HU208838B - Method for producing peptones containing aza aminoacides by means of solid-phase synthesis - Google Patents

Method for producing peptones containing aza aminoacides by means of solid-phase synthesis Download PDF

Info

Publication number
HU208838B
HU208838B HU912825A HU282591A HU208838B HU 208838 B HU208838 B HU 208838B HU 912825 A HU912825 A HU 912825A HU 282591 A HU282591 A HU 282591A HU 208838 B HU208838 B HU 208838B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
ser
arg
tyr
leu
trp
Prior art date
Application number
HU912825A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT60749A (en
HU912825D0 (en
Inventor
Gerhard Breipohl
Jochen Knolle
Wolfgang Koenig
Original Assignee
Hoechst Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst Ag filed Critical Hoechst Ag
Publication of HUT60749A publication Critical patent/HUT60749A/hu
Publication of HU912825D0 publication Critical patent/HU912825D0/hu
Publication of HU208838B publication Critical patent/HU208838B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás a C-terminális végén azaaminosavamid-csoportot tartalmazó peptidek előállítására szilárd fázison végzett szintézis útján.
A találmány feladata olyan eljárás kifejlesztése volt, amellyel C-terminális azaaminosavamid-csoportot tartalmazó peptideket lehet előállítani szilárdfázisú szintézissel, minél kevesebb racemátképződés mellett.
A fenti feladatatot olyan eljárással oldottuk meg, amellyel (I) általános képletű peptidek állíthatók elő:
X-Azagly-NH2 (I)
Az (I) általános képletben X jelentése
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha)-Leu-Arg-Pro-,
Ac-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha)-Leu-Arg-Pro-,
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha)-Leu-Arg-Pro-,
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(ct-LRha)-Leu-Arg-Pro-,
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-D-Ser-Tyr-D-Ser(aL-Rha)-Leu-Arg-Pro-',
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-phe-D-Trp-Ser-D-Tyr-D-Ser(aL-Rha)-Leu-Arg-Pro,
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-Ser(ct-LRha)-Leu-Arg-Pro-,
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha)-D-Leu-Arg-Pro-,
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha)-Leu-D-Arg-Pro-,
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha)-Leu-Arg-D-Pro-, p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-csoport.
A találmány a fenti vegyületek fiziológiailag elviselhető sók előállítására is vonatkozik. Az eljárásra jellemző, hogy alkalmas kapcsolóvegyületet acilezhető formává alakítunk, alkalmas hangyasav-származékkal, majd megfelelő aminosav-hidraziddal reagáltatunk, kívánt esetben a védőcsoportot bázisra érzékeny vagy gyenge savval szemben érzékeny védőcsoportra lecseréljük, az így átalakított vegyületet gyantához kapcsoljuk, a kívánt peptidet lépésenként a C-terminális végtől kezdve felépítjük, a kész peptidet a gyantáról lehasítjuk és kívánt esetben fiziológiailag elviselhető sóvá alakítjuk.
Az azaaminosavak a természetes és nem-természetes aminosavak olyan származékainak tekinthetők, amelyekben a -CHR-, illetve -CH2- központi csoport -NR-, illetve -NH- csoporttal van kiváltva. Ilyen a találmány szerinti vegyületben szereplő azaglicin is.
Az (I) általános képletű vegyületek sóin főleg a gyógyszászatilag elfogadható, azaz nem-toxikus sókat értjük. Előnyösek az alkálifém- és alkáliföldfémsók, fiziológiailag elfogadható aminokkal képzett sók, valamint szervetlen vagy szerves savval (pl. HC1, HBr, H2SO4, H3PO4, maleinsav, fumársav, citromsav, borkősav, ecetsav) képzett sók jöhetnek számításba.
A találmány szerinti eljárás során előnyösen egy (II) általános képletű vegyületet - a (II) általános képletben
Y’,Y2,Y3,Y4 és Y5 jelentése hidrogénatom, (C,-C4)alkil-, (C1-C4)-alkoxi- vagy -O-(CH2)n-COOH, -(CH2)n-COOH vagy -NH-CO-(CH2)n-COOH képletű csoportok amelyek azonosak vagy eltérőek lehetnek, de legalább egy csoport jelentése -O-(CH2)n-COOH, -(CH2),-COOH vagy -NH-CO-(CH2)n-COOH képletű csoport, és n értéke 1-től 6-ig, előnyösen 1-től 3-ig terjedő egész szám,
R1 jelentése hidrogénatom vagy (Cj-C6)-alkoxi-(C6C,2)-arilesöpört, előnyösen 4-metoxi-fenilcsoport szililező reagenssel, például butil-dimetil-szilil-kloriddal, terc-butil-fenil-szilil-kloriddal, trimetil-klór-szilánnal, különösen az utóbbival, alkalmas oldószer, így tetrahidrofurán, acetonitril, diklór-metán, dimetil-formamid vagy a felsoroltak elegyének jelenlétében reagáltatunk, a szililezett vegyületet klórhangyasavszármazékkal, előnyösen helyettesített észterszármazékkal reagáltatjuk és a kapott (III) általános képletű vegyületet, amelyben R1, Y1, Y2, Y3, Y4 és Y5 jelentése a fent megadott, míg
R2 jelentése (C6-Ci2)-arilcsoport, amely elektronszívó csoporttal, például nitrocsoport, halogénatom, így például fluor- vagy klóratom szubsztituált, egy (IV) általános képletű aminosavhidraziddal - a (IV) általános képletben
X jelentése természetes vagy nem-természetes aminosav vagy iminosav, ahogy ezt fent definiáltuk,
R3 jelentése bázissal vagy gyenge savval, illetve hidrogénezéssel szemben érzékeny védőcsoport, pl. uretánvédőcsoport [Hubbuch, Kontakté (Merck) 1979, Nr. 3, 14-23. old.],
R4 (C,-C8)-alkil-, (C3-C9)-cikloalkil-, (C6-C12)-aril-, (C6-C12)-aril-(C|-Cg)-alkil-, heteroaril- vagy heteroaril-(C|-C8)-alkilcsoport vagy hidrogénatomolyan oldószerben, amely a (III) és a (IV) általános képletű vegyületet oldja, például dimetil-formamidban reagáltatjuk, és egy kapott, R3 helyén hidrolízissel szemben érzékeny védőcsoportot, előnyösen benziloxi-karbonilcsoportot tartalmazó (V) általános képletű vegyületről, amelyben R1, R4, Y1, Y2, Y3, Y4 és Y5 jelentése a fent megadott, az R3 védőcsoportot platina katalizátor jelenlétében végzett hidrogénezéssel eltávolítjuk, és a helyén további reagáltatás előtt bázissal szemben érzékeny védőcsoportot, előnyösen Fmoc csoportot, vagy gyenge savval szemben érzékeny uretánvédőcsoportot, előnyösen Bpoc csoportot alakítunk ki, majd az (V) általános képletű vegyületet, amelyben R1, Y1, Y2, Y3, Y4 és Y5 jelentése a fent megadott, és R3 bázissal, illetve gyenge savval szemben érzékeny uretán-védőcsoportot jelent, a peptidkémiában szokásosan alkalmazott kapcsolóreagensek valamelyikével az -O-(CH2)„-COOH, -(CH2)n-COOH vagy -NH-CO-(CH2)n-COOH képletű csoporton keresztül gyantához kapcsoljuk, az R3 védőcsoportot lehasítjuk, bázissal vagy gyenge savval szemben érzékeny védőcsoportot átmenetileg hordozó természetes aminosavakat, iminosavakat, adott esetben aktivált származékaik alakjában, lépésenként hozzákondenzálunk, és a felépí2
HU 208 838 Β tés befejeztével az (I) általános képletű peptidet közepesen erős savval végzett kezeléssel a gyantáról lehasítjuk, és az átmeneti oldallánc-védőcsoportok vagy a savas kezelés során lehasadnak, vagy utólag alkalmas intézkedéssel eltávolítjuk azokat.
A (IV) általános képletű vegyületeket a természetes vagy nem-természetes aminosavak, illetve iminosavak és a megfelelő hidrazidok reagáltatásával állítjuk elő a pentidkémia szokásos kondenzálási módszerek szerint.
Az alkilcsoportok lehetnek egyenes vagy elágazó szénláncúak. Ez az alkilcsoportokról levezetett csoportok (pl. alkoxi-, alkiltio-, alkilamino-, dialkilamino- és alkanoilcsoport) esetén is érvényes. Az alkilcsoport előnyösen 1-4 szénatomos.
Cikloalkilcsoporton ott alkilcsoporttal szubsztituált csoportot, például a 4-metil-ciklohexilcsoportot is értjük.
Halogénatomként fluor-, klór-, bróm- vagy jódatom, előnyösen azonban fluor- vagy klóratom jöhet számításba.
A (C6-C|2)-arilcsoport lehet például fenil- vagy naftilcsoport. Heteroarilcsoporton 5-7 tagú monociklusos, illetve 8-10 tagú biciklusos aromás gyűrűrendszert értünk, amely lehet benzanellált, továbbá heteroelemként az N, 0, S, NO, SO, SO2 közül 1-4 csoportot tartalmazhat, és adott esetben egyszeresen, kétszeresen vagy háromszorosan, azonosan vagy eltérően szubsztituált lehet az alábbi szubsztituensekkel: F, Cl, Br, I; hidroxil-, mono-, di- vagy tri-hidroxi-(CC4)-alkil-, trifluormetil-, formil-, karbox-amido-, mono- vagy di(Q-Cfi-alkilaminokarbonil-, nitro-, (C]-C7)-alkoxi-, (Cj—C7)-alkil-, (C,-C7)-alkoxikarbonil-, amino-, (C[C7)-alkilamino-, di-(C,-C7)-alkilamino-, karboxil-, karboximetoxi-, amino-(Ci-C7)-alkil-, di-(C,-C7)-alkilamino-(C i-C7)-alkil-, (C 1-C7)-alkoxikarbonil-metox i -, karbamoil-, szulfamoil-, (C|-C7)-alkoxiszulfonil-, (Cj-Cgj-alkilszulfonil-, szulfo-(Ct—C8)-alkil-, guanidino-(C,-Cg)-aIkil- és (C|-C6)-alkoxikarbonilcsoport és/vagy oxocsoport. Példaként az alábbiakat soroljuk fel: furil-, tienil-, imidazolil-, pirazolil-, oxazolil-, izoazolil-, tiazolil-, izotiazolil-, tetrazoil-, piridil-, pirazinil-, pirimidinil-, indolil-, izoindolil-, indazolil-, ftálazinil-, kinolil-, izokinolil-, kinazolinil-, cinnolinil-, βkarbolinilcsoport vagy a felsoroltak valamelyikének benzanellált származéka.
Amennyiben mellékreakciók elnyomása, vagy különleges peptidek szintézise céljából szükségesnek mutatkozik, az amino-, illetve azaaminosav oldalláncán lévő reakcióképes csoportot alkalmas védőcsoportokkal védjük [lásd pl.: T. W. Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis”, New York, John Wiley and Sons, 1981; (Hubbuch, Kontakté /Merck/ 1979, Nr. 3, 14-23. old); Büllesbach, Kontakté (Merck) 1980, Nr. 1, 23-25. old.]. Elsősorban az alábbi védőcsoportokat használjuk: Arg(Tos), Arg(Mts), Arg(Mtr), Arg(Pmc), Asp(OBzl), Asp(OtBu), Cys(4-MeBzl), Cys(Acm), Cys(StBu), Glu(OBzl), Glu(OtBU), His(Tos), His(Fmoc), His(Dnp), His(Trt), Lys(Cl-2), Lys(Boc), Met(O), Ser(Bzl), Ser(tBu), Thr(Bzl), Thr(tBu). Az oldallánc aminocsoportja glikozilezett is lehet (EP-A263521).
A hordozóként alkalmazott gyanták a kereskedelmi forgalomban kapható termékek lehetnek, de házilag is el lehet készíteni őket. Előnyösek az alábbiak: alkoxibenzil-alkoholgyanták, aminometilgyanták vagy benzhidrilaminogyanták. Az aminometil-, benzhidrilamino(BHA) és metilbenzhidrilamingyanták (MBHA) részesítjük előnyben. Az aminocsoportokkal való telítettség fokát aminosavelemzésssel és/vagy elemanalízissel határozhatjuk meg.
Alkalmas kapcsolóvegyületek például az alábbi irodalomban felsoroltak, valamint az ezekből levezetett származékok: Atherton, Sheppard, Perspectives in Peptide Chemistry, 101-117. old. (Karger, Basel 1981); EP-A 264 802, EP-A 287 882 és EP-A 322 348. Levezetett származék például olyan kapcsolóvegyület, amelyről lehasítottuk a védőcsoportokat. Előnyben részesítjük az alábbi kapcsolóvegyületeket: 4-karboxiláto-propoxi-4’-metoxi-benzhidriiamin és 5-karboxilátoetil-2,4-dimetoxi-4’-metoxi-benzhirdilamin.
Az (V) általános képletű kapcsolóvegyület és a következő aminosavszármazék kondenzálásának elősegítésére a peptidkémiában szokásosan használt aktiválószerek bármelyikét alkalmazhatjuk (lásd pl. Houben-Weyl, Methoden dér organischen Chemie, XV/2. köt., Stuttgart 1974). Előnyösek a karbodiimidek, pl. Ν,Ν’-diciklohexil-karbodiimid, N,N’-diizopropil-karbodiimid vagy N-etil-N’-(3-dimetilamino-propiI)-karbodiimid. A kondenzálást úgy végezhetjük, hogy az aminosavszármazékot és az aktiváló ágenst, adott esetben egy, a racémképződést elnyomó adalékkal, pl. 4dimetil-aminopiridinnel, l-hidroxibenzoriazollal [W. König, R. Geiger, Chem. Bér. 103 (1970) 78-798] vagy 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidrobenzotriazinnal (HOObt) [W. König, R. Geiger, Chem. Bér. 103 (1970) 2034-2040] együtt közvetlenül adagoljuk a gyantához, de az aminosavszármazék aktiválását, azaz szimmetrikus anhidriddé, illetve HOBt-, vagy HOObt-észterré alakítását külön is végezhetjük; ez esetben az aktivált komponens alkalmas oldószerrel készített oldatát oldjuk a kondenzálásra kész gyantához.
A kondenzálás, illetve az (V) általános képletű kapcsolóvegyületnek és áz aminosavszármazéknak a fentiekben felsorolt aktiválószerek valamelyikével végzett aktiválása dimetil-formamidban vagy diklór-metánban vagy e kettő elegyében történhet. Az aktivált aminosavszármazékot általában 1,5-4-szeres feleslegben visszük reakcióba. Amennyiben a kondenzálás nem teljes, a kondenzálási reakciót megismételjük, de anélkül, hogy a peptidgyanta a-aminocsoportjának a következő aminosav hozzákondenzálásához szükséges felszabadítását elvégeztük volna.
A kondenzálási reakciót a ninhidrin-reakció segítségével [E. Kaiserés mtsai, Anal, Biochem. 34 (1970), 595] követhetjük. A szintézis automatizáltan is történhet, például az Applied Biosystem cég Peptid-Synthesizer Model 430 A típusú gépével, amikor is vagy a gép gyártójának a szintézisprogramját, vagy a felhasználó saját programjait lehet használni. Az utóbbi főleg Fmoc-csoporttal védett aminosavszármazékok esetén célszerű.
HU 208 838 Β
A kész peptidamidot a peptidkémiában általánosan használt közepesen erős savak valamelyikével, pl. trifluor-ecetsavval hasítjuk le a gyantáról, amikor is kationfogóként a szilárd fázisú peptidszintézis területén szokásos kationfogót alkalmazunk, például: fenol, krezol, tiokrezol, anizol, tionizol, etánditiol, dimetil-szulfid, etil-metil-szulfid, vagy hasonlók, vagy a felsoroltak elegyei. A trifluorecetsavat alkalmas oldószerrel, például diklór-metánnal hígított állapotban is felhasználhatjuk. A peptidnek a gyantáról történő lehasításával egyidejűleg az oldalláncok védőcsoportjai is lehasadnak.
Az így kapott nyers proteidet Sephadexen, ioncserélő gyantán vagy HPLC-vel kromatografálva tisztítjuk.
Előnyösen az alábbi két vegyületet állítjuk elő:
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(aL-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 vagy pGlu-His-TrpSer-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 (Zoladex).
A példarészben az alábbi rövidítéseket alkalmazzuk:
BSA bisz-trimetilszilil-acetamid
Cha ciklohexil-alanin
Chg ciklohexil-glicin
DCC diciklohexil-karbodiimid
DIC diizopropil-karbodiimid
DMAP dimetil-aminopiridin
Fmoc 9-fluorenil-metoxikarbonil
HOBt 1-hidroxibenzotriazol
HOObt 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-l,2,3-benzotriazin Nal naftil-alanin Npg neopentilglicin
Pmc 2,2,5,7,8-pentametil-kromán-6-szulfonil Tbg terc-butil-glicin THF tetrahidrofurán Thia 2-tienil-alanin.
Az alábbi példákkal a találmányt közelebbről ismertetjük anélkül, hogy e példákra korlátoznánk.
1. példa la 5-karboxiláto-etil-2,4-dimetoxi-4’-metoxi-benzhidrilamin
17,5 g 5-karboxiláto-etil-2,4-dimetoxi-4’-metoxibenzofenonoxim 450 ml 1: 1 arányú etanol/DMF eleggyel készített oldatához 2 ml tömény ammónia-oldatot, majd platina-katalizátort adunk, és az elegyet légköri nyomáson 5 napon át hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, a szűrletet betöményítjük és a terméket éterrel kicsapjuk; további tisztítás nélkül visszük reakcióba.
b N-(p-nitrofeniloxikarbonil)-5-karboxiláto-etil2,4-dimetoxi-4’-metoxi-benzhidrilamin
Az la példa cím szerinti vegyületének 10 g-ját 100 ml 4: 1 arányú THF/DMF-elegyben feloldjuk és az oldathoz szobahőmérsékleten 2,1 egyenérték bisztrimetilszilil-acetamidot (BSA) adunk. Rövid idő elteltével a szuszpenzió kitisztul, a tiszta oldatot még két órán át keverjük. 3 g klórhangyasav-nitrofenilészter adagolása után még további egy órán át folytatjuk a keverést. A reakció befejeztével az oldószert nagyvákuumban eltávolítjuk. A maradékhoz 300 ml vizet adunk, és a keletkező olajat etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist In KHSO4-oldattal, majd vízzel mossuk, magnéziumszulfáttal szárítjuk és szárazra pároljuk. A maradékot (12 g) NMR, IR és MS segítségével azonosítjuk.
Az N-(p-nitrofeniloxi-karbonil)-5-karboxiláto-etil2,4-dimetoxi-4’-metoxi-benzhidrilamint aminosavhidraziddal az alkalmas szubsztituált kapcsolóvegyületté alakítjuk.
le Benziloxi-karbonil-4-prolil-azaglicil-(5-karboxiláto-etil-2,4-dimetoxi-4’-metoxibenzil-hidril)amid
3,27 g benziloxi-karbonil-prolilhidrazid-hidroklorid és 6,94 g lb szerinti vegyület 40 ml dimetilformamiddal készített oldatához 3 egyenértéknyi Netil-morfint, valamint katalitikus mennyiségű dimetilamino-piridint adunk, és az elegyet 16 órán át reagálni hagyjuk. Utána az elegyet szárazra pároljuk. A maradékot etil-acetát és butanol elegyében felvesszük és telített NaHCO3-oldattal, 1 N KHSO4-oldattal, majd vízzel mossuk. A szerves fázist magnézium-szulfáttal szárítjuk és szűrés után szárazra pároljuk. A maradékot tiszta etil-acetátből átkristályosítjuk. 6,6 g cím szerinti terméket kapunk.
FAB-MS: 641 (M+Li+)
IR: CO 1695 cmΉ-NMR (DMSO): δ = 3,7 s (6H, OCH3) ppm ld 9-fluorenil-metoxikarbonil-L-prolil-azaglicil-(5karboxiláto-etil-2,4-dimetoxi-4’-metoxi-benzhidril)-amid
26,5 g le szerinti vegyület 300 ml metanollal készített oldatához 2 g palládiumcsontszenet adunk. Egy óra alatt a hidrogénezés befejeződik. A katalizátort kiszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. További tisztítás nélkül a maradékot 80 ml (17,5 g) víz és 80 ml dioxán elegyében felvesszük, és 8 g nátrium-hidrogén-karbonátot, valamint 17 g 9-fluorenil-metoxikarbonil-Nhidroxi-szukcinimidet (Fmoc-ONSu) adagolunk. Egy nap reakcióidő után derítőszerből álló réteget hordozó szűrőn át szűrjük az elegyet. A szűrlet pH-értékét 2N kénsav-oldattal 6-ra állítjuk, térfogatát vákuumban 80 ml-re csökkentjük, utána 100 ml vízzel hígítjuk és etil-acetát és n-butanol 8,5 : 1,5 arányú elegyével extraháljuk. A szerves fázist félig telített NaCl-oldattal mossuk, majd szárazra pároljuk. A maradékot 500 g kovasavgélen át szűrjük etil-acetáttal. 20 g cím szerinti terméket kapunk.
FAB-MS: 729 (M+LF)
IR: CO 1695 cm-') le Az ld szerinti vegyület kapcsolása polisztirolgyantához
1,0 g aminometil-polisztirol gyanta (telítettség: 1,07 mmól) és 1,2 g ld szerinti vegyület 10 ml dimetilformamiddal készített szuszpenziójához 216 mg 1hidroxi-benzotriazolt (HOBt) és 0,75 ml diizopropilkarbodiimidet adagolunk. Az elegyet egy éjszakán át reagálni hagyjuk, míg a ninhidrin-teszt szerint a reakció teljes. A gyantát szűrjük, dimetil-formamiddal,
HU 208 838 Β majd diklór-metánnal mossuk, utána vákuumban alaposan szárítjuk. A gyanta prolin-telítettsége 0,51 mmól/g.
lfAc-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (a-L-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2
A 9-fluorenil-metoxikarbonil-Na-védőcsoportot dimetil-formamiddal készített 20%-os piperidin-oldattal hasítjuk az le szerinti vegyületről (2x3 perc, 2x8 ml). Utána a gyantát N-metil-pirrolidinonnal (5x10 ml) mossuk, és a peptidet a gyantán felépítjük [785 mg le szerinti gyanta], amikor is minden új aminosav esetén újból az alábbi lépések sorát végezzük:
- a Fmoc-védőcsoport lehasítása 20%-os, dimetilformamidos piperidin-oldattal;
- a gyanta mosása dimetil-formamiddal és N-metil-pirrolidinonnal;
- a Fmoc-aminosav hozzákondenzálása in situ kialakított HOBt-észter alakjában, diizopropil-karbodiimid alkalmazásával (1,5 mmól aminosav,
2,25 mmól HOBt, 1,6 mmól diizopropil-karbodiimid).
Amennyiben a kondenzálás nem teljes (Kaiserteszt), a kondenzálási lépést megismételjük. Utolsó aminosavaként Fmoc-D-NaI(2)-OH-t alkalmazunk. Az N-terminális acetilesoportot ecetsavanhidriddel végzett acetilezés során visszük be.
A szilárd fázison végzett szintézis befejeztével a gyantát mossuk (DMF, CH2C12), majd alaposan szárítjuk. A szárított gyantát szobahőmérsékleten 0,75 ml etanditiolban szuszpendáljuk. 15 perc elteltével 7,5 ml trifluorecetsavat adagolunk, és a szuszpenziót még 1,5 órán át keverjük. Utána a gyantát kiszűrjük, 80%-os trifluor-ecetsavval alaposan mossuk. A szűrletet vákuumban betöményítjük és a maradékot 30 ml vízben felvesszük. Nátrium-hidrogén-karbonát adagolásával a pH-értéket 6-7-re állítjuk, és a peptidet n-pentanollal kirázzuk (4x30 ml). Az n-pentanolos fázist bepároljuk, a maradékot metanol és víz 9 : 1 arányú elegyének 10 ml-jében felvesszük, 0,5 g kálium-karbonátot adagolunk, az elegyet 30 percig keverjük, majd szűrjük és a szűrletet bepároljuk. A maradékot 100 ml n-pentanolban felvesszük és vízzel mossuk. A szerves fázist magnézium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. 740 mg nyersterméket kapunk. Kromatográfiás tisztítás (Sephadex G 25 és 1 M ecetsav, majd kovasavgél) 185 mg tiszta cím szerinti terméket kapunk.
FAB-MS: 1531 (M+H+)
Az 1. példával analóg módon az alábbi vegyületeket állítjuk elő.
2. példa
Ac-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 FAM-MS: 1531 (M+H+)
3. példa
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(aL-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 FAM-MS: 1531 (M+H+)
4. példa
Ac-D-nal(2)-p-Cl-D-Phe-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 FAM-MS: 1531 (M+H+)
5. példa
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-D-Ser-Tyr-DSer(a-L-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 FAM-MS: 1531 (M+H+)
6. példa
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-D-Tyr-DSer(a-L-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 FAM-MS: 1531 (M+H+)
7. példa
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-Ser(a-LRha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 FAM-MS: 1531 (M+H+)
8. példa
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(aL-Rha)-D-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 FAM-MS: 1531 (M+H+)
9. példa
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(aL-Rha)-Leu-D-Arg-Pro-Azagly-NH2 FAM-MS: 1531 (M+H+)
10. példa
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(aL-Rha)-Leu-Arg-D-Pro-Azalgy-NH2
a) Benziloxi-karbonil-4-D-prolil-azaglicil-(5-karboxilato-etil-2,4-dimetoxi-4’-metoxi-benzilhidril)-amid
1,19 g benziloxi-karbonil-D-prolil-hidrazidihidroklorid 15 ml dimetil-formamiddal készített oldatához 1,84 g lb példa szerinti vegyületet, 1,5 ml N-etil-morfolin, valamint katalitikus mennyiségű dimetilaminopiridint (MPAP) adunk. A reakcióelegyet egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, utána az oldószert vákuumban ledesztilláljuk és a maradékot diklór-metánban oldjuk. A szerves fázist 15%-os KHSO4/K2SO4oldattal mossuk, magnézium-szulfáttal szárítjuk és rotációs bepárlón bepároljuk. 3,4 g olajat kapunk, amelyet kovasavgélen etil-acetát (500 ml) —> etil-acetát: metanol = 50: 2 gradienssel (1000 ml) kromatografáljuk. Hozam: 2,1 g
FAM-MS: 635 (M+H+)
b) H-D-Prolil-azaglicil-(5-karboxilato-etil-2,4-dimetoxi-4’-metoxi-benzhidril)-amid
800 mg 10a példa szerinti vegyület 20 ml metanollal készített oldatához spatulyahegynyi 10%-os palládium csontszén katalizátort adunk nitrogénlégkör alatt. Utána hidrogéngázt vezetünk be az edénybe. 45 perces hidrogénezés után a reakcióelegyet derítőréteggel ellátott szűrőn át szűrjük és a szűrletet rotációs vákuumbepárlóban oldószermentesítjük. 600 mg cím szerinti terméket kapunk.
c) 9-fluorenil-metoxikarbonil-D-prolil-azagIicil-(55
HU 208 838 Β karboxilato-etil-2,4-dimetoxi-4’-metoxi-benzhidril)amid lb 10b példa szerinti vegyület 15 ml dioxán-víz eleggyel (1 : 1) készített oldatához 336 mg nátriumhidrogén-karbonátot, valamint adagokban 674 mg 9fluorenilmetoxi-karbonil-N-hidroxi-szukcinimidet (Fmoc-ONSu) adunk, és az elegyet szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük. Utána az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, a megmaradt vizes fázist 1 N kénsavval savanyítjuk utána, és etil-acetáttal kétszer extraháljuk. A szerves fázist telített NaHCOj-oldattal mossuk, magnézium-szulfáttal szárítjuk, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. 1,4 g nyers terméket kapunk, amelyet kovasavgélen kromatografáljuk (diklórmetán/metanol/víz/ecetsav 95 : 5 : 0,5 : 0,5). Hozam: 870 mg FAM-MS: 745 (M+H+)
d) A 10c példa szerinti vegyület gyantához kapcsolása
I, 0 g aminometil-polisztirol-gyanta (megterhelés 1,07 mmól) és 1,2 g 10c példa szerinti vegyület 15 ml dimetil-formamiddal készített szuszpenziójához 216 mg 1-hidroxi-benzotriazolt (HOBt) és 0,75 ml diizopropil-karbodiimidet (DIC) adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten egy éjszakán át állni hagyjuk, ninhidrin-tesztel meggyőződünk róla, hogy a reakció teljes. A gyantát kiszűrjük és dimetil-formamiddal, diklór-metánnal, majd metil-terc-butil-éterrel mossuk. A gyanta mennyisége 1,5 g, és 0,256 mmól/g D-prolint hordoz.
II. példa p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBU)-Leu-Arg-ProAzagly-NH2
Az 1. példa szerint állítjuk elő a cím szerinti terméket kapunk.

Claims (4)

1. Eljárás (I) általános képletű peptidek, valamint fiziológiailag elviselhető sóik előállítására
X-Azagly-NH2 (I) mely képletben X jelentése
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha)-Leu-Arg-Pro-,
Ac-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha)-Leu-Arg-Pro-,
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha)-Leu-Arg-Pro-,
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha)-Leu-Arg-Pro-,
Ac-D-Nal(2)-p-CI-D-Phe-D-Trp-D-Ser-Tyr-D-Ser(aL-Rha)-Leu-Arg-Pro-,
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-D-Tyr-D-Ser(aL-Rha)-Leu-Arg-Pro-,
Ac-D-Nal(2)-p-CI-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-Ser(a-LRha)-Leu-Arg-Pro-,
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha) -D-Leu-Arg-Pro-,
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha)-Leu-D-Arg-Pro-,
Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-LRha)-Leu-Arg-D-Pro-, p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-csoport.
azzal jellemezve, hogy alkalmas kapcsolóvegyületet acilezhető formává alakítunk, alkalmas hangyasav-származékkal, majd megfelelő aminosav-hidraziddal reagáltatunk, kívánt esetben a védőcsoportot bázisra érzékeny vagy gyenge savval szemben érzékeny védőcsoportra lecseréljük, az így átalakított vegyületet gyantához kapcsoljuk, a kívánt pepiidet lépésenként a C-terminális végtől kezdve felépítjük, a kész pepiidet a gyantáról lehasítjuk és kívánt esetben fiziológiailag elviselhető sóvá alakítjuk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy egy (II) általános képletű vegyületet - a (II) általános képletben
Y1, Y2,Y3 Y4 és Y5 jelentése hidrogénatom, (C,-C4)alkil-, (Cj-CJ-alkoxi- vagy -O-(CH2)n-COOH, -(CH2)n-COOH vagy -NH-CO-(CH2)n-COOH képletű csoportok, amelyek azonosak vagy eltérőek lehetnek, de legalább egy csoport jelentése -O-(CH2)n-COOH, -(CH2)n-COOH vagy -NH-CO-(CH2)n-COOH képletű csoport, és n értéke 1-től 6-ig,
R1 jelentése hidrogénatom vagy (C|-C6)-alkoxi-(C6C12)-ari lesöpört, szililező reagenssel alkalmas oldószer jelenlétében reagáltatunk, a szililezett vegyületet klórhangyasav-származékkal reagáltatjuk és a kapott (III) általános képletű vegyületet, amelyben R1, Υ1, Υ2, Y3, Y4 és Y5 jelentése a fent megadott, míg R2 jelentése (C6-C)2)arilcsoport, amely elektronszívó csoporttal, előnyösen nitrocsoporttal, halogénatommal szubsztituált, egy (IV) általános képletű aminosavhidraziddal - a (IV) általános képletben X jelentése természetes vagy nem-természetes aminosav vagy iminosav, ahogy ezt fent definiáltuk, R3 jelentése bázissal vagy gyenge savval, illetve hidrogénezéssel szemben érzékeny védőcsoport,
R4 (C,-C8)-alkil-, (C3-C9)-cikloalkil-, (C6-C12)-aril-, (C6-C12)-aril-(C,-C8)-alkil-, heteroaril- vagy hetero-aril-fCj-Cgj-alkilcsoport vagy hidrogénatom alkalmas oldószerben reagáltatjuk, és egy kapott, R3 helyén hidrolízissel szemben érzékeny védőcsoportot tartalmazó (V) általános képletű vegyületről, amelyben R1, R4, Y1, Υ2, Y3, Y4 és Y5 jelentése a fent megadott, az R3 védőcsoportot platina katalizátor jelenlétében végzett hidrogénezéssel eltávolítjuk, és a további reagáltatás előtt X-hez kapcsolódó bázissal szemben érzékeny vagy gyenge savval szemben érzékeny uretánvédőcsoportot alakítunk ki, majd a kapott (V) általános képletű kapcsoló vegyületet, amelyben R1, Υ1, Υ2, Y3, Y4 és Y5 jelentése a fent megadott, és R3 bázissal, illetve gyenge savval szemben érzékeny uretán-védőcsoportot jelent, a peptidkémiában szokásosan alkalmazott kapcsolóreagensek valamelyikével az -O-(CH2)n-COOH, -(CH2)nCOOH vagy -NH-CO-(CH2)n-COOH képletű csoporton keresztül gyantához kapcsoljuk, az R3 védőcsoportot
HU 208 838 Β lehasítjuk, bázissal vagy gyenge savval szemben érzékeny védőcsoportot átmenetileg hordozó természetes aminosavakat, iminosavakat vagy azaaminosavakat, adott esetben aktivált származékaik alakjában, lépésenként hozzákondenzálunk, és a felépítés befejeztével az (I) 5 általános képletű peptidet közepesen erős savval végzett kezeléssel a gyantáról lehasítjuk, és az átmeneti oldallánc-védőcsoportok vagy a savas kezelés során lehasadnak, vagy utólag alkalmas intézkedéssel eltávolítjuk azokat.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás Ac-DNal(2)-p-cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő kiindulási anyagokat választunk.
4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás p-GluHis-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő kiindulási anyagokat választunk.
HU912825A 1990-08-30 1991-08-30 Method for producing peptones containing aza aminoacides by means of solid-phase synthesis HU208838B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4027394 1990-08-30

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUT60749A HUT60749A (en) 1992-10-28
HU912825D0 HU912825D0 (en) 1992-10-28
HU208838B true HU208838B (en) 1994-01-28

Family

ID=6413202

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU912825A HU208838B (en) 1990-08-30 1991-08-30 Method for producing peptones containing aza aminoacides by means of solid-phase synthesis

Country Status (22)

Country Link
EP (1) EP0475184B1 (hu)
JP (1) JP3177269B2 (hu)
KR (1) KR100203548B1 (hu)
AU (1) AU646488B2 (hu)
CA (1) CA2050216C (hu)
CZ (1) CZ282881B6 (hu)
DE (1) DE59104538D1 (hu)
DK (1) DK0475184T3 (hu)
ES (1) ES2069148T3 (hu)
FI (1) FI102380B (hu)
GR (1) GR3015359T3 (hu)
HU (1) HU208838B (hu)
IE (1) IE66524B1 (hu)
IL (1) IL99338A (hu)
NO (1) NO300216B1 (hu)
NZ (1) NZ239575A (hu)
PL (1) PL167504B1 (hu)
PT (1) PT98813B (hu)
RU (1) RU2036200C1 (hu)
SK (1) SK280319B6 (hu)
TW (1) TW295589B (hu)
ZA (1) ZA916848B (hu)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9112825D0 (en) * 1991-06-14 1991-07-31 Ici Plc Process for making peptides
GB9727123D0 (en) * 1997-12-22 1998-02-25 Int Centre Genetic Eng & Bio Synthesis of diamines
ES2154590B1 (es) 1999-05-20 2001-11-01 Lipotec Sa Procedimiento de sintesis de peptidos en fase solida
JP5475235B2 (ja) 2005-01-21 2014-04-16 アステックス・セラピューティクス・リミテッド 医薬化合物
WO2008044045A1 (en) 2006-10-12 2008-04-17 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
EP2073803B1 (en) 2006-10-12 2018-09-19 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
ES2624961T3 (es) 2013-03-21 2017-07-18 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Síntesis de productos de péptido que contienen imida cíclica
AU2014234400B2 (en) 2013-03-21 2017-11-16 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Synthesis of hydantoin containing peptide products

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2061714T3 (es) * 1987-12-22 1994-12-16 Hoechst Ag Grupos de anclaje inestables frente a acidos para la sintesis de amidas peptidicas mediante el metodo en fase solida.

Also Published As

Publication number Publication date
TW295589B (hu) 1997-01-11
ZA916848B (en) 1992-04-29
PT98813A (pt) 1992-07-31
NO300216B1 (no) 1997-04-28
AU646488B2 (en) 1994-02-24
FI102380B1 (fi) 1998-11-30
PL167504B1 (pl) 1995-09-30
JPH04230697A (ja) 1992-08-19
FI914064A0 (fi) 1991-08-28
IL99338A0 (en) 1992-07-15
NO913396D0 (no) 1991-08-29
IE913051A1 (en) 1992-03-11
DK0475184T3 (da) 1995-06-26
AU8340291A (en) 1992-03-05
EP0475184A1 (de) 1992-03-18
FI914064A (fi) 1992-03-01
FI102380B (fi) 1998-11-30
SK280319B6 (sk) 1999-11-08
CZ282881B6 (cs) 1997-11-12
IL99338A (en) 1996-05-14
CS266691A3 (en) 1992-03-18
EP0475184B1 (de) 1995-02-08
KR100203548B1 (ko) 1999-06-15
RU2036200C1 (ru) 1995-05-27
JP3177269B2 (ja) 2001-06-18
NZ239575A (en) 1993-07-27
ES2069148T3 (es) 1995-05-01
DE59104538D1 (de) 1995-03-23
NO913396L (no) 1992-03-02
GR3015359T3 (en) 1995-06-30
CA2050216A1 (en) 1992-03-01
PT98813B (pt) 1999-01-29
PL291561A1 (en) 1992-07-13
HUT60749A (en) 1992-10-28
KR920004421A (ko) 1992-03-27
HU912825D0 (en) 1992-10-28
CA2050216C (en) 2003-03-11
IE66524B1 (en) 1996-01-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6235876B1 (en) Liquid phase process for the preparation of GNRH peptides
FI79329C (fi) Nytt foerfarande foer framstaellning av pentapeptiden h-arg-x-asp-y-tyr-r och vid foerfarandet anvaenda mellanprodukter.
WO2001019849A1 (en) A process for the preparation of h-tyr-d-ala-phe(f)-phe-nh¿2?
IL173272A (en) Preparation of somatostatin peptides
HU208838B (en) Method for producing peptones containing aza aminoacides by means of solid-phase synthesis
Ruczyński et al. Problem of aspartimide formation in Fmoc‐based solid‐phase peptide synthesis using Dmab group to protect side chain of aspartic acid
US5117009A (en) Xanthenylamide handle for use in peptide synthesis
JPH02292245A (ja) 保護されたアミノ酸及びその製造方法
WO2000005243A2 (en) Resin derivatization method and uses thereof
Paris et al. Post-synthesis modification of aspartyl or glutamyl residue side-chains on solid support
JPH10505077A (ja) 保護基又はアンカー基及びそれらの使用
KR100336139B1 (ko) 신규의펩티드활성물질및그의제조방법
JP2748897B2 (ja) 新規なアルギニン誘導体およびこれを用いるペプチドの製造方法
JP2002521364A (ja) アミノ−アルデヒド固相支持体、そのためのリンカー並びにそれを製造する方法およびその用途
Jaganathen et al. Synthesis and Properties of a 2‐Diazohistidine Derivative: A New Photoactivatable Aromatic Amino‐Acid Analog
KR100272310B1 (ko) 액상 1-데아미노-8-d-아르기닌 바소프레신 아세테이트 합성법
Nagase et al. Application of tetrabutylammonium salt of N-(9-fluorenylmethoxycarbonyl) cysteic acid for solid phase peptide synthesis: Preparation of endothelin antagonistic cyclic pentapeptides
JPH01197465A (ja) 新規アルギニン誘導体、その製法及びペプチド合成における使用法
JPH07316193A (ja) ペプチド誘導体およびその用途
EP0564587A1 (en) Solution phase process for synthesis of peptide
JPH09136870A (ja) ジベンゾスベレニルアルギニン誘導体及びこれを用いるペプチド製造方法
EP1440977A1 (fr) Procédé de synthèse amélioré de dérivés diamides du tripeptide KPV
MXPA01009111A (es) Procedimiento para preparar ciclo (asp-dfen-nmeval-arg-gli)
KR19990071181A (ko) 고체상 반응을 통한 아자펩티드 유도체의 제조방법