HU200786B

HU200786B - Process for producing cyclosporins

Info

Publication number: HU200786B
Application number: HU851045A
Authority: HU
Inventors: Hans Kobel; P Rene Traber; Roland Wenger; Hans Hofmann
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1984-03-23
Filing date: 1985-03-21
Publication date: 1990-08-28
Also published as: DE3509809A1; IT1199962B; PH23357A; IT8547852A1; GB8507270D0; NO851160L; JPH08838B2; FR2561651A1; AT388737B; GB2155936A; NZ211526A; IL74681A0; US4639434A; ES8702926A1; DK128285A; NL8500828A; PH21868A; SE8501392D0; PT80149B; ES541465A0

Description

A találmány tárgya eljárás új ciklosporionok előállítására.

A ciklosporinok sajátos gyűrűs szerkezetű, többszörösen N-metilezett undekapeptidek, amelyek általában farmakológiai hatáso- 5 kát mutatnak. Különösen figyelemre méltók immunszuppresszív, gyulladásgátló és parazitaellenes hatásaik. A2 elsőként izolált ciklosporin - egyszersmind e vegyületcsoport törzsvegyűlete - természetes anyag, az (A) 10 képletű cíklosporin-A, amely egy gomba metabolitja. Az (A) képletben -MeBmt- jelentése a (B) képletű N-metil-(4R)-4-but-2E-en-l-il-4-metil-(L)-treonil-csoport, ahol -x-y- jelentése transz-térállású -CH=CH- csoport. 15

A ciklosporin-A felfedezése óta számos természetes eredetű ciklosporint izoláltak és azonosítottak, valamint több, a természetben nem található ciklosporint állítottak elő teljes szintézissel (totálszintézissel) vagy félszinte- 20 tikus úton, vagy módosított tenyésztési eljárással. Ennek következtében a ciklosporinok vegyületcsoportja egyre fokozódó jelentőségre tett szert, és jelenleg például a következő típusok ismertek: a természetes eredetű cik- 25 losporin-A-tól ciklosporin-Z-ig terjedő sorozat [Köbei és munkatársai: European Journal of Applied Microbiology and Biotechnology 14, 237 (1982); valamint von Traber és munkatársai posztere, 24. Tudományközi Konfe- 30 rencia az Antimikrobiális Szerek és Kemoterápia Tárgyában, Washington (1984. október

8-10)]; különböző nem természetes eredetű ciklosporinok, amelyek dihidro-ciklosporin-származékokból állnak [ahol a fenti (B) kép- 35 letben az -x-y- csoport telített; ezeket a származékokat a 4 108 985, 4 210 581 és

220 641 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban ismertették]: olyan ciklosporinok, amelyek képletében az -MeBmt- 40 szerkezeti egység izomerizált vagy N-demetilezett alakban van jelen [0 034 567 számú európai szabadalmi leírás: valamint .Cyclosporin A, Proc, Internet. Conference on Cyclosporin A, Cambridge (Nagy-Britannia) 45 1981. szeptember, kiadó D.J.G. White, Elsevier Press (1982): mindkét helyen ismertetik az R. Wenger által ciklosporinok teljesen szintetikus előállításának céjára kidolgozott eljárást]: valamint olyan ciklosporinok, amelyek 50 peptidszekvenciájuk meghatározott helyein különböző beépített aminosavakat tartalmaznak (0 056 782 számú európai szabadalmi leírás). A fentebb idézett irodalmi helyeken leirt ciklosporinokra példaként megemlítjük a 55 következőket: a [THr]²-, [Val]²-, [Nva]² és [Nva]²-[Nva]⁵-ciklosporin (ezeket az előbbi sorrendben ciklosporin-C-, -D-, -G-, illetve -M-nek is nevezik): [dihidro-MeBmt]¹-! Val]²-ciklosporin (ezt dihidro-ciklosporin-D-nek is 60 nevezik): valamint a [(D)Ser]⁸- és a [dihidro-MeBmtlM (D JSerja-ciklosporin.

A ciklosporinok elnevezésére jelenleg használatos nómenklatúra szerint ebben a szabadalmi bejelentésben (és az igénypontok- 65 bán) az elnevezést a ciklosporin-A-ra vonatkoztajuk. Ennek során először megadjuk a molekulának azokat a részeit, amelyek a ciklosporin-A molekula megfelelő részeitől eltérnek, s ezt követően a .ciklosporin szó kitételével meghatározzuk a molekulának azokat a részeit, amelyek a ciklosporin-A molekula megfelelő részeivel azonosak. A .dihidro-MeBmt-’ megjelölést akkor alkalmazzuk, ha a fenti (B) képletben -x-y- jelentése -CH2-CHr-csoport. így például [dihidro-MeBmt]¹-[Val]²-ciklosporinnak nevezzük azt a ciklosporlnt, amelynek szekvenciája ugyanaz, mint az (A) képletben, azonban az 1-es helyzetű -MeBmt- szerkezeti egységet [ahol .a fenti (B) képletben -x-y- jelentése transz-térállású -CH=CH- csoport] -dihidro-MeBmt- [ahol a fenti (B) képletben -x-y jelentése -CH2-CH2csoport] és a 2-es helyzetű -oCAbu- szerkezeti egységet -Val- helyettesíti. Ugyanígy például [(D)Ser]⁸-ciklosporin a neve annak a ciklosporinnak, amelynek szekvenciája megfelel az (A) képletben megadott szekvenciának, azonban a 8-as helyzetű -(D)Ala-csoportot -(D)Ser-csoport helyettesíti.

A szokásos gyakorlat értelmében továbbá a rövidítésekkel jelölt aminosavak - például -Alá, -MeVal- - (l)-konfigurációjúak ha erre vonatkozóan külön megjegyzést nem teszünk. A .Me jelölés - például -MeLeu-N-metilezett csoportot jelent. A ciklosporin-molekula különböző csoportjait az irodalom szerint, tehát az óramutató járásával megegyezően az 1-es helyzetű -MeBmt-vagy -dihidro-MeBmt-csoporttól kiindulva számozzuk.

A találmány alapja az a felismerés, hogy a ciklosporin 8-as helyzetében (D)-konfigurációjú acil-oxi-oC-aminosavat tartalmazó új ciklosporinok előállításával gyógyászati célra alkalmas vegyületekhez juthatunk.

Ennek alapján a találmány tárgya eljárás az (I) általános képletű ciklosporinok előállítására - ahol

X -MeBmt- vagy -dihidro-MeBmt-csoportot jelent;

Y -c£Abu-, -Thr-, -Val- vagy -Nvacsoportot jelent;

Z -Val- vagy -Nva- csoportot jelent; és

Q jelentése egy (II) általános képletű csoport - ahol Rí jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy fenilcsoport; és

Rz jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport -, amely abban áll, hogy egy (III) általános képletű ciklosporint - ahol X, Y és Z jelentése a fentiekben meghatározott, és W jelentése (IV) általános képletű csoport, amelyben R2 jelentése a fentiekben meghatározott - egy Ri-CO általános képletű csoportot - ahol Rí jelenté3

HU 200786 Β se a fentiekben meghatározott tartalmazó acilezőszerrel reagáltatunk, és kívánt esetben olyan (I) általános képletű ciklo- 5 sporinok előállítására, ahol X jelentése -dihidro-MeBmt- csoport, és Y, Z és Q jelentése ugyanaz, mint az (I) képletben, egy megfelelő (I) képletü ciklosporint - ahol 10 X jelentése -MeBmt- csoport, és Y, Z és Q jelentése ugyanaz, mint az (I) képletben - katalitikus hidrogénezéssel redukálunk.

Az (I) képletben Q előnyös jelentése 0-acil-(D)-szeril- vagy 0-acil-(D)-treonil-csoport, amelyben az acilcsoport általános képlete Ri-CO-, ahol Rí jelentése a fentiekben meghatározott. 20

A találmány szerinti ciklosporinok egyik csoportjához tartoznak azok az (I) képletü vegyűletek, ahol Y -oCAbu- vagy -Nva- csoportot, Z -Val- csoportot és R2 hidrogénatomot jelent. 25

A találmány szerinti ciklosporinok egy másik csoportját alkotják azok az (I) képletű vegyűletek, ahol Y -oCAbu- vagy -Nva- csoportot, Z -Nva- csoportot, Rí hidrogénatomot vagy 1-4 szénatomos alkilcsoportot és R2 30 hidrogénatomot jelent.

Az eljárást a hidroxilcsoportok acilezésének általánosan ismert módszereivel végezhetjük, például úgy, hogy 2 mól - vagy abban az esetben, ha Y jelentése -Thr- cső- 35 port, 1 mól - acil-, például 1-5 szénatomos alkanoil- vagy benzoil-halogenidet vagy megfelelő savanhidridet alkalmazunk. Formilezés céljára például ecetsav-hangyasav-anhidridet alkalmazunk. E reakciót például -10 °C és 40 50 °C közötti hőmérséklettartományban végezhetjük. A reakciót vízmentes körülmények között, célszerűén a reakció körülményeivel szemben közömbös oldószer - például diklór-metán - és valamilyen kondenzálószer, pél- 45 dául 4-(dimetil-amino)-piridin jelenlétében folytatjuk le. Ilyen körülmények között a 8-as helyzetű aminosavcsoport hidroxilcsoportja könnyebben acilezódik, mint az 1-es helyzetű aminosavcsoport hidroxilcsoportja.

A kívánt esetben végzett eljáráslépés a természetes eredetű ciklosporinoknak a megfelelő dihidrociklosporinokká történő redukciójára leirt, ismert módon hajthatjuk végre, például katalitikus hidrogénezés útján. Erre §§ alkalmas eljárást ír le az 1 567 201 számú nagy-britanniai szabadalmi leírás.

A hidrogénezést célszerűen semleges körülmények között, körülbelül 20 °C és 30 °C közötti hőmérsékleten, atmoszféranyo- θθ máson vagy ennél kissé magasabb nyomáson végezzük. A hidrogénezés céljára alkalmas katalizátor például a platina-oxid vagy a palládium, így a csontszénre lecsapott palládium. A hidrogénezést például a reakciókörül- θ® 4 ményekkel szemben közömbös oldószerben Így etil-acetátban vagy rövid szénláncú alifás alkanolban, például metanolban vagy izopropanolban - hajthatjuk végre.

A kívánt esetben végzett eljáráslépés végrehajtására kiinduló anyagokként alkalmas ciklosporinok az 1. igénypont szerinti eljárással állíthatók eló.

A (III) általános képletű kiindulási vegyületek a fentebb említett 0 056 782 számú európai szabadalmi leírásból - amely szintén ismertet eljárásokat előállításukra - ismertek, vagy analóg módon vagy a 0 034 567 számú európai szabadalmi leírásban (amelyre utal a - 0 056 782 számú európai szabadalmi leírás) ismertetett általános ciklosporin-totálszintézissel állíthatunk elő, vagy pedig a továbbiakban - különösen a példákban - ismertetett eljárásokkal.

így például a (Illa) általános képletű ciklosporinokat - ahol

Y’ jelentése -cCAbu-, -Thr-, -Valvagy -Nva- csoport;

Z’ jelentése -Val- csoport vagy ha Y’ -Abu- vagy -Nva- csoportot jelent, akkor jelentése -Nva- csoport;

W’ jelentése -(D)Ser- csoport vagy ha Y’ jelentése -oCAbu- csoport és Z’ jelentése -Val- csoport, akkor W’ -(D)Thr- csoportot jelent; és

X’ jelentése -MeBmt- csoport vagy ha Y’ -Thr-, -Val- vagy -Nva- csoportot, Z’ -Val- és W’ -(D)Ser- csoportot jelent, akkor X’ -dihidro-MeBmt-csoportot jelent - a találmány szerint úgy állítjuk elő, hogy

c) az oxigénatomon védőcsoportot tartalmazó valamilyen (III) általános képletű ciklosporinból a védőcsoportot lehasítjuk;

vagy

d) egy (V) általános képletű szekvenciát tartalmazó, adott esetben az oxigénatomján védöcsoportot tartalmazó, egyenes szénláncú undekapeptidet - ahol Y', Z’, W’ és X' jelentése a fentiekben meghatározott - ciklizálunk, és kívánt esetben a védöcsoportot lehasítjuk;

vagy

e) olyan (Illa) általános képletű ciklosporinok előállítására, ahol

Y’ jelentése -Thr-, -Val- vagy -Nvacsoport,

Z’ jelentése -Val- csoport vagy ha Y’ -Nva- csoportot jelent, akkor Z' jelentése -Nva- csoport,

W’ jelentése -(D)Ser- csoport, és X’ -MeBmt- csoportot jelent, egy [Thrl^ciklosporint, [Vall^ciklosporint, [NvaJZ-ciklosporint vagy [Nva]²-[Nva]⁵-ciklosporint termelő gombatörzset (D (-szerint tartalmazó táptalaj jelnlétében tenyésztünk, és

HU 200786 Β az Így kapott tenyészfolyadékból a (Illa) képletű ciklosporint elkülönítjük, vagy

f) olyan (Illa) általános képletü ciklosporinok előállítására, ahol X’ -díhidro-MeBmt- csoportot jelent, égy megfelelő (Illa) képletü ciklosporlnt - amelyben X’. jelentése -MeBmt- csoport - redukálunk.

A d) eljárás végrehajtásához alkalmas undekapeptidek a fentebb idézett 0 056 782 számú európai szabadalmi leírásban közölt általános módszerekhez hasonló eljárásokkal állíthatók elő, igy például az ezen szabadalmi leírás la. példájában megadott szkéma szerint úgy, hogy a ciklosporinmolekula 8-tól 11-ig terjedő csoportjaiból álló peptidszekvenciát az 1—tói 7-ig terjedő csoportokból álló szekvenciával kombináljuk, és közben a 2-es és/vagy 5-ós és/vagy 8-as helyzetű csoportok szükséges helyettesítését elvégezzük. A 8-as helyzetű -(D)Ser- vagy - -(D)Thrcsoport célszerűen az oxigénatomján védőcsoportot, például tercier-butil-csoportot tartalmaz. A ciklizálást a fentebb idézett európai szabadalmi leírásban leírt speciális módszerekkel végezzük, és a ciklizálás után az O-védőceoportot kívánt esetben [(c) eljárás] a peptidkémia területén ismert módszer alkalmazásával lehasitjuk.

Az e) eljárás végrehajtása során előnyős a Tolypocladium inflatum (Gams) gombafaj NRRL 8044 jelű törzsének az alkalmazása. E törzs egy tenyészete az Egyesült Államok Mezőgazdasági Hivatalánál (Északi Kutatási és Fejlesztési Főosztály) (United States Department of Agriculture (Northern Research and Development Division)], Peoria városban (Illinois, Egyesült Államok) letétbe van helyezve és a nyilvánosság számára rendelkezésre áll. E törzs egy másik tenyészete a Fermentációs Kutató Intézetben (Fermentation Research Institute), (Inage, Chiba City, Japán) FRI FERM-P No. 2796 tenyészeti sorszámmal van letétbe helyezve. E törzs alaktani jellemzőit [ezt a törzset előzőleg a Trichoderma polysporum (Link ex Pers.) gombafajhoz sorolták], valamint az előállítására és az elóés utókultúrák készítésére szolgáló módszereket az irodalomban részletesen ismertették (például az 1 491 509 számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban).

Az e) eljárás szerint a választott törzset - például a Tolypocladium inflatum (Gams) fajból származó törzset célszerűen mintegy két héten át az alábbi példákban leírt táptalajon, hozzáadott (D)— vagy (D,L)— -szerin jelenlétében 27 °C hőmérsékleten tenyésztjük. Az aminosav-prekurzort célszerűen a táptalaj 1 liter térfogatára számítva körülbelül 1 g-tól körülbelül 15 g-ig, előnyösen körülbelül 4 g-tól körülbelül 10 g-ig terjedő mennyiségben adjuk a tenyészethez. A táptalaj célszerűen a kívánt ciklosporin 2-es helyzetű csoportjának megfelelő aminosav-prekurzort is tartalmazza, például a táptalaj 1 literére számítva körülbelül 6,0 g-tól körülbelül 10,0 g-ig terjedő, előnyösen 8,0 g mennyiségben. Az inkubációs idő letelte után az igy kapott (Illa) képletű ciklosporint a tenyészfolyadékból ismert módszerekkel különítjük el, például úgy, hogy a tenyészetet micéliumra és szűrletre választjuk szét, homogenizálás után a micéliumot extraháljuk, és a sejttömeget lecentrifugáljuk.

Az így kapott nyers ciklosporint például kromatográfiás úton és/vagy átkristályosítással tisztíthatjuk. Ilyen úton a többi ciklosporin, főként a természetes ciklosporinok. eltávolithatók.

Az f) eljárást például úgy hajthatjuk végre, hogy a kívánt esetben végzett eljáráslépés céljára leirt módszert alkalmazzuk.

A találmány szerinti eljárást az alábbi 1-4 példákban részletesen ismertetjük.

1. példa [(0-Acetil)-(D)Ser]^s-ciklosporin [(I) általános képletű vegyület, ahol X = = -MeBmt-, Y = cCAbu-, Z = -Val-, Q = = -O-acetil-(D)Ser-] előállítása mg [(D)Ser]®-ciklosporinhoz (amelyet a fentebb idézett 0 056 782 számú európai szabadalmi leírás 1. vagy 3. példájában leírt módszerrel állítunk eló, 20 mg 4-(dimetil-amino )-piridin 3 ml diklór-metánnal készült oldatát adjuk. Ezután 6,1 mg frissen desztillált acetil-klorid 1 ml diklór-metánnal készült oldatát adjuk hozzá, és az igy kapott reakcióelegyet egy órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután 50 ml diklór-metánnal hígítjuk, és 30 ml vízzel kirázzuk. A szerves fázist elkülönítjük, vízmentes nátrium-szulfáttal megszárítjuk, a szárítószert szűréssel eltávolítjuk, és a szűrletet bepároljuk. A lepárlási maradékot 60 g (0,062-0,20 szemcseméretű) szilikagélen kromatografáljuk, a2 eluálásra 5% metanolt tartalmazó diklór-metánt alkalmazunk, éa 25 ml térfogatú frakciókat gyűjtünk össze. A cim szerinti vegyületet vékonyréteg-kromatográfia segítségével, 5% metanolt tartalmazó kloroform mint vivőfázis alkalmazásával a 4-8. frakciókból kapjuk; kitermelés: 31 mg (64%). [oCJd²⁰ = -202 °C (c = 0,92, kloroformban).

2. példa

Az 1. példában leirt eljáráshoz hasonlóan a megfelelő, nem acilezett ciklosporinokból 'kiindulva állítjuk elő az alábbi vegyületeket:

2.1. [O-benzoil-lDÍSerl^ciklosporin [(I) általános képletü vegyület, ahol X = = -MeBmt-, Y = -oCAbu-, Z = -Val-, Q = = -0-benzoil-(D)Ser-], [oC]d^m = -220 ⁰5

HU 200786 Β (c = -1,0, kloroformban); kitermelés: 81%;

2.2. [O-acetil-fDjThrj^-ciklosporin [(I) általános képletű vegyület, ahol X = -MeBrat-, Y = -oCAbu-, Z = -Val-, Q· = -0-acetil-(D)-Thr], [oC]d^m = -219° (c = 1,0, kloroformban); kitermelés: 60%;

2.3. [NvalMO-acetil-tDJSerja-ciklosporin [(I) általános képletű vegyület, ahol X = = -MeBmt-, Y = -Nva-, Z = -Val-, Q = = -O-acetil-(D)Ser-], [oC]d²⁰ = -240° (c = 1,0, kloroformban); -233° (c = = 0,8 kloroformban); és -177° (c = = 0,76, metanolban); op.: 143-147 °C; kitermelés: 71%;

2.4. [Val]²-[0-acetil-(D)Ser]^e-ciklosporin [(I) általános képletű vegyület, ahol X = = -MeBmt-, Y = -Val-, Z = -Val-, Q = = -O-acetil-(D)Ser-), (oC)d²⁰ = -219° (c = 0,9 kloroformban); kitermelés: 68%;

2.5. [NvaP-fO-acetil-fDlSerl^ciklosporin [(I, általános képletű vegyület, ahol X = = -MeBmt-, Y = -cCAbu, Z = -Nva-, Q = = -0-acetil-(D)Ser-], [oC]d²⁰ = -215° (c = -1,0, kloroformban); kitermelés: 69%

2.6. [Nva]²-[Nva]^{5 * *}-[0-acetil-(D)Ser]⁸-ciklosporin [(I) általános képletű vegyület, ahol X = -MeBmt-, Y = -Nva, Z = -Nva-, Q = -O-acetil-(D)Ser-], [oCJd²⁰ = -196,9° (c = 1,0, kloroformban); kitermelés: 73% és

2.7. [Thrl^tO-acetil-tDJSerP-ciklosporin [(I) általános képletű vegyület, ahol X = = -MeBmt-, Y = -Thr-, Z = -Val-, Q = = -0-acetil-(D)Ser-], [cCb²⁰ = -251° (c = 0,86, kloroformban), -174° (c = = 0,81, metanolban), op.: 143-146 °C; kitermelés: 61%.

3. példa [Dihiro-MeBmt]¹-[0-acetil-(D)Ser]^s-ciklosporin [(I) általános képletű vegyület, ahol X = -dihidro-MeBmt-, Y = -cCAbu-, Z = -Val-, Q = -O-acetil-(D)Ser-) előállítása mg [O-acetil-lDJSerl^ciklosporin 10 ml etanollal készült oldatát 10 mg 10%-os csontszenes palládiumkatalizátor jelenlétében szobahőmérsékleten atmoszféranyomáson hidrogénezzük. 20 óra eltelte után a keveréket vékony talkumrétegen megszűrjük, és a szűrletből az etanolt vákuumban ledesztilláljuk. A maradékot igen kis nyomáson szárítva jutunk a cím szerinti vegyülethez, [cC]d²⁰ = = -205,8° (c = = 1,02, kloroformban). Kitermelés: 45 mg (83%).

4, példa

Az alábbi vegyületeket vagy a megfelelő, nem acilezett ciklosporinokból kiindulva az 1. példában leírt eljáráshoz hasonlóan, vagy a 2. példában leírt, megfelelő ciklosporinok 3. példában leírt hidrogénezéséhez hasonlóan állítottuk eló:

4.1 [dihidro-MeBmt]¹-[Nvaj^O-acetil-(D)Ser]⁸-cilosporin [(I) általános képletű vegyület, ahol X = -dihidro-MeBmt-,Y = = -Nva-, Z = -Val-, Q = = -O-acetil-(D)Ser-], op.: 139-141 °C, [cC]d²⁰ = -225° (c = 0,88, kloroformban), -163° (c = 0,76, metanolban); kitermelés: 81%;

4.2. [dihidro-MeBmt]¹-! ValJ^tO-acetil-(D)Ser]⁸-ciklosporin [(I) általános képletű vegyület, ahol X = -dihidro-MeBmt-,

Y = -Val, Z = -Val-, Q = -O-acetil-(D)Ser-], [cC]d²⁰ = -210° (c = 0,85, kloroformban); kitermelés: 85%; és

4.3. [dihidro-MeBmt]¹-[Thr]²-[0-acetil-(D)Ser]⁸-ciklosporin [(I) általános képletű vegyület, ahol X = -dihidro-MeBmt-,

Y = -Thr-, Z = -Val-, Q - -O-acetil-(D)Ser-], [cC]d²⁰ = -241° (c = 1,0, kloroformban), -162° (c = 1,0, metanolban), op.: 148-150 °C; kitermelés: 88%.

A kiindulási anyagok előállítása

5. példa

A 2.2.-től 2.7-ig terjedő példákban leírt vegyületek előállításához szükséges kiinduló vegyületeket az ismert [(D)Ser]⁸-ciklosporinhoz hasonló módon állítjuk elő. Az utóbbi vegyület előállítását a 0 056 782 számú európai szabadalmi leírás 1. példája ismerteti a 2-es és/vagy 5-ös és/vagy 8-as helyzetű csoportoknak az eljárás alapját képező szekvenciában való helyettesítésével, amint ezt a fentebb idézett szabadalmi leírás la. példájához megadott reakcióvázlat szemlélteti.

5.1. [(D)Thr]⁸-ciklosporin [(III a) általános képletű vegyület, ahol X’ = -MeBmt-, Y' = -cCAbu-, Z’ = -Val-, V -(D)Thr-], [oC]d²⁰ = -248,7° (c = 1,0, kloroformban);

5.2. [NvalMfDJSerj^ciklosporin [(Illa) általános képletű vegyület, ahol X’ = = -MeBmt-, Y’ = -Nva-, Z’ = -Val-, W² = -(D)Ser-], op.: 150-153 °C, [cClo²⁰ = -262° (c = 0,71, kloroformban), -191° (c = 0,73, metanolban);

[Val]²-[(D)Ser]⁸-ciklospi	orin	[(Illa)	álta-
lános képletű vegyi	ület,	ahol	X’ =
= -MeBmt-, Y’ = -Val-,	Z’ =	-Val-,	W’ =
= -(D)Ser-], [oC]d²⁰ =	-257°	(c	= 1,0,
kloroformban), -255°	(c =	0,45,	kloro-

formban), -189° (c = 0,42, metanolban), op.: 136-140 °C.

5.4. [Nva]⁵-[(D)Ser]⁸-ciklosporin [(Illa) általános képletű vegyület, ahol X’ = = -MeBmt-, Y’ = -oCAbu-, Z’ = -Nva-, W* = -(D)Ser-], [oCjo²⁰ = -212° (1,0, kloroformban);

HU 200786 Β

5.5. [Nva]²-[Nva]⁵-[(D)Ser]^a-ciklosporin [(Illa) általános képletű vegyület, ahol X’ = -MeBmt-, Y’ - -Nva-, Z’ = -Nva-, W = -(D)Ser-], [oCJd²⁰ = -217° (c = 1,0, kloroformban);

és

5.6. [Thr]²-[(D)Ser]^s-ciklosporin [(Illa) általános képletű vegyület, ahol X* = -MeBmt-, Y’ = -Thr-, Z’ = -Val-, W' = -(D)Ser-], [cCJd²⁰ = -258» (c = = 0,39, kloroformban), -178° (c = 0,40, metanolban), op.: 147-152 °C.

6, példa

Az 5.2. példában leirt vegyület más módon - mikrobiológiai úton - a következőképpen állítható elő:

a) Literenként 50 g maltózt, 5 g (DL)-norvalint, 8 g (D)-szerint, 0,75 g kálium-dihidrogén-foszfátot, 0,5 g magnézium-szulfát-heptahidrátot, 0,1 g kalcium-klorid-hexahidrátot és 8 g kazein-peptont tartalmazó 10 liter táptalajt beoltunk NRRL 8044 gombatórzs konidiumait és micéliumát tartalmazó 1 liter szuszpenzióval, amelyet egy háromnapos előtenyészetból vettünk. A beoltott termelő táptalajt 100 ml-es részletekben 100 darab Erlenmeyer-lombikba töltjük, amelyeket a kővetkező 14 napon át 27 °C hőmérsékleten körrázó-gépen percenként 180 fordulatszámmal inkubálunk. Ezután a micéliumot a tenyészfolyadéktól elválasztjuk, és Turrax-berendezésben három ízben 3 liter 90%-os metanollal aprítás és keverés közben extraháljuk. Az aprított micéliumot az oldószertől vákuumszűréssel elválasztjuk, és a szűrleteket egyesítjük, majd vákuumban 40 °C hőmérsékleten addig pároljuk, amig az eltávozó gőzök főként csak vizet tartalmaznak. Az igy kapott keveréket négy ízben, egyenként 500 ml 1,2-diklór-etánnal extraháljuk. A szerves fázisokat egyesítjük, és vákuumban 40 °C hőmérsékleten betöményítjük. A bepárlási maradékot 1,4 kg Sephadex LH-20 (a Pharmacia cég terméke) gélen metanollal gélszűrésnek vetjük alá, és 280 ml-es frakciókban gyűjtjük. A 9-11. frakciókat, amelyek ciklosporinkeveréket tartalmaznak, egyesítjük, és 1 kg szilikagélből készült oszlopon (szeracsemérete 0,063-0,2 mm, a Merck cég gyártmánya) kromatografáljuk. Az eluálásra vízzel telített etil-acetátot alkalmazunk. és 500 ml-es frakciókat gyűjtünk. A polaritással összhangban az oszlopról legelőször (a 7-9. frakciókban) az [Nval^-ciklosporint eluáljuk, ezt követi egy [NvaJMtDlSerP-ciklosporinból és ciklosporinból álló keverék. Ez utóbbi két komponenst 280 g szilikagélből készült oszlopon (szemcsemérete 0,63-0,2 mm, a Merck cég gyártmánya) választjuk szét; az eluálásra kloroform és metanol 98:2 arányú elegyét használjuk, és 100 ml térfogatú frakciókat gyűjtünk. A 20-30. frakciókat, amelyek nyers [Nval^tfDJSerl^ciklosporint tartalmaznak, további tisztításnak vetjük alá úgy, hogy magas nyomással kromatografáljuk 260 g súlyú megfordított fázisú szilikagélből készült oszlopon (a Merck cég LiChropep RP 18 gyártmánya, szemcsemérete 0,04-0,063 mm). Az eluálásra metanol és víz 85:15 arányú elegyét alkalmazzuk, és 25 ml térfogatú frakciókat gyűjtünk. A 45-55. frakciók egye sítésével amorf, fehér por alakjában tiszta [Nva]²-[(D)Ser]^a-ciklosporint kapunk.

A fenti eljárás kivitelezéséhez szükséges előtenyészetet a következőképpen készíthetjük:

b) Az eredetileg izolált NRRL 8044 törzs tenyészetéből előállított spóra- és micélium-szuszpenziót, amelyet az oltásra alkalmazunk, 21 napig 27 °C hőmérsékleten olyan agar-agar-táptalajon tenyésztjük, amely 1 liter ionmentesített vízben 20 g malátakivonatot, 20 g agar-agart és 4 g élesztőkivonatot tartalmaz. Az ezen tenyészetből származó spórákat fiziológiás konyhasóoldatban felvesszük, és így 5 x 10⁶spóra/ml végkoncentrációjú keveréket kapunk. E szuszpenzió 10 ml-es térfogatát alkalmazzuk a 6a. példában megadott táptalajjal azonos tenyésztő közeg 1 liternyi térfogatának oltáséra, azzal az eltéréssel, hogy (D)-szerint és (DL)-norvalint nem adunk a közeghez. A tenyésztést 3 napon át 27 °C hőmérsékleten percenkénti 200 fordulattal körrázó gépen végezzük. Az így kapott tenyészetet használjuk a termelő tenyészet oltására. Az [Nval^nDjSerja-ciklosporint fermentorban a következőképpen állíthatjuk eló:

c) Az NRRL 8044 törzs ferdeagar-tenyészetéból származó körülbelül 10⁹ spórát viszünk egy rozsdamentes acélfermentorba, amely 20 liter térfogatban az alábbi összetételű elötenyésztö-táptalajt tartalmazza:

-611

HU 200786 Β fruktóz 75 g

Amber EHC 25 g kálium-dihidrogén-foszfát 5 g kálium-klorid 2,5 g desztillált vízzel 1 literre kiegészítve (az oldat pH-értéke 5,5)

Ezt megelőzően 20 percen át 120 °C hőmérsékleten sterilizálást végzünk. Az inkubálást előnyösen 27 °C hőmérsékleten, 16 Iiter/perc sebességű levegőbevezetéssel, 50 kPa túlnyomással és percenként. 200-as fordulatszámmal végezzük.

Az előtenyészetet hat napig inkubáljuk, s utána az előtenyészetból 15 litert viszünk egy rozsdamentes acélfermentorba, amely 300 liter termelő táptalajt tartalmaz a következő összetétellel:

maltóz 75 g

Amber EHC 25 g kálium-dihidrogén-foszfát 5g kálium-klorid 2,5 g (DL)-norvalin 5 g (D)-szerin 8 g desztillált vízzel 1 literre kiegészítve (az oldat pH-értéke 5,5)

Előzőleg 20 percen át 120 °C hőmérsékleten sterilizálást végzünk. A tenyészetet 20 °C hőmérsékleten tartjuk, percenként 120 liter levegő átvezetésével, 50 kPa túlnyomással levegőztetjük, és percenként 70-es fordulatszámmal keverjük. A habképződést szilikon-emulzió hozzáadásával gátoljuk.

Tizennégy napig tartó tenyésztés után a teljes térfogat 275 liter. Ekkor a tenyészetet 10 °C-ra hűt jük, és a micéliumot Westfalia-típusú szeparátorral eltávolítjuk. A szűrletet etil-acetáttal kétszer átkeverve extraháljuk, a kivonatokat kevés vízzel mossuk, egyesítjük, és vákuumban beszáritjuk. A micéliumot metanollal elkeverve homogenizáljuk és szűrjük. Ezt az extrakciót 90%-os metanol alkalmazásával két ízben megismételjük. A metanolos kivonatokat egyesítjük, és viz hozzáadása után vákuumbam betóményítjük. A visszamaradó vizes koncentrátumot etil-acetáttal kétszer extraháljuk, a kivonatokat kevés vízzel mossuk, egyesitjük, és vákuumban betöményítjük. Az így extrahált vizes fázist még két ízben extraháljuk etil-acetát és izopropanol 8:2 arányú elegyével. E kivonatokat egyesítjük, és vákuumban ismét bepároljuk.

A micélium és a szűrlet extrakciójából származó kivonatokat szűrjük, s ennek során eluálószerként a Sephadex LH-20 mennyiségére számítva 50-szeres mennyiségű metanolt alkalmazunk. A csücsfrakciókat kromatográfiás úton tisztítjuk: ekkor százszoros mennyiségű Silicagel 60 típusú szilikagélt (szemcsemérete 0,04-0,63 mm) és eluálószerként vízzel telített etil-acetátot használunk. Az eluálás során elsőként az [Nvaj^ciklosporin távozik, ezt követi a ciklosporin és az [Nva]²-[(D)~ -Ser]®-ciklosporin. E későbbi frakciókat to8 vábbi kromatográfiás tisztításnak vetjük alá, ennek során 140-szeres mennyiségű Silicagel 60 típusú szilikagélt (szemcsemérete 0,063-0,20 mm) és eluálószerként kloroform és metanol 98:2 arányú elegyét alkalmazzuk. így tiszta [NvalMfDJSeria-ciklosporint kapunk.

7. példa

Az 5.3. példában leírt vegyület a 6. példa a) pontjában leirt eljáráshoz hasonlóan mikrobiológiai úton is előállítható, ha a kővetkező változtatásokat hajtjuk végre:

a) A táptalajban a (DL)-norvalint 10 g (L)-valinnal helyettesítjük. A micélimunak a tenyészfolyadéktól való elválasztása után az extrakciót a következőképpen végezzük:

A nyers micéliumot az oldószertől vákuumszűréssel elválasztjukj a szűrleteket egyesítjük, vizet adunk hozzá, és vákuumban 40 °C hőmérsékleten addig tőményitjük, amíg az eltávozó párlat főleg csupán vizet tartalmaz. Az így kapott keveréket három ízben egyenként 5 liter etil-acetáttal extraháljuk, a szerves fázisokat egyesítjük, és vákuumban 40 °C hőmérsékleten betöményítjük.

Az így kapott maradékot 1,4 kg Sephadex LH-20 gélen (a Pharmacia cég gyártmánya) metanollal gélszűrésnek vetjük alá. A ciklosporin-keveréket tartalmazó frakciókat egyesítjük, s ezt kővetően 3 kg szilikagélből (szemcsenagysága

0,020-0,045 mm, .Grace) készített oszlopon eluálószerként vízzel telített etil-acetátot alkalmazva elválasztjuk. A polaritással összhangban az oszlopról elsőként a [Val]²-ciklosporin távozik, és ezt követi egy olyan keverék, amelynek a főkomponense [Vall^tlDjSerl^ciklosporin. E legutóbbi főkomponenst 80 g szilikagélből (szemcsemérete 0,020-0,0045 mm, .Grace’) készült oszlopon, eluálószerként aceton és hexán 1:1 arányú elegyével kromatografáljuk. A nyers [Val]²—(D) -Ser]^a-ciklosporint tartalmazó frakciókat nagynyomású kromatográfiával tovább tisztítjuk. E célra megfordított fázisú szilikagéloszlopot (a töltet súlya 160 g, szemcsemérete 0,04-0,063 mm, LiChropep RP 18 berendezés, a Merck cég gyártmánya) és eluálószerként metanol és víz 80:20 arányú elegyét alkalmazzuk, így a tiszta [Vall^fíDjSerl^ciklosporint amorf, fehér por alakjában kapjuk.

-713

HU 200786 Β

b) A szükséges elötenyészetet a 6. példa a) pontja szerint készítjük.

A [Val]M(D)Ser]*-ciklosporint fermentorméretben is előállíthatjuk úgy, hogy a 6. példa c) pontjában leírtak szerint járunk el a következő változtatásokkal:

c) A termelő táptalajban a (DL)-norvalint 10 g (L)-valinnal helyettesítjük. A metanolnak a micéliumhoz való hozzáadása, homogenizálás és szűrés után (ezt két ízben végezzük 90%-os metanollal) a kővetkezőképpen járunk el: A metanolos kivonatokat egyesítjük, és viz hozzáadása után vákuumban betöményítjük. A visszamaradó vizes koncentrátumot etil-acetáttal háromszor extraháljuk, a kivonatokat kevés vízzel mossuk, egyesítjük, és vákuumban pároljuk.

A micélium és a szűrlet extrakciójából származó kivonatokat szűrjük, ’és ennek során eluálószerként a Sephadex LH-20 mennyiségére számitva 50-szeres mennyiségű metanolt alkalmazunk. A csúcsfrakciókat kromatográfiás úton tisztítjuk: ennek során 40-szeres mennyiségű Silicagel 60 típusú szilikagélt (szemcsemérete 0,04-0,063 mm) és eluálószerként vízzel telített etilacetátot használunk. Az eluálás során elsőként a (Vall^ciklosporin távozik, ezt követi a ciklosporin és a [Vall^tlDjSerj^ciklosporin. E későbbi frakciókat további kromatográfiás tisztításnak vetjük alá: ennek során százszoros mennyiségű Silicagel 60 típusú szilikagélt és eluálószerként aceton és hexán 1:1 arányú elegyét alkalmazzuk. A további tisztítást nagy nyomású kromatográfiával végezzük, ehhez megfordított fázisú szilikagélt (szemcsemérete 0,04-0,063 mm, LiChropep RP 18 berendezés, a Merck cég gyártmánya) és eluálószerként metanol és víz 80:20 arányú elegyét alkalmazzuk, igy tiszta [ Val]²—[ (D)Ser]^s-ciklosporinhoz jutunk.

8. példa

Az 5. 6. példában leírt vegyület mikrobiológiai úton is előállítható a 6. példa a) pontjában leírtak szerint a következő változtatásokkal:

a) a táptalajban a (DL)-norvalint 5 g (L)-treoninnal helyettesítjük. Az inkubálás után a következőképpen végezzük az extrakciót: A micéliumot a tenyészfolyadéktól elválasztjuk, és Turrax-berendezésben aprítás és keverés közben három ízben egyenként 9 liter 90%-os metanollal extraháljuk. Az aprított micéliumot az oldószertől vákuumszűréssel elválasztjuk, a szűrleteket egyesítjük, vizet adunk hozzá, és vákuumban 40 °C hőmérsékleten addig töményítjük, amíg az eltávozó párlat főként vizet tartalmaz. Az így kapott keveréket három Ízben egyenként 5 liter etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázisokat egyesítjük, és vákuumban 40 °C hőmérsékleten betöményitjük.

Az így kapott maradékot 2 kg Sephadex. LH-20 gélen (a Pharmacia cég gyártmánya) metanollal gélszűrésnek vetjük alá. A ciklosporin-keveréket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és 2 kg szilikagélből (szemcsemérete 0,02-0,045 mm, .Grace') készült oszlopon, eluálószerként vízzel telített etil-acetát alkalmazásával kromatografáljuk. A polaritással összhangban az eluálás során elsőként távozik a ciklosporin, ezt követi a [(DjSerJ^ciklosporin, majd a [ThrJ^ciklosporin és végül a nyers [ThrlMfDjSer]⁸-ciklosporin. A legutóbbi komponens további tisztítását 50 g szilikagélből (szemcsemérete 0,02-0,45 mm, .Grace”) készült oszlopon, eluálószerként aceton és hexán 2:1 arányú elegyének alkalmazásával végezzük. így amorf, fehér por alakjában tiszta (Thrj^ffD) -Ser]^a-ciklosporinhoz jutunk.

b) A szükséges elötenyészetet a 6. példa b) pontjában leírt eljárással készítjük.

A [ThrlMíDjSerl^ciklosporint fermentorméretben is előállíthatjuk, ha a 6. példa c) pontjában leírt eljárást követjük a következő változtatásokkal:

c) A termelő táptalajban a (DL)-norvalint 5 g (L)-trenoinnal helyettesítjük. Az inkubálás és a micéliumnak Westfalia-típusú szeparátorral való elkülönítése után a következőképpen járunk el:

A micéliumot metanollal keverjük, homogenizáljuk és szűrjük. Ezt az extrakciót 90%-os metanollal két ízben megismételjük. A metanolos kivonatokat egyesítjük, vizet adunk hozzá, és vákuumban betöményítjük. A visszamaradó vizes koncentrátumot etil-acetáttal két Ízben extraháljuk, a kivonatokat kevés vízzel mossuk, egyesítjük, és vákuumban betöményitjük.

A micélium kivonatait szűrjük, s ekkor eluálószerként a Sephadex LH-20 mennyiségére számítva 509

-815

HU 200786 Β

-szeres mennyiségű metanolt alkalmazunk. Ezt követően a csúcsfrakciókat kromatográfiásan tisztítjuk: ennek során 30-szoros mennyiségű Silicagel 60 típusú szilikagélt (szemcsemérete 0,04-0,063 mm) és eluálószerként vizzel telített etilacetátot alkalmazunk. Az eluálás során elsőként távozik a ciklosporin, ezt követi a [(D)Ser]®-ciklosporin, majd a [Thrl^ciklosporin és végül a [ThrlMfDjSeria-ciklosporin. E későbbi frakciókat további kromatográfiás tisztításnak vetjük alá: ennek során 250-szeres mennyiségű Silicagel 60 típusú szilikagélt (szemcsemérete 0,02-0,045 mm) és eluálószerként aceton és hexán 2:1 arányú elegyét alkalmazzuk. így tiszta [ThrlMID) -Ser]^s-ciklosporint kapunk.

9. példa

Az alábbi vegyületek, amelyek a 4.1.-4.3. példákban leírt vegyületek előállítása során kiinduló anyagokként alkalmazhatók, az 5-7. példákban leírt ciklosporinokból a 3. példában leírt eljáráshoz hasonlóan állíthatók elő:

9.1. [Dihidro-MeBmtlMNvalMíDjSerls-ciklosporin [(Illa) általános képletű vegyület, ahol X' = -dihidro-MeBmt-, Y’ = = -Nva-, Z = -Val-, W’ = -(D)Ser-], amelyet az 5.2 példában vagy a 6. példában leirt termékből állítottunk elő, [oClo²⁰ = -251° (c = 1,23, kloroformban) -179° (c = 1,16, metanolban), op.: 155— -157 °C.

9.2. [Dihidro-MeBmt]¹-! Vallat (D)Ser]⁸-ciklosporin [(Illa) általános képletű vegyület, ahol X' = -dihidro-MeBmt-, Y' = = -Val-, Z’ = -Val-, W’ = -(D)Ser-], amelyet az 5.3 példában vagy a 7. példában leírt termékből állítottunk elő, [oCío²⁰ = -224° (c = 1,0 kloroformban).

9.3. [Dihidro-MeBmtlMThrlMfDjSerja-ciklosporin [(Illa) általános képletű vegyület, ahol X’ = -dihidro-MeBmt-, Y’ = = -Thr-, Z’ = -Val-, W’ = -(D)Ser-], [oCJd²⁰ = -262° (c = 0,73, kloroformban), -173° (c = 0,79, metanolban), op.: 156— -158 °C.

A találmány szerinti eljárással előállított (I) képletű ciklosporinok farmakológiai hatást mutatnak, amit az alábbi vizsgáló módszerekkel igazoltunk.

1. Immunszuppresszív hatások

1.1 A lokális hemolizis in vitro vizsgálata gélállapotban (R. I. Mishell és R. W. Dutton: J. Exp. Medicine, 126,

423 (1976)]: A találmány szerinti ciklo10 sporinok - a kezeletlen kontrolokkal összehasonlítva - a hemolízis-zónákat 0,01-10,0 (ug/ml koncentrációban gátolták.

1.2. A Janossy-Greaves-féle limfocita-stimulálási vizsgálat [Clin. Exp. Immunoi., 9, 483 (1971) és 10, 525 (1972)]: A találmány szerinti vegyületek a konkanavalin-A-val stimulált dezoxiribonukleinsav-szintézist (a ³H-timidin beépülését), a sejtszaporodást és a blasztogenézist egérlépsejtek esetében - a kezeletlen kontrollokkal összehasonlítva - 0,001-10,0 Mg/ml koncentrációban gátolták.

1.3. A vegyes limfocita-reakció vizsgálata [Bach és munkatársai, J. Exp. Med 136. 1430 (1972)]:

E vizsgálat során limfociták (Balb/c egerek lépsetjei) reakcióját (azaz szaporodását és differenciálódását) mérjük, miközben Co-inkubálást végzünk 5 napon át besugárzott egerek (CBA ) allogén lépsejtjeivel együtt a vizsgálandó anyag jelenlétében vagy a vizsgálati anyag nélkül. A vizsgálati anyag jelenlétében mért reakciót e reakció százalékos megváltozásával fejezzük ki, a kontrollok reakcióját 100%-nak véve. A találmány szerinti vegyületek alkalmazása során 0,001-10,0 jug/ml koncentrációban e reakció gátlását figyeltük meg.

1.4. A szervek kilökésének gátlása:

F 344 fajtájú nőstény szervadó (donor) patkányok veséit Wistar-Furth fajtájú nőstény befogadó patkányokban ültettük át. A vizsgálandó anyagot 14 napig orálisan adagoltuk a befogadó patkányoknak, s ekkor a kezelést megszakítottuk. Hét nappal az átültetés után a vizsgálati állatok mindkét veséjét eltávolítottuk. Mivel ez esetben a vizsgálati állatok élete az átültetett szerv befogadásától és működésétől függ, a vizsgálandó anyag hatásosságának paramétereként a túlélési idő meghosszabbodását tekintjük, összehasonlítva olyan kontroli-állatok túlélési idejével, amelyek csak placebo-t kaptak. Azoknak az állatoknak a túlélési időtartama, amelyeknek a találmány szerinti ciklosporinokat 2,5-10 mg/kg mennyiségben orálisan adagoltuk, 60-250 nappal volt hosszabb, mint a kezeletlen kontrollállatoké, amelyek szervkilökés következtében 9-10 napon belül valamennyien elpusztultak.

2- Gyulladáscsökkentő hatás

A találmány szerinti ciklosporinok gyulladáscsökkentő hatása patkányon az adjuváns-arthritis vizsgálatával mutatható ki. E vizsgálat során adjuváns-arthritist idézünk elő Pearson és Wood mód-szerével [Arthr. Rheum., 2, 440 (1959)].

-9HU 200786 B

E vizsgálatban a találmány szerinti ciklosporinok a kifejlődő és a kifejlődött arthritissel szemben napi 10-30 mg/kg orális adagban hatásosnak bizonyultak.

3. Parazita-ellenes hatás

L. Rane (Chemotherapy and Drug Resistance in Malaria; kiadó W. Peters, Academic Press, New York, 1970) vizsgálati módszerét alkalmaztuk a malária elleni hatás megállapítására.

OF1 fajtájú hím egereket a kísérlet 0. napján 0,2 ml olyan szuszpenzióval fertőztünk, amely 10*⁷ Plasmodium berghei sp. (NK 65 törzs) parazitasejtet tartalmazott.

E fertőzést intraperitoneális úton végeztük. A.kísérlet 3. napján a vizsgálandó anyag különböző dózisait adagoltuk szubkután úton; e célra dózisonként

5-10 egeret alkalmaztunk. Megállapítottuk a túlélés időtartamát és a legkisebb hatásos dózist, amelyet úgy számítottunk ki, hogy a túlélés időtartamát öszszehasonlitottuk a kezeletlen kontrollállatok túlélési időtartamával. A kontrollállatok túlélési ideje körülbelül 7 napnak adódott. A legkisebb hatásos dózisnak tekintettük azt a mennyiséget, amelynek alkalmazása következtében a túlélés időtartama megkétszereződött. E vizsgálat során a találmány szerinti cíklosporinok napi 25-100 mg/kg szubkután adagokban hatásosnak bizonyultak. Immunszuppressziv hatásuk alapján a találmány szerinti ciklosporinok felhasználhatók olyan állapotok és betegségek megelőzésére és kezelésére, amelyek esetében az immunválasz csökkentése szükséges. így a találmány szerinti ciklosporinok limfociták és immunociták szaporodásának gátlására, tehát például autoimmun-betegségek kezelésére, szervátültetések - így bőr, tüdő, szív, sziv-tüdó, csontvelő, vese, lép és szaruhártya átültetése - utáni szövetkilökés gátlására alkalmazhatók. A találmány szerinti ciklosporinokat különösen olyan autoimmun-betegségek kezelésére alkalmazhatjuk, amelyek esetében a ciklosporin-A-val való kezelés javallt, vagy ezt már előzőleg alkalmazták; ilyenek például: az aplasztikus vérszegénység, a .pure red cell anaemia' (kizárólag vörösvértestekhez kapcsolódó vérszegénység), az idiopátiás trombocitopénia, a szisztémás Lupus erythematodes, polychondritis, scleroderma, Wegener-féle granulomatosis, krónikusan aktív májgyulladás (hepatitis), súlyos izomgyengeség (myasthenia gravis,) pikkelysömör (psoriasis), a Steven-Johnson tünetcsoport, az idiopátiás zsírszéklet (steatorrhoea) (sprue), a Crohn-féle megbetegedés, a Graves-féle szembetegség, sarcoidosis, sclerosis multiplex, az elsődleges epe-elzáródásos májzsugo18 rodás (cirrhosis biliaris), az elsődleges fiatalkori cukorbetegség, a hátsó urea-gyulladás (uveitis posterior), az interstitialis tüdőfibrózis és az arthritises pikkelysömör.

Gyulladásgátló hatásuk alapján a találmány szerinti ciklosporinok gyulladásos állapotok - különösen autoimmun-komponens mint kóroktani tényező következtében jelentkező gyulladásos állapotok - igy arthritis és reumás megbetegedések, például idült és súlyosbodó arthritis kezelésére alkalmazhatók.

Paraziták elleni hatásuk alapján a találmány szerinti ciklosporinok antiparazita gyógyszerekként például különböző típusú parazitafertőzések, különösen protozoa-, szívóféreg- (trematoda-) és fonálféreg- (nematoda) fertőzések kezelésére alkalmazhatók. A találmány szerinti ciklosporinok különösen olyan parazitafertőzések leküzdésére alkalma20 sak, amelyek esetében a szakirodalom ciklosporinokkal való kezelést javasol. Ilyen parazitafertözések például a schistomosomiasis, filariasis, leishamannia, coccidioidomycosis (Coccidioides immitis okozta fertőzés) és kü25 lőnősen a malária.

A fentiekben megnevezett indikációs területeken a napi adag körülbelül 75 mg-tól körülbelül 5000 mg-ig terjed, előnyösen körülbelül 2000 mg, különösen ·. előnyös napi

1500 mg alkalmazása. Adagolási egység alkalmazása során - így például orális adagolás esetén - egy adag körülbelül 25-2500, előnyösen körülbelül 1000, különösen előnyösen körülbelül 800 mg találmány szerinti cíklo35 sporint gyógyászati szempotból elfogadható hígító- vagy vivőanyaggal összekeverve tartalmaz.

A találmány szerinti ciklosporinokat bármilyen szokásos úton adagolhatjuk, külö40 nősen olyan úton, amely összhangban áll a ciklosporin-A alkalmazásának jelenleg elfogadott módszereivel: főként intravénás infúzió útján, így például szervátültetés esetében az átültetés előtt és közvetlenül az után; vagy gyomor-bélrendszeri zavarok jelentkezése esetében, amelyek a felszívódást ronthatják. A találmány szerinti ciklosporinokat orálisan - például orális adagolásra alkalmas oldat alakjában - is adagolhatjuk.

az 1.3. vizsgálat során 0,001-10 pg/ml koncentrációban, a 2. vizsgálat során napi 10-30 mg/kg orális adagban, és a 3. vizsgálat során napi 50-100 mg/kg szubkután dózisban hatásosak.

a (Illa) általános képletű ciklosporinok immunszuppressziv hatásuk alapján olyan betegségek és állapotok megelőzésére és kezelésére alkalmazhatók, amelyek esetében az immunválasz csökkentése kívánatos, például limfociták és immunociták szaporodásának gátlására, így autoimmun-betegségek, különösen a fentebb felsorolt, specifikusan autoimmun-jellegű betegségek kezelésére, vagy a találmány szerinti ciklosporinok felhasználá65

-1019

HU 200786 Β sával kapcsolatban említett különböző szervkilökési jelenségek elhárítására.

A (Illa, általános ciklosporinok gyulladásgátló hatásuk alapján gyulladásos állapotok kezelésére is alkalmasak. Különösen olyan 5 gyulladásos állapotok kezelésére használhatók, amelyek kóroktani tényezői között autoimmun-komponens szerepel, igy az arthritis és reumás betegségek, például a krónikus, súlyosbodó sokízületi gyulladás (polyarthritis 10 chronica progrediens) kezelésére.

A (Illa) általános képletű ciklosporinok paraziták elleni hatásuk alapján antiparazita gyógyszerként alkalmazhatók például különböző típusú parazitafertózések kezelésére, 15 különösen azoknak a parazitafertőzéseknek a kezelésére, amelyeket fentebb a találmány szerinti ciklosporinok felhasználásával kapcsolatban felsoroltunk.

A fentiekben megnevezett indikációs te- 20 rületeken a napi adag körülbelül 75 mg-tól körülbelül 5000 mg-ig terjed. Adagolási egység alkalmazásakor - például orális adagolás esetén - egy adag körülbelül 25-2500 mg (Illa) képletű ciklosporint gyógyászati szem- 25 pontból elfogadható hígító- vagy vivőanyaggal összekeverve tartalmaz.

A (Illa, általános képletű ciklosprinokat bármilyen szokásos úton adagolhatjuk, különösen olyan úton, amely összhangban áll a 30 ciklosporin alkalmazására jelenleg elfogadott módszerekkel: főként intravénás infúzió útján, így például szervátültetés esetében az átültetés előtt és közvetlenül az után; vagy gyomor-bélrendszeri zavarok esetében, ame- 35 lyek a felszívódást ronthatják. A (Illa) általános képletű ciklosporinokat orálisan - például orális adagolásra alkalmas oldat alakjában - is adagolhatjuk.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás az (I) általános képletű ciklosporinok előállítására - ahol 45

X jelentése -MeBmt- vagy -dihidro-MeBmt- csoport;

Y jelentése -cCAbu-, -Thr-, -Val- vagy

-Nva- csoport;

Z jelentése -Val- vagy -Nva- csoport; 50 és

Q jelentése (II) általános képletű csoport, amelyben

Rí jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy fe- 55 nilcsoport; és

R2 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport -, azzal jellemezve, hogy egy (III) általános képletű ciklosporint, ahol X jelentése -MeBmt- vagy -dihidro-MeBmt- csoport, Y jelentése -cCAbu-, -Thr-, -Val- vagy -Nvacsoport, Z jelentése -Val- vagy -Nva- csoport és W jelentése (IV) általános képletű csoport, amelyben R2 hidrogénatomot vagy metilcsoportot jelent, egy Ri-CO- általános képletű csoportot tartalmazó acilezószerrel - amelyben Rí jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkilcsoport vagy fenilcsoport - reagáltatunk, és kívánt esetben olyan (I) általános képletű ciklosporinok előállítására, ahol X jelentése -dihidro-MeBmt- csoport, és Y, Z és Q jelentése ugyanaz, mint az (I) képletben, egy megfelelő (I) képletű ciklosporint - ahol X jelentése -MeBmt- csoport, és Y, Z és Q jelentése ugyanaz, mint az (I) általános képletben katalitikus hidrogénezéssel redukáljuk. (Elsőbbsége: 1985. március 21.)

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy egy (III) általános képletű ciklosporint - ahol X jelentése -MeBmtvagy -dihidro-MeBmt- csoport, Y jelentése -oCAbu- csoport vagy -Nva- csoport, Z -Valcsoportot jelent és W jelentése (IV) általános képletú csoport, amelyben R2 jelentése hidrogénatom - egy Ri-CO- általános képletű csoportot tartalmazó acilezőszerrel - ahol Rí jelentése az 1. igénypont tárgyi kőre szerinti - reagáltatunk. (Elsőbbsége: 1984. március 23.)

3. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy egy (III) általános képletű ciklosporint - ahol X jelentése -MeBmtvagy -dihidro-MeBmt- csoport, Y -cCAbucsoportot, Z -Nva- csoportot és W (IV) általános képletű csoportot jelent, ahol R2 jelentése hidrogénatom - egy RiCO- általános képletű csoportot tartalmazó acilezőszerrel amelyben Rí jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport - reagáltatunk.