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Abstract
Description
天然ポリマー、或いはそれらの混合物上にコーティングされた。
実施例1
350ミクロンの空隙率及び10cm2の活性表面を有する多孔質ポリエチレン(Porex Technologies, Germany)のマトリックス表面を、O2を使用したプラズマ化学蒸着(Plasma Science, USA, Type PS 0350 Plasma Surface Treatment System)によって修飾した。
100ミクロンの空隙率及び20cm2の活性表面を有する多孔質ポリエチレン(Porex Technologies, Germany)のマトリックス表面を、O2を使用したプラズマ化学蒸着(Plasma Science, USA, Type PS 0350 Plasma Surface Treatment System)によって修飾した。
170ミクロンの空隙率及び0.04m2の活性表面を有する多孔質ポリエチレン(Porex Technologies, Germany)のマトリックス表面を、アリルアミンを使用したプラズマ重合(Plasma Science, USA, Type PS 0350 Plasma Surface Treatment System)によって修飾した。
70ミクロンの空隙率及び0.26m2の活性表面を有する多孔質ポリエチレン(Porex Technologies, Germany)のマトリックス表面を、アクリル酸を使用したプラズマ重合(Plasma Science, USA, Type PS 0350 Plasma Surface Treatment System)によって修飾した。
5ミクロンの空隙率及び0.9m2の活性表面を有する多孔質ポリエチレン(Porex Technologies, Germany)のマトリックス表面を、NH3を使用したプラズマ重合(Plasma Science, USA, Type PS 0350 Plasma Surface Treatment System)によって修飾した。
10ミクロンの空隙率及び100cm2の活性表面を有する多孔質ポリテトラフルオロエチレン、PTFE(W.L. Gore & Associates Inc., USA)のマトリックス表面を、NH3を使用したプラズマ化学蒸着(Plasma Science, USA, Type PS 0350 Plasma Surface Treatment System)によって修飾した。
10ミクロンの空隙率及び300cm2の活性表面を有する多孔質ポリスチレン(Dow Chemical, USA)のマトリックス表面を、CO2を使用したプラズマ化学蒸着(Plasma Science, USA, Type PS 0350 Plasma Surface Treatment System)によって修飾した。
80ミクロンの空隙率及び100cm2の活性表面を有する多孔質ポリウレタン(Polymers Unlined, Sweden)のマトリックス表面を、アルデヒディックアルコキシシラン(Ardehydic Alkoxy Silane)製品番号(PSX 1050, United Chemical Technologies Inc., USA)の95%エタノール中2%溶液を使用して修飾した。溶液のpHを酢酸でpH5.5に調節し、溶液をマトリックスを通して還流し、これを室温で一夜インキュベートし、その後0.9%生理食塩水で洗浄した。
200ミクロンの空隙率及び0.5m2の活性表面を有する多孔質シリコン(Nusil, France)のマトリックス表面を、アミン−シラン(製品番号 0750, United Chemical Technologies Inc., USA)の95%エタノール中2%溶液を使用して修飾した。溶液をマトリックスを通して還流し、これを室温で一夜インキュベートし、最終的に0.9%生理食塩水で洗浄した。
実施例10
ポリ−リジン(200mg)を10mlの50mM炭酸ナトリウム溶液に溶解し、そして100ミクロンの空隙率を有する多孔質ポリカーボネート(Milipore Plastics, USA)を該溶液に浸漬し、ポリ−リジンとポリカーボネートマトリックスの間に共有結合を得るために、4℃で24時間保持した。多孔質マトリックスを最終的に過剰の蒸留水で洗浄した。
実施例4によって得られた多孔質ポリエチレンマトリックスを、1−シクロヘキシル−3−(2−モルホリノエチル)カルボジイミドメト−p−トルエンスルホン酸塩(WCCM)(Aldrich)の水溶液で、閉じた回路中で、5ml/分の流速で6時間還流した。そして、それを水ですすぎ、最終的にポリエチレンイミン(Sigma)(10mg/ml、pH7.0)を加え、マトリックスを一夜インキュベートした。
実施例3によって得られた多孔質ポリエチレンマトリックスを、1.0%グルタルジアルデヒドを使用して0.2Mリン酸緩衝液pH7.5中で結合させ、そして1ml/分の流速で室温で6時間還流した。その後、マトリックスをヒアルロン酸溶液(2mg/ml)とともに室温で16時間インキュベートする前に、緩衝液で洗浄した。過剰のヒアルロン酸を最終的にすすいだ。
実施例13
70ミクロンの空隙率及び0.18m2の活性表面を有する多孔質ポリエチレン(Porex Technologies, Germany)のマトリックスを、閉じた回路中、0.1MのHClで調節したpH3.3において、2mg/mlのヒアルロン酸溶液(BioHyos, Sweden, 12×106ダルトン)で1ml/分の流速、室温で16時間還流した。
70ミクロンの空隙率及び7.0m2の活性表面を有する多孔質ポリエチレン(Porex Technologies, Germany)のマトリックスを、ガラスチューブ中に置いた。多孔質マトリックスをその中に有する該チューブを350mlの水中、0.13%ポリ−リジン(Sigma)溶液で満たし、0.1MのHClでpH3.3に調節した。そして、該ポリ−リジン溶液を、フィルターマトリックスを有するチューブを通して室温で5ml/分未満の流速で再循環させた。多孔質マトリックスを最終的に逆浸透水ですすいだ。
70ミクロンの空隙率及び3.4m2の活性表面を有する多孔質ポリエチレン(Porex Technologies, Germany)のマトリックスを、ガラスチューブ中に置いた。多孔質マトリックスをその中に有する該チューブを350mlの逆浸透水中、0.2%リコンブミン(登録商標)(組み換えHuman Serum Albumin, Hoechst-Pharma, USA)で満たし、0.1MのHClでpH3.3に調節した。
実施例4によって得られた多孔質ポリエチレンマトリックスを、10mg/mlのポリエチレンイミン(Sigma)溶液で、閉じた回路中、流速5ml/分で還流した。その後、該多孔質マトリックスを水ですすいだ。
実施例17
実施例5によって得られた多孔質ポリエチレンマトリックスを、WCCMの水性溶液を用いてデオキシコレート(DOC)と結合させた。1ミリモルのソディウムデオキシコレートを含む、水中、40%ジメチルホルムアミド(DMF)(Sigma)の溶液300mlを、0.3MのHClでpHをpH4.8に調節しつつ、攪拌しながら多孔質ポリカーボネートに加えた。DMF:水(1:.1.8)中、6mMのWCCM溶液をその後、10分間にわたって添加した。懸濁液を、0.3MのHClの添加によってpH4.8に維持した。
実施例3によって得られた多孔質ポリエチレンマトリックスを、0.15Mリン酸緩衝液、pH7.0中、12%のグルタルジアルデヒドを室温で24時間使用して、結合させた。マトリックスを0.15Mリン酸緩衝液で洗浄し、そして抗CD14抗体(DAKO、Denmark)を1mg/mlの濃度で添加し、8℃で24時間インキュベートした。続いて、安定な二級アミン結合を生成するために、シアノボロ水素化ナトリウムによる還元を実施した。
実施例8によって得られた多孔質ポリエチレンマトリックスを、0.15Mのリン酸緩衝液で洗浄し、そして組み替えIL-1受容体(Kineret, Amgen, USA)を1mg/mlの濃度で添加し、8℃で24時間インキュベートした。続いて、安定な二級アミン結合を生成するために、シアノボロ水素化ナトリウムによる還元を実施した。
実施例5によって得られた多孔質ポリエチレンマトリックスを、0.2Mリン酸緩衝液、pH7.5及び1.0%のグルタルジアルデヒドを使用して、結合させた。マトリックスをこの溶液とともに3時間インキュベートした。リン酸緩衝液で洗浄後、マトリックスを再循環させながら、1mg/mlの硫酸ポリミキシンB(Sigma)溶液中で一夜インキュベートした。マトリックスを最終的に0.1Mのリン酸緩衝液、pH7.4で洗浄した。
実施例2によって得られた多孔質ポリエチレンマトリックスを、0.1Mの2−(N-モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)緩衝液(Sigma)、pH4.8中、5mg/mlの濃度の組み替えTNF-α受容体(Enbrel, Wyeth, UK)と結合させた。30mg/mlのWCCMの水性溶液を添加し、マトリックスを8℃で一夜インキュベートした。マトリックスを最終的に0.1Mリン酸緩衝液、pH7.4で洗浄した。
実施例3によって得られた多孔質ポリエチレンマトリックスを、0.2Mリン酸緩衝液、pH7.5中、1.0%のグルタルジアルデヒドを使用して、抗−ヒトTNF-α抗体(Sigma)と結合させた。マトリックスをTNF-α抗体緩衝溶液とともに3時間インキュベートした。リン酸緩衝液でマトリックスを洗浄後、1ml/分の流速で再循環させながら、リン酸緩衝液中、抗-ヒトTNF-α抗体(1mg/ml)を添加し、室温で6時間インキュベートした。マトリックスを最終的に0.1Mのリン酸緩衝液、pH7.4で洗浄した。
実施例5で得られた多孔質ポリエチレンマトリックスを、0.1MのMES緩衝液、pH4.8中で、2mg/mlの濃度のヒト殺菌15mg/mlの濃度でこのマトリックスに添加し、8℃で一夜インキュベートした。マトリックスを最終的に0.1Mのリン酸緩衝液、pH7.4で洗浄した。
実施例15によって得られた多孔質ポリエチレンマトリックスを、0.1MのMES緩衝液pH4.8中、1mg/mlの濃度のDOC溶液中でインキュベートした。その後、WCCMの水性溶液を添加し、マトリックスを8℃で一夜インキュベートした。マトリックスを最終的に0.1Mのリン酸緩衝液、pH7.4で洗浄した。
実施例25
実施例3によって得られた多孔質ポリエチレンマトリックスを、室温で24時間、0.2Mリン酸緩衝液、pH7.0中、1.2%のグルタルジアルデヒドで活性化した。マトリックスを緩衝液で洗浄し、続いて0.2Mリン酸緩衝液、pH7.0中、50mg/mlの1,6−ジアミノヘキサン(DAH)(Sigma)中で24時間インキュベートした。その後、10mg/mlのシアノボロ水素化ナトリウム(Sigma)を溶液に添加した。多孔質マトリックスを0.1Mリン酸緩衝液で洗浄し、その後、0.1MのMES緩衝液、pH4.8中、DOC溶液(1mg/ml)中でインキュベートした。その後、WCCMの水性溶液を添加し、マトリックスを8℃で一夜インキュベートした。マトリックスを最終的に0.1Mリン酸緩衝液、pH7.4で洗浄した。
実施例5によって得られた多孔質ポリエチレンマトリックスを、0.2Mリン酸緩衝液、pH7.0中、1.2%のグルタルジアルデヒドで、室温において24時間インキュベートした。マトリックスを緩衝液で洗浄し、その後、0.2Mリン酸緩衝液、pH7.4中、10mg/mlの濃度のアジピン酸ジヒドラジド(Aldrich)とともに24時間インキュベートした。その後、10mg/mlのシアノボロ水素化ナトリウム(Sigma)を溶液に添加した。
実施例10によって得られたマトリックスを、WCCMの水性溶液を使用してDOCと結合させた。1ミリモルのソディウムデオキシコレートを含む、300mlの40%DMF(Sigma)水溶液を、攪拌しながら、多孔質ポリカーボネートマトリックスに添加した。0.3MのHClで、懸濁液のpHを4.8に調節した。DMF:水(1:1.8)中、WCCMの6mM溶液を10分間にわたって添加し、3時間の間、周期的に0.3MのHClを添加することによって、pH4.8に維持した。そして、それを24時間、室温に保持した。
実施例14によって得られたマトリックスを、室温で24時間、0.2Mリン酸緩衝液、pH7.0中、1.2%のグルタルジアルデヒドで活性化し、その後過剰量の緩衝液ですすいだ。0.1Mの炭酸水素緩衝液、pH8.0中、10mg/mlの濃度のポリエチレンイミン(Sigma)を、多孔質マトリックス中へ導入し、マトリックスを溶液とともに16時間インキュベートした。
実施例3によって得られた多孔質ポリエチレンマトリックスを、室温で24時間、0.2Mリン酸緩衝液、pH7.0中、1.2%のグルタルジアルデヒドで活性化した。その後、マトリックスを緩衝液ですすぎ、0.2Mのリン酸緩衝液、pH7.0中、50mg/mlの濃度の1,6−ジアミノヘキサン(DAH)(Sigma)とともに室温で24時間インキュベートした。その後、多孔質マトリックスを0.1Mリン酸緩衝液で洗浄し、0.1Mリン酸緩衝液、pH7.4中、10mg/mlの濃度のTNF-α受容体(Enbrel, Wyeth, UK)溶液中の懸濁液として、8℃で12時間インキュベートした。その後、10mg/mlの濃度で、シアノボロ水素化ナトリウム(Sigma)の溶液を懸濁液に添加した。マトリックスを最終的に0.1Mリン酸緩衝液、pH7.4で洗浄した。
全血を、0.02m2の活性表面を有するディスク形状のマトリックスのフィルターを通過させることによって、細胞の分離を行った。
実施例30
特異的標識された抗CD45+抗体(MACS Antibody Microbeads; Miltenyi Biotec, Germany)を使用して、全血から白血球を分離するために、100ミクロンの空隙率を有する、ポリエチレン及び磁性フェライト(80%FeO、20%BaO2、Porex Technologies, Germany)の混合物を含む磁性多孔質マトリックスを使用した。そのような抗体で白血球を磁性標識した後、血液を多孔質マトリックスを通過させた。
好中球及び単球としてヒト貪食血液細胞を分離するために、200ミクロンの空隙率及び0.2m2の活性表面を有する、多孔質セルロースジアセテート(Tenite,Eastman Chemicals, USA)のマトリックス表面を使用した。ヒト全血を、EDTA入り採血管(B&D、UK)中に集め、血液を多孔質マトリックスを通過させた。
実施例32
エンドトキシン除去基でコーティングした、実施例22によって得られたマトリックスを、図4に示す試験系において、多孔質ディスクとして使用した。
実施例33
実施例25によって得られたマトリックス、すなわちDOCをその上に有する、プラズマ修飾されたポリエチレンマトリックスは、ジアミノヘキサンのスペーサーを介してDOCをその上に固定化した。該スペーサーは、先ずグルタルジアルデヒドによってマトリックスに結合させ、そしてカルボジイミドを使用してデオキシコレートに結合させた。得られたマトリックスを、図4に示す系のフィルター装置中の多孔質ディスクとして使用した。
実施例3(非固定化アミノ基)及び実施例17(固定化DOC)によってそれぞれ得られたマトリックスを、多孔質ディスクとして使用し、それらのLPS除去能を比較した。LPSを蒸留水に溶解したという違い以外は、実施例33と同様の再循環試験を実施した。
実施例35
実施例19及び実施例29によって得られたマトリックスを、それぞれTNF-α及びIL-1の組み合わせの除去のために使用した。
Claims (22)
- 全血又は体液から、少なくとも1の成分を選択的に結合し、且つ分離するための方法であって、ここで、前記血液又は体液が、硬質一体型分離マトリックスを、そこから排除されることなく通過させられ、前記マトリックスが、5ミクロン〜500ミクロンの範囲の孔サイズ、並びに0.5cm2〜10m2の範囲の活性表面を有する多孔質構造を有し、前記少なくとも1の成分を結合可能である、前記方法。
- 前記マトリックスがさらに、前記多孔質構造のコーティング及び/又は表面修飾によって導入された、少なくとも1の官能基を含み、前記少なくとも1の官能基が単独で又は前記多孔質構造の非機能付加領域とともに、前記少なくとも1の成分を結合可能である、請求項1に記載の方法。
- 前記マトリックスが、金属、無機酸化物、カーボン、ガラス、セラミック、合成ポリマー、及び/又は天然ポリマー、或いはそれらの混合物から作られる、請求項1に記載の方法。
- 前記金属が磁性を有する、請求項3に記載の方法。
- 前記合成又は天然ポリマーが、前記金属、表面積の広い無機酸化物、カーボン、ガラス、セラミック、合成ポリマー、及び/又は天然ポリマー、或いはそれらの混合物上にコーティングされた、請求項3又は4に記載の方法。
- 前記合成ポリマーが、ポリオレフィン、ビニルポリマー、フッ素含有ポリマー、ポリアクリレート、ポリアミド、ポリイミド、ポリイミン、ポリスチレン及びそのコポリマー、シリコンゴム、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリウレタン、ポリスルホネート、ポリグリコール、ポリエーテル、又はポリアルキドオキサイド、或いはそれらのコポリマー又はハイブリッドである、請求項3又は5に記載の方法。
- 前記天然ポリマーが、ポリサッカライド、ポリ炭化水素、ポリアミノ酸、ポリ乳酸、又はポリグリコール酸、或いはそれらのコポリマー又はハイブリッドである、請求項3又は5に記載の方法。
- 前記表面修飾が、電着、電気蒸着、プラズマ化学沈着、イオンプラズマ流からの沈着、プラズマ重合、プラズマにより促進された表面ポリマー沈着、又は化学蒸着によって達成される、請求項2に記載の方法。
- 前記多孔質構造が、焼結、押し出し成形、型成形、又は発泡法によって得られる、請求項1に記載の方法。
- 前記少なくとも1の官能基が、スルフヒドリル、カルボキシレート、アミン、アルデヒド、ケトン、ヒドロキシル、ハロゲン、ヒドラジド、又は活性水素である、請求項2に記載の方法。
- リガンドが、前記少なくとも1の官能基に共有結合で結合されている、請求項2に記載の方法。
- 前記リガンドが、タンパク質、ペプチド、抗体又はそれらの断片、炭化水素、ポリサッカライド、ホルモン、抗酸化物質、糖タンパク質、リポタンパク質、脂質、脂溶性ビタミン、胆汁酸、反応性色素、アラントイン、尿酸、又はポリミキシン、或いはそれらの組み合わせである、請求項11に記載の方法。
- クロスリンカーが、前記少なくとも1の官能基及び前記リガンドの間に共有結合で結合されている、請求項11又は12に記載の方法。
- 前記クロスリンカーが、ホモ二機能性、ヘテロ二機能性、又は三機能性のクロスリンカーである、請求項13に記載の方法。
- 前記クロスリンカーが、スペーサーとして、前記少なくとも1の官能基及び前記リガンドの間に共有結合で結合されている、請求項13又は14に記載の方法。
- 前記スペーサーが、シラン、ジイソシアネート、グリコレート、ポリエチレングリコール、サクシニミジル試薬、ジヒドラジン、アジピン酸、ジアミン、アミノ酸、オリゴアミノ酸、ポリアミノ酸、ペプチド、又はタンパク質である、請求項15に記載の方法。
- 前記分離マトリックスが、ディスク、ロッド、シリンダー、リング、球、管、又は中空の管の形状を有する、請求項1に記載の方法。
- 請求項1〜17のいずれか1項に記載の方法であって、以下の:
(1)ハウジング;
(2)入り口;
(3)出口;及び
(4)前記少なくとも1の分離マトリックス(5a、5b、…);
を含む装置中で実施される、前記方法。 - 前記装置が数個の分離マトリックス(5a、5b、…)を有し、ここで、各分離マトリックスが、全血又は体液からの少なくとも1の成分を選択的且つ別々に除去する、請求項18に記載の方法。
- 前記装置を通過する流速が、5ml/時間〜6000ml/分の範囲である、請求項18又は19に記載の方法。
- 成分を、これを含む水性溶液から除去するための、支持体上に固定化された胆汁酸部分の使用。
- 前記胆汁酸部分が、デオキシコール酸部分である、請求項21に記載の使用。
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