PL167504B1 - Sposób wytwarzania peptydów za pomoca syntezy w fazie stalej PL PL - Google Patents
Sposób wytwarzania peptydów za pomoca syntezy w fazie stalej PL PLInfo
- Publication number
- PL167504B1 PL167504B1 PL91291561A PL29156191A PL167504B1 PL 167504 B1 PL167504 B1 PL 167504B1 PL 91291561 A PL91291561 A PL 91291561A PL 29156191 A PL29156191 A PL 29156191A PL 167504 B1 PL167504 B1 PL 167504B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- formula
- ser
- amino acid
- resin
- fmoc
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Sposób wytwarzania peptydów za pomoca syntezy w fazie stalej, o ogólnym wzorze 1, w którym X oznacza a -aminokwas z szeregu Ac-Nal(2), Ac-D-Nal(2), p-Cl- Phe, p-Cl-D-Phe- Trp, D-Trp, Ser, D-Ser, Tyr, D-Tyr, Ser( a -L-Rha), D-Ser( a -L-Rha), Leu, D-Leu, Arg, D- Arg, Pro, D-Pro, P-Glu, His, D-ser (tBu), n oznacza liczbe calkowita od 3 do 10, i A oznacza azaglicyne, oraz ich fizjologicznie tolerowanych soli octanów i chlorowo- dorków, znamienny tym, ze zwiazek o wzorze 2, w którym Y1 , Y2, Y3, Y4 i Y oznaczaja wodór, grupe C1-C4- alkoksy albo -(CH2)n-COOH, przy czym rodniki moga byc jednakowe albo rózne, przynajmniej jeden rodnik oznacza jednak -(C H2)n-CO O H , n oznacza liczbe calko- wita od 1 do 3, i R oznacza wodór albo 4-metoksyfenyl, poddaje sie reakcji z odczynnikiem sililujacym z szeregu chlorek tert.-butylodimetylosililu, chlorek tert.-butylo- fenylosililu, trimetylochlorosilan albo bistrimetylosililo- acetamid w rozpuszczalniku i nastepnie sililowany zwia- zek przeprowadza sie za pomoca pochodnej kwasu chloromrówkowego w zwiazki o wzorze 3, w którym R1. Y1, Y2, Y3, Y4 i Y maja wyzej podane znaczenie i R oznacza fenyl, który jest podstawiony przez grupe nitrowa i chlorowiec, tak otrzymane zwiazki o wzorze 3 poddaje sie reakcji z hydrazydem aminokwasu o wzorze 4, w którym X oznacza wyzej podany a -aminokwas i R3 oznacza grupe ochronna Fmoc, Bpoc albo Boc, w rozpu- szczalniku z utworzeniem zwiazków o wzorze 5, w któ- rym R1, R3 i Y1, Y2, Y3, Y4 i Y5 maja wyzej podane znaczenie; . . . W ZÓ R 1 W zó r 4 W ZÓ R 2 W z ór 5 WZÓR 3 PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania peptydów z C-końcowym amidem azaaminokwasu za pomocą syntezy w fazie stałej.
Synteza w fazie stałej - również synteza Merrifield'a - w której zostają utworzone aminokwasy, w syntezie w fazie stałej stopniowo od końca C-terminalnego,jestjuż od dawna znana, jednakże nie można tym sposobem wytwarzać z ubogą racemizacją peptydów, które przy C-terminalnym końcu zawierają azaaminokwas.
Zadaniem wynalazku jest opracowanie ubogiego w racemizaję sposobu wytwarzania peptydów z C-końcowymi amidami azaaminokwasu za pomocą syntezy w fazie stałej. Zadanie to rozwiązano według wynalazku przez sposób wytwarzania peptydów o ogólnym wzorze 1, w którym X oznacza α-aminokwas z szeregu Ac-Nal(2), Ac-D-Nal(2), p-Cl-Phe, p-Cl-D-Phe ,Trp, D-Trp, Ser, D-Ser, Tyr, D-Tyr, Ser(a-L-Rha), D-Ser(a-L-Rha), Leu, D-Leu, Arg, D-Arg, Pro, D-Pro, P-Glu, His, D-ser (tBu), n oznacza liczbę całkowitą od 3 do 10, i A oznacza azaglicynę, oraz ich fizjologicznie tolerowanych soli octanów i chlorowodorków, polegający na tym, że związek o wzorze 2, w którym Y\ γ2, Y3, Y4 i Y5 oznaczają wodór, grupę CvC4-alkoksy albo -(CH2)nCOOH, przy czym rodniki mogą być jednakowe albo różne, przynajmniej jeden rodnik oznacza jednak -(CHa)n-COOH, n oznacza liczbę całkowitą od 1 do 3, i R1 oznacza wodór albo 4metoksyfenyl, poddaje się reakcji z odczynnikiem sililującym z szeregu chlorek tert.-butylodimetylo167 504 sililu, chlorek tert.-butylofenylosililu, trimetylochlorosilan albo bistrimetylosililoacetamid w rozpuszczalniku i następnie sililowany związek przeprowadza się za pomocą pochodnej kwasu chloromrówkowego w związki o wzorze 3, w którym R1, Y1, Y2, Y3, Y4 i Y5 mają wyżej podane znaczenie i R2 oznacza fenyl, który jest podstawiony przez grupę nitrową i chlorowiec, tak otrzymane związki o wzorze 3 poddaje się reakcji z hydrazydem aminokwasu o wzorze 4, w którym X oznacza wyżej podany α-aminokwas i R3 oznacza grupę ochronną Fmoc, Bpoc albo Boc, w rozpuszczalniku z utworzeniem związków o wzorze 5, w którym R1, R3 i Y1, Y2, Y3, Y4 i y5 mają wyżej podane znaczenie ,i jeżeli R3 oznacza Boc, tę grupę ochronną usuwa się przez uwodornienie nad katalizatorem Pd i-przed dalszą reakcją przeprowadza w ochronną grupę Fmoc- albo Bpocuretanową, następnie związek o wzorze 5, w którym R1, Y\ γ2, Y3, Y i y5 mają wyżej podane znaczenie i R3 oznacza grupę ochronną Fmoc-albo Bpoc-uretanową, za pomocą odczynników sprzęgających, stosowanych w chemii peptydów, przez ugrupowanie -(CH2)n-COOH łączy się z żywicą, odszczepia się grupę ochronną R3, stopniowo przyłącza się chronione czasowo przez grupy ochronne Fmoc albo Bpoc α-aminokwasy, ewentualnie w postaci ich aktywowanych pochodnych, i po zakończonej budowie peptydy o wzorze 1 przez traktowanie kwasem o średniej mocy uwalnia się od żywicy, przy czym jednocześnie albo bezpośrednio potem odszczepia się znowu czasowo wprowadzone grupy ochronne łańcuchów bocznych.
Jako sole związków o wzorze 1 rozumie się zwłaszcza odpowiednie do stosowania farmaceutycznego albo nietoksyczne sole z nieorganicznymi albo organicznymi kwasami jak np. HCl i kwas octowy.
Związki o wzorze 4 wytwarza się przez α-aminokwasów z odpowiednimi hydrazydami według stososwanych w chemii peptydów metod sprzęgania.
Grupa alkoksylowa może być w łańcuchu prostym albo rozgałęziona.
Chlorowiec oznacza fluor, chlor, brom albo jod, szczególnie fluor albo chlor.
Jeżeli dla zapobieżenia reakcjom ubocznym albo dla syntezy specjalnych peptydów jest to potrzebne, funkcyjne grupy w łańcuchu bocznym α-aminokwasów są dodatkowo chronione przez odpowiednie grupy ochronne (patrz np. T.W. Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis“, Nowy Jork, John Wihley & Sons, 1981; Hubbuch, Kontakte (Merck) 1979, nr 3, strony 14-23; Biillsbach, Kontakte (Merck) 1980, nr 1, strony 23-35), przy czym w pierwszym rzędzie stosuje się Arg(Tos), Arg(Mts), Arg(Mtr), Arg(Pmc), Glu(OBzl), Glu(OtBu), Ser(Bzl), Ser(tBu). Poza tym funkcyjne grupy w łańcuchu bocznym mogą być również glikozylowane, jak np. opisano w europejskim opisie patentowym nr EP-A263521 (HOE 86/F 253).
Stosowane jako nośnik żywice dostępne są w handlu albo są wytwarzane, jak np. żywica na bazie alkoholu alkoksysbenzylowego, żywice aminometylowe albo żywice benzhydryloaminowe. Wyróżniają się żywice aminometylowe, benzhydryloaminowe (BHA) i żywice metylobenzhydryloaminowe (MBHA). Nasycenie oznacza się przez analizę aminokwasową i/albo analizę elementarną.
Jako odpowiednie związki o wzorze 5 rozumie się na przykład opisane w Atherton, Sheppard in Perspectives in Peptice Chemistry, strony 101-117 (Karger, Basel 1981); w europejskim opisie patentowym nr EP-A 264 802 (HOE 86/F 259), europejskim opisie patentowym nr EP-A 287,882 (HOE 87/F 101) oraz w europejskim opisie patentowym nr EP-A 322 348 (HOE 87/F 386K) „spacer'y“ oraz pochodzące od nich pochodne, jak na przykład takie, których grupa ochronna jest odszczepiona. Wyróżniają się 4-karboksylanopropoksy-4'-metoksybenzhydryloamina i 5-etoksykarbonylo-2,4-dimetoksy-4'-metoksybenzhydryloamina.
Jako odczynniki sprzęgające dla związków o wzorze 5 oraz dalszych pochodnych aminokwasów można stosować wszystkie możliwe stosowane w syntezie peptydów odczynniki aktywujące, patrz np. Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie, tom XV/2, Stuttgart 1974, zwłaszcza karbodiimidy, jak np. N.N'-uicykloheksylokarbodiimid, N,N'-diizopropylokarbodiimid albo Netylo-N'-(3-dimeeyloaminopropylo)-karbodiimid. Sprzęganie z żywicą można przy tym przeprowadzać wprost przez dodanie pochodnej aminokwasu przy użyciu odczynnika aktywującego i ewentualnie dodatku tłumiącego racemizacją, jak np. 4-dimetyloaminopirydyny, 1-dydroksybenzotriazolu (HOBt) (W.Kónig, R. Geiger, Chem. Ber. 103 (1970) 788-798) albo 3-hydroksy-4okso-3,4-dihydrobenzotriazyny (HOObt) (W. Konig, R. Geiger, Chem. Ber, 103 (1970) 2034-2040), albo aktywowanie wstępne pochodnej aminokwasu jako symetrycznego bezwodnika albo estru
167 504
HOBt lub HOObt może następować oddzielnie i roztwór aktywowanego czynnika w odpowiednim rozpuszczalniku dodaje się do zdolnej do sprzęgania peptydożywicy.
Sprzęganie lub aktywowanie związku o wzorze 5 i pochodnej aminokwasu jednym z wymienionych wyżej odczynników aktywujących można przeprowadzać w dimetyloformamidzie albo chlorku metylenu, albo w mieszaninie obydwu. Aktywowaną pochodną aminokwasu stosuje się zwykle w 1,5- do 4-krotnym nadmiarze. W przypadku, w których następuje niecałkowite sprzęgnięcie, powtarza się reakcję sprzęgania, bez uprzedniego przeprowadzenia potrzebnego dla sprzęgnięcia następnego aminokwasu odblokowania grupy α-aminowej peptydożywicy.
Skuteczny przebieg reakcji sprzęgania można badać za pomocą reakcji ninhydrynowej, jaka opisana jest np. przez E.Kaiser'a i współpracowników [Anal. Biochem. 34 (1970) 595]. Syntezę można przeprowadzić również w sposób zautomatyzowany, np. za pomocą syntezatora peptydów model 430A firmy Applied Biosystems, przy czym można stosować albo program syntezy przewidziany przez wytwórcę urządzenia, albo również ustalony przez samego użytkownika. Te ostatnie są używane zwłaszcza w przypadku stosowania pochodnych aminokwasów chronionych grupą Fmoc.
Jakie rozpuszczalniki przy syntezie związków o wzorze 3 wchodzą w rachubę korzystnie tetrahydrofuran, acetonitryl, chlorek metylenu, dimetyloformamid albo ich mieszaniny.
Odszczepienie peptydoamidów od żywicy prowadzi się przez traktowanie stosowanymi zwykle w syntezie peptydów kwasami o średniej mocy, np. kwasem trifluorooctowym, przy czym jako wychwytywacze kationów dodaje się substancje takie jak fenol,krezol, tiokrezol, anizol, tioanizol, etanoditiol, siarczek dimetylowy, siarczek etylowometylowy albo podobne stosowane w syntezie w fazie stałej wychwytywacze kationów pojedynczo albo mieszanię dwu albo więcej tych środków pomocniczych. Przy tym kwas trifluorooctowy można stosować rozcieńczony również przez odpowiednie rozpuszczalniki, jak np. chlorek metylenu.
Przy odszczepianiu związku o wzorze 5 od żywicy następuje jednocześnie odszczepienie grup ochronnych łańcuchów bocznych. Oczyszczanie tak otrzymanych surowych peptydów następuje za pomocą chromatografii na Sephadex'ie, żywicach jonowymiennych albo przez HPLC.
Sposób według wynalazku odznacza się tym, że za pomocą syntezy w fazie stałej - syntezy Merrifiełd'a można wytwarzać peptydy, które zawierają C-końcowo amid azaaminokwasu. Synteza Merrifield jest wprawdzie znanajuż od dawna, jednak dotychczas nie było możliwe otrzymanie z ubogą racemizacją wyżej wymienionych peptydów z C-końcowym azaaminokwasem. Udaje się to nieoczekiwanie tylko za pomocą sposobu według wynalazku, w którym najpierw związek o wzorze 2 przeprowadza się w postać zdolną do acylowania, tę ostatnią poddaje się reakcji z pochodną kwasu mrówkowego i następnie hydrazydem aminokwasu a potem przyłącza do żywicy; dopiero po tych “etapach wstępnych“ zaczyna się właściwa synteza w fazie stałej, jednak nie tak jak to jest powszechnie stosowane, zaczynając przy C-skrajnym końcu z pierwszym aminokwasem, lecz z drugi aminokwasem.
Sposób syntezy w fazie stałej wyróżnia się przy wytwarzaniu Ac-D-Nal^^p-Cl-D-Phe-D-TrpSer-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 orazpGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-LeuArg-Pro-Azagly-NH2 (Zoladex).
Oznaczenie stosowanych skrótów: BSA bistrimetylosiłiłoacetamld; Cha cykloheksyloalanina; Chg cykloheksyloglicyna; DCC dicykloheksylokarbodiimid; DIS diizopropyłokarbodiimid; DMAP dimetyloaminopirydyna; Fmoc 9-^^orenylometoksykarbonyl; HOBt 1-hydroksybenzotriazol; HOObt 3-hydroksy-4-okso-3,‘4-dihy<:hro-1,2,3-benzotriazyna; Nal naftyloalanina; Npg neopentyloglicyna; Pmc 2,2,5,7,8-pentametylochΓomano-6-sułfonyl; Tbg tert-butyloglicyna; THF tetrahydrofuran; Thia 2-tienyloalanina.
Poniższe przykłady objaśniają wynalazek, nie ograniczając go.
Przykład I.
la) 5-etoksykarbonyło-2,4-dimetoksy-4'-metoksybenzhydryłoamma.
17,5 g 5-etokse^^ai^;^'borab^-^n^,4-dnnedime^-^o^i^iy(^tomerbenz.of{^i-^c^ifoooso!o^u rozpuszczono on 450 ml mieszaniny 1: 1 etanolu i DMF, i dodano 2 ml stężonego NH3. Po dodaniu katalizatora Pt/C uwodorniano przy normalnym ciśnieniu przez 5 dni. Po zakończeniu reakcji odsączono katalizator pod zmniejszonym ciśnieniem, przesącz zatężono i produkt wytrącono eterem. Produkt ten stosowano jako taki bez dalszego oczyszczania.
167 504 5 lb) N-(p-nitrofenoksykarbonylo}-5~etoksykarbonylo-3,4-dimetoksy-4'-meioksybenzhydryloamina.
g tytułowego związku Ia) umieszczono w mieszaninie 4:1 THF/DMF i w temperaturze pokojowej dodano 2,1 równoważnika bistrimetylosililoacetamidu (BSA). Zawiesina wyklarowała się całkowicie po krótkim czasie i klarowany roztwór mieszano dalej przez 2 godziny. Następnie dodano 3 g chloromrówczanu nitrofenylu i mieszano przez dalszą godzinę. Po zakończeniu reakcji usunięto rozpuszczalnik w wysokiej próżni. Pozostałość zadano 300 ml wody i powstały olej ekstrahowano octanem etylu. Fazę octanu etylu przemyto 1N roztworem KHSO4 i wodą. Fazę organiczną wysuszono nad MgSO4 i odparowano do sucha. Pozostałość (12 g) scharakteryzowano za pomocą NMR, IR oraz MS.
N-(p-nitrofenoksykarbonylo)-5-etoksykarbonylo~2,4-dimetoksy-4'-metoksybenzhydryloaminę poddano następnie reakcji z hydrazydami aminokwasów w celu otrzymania odpowiednich podstawionych grup funkcyjnych.
lc) Benzyloksykarbonylo-4-prolilo-azaglicylo-(5-etoksykarbonylo-2,4-dimetoksy-4'-metoksybenzhydrylo)-amid.
3,27 g chlorowodorku benzyloksykarbonylo-prolilohydrazydu i 6,94 g tytułowego związku z przykładu Ib) rozpuszczono w 40 ml dimetyloformamidu (DMF) i dodano 3 równoważniki Netylomorfoliny i katalityczną ilość dimetyloaminopirydyny (DMAP). Pozostawiono na 16 godzin do przereagowania. Po zakończeniu reakcji odparowano do sucha. Pozostałość przeniesiono do układu octan etylu/butanol i fazę organiczną przemyto nasyconym roztworem NaHCOe, 1N roztworem KHSO4 i wodą. Fazę organiczną wysuszono nad MgSO4 i po przesączeniu odparowano do sucha. Pozostałość przekrystalizowano z czystego octanu etylu. Otrzymano 6,6 g tytułowego związku. FAB-MS: 641 (M + Li+). IR: CO 1695 cm1. 1H-NMR (DMSO): δ = 3,7 s (6H,OCH3)ppm.
ld) 9-fluorenyiometoksykarbonylo-L-proIilo-azaglicylo-(5-etoksykarbonylo-2,4-dimetoksy4'-metoksybenzhydrylo)-amid.
26,5 g tytuływego zwitku z pzykladu ac) rozpiozczono w 300 ml metanoła i dodanca g katalizatora Pd. Po godzinie uwodornienie było zakończone. Katalizator odsączono, przesącz zatężono do sucha. Pozostałość (17,5 g) bez dalszego oczyszczania przeniesiono do mieszaniny złożonej z 80 ml wody i 80 ml dioksanu, i dodano 8g wodorowęglanu sodu i 17 g 9-fluoreoylometgksykarbonylg-N- hydroksy sukcynimidu (Fmoc-ONSu). Pozostawiono na 1 dzień w celu CΓzereaggwania. Po zakończeniu reakcji przesączono przez warstwowy filtr klarujący. Przesącz ustawiono na pH = 6 za pomocą 2 N H2 SO4 i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do objętości 80 ml. Rozcieńczono przy użyciu 100 ml wody i ekstrahowano mieszaniną 8,5:1,5 octan etylu/nbutanol. Fazę organiczną przemyto półnasyconym roztworem NaCl i potem odparowano do sucha. Pozostałość przesączono przez 500 g silikażelu przy użyciu octanu etylu. Otrzymano 20 g związku tytułowego. FaB-MS: 729 (M+Li+). IR: CO 1695 cm’!
le) Sprzęgnięcie tytułowego związku z przykładu Id) z żywicą polistyrenową.
1,0 g żywicyamiy ometyinpollgtcgenowej o^weycenie l,0i mmoli) i o ,2g tytułoyego owiązak z przykładu Id) przeprowadzono w stan zawiesiny w 10 ml dimetyloformamidu i dodano 216 mg y-hydrokoybeozotriazolu (HOBt) i 0,75 ml diizopΓOcylokarbgdiimiCu (DIC). Pozostawiono przez noc w celu przerenggwaoia aż test niohyCryoowy wykazał całkowitą reakcję. Żywicę odsączono, przemyto dimetyloformamidem oraz chlorkiem metylenu i wysuszono dokładnie pod zmniejszonym ciśnieniem. Nasycenie żywicy proliną wynosiło 0,51 mmola/g.
lf) Ac-D-Nal(U}-p-Cl-D-Phe-D-Trc-Sel-Tdl-D-Ser(α-L-Rha)-Lou-Arg-Pro-Aaαgίd-NHu.
Grupę 9-fluorznylometokodkarbonylg jako grupę ochroną grupy N-a-aminowej związku z przykładu Ie) odoalzepiooo przy użyciu 20% roztworu ciperddyoy w dimetyloformamidzie (2X3 min, 2X8 ml). Następnie żywicę przemyto N-mety/iopi^olidonem (5 X 10 mi) i budowano peptdC na żywicy (785 mg ydwicd z przykładu Ic)), przy czym plaeprownCaaoo cyklicznie następujące etapy:
- odczepienie grupy ochronnej Fmoc za pomocą 20% roztworu pipelyddod w dMf
- plaemylie żywicy układem DMF/N'-mełdlopirolidynon
- przyłączenie Fmol-amiookwaou przy aktywowaniu in situ jako HOBt-zstzl przy zastosowaniu CiiaopropdlokarboCiimiCu jako odczynnika aktywującego (1,5 mmoli aminokwasu, 2,25 mmoli HOBt, 1,6 mmoli diiaopropylokarbodiimiCu)
167 504
Jeżeli sprzęgnięcie było niecałkowite (test Kaiśer'a) powtarzano etap sprzęgania. Jako ostatni aminokwas zastosowano Fmoc-D-Nał(2)-OH. N-końcową grupę acetylową wprowadzono przez reakcję z bezwodnikiem kwasu octowego.
ro zakończeniu syntezy w fazie stałej żywicę przemyto (DMF, CH2CI2)
Jatinren_
UV1V.1U\4J11J.V TfJUIU szono. Otrzymano 1,35 g podstawionej żywicy.
Wysuszoną żywicę przeprowadzono w stan zawiesiny w 0,75 ml etanoditiolu w temperaturze pokojowej. Po 15 minutach dodano 7,5 ml kwasu trifluorooctowego i zawiesinę mieszano w ciągu 1,5 godziny. Po upływie tego czasu żywicę odsączono i przemyto dokładnie 80% kwasem trifiuorooctowym. Przesącz zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość przeniesiono do 30 ml wody. Przez dodanie NaHCO3 ustawiono pH na 6-7 i peptyd wytrząśnięto z n-pentanolem (4 X 30 ml). Fazę n-pentanolową zatężono i pozostałość przeniesiono do 10 ml układu metanol/ /woda (9:1) i dodano 0,5 g K2CO3. Mieszano przez 30 minut, przesączono i przesącz zatężono. Pozostałość przeniesiono do 100 ml n-pentanolu i fazę organiczną przemyto wodą. Po wysuszeniu za pomocą MgSO4 i przesączeniu fazę organiczną zatężono. Otrzymano 740 mg surowego produktu. Po chromatografii na RSephadex'ie G25 (1M kwasu octowego) i na silikażelu otrzymano 185 g czystego związku tytułowego. FAB-MS: 1531 (M + H*).
Związki według następujących przykładów II-XI otrzymano analogiczniejak w przykładzie I. Przykładl I. Ac-Nal(2Vp-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly·
NH2. FAB-MS: 1531 (M+H+).
Przykład III. Ac-D-Nal(2)-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-Leu-Arg-ProAzagly-NH2. FAB-MS: 1531 (M + H+).
Przykład IV. Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-Leu-Arg-ProAzagly-NHa. FAB-MS: 1531 (M + H+).
Prz y k ł a dV. Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(e-L-Rha)-Leu-Arg-ProAzagly-NH FAB-MS: 1531 (M + H+
P r z y k ł a d VI. Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-Leu-Arg-ProAzagly-NH2. FAB-MS: 1531 (M + H+).
Przykład VII. Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(e-L-Rha)-Leu-Arg-ProAzagly-NH2. FAB-MS: 1531 (M + H).
Przykład VIII. Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp~Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-D-Leu-Arg-ProAzagly-NH2. FAB-MS: 1531 (M + H+).
Przykład IX. Ac-D-Nal(2)-p-Cł-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-Leu-D-Arg-ProAzagly-NH2. FAB-MS: 1531 (M + H+
PrzykładX. Ac-D-Nal(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(a-L-Rha)-Leu-Arg-D-ProAzagly-NH2.
a) Benzyloksykarbonylo-4-D-prolilo-azaglicylo-(5-karboksylanoetylo-2,4-dimetoksy-4'metoksybenzylohydrylo)amid.
1,19 g chlorowodorku benzyloksykarabonylo-D-prolilohydrazydu rozpuszczono w 15 ml dimetyloformamidu (DMF) i dodano 1,84 g związku tytułowego z przykładu Ib), 1,5 ml Netylomorfoliny oraz katalityczną ilość dimetyloaminopirydyny (DMAP). Mieszano w ciągu nocy w temperaturze pokojowej. Po zakończeniu reakcji oddestylowano DMF pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość rozpuszczono w chlorku metylenu. Fazę organiczną przemyto za pomocą 15% roztworu KHSO4/K2SO4, wysuszono nad MgSOe i wirowano. Otrzymano 3,4 g oleju. Następnie chromatografowano na żelu krzemionkowym (gradient z octanu etylu pur (500 ml) do octanu etyłu/metanolu 50:2 (1000 ml)). Wydajność: 2,1 g. FAB-MS: 635 (M +· H+).
b) H-D-prolilo-azaglicylo(5-karboksylanoetylo-2,4-dimetoksy-4'-metoksy-benzhydrylo)amid.
800 g związku tytułowego z przykładu X a) rozpuszczono w 20 ml metanolu i dodano mały czubek łopatki laboratoryjnej Pd na węglu (10%) w atmosferze azotu. Potem przeprowadza się wodór. Po 45 minutach uwodornianie było zakończone. Mieszaninę reakcyjną filtrowano przez warstwowy filtr klarujący i przesącz wirowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymano 600 mg związku tytułowego.
c) 9-fluorenylometoksykarbonylo-D-proliio-azaglicylo(5-karboksylanoetylo-2,4-dimetoksy4'-metoksy-benzhydrylo)amid.
167 504 g związku tytułowego z przykładu Xb) rozpuszczono w 15 ml dioksanu/wody (1:1) i dodano 336 mg wodorowęglanu sodu oraz porcjami 674 mg 9-fłuorenylometoksy-karbonyio-N-hydroksysukcynimidu (Fmoc-ONSu) i mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Po zakończeniu reakcji oddestylowano wszvstko aż do wodv pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostaiaca fazę wodną zakwaszono za pomocą 1N H2 SO4. Produkt ekstrahowano 2 razy za pomocą octanu etylu, fazę organiczną przemyto jeden raz za pomocą nasyconego roztworu NaHCO3, wysuszono nad MgSO4 i rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem.
Otrzymano 1,4 g surowego produktu, który chromatografowano na żelu krzemionkowym (eluent chlorek metylenu:metanol:woda:kwas octowy 95:5:0,5:0,5). Wydajność: 870 mg FAB-MS: 745 (M + Na+).
d) Sprzęganie rw^u tytułowego z przykkaduXc)) z żywiią polistyrenową.
1,0 g żywi ży ammometylopylistorenowej (neładowanie 1,0e mmob) il,2 zwiądoi tytułowego z przykładu Xc) zawieszono w 15 ml dimetyloformamidu i dodano 216 mg 1-hydroksy-benzotriazolu (HOBt) i 0,75 ml diizopropylokarboażimiau (DIC). Pozostawiono przez noc do przereagowania w temperaturze pokojowej dotąd, aż test einhydryeo wykazał reakcję całkowitą. Żywicę odsączono i przemyto za pomocą dimetyloformamidu, chlorku metylenu i metolo-tert.butyioeteru. Wydajność żyaaLC0’ woeos^a: 1,5 g.
Naładowanie żywicy D-proliną wynosiło 0,256 mmol/g.
Przykład XI. p-Glu-His-TrplSα^-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-.Arg-Pro-Azagio-NH2.
Ten związek otrzymano analogicznie do przykładu I. FAB-MS: 13998M + H+).
Przykład XII. Ogólny przepis wytwarzania soli.
100 mg związku z przykładów I-XI (postać trifluorooctanu) rozpuszcza się w 5-10 ml wody (pH 1,5-2) i dodaje czubek łopatki laboratoryjnej wymieniacza jonowego ®Amberlite IRA 45 (postać octanu lub postać chlorku). Wymieniacz jonowy miesza się i mierzy wartość pH. Jeśli zakres pH 3,5-4 kwasu octowego lub kwasu solnego pH 1-2 nie zostałjeszcze osiągnięty, dodaje się jeszcze dalszy wymieniacz jonowy. Następnie osącza się wymieniacz jonowy i przemywa dodatkowo za pomocą niewielkiej ilości wody. Roztwór peptydu oddestylowuje się pod zmniejszonym ciśnieniem albo poddaje liofilizacji.
(Χ)η-Α- ΝΗ2
WZÓR 1
WZÓR 2
WZÓR 3 r3-x-co-nh-nh2-hci
Wzór 4
H© ^NH-CO-X-R3 Wzór 5
Departament Wydawnictw UP RP Nakład 90 egz. Cena 1,50 zł
Claims (1)
- Zastrzeżenie patentoweSposób wytwarzania peptydów za pomocą syntezy w fazie stałej, o ogólnym wzorze 1, w którym X oznacza α-aminokwas z szeregu Ac-Nal(2), Ac-D-Nal(2), p-Cl-Phe, p-Cl-D-Phe- Trp, D-Trp, Ser, D-Ser, Tyr, D-Tyr, Ser(a-L-Rha), D-Ser(a-L-Rha), Leu, D-Leu, Arg, D-Arg, Pro, D-Pro, P-Glu, His, D-ser (tBu), n oznacza liczbę całkowitą od 3 do 10, i A oznacza azaglicynę, oraz ich fizjologicznie tolerowanych soli octanów i chlorowodorków, znamienny tym, że związek o wzorze 2, w którym Y1, Y2, Y3, Y i Y5 oznaczają wodór, grupę C1-C4-alkoksy albo -(CH2)nCOOH, przy czym rodniki mogą być jednakowe albo różne, przynajmniej jeden rodnik oznacza jednak -(CHz)n-COOH, n oznacza liczbę całkowitą od 1 do 3, i R1 oznacza wodór albo 4metoksyfenyl, poddaje się reakcji z odczynnikiem sililującym z szeregu chlorek tert.-butylodimetylosililu, chlorek tert.-butylofenylosililu, trimetylochlorosilan albo bistrimetylosililoacetamid w rozpuszczalniku i następnie sililowany związek przeprowadza się za pomocą pochodnej kwasu chloromrówkowego w związki o wzorze 3, w którym R\ Y\ Y, Y3, Y i Y5 mają wyżej podane znaczenie i R2 oznacza fenyl, który jest podstawiony przez grupę nitrową i chlorowiec, tak otrzymane związki o wzorze 3 poddaje się reakcji z hydrazydem aminokwasu o wzorze 4, w którym X oznacza wyżej podany α-aminokwas i R3 oznacza grupę ochronną Fmoc, Bpoc albo Boc, w rozpuszczalniku z utworzeniem związków o wzorze 5, w którym Ri, r3 i Y\ Y2, y3, Y i y5 mają wyżej podane znaczenie; jeżeli R3 oznacza Boc, tę grupę ochronną usuwa się przez uwodornienie nad katalizatorem Pd i przed dalszą reakcją przeprowadza się w ochronną grupę Fmoc- albo Bpoc-uretanową, następnie związek o wzorze 5, w którym Ri, Y\ γ2, Y®, γ4 i γ5 mają wyżej podane znaczenie i R3 oznacza grupę ochronną Fmoc- albo Bpoc-uretanową, za pomocą odczynników sprzęgających, stosowanych w chemii peptydów, przez ugrupowanie -(CHjn-COOH łączy się z żywicą, odszczepia się grupę ochronną R3, stopniowo przyłącza się chronione czasowo przez grupy ochronne Fmoc albo Bpoc α-aminokwasy, ewentualnie w postaci ich aktywowanych pochodnych, i po zakończonej budowie peptydy o wzorze 1 przez traktowanie kwasem o średniej mocy uwalnia się od żywicy, przy czym jednocześnie albo bezpośrednio potem odszczepia się znowu czasowo wprowadzone grupy ochronne łańcuchów bocznych.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4027394 | 1990-08-30 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL291561A1 PL291561A1 (en) | 1992-07-13 |
| PL167504B1 true PL167504B1 (pl) | 1995-09-30 |
Family
ID=6413202
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL91291561A PL167504B1 (pl) | 1990-08-30 | 1991-08-29 | Sposób wytwarzania peptydów za pomoca syntezy w fazie stalej PL PL |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0475184B1 (pl) |
| JP (1) | JP3177269B2 (pl) |
| KR (1) | KR100203548B1 (pl) |
| AU (1) | AU646488B2 (pl) |
| CA (1) | CA2050216C (pl) |
| CZ (1) | CZ282881B6 (pl) |
| DE (1) | DE59104538D1 (pl) |
| DK (1) | DK0475184T3 (pl) |
| ES (1) | ES2069148T3 (pl) |
| FI (1) | FI102380B (pl) |
| GR (1) | GR3015359T3 (pl) |
| HU (1) | HU208838B (pl) |
| IE (1) | IE66524B1 (pl) |
| IL (1) | IL99338A (pl) |
| NO (1) | NO300216B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ239575A (pl) |
| PL (1) | PL167504B1 (pl) |
| PT (1) | PT98813B (pl) |
| RU (1) | RU2036200C1 (pl) |
| SK (1) | SK280319B6 (pl) |
| TW (1) | TW295589B (pl) |
| ZA (1) | ZA916848B (pl) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9112825D0 (en) * | 1991-06-14 | 1991-07-31 | Ici Plc | Process for making peptides |
| GB9727123D0 (en) * | 1997-12-22 | 1998-02-25 | Int Centre Genetic Eng & Bio | Synthesis of diamines |
| ES2154590B1 (es) | 1999-05-20 | 2001-11-01 | Lipotec Sa | Procedimiento de sintesis de peptidos en fase solida |
| JP5475235B2 (ja) | 2005-01-21 | 2014-04-16 | アステックス・セラピューティクス・リミテッド | 医薬化合物 |
| WO2008044045A1 (en) | 2006-10-12 | 2008-04-17 | Astex Therapeutics Limited | Pharmaceutical combinations |
| EP2073803B1 (en) | 2006-10-12 | 2018-09-19 | Astex Therapeutics Limited | Pharmaceutical combinations |
| ES2624961T3 (es) | 2013-03-21 | 2017-07-18 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Síntesis de productos de péptido que contienen imida cíclica |
| AU2014234400B2 (en) | 2013-03-21 | 2017-11-16 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Synthesis of hydantoin containing peptide products |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2061714T3 (es) * | 1987-12-22 | 1994-12-16 | Hoechst Ag | Grupos de anclaje inestables frente a acidos para la sintesis de amidas peptidicas mediante el metodo en fase solida. |
-
1991
- 1991-08-17 TW TW080106522A patent/TW295589B/zh active
- 1991-08-27 EP EP91114332A patent/EP0475184B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-08-27 DK DK91114332.9T patent/DK0475184T3/da active
- 1991-08-27 ES ES91114332T patent/ES2069148T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-08-27 DE DE59104538T patent/DE59104538D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-08-28 IL IL9933891A patent/IL99338A/en not_active IP Right Cessation
- 1991-08-28 NZ NZ239575A patent/NZ239575A/xx not_active IP Right Cessation
- 1991-08-28 FI FI914064A patent/FI102380B/fi not_active IP Right Cessation
- 1991-08-29 PL PL91291561A patent/PL167504B1/pl unknown
- 1991-08-29 NO NO913396A patent/NO300216B1/no not_active IP Right Cessation
- 1991-08-29 SK SK2666-91A patent/SK280319B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1991-08-29 KR KR1019910014992A patent/KR100203548B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1991-08-29 PT PT98813A patent/PT98813B/pt not_active IP Right Cessation
- 1991-08-29 ZA ZA916848A patent/ZA916848B/xx unknown
- 1991-08-29 CZ CS912666A patent/CZ282881B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1991-08-29 JP JP21852591A patent/JP3177269B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1991-08-29 CA CA002050216A patent/CA2050216C/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-08-29 RU SU915001313A patent/RU2036200C1/ru active
- 1991-08-29 AU AU83402/91A patent/AU646488B2/en not_active Expired
- 1991-08-29 IE IE305191A patent/IE66524B1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-08-30 HU HU912825A patent/HU208838B/hu unknown
-
1995
- 1995-03-10 GR GR950400517T patent/GR3015359T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0751779B1 (en) | Selectively cleavable linkers based on iminodiacetic acid ester bonds | |
| US4786684A (en) | Benzylthioether-linked solid support-bound thiol compounds and method for peptide synthesis | |
| EP0257742B1 (en) | Method of synthesizing a peptide containing a non-peptide bond | |
| JP2001500134A (ja) | 改良型固相ペプチド合成及びかかる合成において利用するための試薬 | |
| US5602231A (en) | Process for making peptides | |
| CA2345407A1 (en) | Synthesis of cyclic peptides | |
| GB2070618A (en) | Polypeptides | |
| US6235876B1 (en) | Liquid phase process for the preparation of GNRH peptides | |
| ES2753407T3 (es) | Conjugado de péptido-resina y su utilización | |
| PL167504B1 (pl) | Sposób wytwarzania peptydów za pomoca syntezy w fazie stalej PL PL | |
| KR20210046730A (ko) | Wnt 헥사펩티드에 대한 용액상 경로 | |
| US5166394A (en) | Coupling reagent for peptide synthesis | |
| JP3436559B2 (ja) | ペプチドの合成方法及び新規な合成中間体 | |
| JP2004513191A (ja) | ペプチドおよび小分子有機合成用の新しいリンカーに基づく固相支持体 | |
| US6277958B1 (en) | Method for preparing peptide thiol ester | |
| FI88031C (fi) | 4-(substituerad aminokarbonyloximetyl)fenoxiaettiksyraderivat, foerfarande foer framstaellning av dessa och deras anvaendning i en fastfassyntes av peptid-aminoalkylamider | |
| KR20030081355A (ko) | 트립토판 잔기를 갖는 펩티드의 합성공정 | |
| Ogrel et al. | Synthesis of the Isotopically Labelled C‐Terminal Fragment of Zervamicin: An Approach to the Synthesis of Aib‐Containing Peptides | |
| CA2579631C (en) | Selectively cleavable linkers based on iminodiacetic acid ester bonds | |
| JP2748897B2 (ja) | 新規なアルギニン誘導体およびこれを用いるペプチドの製造方法 | |
| KR20240004561A (ko) | 포스포릴콜린 접합체를 포함하는 펩티드 및 이의 합성 방법 | |
| CA3238634A1 (en) | Synthetic process for production of modified gcc receptor agonists | |
| EP0765341A1 (en) | Template directed cyclization | |
| AU766495B2 (en) | Synthesis of cyclic peptides | |
| JPS62286978A (ja) | アミノ酸のｏｏｂｔエステルおよびそれらの製法 |