番号１８の重鎖可変領域配列及び配列番号１９の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様９３から９５のいずれか１項に記載のＴ細胞活性化治療剤。
９７．抗体が、Ｂ細胞抗原、特にＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５からなる群から選択される抗原、より具体的にはＣＤ２０又はＣＤ１９、最も具体的にはＣＤ２０に特異的に結合する、実施態様９３から９６のいずれか１項に記載のＴ細胞活性化治療剤。
９８．抗体が、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、実施態様９７に記載のＴ細胞活性化治療剤。
９９．抗体が、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む、実施態様９７又は９８に記載のＴ細胞活性化治療剤。
１００．抗体が、（ｉ）実施態様９４から９６のいずれか１項に定義される抗体及び（ｉｉ）実施態様９７から９９のいずれか１項に定義される抗体を含む二重特異性抗体である、実施態様８５から９９のいずれか１項に記載のＴ細胞活性化治療剤。
１０１．治療剤が、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢを含む、実施態様８５から１００のいずれか１項に記載のＴ細胞活性化治療剤。
１０２．治療剤が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、特に、Ｂ細胞抗原に特異的に結合するＣＡＲ、より具体的にはＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５の群から選択される抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現するＴ細胞を含む、実施態様８５から９２のいずれか１項に記載のＴ細胞活性化治療剤。
１０３．疾患が、Ｂ細胞増殖性疾患、特にＣＤ２０陽性Ｂ細胞疾患であり、かつ／又は非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、及びホジキンリンパ腫（ＨＬ）からなる群から選択される疾患である、実施態様８５から１０２のいずれか１項に記載のＴ細胞活性化治療剤。
以下において、本発明のさらなる態様が与えられる。
Ｉ．対象における疾患を治療する方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であって、該方法が、
（ｉ）ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の対象への投与、及び連続して一定期間後に
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化治療剤の対象への投与
を含む治療レジメンを含み、
ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間が、ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＩＩ．治療レジメンが、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与なしの対応する治療レジメンと比較して、治療剤の投与に関連する対象におけるサイトカイン放出を効果的に減少させる、態様Ｉに記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＩＩＩ．治療剤の投与前の対象へのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与を含む、対象におけるＴ細胞活性化治療剤の投与に関連するサイトカイン放出を減少させるための方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＩＶ．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の投与と治療剤の投与との間の期間が、ＣＤ２０抗体の投与に応答した、対象におけるＢ細胞の数の減少のために十分である、態様ＩＩＩに記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
Ｖ．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、態様ＩからＩＶのいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＶＩ．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む、態様ＩからＶのいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＶＩＩ．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、ＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体であり、ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約４０％が非フコシル化されている、態様ＩからＶＩのいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＶＩＩＩ．ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、態様ＩからＶＩＩのいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＩＸ．治療剤が、抗体、特に多重特異性抗体を含む、態様ＩからＸＩＩＩのいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
Ｘ．治療剤に含まれる抗体が、活性化Ｔ細胞抗原、特に、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、及びＣＤ１２７からなる群から選択される抗原、より具体的にはＣＤ３、最も具体的にはＣＤ３εに特異的に結合する、態様ＩＸに記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＸＩ．治療剤に含まれる抗体が、配列番号１２の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号１４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号１５の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１６のＬＣＤＲ２、及び配列番号１７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、態様ＩＸ又はＸに記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＸＩＩ．治療剤に含まれる抗体が、配列番号１８の重鎖可変領域配列及び配列番号１９の軽鎖可変領域配列を含む、態様ＩＸからＸＩのいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＸＩＩＩ．治療剤に含まれる抗体が、Ｂ細胞抗原、特にＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５からなる群から選択される抗原、より具体的にはＣＤ２０又はＣＤ１９、最も具体的にはＣＤ２０に特異的に結合する、態様ＩＸからＸＩＩのいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＸＩＶ．治療剤に含まれる抗体が、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；及び配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、態様ＸＩＩＩに記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＸＶ．治療剤に含まれる抗体が、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む、態様ＸＩＩＩ又はＩＶに記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＸＶＩ．抗体が、（ｉ）請求項１０から１２のいずれか１項に定義される抗体及び（ｉｉ）態様ＸＩＩＩからＸＶのいずれか１項に定義される抗体を含む二重特異性抗体である、態様ＩからＸＶのいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＸＶＩＩ．治療剤が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、特に、Ｂ細胞抗原に特異的に結合するＣＡＲ、より具体的にはＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＲＯＲ－１、ＣＤ３７及びＣＤ５の群から選択される抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現するＴ細胞を含む、態様ＩからＶＩＩＩのいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
ＸＶＩＩＩ．疾患が、Ｂ細胞増殖性疾患、特にＣＤ２０陽性Ｂ細胞疾患であり、かつ／又は非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、及びホジキンリンパ腫（ＨＬ）からなる群から選択される疾患である、態様ＩからＸＶＩＩのいずれか１項に記載のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
以下は、本発明の方法及び組成物の例である。上記で提供された一般的な説明を前提として、さまざまな他の実施態様が実施され得ることが理解される。
実施例１
完全ヒト化マウスにおけるＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ±オビヌツズマブ前治療（Ｇｐｔ）によって媒介される抗腫瘍活性及びサイトカイン放出の評価
我々は、Ｇｐｔが、完全ヒト化ＮＯＧマウスにおけるＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの第１の投与に関連するサイトカイン放出を防止することができるかどうかを調査した。
すべての治療選択肢（オビヌツズマブ、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ及びＧｐｔ＋ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ）は、第１の治療投与の既に２４時間後に検出された末梢血Ｂ細胞の効率的な枯渇をもたらした（図１Ａ）。Ｔ細胞数は、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの第１の投与の２４時間後において、末梢血中における一過性の減少が明らかとなったが、オビヌツズマブ又はＧｐｔ＋ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの投与後はそうではなかった（図１Ｂ）。したがって、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの前に投与される場合、オビヌツズマブの単回投与は、末梢血中におけるＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢを介したＴ細胞の減少を抑制する。
異なる実験群における治療マウスの血液中に放出されたサイトカインの分析により、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ治療は、血液中におけるいくつかのサイトカインの一過性の上昇を誘導し、これは第１の投与後２４時間でピークに達し、７２時間までにほぼベースラインレベルに戻った（図２）。ＭＩＰ－１ｂ、ＩＬ－５、ＩＬ－１０、ＭＣＰ－１は、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ－６と同様の傾向を示す（示されない）。Ｇｐｔは、第１のＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ注射に関連する末梢血中におけるサイトカイン放出を強く減少させた（表２）。
表２．ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ及びＧｐｔ＋ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ治療によって完全ヒト化ＮＯＧマウスの末梢血中に放出されるサイトカイン
Figure 2023175681000002
ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの抗腫瘍活性は、オビヌツズマブによる前治療によって影響を受けなかった（図３）。オビヌツズマブ治療は、単剤療法として、強力な抗腫瘍活性を示したが、この腫瘍及びマウスモデルにおいてＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢと比較した場合、反応速度は遅くなった。
したがって、データは、Ｇｐｔが第１のＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ注射に関連するサイトカイン放出を減少させるが、腫瘍細胞上の同じ抗原を標的とするにもかかわらず、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの抗腫瘍活性はＧｐｔの影響を受けないことを示している。
実施例２
カニクイザルにおけるオビヌツズマブ前治療試験
０．１、０．３、及び１ｍｇ／ｋｇの用量のＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢに対するオビヌツズマブによる前治療の効果を調査するために、雄カニクイザルにおける機構的研究（非ＧＬＰ）を実施した（表３）。この研究では、６匹のナイーブな雄カニクイザル／群（群１では４匹）が、コントロール製品１（群１及び２）又はオビヌツズマブ（５０ｍｇ／ｋｇ、群３、４、５）のいずれかのＩＶ投与を受け、４日後にコントロール製品２（群１）、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ、０．１ｍｇ／ｋｇ（群２、群３）、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ、０．３ｍｇ／ｋｇ（群４）又はＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ、１ｍｇ／ｋｇ（群５）による治療を受けた。オビヌツズマブとＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ投薬の間の４日間は、オビヌツズマブによる末梢血、リンパ節及び脾臓におけるＢ細胞の枯渇を可能にするのに十分であると考えられた。１２日目に、群１からの２匹の動物及び群２から５の４匹の動物を剖検した（最終剖検）。各群から２匹の動物が、８週間の回復期間のために保持された。
表３．試験計画：カニクイザルにおけるオビヌツズマブ前治療。
Figure 2023175681000003
以下の予備データは、現在進行中のこの試験から入手できる。
・ オビヌツズマブ（５０ｍｇ／ｋｇ、Ｇｐｔ）による前治療後、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢのＩＶ投与は、最高試験用量である１ｍｇ／ｋｇまで許容された。ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ単独で観察される臨床徴候（嘔吐、猫背の姿勢及び活動性低下）は、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢのすべての用量でＧｐｔにより著しく減少した。
・ ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ投与単独では、Ｂリンパ球の減少と、Ｔリンパ球（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋）サブセット及びＮＫ細胞の活性化及び増殖をもたらした。さらに、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ投与前のオビヌツズマブの投与により、Ｂリンパ球の枯渇、並びにＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ投与後のリンパ球及び単球集団の一過性の減少の低下によって実証される、Ｔリンパ球活性化のその後の減弱、並びにＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ単独で治療された動物に存在する変化と比較して、Ｔ細胞活性化マーカーのアップレギュレーションと増殖の減少をもたらした。
・ ０．１ｍｇ／ｋｇのＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ治療の４時間後のＩＦＮγ、ＩＬ－８、ＴＮＦα、ＩＬ－２及びＩＬ－６の放出は、Ｇｐｔ群において著しく減少した。同様に、Ｇｐｔ群において高用量のＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢで低レベルのサイトカイン放出が認められた。
・ ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ関連の病理組織学的所見はリンパ器官に限定されていた（例えば、ＣＤ２０陽性細胞に特異的に影響を与える細胞充実性の低下は、脾臓のリンパ濾胞に存在していた）。ＣＤ２０陽性細胞の減少は、８週間の無治療期間後にほとんど完全に逆転した。Ｇｐｔ後に、０．１ｍｇ／ｋｇのＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢにより治療されたサル、及び０．１、０．３、又は１ｍｇ／ｋｇのＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢを投与された動物において、脳、脊髄、坐骨神経を含めて他の組織病理学的変化は無かった。
実施例３
ｒ／ｒ ＮＨＬを有する患者におけるオビニツズマブ前治療を伴うＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの安全性、忍容性及び薬物動態の臨床評価
第Ｉ相の用量漸増試験が実施されるであろう。その主な目的には、再発／難治性（ｒ／ｒ）ＮＨＬを有する患者におけるオビヌツズマブ前治療を伴うＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの安全性、忍容性及び薬物動態の評価が含まれる。
本試験では、腫瘍がＢ細胞においてＣＤ２０を発現すると予想されるｒ／ｒ ＮＨＬを有する患者を登録するであろう。ＣＬＬを有する患者は登録されないであろう。患者は、少なくとも１つの以前の治療レジメンの後に再発したか、又はそれに応答しなかったと予想される。
オビヌツズマブ及びＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢは、静脈内（ＩＶ）投与されるであろう。オビヌツズマブ及びＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの投与前に、コルチコステロイド（例えば、１００ｍｇのＩＶプレドニゾロン又は同等品）による前投薬が、抗ヒスタミン剤及びアセトアミノフェンとともに投与されるであろう。腫瘍溶解症候群などの他のイベントの予防対策も、必要に応じて推奨されるか、義務付けられるであろう。
ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢは、第１のＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの用量（サイクル１／１日目）の７日前（サイクル１／ー７日目）のオビヌツズマブ（１０００ｍｇ；ＩＶ）の単一用量による前治療後に、サイクル１／１日目（Ｃ１／Ｄ１）に単剤として静脈内（ＩＶ）注入により開始されるであろう。予想されるＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの開始用量は、５マイクログラムである（フラット投薬）。すべての投薬サイクルは、１４日間（Ｑ２Ｗ）である。投薬計画は、サイクル１の１日目と８日目（Ｃ１／Ｄ１；Ｃ１／Ｄ８）と、その後の合計１２サイクル（２４週間）の治療について、又は許容できない毒性若しくは増悪が起こるまで、すべての後続サイクルの１日目のみ（Ｑ２Ｗ）におけるＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの投与のためのものである。
血液試料が適切な時点で収集され、例えば、Ｇｐｔ及びＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢ用量開始後のＢ細胞枯渇の規模と動態、Ｔ細胞表現型を評価するため、かつ選択された時点でのＧｐｔ及びＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの投与後の可溶性メディエーター放出（サイトカイン及びケモカイン）を評価するために、ＣＤ２０ＸＣＤ３ ｂｓＡＢの関連するＰＫ特性、並びに血液中のＰＤマーカーの範囲が決定されるであろう。
実施例４
ＣＡＲ－Ｔ細胞による養子Ｔ細胞療法後のサイトカイン放出を避けるためのＧＡＺＹＶＡ前治療
サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）は、致命的な副作用を引き起こし得る、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞並びにＣＤ２０又はＣＤ２２に対するＣＡＲ－Ｔ細胞による治療後の非常に頻繁な現象である。ＣＲＳを回避又は軽減するための戦略は、ＣＡＲ－Ｔ療法のさまざまな側面に焦点を当てている（Xu and Tang, Cancer Letters (2014) 343, 172-178に総説される）。
我々は、オビヌツズマブ前治療を使用した末梢及び悪性Ｂ細胞の枯渇による、Ｂ細胞増殖性疾患におけるＣＡＲ－Ｔ細胞による治療後のＣＲＳを回避するための新規な手法を提案する。
この目的のために、Ｂ細胞増殖性疾患（例えば、ＮＨＬ）を有する患者は、オビヌツズマブ前治療群とオビヌツズマブ前治療なしのコントロール群に無作為化される。オビヌツズマブ前治療群の患者は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、又はＣＤ２２ ＣＡＲ－Ｔ細胞の投与の－７日目（＋／－２日）に投与される、１ｇのオビヌツズマブの投与を受ける。
患者には、使用される特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞、患者、及び治療される疾患に適した用量で、ＣＡＲレンチウイルスベクターを形質導入した自己Ｔ細胞が注入される（例えば、Maude et al., N Engl J Med (2014) 371,1507-1517に記載されるように体重１キログラムあたり０．７６×１０６から２０．６×１０６個のＣＡＲ－Ｔ細胞；Grupp et al., New Engl J Med (2013) 368, 1509-1518に記載されるように体重１キログラムあたり１．４×１０６から１．２×１０７個のＣＡＲ－Ｔ細胞；又は、Porter et al., Sci Transl Med (2015) 7, 303ra139に記載されるように０．１４×１０８から１１×１０８個のＣＡＲ－Ｔ細胞）。患者は、応答、毒作用、循環ＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖と持続性についてモニターされる。
各オビヌツズマブの投薬前に、前投薬が与えられる。Ｂリンパ球数のモニタリングのために、治療期間の前及び期間中に血液試料が収集される。Ｂ細胞数は、フローサイトメトリー及びＣＤ１９の染色を使用して取得される。さらに、ＣＲＳの発生率は、ＩＬ－６を含むサイトカインを測定することによりスクリーニングされる。
実施例５
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブ又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体の併用治療
図６は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブの併用治療の有効性（図６Ｄ）及び抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と抗ＰＤ－Ｌ１抗体の併用治療の有効性（図６Ｅ）を示している。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、２つの断片の抗原結合（Ｆａｂ）ドメインを介して腫瘍細胞上のヒトＣＤ２０に、及び単一のＦａｂドメインを介してＴ細胞上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体のヒトＣＤ３イプシロンサブユニット（ＣＤ３ｅ）に結合する「２：１」Ｔ細胞二重特異性ヒト化モノクローナル抗体である。この分子は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプに基づいているが、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）及び補体（Ｃ１ｑ）結合のないＦｃ部分を含んでいる。分子量は約１９４ｋＤａである。実施例５では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性は、配列番号１１６による重鎖、配列番号１１７による重鎖、２倍の配列番号１１８による軽鎖及び配列番号１１９による軽鎖を含む。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、国際公開第２０１０／０７７６３４号に記載されているＹＷ２４３．５５．Ｓ７０ ＰＤ－Ｌ１抗体（国際公開第２０１０／０７７６３４号の図１１に示されている配列）に基づいている。この抗体は、ＦｃγＲ相互作用を消失させるＤＡＰＧ変異を含んでいた。ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０の可変領域は、ＤＡＰＧ Ｆｃ変異を有するマウスＩｇＧ１定常ドメインに結合していた。実施例５において使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号１２０による重鎖及び配列番号１２１による軽鎖を含む。
オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ；図６Ｄ）及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体（図６Ｅ）と組み合わせた抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の抗腫瘍活性を、０日目に皮下注射された中悪性度リンパ腫モデル（ＷＳＵ－ＤＬＣＬ２腫瘍）を保有するヒト造血幹細胞ヒト化マウス（ＨＳＣ－ＮＳＧマウス）において分析した。治療は、図６Ａ－Ｆの矢印で示すように、腫瘍の平均体積が６００ｍｍ３のときに開始された。試験１５日目で、６００ｍｍ３の腫瘍の平均体積に達した。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブの併用治療のために、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、１週間に１回、０．１５ｍｇ／ｋｇの準最適有効用量で静脈内投与された。オビヌツズマブは、１週間に１回、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与された（図６Ｄ）。２つのパートナーは同時に注射された。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と抗ＰＤ－Ｌ１抗体の併用治療のために、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、１週間に１回、０．１５ｍｇ／ｋｇの準最適有効用量で静脈内投与され、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、１週間に１回、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与された（図６Ｅ）。２つのパートナーはまた同時に注射された。
ビヒクル群の動物は、リン酸緩衝生理食塩水の静脈内注射を毎週受けた（図６Ａ）。単剤療法群では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（図６Ｂ）は、１週間に１回、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与され、オビヌツズマブ（図６Ｃ）は、１週間に１回、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与され、抗ＰＤ－Ｌ１（図６Ｆ）抗体は、１週間に１回、１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与された。各群には１０匹の動物が含まれていた。単剤療法群は、Ｄｕｎｎｅｔの方法による標準化曲線下面積（ｓＡＵＣ）の一元配置分散分析に従って、統計的に互いに異なっていなかった（表４）。
表４．単剤療法群の生体内データの統計分析。
Figure 2023175681000004
上記のように、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブ、又は抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれかの併用治療は、試験の経過中において腫瘍の平均サイズが有意に減少することを示している。これは、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体、オビヌツマブ又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれかの個々の治療と比較して、腫瘍の平均サイズを減少させる併用治療の優れた可能性を示している。
実施例５の併用治療に関する上記の生体内データは、Ｄｕｎｎｅｔの方法を用いたｓＡＵＣの一元配置分散分析に従って統計的に分析された（表５）。
表５．併用治療の生体内データの統計分析。
Figure 2023175681000005
試験条件において、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブの併用治療は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と抗ＰＤ－Ｌ１抗体の併用治療と比較して、平均腫瘍サイズの減少に対してより強い効果を示した。
図７は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブの併用治療の有効性を示している（図７Ａ及び７Ｂ）。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の構造に関しては、実施例５を参照。オビヌツズマブとの併用による抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体、ここではＲＯ７０８２８５９の抗腫瘍活性が、中悪性度リンパ腫モデル（ＯＣＩ－Ｌｙ１８腫瘍）を保有するヒト造血幹細胞ヒト化マウス（ＨＳＣ－ＮＳＧマウス）において試験された。前記組み合わせは、０日目に皮下注射された。腫瘍の平均体積が５００ｍｍ３（試験１４日目に到達）になったときに、治療が開始された。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、１週間に１回、０．５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与された。オビヌツズマブは、１週間に１回、３０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与された。組み合わせの２つのパートナーは、組み合わせ群において同時に注射された。ビヒクル群の動物は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）の注射を毎週受けた。各群には８匹の動物が含まれていた。図７Ａは、平均及び標準誤差（ＳＥＭ）におけるすべての群の腫瘍増殖動態を示している。図７Ｂは、各治療群における単一マウスの腫瘍増殖動態を示している。統計分析は、一元配置分散分析を用いて実行された。個々の群が比較され、ここで、図７Ａにおいて、「＊」は抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体対抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブの組み合わせを表し、「＊＊」は、オビヌツズマブ対抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブの組み合わせを表す。
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体とオビヌツズマブの組み合わせは、２つの抗体を数回の投与サイクルにおいて一緒に投与した場合の強力な抗腫瘍効果によって例証される。それらの組み合わせの相乗効果は、２つの異なるＤＬＢＣＬモデル、すなわちＷＳＵ－ＤＬＣＬ２及びＯＣＩ－Ｌｙ１８において観察され、対応する単一抗体と比較した場合、すべての動物及び両方の腫瘍モデルにおける急速な腫瘍縮小によって証明される。
前述の発明は、理解を明確にする目的のために、例示及び実施例により若干詳細に説明されたが、その説明及び実施例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書で引用されるすべての特許及び科学文献の開示は、参照によりその全体が明示的に組み込まれる。

SEQUENCE LISTING

<110> F. Hoffmann-La Roche AG

<120> Treatment method

<130> PX

<160> 121

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1
<211> 297
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Thr Thr Pro Arg Asn Ser Val Asn Gly Thr Phe Pro Ala Glu Pro
1 5 10 15


Met Lys Gly Pro Ile Ala Met Gln Ser Gly Pro Lys Pro Leu Phe Arg
20 25 30


Arg Met Ser Ser Leu Val Gly Pro Thr Gln Ser Phe Phe Met Arg Glu
35 40 45


Ser Lys Thr Leu Gly Ala Val Gln Ile Met Asn Gly Leu Phe His Ile
50 55 60


Ala Leu Gly Gly Leu Leu Met Ile Pro Ala Gly Ile Tyr Ala Pro Ile
65 70 75 80


Cys Val Thr Val Trp Tyr Pro Leu Trp Gly Gly Ile Met Tyr Ile Ile
85 90 95


Ser Gly Ser Leu Leu Ala Ala Thr Glu Lys Asn Ser Arg Lys Cys Leu
100 105 110


Val Lys Gly Lys Met Ile Met Asn Ser Leu Ser Leu Phe Ala Ala Ile
115 120 125


Ser Gly Met Ile Leu Ser Ile Met Asp Ile Leu Asn Ile Lys Ile Ser
130 135 140


His Phe Leu Lys Met Glu Ser Leu Asn Phe Ile Arg Ala His Thr Pro
145 150 155 160


Tyr Ile Asn Ile Tyr Asn Cys Glu Pro Ala Asn Pro Ser Glu Lys Asn
165 170 175


Ser Pro Ser Thr Gln Tyr Cys Tyr Ser Ile Gln Ser Leu Phe Leu Gly
180 185 190


Ile Leu Ser Val Met Leu Ile Phe Ala Phe Phe Gln Glu Leu Val Ile
195 200 205


Ala Gly Ile Val Glu Asn Glu Trp Lys Arg Thr Cys Ser Arg Pro Lys
210 215 220


Ser Asn Ile Val Leu Leu Ser Ala Glu Glu Lys Lys Glu Gln Thr Ile
225 230 235 240


Glu Ile Lys Glu Glu Val Val Gly Leu Thr Glu Thr Ser Ser Gln Pro
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Lys Asn Glu Glu Asp Ile Glu Ile Ile Pro Ile Gln Glu Glu Glu Glu
260 265 270


Glu Glu Thr Glu Thr Asn Phe Pro Glu Pro Pro Gln Asp Gln Glu Ser
275 280 285


Ser Pro Ile Glu Asn Asp Ser Ser Pro
290 295


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<212> PRT
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Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser Trp Met Asn Trp Val Lys Leu
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Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp
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Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr
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Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Thr Ser Leu Thr
65 70 75 80


Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly
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Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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<213> Mus musculus

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1 5 10 15


Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu
20 25 30


Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn
35 40 45


Leu Val Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr
50 55 60


Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val
65 70 75 80


Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly
85 90 95


Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
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Tyr Ser Trp Ile Asn
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Gly



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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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20 25 30


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35 40 45


Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro
50 55 60


Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80


Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
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Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110


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65 70 75 80


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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30


Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60


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65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110


Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
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Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
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Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly
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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu
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Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly
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Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
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Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
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Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
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Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60


Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
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Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255


Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270


Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285


Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
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Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
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Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys
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Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
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Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
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Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
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Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
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Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
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Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
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Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
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Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
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Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45


Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro
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Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80


Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
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Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110


Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg
115 120 125


Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140


Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
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Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
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Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
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Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
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Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
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Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
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Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
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Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val
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Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
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Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
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Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
165 170 175


Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
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Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
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Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln
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Gly



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Leu Gln Leu Thr His Val Pro Tyr Thr
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
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Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110


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115 120


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Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
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Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Pro
20 25 30


Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45


Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60


Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80


Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu
85 90 95


Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110


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<211> 449
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VH-CH1(EE)-Fc(hole, P329G LALA)

<400> 32

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30


Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110


Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125


Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140


Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160


Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175


Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190


Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205


Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220


Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240


Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255


Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270


Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285


His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300


Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320


Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335


Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350


Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365


Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380


Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400


Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415


Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430


His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445


Pro



<210> 33
<211> 674
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VH-CH1(EE)-CD3 VL-CH1-Fc(knob, P329G LALA)

<400> 33

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30


Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110


Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125


Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140


Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160


Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175


Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190


Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205


Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220


Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr
225 230 235 240


Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr
245 250 255


Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp
260 265 270


Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr
275 280 285


Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu
290 295 300


Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu
305 310 315 320


Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly
325 330 335


Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
340 345 350


Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
355 360 365


Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
370 375 380


Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
385 390 395 400


Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
405 410 415


Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
420 425 430


His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
435 440 445


Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
450 455 460


Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
465 470 475 480


Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
485 490 495


His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
500 505 510


Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
515 520 525


Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
530 535 540


Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro
545 550 555 560


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565 570 575


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580 585 590


Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
595 600 605


Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
610 615 620


Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
625 630 635 640


Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
645 650 655


Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
660 665 670


Ser Pro



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<211> 219
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VL-CL(RK)

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Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15


Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Asn Pro
20 25 30


Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45


Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60


Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80


Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu
85 90 95


Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110


Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg
115 120 125


Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140


Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160


Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175


Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190


Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205


Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215


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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
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<400> 36

Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln
1 5 10 15


Gly



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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
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Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn
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<213> Artificial Sequence

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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VH

<400> 41

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30


Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110


Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 42
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VL

<400> 42

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15


Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30


Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45


Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60


Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80


Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu
85 90 95


Leu Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110


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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 HCDR1

<400> 43

Asp Tyr Ile Met His
1 5


<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 HCDR2

<400> 44

Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln
1 5 10 15


Gly



<210> 45
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 HCDR3

<400> 45

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr
1 5 10


<210> 46
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 LCDR1

<400> 46

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Ser Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15


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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 LCDR2

<400> 47

Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser
1 5


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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 LCDR3

<400> 48

Leu Gln Leu Ile Asp Tyr Pro Val Thr
1 5


<210> 49
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VH

<400> 49

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30


Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110


Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 50
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VL

<400> 50

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15


Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Ser Ser
20 25 30


Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45


Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60


Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80


Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu
85 90 95


Ile Asp Tyr Pro Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110


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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
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<400> 51

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1 5


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<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
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<400> 52

Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln
1 5 10 15


Gly



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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
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<400> 53

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Glu Leu Phe Asp Tyr
1 5 10


<210> 54
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 LCDR1

<400> 54

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15


<210> 55
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
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<400> 55

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1 5


<210> 56
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 LCDR3

<400> 56

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1 5


<210> 57
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VH

<400> 57

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30


Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Glu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110


Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


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<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VL

<400> 58

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15


Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30


Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45


Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60


Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80


Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala
85 90 95


Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110


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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
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<400> 59

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<210> 60
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
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<400> 60

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1 5 10 15


Gly



<210> 61
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 HCDR3

<400> 61

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Asp Leu Phe Asp Tyr
1 5 10


<210> 62
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 LCDR1

<400> 62

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15


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<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 LCDR2

<400> 63

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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 LCDR3

<400> 64

Leu Gln Leu Thr His Val Pro Tyr Thr
1 5


<210> 65
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VH

<400> 65

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30


Ile Thr His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


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50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110


Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 66
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VL


<220>
<221> misc_feature
<222> (107)..(107)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid

<400> 66

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15


Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30


Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45


Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60


Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80


Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu
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Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Xaa Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110


<210> 67
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 HCDR1

<400> 67

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1 5


<210> 68
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 HCDR2

<400> 68

Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln
1 5 10 15


Gly



<210> 69
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 HCDR3

<400> 69

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr
1 5 10


<210> 70
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 LCDR1

<400> 70

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15


<210> 71
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 LCDR2

<400> 71

Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser
1 5


<210> 72
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 LCDR3

<400> 72

Leu Gln Pro Gly His Tyr Pro Gly Thr
1 5


<210> 73
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VH

<400> 73

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30


Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110


Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 74
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VL

<400> 74

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15


Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30


Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45


Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60


Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80


Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Pro
85 90 95


Gly His Tyr Pro Gly Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110


<210> 75
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 HCDR1

<400> 75

Asp Tyr Ile Met His
1 5


<210> 76
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 HCDR2

<400> 76

Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln
1 5 10 15


Gly



<210> 77
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 HCDR3

<400> 77

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr
1 5 10


<210> 78
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 LCDR1

<400> 78

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15


<210> 79
<211> 7
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<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 LCDR2

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Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser
1 5


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<213> Artificial Sequence

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<223> CD19 LCDR3

<400> 80

Leu Gln Leu Asp Ser Tyr Pro Asn Thr
1 5


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<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VH

<400> 81

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30


Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110


Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


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<220>
<223> CD19 VL

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Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15


Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30


Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45


Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60


Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80


Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu
85 90 95


Asp Ser Tyr Pro Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110


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Asp Tyr Ile Met His
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Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe Gln
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Gly



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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30


Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe
50 55 60


Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Glu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110


Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


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<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CD19 VL

<400> 90

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15


Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser
20 25 30


Thr Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45


Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60


Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80


Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu
85 90 95


Thr His Glu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110


<210> 91
<211> 207
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 91

Met Gln Ser Gly Thr His Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser
1 5 10 15


Val Gly Val Trp Gly Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr
20 25 30


Gln Thr Pro Tyr Lys Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr
35 40 45


Cys Pro Gln Tyr Pro Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys
50 55 60


Asn Ile Gly Gly Asp Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp
65 70 75 80


His Leu Ser Leu Lys Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr
85 90 95


Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu
100 105 110


Tyr Leu Arg Ala Arg Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp Val Met
115 120 125


Ser Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp Ile Cys Ile Thr Gly Gly Leu
130 135 140


Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys
145 150 155 160


Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn
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Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Ile
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<210> 92
<211> 198
<212> PRT
<213> Macaca fascicularis

<400> 92

Met Gln Ser Gly Thr Arg Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser
1 5 10 15


Ile Gly Val Trp Gly Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Ser Ile Thr
20 25 30


Gln Thr Pro Tyr Gln Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr
35 40 45


Cys Ser Gln His Leu Gly Ser Glu Ala Gln Trp Gln His Asn Gly Lys
50 55 60


Asn Lys Glu Asp Ser Gly Asp Arg Leu Phe Leu Pro Glu Phe Ser Glu
65 70 75 80


Met Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Asn Pro
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Glu Asp Ala Ser His His Leu Tyr Leu Lys Ala Arg Val Cys Glu Asn
100 105 110


Cys Met Glu Met Asp Val Met Ala Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp
115 120 125


Ile Cys Ile Thr Leu Gly Leu Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys
130 135 140


Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly
145 150 155 160


Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn
165 170 175


Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg Lys Gly Gln Gln Asp Leu Tyr Ser Gly
180 185 190


Leu Asn Gln Arg Arg Ile
195


<210> 93
<211> 556
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 93

Met Pro Pro Pro Arg Leu Leu Phe Phe Leu Leu Phe Leu Thr Pro Met
1 5 10 15


Glu Val Arg Pro Glu Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp
20 25 30


Asn Ala Val Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln
35 40 45


Gln Leu Thr Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu
50 55 60


Ser Leu Gly Leu Pro Gly Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile
65 70 75 80


Trp Leu Phe Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu
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Cys Gln Pro Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr
100 105 110


Val Asn Val Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp
115 120 125


Leu Gly Gly Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro
130 135 140


Ser Ser Pro Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala
145 150 155 160


Lys Asp Arg Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Leu Pro Pro
165 170 175


Arg Asp Ser Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro
180 185 190


Gly Ser Thr Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser
195 200 205


Arg Gly Pro Leu Ser Trp Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser
210 215 220


Leu Leu Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp
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Val Met Glu Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala
245 250 255


Gly Lys Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu
260 265 270


Glu Ile Thr Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly
275 280 285


Gly Trp Lys Val Ser Ala Val Thr Leu Ala Tyr Leu Ile Phe Cys Leu
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Cys Ser Leu Val Gly Ile Leu His Leu Gln Arg Ala Leu Val Leu Arg
305 310 315 320


Arg Lys Arg Lys Arg Met Thr Asp Pro Thr Arg Arg Phe Phe Lys Val
325 330 335


Thr Pro Pro Pro Gly Ser Gly Pro Gln Asn Gln Tyr Gly Asn Val Leu
340 345 350


Ser Leu Pro Thr Pro Thr Ser Gly Leu Gly Arg Ala Gln Arg Trp Ala
355 360 365


Ala Gly Leu Gly Gly Thr Ala Pro Ser Tyr Gly Asn Pro Ser Ser Asp
370 375 380


Val Gln Ala Asp Gly Ala Leu Gly Ser Arg Ser Pro Pro Gly Val Gly
385 390 395 400


Pro Glu Glu Glu Glu Gly Glu Gly Tyr Glu Glu Pro Asp Ser Glu Glu
405 410 415


Asp Ser Glu Phe Tyr Glu Asn Asp Ser Asn Leu Gly Gln Asp Gln Leu
420 425 430


Ser Gln Asp Gly Ser Gly Tyr Glu Asn Pro Glu Asp Glu Pro Leu Gly
435 440 445


Pro Glu Asp Glu Asp Ser Phe Ser Asn Ala Glu Ser Tyr Glu Asn Glu
450 455 460


Asp Glu Glu Leu Thr Gln Pro Val Ala Arg Thr Met Asp Phe Leu Ser
465 470 475 480


Pro His Gly Ser Ala Trp Asp Pro Ser Arg Glu Ala Thr Ser Leu Gly
485 490 495


Ser Gln Ser Tyr Glu Asp Met Arg Gly Ile Leu Tyr Ala Ala Pro Gln
500 505 510


Leu Arg Ser Ile Arg Gly Gln Pro Gly Pro Asn His Glu Glu Asp Ala
515 520 525


Asp Ser Tyr Glu Asn Met Asp Asn Pro Asp Gly Pro Asp Pro Ala Trp
530 535 540


Gly Gly Gly Gly Arg Met Gly Thr Trp Ser Thr Arg
545 550 555


<210> 94
<211> 225
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 94

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15


Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30


Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45


Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60


His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80


Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95


Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110


Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125


Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140


Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160


Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175


Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190


Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205


His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220


Pro
225


<210> 95
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> linker

<400> 95

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10


<210> 96
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> linker

<400> 96

Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10


<210> 97
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 97

Thr Tyr Ala Met Asn
1 5


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<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 98

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
1 5 10 15


Val Lys Gly



<210> 99
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 99

His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr
1 5 10


<210> 100
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 100

Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn
1 5 10


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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 101

Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
1 5


<210> 102
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 102

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val
1 5


<210> 103
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 103

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15


Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30


Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45


Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60


Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80


Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95


Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110


Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125


<210> 104
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 104

Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15


Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30


Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly
35 40 45


Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60


Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala
65 70 75 80


Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95


Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105


<210> 105
<211> 207
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 105

Met Gln Ser Gly Thr His Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser
1 5 10 15


Val Gly Val Trp Gly Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr
20 25 30


Gln Thr Pro Tyr Lys Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr
35 40 45


Cys Pro Gln Tyr Pro Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys
50 55 60


Asn Ile Gly Gly Asp Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp
65 70 75 80


His Leu Ser Leu Lys Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr
85 90 95


Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu
100 105 110


Tyr Leu Arg Ala Arg Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp Val Met
115 120 125


Ser Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp Ile Cys Ile Thr Gly Gly Leu
130 135 140


Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys
145 150 155 160


Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn
165 170 175


Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg
180 185 190


Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Ile
195 200 205


<210> 106
<211> 198
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 106

Met Gln Ser Gly Thr Arg Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser
1 5 10 15


Ile Gly Val Trp Gly Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Ser Ile Thr
20 25 30


Gln Thr Pro Tyr Gln Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr
35 40 45


Cys Ser Gln His Leu Gly Ser Glu Ala Gln Trp Gln His Asn Gly Lys
50 55 60


Asn Lys Glu Asp Ser Gly Asp Arg Leu Phe Leu Pro Glu Phe Ser Glu
65 70 75 80


Met Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Asn Pro
85 90 95


Glu Asp Ala Ser His His Leu Tyr Leu Lys Ala Arg Val Cys Glu Asn
100 105 110


Cys Met Glu Met Asp Val Met Ala Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp
115 120 125


Ile Cys Ile Thr Leu Gly Leu Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys
130 135 140


Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly
145 150 155 160


Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn
165 170 175


Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg Lys Gly Gln Gln Asp Leu Tyr Ser Gly
180 185 190


Leu Asn Gln Arg Arg Ile
195


<210> 107
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 107

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile His
1 5 10


<210> 108
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 108

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
1 5 10 15


Lys Gly



<210> 109
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 109

Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr
1 5


<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Artificial Contruct

<400> 110

Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala
1 5 10


<210> 111
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 111

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser
1 5


<210> 112
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 112

Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr
1 5


<210> 113
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 113

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15


Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30


Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45


Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60


Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110


Leu Val Thr Val Ser Ser
115


<210> 114
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 114

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15


Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30


Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45


Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60


Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110


Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120


<210> 115
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 115

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15


Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30


Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95


Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105


<210> 116
<211> 673
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 116

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30


Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60


Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110


Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125


Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140


Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160


Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175


Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190


Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205


Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly
210 215 220


Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu
225 230 235 240


Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly
245 250 255


Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln
260 265 270


Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys
275 280 285


Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly
290 295 300


Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu
305 310 315 320


Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly
325 330 335


Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
340 345 350


Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
355 360 365


Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
370 375 380


Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
385 390 395 400


Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
405 410 415


Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
420 425 430


Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
435 440 445


Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly
450 455 460


Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
465 470 475 480


Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
485 490 495


Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
500 505 510


Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
515 520 525


Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
530 535 540


Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu
545 550 555 560


Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
565 570 575


Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
580 585 590


Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
595 600 605


Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
610 615 620


Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
625 630 635 640


Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
645 650 655


Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
660 665 670


Gly



<210> 117
<211> 448
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 117

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser
20 25 30


Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60


Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110


Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125


Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140


Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160


Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175


Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190


Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205


Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220


Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240


Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255


Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270


Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285


Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300


Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320


Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335


Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
340 345 350


Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365


Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380


Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400


Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415


Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430


Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445


<210> 118
<211> 219
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 118

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15


Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser
20 25 30


Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45


Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro
50 55 60


Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80


Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95


Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110


Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg
115 120 125


Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140


Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160


Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175


Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190


Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205


Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215


<210> 119
<211> 232
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 119

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15


Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30


Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45


Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60


Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80


Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95


Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110


Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val
115 120 125


Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
130 135 140


Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
145 150 155 160


Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
165 170 175


Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
180 185 190


Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
195 200 205


Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
210 215 220


Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230


<210> 120
<211> 442
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 120

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15


Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30


Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45


Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60


Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110


Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro
115 120 125


Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly
130 135 140


Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn
145 150 155 160


Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175


Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr
180 185 190


Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser
195 200 205


Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro
210 215 220


Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
225 230 235 240


Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys
245 250 255


Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Ala Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp
260 265 270


Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu
275 280 285


Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met
290 295 300


His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser
305 310 315 320


Ala Ala Phe Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly
325 330 335


Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln
340 345 350


Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe
355 360 365


Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu
370 375 380


Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe
385 390 395 400


Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn
405 410 415


Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr
420 425 430


Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440


<210> 121
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 121

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15


Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30


Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95


Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110


Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125


Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140


Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160


Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175


Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190


Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
195 200 205


Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210

Claims (63)

  1. 個体のがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であって、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせて使用される、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  2. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、単一の組成物で一緒に投与されるか、又は２つ以上の異なる組成物で別々に投与される、請求項１に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  3. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、異なる時点で投与される２つ以上の異なる組成物で投与される、、請求項１又は２に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  4. ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  5. ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  6. ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、ＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体であり、かつ、抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約４０％が非フコシル化されている、請求項１から５のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  7. ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、請求項１から６のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  8. ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と同時に、その前に、又はその後に投与される、請求項１から７のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  9. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体、好ましくはアテゾリズマブがさらに投与される、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  10. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の少なくとも一方と別々に、又は組み合わせて投与される、請求項９に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  11. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合ドメイン、及びＣＤ２０に結合する第２の抗原結合ドメインを含む、請求項１から１０のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  12. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）及び軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含む第１の抗原結合ドメイン、並びに重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）及び軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含む第２の抗原結合ドメインを含む、請求項１１に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  13. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインが、配列番号９７のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号９８のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号９９のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）；並びに／又は配列番号１００のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１０１のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号１０２のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含む、請求項１１又は１２に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  14. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインが、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）、及び／又は配列番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含む、請求項１１又は１２に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  15. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインが、配列番号４のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号６のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）；並びに／又は配列番号７のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含む、請求項１１から１４のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  16. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）、及び／又は配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含む、請求項１１から１４のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  17. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、ＣＤ２０に結合する第３の抗原結合ドメインを含む、請求項１１から１６のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  18. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインが、配列番号４のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号６のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）；並びに／又は配列番号７のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含む、請求項１７に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  19. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）、及び／又は配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含む、請求項１７又は１８に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  20. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインがクロスＦａｂ分子であり、ここで、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメイン又は定常ドメインが交換されており、かつ、第２及び第３の抗原結合ドメインは、存在する場合は、従来のＦａｂ分子である、請求項１１から１９のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  21. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体がＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む、請求項２０に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  22. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＩｇＧ１ Ｆｃドメインが、Ｆｃ受容体への結合及び／又はエフェクター機能を低減させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含む、請求項２１に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  23. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＩｇＧ１ Ｆｃドメインが、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）を含む、請求項２１又は２２に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  24. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、第３の抗原結合ドメインを含み、
    ここで、（ｉ）抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインが、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインが、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、かつ、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインが、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合しており、又は（ｉｉ）抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインが、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインが、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、かつ、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインが、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している、請求項２１から２３のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  25. 組み合わせが、約１週間から３週間の間隔で投与される、請求項１から２４のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  26. 併用治療の前に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブによる前治療が実施され、ここで、前治療と併用治療との間の期間が、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブに応答した、個体におけるＢ細胞の減少のために十分である、請求項１から２５のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  27. ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体を投与することを含む、個体における増殖性疾患、特にがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法であって、ここで、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、単一の組成物又は２つ以上の組成物で投与される、方法。
  28. 併用治療における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び任意の薬学的に許容される担体と、疾患、特にがんの併用治療における使用のための、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む第２の医薬と、任意で、抗ＰＤ－Ｌ１抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む第３の医薬とを含む薬学的組成物。
  29. ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む第１の医薬と、疾患、特にがんの併用治療における使用のための、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む第２の医薬と、任意で、抗ＰＤ－Ｌ１抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む第３の医薬とを含むキット。
  30. キットが、個体におけるがんを治療する又はその進行を遅延させるための第１の医薬及び第２の医薬及び任意で第３の医薬の使用説明書を含む、請求項２９に記載のキット。
  31. 好ましくは、個体における増殖性疾患、特にがんを治療する又はその進行を遅延させるための、治療用途のための医薬の製造における、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体との組み合わせの使用。
  32. 個体におけるがんを治療する又はその進行を遅延させるための医薬の製造におけるＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の使用であって、ここで、医薬がＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含み、かつ、治療が抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた医薬の投与を含む、使用。
  33. 個体におけるがんを治療する又はその進行を遅延させるための医薬の製造における抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の使用であって、ここで、医薬が抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含み、かつ、治療が抗ＣＤ２０抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた医薬の投与を含む、使用。
  34. ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体を個体に投与することを含む、個体におけるがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法。
  35. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体が個体にさらに投与される、請求項３６に記載の方法。
  36. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体がＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて使用される、個体のがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  37. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、単一の組成物で一緒に投与されるか、又は２つ以上の異なる組成物で別々に投与される、請求項３９に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  38. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、異なる時点で投与される２つ以上の異なる組成物で投与される、請求項３９又は４０に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  39. ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号５のＨＣＤＲ２、及び配列番号６のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号７の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号８のＬＣＤＲ２、及び配列番号９のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３９から４１のいずれか１項に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  40. ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、配列番号１０の重鎖可変領域配列及び配列番号１１の軽鎖可変領域配列を含む、請求項３９から４２のいずれか１項に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  41. ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、ＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ１抗体であり、ここで、抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域におけるＮ－結合型オリゴ糖の少なくとも約４０％が非フコシル化されている、請求項３９から４２のいずれか１項に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  42. ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブである、請求項３９から４４のいずれか１項に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  43. ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と同時に、その前に、又はその後に投与される、請求項３９から４５のいずれか１項に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  44. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体、好ましくはアテゾリズマブがさらに投与される、請求項３９から４６のいずれか１項に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  45. 抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の少なくとも一方と別々に、又は組み合わせて投与される、請求項４７に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  46. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合ドメイン、及びＣＤ２０に結合する第２の抗原結合ドメインを含む、請求項３９から４８のいずれか１項に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  47. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）及び軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含む第１の抗原結合ドメイン、並びに重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）及び軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含む第２の抗原結合ドメインを含む、請求項４９に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  48. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインが、配列番号９７のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号９８のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号９９のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）；並びに／又は配列番号１００のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号１０１のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号１０２のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含む、請求項４８から５０のいずれか１項に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  49. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインが、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ３）、及び／又は配列番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ３）を含む、請求項４８から５１のいずれか１項に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  50. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインが、配列番号４のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号６のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）；並びに／又は配列番号７のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含む、請求項４８から５２のいずれか１項に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  51. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）、及び／又は配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含む、請求項４８から５２のいずれか１項に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  52. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、ＣＤ２０に結合する第３の抗原結合ドメインを含む、請求項４８から５４のいずれか１項に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  53. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインが、配列番号４のＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のＣＤＲ－Ｈ２配列、及び配列番号６のＣＤＲ－Ｈ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）；並びに／又は配列番号７のＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のＣＤＲ－Ｌ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含む、請求項５５に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  54. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨＣＤ２０）、及び／又は配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬＣＤ２０）を含む、請求項５５又は５６に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  55. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインがクロスＦａｂ分子であり、ここで、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメイン又は定常ドメインが交換されており、かつ、第２及び第３の抗原結合ドメインは、存在する場合、従来のＦａｂ分子である、請求項４８から５７のいずれか１項に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  56. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体がＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む、請求項５８に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  57. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＩｇＧ１ Ｆｃドメインが、Ｆｃ受容体への結合及び／又はエフェクター機能を低減させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含む、請求項５９に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  58. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＩｇＧ１ Ｆｃドメインが、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）を含む、請求項５９又は６０に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  59. 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、第３の抗原結合ドメインを含み、
    ここで、（ｉ）抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインが、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインが、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、かつ、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインが、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合しており、又は（ｉｉ）抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインが、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２の抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインが、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、かつ、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の第３の抗原結合ドメインが、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している、請求項５９から６１のいずれか１項に記載の方法における使用のためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体。
  60. 組み合わせが、約１週間から３週間の間隔で投与される、請求項３９から６２に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  61. 併用治療の前に、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブによる前治療が実施され、ここで、前治療と併用治療との間の期間が、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはオビヌツズマブに応答した、個体におけるＢ細胞の減少のために十分である、請求項３９から６３のいずれか１項に記載の方法における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
  62. 併用治療における使用のための抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及び任意の薬学的に許容される担体と、疾患、特にがんの併用治療における使用のための、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む第２の医薬と、任意で、抗ＰＤ－Ｌ１抗体及び任意の薬学的に許容される担体を含む第３の医薬とを含む薬学的組成物。
  63. 本明細書に記載される発明。
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