JP2007502131A5 - - Google Patents

Claims (18)

1. 複数の試料におけるリポ蛋白ホスホリパーゼＡ２（Ｌｐ−ＰＬＡ２）酵素活性を測定するハイスループット法であって、
   ｉ．標識された血小板活性化因子（ＰＡＦ）を含む溶液を調製する工程；
   ｉｉ．複数の試料の各々を、マイクロタイタープレート上のウェルまたは微小遠心管にアリコートする工程；
   ｉｉｉ．複数の組織試料の各々を、工程ｉにしたがって調製される溶液と接触させる工程；
   ｉｖ．その第一の接触工程の溶液の各々をＰＡＦのシークエスター分子と接触させてＰＡＦ−シークエスター分子の複合体を形成する工程；
   ｖ．該ＰＡＦ−シークエスター分子の複合体をトリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を含む沈殿化溶液と接触させて沈殿物および上清を形成する工程；
   ｖｉ．該マイクロタイタープレートまたは微小遠心管を１０℃未満で少なくとも５分間、少なくとも６，０００ｇで遠心分離することによって該ＰＡＦ−シークエスター分子の複合体を取り出す工程；および
   ｖｉｉ．Ｌｐ−ＰＬＡ２活性を検出する工程
   を含むハイスループット法であり、ここで、少なくとも１の試料がＬｐ−ＰＬＡ２阻害剤が投与されている動物から得られ、該ＰＡＦのシークエスター分子が、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはヒト血清アルブミンである、ハイスループット法。
2. 少なくとも１の試料が、血清、細胞溶解物、組織溶解物、尿または血漿からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
3. 標識されたＰＡＦが放射標識されている、請求項１または２記載の方法。
4. 工程ｉにしたがって調製される溶液中のＰＡＦの全濃度が、少なくとも２０μＭである、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法。
5. 標識されたおよび標識されていないＰＡＦが緩衝溶液である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の方法。
6. 緩衝溶液が、ＨＥＰＥＳ、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、およびエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含む、請求項５記載の方法。
7. 工程ｉにしたがって調製される溶液および試料が、少なくとも５秒間混合され、２１℃で少なくとも１分間インキュベートされる、請求項１ないし６のいずれか１項に記載の方法。
8. 接触工程のシークエスター分子が、外因性ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）である、請求項１ないし７のいずれか１項に記載の方法。
9. ＢＳＡが１０℃未満である、請求項８記載の方法。
10. ＢＳＡが４℃である、請求項８記載の方法。
11. ＢＳＡが５０ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項８または９記載の方法。
12. 接触工程のシークエスター分子が、内因性ヒト血清アルブミンである、請求項１ないし１１のいずれか１項に記載の方法。
13. ＴＣＡを含む沈殿化溶液が１０℃未満である、請求項１ないし１２のいずれか１項に記載の方法。
14. 遠心分離が４℃で１５分間実施される、請求項１ないし１３のいずれか１項に記載の方法。
15. Ｌｐ−ＰＬＡ２活性がシンチレーションカウンティングによって測定される、請求項１ないし１４のいずれか１項に記載の方法。
16. 全ＲＩカウントまたはブランクを測定するための少なくとも２つの容器に緩衝溶液をアリコートすることをさらに含む、請求項１記載の方法。
17. 容器が、微小遠心管またはマイクロタイタープレート上のウェルである、請求項１６記載の方法。
18. 少なくとも１つのブランクを測定するための反応混合物をほぼ同容量および濃度の工程ｉにしたがって調製される溶液およびＢＳＡまたはヒト血清アルブミンと接触させ、少なくとも２つの全ＲＩカウントを測定するための反応混合物をほぼ同容量の工程ｉにしたがって調製される溶液およびＢＳＡまたはヒト血清アルブミンの置換溶液と接触させること、ここで、該置換溶液はＢＳＡまたはヒト血清アルブミンを含有しない；得られた各試料の上清部分、得られたブランクを測定するための反応混合物および得られた全ＲＩカウントを測定するための反応混合物を別々の容器にアリコートすること；および、その各アリコートにシンチレーションカクテルを接触させることをさらに含む、請求項１７記載の方法。