JP2014519830A5 - - Google Patents

Description

更に、ＭＨＣクラスＩタンパク質複合体に結合したウイルス由来ペプチド、及び少なくとも一の可変ドメイン及びヒンジ領域に由来したジスルフィド結合ポリペプチドの一対を含む２つの融合ポリペプチドを含む複合体の発現、及び特に分泌は真核細胞では不可能であることが分かっている。

従って、ＭＨＣクラスＩタンパク質に結合したウイルス由来ペプチド、抗体重鎖ヒンジ領域、及び少なくとも一の抗体可変ドメイン及び一の抗体定常ドメインを含む厳密に一の融合ポリペプチドを含む複合体は、真核細胞中で組換え産生され分泌させることができる。一実施態様において、少なくとも一の定常ドメインは抗体重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）又は抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）の何れかである。

Claims (28)

1. ｉ）Ｎ末端からＣ末端の方向に、Ｔ細胞応答誘発性ペプチド、β２−ミクログロブリン、並びにクラスＩ ＭＨＣ分子の細胞外ドメインのα１、α２、及びα３を含む融合ポリペプチド、
   ｉｉ）１対のジスルフィド結合ポリペプチド鎖であって、
   第一ジスルフィド結合ポリペプチド鎖はＮからＣ末端方向に、免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、免疫グロブリン重鎖第一定常ドメイン（ＣＨ１）、抗体重鎖ヒンジ領域ポリペプチド、免疫グロブリン重鎖第二定常（ＣＨ２）及び第三定常（ＣＨ３）ドメインを含み、
   第二ジスルフィド結合ポリペプチド鎖はＮからＣ末端方向に、抗体の重鎖ヒンジ領域ポリペプチド、免疫グロブリン重鎖第二定常（ＣＨ２）及び第三定常（ＣＨ３）ドメインを含み、
   第一と第二のジスルフィド結合ポリペプチド鎖が一以上のジスルフィド結合によって連結された、１対のジスルフィド結合ポリペプチド鎖、及び
   ｉｉｉ）抗体軽鎖
   を含む複合体の真核細胞における組換え生産の方法であって、
   − 複合体をコードする一以上の核酸を同一真核細胞内に含む真核細胞を培養する工程、及び
   − 細胞又は培養培地から複合体を回収する工程
   を含み、
   複合体がＴ細胞応答誘発性ペプチド、β２−ミクログロブリン、並びにクラスＩ ＭＨＣ分子の細胞外ドメインα１、α２、及びα３の厳密に一の融合ポリペプチドを含む、方法。
2. 複合体が培養培地中で１ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で得られることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
3. 真核細胞が哺乳動物細胞であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。
4. 哺乳動物細胞が、ヒト胚性腎細胞、又はチャイニーズハムスター卵巣細胞、又はベビーハムスター腎臓細胞、又はマウスの骨髄腫細胞であることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
5. 融合ポリペプチドが、ｉ）第二ジスルフィド結合ポリペプチド鎖のＮ末端に共有結合するか、又はｉｉ）第一ジスルフィド結合ポリペプチド鎖のＮ末端に共有結合するか、又はｉｉｉ）抗体軽鎖のＮ末端に共有結合することを特徴とする、請求項１から４の何れか一項に記載の方法。
6. Ｔ細胞応答誘発性ペプチドがウイルス由来ペプチドであることを特徴とする、請求項１から５の何れか一項に記載の方法。
7. 融合ポリペプチドがＮからＣ末端方向に、
   （ｉ）配列番号０１〜配列番号０９から選択されるアミノ酸配列を有するウイルス由来ペプチド、
   （ｉｉ）配列番号１６、１７、１８、２１、２２、及び２３から選択されるアミノ酸配列を有する第一リンカーペプチド、
   （ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するβ２−ミクログロブリン、
   （ｉｖ）配列番号１６、１７、１８、２１、２２、及び２３から選択されるアミノ酸配列を有する第二リンカーペプチド、
   （ｖ）配列番号１１のアミノ酸配列を有するクラスＩ ＭＨＣ分子の細胞外ドメインのα１、α２、及びα３、及び
   （ｖｉ）配列番号１２、１６、１７、１８、２１、２２、及び２３から選択されるアミノ酸配列を有する第三リンカーペプチド
   を含むことを特徴とする、請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
8. 第一ジスルフィド結合ポリペプチド鎖及び第二ジスルフィド結合ポリペプチド鎖は、ｉ）配列番号３１、３２、及び３３から選択されるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン、及び配列番号３４、３５、及び３６から選択されるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＣＨ３ドメインを含むことを特徴とする、請求項１から７の何れか一項に記載の方法。
9. 複合体が、ｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する第一リンカーペプチド、及び／又はｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する第二リンカーペプチド、及び／又はｉｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を有する第三リンカーペプチド、及び／又はｉｖ）配列番号３２又は３３のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン、及び／又はｖ）第一ジスルフィド結合ポリペプチドにおいて、配列番号３５のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１のＣＨ３ドメイン及び第二ジスルフィド結合ポリペプチドにおいて、配列番号３６のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１のＣＨ３ドメインを含むことを特徴とする、請求項７又は８の何れか一項に記載の方法。
10. 複合体が、
    − ＮからＣ末端方向に、
    （ｉ）Ｔ細胞応答誘発性ペプチド、
    （ｉｉ）β２−ミクログロブリン、及び
    （ｉｉｉ）クラスＩ ＭＨＣ分子の細胞外ドメインのα１、α２、及びα３、
    を含む一の融合ポリペプチド、及び
    − 一以上のジスルフィド結合によって連結される２つのポリペプチド鎖であって、
    第一ジスルフィド結合ポリペプチド鎖がＮからＣ末端方向に、
    （ｉ）免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、
    （ｉｉ）免疫グロブリン第１重鎖定常（ＣＨ１）ドメイン、
    （ｉｉｉ）抗体重鎖ヒンジ領域ポリペプチド、
    （ｉｖ）免疫グロブリン第２重鎖定常（ＣＨ２）ドメイン、及び
    （ｖ）免疫グロブリン第３重鎖定常（ＣＨ３）ドメインを含み、
    第二ジスルフィド結合ポリペプチド鎖がＮからＣ末端方向に、
    （ｉ）抗体重鎖ヒンジ領域ポリペプチド、
    （ｉｖ）免疫グロブリン第２重鎖定常（ＣＨ２）ドメイン、及び
    （ｖ）免疫グロブリン第３重鎖定常（ＣＨ３）ドメイン
    を含む、２つのポリペプチド鎖を含み、
    融合ポリペプチドが、
    （ｉ）第二ジスルフィド結合ポリペプチド鎖のＮ末端に共有結合するか、又は
    （ｉｉ）第一ジスルフィド結合ポリペプチド鎖のＮ末端に共有結合するか、又は
    （ｉｉｉ）抗体軽鎖のＮ末端に共有結合すること
    を特徴とする、複合体。
11. Ｔ細胞応答誘発性ペプチドがウイルス由来のペプチドであることを特徴とする、請求項１０に記載の複合体。
12. 融合ポリペプチドがＮからＣ末端方向に
    （ｉ）配列番号０１〜配列番号０９から選択されるアミノ酸配列を有するウイルス由来ペプチド、
    （ｉｉ）配列番号１６、１７、１８、２１、２２、及び２３から選択されるアミノ酸配列を有する第一リンカーペプチド、
    （ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するβ２−ミクログロブリン、
    （ｉｖ）配列番号１６、１７、１８、２１、２２、及び２３から選択されるアミノ酸配列を有する第二リンカーペプチド、
    （ｖ）配列番号１１のアミノ酸配列を有するクラスＩ ＭＨＣ分子の細胞外ドメインのα１、α２、及びα３、及び
    （ｖｉ）配列番号１２、１６、１７、１８、２１、２２、及び２３から選択されるアミノ酸配列を有する第三リンカーペプチド
    を含むことを特徴とする、請求項１０又は１１に記載の複合体。
13. 第一ジスルフィド結合ポリペプチド及び第二ジスルフィド結合ポリペプチドが、
    − 配列番号３１、３２、及び３３から選択されるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン、及び
    − 配列番号３４、３５、及び３６から選択されるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＣＨ３ドメイン
    を更に含むことを特徴とする、請求項１０から１２の何れか一項に記載の複合体。
14. − 第一リンカーペプチドが配列番号２１のアミノ酸配列を有する、及び／又は
    − 第二リンカーペプチドが配列番号２２のアミノ酸配列を有する、及び／又は
    − 第三リンカーペプチドが配列番号１２のアミノ酸配列を有する、及び／又は
    − ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインが配列番号３２又は３３のアミノ酸配列を有する、及び／又は
    − 一のジスルフィド結合ポリペプチドのヒトＩｇＧ１のＣＨ３ドメインが配列番号３５のアミノ酸配列を有し、他のジスルフィド結合ポリペプチドのヒトＩｇＧ１のＣＨ３ドメインが配列番号３６のアミノ酸配列を有する
    ことを特徴とする、請求項１２又は１３に記載の複合体。
15. 請求項１０から１４の何れか一項に記載の複合体をコードする核酸。
16. 請求項１５の核酸を含む宿主細胞。
17. 請求項１０から１４の何れか一項に記載の複合体及び任意で薬学的に許容される担体を含む薬学的製剤。
18. 医薬として使用のための請求項１０から１４の何れか一項に記載の複合体。
19. がん又は慢性ウイルス感染の治療における使用のための請求項１０から１４の何れか一項に記載の複合体。
20. 標的に対して個体のウイルス特異的細胞傷害性Ｔ細胞を誘引することに使用するための請求項１０から１４の何れか一項に記載の複合体。
21. がん細胞又はウイルス感染細胞の除去における使用のための請求項１０から１４の何れか一項に記載の複合体。
22. 医薬の製造における請求項１０から１４の何れか一項に記載の複合体の使用。
23. 医薬ががん又は慢性ウイルス感染の治療のためである、請求項２２の使用。
24. 医薬が標的に対して個体のウイルス特異的細胞傷害性Ｔ細胞を誘引するためである、請求項２２の使用。
25. 医薬ががん細胞又はウイルス感染細胞の除去のためである、請求項２４の使用。
26. 請求項１０から１４の何れか一項に記載の複合体を含む、個体において標的に対して個体のウイルス特異的細胞傷害性Ｔ細胞を誘引するための薬剤。
27. 請求項１０から１４の何れか一項に記載の複合体を含む、個体のがん細胞又はウイルス感染細胞を除去するための薬剤。
28. 請求項１０から１４の何れか一項に記載の複合体を含む、個体のがん又は慢性ウイルス感染を治療するための医薬。