JP2007502131A5 - - Google Patents
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Claims (18)
- 複数の試料におけるリポ蛋白ホスホリパーゼA2(Lp−PLA2)酵素活性を測定するハイスループット法であって、
i.標識された血小板活性化因子(PAF)を含む溶液を調製する工程;
ii.複数の試料の各々を、マイクロタイタープレート上のウェルまたは微小遠心管にアリコートする工程;
iii.複数の組織試料の各々を、工程iにしたがって調製される溶液と接触させる工程;
iv.その第一の接触工程の溶液の各々をPAFのシークエスター分子と接触させてPAF−シークエスター分子の複合体を形成する工程;
v.該PAF−シークエスター分子の複合体をトリクロロ酢酸(TCA)を含む沈殿化溶液と接触させて沈殿物および上清を形成する工程;
vi.該マイクロタイタープレートまたは微小遠心管を10℃未満で少なくとも5分間、少なくとも6,000gで遠心分離することによって該PAF−シークエスター分子の複合体を取り出す工程;および
vii.Lp−PLA2活性を検出する工程
を含むハイスループット法であり、ここで、少なくとも1の試料がLp−PLA2阻害剤が投与されている動物から得られ、該PAFのシークエスター分子が、ウシ血清アルブミン(BSA)またはヒト血清アルブミンである、ハイスループット法。 - 少なくとも1の試料が、血清、細胞溶解物、組織溶解物、尿または血漿からなる群より選択される、請求項1記載の方法。
- 標識されたPAFが放射標識されている、請求項1または2記載の方法。
- 工程iにしたがって調製される溶液中のPAFの全濃度が、少なくとも20μMである、請求項1ないし3のいずれか1項に記載の方法。
- 標識されたおよび標識されていないPAFが緩衝溶液である、請求項1ないし4のいずれか1項に記載の方法。
- 緩衝溶液が、HEPES、塩化ナトリウム(NaCl)、およびエチレンジアミン四酢酸(EDTA)を含む、請求項5記載の方法。
- 工程iにしたがって調製される溶液および試料が、少なくとも5秒間混合され、21℃で少なくとも1分間インキュベートされる、請求項1ないし6のいずれか1項に記載の方法。
- 接触工程のシークエスター分子が、外因性ウシ血清アルブミン(BSA)である、請求項1ないし7のいずれか1項に記載の方法。
- BSAが10℃未満である、請求項8記載の方法。
- BSAが4℃である、請求項8記載の方法。
- BSAが50mg/mLの濃度である、請求項8または9記載の方法。
- 接触工程のシークエスター分子が、内因性ヒト血清アルブミンである、請求項1ないし11のいずれか1項に記載の方法。
- TCAを含む沈殿化溶液が10℃未満である、請求項1ないし12のいずれか1項に記載の方法。
- 遠心分離が4℃で15分間実施される、請求項1ないし13のいずれか1項に記載の方法。
- Lp−PLA2活性がシンチレーションカウンティングによって測定される、請求項1ないし14のいずれか1項に記載の方法。
- 全RIカウントまたはブランクを測定するための少なくとも2つの容器に緩衝溶液をアリコートすることをさらに含む、請求項1記載の方法。
- 容器が、微小遠心管またはマイクロタイタープレート上のウェルである、請求項16記載の方法。
- 少なくとも1つのブランクを測定するための反応混合物をほぼ同容量および濃度の工程iにしたがって調製される溶液およびBSAまたはヒト血清アルブミンと接触させ、少なくとも2つの全RIカウントを測定するための反応混合物をほぼ同容量の工程iにしたがって調製される溶液およびBSAまたはヒト血清アルブミンの置換溶液と接触させること、ここで、該置換溶液はBSAまたはヒト血清アルブミンを含有しない;得られた各試料の上清部分、得られたブランクを測定するための反応混合物および得られた全RIカウントを測定するための反応混合物を別々の容器にアリコートすること;および、その各アリコートにシンチレーションカクテルを接触させることをさらに含む、請求項17記載の方法。
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