FR3092759A1 - Actif pour homogénéiser le teint, notamment des peaux à carnation olive - Google Patents

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Abstract

L’invention propose l’utilisation de cellules végétales indifférenciées ou dédifférenciées, entières et/ou lysées, de Buddleja davidii Franch. obtenues par un procédé de culture cellulaire in-vitro, et/ou d’un extrait intracellulaire desdites cellules débarrassé des débris cellulaires, pour un traitement cosmétique non-thérapeutique topique pour homogénéiser le teint de la peau, via notamment la prévention et/ou le traitement des hétérogénéités pigmentaires et/ou de texture de la peau. Le traitement est particulièrement adapté pour le traitement des peaux de phototype III à V developpant des taches et des zones d’hyperpigmentation, et en particulier encore pour le traitement des peaux à carnation olive.

Description

ACTIF POUR HOMOGÉNÉISER LE TEINT, NOTAMMENT DES PEAUX À CARNATION OLIVE
La présente invention concerne un ingrédient actif cosmétique pour homogénéiser le teint, une composition cosmétique le comprenant et son utilisation en cosmétique sur la peau et les phanères de mammifères, humains ou animaux. Elle vise les industries des produits cosmétiques, dermatologiques et des produits d’hygiène et de soins personnels.
Un teint homogène et éclatant est synonyme de fraicheur et de jeunesse. C’est l’un des buts les plus recherchés en cosmétique, avec ceux de combattre la sécheresse et les rides.
La pigmentation de la peau et l’apparition de taches peuvent être limitées en évitant l’exposition solaire ou en filtrant les rayonnements solaires. Il est possible aussi d’utiliser des traitements dépigmentants. Cependant ces traitements, souvent de types acides, laser ou à base d’hydroquinone ou de sels de mercure, tendent à irriter la peau localement et, sur des peaux foncées naturellement pigmentées, comme les peaux de phototype III à IV (selon l’échelle de Fitzpatrick), ils favorisent, par effet rebond, la surpigmentation de la peau. Ce problème touche les femmes de différentes parties du monde, en Méditerranée, Europe du sud, Amérique latine, Moyen-orient et Asie centrale. Cela va se traduire pour ces femmes, par des tâches ou des zones surpigmentées disgracieuses, par exemple autour de la bouche, qui vont prendre beaucoup de temps à s’estomper naturellement. Un autre problème rencontré avec les peaux de ces phototypes III à V, est lié à leur carnation : le teint est doré l’été, et l’hiver olivatre ou grisatre (avec un sous-ton mélangé chaud et neutre) et donc moins esthétique.
Pour pallier ces deux effets inesthétiques, taches et zones hyperpigmentées et teint olivâtre et/ou terne, les femmes ont le plus souvent recours au maquillage.
La présente invention a pour but de proposer un traitement cosmétique ou dermatologique pour homogénéiser le teint, et en outre particulièrement efficace pour traiter les peaux foncées, de phototype III à IV, pour leur rendre leur éclat, notamment leur redonner une couleur ambrée, et un ingrédient actif à cet effet.
A cet effet, elle propose l’utilisation de cellules végétales indifférenciées ou dédifférenciées, entières et/ou lysées, deBuddleja davidiiFranch. obtenues par un procédé de culture cellulairein vitro, et/ou d’un extrait intracellulaire desdites cellules débarrassé des débris cellulaires, pour un traitement cosmétique non-thérapeutique topique pour homogénéiser le teint de la peau.
De manière préférentielle selon l’invention, les cellules sont utilisées sous forme d’un mélange de cellules entières et de cellules lysées mises en suspension dans un milieu physiologiquement acceptable, de préférence une matrice hydrophile. De préférence, le mélange comprend au moins 10% de cellules entières, de préférence encore entre 30% et 70% de cellules entières, typiquement entre 40 et 60%, en général environ 50%.
La présente invention propose également l’utilisation de cellules végétales indifférenciées ou dédifférenciées, entières et/ou lysées, deBuddleja davidiiFranch. obtenues par un procédé de culture cellulairein vitro, et/ou d’un extrait intracellulaire desdites cellules débarrassé des débris cellulaires, pour la fabrication d’un ingrédient actif cosmétique pour homogénéiser le teint de la peau et d’une composition cosmétique topique comprenant ledit ingrédient actif.
Dans la description qui suit, les termes « cellules végétales deBuddleja davidiiFranch. », lorsque cela n’est pas précisé autrement, englobent des cellules végétales indifférenciées ou dédifférenciées, entières et/ou lysées, deBuddleja davidiiFranch. obtenues par un procédé de culture cellulairein vitro, et/ou un extrait intracellulaire desdites cellules débarrassé des débris cellulaires.
Selon un autre aspect, la présente invention propose une composition comprenant l’ingrédient actif selon l’invention à base de cellules végétales deBuddleja davidiiFranch., tel que défini ci-dessus, une telle composition pouvant être utilisée en cosmétique ou pour une application médicale dermatologique de soin de la peau, de ses annexes et des muqueuses.
Selon un autre aspect encore, la présente invention propose également un procédé pour homogénéiser le teint de la peau comprenant l’application topique sur la peau d’une quantité efficace d’une composition cosmétique comprenant l’ingrédient cosmétique actif selon l’invention, tels que décrits et définis ci-dessus.
LeBuddleja davidiiFranch. ouBuddleia davidiiFranch.(« Butterfly Bush » en anglais et « Mi Meng Hua » en chinois), ou plus communément appelé Arbre aux papillons, est un arbuste aux branches frêles mais abondantes qui se pare en été de fleurs parfumées de couleurs variées selon les plants. Originaire de Chine, leBuddleja davidiiFranch.,est très repandu dans les jardins ornementaux à travers le monde où il attire les papillons polinisateurs. Il colonise très facilement les terrains secs et les friches de l’Europe, de la Nouvelle Zélande, des Etats Unis et de l’Australie.
LeBuddleja davidiiFranch. est utilisé en usage traditionnel en Chine pour drainer le feu du corps et calmer les yeux rouges, douloureux, pleureurs, sensibles à la lumière et enflés. En Corée, il est utilisé de la même façon, mais aussi pour les états inflammatoires intestinaux et pour réduire la sensibilité de la peau.
Les cellules végétales deBuddleja davidiiFranch. selon l’invention sont riches en phytomolécules protectrices pour les cellules cutanées dont le verbascoside (appelé aussi acteoside ou kusagenin).
Comme le montrent les testsin-vitroetin-vivodétaillés plus loin, le traitement selon l’invention permet d’agir sur deux causes responsables d’un teint non homogène, c’est-à-dire :
  • les hétérogénéités de pigmentation ; et
  • les hétérogénéités de texture (de relief), qui ne renvoient pas la lumière de façon homogène.
Sur les hétérogénéités de pigmentation, il a été montré que l’actif selon l’invention a un effet éclaircissant des taches et zones sombres (hyperpigmentées), notamment grâce à une action sur la production de la mélanine qui donne sa couleur à la peau, mais aussi sur la répartition de la mélanine dans l’épiderme.
Sur les hétérogénéités de texture, il a été montré que l’actif selon l’invention a un effet lissant.
La présente invention propose ainsi un traitement adapté à prévenir et/ou, traiter les hétérogénéités pigmentaires et/ou de texture de la peau.
Le traitement selon l’invention est en outre particulièrement adapté aux peaux de phototype III à V, avec un rendu de teint plus homogène et plus éclatant, notamment les peaux de phototype IV (voir les testsin-vivodétaillés plus loin).
De manière plus particulière, l’aspect éclaircissant de l’ingrédient selon l’invention a été montré à travers différents testsin-vitro. Les testsin-vitroles plus classiques pour montrer un effet éclaircissant sont ceux réalisés sur des cultures de mélanocytes. Ces cellules cutanées produisent la mélanine, responsable de la pigmentation foncée de la peau et un bon éclaircissant cosmétique devra faire baisser cette production. Pour arriver à ce résultat un des moyens consiste à diminuer l’activité de la tyrosinase, la première enzyme dans la chaine de biosynthèse de la mélanine, qui transforme la tyrosine en DOPA-quinone. Une autre enzyme impliquée dans la suite de cette biosynthèse est la dopachrome tautomérase (DCT), dont la baisse de l’activité a été recherchée. Les trois paramètres (mélanine, tyrosinase et DCT) ont été testés sur des cultures de mélanocytes, avec et sans l’ingrédient selon l’invention.
Une autre voie pour limiter la pigmentation et éclaircir la peau consiste à ralentir le transfert des mélanosomes (globules contenant de la mélanine) qui s’opère par phagocytose du mélanocyte vers les kératinocytes voisins. Pour montrer cet effet, un testin-vitroa été réalisé consistant à appliquer des mélanosomes artificiels (billes fluorescentes) au contact de kératinocytes, avec et sans l’ingrédient selon l’invention, et à évaluer la phagocytose par mesure de fluorescence.
Par ailleurs, il a été montré que l’ingrédient selon l’invention contribue au renfort de la jonction dermo-épidermique (JDE)viala stimulation dans des culture de kératinocytes de la production de collagène VII et de laminines, qui sont des constituants importants intervenant dans le bon ancrage des kératinocytes et des mélanocytes dans la JDE. Ce bon ancrage va rendre les mélanocytes moins réceptifs aux stimuli propigmentants, ces stimuli qui sont responsables de la dérégulation de leurs activités et qui les conduisent à surproduire de la mélanine.
Il existe également un lien entre la qualité de la barrière cutanée et la pigmentation de la peau. Une barrière cutanée renforcée contribue à freiner les pénétrations d’allergènes et d’irritants pouvant conduire à une surpigmentation. De même, le mélasma (hyperpigmentation au niveau du visage) est associé à une fonction de barrière altérée. Enfin dans les désordres de type taches de vieillesse, concernant presque toutes les personnes au-delà de 50 ans, la réduction du gène de l’involucrine, acteur majeur de la barrière cutanée est observée. Pour illustrer cet effet de l’ingrédient selon l’invention, la stimulation par l’ingrédient selon l’invention de la production de deux marqueurs de la barrière cutanée (involucrine et cytokératine-I) sur des kératinocytes a été montrée.
Par ailleurs, l’ingrédient selon l’invention a montré sa capacité à stimuler la production d’acide hyaluronique sur des cultures de kératinocytes. L’acide hyaluronique est un constituant majeur de l’épiderme participant à la fonction de barrière (voir ci-dessus) ainsi qu’au maintien d’une hydratation satisfaisante de la peau. Il se présente sous la forme d’un gel aqueux et nourrissant qui remplit les espaces entre les kératinocytes. Il prévient de cette façon une sécheresse cutanée, dont on sait qu’elle altère la texture de la peau, en lui conférant un toucher rêche et rugueux.
Selon un autre aspect, il est connu qu’avec l’âge et l’exposition solaire, les protéines de la peau accumulent des AGEs (« Advanced Glycation End-products » ou PTGs, Produits Terminaux de la Glycation), un phénomène amplifié par une nourriture trop riche en sucres. Les AGEs sont en effet des sous-produits de la liaison d’acides aminés avec des sucres. Dans la peau, la fibronectine, les laminines et les collagènes, par exemple, accumulent ces AGEs, les rendant moins fonctionnels. Il a été montré également que les AGEs provoquaient une dénaturation de la qualité de l’acide hyaluronique. On sait de plus que les différents types d’AGEs provoquent sur des mélanocytes isolés et dans des explants cutanés humains une stimulation de la mélanogénèse et une augmentation de l’activité de la tyrosinase. Ces inductions restent modérées mais sont constantes, au contraire des expositions aux UVs. Elles pourraient être un début d’explication sur l’apparition de taches séniles sur des sites non exposés au soleil.
Les AGEs exercent enfin un impact négatif au niveau du teint. Chez les personnes diabétiques, une grande quantité d’AGEs, contribue fortement à faire paraître la peau plus vieille, plus terne et plus tachée.
Les AGEs ont donc un rôle délétère majeur au niveau de la peau. Inhiber leur formation est donc une propriété importante pour un ingrédient actif cosmétique en vue de limiter la pigmentation et garder un teint éclatant. Cette propriété a été mise en évidence pour l’ingrédient actif selon l’invention.
Le traitement selon l’invention est ainsi adapté notamment à éclaircir la peau, à contrer la glycation des protéines, à lisser la peau, à stimuler la production d’acide hyaluronique, à renforcer la barrière cutanée et/ou à renforcer la jonction épiderme-derme.
Les tests montrant l’efficacité de l’ingrédient selon l’invention sont détaillés plus loin dans la description.
De manière usuelle, les cellules végétales deBuddleja davidiiFranch. selon l’invention peuvent être associées à d’autres actifs, à des concentrations efficaces pouvant agir de façon synergique ou en renfort d’activité, tels que les agents usuels suivants : anti-âges, anti-rides et ridules, éclaircissants, hydratants, humectants, astringeants, anti-séborrhée, amincissants, anti-acné, anti-inflammatoires, anti-oxydants, agissant sur l’éclat du teint, les signes de la fatigue cutanée, les rougeurs, les cernes et poches sous les yeux, calmants, apaisants les peaux facilement irritables, anti-glycation, volumateurs, restructurants, anti-carbonylation, dermo-relaxants, protecteurs vis-à-vis de la polution et des différentes radiations (UV, IR, lumière bleue, etc.), anti-repousse poil, agissants sur la couche cornée, sur la jonction derme-épiderme, sur la production de protéine HSPs, sur la fermeté, l’élasticité, la tonicité de la peau, la repousse des poils (cils, sourcils par exemple), etc.
Les cellules végétales deBuddleja davidiiFranch. selon l’invention peuvent être combinées également avec au moins l’un des composés choisis parmi les composés de la vitamine B3, les composés comme la niacinamide ou le tocophérol, les composés rétinoïdes comme le rétinol, l’hexamidine, l’acide α-lipoïque, le resvératrol ou la DHEA, l’acide hyaluronique, les peptides, notamment le N-acétyl-Tyr-Arg-O-hexadécyl, le Pal-VGVAPG (SEQ ID NO: 1), le Pal-KTTKS (SEQ ID NO: 2), le Pal-GHK, le Pal-KMO2K, le Pal-GQPR (SEQ ID NO: 3) et le Pal-K(P)HG, qui sont des actifs classiques utilisés dans les compositions topiques cosmétiques ou dermo-pharmaceutiques.
Par « milieu physiologiquement acceptable », on entend selon la présente invention, sans être limitatif, une solution aqueuse ou hydro alcoolique, une émulsion eau-dans-huile, une émulsion huile-dans-eau, une microémulsion, un gel aqueux, un gel anhydre, un sérum, une dispersion de vésicules, une poudre, ou un milieu hétérogène liquide/particules.
« Physiologiquement acceptable » signifie que les compositions comprenant l’ingrédient selon l’invention conviennent à une utilisation topique ou transdermique, en contact avec les muqueuses, les ongles, le cuir chevelu, les cheveux, les poils et la peau de mammifère et plus particulièrement humaine, des compositions pouvant être ingérées ou injectées dans la peau, sans risque de toxicité, d’incompatibilité, d’instabilité, de réponse allergique, et autres. Ce « milieu physiologiquement acceptable » forme ce que l’on appelle classiquement l’excipient de la composition.
Une composition selon l’invention peut être appliquée sur le visage, le corps, le décolleté, le cuir chevelu, les cheveux, les cils, les poils, sous n’importe quelle forme ou véhicules connus de l’homme de l’art, notamment sous forme de solution, de dispersion, d'émulsion, de pâte ou de poudre, individuellement ou en pré-mélange ou être véhiculée individuellement ou en pré-mélange par des vecteurs comme les macrocapsules, les microcapsules ou les nanocapsules, les macrosphères, les microsphères, ou les nanosphères, les liposomes, les oléosomes ou les chylomicrons, les macroparticules, les microparticules ou les nanoparticules, macroéponges, les microéponges ou les nanoéponges, les microémulsions ou les nanoémulsions, ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, les talcs, bentonites, spores ou exines et autres supports minéraux ou organiques.
En cosmétique notamment, des applications peuvent être proposées notamment dans les gammes de soins de la peau du visage, du corps, des cheveux et des poils et des gammes de maquillages-soins.
D’une manière générale, les cellules végétales deBuddleja davidiiFranch. selon la présente invention peuvent être utilisées sous n'importe quelle forme, dans une forme liée, incorporée ou adsorbée sur des macro-, micro-, et nanoparticules, ou sur macro-, micro- et nanocapsules, pour le traitement des textiles, des fibres naturelles ou synthétiques, des laines, et tous matériaux destinés à entrer en contact avec la peau et qui peuvent être employés dans l'habillement, les sous-vêtements de jour ou de nuit, les mouchoirs, ou les tissus, afin d’exercer son effet cosmétique ou thérapeutique (dermatologique) par l'intermédiaire de ce contact peau/textile et permettre une délivrance topique continue.
Le CTFA (“International cosmetic ingredient dictionary & handbook (17ème Ed. 2017) publié par “the Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association, Inc.”, Washington, D.C.) décrit une grande variété, sans limitation, d’ingrédients cosmétiques et pharmaceutiques habituellement utilisés dans l’industrie du soin de la peau, qui conviennent pour être utilisés comme ingrédients additionnels dans les compositions selon la présente invention.
D’autres actifs cosmétiques additionnels peuvent être trouvés dans la documentation commerciale de Sederma et sur le site www.sederma.com ou www.crodarom.fr.
On peut aussi citer à titre d’exemples les actifs commerciaux suivants : la bétaïne, le glycérol, l’Actimoist Bio 2™ (Active organics), AquaCacteen™ (Mibelle AG Cosmetics), Aquaphyline™ (Silab), AquaregulK™ (Solabia), Carciline™ (Greentech), Codiavelane™ (Biotech Marine), Dermaflux™ (Arch Chemicals, Inc), Hydra'Flow™ (Sochibo), Hydromoist L™ (Symrise), RenovHyal™ (Soliance), Seamoss™ (Biotech Marine), Argireline™ (nom commercial de l’acétyl hexapeptide-3 de Lipotec), le spilanthol ou un extrait d’Acmella oleraceaconnu sous le nom Gatuline Expression™, un extrait deBoswellia serrataconnu sous le nom Boswellin™, Deepaline PVB™ (Seppic), Syn-AKE™ (Pentapharm), Ameliox™, Bioxilift™ (Silab), PhytoCellTec™Argan (Mibelle), Papilactyl D™ (Silab), Preventhelia™ (Lipotec), ou l’un ou plusieurs des ingrédients actifs suivants vendus par Sederma : HaloxylTM, Subliskin™, Venuceane™, Moist 24™, Vegesome Moist 24™, Essenskin™, Juvinity™, Revidrat™, Resistem™, Chronodyn™, Kombuchka™, Chromocare™, Calmosensine™, Glycokin factor S™, Biobustyl™, Idealift™, Ceramide 2™, Ceramide A2™, Ceramide HO3™, LumisphereTM, LumiskinTM, Legance™, Intenslim™, Prodizia™, Beautifeye™, PacifeelTM, Zingerslim™, MediatoneTM, Meiritage™, Senestem™, Sebuless™, Majestem™, Apiscalp™, Rubistem™, CitystemTM, NeonycaTM, NG Insaponifiables de Beurre de KaritéTM, MajestemTM, HydronesisTM, PoretectTM, CrystalideTMou des mélanges de ceux-ci.
Il est par exemple particulièrement avantageux de compléter ou potentialiser l’action des cellules végétales deBuddleja davidiiFranch. selon la présente invention avec l’action d’un produit agissant sur la présence des pigments cutanés d’origine sanguine (comme la biliverdine ou la bilirubine) responsables notamment des cernes, par exemple le N-hydroxysuccinimide (NHS) et/ou la chrysine. A titre d’exemples, on peut citer le produit commercial HaloxylTMcommercialisé par la Demanderesse comprenant une association de NHS et de chrysine et de deux matrikines, le Pal-GHK et Pal-GQPR.
On peut citer aussi l’association avec un produit agissant sur l’éclat ou l’éclaircissement du teint comme par exemple les produits commerciaux LumisphereTM(une association de diacétylboldine (DAB) encapsulée dans des microcapsules de polyméthylméthacrylate et de TiO2Mn), LumiskinTM(de la DAB en solution dans des triglycerides C8 C10) ou MediatoneTM(comprenant de l’acide octadécène dioïque).
Parmi les extraits de plante (sous la forme d’extraits classiques ou préparés par une méthodein vitro) pouvant être combinés avec le(s) peptide(s) cyclique(s) selon l’invention, on peut mentionner, en outre et en particulier, les extraits de lierre, par exemple de lierre grimpant(Hedera helix), deBupleurum chinensis, deBupleurum falcatum, d’arnica(Arnica montana L.), de romarin (Rosmarinus officinalis N.), de souci (Calendula officinalis), de sauge (Salvia officinalis L.), de ginseng (Panax ginseng), deginko biloba, de millepertuis (Hyperycum perforatum), de fragon (Ruscus aculeatus L.), d’ulmaire (Filipendula ulmaria L.), d'orthosiphon (Orthosiphon stamincusBenth.), d’algues (Fucus vesiculosus), de bouleau (Betula alba), de thé vert, de noix de cola (Cola nipida), de marronniers d'Inde, de bambou,Centella asiatica, de bruyère, fucus, saule, piloselle, les extraits d'escine, les extraits de Cangzhu, les extraits deCrysanthellum indicum, de plantes du genreArmeniacea, Atractylodis platicodon,Sinnomenum,Pharbitidis,Flemingia, deColeuscommeC. forskohlii,C. blumei,C. esquirolii,C. scutellaroides, C. xanthantusetC. barbatus, comme un extrait de racines deColeus barbatus, des extraits deBallote,Guioa,Davallia,Terminalia,Barringtonia,Trema,Antirobia,Cecropia,Argania,DioscoreaecommeDioscorea oppositaou mexicain, des extraits deAmmi visnaga, deSiegesbeckia, en particulierSiegesbeckia orientalis, des extraits végétaux de la familles desEricaceae, en particulier des extraits de myrtilles (Vaccinium angustifollium) deArctostaphylos uva ursi,Aloe vera, de plantes contenant des stérols (notamment des phytostérols), de Manjistha (extrait de plantes du genreRubia, en particulierRubia cordifolia), de Guggal (extrait de plantes du genreCommiphora, en particulierCommiphora mukul), un extrait de kola, camomille, trèfle violet, dePiper methysticum(Kava Kavade Sederma), deBacopa monieri(Bacocalmine™, Sederma) et de fouet de mer, deGlycyrrhiza glabra, de mûrier, demelaleuca(arbre à thé), deLarrea divaricata, deRabdosia rubescens, deEuglena gracilis, deFibraurea recisa hirudinea, deChaparral sorghum, de fleur de tournesol, d’Enantia chlorantha, de Mitracarpe du genreSpermacocea,deBuchu barosma, deLawsonia inermis L., d’Adiantium capillus-veneris L., deChelidonium majus, deLuffa cylindrica, de « Japanese Mandarin » (Citrus reticulata blancovar.unshiu), deCamelia sinensis, deImperata cylindrica, deGlaucium flavum, deCupressus sempervirens, dePolygonatum multiflorum, deLoveyly hemsleya, deSambucus nigra, dePhaseolus lunatus, deCentaurium, deMacrocystis pyrifera, deTurnera diffusa, deAnemarrhena asphodeloides, dePortulaca pilosa, d’Humulus lupulus, de café Arabica, d’Ilex paraguariensis, deGlobularia cordifolia, d’Oxydendron arboreum, d’Albizzia julibrissin, deZingiber zerumbet Smith, d’Astragalus membranaceus, d’Atractylodes macrocephalae, dePlantago lanceolata, deLeontopodium alpinum(ou eldelweiss), deMirabilis jalapa, d’Apium graveolens,deMarrubium vulgareou d’orchidées.
Les compositions selon la présente invention peuvent comprendre un ou plusieurs peptides, incluant, sans se limiter, les, di-, tri-, tetra-, penta- et hexapeptides et leurs dérivés. Selon un mode de réalisation particulier, la concentration du peptide additionnel, dans la composition, varie entre 1x10-7% et 20%, de préférence entre 1x10-6% et 10%, préférentiellement entre 1x10-5% et 5%, en poids. Le terme « peptide » désigne ici les peptides contenant 10 acides aminés ou moins, leurs dérivés, isomères et complexes avec d’autres espèces telles qu’un ion métal (e.g. cuivre, zinc, manganèse, magnésium, et autres). Le terme "peptides" se réfère à la fois à des peptides naturels et à des peptides de synthèse. Il se réfère également à des compositions qui contiennent des peptides et qui se rencontrent dans la nature, et/ou qui sont commercialement disponibles.
Des exemples non limitatifs de dipeptides utilisables dans le cadre de la présente invention, comprennent la Carnosine (beta-AH), YR, VW, NF, DF, KT, KC, CK, KP, KK, TT, PA, PM ou PP.
Des exemples non limitatifs de tripeptides comprennent RKR, HGG, GHK, GGH, GHG, KFK, KAvaK, KβAK, KAbuK, KAcaK, KPK, KMOK, KMO2K, PPL, PPR, SPR, QPA, LPA ou SPA.
Des exemples non limitatifs de tétrapeptides sont RSRK (SEQ ID NO: 4), GQPR (SEQ ID NO: 5) ou KTFK (SEQ ID NO: 6), KTAK (SEQ ID NO: 7), KAYK (SEQ ID NO: 8) ou KFYK (SEQ ID NO: 9). Un exemple non limitatif de pentapeptide est le KTTKS (SEQ ID NO: 10) et d’hexapeptides les GKTTKS (SEQ ID NO: 11) et VGVAPG (SEQ ID NO: 12).
D’autres peptides utilisables dans le cadre de la présente invention peuvent être choisis dans la liste suivante sans qu’elle soit limitative : les dérivés lipophiles de peptides, de préférence les dérivés palmitoyl et myristoyl, et les complexes avec les ions métal mentionnés plus haut (e.g. complexe cuivre du tripeptide HGG). Les dipeptides préférés comprennent par exemple le N-Palmitoyl-ß-Ala-His, N-Acetyl-Tyr-Arg-hexadecylester (Calmosensine™, Idealift™, Sederma), le Pal-KT, le Pal-RT (Sederma). Les tripeptides préférés comprennent notamment le N-Pal-Gly-Lys-His, (Pal-GKH, Sederma), le dérivé cuivre de HGG (Lamin™, Sigma), le Pal-GHK, la lipospondin (N-Elaidoyl-KFK) et ses analogues de substitution conservative, N-Acetyl-RKR-NH2(Peptide CK+), le N-Biot-GHK (Sederma), le Pal-KAvaK, le Pal-KβAlaK, le Pal-KAbuK, le Pal-KAcaK, le Pal-KMO2K (Sederma) et leurs dérivés.
On peut également citer ici les tripeptides anti-âges de formule générale X–Pro*–Pro*–Xaa–Y décrits dans la demande WO2015181688 avec Xaa choisi parmi Leu, Arg, Lys, Ala, Ser, et Asp, en extrémité N terminale, X choisi parmi H, -CO-R1 et -SO2-R1 et en extrémité C terminale Y choisi parmi OH, OR1, NH2, NHR1 ou NR1R2, R1 et R2 étant, indépendamment l’un de l’autre, choisis parmi un groupement alkyle, aryle, aralkyle, alkylaryle, alkoxyle et aryloxyle, pouvant être linéaire, ramifié, cyclique, polycyclique, insaturé, hydroxylé, carbonylé, phosphorylé et/ou soufré, ledit groupement pouvant posséder dans son squelette un hétéroatome notamment O, S et/ou N, et Pro* correspondant à la Proline, un analogue ou un dérivé de celle-ci ; comprenant par exemple le Myr-PPL-OH et le Myr-PPR-OH.
On peut également citer encore ici les dipeptides et tripeptides pro-pigmentants et/ou pro-Mec de formule générale X–(Xaa1)n–Pro*–Xaa2–Y décrits dans la demande WO2014/080376, avec n=0, 1 ou 2, Xaa1 un aminoacide hydrophobe choisi parmi Ala, Val, Met, Leu, Iso, Phe, Pro, et les analogues ou dérivés de ceux-ci ; ou un aminoacide polaire choisi parmi Ser, Thr, Tyr, Asp, Glu et les dérivés et analogues de ceux-ci ; et lorsque n=2 les deux aminoacides Xaa1 pouvant être identiques ou différents ; Xaa2 un aminoacide hydrophobe choisi parmi Ala, Val, Met, Leu, Iso, Phe, et les analogues ou dérivés de ceux-ci ; un aminoacide basique choisi parmi Arg, Lys, His, et les dérivés et analogues de ceux-ci ; en extrémité N terminale du peptide, X est choisi parmi H, -CO-R1 et -SO2-R1 ; en extrémité C terminale du peptide, Y est choisi parmi OH, OR1, NH2, NHR1 ou NR1R2, R1 et R2 étant, indépendamment l’un de l’autre, choisis parmi un groupement alkyle, aryle, aralkyle, alkylaryle, alkoxyle et aryloxyle, pouvant être linéaire, ramifié, cyclique, polycyclique, insaturé, hydroxylé, carbonylé, phosphorylé et/ou soufré, ledit groupement pouvant posséder dans son squelette un hétéroatome notamment O, S et/ou N ; Pro* correspondant à la Proline, un analogue ou un dérivé de celle-ci ; comprenant par exemple les peptides Pal-SPR-OH, Pal-PPR-OH, Pal-QPA-OH, Pal-LPA-OH, Myr-SPA-OH, Pal-PM-OH, Pal-PA-OH et Pal-PP-OH.
Des dérivés tétrapeptides pouvant être utilisés dans le cadre de la présente invention comprennent, sans y être limités, le Pal-GQPR (Sederma) (SEQ ID NO: 3), le Pal-KTFK (SEQ ID NO: 13) ou Ela-KTFK (SEQ ID NO: 14), le Ela-KTAK (SEQ ID NO: 15), le Ela-KAYK (SEQ ID NO: 16) ou le Ela-KFYK (SEQ ID NO: 17). Des dérivés pentapeptides utilisables sont, sans y être limités, le Pal-KTTKS (SEQ ID NO: 2) (MATRIXYL™, Sederma), le N-Pal-Tyr-Gly-Gly-Phe-X (SEQ ID NO: 18) avec X étant Leu ou Pro, le N-Pal-His-Leu-Asp-Ile-Ile-X avec X étant Trp, Phe, Tyr, Tic, 7-hydroxy-Tic ou Tpi (SEQ ID NO: 19), ou leur mélange. Des dérivés hexapeptides utilisables, comprennent sans y être limités : N-Pal-VGVAPG (SEQ ID NO: 1), Pal-GKTTKS (SEQ ID NO: 20) et dérivés. On peut citer aussi le mélange Pal-GHK et Pal-GQPR (SEQ ID NO: 3) (Matrixyl™ 3000, Sederma).
Les compositions préférées disponibles dans le commerce contenant un tripeptide ou dérivé comprennent le Biopeptide CL™, Maxilip™ ou Biobustyl™ de Sederma. Les compositions préférées, disponibles dans le commerce, sources de tétrapeptides comprennent : RIGIN™, Eyeliss™, Matrixyl™ Reloaded et Matrixyl 3000™, qui contiennent entre 50 et 500 ppm de palmitoyl-GQPR (SEQ ID NO: 3) et un excipient, proposées par Sederma.
Les peptides commerciaux suivants peuvent également être mentionnés comme ingrédients actifs additionnels :
  • le Vialox™ (nom INCI = Pentapeptide-3 (peptide synthétique comprenant alanine, arginine, isoleucine, glycine et proline)), le Syn-ake™ (β-Ala-Pro-Dab-NH-Bzl) ou le Syn-Coll™ (Pal-Lys-Val-Lys-OH) vendus par la société Pentapharm,
  • l’Argireline™ (Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2(Nom INCI = Acetyl hexapeptide-3) (SEQ ID NO: 21), le Leuphasyl™ (Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu) (SEQ ID NO: 22), l’Aldenine™ (Gly-His-Lys), le TrylagenTM(Nom INCI = Pseudoalteromonas Ferment Extract, Hydro lyzed Wheat Protein, Hydrolyzed Soy Protein, Tripeptide-10 Citrulline (produit de la réaction de Citrulline et du Tripeptide-10 (peptide synthétique constitué d’acide aspartique, d’isoleucine et de lysine)), Tripeptide-1), l’Eyeseryl™ (Ac-β-Ala-His-Ser-His)(SEQ ID NO: 23), le Serilesine™ (Ser-Ile-Lys-Val-Ala-Val) (SEQ ID NO: 24) ou le Decorinyl™ (Nom INCI : Tripeptide-10 Citrulline = produit de la réaction de Citrulline et du Tripeptide-10 (peptide synthétique constitué d’acide aspartique, d’isoleucine et de lysine) vendus par la société Lipotec,
  • le Collaxyl™ (Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Gln (SEQ ID NO: 25)) ou la Quintescine™ (Cys-Gly) vendus par la société Vincience,
  • le Cytokinol™LS (hydrolysat de caséine) vendu par les Laboratoires Serobiologiques/Cognis,
  • le Kollaren™ (Gly-His-Lys), l’IP2000™ (Pal-Val-Tyr-Val) ou le Meliprene™ (Nom INCI = Monofluoroheptapeptide-1 : produit de la réaction d’acide acétique et d’un peptide synthétique contenant arginine, glycine, acide glutamique, histidine, norleucine, p-fluorophenylalanine et tryptophan) vendus par l’Institut Européen de Biologie Cellulaire,
  • le Neutrazen™ (Pal-His-D-Phe-Arg-NH2) vendu par la société Innovations, ou
  • le BONT-L-Peptide™ (Nom INCI = Palmitoyl Hexapeptide-19 : produit de la réaction d’acide palmitique et d’Hexapeptide-19 (peptide synthétique constitué d’asparagine, d’acide aspartique, de lysine et de méthionine), le Timp-Peptide™ (Nom INCI = Acetyl Hexapeptide-20 : produit obtenu par acétylation d’Hexapeptide-20 (peptide synthétique constitué d’alanine, glycine, lysine, valine et proline) ou l’ECM Moduline™ (Nom INCI = Palmitoyl Tripeptide-28 : produit de la réaction de l’acide palmitique et de Tripeptide-28 (peptide synthétique constitué d’arginine, lysine et de phénylalanine) vendus par la société lnfinitec Activos.
Il est également envisageable de combiner les cellules végétales selon l’invention avec un ou plusieurs peptides cycliques notamment ceux extraits de l’huile de graines de lin décrits dans la demande de brevet de la Demanderesse FR1850845.
Selon l’invention, par « traitement topique » ou « utilisation topique » on entend une application qui est destinée à agir à l’endroit où elle est appliquée : peau, muqueuse, phanères.
Les cellules végétales deBuddleja davidiiFranch. selon l’invention ou la composition selon l'invention les contenant peuvent être appliquées localement sur les zones ciblées.
La quantité « efficace » dépend de divers facteurs, comme l’âge, l’état cutané de l’utilisateur, l’intensité du désordre cutané et du mode d’administration. Une quantité efficace signifie une quantité non toxique suffisante pour obtenir l’effet désiré, notamment un effet plus ou moins prononcé. Cette quantité efficace selon l’invention est détaillée plus loin dans la description (point B).
Tous les pourcentages et ratios utilisés dans la présente demande sont par poids de la composition totale et toutes les mesures sont faites à 25°C, à moins que cela ne soit précisé autrement.
À titre d’exemple, pour un traitement cosmétique du visage, la Directive Européenne sur les Cosmétiques a fixé une quantité standard d’application d’une crème de 2,72 mg/cm2/jour/personne et pour une lotion pour le corps de 0,5 mg/cm2/jour/personne.
Selon d’autres particularités, le procédé de traitement cosmétique selon l’invention peut être associé avec un ou plusieurs autres procédés de traitement visant la peau, comme par exemple les traitements par luminothérapie, par la chaleur ou par aromathérapie.
Selon l’invention, il est possible de proposer des dispositifs à plusieurs compartiments ou kits destinés à la mise en oeuvre du procédé décrit ci-dessus, et qui pourrait comprendre, à titre d’exemple, et sans que ce soit limitatif, dans un premier compartiment une composition comprenant un ingrédient actif selon l’invention à base de cellules végétales deBuddleja davidiiFranch. selon l’invention et dans un second compartiment un excipient et/ou actif additionnel, les compositions contenues dans lesdits premier et second compartiments étant ici considérées comme composition de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps notamment dans l’un des traitements définis ci-dessus.
La présente invention sera mieux comprise à la lumière de la description détaillée qui va suivre d’exemples de réalisation.
  1. Exemple de préparation in-vitro d’un extrait cellulaire végétal selon l’invention
  1. Création d’une lignée cellulaire
Des feuilles sélectionnées de la planteBuddleja davidiiFranch. sont prélevées, lavées et coupées en petits morceaux de quelques mm, de façon à réaliser de nombreux explants. Après une série de traitements de décontamination, les morceaux sont placés sur un panel de milieux de culture gélosés, afin d’induire la callogenèse (formation d’un cal).
Après une période de temps appropriée, un amas de cellules dédifférenciées ou cal se forme, lequel est transféré sur un plus grand volume de milieu de culture neuf afin de pouvoir se multiplier. Un certain nombre de sous-cultures (transferts sur un milieu frais de culture) sont réalisées pour stabiliser la lignée cellulaire, c’est-à-dire jusqu’à ce que celle-ci présente une vitesse de prolifération satisfaisante et constante, une conservation du phénotype, une teneur constante en composés bioactifs d’intérêt (métabolites primaires et secondaires).
La lignée cellulaire est ensuite soumise à une étape de sélection qui consiste à cultiver les cellules pendant une durée appropriée, à prélever les agrégats de cellules formés et à les inoculer dans un milieu de culture liquide pour une durée permettant d’obtenir la multiplication de l’agrégat cellulaire. La meilleure lignée cellulaire sera celle permettant d’obtenir le plus rapidement possible et de manière reproductible une biomasse satisfaisante ayant une teneur optimale en métabolites choisis, la meilleure activité biologique et un phénotype homogène.
Celle-ci a été choisie également pour sa capacité à produire le maximum de verbascoside.
  1. Procédé industriel d’obtention d’une biomasse de cellules indifférenciées ou dédifférenciées de Buddleja davidii Franch. et traitement de cette biomasse
On part d’une lignée cellulaire préparée comme décrit ci-dessus ou d’une lignée existante.
La lignée deBuddleja davidiiFranch. est, dans un premier temps, multipliée pour obtenir une quantité suffisante de biomasse de cellules dédifférenciées afin d’effectuer l’étape de production à grande échelle.
Les étapes suivantes sont mises en œuvre :
  1. Inoculation de la lignée sélectionnée dans un milieu liquide et culture un temps suffisant pour obtenir une augmentation de la biomasse d’au moins 300% ;
  2. De façon optionnelle, transfert de la suspension obtenue en a) dans un milieu liquide frais et à nouveau culture un temps suffisant pour obtenir une augmentation de la biomasse d’au moins 300% ;
  3. De façon optionnelle, répétition de l’étape b) ;
  4. Transfert des suspensions cellulaires obtenues aux stades a) à c) dans un bioréacteur avec du milieu liquide frais, et conduite de la culture dans des conditions telles et pendant un temps suffisant pour obtenir une biomasse cellulaire contenant les métabolites d’intérêt c’est-à-dire les phénylpropanoïdes glycosides dont le verbascoside en quantités suffisantes, cette étape de production en bioréacteur comprenant une étape d’élicitation réalisée en modifiant les taux de nutriments du milieu de culture.
Le bioréacteur:
Volume : de 5 à 50 fois plus grand que le volume de biomasse utilisée comme inoculum ; surface interne du bioréacteur lisse et uniforme (pas d’arêtes ou d’angles pouvant provoquer la rupture des parois des cellules).
Conditions de culture:
Milieu de culture : milieu comprenant des sels minéraux (solution de macroéléments et de microéléments), des vitamines, des hormones végétales ainsi que du sucrose. De l’agar végétal est ajouté dans les milieux solides pour les étapes initiales.
Température : entre 15°C et 35°C.
Durée : entre 7 et 21 jours sous agitation de la biomasse pour qu’elle soit aérée de façon optimale.
Oxygénation : normalement réalisée en utilisant de l’air stérile ou des mélanges de gaz contenant de 10% à 100% v/v d’oxygène.
Traitement de la biomasse obtenue:
Filtration pour éliminer le milieu de culture et récupérer la biomasse de cellules. Cette biomasse peut être caractérisée par son taux équivalent de cellules lyophilisées.
Caractérisation des composés actifs contenus dans les cellules par détermination analytique de métabolites primaires et secondaires produits par la culture incluant la teneur en protéines, phenylpropanoïdes glycosides dont le verbascoside.
Homogénéisation sous haute pression de la biomasse cellulaire : permet une réduction de la taille des agrégats cellulaires ; certaines cellules peuvent être éclatées et on peut alors être en présence d’un mélange de cellules entières et de cellules lysées, en général environ 50% de cellules entières.
Caractérisation des composés actifs contenus dans les cellules par détermination analytique de métabolites primaires et secondaires produits par la culture incluant la teneur en protéines, phenylpropanoïdes glycosides dont le verbascoside.
Optionnellement :
  1. Séchage des cellules notamment par lyophilisation ou atomisation pour permettre une plus grande stabilité des composés d’intérêt, améliorer le stockage à long terme sans avoir à ajouter des conservateurs.
  2. Extraction du contenu des cellules par broyage/lyse/éclatement des cellules et séparation des phases liquide et solide (par centrifugation ou filtration ou autre), afin d’obtenir un extrait cellulaire particulier.
  3. Purification de l’extrait cellulaire pour augmenter la teneur en verbascoside.
  1. Préparation d’un ingrédient actif selon l’invention pour une utilisation selon l’invention
Le matériel végétal est mélangé à un milieu physiologiquement acceptable formant l’excipient.
Dans le cas d’un matériel végétal obtenu par culture cellulairein vitrotel que décrit ci-dessus au point A), à titre d’exemple préférentiel, ce milieu physiologiquement acceptable est selon l’invention une matrice hydrophile dans laquelle les cellules végétales entières ou éclatées sont mises en suspension. Dans le cas d’une composition cosmétique, la matrice hydrophile est par exemple constituée de glycérol et/ou de butylène glycol.
Un ingrédient actif à usage cosmétique peut ainsi être formé pour la mise en œuvre de l’invention, comprenant par exemple 20% en poids d’extrait cellulaire de biomasse fraîche de cellules dédifférenciées entières (correspondant à environ 1-2% de cellules sèches), dans un mélange excipient physiologiquement acceptable constitué de glycérol (environ 80%), ledit ingrédient contenant entre 0,2% et 0,5% de phénylpropanoïdes avec majoritairement du verbascoside. Cet ingrédient est ensuite utilisable pour préparer des formulations cosmétiques comme celle par exemple exposée ci-dessous au point Galénique F). Une quantité efficace représente entre 0,3% et 15%, de préférence entre 1% et 5%, de préférence encore entre 2% et 4% et généralement 3% en poids de ladite formulation.
Il va de soi que selon l’invention on pourrait utiliser un matériel végétal comprenant un taux différent de phenylpropanoïdes (et en particulier de verbascoside), notamment plus élevé, soit obtenu directement grâce au procédéin vitro(par exemple grâce à une autre élicitation permettant d’augmenter ce taux), soit obtenu par une phase de purification/concentration après extraction du contenu cellulaire.
  1. GALÉNIQUE
La formule 1 de crème suivante est donnée à titre d’exemple dans le tableau 1 suivant :
Matières premières Nom INCI (%)
Phase A
H2O
Carbopol Ultrez 10
Water
Carbomer
qsp100
0,30
Phase B
Brij S2-SS-(RB)
Brij S10-SO-(RB)
Crodafos CES-PA-(RB)

Crodacol CS90-PA-(RB)
Crodamol AB-LQ-(RB)
Crodamol OSU-LQ-(JP)
Steareth-2
Steareth-10
Cetearyl Alcohol (and) Dicetyl Phosphate (and) Ceteth-10 Phosphate
Cetearyl Alcohol
C12-15 Alkyl Benzoate
Diethylhexyl Succinate
0,40
1,20
4,00

1,50
1,50
7,00
Phase C
Glycérine
Octanediol
Glycerin
Caprylyl Glycol
2,50
0,50
Phase D
Phénoxyéthanol
Phenoxyethanol
qs
Phase E
Sorbate de potassium
Potassium Sorbate
qs
Phase F
H2O
NaOH 30 %
Water
Sodium Hydroxide
4,00
0,40
Phase G
Ingrédient selon l’invention		 2,00
  1. TESTS D’EFFICACITÉ in-vitro
  1. Tests montrant un effet éclaircissant
Diminution de la production de mélanine, de l’activité tyrosinase résiduelle et de l’expression de la DCT (ARNm).
Protocole :
Trois essais ont été menés pour évaluer l’effet de l’ingrédient selon l’invention sur des mélanocytes humains normaux (MHN) modérément pigmentés (isolés d’un donneur modérément pigmenté). Les MHN à confluence, ont été mis en contact avec l’ingrédient selon l’invention durant 6 ou 11 jours. L’ingrédient selon l’invention a été testé à 0,5% 1% et 2%. A l’issue du contact, les mélanines sont extraites des cellules après broyage et dosées par spectrophotométrie. Une estimation du nombre de cellules est également réalisée en fin de culture à l’aide d’un dosage protéique par la méthode du BCA. Les concentrations en mélanine sont normalisées par la teneur en protéines de l’échantillon.
L’activité tyrosinase résiduelle est mesurée dans les broyats cellulaires ; les résultats étant normalisés par la quantité de protéines.
Pour la dopachrome tautomérase (DCT), il a été choisi de regarder l’expression de son gène dans des MHN au contact de l’ingrédient selon l’invention en suivant la production de son ARN messager (ARNm).
Résultats
Effet de l’ingrédient selon l’invention sur la production de mélanines sur des MHN (n=4) ; 11 jours de contact :
Concentrations Mélanines
% de variation / contrôle
Contrôle Référence
0,5% de l’ingrédient selon l’invention -31% ;p<0,01
1% de l’ingrédient selon l’invention -36% ;p<0,01
2% de l’ingrédient selon l’invention -42%;p<0,01
Témoin positif : arbutine à 300ppm : -49% (p<0,01).
Effet de l’ingrédient selon l’invention sur l’activité tyrosynase résiduelle des MHN (n=4) ; 6 jours de contact :
Concentrations Activité Tyrosinase
% de variation / contrôle
Contrôle Référence
0,5% de l’ingrédient selon l’invention -19% ;p<0,01
1% de l’ingrédient selon l’invention -30% ;p<0,01
2% de l’ingrédient selon l’invention -47%;p<0,01
Témoin positif : arbutine à 300ppm : -75% (p<0,01).
Effet de l’ingrédient selon l’invention sur l’expression de l’ARNm de la DCT dans des MHN (n=3) :
Concentrations Dopachrome tautomérase
% de variation / contrôle
Contrôle Référence
1% de l’ingrédient selon l’invention -44% ;p<0,01
2% de l’ingrédient selon l’invention -53%;p<0,05
Les résultats montrent que l’ingrédient selon l’invention diminue la production de mélanine de façon dose-dépendante et significative (-31% à -42%), ceci sans effet cytotoxique sur ces cellules malgré un temps de contact long. Par ailleurs, l’activité tyrosinase des MHN après contact avec l’ingrédient selon l’invention est réduite aussi de façon dose-dépendante (-19% à -47%). Enfin, l’expression de l’ARNm de la DTC est aussi réduite de façon dose-dépendante (-44% et -53%).
On note donc une action directe de l’ingrédient selon l’invention sur l’activité de la tyrosinase et sur la production de l’enzyme DPC ce qui permet de contrôler la pigmentation du mélanocyte et de réduire la production globale de pigments de ces cellules fortement productrices de mélanines, ceci sans toxicité pour ces cellules réputées fragiles.
Réduction de la phagocytose des mélanosomes.
Principe
L’augmentation de la pigmentation cutanée est liée notamment à un plus fort transfert des mélanosomes chargés en mélanine du mélanocyte vers les kératinocytes voisins. La modération de cette phagocytose est connue pour favoriser l’éclaircissement de la peau.
Protocole
Des kératinocytes humains normaux (KHN) à confluence ont été mis au contact de l’ingrédient selon l’invention et ont alors reçu une solution de mélanosomes artificiels sous forme de billes pour mesurer leur capacité à inclure ces structures fluorescentes. Après rinçage pour retirer les billes non phagocytées, des photos ont été prises par microscopie à fluorescence et ont été analysées par analyse d’images. Le nombre de cellules a été estimé à l’aide de la méthode Hoescht et utilisé pour normaliser les résultats.
Résultats
Effet de l’ingrédient selon l’invention sur la phagocytose par les KHN de mimes de mélanosomes (n=3 ; 27 photos/cas) :
Concentrations Phagocytose
% de variation / contrôle
Contrôle Référence
1% de l’ingrédient selon l’invention -32% ;p<0,01
2% de l’ingrédient selon l’invention -44% ;p<0,01
Les résultats montrent que la phagocytose par les KHN des modèles de mélanosomes peut être efficacement modérée de 32% et 44% grâce à l’ingrédient selon l’invention (les deuxp<0,01).
Ainsi, outre son action sur l’activité globale de la tyrosinase, par l’expression de la DPC et sur la production de mélanine, l’ingrédient selon l’invention réduit nettement la phagocytose des mélanosomes par les KHN, cellules associées aux mélanocytes. Ces éléments indiquent que l’ingrédient selon l’invention favorise l’éclaircissement de la peau.
  1. Test montrant un effet anti-glycation
Principe
Les AGEs diminuent la qualité de l’acide hyaluronique et ont récemment été impliqués dans l’induction de la mélanogénèse.
Protocole
L’effet anti-glycation de l’ingrédient selon l’invention a été évalué dans un test utilisant une protéine modèle (BSA) et un sucre réducteur (le fructose). Ce mélange a été incubé de façon à créer des AGEs qui sont, observés et quantifiés en fluorescence. La production d’AGEs en présence de l’ingrédient selon l’invention a été comparée à celle obtenue avec le contrôle.
Résultats
Effet de l’ingrédient selon l’invention sur la production d’AGEs (n=4) :
Concentrations AGEs
% de variation / contrôle
Contrôle Référence
1,3% de l’ingrédient selon l’invention -92% ;p<0,01
2% de l’ingrédient selon l’invention -94% ;p<0,01
Ces résultats montrent le fort potentiel anti-glycant de l’ingrédient selon l’invention qui est capable de diminuer la formation des AGEs, à la plus faible concentration testée, et potentiellement de contrôler leurs effets sur la peau terne, la dénaturation des protéines et de l’acide hyaluronique.
  1. Test montrant un effet sur le renforcement de la barrière cutanée
Protocole
Des KH ou KHN ont été cultivés à sub-confluence puis ont été mis au contact de l’ingrédient selon l’invention. A l’issue de ce contact, les cellules ont été rincées, fixées et marquées à l’aide d’anticorps dirigés contre l’involucrine, un composant essentiel de la fonction barrière de l’épiderme et contre la cytokératine-1, traceur de la différentiation de l’épiderme. Une estimation de la quantité de cellules par méthode Hoechst a permis d’homogénéiser les résultats.
Résultats
Effet de l’ingrédient selon l’invention sur la production d’involucrine et de cytokératine-1 par des KHN (n=3 ; 27 photos/cas) :
Concentrations Involucrine
% de variation / contrôle 		Cytokératine-1
% de variation / contrôle
Contrôle Référence Référence
2% de l’ingrédient selon l’invention +60% ;p<0,01 +36% ;p<0,01
Ces résultats montrent que l’ingrédient selon l’invention stimule la production d’involucrine et de cytokératine-1, des éléments essentiels à la fonction barrière de l’épiderme.
  1. Test montrant un effet sur la stimulation de l’acide hyaluronique
Protocole
Des KH ont été cultivés à sub-confluence puis ont été mis au contact de l’ingrédient selon l’invention. A l’issue de ce contact, les surnageants de culture ont été dosés pour leur contenu en acide hyaluronique à l’aide d’un dosage type ELISA. Une estimation de la quantité de cellules par méthode Hoechst a permis d’homogénéiser les résultats.
Résultats
Modulation de la production d’acide hyaluronique par des kératinocytes
au contact de l’ingrédient selon l’invention :
Concentrations Acide hyaluronique
% de variation / contrôle
Contrôle Référence
1% de l’ingrédient selon l’invention +33% ;p<0,01
1,5% de l’ingrédient selon l’invention +82% ;p<0,01
2% de l’ingrédient selon l’invention +240%;p<0,01
Témoin positif : acide rétinoïque 1µM : +184% (p<0,01).
Ces résultats montrent que l’ingrédient selon l’invention stimule fortement la production d’acide hyaluronique chez le kératinocyte. Cette augmentation atteint +240% (p<0,01). Ceci participe donc à l’homéostasie de l’épiderme et à améliorer ses qualités.
  1. Test montrant un effet sur le renforcement de la jonction épiderme-derme
Protocole
Des KH ont été cultivés à sub-confluence puis ont été mis au contact de l’ingrédient selon l’invention. A l’issue de ce contact, les surnageants de culture et les tapis cellulaires ont été dosés respectivement pour leur contenu en laminines et collagène-VII, respectivement à l’aide de kits type ELISA. Une estimation de la quantité de cellules par méthode Hoechst a permis de normaliser les résultats.
Des explants de peaux humaines (femme, caucasienne, 29 ans, phototype 3) ont reçu des applications quotidiennes d’une crème contenant 2% de l’ingrédient selon l’invention ou une crème placebo (1 fois/jour/7 jours ; crème 1 dans la partie galénique au point B) ci-dessus). A l’issue de ce contact, les peaux ont été rincées, congelées avant d’être sectionnées au microtome et marquées pour le collagène-VII ou la laminine-5. Cinq explants ont été réalisés pour chaque cas. Des photos des sections ont été réalisées au microscope à fluorescence pour quantifier l’intensité du marquage.
Effet de l’ingrédient selon l’invention sur la production de collagène-VII (tapis) et de laminines (surnageants) par des KHN (n=4) :
Concentrations Collagène VII
% de variation / contrôle 		Laminines
% de variation / contrôle
Contrôle Référence Référence
0,5% de l’ingrédient selon l’invention +66% ;p<0,01 +9% ;dns
1% de l’ingrédient selon l’invention +128% ;p<0,01 +47% ;p<0,01
2% de l’ingrédient selon l’invention +175% ;p<0,01 +178% ;p<0,01
dns : différence non significative
Effet de l’ingrédient selon l’invention sur la production de collagène-VII et de laminine 5 par des explants cutanés (n = 5 explants ; 12 photos/coupe ; 60 photos/cas) :
Concentrations Collagène VII
% de variation / contrôle 		Laminine-5
% de variation / contrôle
Contrôle Référence Référence
2% de l’ingrédient selon l’invention +11% ;p<0,01 +21% ;p<0,01
Ces résultats montrent que l’ingrédient selon l’invention stimule la production de collagène-VII et de laminines, des éléments essentiels pour la jonction dermo-épidermique, ces résultats étant observés sur un modèle de cellules en culture et sur un modèle plus complexe et réaliste d’explants.
  1. TESTS D’EFFICACITÉ in-vitro COMPARATIFS AVEC LE VERBASCOSIDE SEUL – Effet sur la pigmentation
Inhibition de la synthèse de mélanine sur mélanocytes humains
Protocole
Des mélanocytes humains normaux sont ensemencés et cultivés dans leur milieu d’entretien, puis mis en contact avec les produits à tester dans le milieu test durant 11 jours. Le produit selon l’invention a été testé à 1% et 2% ; le verbascoside est testé en parallèle à des doses équivalentes à celles présentes dans le produit selon l’invention (soit 30 et 60 ppm respectivement). À l’issue du contact, les mélanines sont extraites des cellules et dosées par spectrophotométrie (490 nm). Une estimation du nombre de cellules est réalisée en fin de culture à l’aide d’un dosage protéique par la méthode du BCA. Les concentrations en mélanine sont normalisées par la teneur en protéines de l’échantillon.
Résultats
Inhibition de la mélanogénèse par rapport au contrôle, après 11 jours de contact avec les produits à tester :
Concentration Produit selon l’invention Verbascoside
1% du produit selon
l’invention à 30 ppm de verbascoside 		-15%
p<0,01 		-4%
dns
2% du produit selon
l’invention à 60 ppm de verbascoside 		-36%
p<0,01 		-20%
p<0,01
Inhibition de l’activité tyrosinase sur mélanocytes humains
Protocole
Des mélanocytes humains normaux sont ensemencés et cultivés dans leur milieu d’entretien, puis mis en contact avec les produits à tester dans le milieu test durant 11 jours. Le produit selon l’invention a été testé à 1% et 2% ; le verbascoside est testé en parallèle à des doses équivalentes à celles présentes dans le produit selon l’invention (soit 30 ppm et 60 ppm respectivement). À l’issue du contact, l’activité tyrosinase résiduelle est mesurée dans les broyats cellulaires. Une estimation du nombre de cellules est réalisée en fin de culture à l’aide d’un dosage protéique par la méthode du BCA. L’activité tyrosinase est normalisée par la teneur en protéine de l’échantillon.
Résultats
Inhibition de l’activité tyrosinase par rapport au contrôle, après 11 jours de contact avec les produits à tester :
Concentration Produit selon l’invention Verbascoside
1% du produit selon
l’invention à 30 ppm de verbascoside 		-49%
p<0,01 		-30%
p<0,01
2% du produit selon
l’invention à 60 ppm de verbascoside 		-73%
p<0,01 		-56%
p<0,01
On observe de manière surprenante que l’ingrédient selon l’invention donne de meilleurs résultats à la fois sur l’inhibition de la mélanogénèse et celle de la tyrosinase que le verbascoside pur à des doses équivalentes à celles présentes dans le produit selon l’invention.
L’activité éclaircissante du produit selon l’invention ne peut donc pas s’expliquer par la seule présence du verbascoside.
  1. TESTS D’EFFICACITÉ in-vivo
Produit testé : la crème 1) du point C) Galénique ci-dessus.
Principes :l’évaluation de l’efficacité de la crème a été menée sur un panel de volontaires féminines vivant en Tunisie et de type moyen-oriental. L’étude a été menée contre placebo et visait à mesurer l’amélioration de l’éclat de la peau en utilisant les deux techniques complémentaires suivantes :
  • une évaluation de la texture de la peau, réalisée avec un système VISIA® ; et
  • une évaluation de la couleur de la peau, réalisée sur différents sites du visage par analyse d’image sur photographies standardisées.
Protocole :
Critères d’inclusion particuliers
L’étude a été menée sur un panel de 26 femmes (moyenne d’âge 36 ans [23–58]), de phototype IV et possédant une peau imparfaite, à savoir présentant un teint terne, des cernes, un grain de peau irrégulier et des zones d’hyperpigmentation. Les volontaires devaient éviter tout ensoleillement excessif (naturel ou artificiel) 1 mois avant le début du test.
Type d’étude, durée, applications
Pendant 1 mois, les volontaires ont appliqué sur le visage matin et soir une crème selon l’invention et une crème placebo en contra-latéral. Une crème contenant un filtre solaire (SPF50) a également été fournie aux volontaires pour un usage quotidien afin de limiter l’effet perturbateur du soleil, les volontaires devant par ailleurs éviter les expositions solaires sans protection préalable.
Statistiques
Les études statistiques ont été effectuées à l’aide d’un testtde Student ou si besoin avec un test non paramétrique de Wilcoxon. Des tests unilatéraux ont été effectués sur séries appariées ce qui est possible grâce aux applications en contra-latéral. Dans le cas des autoévaluations, des tests de Khi2 ont été utilisés.
Méthode et résultats
Evaluation de la texture de la peau
Principe :
Un appareil VISIA® CAS (Canfield, USA) a été utilisé, permettant d’obtenir des photos standardisées sous différentes illuminations (lumière blanche, UV, polarisée) avec un logiciel intégré pouvant fournir différents paramètres. Les bosses (en une couleur) et les creux (en une autre couleur) sont assimilés à une rugosité de la peau et la mesure de l’hétérogénéité de couleur entre ces deux zones a permis de mesurer la texture de la peau.
Résultats :
Variation de la texture sur le visage après application de la crème selon l’invention (n=26 volontaires) ; valeurs en unités arbitraires :
Quantité d’imperfections Crème selon l’invention Crème placebo
T0 T1mois T0 T1mois
% variation vs. T0 -7,4% -1,6%
Significativité p=0,075 p=0,355
% d’amélioration de la crème selon l’invention vs. la crème placebo +6% (p<0,05)
Après 1 mois d’application de la crème selon l’invention, le visage présente moins d’imperfections visibles et s’est donc lissé. Comparativement à l’application de la crème placebo, l’amélioration atteint +6% et est significative avecp<0,05.
Evaluation de la couleur de la peau
Principe :
Le même dispositif que précédemment (VISIA®) a été utilisé pour acquérir des photographies du visage en mode polarisé croisé afin de retirer la brillance naturelle de la peau. La technologie développée par Newtone (France) pour extraire les paramètres et analyser les paramètres de couleur avant et après application a été appliquée. Les mesures ont été prises sur la joue.
Les paramètres étudiés sont ceux du système CIE L*a*b* :
  • L* : une augmentation de L* démontre une augmentation de la luminosité de la peau,
  • a* : une diminution de a* démontre une baisse de la rougeur,
  • ITA («Individual Typologic Angle ») : une augmentation de ITA démontre une dépigmentation de la peau, et
  • IWA («Individual Whithening Angle ») : une augmentation de IWA démontre un effet éclaircissant.
L’observation du panel montre que l’amplitude possible de ces paramètres est d’environ 20 unités, L* étant entre 45 et 65, a* étant entre 15 et 35, ITA étant entre 0 et 30 et IWA étant entre 45 et 65.
Résultats :
Variation des paramètres du teint (couleur) sur le visage après application dela crème selon l’inventionou de la crème placebo ; (n=26 volontaires) ; valeurs en unités arbitraires :
Luminosité ; L* Dépigmentation ; ITA Effet éclaircissant ; IWA Rougeur ;
a*
Tempes Tempes Tempes Joues
% d’amélioration
Crème selon l’invention vs. crème placebo 		+5% +8,5% +3% +2%
Significativité p<0,01 p<0,01 p<0,01 p<0,075
Max 21% 30% 10% 16%
Répondeurs 73% 77% 73% 69%
L’analyse de ces données et des photos concernant les paramètres relatifs au teint (couleurs) montrent une amélioration du teint en faveur des applications réalisées avec la crème selon l’invention par rapport à la crème placebo. L’effet est net puisqu’on observe une meilleure luminosité (+5%,p<0,01), une meilleure dépigmentation (+8,5%,p<0,01) et un meilleur effet éclaircissant (+3%,p<0,01). Concernant la rougeur, mesurée sur les joues, l’amélioration est constatée avec une diminution de 2% significative au risquep<0,075.
L’utilisation selon l’invention est caractérisée en ce que le traitement est adapté aux peaux de carnation olive.
L’utilisation selon l’invention est caractérisée en ce que l’ingrédient actif est adapté au traitement des peaux de carnation olive.

Claims (12)

  1. Utilisation de cellules végétales indifférenciées ou dédifférenciées, entières et/ou lysées, deBuddleja davidiiFranch. obtenues par un procédé de culture cellulairein vitro, et/ou d’un extrait intracellulaire desdites cellules débarrassé des débris cellulaires, pour un traitement cosmétique non-thérapeutique topique pour homogénéiser le teint de la peau.
  2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que les cellules sont utilisées sous forme d’un mélange de cellules entières et de cellules lysées mises en suspension dans un milieu physiologiquement acceptable.
  3. Utilisation selon la revendication 2, caractérisée en ce que le milieu physiologiquement acceptable est une matrice hydrophile.
  4. Utilisation selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le traitement est adapté à prévenir et/ou, traiter les hétérogénéités pigmentaires et/ou de texture de la peau.
  5. Utilisation selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que le traitement est adapté à éclaircir la peau, à contrer la glycation des protéines, à lisser la peau, à stimuler la production d’acide hyaluronique, à renforcer la barrière cutanée et/ou à renforcer la jonction épiderme-derme.
  6. Utilisation selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le traitement est adapté aux peaux de phototype III à V.
  7. Utilisation selon la revendication 6, caractérisée en ce que le traitement est adapté aux peaux de carnation olive.
  8. Utilisation de cellules végétales indifférenciées ou dédifférenciées, entières et/ou lysées, deBuddleja davidiiFranch. obtenues par un procédé de culture cellulairein vitro, et/ou d’un extrait intracellulaire desdites cellules débarrassé des débris cellulaires, pour la fabrication d’un ingrédient actif cosmétique pour homogénéiser le teint de la peau et d’une composition cosmétique topique comprenant ledit ingrédient actif.
  9. Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que ledit ingrédient actif est adapté à prévenir et/ou traiter les hétérogénéités pigmentaires et/ou de texture de la peau.
  10. Utilisation selon la revendication 8 ou 9, caractérisée en ce que ledit ingrédient actif est adapté à éclaircir la peau, à contrer la glycation des protéines, à lisser la peau, à stimuler la production d’acide hyaluronique, à renforcer la barrière cutanée et/ou à renforcer la jonction épiderme-derme.
  11. Utilisation selon l’une quelconque des revendications 8 à 10, caractérisée en ce que ledit ingrédient actif est adapté au traitement des peaux de phototype III à V.
  12. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que ledit ingrédient actif est adapté au traitement des peaux de carnation olive.
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