ES2923002T3 - Acido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxailamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico como inhibidor de la neprilisina - Google Patents

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Erik Fenster
Melissa Fleury
Anne-Marie Beausoleil
Venkat R Thalladi
Jerry Nzerem
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Abstract

En un aspecto, la invención se refiere a un compuesto de estructura: (1), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y una forma cristalina de este compuesto, que tiene actividad de inhibición de neprilisina. En otro aspecto, la invención se relaciona con composiciones farmacéuticas que comprenden este compuesto; métodos de uso de este compuesto; y procesos para preparar este compuesto. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxailamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico como inhibidor de la neprilisina
Antecedentes de la invención
Campo de la invención
La presente invención se refiere a un nuevo compuesto y a una forma cristalina del mismo que se metabolizan in vivo para formar un compuesto que presenta utilidad como inhibidor de la neprilisina. La invención se refiere además a composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos y procedimientos para la preparación de dicho compuesto, y encuentra utilidad en métodos de utilización de compuesto para tratar enfermedades tales como la hipertensión, la insuficiencia cardíaca, la hipertensión pulmonar y la enfermedad renal.
Estado de la técnica
La neprilisina (endopeptidasa neutra, EC 3.4.24.11) (NEP) es una metalopeptidasa Zn2+ unida a la membrana endotelial en muchos órganos y tejidos, incluyendo el cerebro, los riñones, los pulmones, el tracto gastrointestinal, el corazón y la vasculatura periférica. La NEP degrada e inactiva varios péptidos endógenos, tales como encefalinas, bradiquinina circulante, péptidos de angiotensina y péptidos natriuréticos, en el que estos últimos presentan varios efectos, entre ellos, por ejemplo, la vasodilatación y la natriuresis/diuresis, así como la inhibición de la hipertrofia cardíaca y la fibrosis ventricular. De esta manera, la NEP desempeña un papel importante en la homeostasis de la presión sanguínea y la salud cardiovascular.
Los inhibidores de la NEP, tales como tiorfán, candoxatrilo y candoxatrilat, han sido estudiados como potenciales terapéuticos. También se conocen compuestos que inhiben tanto la NEP como el enzima conversor de la angiotensina I (ACE), y entre ellos se incluyen omapatrilat, gempatrilat y sampatrilat. Denominados inhibidores de vasopeptidasa, esta última clase de compuestos se describe en Robl et al. (1999) Exp. Opin. Ther. Patents 9(12): 1665-1677, 1977. Se han descrito numerosos inhibidores de NEP en la solicitud publicada de patente US n° 2013/109639, de Hughes et al. Uno de tales compuestos es el ácido (2S,4RJ-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metil-4-(oxalilamino)pentanoico, que presenta la estructura:
Figure imgf000002_0001
Dicho compuesto muestra una potente actividad de inhibición de NEP (pK¡ >9). Sin embargo, también se ha encontrado que dicho compuesto presenta una biodisponibilidad oral muy baja en especies preclínicas, haciendo que resulte inadecuado o no deseable para la administración oral.
Un método para incrementar la biodisponibilidad oral de un compuesto es formar un profármaco del compuesto. Al administrarlo por vía oral, el profármaco debería tener una absorción oral aceptable y escindirse in vivo para generar el compuesto activo. Para los inhibidores de NEP, puede resultar preferible que cualquier de dichos profármacos se escinda con rapidez (p. ej., dentro de la primera hora después de la administración oral) y de manera completa, de manera que se encuentre disponible un bolo inicial de compuesto activo para inducir una respuesta de guanosina monofosfato cíclico (GMPc). También puede resultar deseable que el profármaco mismo presente actividad de inhibición de NEP, de manera que el profármaco pueda contribuir a la actividad farmacológica antes de escindirse. Además, cualquiera de dichos profármacos debería ser químicamente estable durante el almacenamiento durante un periodo de tiempo prolongado.
De esta manera, existe una necesidad de un profármaco de ácido (2S,4RJ-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metil-4-(oxalilamino)pentanoico que tenga una absorción oral aceptable y que se escinda con rapidez in vivo generando el compuesto activo. El profármaco puede tener, además, cierto nivel de actividad inhibidora de NEP. La presente invención se refiere a dicha necesidad.
Además, para utilizar eficazmente un compuesto inhibidor de NEP como agente terapéutico, resultaría deseable disponer de una forma de estado sólido que pueda fabricarse fácilmente y que presente una estabilidad química y física aceptable. Por ejemplo, resultaría altamente deseable disponer de una forma física que sea térmicamente estable a una temperatura razonablemente elevada, facilitando de esta manera el procesamiento y almacenamiento del material. Los sólidos cristalinos son generalmente preferentes sobre las formas amorfas, para potenciar la pureza y estabilidad del producto fabricado. Sin embargo, la formación de formas cristalinas de compuestos orgánicos es altamente impredecible. No existen métodos fiables para predecir qué forma, si alguna, de un compuesto orgánico será cristalina. Además, no existen métodos para predecir qué forma cristalina, si alguna, tendrá las propiedades físicas deseadas para la utilización como agentes farmacéuticos. De acuerdo con lo anterior, existe una necesidad de una forma cristalina estable que presente un punto de fusión razonablemente elevado.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona un nuevo compuesto (1) que se convierte in vivo para formar un compuesto que posee actividad de inhibición del enzima neprilisina (NEP). De acuerdo con lo anterior, se espera que dicho compuesto resulte útil y ventajoso como agente terapéutico para tratar condiciones tales como la hipertensión y la insuficiencia cardíaca.
Un aspecto de la invención se refiere al ácido (2S,4RJ-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico (1):
Figure imgf000003_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Otro aspecto de la invención se refiere a una forma cristalina del compuesto 1. En una realización, la forma cristalina (1') es una sal semicálcica del compuesto 1.
Otro aspecto de la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más portadores farmacéuticamente aceptables y compuesto 1 o una forma cristalina del mismo. Dichas composiciones pueden contener opcionalmente otros agentes terapéuticos, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, un antagonista de receptor AT1, un inhibidor del enzima conversor de la angiotensina, un inhibidor de fosfodiesterasa (PDE), un inhibidor de renina, un diurético o combinaciones de los mismos.
El compuesto 1 posee actividad de inhibición del enzima NEP y, por lo tanto, se espera que resulte útil como agente terapéutico para el tratamiento de pacientes que sufren de una enfermedad o trastorno que se trata mediante la inhibición del enzima NEP o mediante el incremento de los niveles de sus sustratos peptídicos. De esta manera, la invención encuentra utilidad en un método de tratamiento de pacientes que sufren de una enfermedad o trastorno que se trata mediante la inhibición del enzima NEP, que comprende administrar en un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de compuesto 1. La invención también encuentra utilidad en un método de tratamiento de la hipertensión, la insuficiencia cardíaca, o la enfermedad renal, que comprende administrar en un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de compuesto 1. La invención encuentra utilidad además en un método de inhibición de un enzima NEP en un sujeto, que comprende administrar en el sujeto, una cantidad inhibidora del enzima NEP de compuesto 1.
Debido a que el compuesto 1 posee actividad de inhibición de NEP, también resulta útil como herramienta de investigación, por ejemplo en un método que comprende llevar a cabo un ensayo biológico utilizando el compuesto 1. El compuesto 1 también puede utilizarse para evaluar nuevos compuestos químicos, por ejemplo en un método de evaluación de un compuesto de ensayo en un ensayo biológico, que comprende: (a) llevar a cabo un ensayo biológico con un compuesto de ensayo para proporcionar un primer valor de ensayo, (b) llevar a cabo el ensayo biológico con el compuesto de la invención para proporcionar un segundo valor de ensayo, en el que la etapa (a) se lleva a cabo antes, después o concurrentemente con la etapa (b), y (c) comparar el primer valor de ensayo de la etapa (a) con el segundo valor de ensayo de la etapa (b). Entre los ensayos biológicos ejemplares se incluye un ensayo de inhibición del enzima NEP. La invención encuentra utilidad además en un método de estudio de un sistema o muestra biológico que comprende un enzima NEP, en el que el método comprende: (a) poner en contacto el sistema o muestra biológico con el compuesto de la invención, y (b) determinar los efectos causados por el compuesto sobre el sistema o muestra biológico.
Otro aspecto de la invención se refiere a procedimientos útiles para preparar compuesto 1 o una forma cristalina del mismo.
Todavía otro aspecto de la invención se refiere a compuestos de la invención para la utilización en terapia, y la invención encuentra utilidad en la utilización de compuesto 1 o una forma cristalina del mismo para la preparación de un medicamento, especialmente para la preparación de un medicamento útil para el tratamiento de la hipertensión, la insuficiencia cardíaca o la enfermedad renal.
Breve descripción de los dibujos
Se ilustran diversos aspectos de la presente invención en referencia a los dibujos adjuntos.
La FIG. 1 muestra un patrón de difracción de rayos X de los polvos (PXRD) de la forma cristalina de (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato cálcico (1').
La FIG. 2 muestra un termograma de calorimetría diferencial de barrido (DSC) de la forma cristalina de (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato cálcico (1'). La FIG. 3 muestra un gráfico del análisis gravimétrico térmico (TGA) de la forma cristalina de (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato cálcico (1').
La FIG. 4 muestra una isoterma de sorción dinámica de humedad (SDH) de la forma cristalina de (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato cálcico (1').
La FIG. 5 es una imagen de microscopía óptica polarizada (PLM) de la forma cristalina de (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato cálcico (1').
La FIG. 6 muestra un patrón de difracción de rayos X de los polvos (PXRD) de la forma cristalina de (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de arginina (1''). La FIG. 7 muestra un termograma de calorimetría diferencial de barrido (DSC) de la forma cristalina de (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de arginina (1''). La FIG. 8 muestra un gráfico del análisis gravimétrico térmico (TGA) de la forma cristalina de (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de arginina (1'').
La FIG. 9 es una imagen de microscopía óptica polarizada (PLM) de la forma cristalina de (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de arginina (1'').
Descripción detallada de la invención
En un aspecto, la invención se refiere a ácido ^2S,4Rj-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico (1), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
El compuesto 1 de la invención contiene dos centros quirales y, por lo tanto, dicho compuesto puede prepararse y utilizarse en diversas formas estereoisoméricas. Específicamente, los átomos de carbono presentan una configuración (R,R), (S,S), (S,R) o (R,S) particular o están enriquecidos en una forma estereoisomérica que presenta dicha configuración. El compuesto 1, tal como se muestra y se nombra, se encuentra en la configuración (S,R). El experto en la materia entenderá que pueden encontrarse presentes cantidades menores de otros estereoisómeros en las composiciones de la invención a menos que se indique lo contrario, con la condición de que la utilidad de la composición en su globalidad no resulte eliminada por la presencia de dichos otros isómeros. Pueden obtenerse estereoisómeros individuales mediante numerosos métodos que son bien conocidos de la técnica, incluyendo la cromatografía quiral utilizando una fase o soporte estacionario quiral adecuado o mediante la conversión química de los mismos en diastereoisómeros, separando los diastereoisómeros por medios convencionales, tales como la cromatografía o la recristalización, regenerando seguidamente el estereoisómero original.
El compuesto 1 es un profármaco de éster de etilo, en el que la fracción etilo sirve para mejorar la lipofilicidad del compuesto y, por lo tanto, mejorar la permeabilidad pasiva de la membrana al compuesto activo mediante enmascaramiento del ácido carboxílico. Una vez en el cuerpo, se cree que dicho enlace éster es hidrolizado por esterasas que se encuentran en la sangre, hígado y otros órganos y tejidos.
Se ha encontrado que el compuesto 1 de la invención inhibe el enzima neprilisina (NEP). Además, el compuesto posee mayor potencia para la inhibición de NEP una vez se ha metabolizado in vivo. De esta manera, al comentar la actividad del compuesto de la invención, se entiende que el compuesto puede mostrar un determinado nivel de actividad en un ensayo y un nivel mejorado de actividad una vez metabolizado en su forma activa. Una medida de la capacidad de un compuesto de inhibir la actividad de NEP es la constante de inhibición (pKi). El valor de pKi es el logaritmo negativo de base 10 de la constante de disociación (Ki), que típicamente se expresa en unidades molares. El compuesto 1, una vez metabolizado, forma ácido ^2S,4Rj-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metil-4-(oxalilamino)pentanoico (el "agente activo o metabolito activo"), que se informa en la solicitud publicada de patente US n° 2013/0109639 que presenta un pKi en NEP >9. Otras propiedades y utilidades del compuesto 1 pueden demostrarse utilizando ensayos in vitro e in vivo que son bien conocidos por el experto en la materia, incluyendo, entre otros, los indicados en la solicitud publicada de patente US n° 2013/0109639.
El compuesto 1, así como aquellos compuestos utilizados en su síntesis, también pueden incluir compuestos marcados isotópicamente, es decir, en los que uno o más átomos han sido enriquecidos con átomos que presentan una masa atómica diferente de la masa atómica observada predominantemente en la naturaleza. Entre los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en los compuestos de fórmula I se incluyen, por ejemplo, aunque sin limitación, 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 170 , 35S, 36Cl y 18F. Resulta de particular interés el compuesto 1 enriquecido en tritio o carbono-14, que puede utilizarse en, por ejemplo, estudios de distribución en los tejidos; el compuesto 1 enriquecido en deuterio especialmente en un sitio de metabolismo que resulta en, por ejemplo, un compuesto que presenta mayor estabilidad metabólica, y el compuesto 1 enriquecido en un isótopo emisor de positrones, tal como 11C, 18F, 15O y 13N, que puede utilizarse en, por ejemplo, estudios de tomografía de emisión de positrones (PET, por sus siglas en inglés).
Las estructuras químicas se nombran en la presente memoria según las convenciones de la IUPAC tal como se implementan en el software ChemDraw (Perkin Elmer, Inc., Cambridge, MA).
Definiciones
Al describir el compuesto, composiciones, métodos y procedimientos de la invención, los términos siguientes presentan los significados siguientes, a menos que se indique lo contrario. Además, tal como se utilizan en la presente memoria, las formas singulares "un", "una", "el" y "la" incluyen tanto las formas singulares como las formas plurales, a menos que el contexto dicte claramente lo contrario. Las expresiones "que comprende", "que incluye" y "que presenta" pretenden ser inclusivas y significan que pueden existir elementos adicionales aparte de los elementos indicados. Todos los números que expresan cantidades de ingredientes, propiedades tales como el peso molecular, condiciones de reacción y similares utilizados en la presente memoria debe entenderse que están modificados por el término "aproximadamente", a menos que se indique lo contrario. De acuerdo con lo anterior, los números indicados en la presente memoria son aproximaciones que pueden variar dependiendo de las propiedades deseadas que se busca obtener mediante la presente invención. Por lo tanto, y no como intento de limitar la aplicación de la doctrina de equivalentes al alcance según las reivindicaciones, cada número debería interpretarse por lo menos a la luz de los dígitos significativos informados y mediante la aplicación de técnicas de redondeo ordinarias.
El término "aproximadamente" utilizado en el contexto del comportamiento térmico del compuesto 1 se define como ± 1-3°C. El término "aproximar" utilizado en el contexto del % de dosis de compuesto 1 excretado en la orina se define por un margen de error que es típicamente de aproximadamente dos veces la desviación estándar o el semirrango de un intervalo de confianza al 95 por ciento. El término "aproximar" en otros sitios de la exposición puede utilizarse para indicar la desviación estándar o la cantidad de variación o dispersión de un grupo de valores de datos.
La expresión "liberación controlada" tal como se utiliza en la presente memoria es sinónima de liberación sostenida y liberación extendida y se refiere a la cantidad de fármaco administrada durante un periodo de tiempo prolongado en un sujeto. Generalmente, las tabletas y cápsulas de liberación controlada liberan el compuesto activo en el sujeto durante periodos de tiempo de aproximadamente 8, 12, 16 y 24 horas. Por otra parte, la expresión "liberación inmediata" se refiere a que el compuesto activo se libera en el sujeto dentro de un periodo de tiempo pequeño, típicamente inferior a aproximadamente 30 minutos. La expresión "liberación retardada" se refiere a tabletas y cápsulas que liberan la dosis farmacéutica después de un periodo de tiempo definido. Dichas formas de administración habitualmente se encuentran recubiertas entéricamente con el fin de impedir la liberación en el estómago, pero permitir la liberación en el tracto intestinal.
Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "de fórmula" o "que presenta la fórmula" o "que presenta la estructura" no pretende ser limitativa y se utiliza de la misma manera que se utiliza habitualmente la expresión "que comprende". Por ejemplo, en el caso de que se ilustre una estructura, se entiende que se encuentran comprendidas todas las formas estereoisoméricas y tautoméricas, a menos que se indique lo contrario.
En general, en la descripción de sólidos farmacéuticos, la expresión 'Y2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoate de calcio" implica una cantidad estequiométrica aproximada de 2:1 de anión carboxilato del compuesto 1 respecto al contraión de calcio. La expresión sal semicálcica del compuesto 1 es equivalente a la sal de calcio del compuesto 1. En una realización de la invención, la forma cristalina del compuesto 1' es un sólido no higroscópico.
La expresión "punto de fusión" tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a la temperatura a la que se observa el flujo de calor endotérmico máximo mediante calorimetría diferencial de barrido, para la transición térmica que corresponde al cambio de fase sólido a líquido.
La expresión "farmacéuticamente aceptable" se refiere a un material que no es biológica o de otro modo inaceptable al utilizarlo en la invención. Por ejemplo, la expresión "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a un material que puede incorporarse en una composición y administrarse en un paciente sin causar efectos biológicos inaceptables o interactuar de una manera inaceptable con otros componentes de la composición. Dichos materiales farmacéuticamente aceptables típicamente han cumplido los estándares requeridos de los ensayos toxicológicos y de fabricación, e incluyen aquellos materiales identificados como ingredientes inactivos adecuados por la Food and Drug Administration estadounidense.
La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sal preparada a partir de una base o un ácido que resulta aceptable para la administración en un paciente, tal como un mamífero (por ejemplo, sales que presentan una seguridad en mamíferos aceptable para un régimen de dosis dado). Sin embargo, se entiende que las sales cubiertas por la invención no es necesario que sean sales farmacéuticamente aceptables, tales como sales de compuestos intermediarios que no están destinados a la administración en el paciente. Las sales farmacéuticamente aceptables pueden obtenerse a partir de bases inorgánicas u orgánicas farmacéuticamente aceptables y a partir de ácidos inorgánicos u orgánicos farmacéuticamente aceptables. Además, en el caso de que un compuesto contenga tanto una fracción básica, tal como una amina, piridina o imidazol, como una fracción ácida, tal como un ácido carboxílico o tetrazol, pueden formarse zwiteriones y están incluidos en el término "sal" tal como se utiliza en la presente memoria. Entre las sales derivadas de bases inorgánicas farmacéuticamente aceptables se incluyen sales de amonio, calcio, cobre, férrica, ferrosa, litio, magnesio, mangánica, manganosa, potasio, sodio, cinc y similares. Entre las sales derivadas de bases orgánicas farmacéuticamente aceptables se incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, incluyendo aminas sustituidas, aminas cíclicas, aminas naturales y similares, tales como arginina, betaína, cafeína, colina, N,N'-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares. Entre las sales derivadas de ácidos inorgánicos farmacéuticamente aceptables se incluyen sales de los ácidos bórico, carbónico, hidrohálico (bromhídrico, clorhídrico, fluorhídrico o yodhídrico), nítrico, fosfórico, sulfámico y sulfúrico. Entre las sales derivadas de ácidos orgánicos farmacéuticamente aceptables se incluyen sales de ácidos hidroxilo alifáticos (por ejemplo, ácidos cítrico, glucónico, glicólico, láctico, lactobiónico, málico y tartárico), ácidos monocarboxílicos alifáticos (por ejemplo, los ácidos acético, butírico, fórmico, propiónico y trifluoroacético), aminoácidos (por ejemplo, los ácidos aspártico y glutámico), ácidos carboxílicos aromáticos (por ejemplo, los ácidos benzoico, p-clorobenzoico, difenilacético, gentísico, hipúrico y trifenilacético), ácidos hidroxilo aromáticos (por ejemplo, los ácidos o-hidroxibenzoico, p-hidroxibenzoico, 1-hidroxinaftaleno-2-carboxílico y 3-hidroxinataleno-2-carboxílic), ascórbico, ácido dicarboxílicos (por ejemplo, los ácidos fumárico, maleico, oxálico y succínico), los ácidos glucurónico, mandélico, múcico, nicotínico, orótico, pamoico, pantoténico y sulfónico (por ejemplo, los ácidos bencenosulfónico, canforsulfónico, edisílico, etanosulfónico, isetiónico, metanosulfónido, naftalenosulfónico, naftaleno-1,5-disulfónico, naftaleno-2,6-disulfónico y p-toluenosulfónico), ácido xinafoico y similares.
La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad suficiente para realizar el tratamiento al administrarla en un paciente que lo necesita, es decir, la cantidad de fármaco necesaria para obtener el efecto terapéutico deseado. Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente eficaz para tratar la hipertensión es una cantidad de compuesto necesaria para, por ejemplo, reducir, suprimir, eliminar o evitar los síntomas de hipertensión, o para tratar la causa subyacente de hipertensión. En una realización, una cantidad terapéuticamente eficaz es aquella cantidad de fármaco necesaria para reducir la presión arterial o la cantidad de fármaco necesaria para mantener una presión arterial normal. Por otra parte, la expresión "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad suficiente para obtener un resultado deseado, que puede no ser necesariamente un resultado terapéutico. Por ejemplo, al estudiar un sistema que comprende un enzima NEP, una "cantidad eficaz" puede ser la cantidad necesaria para inhibir el enzima.
El término "tratando" o "tratamiento" tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a tratar o el tratamiento de una enfermedad o condición médica (tal como la hipertensión) en un paciente, tal como un mamífero (particularmente un ser humano) que incluye uno o más de los siguientes: (a) prevenir la aparición de la enfermedad o condición médica, es decir, evitar la recidiva de la enfermedad o condición médica, o el tratamiento profiláctico de un paciente que está predispuesto a sufrir la enfermedad o condición médica, (b) mejorar la enfermedad o condición médica, es decir, eliminar o causar la regresión de la enfermedad o condición médica en un paciente, (c) suprimir la enfermedad o condición médica, es decir, retrasar o detener el desarrollo de la enfermedad o condición médica en un paciente, o (d) aliviar los síntomas de la enfermedad o condición médica en un paciente. Por ejemplo, la expresión "tratar la hipertensión" incluiría prevenir la aparición de hipertensión, mejorar la hipertensión, suprimir la hipertensión y aliviar los síntomas de la hipertensión (por ejemplo, reducir la presión arterial). El término "sujeto" o "paciente" pretende incluir aquellos mamíferos, tales como seres humanos, que necesitan de tratamiento o prevención de la enfermedad o que actualmente están siendo tratados para prevenir la enfermedad o el tratamiento de una enfermedad o condición médica específica, así como sujetos de ensayo en los que se está evaluando el compuesto cristalino o se está utilizando en un ensayo, por ejemplo un modelo animal.
Se pretende que todos los demás términos utilizados en la presente memoria tengan su significado ordinario según lo entiende el experto ordinario en la materia a la que se refieren.
Procedimientos sintéticos generales
El compuesto 1 y su forma salina de calcio cristalina pueden sintetizarse a partir de materiales de partida fácilmente disponibles, tal como se indica posteriormente y en los Ejemplos. Se apreciará que en donde se proporcionan condiciones de procedimiento típicas o preferentes (es decir, temperaturas de reacción, tiempos, proporciones de moles de reactivos, solventes, presiones, etc.), también pueden utilizarse otras condiciones de procedimiento, a menos que se indique lo contrario. Se apreciará que, aunque se proporcionan condiciones de procedimiento específicas (es decir, temperaturas de reacción, tiempos, proporciones de moles de reactivos, solventes, presiones, etc.), también pueden utilizarse otras condiciones de procedimiento, a menos que se indique lo contrario. En algunos casos, las reacciones de cristalización se llevaron a cabo a temperatura ambiente y no se realizó ninguna medición de la temperatura. Se entiende que la temperatura ambiente se puede considerar que es una temperatura dentro de un intervalo asociado habitualmente a la temperatura ambiente en un entorno de laboratorio, y típicamente se encontrará comprendida en un intervalo de entre aproximadamente 15°C y aproximadamente 30°C, tal como entre aproximadamente 20°C y aproximadamente 25°C. En otros casos, las reacciones de cristalización se llevaron a cabo a temperatura ambiente y la temperatura realmente se midió y registró.
Cualesquiera proporciones molares indicadas en los métodos de la invención pueden determinarse fácilmente mediante diversos métodos disponibles al experto en la materia. Por ejemplo, dichas proporciones molares pueden determinarse fácilmente mediante RMN 1H. Alternativamente, pueden utilizarse métodos de análisis elemental y de HPLC para determinar la proporción molar.
En una realización, la invención se refiere a ácido (2N,4R)-5-(5'-cloro-2-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico (1), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En otra realización, puede prepararse el compuesto 1 mediante la mezcla de etanol y cloruro de oxalilo para formar una solución, la reacción de bencil-éster de ácido (2S, 4R)-4-amino-5-(5'-cloro-2-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico con la solución, y la combinación de la mezcla resultante con paladio sobre carbono bajo hidrógeno.
En todavía otra realización, el compuesto 1 puede preparar mediante (a) disolución de etanol en diclorometano, (b) adición de cloruro de oxalilo para formar una solución y la agitación a temperatura ambiente, (c) la evaporación del solvente a partir de la solución, (d) la adición de la solución restante a bencil-éster de ácido (2S,4R)-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico que en primer lugar se disolvió en diclorometano, (e) la adición de N,N-diisopropiletilamina y la agitación a temperatura ambiente, (f) la evaporación del solvente para formar un sólido, (g) la combinación del sólido con paladio al 10 % en peso sobre carbono en solvente para formar una mezcla, (h) dejar la mezcla bajo hidrógeno, bajo agitación, y (i) la separación mediante filtración del paladio sobre carbono y el secado al vacío para formar compuesto 1 sólido. Los sólidos resultantes en las etapas (f) e (i) también pueden purificarse mediante cromatografía.
La preparación de la sal hemicalcio cristalina del compuesto 1 se llevó a cabo generalmente en un diluyente inerte adecuado, entre los ejemplos de la cual se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, acetona, acetonitrilo, acetato de etilo, metiletilcetona, metanol, etanol, isopropanol, isobutanol, diclorometano, éter metil-t-butílico, éter ciclopentilmetílico, hexanos y similares, y mezclas de los mismos, que opcionalmente contienen agua. Entre las mezclas de diluyentes inertes (también denominados sistemas de solventes) se incluyen acetona con agua, acetonitrilo con agua, etanol y acetato de etilo, acetato de etilo y hexanos, y alcoholes inferiores (alquil C1-6-OH) con agua, por ejemplo, metanol y agua, e isopropanol y agua. Entre los sistemas de solventes particularmente adecuados se incluyen etanol, etanol:agua y acetato de etilo:etanol que contiene propionato de calcio u otras sales de calcio. Tras completar la cristalización, el compuesto cristalino puede aislarse a partir de la mezcla de reacción mediante cualquier medio convencional, tal como precipitación, filtración, concentración, centrifugación, secado al vacío y similares.
En una realización, la invención se refiere a una forma cristalina de ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico. En otra realización, la forma cristalina es (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de calcio (1').
En otra realización, la forma cristalina 1' puede prepararse mediante: (a) disolución de ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico en etanol y N,N-diisopropiletilamina para formar la solución A, (b) disolución de trifluorometanosulfonato de calcio en etanol para formar la solución B, (c) añadir gota a gota la solución B a solución A para formar una solución, (d) agitación a temperatura ambiente, y (e) aislamiento de los sólidos resultantes, obteniendoobteniendo el compuesto 1'. Otra realización incluye una segunda etapa de cristalización. En la presente memoria, el segundo procedimiento de recristalización comprende además (f) enfriar el compuesto 1' a aproximadamente 5°C y añadir una mezcla de etanol:agua fría bajo agitación vigorosa, y (g) filtrar y secar a temperatura ambiente, obteniendoobteniendo el compuesto 1'.
Propiedades cristalinas
Tal como es bien conocido en el campo del análisis de difracción de rayos X de polvos (PXRD), las alturas relativas de pico de los patrones de PXRD dependen de varios factores relacionados con la preparación de las muestras y la geometría del instrumento, mientras que las posiciones de los picos son relativamente insensibles a los detalles experimentales. Se llevó a cabo la evaluación mediante PXRD, calorimetría diferencial de barrido (DSC), análisis termogravimétricos (TGA) y sorción dinámica de la humedad (SDH) (también conocida como análisis de sorcióndesorción de la humedad) tal como se indica en la presente memoria.
En un aspecto, la invención se refiere a ácido ^2S,4Rj-5-(5'-doro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico en forma cristalina. En otro aspecto, la forma cristalina es (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de calcio (1'). Dicha forma cristalina 1' se caracteriza por un patrón de PXRD en el que las posiciones de los picos están sustancialmente de acuerdo con los mostrados en la FIG. 1. Los picos con intensidades relativas superiores a 0,1 % en la superficie se indican en la tabla a continuación. Este patrón muestra picos de difracción estrechos en el intervalo de 3 a 25° en 20.
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De esta manera, en una realización, la forma cristalina 1' se caracteriza por un patrón de PXRD que comprende los picos de difracción en valores de 20 de 7,18±0,2, 7,38±0,2 y 7,97±0,2, en el que el patrón de difracción de rayos X se obtiene mediante la utilización de radiación de Cu-Ka.
En otra realización, la forma cristalina 1' se caracterizó por un patrón de PXRD que comprendía picos de difracción en valores de 20 de 3,98±0,2, 5,00±0,2, 7,18±0,2, 7,38±0,2, 7,97±0,2, 8,87±0,2 y 10,91±0,2, en el que el patrón de difracción de rayos X se obtiene utilizando radiación de Cu-Ka.
En otra realización, la forma cristalina 1' se caracterizó adicionalmente porque presentaba uno o más picos adicionales de difracción en valores de 20 seleccionados de entre 3,47±0,2, 9,99±0,2, 15,74±0,2, 15,98±0,2 y 18,98±0,2; en el que el patrón de difracción de rayos X se obtuvo utilizando radiación de Cu-Ka, y en todavía otra realización, la forma 1' se caracterizó adicionalmente porque presentaba tres o más de dichos picos de difracción adicionales.
En una realización, la forma cristalina 1' se caracterizó por un termograma de DSC sustancialmente de acuerdo con lo mostrado en la FIG. 2. La forma cristalina 1' se caracterizó por una traza de DSC registrada a una tasa de calentamiento de 10°C por minuto que muestra un máximo en el flujo de calor endotérmico máximo a una temperatura de entre 237°C y 241°C. El termograma de DSC ilustra una endoterma de fusión con un pico en aproximadamente 239°C, inicio en 233°C y con una entalpia de ~67 J/g. Una segunda endoterma representa la descomposición y otros sucesos térmicos desconocidos.
En una realización, la forma cristalina 1' se caracteriza mediante el gráfico de TGA en la FIG. 3. El gráfico de TGA muestra el inicio de la descomposición a una temperatura de aproximadamente 225°C. El compuesto cristalino se descompone después de la fusión, tal como se observa a partir de la pérdida significativa de peso después de ~250°C, que también corresponde a una segunda endoterma en la traza de DSC.
En una realización, la forma cristalina 1' se caracteriza mediante la isoterma de SDH en la FIG. 4. Esta forma es un sólido no higroscópico. La ganancia de humedad total observada es inferior a 1 % en peso bajo exposición a una humedad relativa de entre 5 % y 90 %. No se observó histéresis significativa entre ciclos consecutivos de sorción desorción. El sólido obtenido después de los ciclos de sorción-desorción mostró el mismo patrón de PXRD que el material de partida, indicando la ausencia de cambio de forma después de este experimento.
La forma cristalina 1' puede caracterizarse mediante la imagen de PLM en la FIG. 5, que muestra que dicha forma son cristales birrefringentes delgados.
También se prepararon cristales de (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de L-arginina (1''). Sin embargo, la exposición de dichos cristales a condiciones ambientales condujo a una lenta delicuescencia. La forma cristalina 1'' se caracterizó mediante un PXRD y una traza de DSC en las FIGS. 6 y 7, respectivamente. Se registró la traza de DSC a una tasa de calentamiento de 10°C por minuto y mostraba un máximo en el flujo de calor endotérmico a una temperatura de entre aproximadamente 113°C y aproximadamente 117°C. El termograma de DSC ilustra una endoterma de fusión con un pico en aproximadamente 116,9°C, inicio en 106,8°C y con una entalpia de ~70,3 J/g. La forma cristalina 1'' también puede caracterizarse mediante el gráfico de TGA en la FIG. 8, en el que se observó una pérdida de peso ~ 6,5 % hasta 140°C y se observó una pérdida continua de masa después de 140°C. La forma cristalina 1'' puede caracterizarse mediante la imagen de PLM en la FIG. 9, que muestra que dicha forma son cristales birrefringentes delgados.
Utilidad
La extrapolación in vitro a in vivo del comportamiento del fármaco en un sujeto continúa mejorando (ver, p. ej., Chiba et al., AAPS J., junio de 2009, 11(2): 262-276). En la presente invención, se evaluó la actividad in vitro de inhibidor de neprilisina humana (Ensayo 1) con el fin de determinar la actividad inhibitoria de neprilisina del compuesto 1. Se cumplió un umbral de pK > 9,0 para dicho compuesto. Sin embargo, se llevaron además experimentos in vivo adicionales con el fin de predecir con mayor exactitud el comportamiento del compuesto 1 en un sujeto.
Un parámetro crítico en la evaluación de la idoneidad de un profármaco es la determinación de lo rápidamente en que el profármaco se convierte en el agente activo o el metabolito activo. En la presente invención, el compuesto 1, al ser un profármaco éster, se convierte en el agente activo o metabolito activo, el compuesto comparativo c 2, mediante una reacción enzimática, p. ej., la hidrólisis con esterasa, que puede ser altamente dependiente de la especie. Por ese motivo, resulta preferible evaluar las tasas de conversión en múltiples especies al extrapolar a sujetos humanos. Además, hay varias propiedades que resultan útiles para evaluar si se administrará una cantidad suficiente del fármaco en el plasma con el fin de conseguir el necesario beneficio terapéutico, por ejemplo, una biodisponibilidad oral elevada y un bajo aclaramiento renal para aquellos sujetos con función renal comprometida.
Para la presente invención, se llevaron a cabo estudios farmacocinéticos orales e intravenosos en las especies de rata, perro y mono con el fin de determinar la biodisponibilidad oral del compuesto 1 en comparación con el metabolito activo compuesto comparativo C2 (Ensayo 2). Además, se llevaron a cabo estudios farmacocinéticos orales e intravenosos en las especies de rata y perro con el fin de comparar el compuesto 1 con otros profármacos o compuestos éster químicamente similares (Ensayo 3).
El compuesto 1 inhibe el enzima NEP y, por lo tanto, se espera que resulte útil para el tratamiento y/o la prevención de condiciones médicas que responden a la inhibición de NEP. De esta manera, se espera que los pacientes que sufren de una enfermedad o trastorno que se trata mediante la inhibición del enzima NEP o mediante el incremento de los niveles de sus sustratos peptídicos, puedan tratarse mediante la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de compuesto 1. Por ejemplo, mediante la inhibición de NEP, se espera que el compuesto 1 potencie los efectos biológicos de los péptidos endógenos que son metabolizados por NEP, tales como los péptidos natriuréticos, la bombesina, las bradiquininas, la calcitonina, las endotelinas, las encefalinas, la neurotensina, la sustancia P y el péptido intestinal vasoactivo. De esta manera, se espera que dicho compuesto presente otras actividades fisiológicas, por ejemplo sobre los sistemas renal, nervioso central, reproductor y gastrointestinal.
Los fármacos son eliminados del cuerpo de un sujeto mediante diversos procesos de eliminación que se clasifican generalmente como excreción y biotransformación. La excreción se refiere a la eliminación del fármaco no volátil intacto principalmente por ruta renal (riñones) a vejiga a orina, mientras que otras rutas de excreción incluyen la bilis (hígado), el sudor, la saliva, la leche (mediante la lactancia) u otros líquidos corporales. Los fármacos volátiles como el alcohol y los anestésicos gaseosos se excretan mediante los pulmones, en el aire espirado. Por otra parte, la biotransformación, o el metabolismo de los fármacos, se refiere a un fármaco que se convierte químicamente en el cuerpo en un metabolito y habitualmente es un proceso enzimático. La excepción a lo anterior es la modificación química no enzimática de un fármaco, p. ej., la hidrólisis de éster. Los enzimas que participan en la biotransformación de los fármacos se localizan principalmente en el hígado. Otros tejidos, tales como el renal, el pulmonar, intestino delgado y piel también contienen enzimas metabólicos.
También pueden utilizarse estudios farmacocinéticos para investigar las rutas de eliminación en un sujeto, p. ej., el aclaramiento renal mediante excreción del fármaco administración, en orina durante el tiempo. Se llevó a cabo la excreción renal del compuesto 1 en un modelo de perro para evaluar la excreción renal como una ruta de eliminación (Ensayo 4). Dicha ruta de eliminación es importante para sujetos que presentan una función renal comprometida y necesitan terapias que son aclaradas mínimamente por excreción renal. En una realización, la excreción renal del compuesto 1, o forma cristalina del mismo, en el sujeto es de aproximadamente <15 %, <10 %, <5 %, <3 %, <2 %, <1 % o <0,5 % de la dosis administrada durante 24 horas.
Tal como se indica en la sección de ensayo, posteriormente, junto con el compuesto 1 en un ensayo in vitro de enzima NEP y en determinaciones in vivo de biodisponibilidad oral y excreción renal en múltiples especies animales, se incluyeron compuestos comparadores de estructura química similar. Inesperadamente, se observaron diferencias significativas de resultados. Aunque los compuestos comparadores individuales mostraban propiedades similares a las del compuesto 1 en uno o más ensayos, solo el compuesto 1 mostraba, simultáneamente, una actividad inhibitoria elevada de la neprilisina humana, una biodisponibilidad oral elevada y una excreción renal baja que se espera que lleve a una utilidad particular en el tratamiento de la enfermedad.
Además, para utilizar eficazmente el compuesto 1 como agente terapéutico, resulta deseable disponer de una forma de estado sólido de dicho compuesto que pueda fabricarse fácilmente y que presente una estabilidad química y física aceptable, incluyendo un punto de fusión elevado. No pudieron obtenerse cristales del ácido libre de compuesto 1. Se prepararon finalmente cristales de arginina y calcio del compuesto 1, aunque los cristales de arginina eran delicuescentes bajo condiciones ambientales y resultó difícil desarrollarlos adicionalmente. Por otra parte, los cristales de calcio eran estables y se fundieron a aproximadamente 239°C y pueden utilizarse para el desarrollo posterior como agente terapéutico.
Enfermedades cardiovasculares
Mediante la potenciación de los efectos de péptidos vasoactivos, tales como péptidos natriuréticos y la bradiquinina, se espera que el compuesto 1 encuentre utilidad en el tratamiento y/o la prevención de condiciones médicas tales como las enfermedades cardiovasculares. Ver, por ejemplo, Roques et al. (1993) Pharmacol. Rev. 45:87-146yDempsey et al. (2009) Amer. J. of Pathology 174(3):782-796. Entre las enfermedades cardiovasculares de particular interés se incluyen la hipertensión y la insuficiencia cardíaca. La hipertensión incluye, a título ilustrativo y no limitativo, hipertensión primaria, que también se denomina hipertensión esencial o hipertensión idiopática, hipertensión secundaria, hipertensión con enfermedad renal acompañante, hipertensión grave con o sin enfermedad renal acompañante, hipertensión pulmonar, incluyendo hipertensión arterial pulmonar e hipertensión resistente. La insuficiencia cardiaca incluye, a título ilustrativo y no limitativo, insuficiencia cardiaca congestiva, insuficiencia cardíaca aguda, insuficiencia cardíaca crónica, por ejemplo con fracción de eyección ventricular izquierda reducida (también denominada insuficiencia cardíaca sistólica) o con fracción de eyección ventricular conservada (también denominada insuficiencia cardíaca diastólica) e insuficiencia cardíaca descompensada crónica. De esta manera, una realización de la invención se refiere a compuesto I para la utilización para tratar la hipertensión, particularmente la hipertensión primaria o la hipertensión arterial pulmonar, que comprende administrar en un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto 1.
Para el tratamiento de la hipertensión primaria, la cantidad terapéuticamente eficaz es típicamente la cantidad que resulta suficiente para reducir la presión arterial del paciente. Lo anterior incluiría tanto hipertensión leve a moderada como hipertensión grave. Al utilizarlo para tratar la hipertensión, el compuesto 1 puede administrarse en combinación con otros agentes terapéuticos, tales como antagonistas de aldosterona, inhibidores de aldosterona sintasa, inhibidores del enzima conversor de la angiotensina e inhibidores de acción dual de enzima conversor de angiotensina/neprilisina, activadores y estimuladores del enzima 2 conversor de la angiotensina (ACE2), vacunas de angiotensina II, agentes antidiabéticos, agentes antilipídicos, agentes antitrombóticos, antagonistas de receptor AT1 e inhibidores de acción dual de antagonista de receptor AT-i/neprilisina, antagonistas de receptor p1-adrenérgico, antagonista de acción dual de receptor p-adrenérgico/receptor a-i, bloqueantes de los canales del calcio, diuréticos, antagonistas de receptor de endotelina, inhibidores del enzima conversor de endotelina, inhibidores de neprilisina, péptidos natriuréticos y sus análogos, antagonistas del receptor de aclaramiento del péptido natriurético, donantes de óxido nítrico, agentes antiinflamatorios no esteroideos, inhibidores de fosfodiesterasa (específicamente inhibidores de PDE-V), agonistas de receptor de prostaglandina, inhibidores de renina, estimuladores y activadores de guanilato ciclasa soluble, y combinaciones de los mismos. El compuesto de la invención puede combinarse con un antagonista de receptor AT1, un bloqueante de los canales del calcio., un diurético o una combinación de los mismos, y utilizarse para tratar la hipertensión primaria. El compuesto de la invención se combina con un antagonista de receptor AT1 y se utiliza para tratar la hipertensión con enfermedad renal acompañante. Al utilizarse para tratar la hipertensión resistente, el compuesto puede administrarse en combinación con otros agentes terapéuticos, tales como los inhibidores de la aldosterona sintasa.
Para el tratamiento de la hipertensión arterial pulmonar, la cantidad terapéuticamente eficaz es típicamente la cantidad que resulta suficiente para reducir la resistencia vascular pulmonar. Otros objetivos de la terapia son mejorar la capacidad de ejercicio del paciente. Por ejemplo, en un contexto clínico, la cantidad terapéuticamente eficaz puede ser la cantidad que mejora la capacidad del paciente de caminar confortablemente durante un periodo de 6 minutos (cubriendo una distancia de aproximadamente 20 a 40 metros). Al utilizarse para tratar la hipertensión arterial pulmonar, el compuesto puede administrarse en combinación con otros agentes terapéuticos, tales como antagonistas de receptor a-adrenérgico, antagonistas de receptor p1-adrenérgico, agonistas de receptor p2-adrenérgico, inhibidores de enzima conversor de la angiotensina, anticoagulantes, bloqueantes de los canales del calcio, diuréticos, antagonistas de receptor de endotelina, inhibidores de PDE-V, análogos de prostaglandina, inhibidores selectivos de la recaptación de la serotonina, y combinaciones de los mismos. El compuesto 1 puede combinarse con un inhibidor de PDE-V o un inhibidor selectivo de la recaptación de la serotonina y utilizarse para tratar la hipertensión arterial pulmonar.
La invención encuentra utilidad en un método de tratamiento de la insuficiencia cardíaca, en particular la insuficiencia cardiaca congestiva (incluyendo la insuficiencia cardíaca congestiva sistólica y diastólica), que comprende administrar en el paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de compuesto 1. Típicamente, la cantidad terapéuticamente eficaz es la cantidad que resulta suficiente para reducir la presión sanguínea y/o mejorar las funciones renales. En un contexto clínico, la cantidad terapéuticamente eficaz puede ser la cantidad que resulta suficiente para mejorar la hemodinámica cardiaca, como, por ejemplo, la reducción de la presión de enclavamiento, la presión auricular derecha, la presión de llenado y la resistencia vascular. El compuesto 1 puede administrarse como forma de dosis intravenosa. Al utilizarse para tratar la insuficiencia cardiaca, el compuesto puede administrarse en combinación con otros agentes terapéuticos, tales como antagonistas de receptor de adenosina, rompedores de productos final de la glicación avanzada, antagonistas de aldosterona, antagonistas de receptor ATI, antagonistas de receptor p1-adrenérgico, antagonista de acción dual de receptor p-adrenérgico/receptor de a-i, inhibidores de quimasa, digoxina, diuréticos, inhibidores del enzima conversor de la endotelina (ECE), antagonistas de receptor de endotelina, péptidos natriuréticos y sus análogos, antagonistas de receptor de aclaramiento del péptido natriurético, donantes de óxido nítrico, análogos de prostaglandina, inhibidores de PDE-V, activadores y estimuladores de la guanilato ciclasa soluble, y antagonistas de receptor de vasopresina. El compuesto 1 puede combinarse con un antagonista de aldosterona, un antagonista de receptor p1-adrenérgico, un antagonista de receptor AT1 o un diurético, y utilizarse para tratar la insuficiencia cardíaca congestiva.
Diarrea
Como inhibidor de NEP, se espera que el compuesto 1 inhiba la degradación de las encefalinas endógenas y, de esta manera, dichos compuestos también podrían encontrar utilizada par ael tratamiento de la diarrea, incluyendo la diarrea infecciosa y secretoria/acuosa. Ver, por ejemplo, Baumer et al. (1992) Gut 33:753-758; Farthing (2006) Digestive Diseases 24:47-58 y Margais-Collado (1987) Eur. J. Pharmacol. 144(2):125-132. En su uso para el tratamiento la diarrea, el compuesto 1 puede combinarse con uno o más agentes antidiarreicos adicionales.
Enfermedades renales
Mediante la potenciación de los efectos de péptidos vasoactivos como los péptidos natriuréticos y la bradiquinina, se espera que el compuesto 1 potencie la función renal (ver Chen et al. (1999) Circulation 100:2443-2448; Lipkin et al. (1997) Kidney Int. 52:792-801 y Dussaule et al. (1993) Clin. Sci. 84:31-39) y encuentre utilidad en el tratamiento y/o la prevención de enfermedades renales en un sujeto con insuficiencia renal. Entre las enfermedades renales de interés particular se incluyen la nefropatía diabética, la enfermedad renal crónica, la proteinuria y particularmente la lesión renal aguda (causada, por ejemplo, por cirugía cardiovascular, quimioterapia o la utilización de pigmentos de contraste en la obtención de imágenes médicas) o la insuficiencia renal aguda (ver Sharkovska et al. (2011) Clin. Lab. 57:507-515 y Newaz et al. (2010) Renal Failure 32:384-390).
Un sujeto con deterioro renal que presenta enfermedad renal crónica (ERC) puede clasificarse según las guías de iniciativas en calidad de resultados de enfermedades renales (KDOQI) de la National Kidney Foundation (NKF). Una vez se ha establecido la enfermedad renal crónica, es decir, el daño renal o una tasa de filtración glomerular (TFG)<60 ml/min/1,73 m2 durante >3 meses, puede asignarse el estadio de la enfermedad según la clasificación KDOQI de la ERC. Esta clasificación incluye el Estadio 1 (daño renal con TFG normal o incrementada): TFG >90; Estadio 2 (daño renal con TFG levemente reducida): TFG 60-89; Estadio 3 (TFG moderadamente reducida): TFG 30-59; Estadio 4 (TFG gravemente reducida): TFG 15-29; y Estadio 5 (insuficiencia renal): TFG <15 (o diálisis). La TFG se define en unidades de ml/min/1,73 m2.
La invención encuentra utilidad en un método de tratamiento de un sujeto con deterioro renal que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de compuesto 1 o una forma cristalina del mismo, específicamente la forma cristalina 1'. Dicho método incluye además el tratamiento de un sujeto con deterioro renal con hipertensión o insuficiencia cardiaca. En el caso de que se utilice para tratar una enfermedad renal, el compuesto 1 o una forma cristalina del mismo, específicamente la forma cristalina 1', puede administrarse en combinación con otros agentes terapéuticos, tales como los inhibidores del enzima conversor de la angiotensina, los antagonistas del receptor AT1 y los diuréticos.
La invención también encuentra utilidad en un método de tratamiento de un sujeto con deterioro renal que presenta enfermedad renal crónica con una tasa de filtración glomerular estimada (TFGe) de entre 60 ml/min/1,73 m2 y 15 ml/min/1,75 m2, que comprende administrar en el paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de compuesto 1 o una forma cristalina del mismo, específicamente la forma cristalina 1', y en un método de tratamiento de un sujeto con deterioro renal que presenta enfermedad renal crónica con una tasa de filtración glomerular estimada (TFGe) > 90 ml/min/1,73 m2 (Estadio 1) o una TFGe <15 ml/min/1,73 m2 (Estadio 5), que comprende administrar en el paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de compuesto 1 o una forma cristalina del mismo, específicamente la forma cristalina 1'. Para los fines de la presente invención, la enfermedad renal grave puede clasificarse como una TFGe <30 ml/min/1,73 m2 La invención también encuentra utilidad en un método de tratamiento de un sujeto con deterioro renal que presenta enfermedad renal crónica clasificada como Estadio 1, Estadio 2, Estadio 3, Estadio 4, Estadio 5 o intervalos de TFGe que cubren uno o más de dichos estadios con compuesto 1 o una forma cristalina del mismo, específicamente está incluida la forma cristalina 1'.
Terapia preventiva
Mediante la potenciación de los efectos de los péptidos natriuréticos, también se espera que el compuesto 1 resulte útil en terapia preventiva, debido a los efectos antihipertróficos y antifibróticos de los péptidos natriuréticos (ver Potter et al. (2009) Handbook of Experimental Pharmacology 191:341-366), por ejemplo en la prevención de la progresión de la insuficiencia cardiaca tras el infarto de miocardio, la prevención de la restenosis arterial después de angioplastia, la prevención del engrosamiento de las paredes de los vasos sanguíneos tras operaciones vasculares, la prevención de la ateroesclerosis y la prevención de la angiopatía diabética.
Glaucoma
Mediante la potenciación de los efectos de los péptidos natriuréticos, se espera que el compuesto 1 resulte útil en el tratamiento del glaucoma. Ver, por ejemplo, Diestelhorst et al. (1989) International Ophthalmology 12:99-101. En su uso para el tratamiento del glaucoma, el compuesto 1 puede combinarse con uno o más agentes antiglaucoma adicionales.
Alivio del dolor
Como un inhibidor de la NEP, se espera que el compuesto 1 inhiba la degradación de las encefalinas endógenas y, de esta manera, dichos compuestos también podrían encontrar utilidad como analgésicos. Ver, por ejemplo, Roques et al. (1980) Nature 288:286-288 y Thanawala et al. (2008) Current Drug Targets 9:887-894. En su uso en el tratamiento del dolor, el compuesto 1 puede combinarse con uno o más fármacos antinociceptivos adicionales, tales como los inhibidores de aminopeptidasa N o dipeptidilpeptidasa III, agentes antiinflamatorios no esteroideos, inhibidores de la recaptación de la monoamina, relajantes musculares, antagonistas de receptores de NMDA, agonistas de receptores de opioides, agonistas de receptores de serotonina 5-HT-id y antidepresivos tricíclicos.
Otras utilidades
Debido a sus propiedades de inhibición de la NEP, también se espera que el compuesto 1 resulte útil como un agente antitusivo; además podría encontrar utilidad en el tratamiento de la hipertensión portal asociada a la cirrosis hepática (ver Sansoe et al. (2005) J. Hepatol. 43:791-798), el cáncer (verVesely (2005) J. Investigative Med. 53:360-365), la depresión (ver Noble et al. (2007) Exp. Opin. Ther. Targets 11:145-159), los trastornos menstruales, el parto prematuro, la preeclampsia, la endometriosis, los trastornos reproductivos (por ejemplo, la infertilidad masculina y femenina, el síndrome del ovario poliquístico y el fracaso de la implantación) y la disfunción sexual masculina y femenina, incluyendo la disfunción eréctil masculina y el trastorno de excitación sexual femenina. Más específicamente, se espera que el compuesto 1 resulte útil para tratar la disfunción sexual femenina (ver Pryde et al. (2006) J. Med. Chem. 49:4409-4424), que con frecuencia se define como la dificultad o incapacidad del paciente femenino para encontrar satisfacción en la expresión sexual. Lo anterior cubre una diversidad de trastornos sexuales femeninos diversos, entre ellos, a título ilustrativo y no limitativo, el trastorno de deseo sexual hipoactivo, el trastorno de la excitación sexual, el trastorno orgásmico y el trastorno de dolor sexual. En el caso de que se utilice para tratar dichos trastornos, especialmente la disfunción sexual femenina, el compuesto de la invención puede combinarse con uno o más de los agentes secundarios siguientes: inhibidores de PDE-V, agonistas de la dopamina, agonistas y/o antagonistas de receptores de estrógeno, andrógenos y estrógenos. Debido a su propiedad de inhibición de la n Ep , también se espera que el compuesto 1 presente propiedades antiinflamatorias, y se espera que encuentre utilidad como tal, particularmente al utilizarlo en combinación con estatinas.
Algunos estudios recientes sugieren que la NEP desempeña un papel en la regulación de la función nerviosa en la diabetes deficiente en insulina y en la obesidad inducida por la dieta. Coppey et al. (2011) Neuropharmacology 60:259-266. Por lo tanto, debido a su propiedad de inhibición de la NEP, se espera que el compuesto 1 resulte útil para proporcionar protección frente al deterioro nervioso causado por la diabetes o la obesidad inducida por la dieta.
La cantidad de compuesto 1 administrada por dosis la cantidad total administrada al día puede ser predeterminada o puede determinarse individualmente para cada paciente tomando en consideración numerosos factores, entre ellos la naturaleza y gravedad de la condición del paciente, la condición bajo tratamiento, la edad, el peso y estado general de salud del paciente, la tolerancia del paciente al agente activo o metabolito activo, la vía de administración, consideraciones farmacológicas, tales como la actividad, eficacia, farmacocinética y perfiles toxicológicos del compuesto y cualesquiera agentes secundarios que se administren, y similares. El tratamiento de un paciente que sufre de una enfermedad o condición médica (tal como la hipertensión) puede iniciar una dosis predeterminada o una dosis determinada por el médico tratante, y continuará durante el periodo de tiempo necesario para prevenir, mejorar, suprimir o aliviar los síntomas de la enfermedad o condición médica. Los pacientes sometidos a dicho tratamiento típicamente se seguirán de modo rutinario para determinar la efectividad de la terapia. Por ejemplo, en el tratamiento de la hipertensión, pueden utilizarse las mediciones de la presión arterial para determinar la efectividad del tratamiento. Son bien conocidos indicadores similares para otras enfermedades y condiciones indicadas en la presente memoria, y se encuentran fácilmente disponible al médico tratante. El seguimiento continuo por el médico garantizará que se administre la cantidad óptima de compuesto 1 en cualquier tiempo dado, así como facilitará la determinación de la duración del tratamiento. Lo anterior resulta de valor particular en el caso de que también se administren agentes secundarios, ya que su selección, administración y duración de la terapia también pueden requerir ajustes. De esta manera, el régimen de tratamiento y el programa de administración pueden ajustarse durante el curso de la terapia de manera que se administre la cantidad más baja de agente activo o metabolito activo que muestre la efectividad deseada y, además, que se continúe la administración solo durante el tiempo necesario para tratar con éxito la enfermedad o condición médica.
El compuesto 1 también encuentra utilidad como intermediario útil para la preparación de formas cristalinas de compuesto 1, incluyendo, por ejemplo, la forma cristalina 1'.
Herramientas de investigación
Debido a que el compuesto 1 posee actividad de inhibición del enzima NEP, también resulta útil como herramienta de investigación para investigar o estudiar sistemas o muestras biológicas que presentan un enzima NEP, por ejemplo para estudiar enfermedades en las que el enzima NEP o sus sustratos peptídicos desempeñan un papel. Puede utilizarse en dichos estudios cualquier sistema o muestra biológico adecuado que presente un enzima n Ep que puede llevarse a cabo in vitro o in vivo. Entre los sistemas o muestras biológicos representativos adecuados para dichos estudios se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, células, extractos celulares, membranas plasmáticas, muestras de tejido, órganos aislados, mamíferos (tales como ratones, ratas, cobayas, conejos, perros, cerdos, seres humanos, etc.), y similares, en los que los mamíferos son de particular interés. La actividad enzimática de NEP en un mamífero puede inhibirse mediante la administración de una cantidad inhibidora de NEP del compuesto 1.
Al utilizarlo como herramienta de investigación, típicamente se pone en contacto un sistema o muestra biológico que comprende un enzima NEP con una cantidad inhibidora de enzima NEP del compuesto 1. Tras exponer el sistema o muestra biológico al compuesto, se determinaron los efectos de la inhibición del enzima NEP utilizando procedimientos y equipos convencionales, tales como la medición de la unión de receptores en un ensayo de unión o midiendo los cambios mediados por ligandos en un ensayo funcional. La exposición comprende poner en contacto células o tejido con el compuesto, la administración del compuesto en un mamífero, por ejemplo mediante administración i.p., p.o., i.v., s.c. o por inhalación, y similares. Dicha etapa de determinación puede implicar la medición de una respuesta (un análisis cuantitativo) o puede implicar realizar una observación (un análisis cualitativo). La medición de una respuesta implica, por ejemplo, determinar los efectos del compuesto sobre el sistema o muestra biológico mediante la utilización de procedimientos y equipos convencionales, tales como los ensayos de actividad enzimática y la medición de los cambios mediados por el sustrato enzimático o el producto en ensayos funcionales. Los resultados de ensayo pueden utilizarse para determinar el nivel de actividad, así como la cantidad de compuesto necesaria para conseguir el resultado deseado, es decir, una cantidad inhibidora del enzima NEP. Típicamente, la etapa de determinación implicará determinar los efectos de inhibir el enzima NEP.
Además, el compuesto 1 puede utilizarse como herramientas de investigación para evaluar otros compuestos químicos y, de esta manera, también resulta útil en ensayos de cribado para encontrar, por ejemplo, nuevos compuestos que presentan actividad inhibidora de NEP. De esta manera, se utiliza el compuesto 1 como estándar en un ensayo para permitir la comparación de los resultados obtenidos con un compuesto de ensayo y con el compuesto 1 con el fin de identificar aquellos compuestos de ensayo que presentan una actividad igual o superior, en caso de tener. Por ejemplo, se comparan los datos de pKi para un compuesto de ensayo o un grupo de compuestos de ensayo con los datos de pKi para el compuesto 1 con el fin de identificar aquellos compuestos que presentan las propiedades deseadas, por ejemplo, los compuestos de ensayo que presentan un valor de pKi igual o superior al del compuesto de la invención. Lo anterior puede incluir tanto la generación de datos de comparación (utilizando los ensayos apropiados) y el análisis de los datos de ensayo para identificar los compuestos de ensayo de interés. De esta manera, puede evaluarse un compuesto de ensayo en un ensayo biológico, mediante un método que comprende las etapas de: (a) llevar a cabo un ensayo biológico con un compuesto de ensayo para proporcionar un primer valor de ensayo, (b) llevar a cabo el ensayo biológico con el compuesto 1 para proporcionar un segundo valor de ensayo, en el que la etapa (a) se lleva a cabo antes, después o concurrentemente con la etapa (b), y (c) comparar el primer valor de ensayo de la etapa (a) con el segundo valor de ensayo de la etapa (b). Entre los ensayos biológicos ejemplares se incluye un ensayo de inhibición del enzima NEP.
La invención encuentra utilidad además en un método de estudio de un sistema o muestra biológico que comprende un enzima NEP, en el que el método comprende: (a) poner en contacto el sistema o muestra biológico con el compuesto de la invención, y (b) determinar los efectos causados por el compuesto sobre el sistema o muestra biológico.
Composiciones y formulaciones farmacéuticas
El compuesto 1 típicamente se administra en un paciente en la forma de una composición o formulación farmacéutica.
Dichas composiciones farmacéuticas pueden administrarse en el paciente mediante cualquier vía de administración aceptable, incluyendo, aunque sin limitación, los modos de administración oral, rectal, vaginal, nasal, inhalado, tópica (incluyendo transdérmica), ocular y parenteral. Además, el compuesto 1 puede administrarse, por ejemplo por vía oral, en múltiples dosis al día (por ejemplo, dos, tres o cuatro veces al día) en una única dosis diaria o en una única dosis semanal. Se entenderá que puede utilizarse cualquier forma de compuesto 1 (es decir, base libre, ácido libre, sal, solvato, etc. farmacéuticamente aceptable) que resulte adecuada para el modo particular de administración en las composiciones farmacéuticas comentadas en la presente memoria.
De acuerdo con lo anterior, en una realización, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y compuesto 1. La composición puede contener otros agentes terapéuticos y/o de formulación, si se desea. Al comentar composiciones, el "compuesto 1" también puede denominarse en la presente memoria "agente activo", para distinguirlo de otros componentes de la formulación, tales como el portador. De esta manera, se entiende que la expresión "agente activo" incluye los compuestos de la invención, así como sus sales farmacéuticamente aceptables.
Las composiciones farmacéuticas de la invención típicamente contienen una cantidad terapéuticamente eficaz de compuesto 1. Sin embargo, el experto en la materia reconocerá que una composición farmacéutica puede contener más de una cantidad terapéuticamente eficaz, tal como en composiciones en masa, o menos de una cantidad terapéuticamente eficaz, es decir, dosis unitarias individuales diseñadas para la administración múltiple para alcanzar una cantidad terapéuticamente eficaz. Típicamente, la composición contendrá entre aproximadamente 0,01 % y 95 % en peso de agente activo, incluyendo entre aproximadamente 0,01 % y 30 % en peso, tal como entre aproximadamente 0,01 % y 10 % en peso, en la que la cantidad final dependerá de la formulación misma, de la vía de administración, de la frecuencia de administración, y similares. En una realización, una composición adecuada para una forma de administración oral, por ejemplo, puede contener aproximadamente 5 % a 70 % en peso, o entre aproximadamente 10 % y 60 % en peso de agente activo.
Puede utilizarse cualquier portador o excipiente convencional en las composiciones farmacéuticas de la invención. La elección de un portador o excipiente particular, o combinaciones de portadores o excipientes, dependerá del modo de administración que se utilice para tratar un paciente particular o tipo de condición médica o estado de enfermedad. A este respecto, la preparación de una composición adecuada para un modo particular de administración se encuentra perfectamente comprendida dentro de los conocimientos del experto en la técnica farmacéutica. Además, los portadores o excipientes utilizados en dichas composiciones se encuentran disponibles comercialmente. A título de ilustración adicional, se describen técnicas de formulación convencionales en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a edición, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); y H. C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7a edición, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999). Entre los ejemplos representativos de materiales que pueden servir de portadores farmacéuticamente aceptables se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, los siguientes: azúcares, tales como lactosa, glucosa y sucrosa; almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; celulosa, tal como celulosa microcristalina, y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa sódica, etilcelulosa y acetato de celulosa; sales de ácido graso, tales como estearato de magnesio; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes, tales como manteca de cacao y ceras supositorias; aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja; glicoles, tales como propilenglicol; polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tamponadores, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua libre de pirógenos; solución salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico; soluciones tamponadoras de fosfato; gases propelentes comprimidos, tales como clorofluorocarburos e hidrofluorocarburos, y otras sustancias compatibles no tóxicas utilizadas en composiciones farmacéuticas.
En una realización de la invención, el portador farmacéuticamente aceptable es estearato de magnesio. Por ejemplo, la composición farmacéutica puede comprender compuesto 1 o una forma cristalina 1' y estearato de magnesio en una proporción de entre aproximadamente 3:1 y aproximadamente 10:1 de compuesto 1 o una forma cristalina 1' a estearato de magnesio. Entre otras proporciones de compuesto 1 o una forma cristalina 1' a estearato de magnesio se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, 1:1, 5:1, 15:1, 20:1, 25:1, 30:1 y 50:1.
Las composiciones farmacéuticas se preparan típicamente mediante la mezcla o combinación a fondo íntima del agente activo con un portador farmacéuticamente aceptable y uno o más ingredientes opcionales. La mezcla uniformemente combinada resultante a continuación puede conformarse o cargarse en tabletas, cápsulas, píldoras, cartuchos, dispensadores y similares utilizando procedimientos y equipos convencionales.
En una realización, las composiciones farmacéuticas resultan adecuadas para la administración oral. Las composiciones adecuadas para la administración oral pueden encontrarse en forma de cápsulas, tabletas, píldoras, pastillas, cápsulas, grageas, polvos, gránulos, soluciones o suspensiones en un líquido acuoso o no acuoso; emulsiones líquidas de aceite en agua o de agua en aceite, elixires o jarabes, y similares, en las que cada una contiene una cantidad predeterminada del agente activo.
En el caso de que esté previsto para la administración oral en una forma de administración sólida (cápsulas, tabletas, píldoras y similares), la composición típicamente comprenderá el agente activo y uno o más portadores farmacéuticamente aceptables, tales como citrato sódico, fosfato dicálcico o estearato de magnesio. Las formas de administración sólidas también pueden comprender agentes de carga o extensores, tales como almidones, celulosa microcristalina, lactosa, sucrosa, glucosa, manitol y/o ácido silícico; ligantes, tales como carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sucrosa y/o acacia; humectantes, tales como glicerol; agentes desintegrantes, tales como agar agar, carbonato cálcico, almidón de patata o almidón de tapioca, ácido algínico, determinados silicatos y/o carbonato sódico, agentes de retardo de solución, tales como parafina, acelerantes de absorción, tales como los compuestos de amonio cuaternario; agentes humectantes, tales como alcohol cetílico y/o monoestearato de glicerol; absorbentes, tales como caolín y arcilla de bentonita; lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, laurilsulfato sódico y/o mezclas de los mismos; agentes colorantes, y agentes tamponadores. Para el propósito de la presente invención, la expresión "portadores farmacéuticamente aceptables" son inclusivos de todos los términos, tales como portadores, agentes de carga o extensores, ligantes, humectantes, agentes retardantes de solución, agentes humectantes, absorbentes, lubricantes, agentes colorantes y agentes tamponadores indicados anteriormente.
También pueden encontrarse presentes en las composiciones farmacéuticas agentes desmoldantes, agentes humectantes, agentes de recubrimiento, edulcorantes, agentes saborizantes y perfumantes, conservantes y antioxidante. Entre los agentes de recubrimiento ejemplares para tabletas, cápsulas, píldoras y similares se incluyen los utilizados para recubrimientos entéricos, tales como acetato ftalato de celulosa, ftalato de acetato de polivinilo, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, copolímeros de ácido metacrílico-éster de ácido metacrílico, trimelitato de acetato de celulosa, carboximetiletilcelulosa, succinato de acetato de hidroxipropilmetilcelulosa y similares. Entre los ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables se incluyen antioxidantes solubles en agua, tales como ácido ascórbico, hidrocloruro de cisteína, bisulfato sódico, metabisulfato sódico, sulfito sódico y similares; antioxidantes liposolubles, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol y similares, y agentes quelantes de metales, tales como ácido cítrico, ácido etilén-diaminatetraacético, sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico y similares.
También pueden formularse composiciones para proporcionar la liberación lenta o controlada del agente activo mediante la utilización, a título de ejemplo, de hidroxipropilmetilcelulosa en proporciones variables u otras matrices de polímeros, liposomas y/o microesferas. Además, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden contener agentes opacificadores y pueden formularse de manera que liberen únicamente, o preferentemente, el agente activo, en una determinada parte del tracto gastrointestinal, opcionalmente de una manera retardada. Entre los ejemplos de composiciones incluidas que pueden utilizarse se incluyen sustancias poliméricas y ceras. El agente activo también puede encontrarse en forma microencapsulada, opcionalmente con uno o más de los excipientes anteriormente indicados.
Una realización de la invención incluye una forma de administración oral que comprende el compuesto 1 o la forma cristalina 1' en una cápsula, tableta, líquido o suspensión. Otra realización de la invención se refiere a una forma de administración oral en la que la liberación del compuesto 1 o forma cristalina 1' en un sujeto es una liberación inmediata, controlada o retardada. En el caso de que se utilice una cápsula como forma de administración oral, otra realización incluye una cápsula que comprende gelatina, polisacáridos o polímeros sintéticos. En una realización particular, la cápsula comprende hidroxipropilmetilcelulosa.
Los materiales de cápsula adecuados según la invención se seleccionan de entre gelatina, derivados de celulosa, almidón, derivados de almidón, quitosano y plásticos sintéticos. En el caso de que se utilice gelatina como el material de la cápsula, puede utilizarse mezclado con otros aditivos seleccionados de entre polietilenglicol (PEG), glicerol, sorbitol, polipropilenglicol, copolímeros en bloque de PEO-PPO, y otros polialcoholes y poliéteres. En el caso de que se utilice un derivado de celulosa como el material de la cápsula, los polímeros preferentes son hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, metilcelulosa, hidroximetilcelulosa e hidroxietilcelulosa. En el caso de que se utilicen plásticos sintéticos como el material de la cápsula, son materiales preferentes polietileno, policarbonato, poliéster, polipropileno y tereftalato de polietileno. Resultan particularmente preferentes, polietileno, policarbonato o tereftalato de polietileno.
Entre las formas de administración líquidas adecuadas para la administración oral se incluyen, a título ilustrativo, emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Las formas de administración líquidas típicamente comprenden el agente activo y un diluyente inerte, tal como, por ejemplo, agua u otros solventes, agentes solubilizadores y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites (por ejemplo, aceites de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácido graso de sorbitán, y mezclas de los mismos. Las suspensiones pueden contener agentes de suspensión, tales como, por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilén sorbitol y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, y mezclas de los mismos.
En caso de estar destinados a la administración oral, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden envasarse en una forma de administración unitaria. La expresión "forma de administración unitaria" se refiere a una unidad físicamente discreta adecuada para la administración en un paciente, es decir, cada unidad contiene una cantidad predeterminada del agente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, sola o en combinación con una o más unidades adicionales. Por ejemplo, dichas formas de administración unitaria pueden ser cápsulas, tabletas, píldoras y similares.
En otra realización, las composiciones de la invención resultan adecuadas para la administración inhalada, y típicamente se encuentran en forma de un aerosol o unos polvos. Dichas composiciones se administran generalmente utilizando dispositivos de administración bien conocidos, tales como un nebulizador, polvos secos o un inhalador de dosis medida. Los dispositivos nebulizadores producen una corriente de aire a alta velocidad que causa la pulverización de la composición en forma de una niebla que es arrastrada hacia el interior del tracto respiratorio del paciente. Una formulación nebulizadora ejemplar comprende el agente activo disuelto en un portador para formar una solución, o micronizada y combinada con un portador para formar una suspensión de partículas micronizadas de tamaño respirable. Los inhaladores de polvos secos administran el agente activo en forma de unos polvos de flujo libre que se dispersan en la corriente de aire del paciente durante la inspiración. Una formulación de polvos secos ejemplar comprende el agente activo mezclado en seco con un excipiente, tal como lactosa, almidón, manitol, dextrosa, ácido poliláctico, poliláctido-co-glicólido, y combinaciones de los mismos. Los inhaladores de dosis medida descargan una cantidad medida del agente activo utilizando gas propelente comprimido. Una formulación de dosis medida ejemplar comprende una solución o suspensión del agente activo en un propelente licuado, tal como un clorofluorocarburo o hidrofluoroalcano. Entre los componentes opcionales de dichas formulaciones se incluyen cosolventes, tales como etanol o pentano, y tensioactivos, tales como trioletato de sorbitán, ácido oleico, lecitina, glicerina y laurilsulfato sódico. Dichas composiciones se preparan típicamente mediante la adición de hidrofluoroalcano refrigerado o presurizado a un recipiente adecuado que contiene el agente activo, etanol (en caso de estar presente) y el tensioactivo (en caso de estar presente). Para preparar una suspensión, el agente activo se microniza y después se combina con el propelente. Alternativamente, puede prepararse una formulación de suspensión mediante secado por pulverización de un recubrimiento de tensioactivo sobre las partículas micronizadas del agente activo. A continuación, la formulación se carga en un cartucho de aerosol, que forma una parte del inhalador.
El compuesto 1 y las composiciones del mismo también pueden administrarse por vía parenteral, por ejemplo, por vía subcutánea, intravenosa, intramuscular o inyección intraperitoneal. Para dicha administración, el agente activo se proporciona en una solución, suspensión o emulsión estéril. Entre los solventes ejemplares para preparar dichas formulaciones se incluyen agua, solución salina, electrolitos, alcoholes de bajo peso molecular, tales como propilenglicol y polietilenglicol, aceites, aminoácidos, gelatina, azúcares; ésteres de ácido graso, tales como oleato de etilo, y similares. Las formulaciones parenterales pueden contener además uno o más antioxidantes, solubilizadores, estabilizantes, conservantes, agentes humectantes, emulsionantes y agentes dispersantes. Los tensioactivos, agentes estabilizantes o agentes de ajuste del pH (ácidos, bases o tampones) y antioxidantes adicionales resultan particularmente útiles para proporcionar estabilidad a la formulación, por ejemplo, para minimizar o evitar la hidrólisis de los enlaces éster y amida que pueden encontrarse presentes en el compuesto. Dichas formulaciones pueden esterilizarse mediante la utilización de un medio inyectable estéril, un agente esterilizante, la filtración, la radiación o el calor.
Entre los portadores acuosos fisiológicamente aceptables representativos se incluyen, a título de ejemplo, agua estéril para inyección, USP; inyección de dextrosa, USP (p. ej., dextrosa al 2,5, 5,0, 10 y 20 %, incluyendo inyección de dextrosa al 5 % (D5/W); inyección de dextrosa y cloruro sódico, USP (p. ej., dextrosa entre 2,5 y 10 % y cloruro sódico entre 0,12 (19 mEq de sodio) y 0,9 % (154 mEq de sodio)); inyección de manitol, USP (p. ej., manitol al 5, 10, 15, 20 y 25 %); inyección de Ringer, USP (p. ej., 147 mEq de sodio, 4 mEq de potasio, 4,5 mEq de calcio y 156 mEq de cloruro por litro); inyección de Ringer lactato, USP (p. ej., 2,7 mEq de calcio, 4 mEq de potasio, 130 mEq de sodio y 28 mEq de lactato por litro); inyección de cloruro sódico, USP (p. ej., cloruro sódico al 0,9 %) y similares.
Al administrarlo en un paciente, el compuesto 1 típicamente se diluye en aproximadamente 0,5 ml a aproximadamente 10 ml del portador acuoso por mg del compuesto 1, tal como entre aproximadamente 0,6 y aproximadamente 8 ml por mg.
En una realización particular, la formulación parenteral comprende una solución acuosa de ciclodextrina como el portador farmacéuticamente aceptable. Entre las ciclodextrinas adecuadas se incluyen moléculas cíclicas que contienen seis o más unidades de a-D-glucopiranosa unidas en las posiciones 1,4 mediante un enlace, tal como en amilasa, p-ciclodextrina o cicloheptaamilosa. Entre las ciclodextrinas ejemplares se incluyen derivados de ciclodextrina, tales como hidroxipropil y sulfobutil éter-ciclodextrinas, tales como hidroxipropil p-ciclodextrina y sulfobutil éter-p-ciclodextrina. Entre los tampones ejemplares para dichas formulaciones se incluyen tampones a base de ácido carboxílico, tales como las soluciones tampón de citrato, lactato y maleato. En una realización de la invención, una forma de administración intravenosa comprende compuesto 1 en una solución tamponada.
En una realización, el compuesto 1 o una composición farmacéutica del mismo son unos polvos liofilizados. Típicamente, los polvos liofilizados son estériles y se empaquetan en un vial o ampolla herméticamente sellado o recipiente similar.
El compuesto 1 también puede administrarse por vía transdérmica utilizando sistemas y excipientes de administración transdérmica conocidos. Por ejemplo, el compuesto 1 puede mezclarse con intensificadores de permeación, tales como propilenglicol, monolaurato de polietilenglicol, azacicloalcán-2-onas y similares, e incorporarse en un parche o sistema de administración similar. Pueden utilizarse excipientes adicionales, incluyendo agentes gelificantes, emulsionantes y tampones, en dichas composiciones transdérmicas, si se desea.
Agentes secundarios
El compuesto 1 puede resultar útil como el único tratamiento de una enfermedad o puede combinarse con uno o más agentes terapéuticos adicionales con el fin de obtener el efecto terapéutico deseado. De esta manera, en una realización, las composiciones farmacéuticas de la invención contienen otros fármacos que se coadministran con el compuesto 1. Por ejemplo, la composición puede comprender además uno o más fármacos (también denominados "agente secundario" o "agentes secundarios"). Dichos agentes terapéuticos son bien conocidos de la técnica y entre ellos se incluyen los antagonistas de receptor de adenosina, los antagonistas de receptor a-adrenérgico, los antagonistas de receptor p1-adrenérgico, los agonistas de receptor p2-adrenérgico, los antagonistas de acción dual de receptor p-adrenérgico/antagonistas de receptor ai, rompedores de productos finales de la glicación avanzada, inhibidores de la aldosterona sintasa, inhibidores de la aminopeptidasa N, andrógenos, inhibidores del enzima conversor de la angiotensina e inhibidores de acción dual del enzima conversor de la angiotensina/neprilisina, activadores y estimulantes del enzima 2 conversor de la angiotensina, vacunas de angiotensina II, anticoagulantes, agentes antidiabéticos, agentes antidiarreicos, agentes antiglaucoma, agentes antilipídicos, agentes antinociceptivos, agentes antitrombóticos, antagonistas de receptor ATi y antagonista de acción dual de receptor ATi/inhibidores de neprilisina y bloqueantes multifuncionales de receptor de angiotensina, antagonistas de receptor de bradiquinina, bloqueante de los canales del calcio., inhibidores de quimasa, digoxina, diuréticos, agonistas de dopamina, inhibidores del enzima conversor de la endotelina, antagonistas de receptor de endotelina, inhibidores de la HMG-CoA reductasa, estrógenos, agonistas y/o antagonistas de receptor de estrógeno, inhibidores de recaptación de monoamina, relajantes musculares, péptidos natriuréticos y sus análogos, antagonistas de receptor de aclaramiento del péptido natriurético, inhibidores de neprilisina, donantes de óxido nítrico, agentes antiinflamatorios no esteroideos, antagonistas de receptor de N-metil D-aspartato, agonistas de receptor de opioide, inhibidores de fosfodiesterasa, análogos de prostaglandina, agonistas de receptor de prostaglandina, inhibidores de la renina, inhibidores selectivos de la recaptación de la serotonina, bloqueante de los canales del sodio, estimulantes y activadores de la guanilato ciclasa soluble, antidepresivos tricíclicos, antagonistas de receptor de vasopresina, y combinaciones de los mismos. Se detallan en la presente memoria ejemplos específicos de dichos agentes.
Una realización específica incluye una composición farmacéutica que comprende compuesto 1 o una forma cristalina del mismo y un antagonista de receptor AT1, un inhibidor de enzima conversor de la angiotensina, un inhibidor de fosfodiesterasa (PDE), un inhibidor de renina, un diurético, o combinaciones de los mismos, y opcionalmente uno o más portadores farmacéuticamente aceptables.
De acuerdo con lo anterior, en todavía otro aspecto de la invención, una composición farmacéutica comprende compuesto 1, un segundo agente activo y un portador farmacéuticamente aceptable. También pueden incluirse en la composición tercer, cuarto, etc. agente activo. En la terapia de combinación, la cantidad de compuesto 1 que se administra, así como la cantidad de agentes secundarios, puede ser inferior a la cantidad administrada típicamente en monoterapia.
El compuesto 1 puede mezclarse físicamente con el segundo agente activo para formar una composición que contiene ambos agentes, o cada agente puede encontrarse presente en composiciones separadas y diferentes que se administran en el paciente simultáneamente o en tiempos separados. Por ejemplo, el compuesto 1 puede combinarse con un segundo agente activo utilizando procedimientos y equipos convencionales para formar una combinación de agentes activos que comprende compuesto 1 y un segundo agente activo. Además, los agentes activos pueden combinarse con un portador farmacéuticamente aceptable para formar una composición farmacéutica que comprende compuesto 1, y un segundo agente activo y un portador farmacéuticamente aceptable. En dicha realización, los componentes de la composición típicamente se mezclan o combinan para crear una mezcla física. A continuación, la mezcla física se administra en una cantidad terapéuticamente eficaz utilizando cualquiera de las vías indicadas en la presente memoria.
Alternativamente, los agentes activos pueden mantenerse separados y diferentes antes de la administración en el paciente. En dicha realización, los agentes no se mezclan físicamente entre sí antes de la administración, sino que se administran simultáneamente o en tiempos separados en forma de composiciones separadas. Dichas composiciones pueden envasarse separadamente o pueden envasarse juntas en un kit. En el caso de que se administren en tiempos separados, el agente secundario típicamente se administra menos de 24 horas después de la administración del compuesto 1, entre concurrentemente con la administración del compuesto de la invención y aproximadamente 24 horas después de la dosis. Lo anterior también se denomina administración secuencial. De esta manera, el compuesto 1 puede administrarse por vía oral simultánea o secuencialmente con otro agente activo utilizando dos tabletas, con una tableta para cada agente activo, en donde secuencial puede significar la administración inmediatamente después de la administración del compuesto 1 o en algún tiempo predeterminado posterior (por ejemplo, una hora después o tres horas después). También se encuentra contemplado que el agente secundario se administre más de 24 horas después de la administración del compuesto 1. Alternativamente, la combinación puede administrarse por vías de administración diferentes, es decir, una oral y la otra mediante inhalación.
En una realización, el kit comprende una primera forma de administración que comprende compuesto 1 y por lo menos una forma de administración adicional que comprende uno o más de los agentes secundarios indicados en la presente memoria, en cantidades suficientes para llevar a cabo los métodos de la invención. La primera forma de administración y la segunda (o tercera, etc.) forma de administración juntas comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de agentes activos para el tratamiento o la prevención de una enfermedad o condición médica en un paciente.
El agente o agentes secundarios, en caso de incluirse, se encuentran presentes en una cantidad terapéuticamente eficaz, de manera que se administran típicamente en una cantidad que produce un efecto terapéuticamente beneficioso al coadministrarse con el compuesto 1 de la invención. El agente secundario puede encontrarse en forma de una sal, solvato, estereoisómero ópticamente puro, y similar farmacéuticamente aceptable. El agente secundario también puede encontrarse en la forma de un profármaco, por ejemplo, un compuesto que presenta un grupo ácido carboxílico que ha sido esterificado. De esta manera, se pretende que los agentes secundarios indicados en la presente memoria incluyan la totalidad de dichas formas, y se encuentran disponibles comercialmente o pueden prepararse utilizando procedimientos y reactivos convencionales.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista de receptor de adenosina, entre los ejemplos del cual se incluyen naxifilina, rolofilina, SLV-320, teofilina y tonapofilina.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista de receptor a-adrenérgico, entre los ejemplos del cual se incluyen doxazosina, prazosina, tamsulosina y terazosina.
El compuesto 1 también puede administrarse en combinación con un antagonista de receptor p1-adrenérgico ("p1-bloqueante"), entre los ejemplos del cual se incluyen acebutolol, alprenolol, amosulalol, arotinolol, atenolol, befunolol, betaxolol, bevantolol, bisoprolol, bopindolol, bucindolol, bucumolol, bufetolol, bufuralol, bunitrolol, bupranolol, bubridina, butofilolol, carazolol, carteolol, carvedilol, celiprolol, cetamolol, cloranolol, dilevalol, epanolol, esmolol, indenolol, labetolol, levobunolol, mepindolol, metipranolol, metoprolol, tal como succinato de metoprolol y tartrato de metoprolol, moprolol, nadolol, nadoxolol, nebivalol, nipradilol, oxprenolol, penbutolol, perbutolol, pindolol, practolol, pronetalol, propranolol, sotalol, sufinalol, talindol, tertatolol, tilisolol, timolol, toliprolol, xibenolol, y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el antagonista p1 se selecciona de entre atenolol, bisoprolol, metoprolol, propranolol, sotalol, y combinaciones de los mismos. Típicamente, el p1-bloqueante se administra en una cantidad suficiente para proporcionar aproximadamente 2 a 900 mg por dosis.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agonista de receptor p2-adrenérgico, entre los ejemplos del cual se incluyen albuterol, bitolterol, fenoterol, formoterol, indacaterol, isoetarina, levalbuterol, metaproterenol, pirbuterol, salbutamol, salmefamol, salmeterol, terbutalina, vilanterol y similares. Típicamente, el agonista de receptor p2-adrenérgico se administra en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 0,05 y 500 |jg por dosis.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un rompedor de producto final de glicación avanzada (AGE, por sus siglas en inglés), entre los ejemplos del cual se incluyen alagebrium (o ALT-711) y TRC4149.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista de aldosterona, entre los ejemplos del cual se incluyen eplerenona, espironolactona y combinaciones de los mismos. Típicamente, el antagonista de aldosterona se administra en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 5 y 300 mg al día.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un inhibidor de aminopeptidasa N o dipeptidilpeptidasa III, entre los ejemplos del cual se incluyen bestatina y PC18 (2-amino-4-metilsulfonilbutano tiol, metionina tiol).
El compuesto 1 también puede administrarse en combinación con un inhibidor de enzima conversor de la angiotensina (ACE), entre los ejemplos del cual se incluyen accuprilo, alaceprilo, benazeprilo, benazeprilat, captoprilo, ceranaprilo, cilazaprilo, delaprilo, enalaprilo, enalaprilat, fosinoprilo, fosinoprilat, imidaprilo, lisinoprilo, moexiprilo, monoprilo, moveltiprilo, pentoprilo, perindoprilo, quinaprilo, quinaprilat, ramiprilo, ramiprilat, acetato de saralasin, espiraprilo, temocaprilo, trandolaprilo, zofenoprilo, y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el inhibidor de ACE se selecciona de entre benazeprilo, captoprilo, enalaprilo, lisinoprilo, ramiprilo y combinaciones de los mismos. Típicamente, el inhibidor de ACE se administra en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 1 y 150 mg al día.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un inhibidor de acción dual del enzima conversor de la angiotensina/neprilisina (ACE/NEP), entre los ejemplos del cual se incluyen: AVE-0848 (ácido (4S,7S,12bR)-7-[3-methyl-2(S)-sulfanylbutyramido]-6-oxo-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydropyrido[2,1-a][2]-benzazepín-4-carboxílico); AVE-7688 (ilepatrilo) y su compuesto parental; BMS-182657 (ácido 2-[2-oxo-3(s)-[3-fenil-2(S)-sulfanilpropionamido]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-1-benzazepín-1-il]acético); CGS-35601 (N-[1-[4-metil-2(S)-sulfanilpentanamido]ciclopentilcarbonil]-L-triptófano); fasidotrilo; fasidotrilato; enalaprilat; e R-32935 (ácido (3R,6S,9aR)-6-[3(S)-metil-2(S)sulfanilpentanamido]-5-oxoperhidrotiazolo[3,2-a]azepín-3-carboxílico); gempatrilat; MDL-101264 (ácido (4S,7S,12bR)-7-[2(S)-(2-morfo\inoaceti\tio)-3-feni\propionamido]-6-oxo-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahidropindo[2,1-a][2]benzazepín-4-carboxílico); MDL-10l287 (ácido [4S-[4a,7a(R*), 12b6]]-7-[2-(carboximeti\)-3-feni\propionamido]-6-oxo-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahidropirido[2,1-a][2]benzazepín-4-carboxílico); omapatrNat; RB-105 (N-[2(s)-(mercaptometi\)-3(R)-feni\buti\]-L-a\anina); sampatrilat; SA-898 ((2R,4R)-N-[2-(2-hidroxifeni\)-3-(3-mercaptopropioni\)tiazo\idín-4-i\carboni\]-L-feni\a\anina); Sch-50690 (N-[1(S)-carboxi-2-[N2-(metanosu\foni\)-L-\isi\amino]eti\]-L-va\i\-L-tirosina), y combinaciones de \os mismos, también pueden estar inc\uidos. En una rea\ización particu\ar, e\ inhibidor de ACE/n Ep se se\ecciona de entre: AVE-7688, ena\apri\at, fasidotri\o, fasidotri\ato, omapatri\at, sampatri\at, y combinaciones de \os mismos.
E\ compuesto 1 puede administrarse en combinación con un activador o estimu\ante de\ enzima 2 conversor de angiotensina (ACE2).
E\ compuesto 1 puede administrarse en combinación con una vacuna de angiotensina II, entre \os ejemp\os de\ cua\ se inc\uyen ATR12181 y CYT006-AngQb.
E\ compuesto 1 puede administrarse en combinación con un anticoagu\ante, entre \os ejemp\os de\ cua\ se inc\uyen: coumarinas, ta\es como warfarina, heparina e inhibidores directos de \a trombina, ta\es como argatrobán, biva\irudina, dabigatrán y \epirudina.
E\ compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agente antidiabético, entre \os ejemp\os de\ cua\ se inc\uyen fármacos inyectab\es, así como fármacos ora\mente eficaces, y combinaciones de \os mismos. Entre \os ejemp\os de fármacos inyectab\es se inc\uyen \a insu\ina y derivados de \a insu\ina. Entre \os ejemp\os de fármacos ora\mente eficaces se inc\uyen: biguanidas, ta\es como metformina; antagonistas de\ g\ucagón; inhibidores de \a ag\ucosidasa, ta\es como acarbosa y mig\ito\; inhibidores de \a dipeptidi\-peptidasa IV (inhibidores de DPP-IV), ta\es como aLOg\iptina, denag\iptina, \inag\iptina, saxag\iptina, sitag\iptina y vi\dag\iptina; meg\itinidas, ta\es como repag\inida; oxadiazo\idindionas; su\foni\ureas, ta\es como c\orpropamida, g\imepirida, g\ipizida, g\ibúrido y to\azamida; tiazo\idindionas, ta\es como piog\itazona y rosig\itazona, y combinaciones de \os mismos.
E\ compuesto 1 puede administrarse en combinación con tratamientos antidiarreicos. Entre \as opciones de tratamiento representativas se inc\uyen so\uciones de rehidratación ora\ (SRO), \operamida, difenoxi\ato y subsa\ici\ato de bismuto.
E\ compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agente antig\aucoma, entre \os ejemp\os de\ cua\ se inc\uyen: agonistas a-adrenérgicos, ta\es como brimonidina; antagonistas de receptor p1-adrenérgico; p1-b\oqueantes tópicos, ta\es como betaxo\o\, \evobuno\o\ y timo\o\; inhibidores de \a anhidrasa carbónica, ta\es como acetazo\amida, brinzo\amida o dorzo\amida; agonistas co\inérgicos, ta\es como cevime\ina y DMXB-anabaseína; compuestos de epinefrina; mitóticos, ta\es como \a pi\ocarpina, y aná\ogos de prostag\andina.
E\ compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agente anti\ípídico, entre \os ejemp\os de\ cua\ se inc\uyen: inhibidores de \a proteína de transferencia de éster de co\esteri\o (CETP, por sus sig\as en ing\és), ta\ como anacetrapib, da\cetrapib y torcetrapib; estatinas, ta\es como atorvastatina, fluvastatina, \ovastatina, pravastatina, rosuvastatina y simvastatina, y combinaciones de \os mismos.
E\ compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agente antitrombótico, entre \os ejemp\os de\ cua\ se inc\uyen: aspirina, agentes antip\aquetarios, ta\es como c\opidogre\, prasugre\ y tic\opidina; heparina, y combinaciones de \os mismos.
E\ compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista de receptor AT1, también conocidos como b\oqueantes de receptor de tipo 1 de \a angiotensina II (ARB, por sus sig\as en ing\és). Entre \os ARB representativos se inc\uyen abitesartan, azi\sartán (p. ej., azi\sartán medoxomi\o), benci\-\osartán, candesartán, candesartan ci\exeti\o, e\isartán, embusartán, eno\tasosartán, eprosartán, EXP3174, fonsartán, forasartán, g\ici\-\osartán, irbesartán, isoteo\ina, \osartán, medoxomi\o, mi\fasartán, o\mesartán (p. ej., o\mesartán medoxomi\o), opomisartán, pratosartán, ripisartán, saprisartán, sara\asina, sarmesina, TAK-591, tasosartán, te\misartán, va\sartán, zo\asartán, y combinaciones de \os mismos. En una rea\ización particu\ar, e\ ARB se se\ecciona de entre azi\sartán medoxomi\o, candesartán ci\exeti\o, eprosartán, irbesartán, \osartán, o\mesartán medoxomi\o, saprisartán, tasosartán, te\misartán, va\sartán y combinaciones de \os mismos. Entre \as sa\es y/o profármacos ejemp\ares se inc\uyen candesartán ci\exeti\o, mesi\ato de eprosartán, sa\ potásica de \osartán y o\mesartán medoxomi\o. Típicamente, e\ ARB se administra en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 4 y 600 mg por dosis, con dosis diarias ejemp\ares comprendidas entre 20 y 320 mg a\ día.
E\ compuesto 1 también puede administrarse en combinación con un agente de acción dua\, ta\ como un inhibidor antagonista de receptor AT1/inhibidor de nepri\isina (ARB/NEP), entre \os ejemp\os de\ cua\ se inc\uyen \os compuestos indicados en \as patentes US n° 7.879.896 y n° 8.013.005, ambas de A\\egretti et a\., ta\ como e\ compuesto ácido 4'-{2-etoxi-4-eti\-5-[((S)-2-mercapto-4-meti\pentanoi\amino)-meti\]imidazo\-1-i\meti\}-3'-f\uorobifeni\-2-carboxí\ico.
El compuesto 1 también puede administrarse en combinación con bloqueantes multifuncionales de receptor de angiotensina tal como se indica en Kurtz y Klein (2009) Hypertension Research 32:826-834.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista de receptor de bradiquinina, por ejemplo icatibant (HOE-140). Se espera que dicha terapia de combinación puede presentar la ventaja de evitar el angioedema u otras consecuencias no deseadas de los niveles elevados de bradiquinina.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un bloqueante de los canales del calcio, entre los ejemplo sdel cual se incluyen amlodipina, anipamilo, aranipina, barnidipina, benciclano, benidipina, bepridilo, clentiazem, cilnidipina, cinarizina, diltiazem, efonidipina, elgodipina, etafenona, felodipina, fendilina, flunarizina, galopamilo, isradipina, lacidipina, lercanidipina, lidoflazina, lomerizina, manidipina, mibefradilo, nicardipina, nifedipina, niguldipina, niludipina, nilvadipina, nimodipina, nisoldipina, nitrendipina, nivaldipina, perhexilina, prenilamina, riosidina, semotiadilo, terodilina, tiapamilo, verapamilo, y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el bloqueante de los canales del calcio se selecciona de entre amlodipina, bepridilo, diltiazem, felodipina, isradippina, lacidipina, nicardipina, nifedipina, niguldipina, nimodipina, nisoldipina, riosidina, verapamilo y combinaciones de los mismos. Típicamente, el bloqueante de canales del calcio se administra en una cantidad suficiente para proporcionar aproximadamente 2 a 500 mg por dosis.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un inhibidor de quimasa, tal como TPC-806 y 2-(5-formilamino-6-oxo-2-fenil-1,6-dihidropirimidín-1-il)-N-[{3,4-dioxo-1-fenil-7-(2-piridiloxi)} -2-heptil]acetamida (NK3201).
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un diurético, entre los ejemplos del cual se incluyen: inhibidores de anhidrasa carbónica, tales como acetazolamida y diclorfenamida; diuréticos del asa, que incluyen derivados de sulfonamida, tales como acetazolamida, ambúsido, azosemida, bumetanida, butazolamida, cloraminofenamida, clofenamida, clopamida, clorexolona, disulfamida, etoxzolamida, furosemida, mefrusida, metazolamida, piretanida, torsemida, tripamida y xipamida, así como diuréticos no sulfonamidas, tales como ácido etacrínico y otros compuestos de ácido fenoxiacético, tales como ácido tienílico, indacrinona y quincarbato; diuréticos osmóticos, tales como manitol; diuréticos controladores del potasio, que incluyen antagonistas de aldosterona, tales como espironolactona e inhibidores de los canales del Na+, tales como amilorida y trimatereno; tiazida y diuréticos de tipo tiazida, tales como altiazida, bendroflumetiazida, bencilhidroclorotiazida, benztiazida, butiazida, clortalidona, clorotiazida, ciclopentiazida, ciclotiazida, epitiazida, etiazida, fenquizona, flumetiazida, hidroclorotiazida, hidroflumetiazida, indapamida, metilclotiazida, meticrano, metolazona, paraflutizida, politiazida, quinetazona, teclotiazida y triclorometiazida; y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el diurético se selecciona de entre amilorida, bumetanida, clorotiazida, clortalidona, diclorfenamida, ácido etacrínico, furosemida, hidroclorotiazida, hidroflumetiazida, indapamida, metilclotiazida, metolazona, torsemida, triamtereno y combinaciones de los mismos. El diurético se administra en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 5 y 50 mg al día, más típicamente entre 6 y 25 mg al día, en donde las dosis habituales son de 6,25 mg, 12,5 mg o 25 mg al día.
El compuesto 1 también puede administrarse en combinación con un inhibidor de enzima conversor de la endotelina (ECE), entre los ejemplos del cual se incluyen fosforamidón, CGS 26303 y combinaciones de los mismos.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista de receptor de endotelina, entre los ejemplos del cual se incluyen: antagonistas selectivos de receptor de endotelina que afectan a los receptores de endotelina A, tales como avosentán, ambrisentán, atrasentán, BQ-123, clazosentán, darusentán, sitaxentán y zibotentán, y antagonistas duales de receptor de endotelina que afectan tanto a receptores de endotelina A como de endotelina B, tales como bosentán, macitentán y tezosentán.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con uno o más inhibidores de la HMG-CoA reductasa, que también se conocen como estatinas. Entre las estatinas representativas se incluyen atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina y simvastatina.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un inhibidor de la recaptación de monoamina, entre los ejemplos del cual se incluyen inhibidores de recaptación de norepinefrina, tales como atomoxetina, buproprión y el metabolito del buproprión, hidroxibuproprión, maprotilina, reboxetina y viloxazina; inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina (ISRS), tales como citalopram, y el metabolito del citalopram, desmetilcitalopram, dapoxetina, escitalopram (p. ej., oxalato de escitalopram), fluoxetina y el metabolito desmetilo de la fluoxetina, norfluoxetina, fluvoxamina (p. ej., maleato de fluvoxamina), paroxetina, sertralina y el metabolito de sertralina, desmetilsertralina; inhibidores duales de la recaptación de serotonina-norepinefrina (IRSN), tales como bicifadina, duloxetina, milnaciprán, nefazodona y venlafaxina, y combinaciones de los mismos.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un relajante muscular, entre los ejemplos del cual se incluyen: carisoprodol, clorzoxazona, ciclobenzaprina, difunisal, metaxalona, metocarbamol y combinaciones de los mismos.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un péptido natriurético o análogo, entre los ejemplos del cual se incluyen: carperitida, CD-NP (Nile Therapeutics), CU-NP, nesiritida, PL-3994 (Palatin Technologies, Inc.), ularitida, cenderitida, y los compuestos indicados en Ogawa et al (2004) J.Biol.Chem. 279:28625-31,2012. Dichos compuestos también se denominan agonistas del receptor A del péptido natriurético (A-RPN). En otra realización, el compuesto 1 se administra en combinación con un antagonista de receptor de degradación del péptido natriurético (NPR-C), tal como SC-46542, cANF (4-23) y AP-811 (Veale (2000) Bioorg. Med. Chem. Lett. 10:1949-52). Por ejemplo, se ha observado sinergia de AP-811 en combinación con el inhibidor de NEP, tiorfano (Wegner (1995) Clin. Exper. Hypert.
17:861-876).
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un inhibidor de neprilisina (NEP)), entre los ejemplos del cual se incluyen: AHU-377; candoxatrilo; candoxatrilat; dexecadotrilo (bencil-éster de (+)-N-[2(R)-(acetiltiometil)-3-fenilpropionil]glicina); CGS-24128 (ácido 3-[3-(bifenil-4-il)-2-(fosfonometilamino)propionamido]propiónico); CGS-24592 (ácido ('SJ-3-[3-(bifenil-4-il)-2-(fosfonometilamino)propionamido]propiónico); c GS-25155 (bencil-éster de N-[9(RJ-(acetiltiometil)-10-oxo-1-azaciclodecán-2('SJ-ilcarbonil]-4('R)-hidroxi-L-prolina); derivados del ácido 3-(1-carbamoilciclohexil)propiónico descritos en el documento n°WO 2006/027680, de Hepworth et al. (Pfizer Inc.); JMV-390-1 (2('RJ-bencil-3-(N-hidroxicarbamoil)propionil-L-isoleucil-L-leucina); ecadotrilo; fosforamidón; retrotiorfán; RU-42827 (2-(mercaptometil)-N-(4-piridinil)bencenopropionamida); RU-44004 (N-(4-morfolinil)-3-fenil-2-(sulfanilmetil)propionamida); SCH-32615 ((SJ-N-[N-(1-carboxi-2-feniletil)-L-fenilalanil]-p-alanina) y su profármaco, SCH-34826 (('SJ-N-[N-[1-[[(2,2-dimetil-1,3-dioxolán-4-il)metoxi]carbonil]-2-feniletil]-L-fenilalanil]-p-alanina); sialorfina; SCH-42495 (etil-éster de N-[2('S)-(acetilsulfanilmetil)-3-(2-metilfenil)propionil]-L-metionina); espinorfina; SQ-28132 (N-[2-(mercaptometil)-1-oxo-3-fenilpropil]leucina); SQ-28603 (N-[2-(mercaptometil)-1-oxo-3-fenilpropil]-p-alanina); SQ-29072 (ácido 7-[[2-(mercaptometil)-1-oxo-3-fenilpropil]amino]heptanoico); tiorfán y su profármaco, racecadotrilo; UK-69578 (ácido cis-4-[[[1-[2-carboxi-3-(2-metoxietoxi)propil]ciclopentil]carbonil]amino]ciclohexanocarboxílico); UK-447,841 (ácido 2-{1-[3-(4-clorofenil)propilcarbamoil]-ciclopentilmetil}-4-metoxibutírico); UK-505,749 (ácido ('RJ-2-metil-3-{1-[3-(2-metilbenzotiazol-6-il)propilcarbamoil]ciclopentil}propiónico); ácido 5-bifenil-4-il-4-(3-carboxipropionilamino)-2-metilpentanoico y etil-éster de ácido 5-bifenil-4-il-4-(3-carboxipropionilamino)-2-metilpentanoico (documento n° WO 2007/056546); daglutrilo [ácido (3S,2,R)-3-{1-[2'-(etoxicarbonil)-4'-fenilbutil]-ciclopentán-1-carbonilamino}-2,3,4,5-tetrahidro-2-oxo-1H-1-benzazepín-1-acético] descrito en el documento n° WO 2007/106708, de Khder et al. (Novartis AG); y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el inhibidor de NEP se selecciona de entre AHU-377, candoxatrilo, candoxatrilat, CGS-24128, fosforamidón, SCH-32615, SCH-34826, SQ-28603, tiorfán, y combinaciones de los mismos. En una realización particular, el inhibidor de NEP es un compuesto, tal como daglutrilo o CGS-26303 (ácido [N-[2-(bifenil-4-il)-1 ^S)-(1H-tetrazol-5-il)etil]amino]metilfosfónico), ambos con actividad como inhibidores del enzima conversor de endotelina (ECE) y de NEP. También pueden utilizarse otros compuestos de acción dual ECE/NEP. El inhibidor de NEP se administra en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 20 y 800 mg al día, con dosis diarias típicas comprendidas entre 50 y 700 mg al día, más habitualmente entre 100 y 600 o entre 100 y 300 mg al día.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un donante de óxido nítrico, entre los ejemplos del cual se incluyen: nicorandilo, nitratos orgánicos, tales como tetranitrato de pentaeritritol, y sidnoniminas, tales como linsidomina y molsidomina.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agente antiinflamatorio no esteroideo (AINE), entre los ejemplos del cual se incluyen: acemetacina, ácido acetilsalicílico, alclofenac, alminoprofeno, amfenac, amiprilosa, aloxiprina, anirolac, apazona, azapropazona, benorilato, benoxaprofeno, bezpiperilón, broperamol, ácido buclóxico, carprofeno, clidanac, diclofenac, diflunisal, diftalona, enolicam, etodolac, etoricoxib, fenbufeno, fenclofenac, ácido fenclózico, fenoprofeno, fentiazac, feprazona, ácido flufenámico, flufenisal, fluprofeno, flurbiprofeno, furofenac, ibufenac, ibuprofeno, indometacina, indoprofeno, isoxepac, isoxicam, ketoprofeno, ketorolac, lofemizol, lornoxicam, meclofenamato, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, meloxicam, mesalamina, miroprofeno, mofebutazona, nabumetona, naproxeno, ácido niflúmico, oxaprozina, oxpinac, oxifenbutazona, fenilbutazona, piroxicam, pirprofeno, pranoprofeno, salsalato, sudoxicam, sulfasalazina, sulindac, suprofeno, tenoxicam, tiopinac, ácido tiaprofénico, tioxaprofeno, ácido tolfenámico, tolmetina, triflumidato, zidometacina, zomepirac, y combinaciones de los mismos. En una realizacion particular, el AINE se selecciona de entre etodolac, flurbiprofeno, ibuprofeno, indometacina, ketoprofeno, ketorolac, meloxicam, naproxeno, oxaprozina, piroxicam y combinaciones de los mismos.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista de receptor de N-metil-D-aspartato (NMDA), entre los ejemplos del cual se incluyen amantadina, dextrometorfano, dextropropoxifeno, ketamina, ketobemidona, memantina, metadona y similares.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agonista de receptor de opioide (también denominado analgésico opioide). Entre los agonistas de receptor opioide representativos se incluyen: buprenorfina, butorfanol, codeína, dihidrocodeína, fentanilo, hidrocodona, hidromorfona, levalorfano, levorfanol, meperidina, metadona, morfina, nalbufina, nalmefeno, nalorfina, naloxona, naltrexona, nalorfina, oxicodona, oximorfona, pentazocina, propoxifeno, tramadol y combinaciones de los mismos. En determinadas realizaciones, el agonista de receptor opioide se selecciona de entre codeína, dihidrocodeína, hidrocodona, hidromorfona, morfina, oxicodona, oximorfona, tramadol y combinaciones de los mismos.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un inhibidor de fosfodiesterasa (PDE), particularmente un inhibidor de PDE-V. Entre los inhibidores de PDE-V representativos se incluyen avanafilo, lodenafilo, mirodenafilo, sildenafilo (Revatio®), tadalafilo (Adcirca®), vardenafilo (Levitra®) y udenafilo.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un análogo de prostaglandina (también denominado prostanoide o análogo de prostaciclina). Entre los análogos representativos de prostaglandina se incluyen beraprost sodio, bimatoprost, epoprostenol, iloprost, latanoprost, tafluprost, travoprost y treprostinilo, en donde bimatoprost, latanoprost y tafluprost son de particular interés.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agonista de receptor de prostaglandina, entre los ejemplos del cual se incluyen bimatoprost, latanoprost, travoprost, y similares.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un inhibidor de renina, entre los ejemplos del cual se incluyen aliskirén, enalkirén, remikirén y combinaciones de los mismos.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un inhibidor selectivo de recaptación de serotonina (ISRS), entre los ejemplos del cual se incluyen: citalopram y el metabolito de citalopram, desmetil-citalopram, dapoxetina, escitalopram (p. ej., oxalato de escitalopram), fluoxetina y el metabolito desmetilo de la fluoxetina, norfluoxetina, fluvoxamina (p. ej., maleato de fluvoxamina), paroxetina, sertralina y el metabólito de la sertralina, desmetilsertralina, y combinaciones de los mismos.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un agonista de receptor de serotonina 5-HT-id, entre los ejemplos del cual se incluyen triptanos, tales como almotriptán, avitriptán, eletriptán, frovatriptán, naratriptán, rizatriptán, sumatriptán y zolmitriptán.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un bloqueante de los canales de sodio, entre los ejemplos del cual se incluyen carbamazepina, fosfenitoína, lamotriglina, lidocaína, mexiletina, oxcarbazepina, fenitoína y combinaciones de los mismos.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un estimulante o activador soluble de la guanilato ciclasa, entre los ejemplos del cual se incluyen ataciguat, riociguat y combinaciones de los mismos.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antidepresivo tricíclico (ADT), entre los ejemplos del cual se incluyen amitriptilina, amitriptillinóxido, butriptilina, clomipramina, demexiptilina, desipramina, dibenzepina, dimetacrina, dosulepina, doxepina, imipramina, imipraminóxido, lofepramina, melitracén, metapramina, nitroxazepina, nortriptilina, noxiptilina, pipofezina, propizepina, protriptilina, quinupramina, y combinaciones de los mismos.
El compuesto 1 puede administrarse en combinación con un antagonista de receptor de vasopresina, entre los ejemplos del cual se incluyen conivaptán y tolvaptán.
Los agentes terapéuticos secundarios combinados también pueden resultar útiles en terapia de combinación adicional con el compuesto de la invención. Por ejemplo, el compuesto de la invención puede combinarse con un diurético y un ARB, o un bloqueante de los canales del calcio y un ARB, o un diurético y un inhibidor de ACE, o un bloqueante de los canales del calcio. y una estatina. Entre los ejemplos específicos se incluyen una combinación del inhibidor de ACE, enalapril (en la forma de sal maleato) y el diurético hidroclorotiazida, que se comercializa bajo la marca Vaseretic®, o una combinación del bloqueante de canales de calcio amlodipina (en la forma de sal besilato) y el ARB olmesartrán (en la forma de profármaco medoxomilo), o una combinación de un bloqueante de canales de calcio y una estatina, la totalidad de los cuales también puede utilizarse con compuesto 1. Otros agentes terapéuticos, tales como agonistas de receptor a2-adrenérgico y antagonistas de receptor de vasopresina también pueden resultar útiles en terapia de combinación. Entre los agonistas a2-adrenérgicos ejemplares se incluyen clonidina, dexmedetomidina y guanfacina.
Las formulaciones siguientes ilustran composiciones farmacéuticas representativas de la invención.
Cápsulas de gelatina dura ejemplares para la administración oral
Se mezclaron a fondo el compuesto de la invención (50 g), 440 g de lactosa seca por pulverización y 10 mg de estearato de magnesio. A continuación, la composición resultante se cargó en cápsulas de gelatina dura (500 mg de composición en cada cápsula). Alternativamente, se mezcló a fondo compuesto 1 (20 mg) con almidón (89 mg), celulosa microcristalina (89 mg) y estearato de magnesio (2 mg). A continuación, la mezcla se pasó por un tamiz US de malla del n° 45 y se cargó en una cápsula de gelatina dura (200 mg de composición en cada cápsula).
Alternativamente, se mezclaron a fondo compuesto 1 (30 g), un agente secundario (20 g), 440 g de lactosa seca por pulverización y 10 g de estearato de magnesio, y se procesaron tal como se ha indicado anteriormente.
Formulación ejemplar de cápsula de gelatina para la administración oral
Se mezcló a fondo compuesto 1 (100 mg) con monooleato de sorbitán polioxietileno (50 mg) y almidón en polvo (250 mg). A continuación, la mezcla se cargó en una cápsula de gelatina (400 mg de composición en cada cápsula). Alternativamente, se mezcló a fondo compuesto 1 (70 mg) y un agente secundario (30 mg) con monooleato de sorbitán polioxietileno (50 mg) y almidón en polvo (250 mg), y la mezcla resultante se cargó en una cápsula de gelatina (400 mg de composición en cada cápsula).
Alternativamente, se mezcló a fondo compuesto 1 (40 mg) con celulosa microcristalina (Aivcel PH 103, 259,2 mg) y estearato de magnesio (0,8 mg). A continuación, la mezcla se cargó en una cápsula de gelatina (tamaño n° 1, blanca, opaca) (300 mg de composición en cada cápsula).
Cápsula ejemplar de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) para la administración oral
Se cargó el compuesto 1 (50 mg o 100 mg) directamente en una cápsula de HPMC.
Formulación ejemplar de tableta para la administración oral
El compuesto 1 (10 mg), almidón (45 mg) y celulosa microcristalina (35 mg) se pasaron por un tamiz US de malla del n° 20 y se mezclaron a fondo. Los gránulos producidos de esta manera se secaron a una temperatura de entre 50°C y 60°C y se pasaron por un tamiz US de malla del n° 16. Se mezcló una solución de polivinilpirrolidona (4 mg en forma de una solución al 10 % en agua estéril) con carboximetil-almidón sódico (4,5 mg), estearato de magnesio (0,5 mg) y talco (1 mg), y esta mezcla seguidamente se pasó por un tamiz US de malla del n° 16. El carboximetil-almidón sódico, el estearato de magnesio y el talco seguidamente se añadieron a los gránulos. Tras la mezcla, la mezcla se comprimió en una tableteadora, proporcionando una tableta que pesaba 100 mg.
Alternativamente, se mezcló a fondo compuesto 1 (250 mg) con celulosa microcristalina (400 mg), dióxido de silicio ahumado (10 mg) y ácido esteárico (5 mg). A continuación, la mezcla se comprimió para formar tabletas (665 mg de composición en cada tableta).
Alternativamente, se mezcló a fondo compuesto 1 (400 mg) con almidón de maíz (50 mg), croscarmelosa sódica (25 mg), lactosa (120 mg) y estearato de magnesio (5 mg). A continuación, la mezcla se comprimió para formar una tableta monorranurada (600 mg de composición en cada tableta).
Alternativamente, se mezcló a fondo compuesto 1 (100 mg) con almidón de maíz (100 mg), con una solución acuosa de gelatina (20 mg). La mezcla se secó y se molió hasta formar unos polvos finos. A continuación, se mezcló celulosa microcristalina (50 mg) y estearato de magnesio (5 mg) con la formulación de gelatina, se granuló y la mezcla resultante se comprimió para formar tabletas (100 mg del compuesto de la invención en cada tableta).
Formulación ejemplar en suspensión para la administración oral
Se mezclaron los ingredientes siguientes para formar una suspensión que contenía 100 mg de compuesto 1 por cada 10 ml de suspensión:
Figure imgf000023_0001
Formulación líquida ejemplar para la administración oral
La formulación líquida adecuada es una con un tampón a base de ácido carboxílico, tal como soluciones tampón de citrato, lactato y maleato. Por ejemplo, el compuesto 1 (que puede premezclarse con DMSO) se combina con un tampón de citrato amónico 100 mM y se ajusta el pH a 5, o se combina con una solución de ácido cítrico 100 mM y se ajusta el pH a 2. Dichas soluciones pueden incluir además un excipiente solubilizador, tal como una ciclodextrina, por ejemplo, la solución puede incluir hidroxipropil-p-ciclodextrina al 10 % en peso.
Entre otras formulaciones adecuadas se incluyen una solución de NaHCO3 al 5 %, con o sin ciclodextrina.
Formulación parenteral IV ejemplar para la administración mediante inyección
El compuesto 1 (0,2 g) se combinó con solución tampón de acetato sódico 0,4 M (2,0 ml). El pH de la solución resultantes se ajustó a pH 4 utilizando ácido clorhídrico acuoso 0,5 N o hidróxido sódico acuoso 0,5 N, según se requiera, y después se añadió suficiente agua para inyección para proporcionar un volumen total de 20 ml. A continuación, la mezcla se filtró por un filtro estéril (0,22 micrómetros), proporcionando una solución estéril adecuada para la administración mediante inyección.
Las formulaciones siguientes ilustran composiciones farmacéuticas representativas de la presente invención.
Ejemplo de formulación A
Se preparó una solución congelada adecuada para preparar una solución inyectable, de la manera siguiente:
Figure imgf000024_0002
Procedimiento representativo: Los excipientes, en caso de haber, se disolvieron en aproximadamente 80 % del agua para inyección y se añadió y disolvió el compuesto 1 o 1'. Se ajustó el pH con hidróxido sódico 1 M a ph 3 a 4,5, y después se ajustó el volumen a 95 % del volumen final con agua para inyección. Se comprobó el pH y se ajustó, en caso necesario, y se ajustó el volumen al volumen final con agua para inyección. A continuación, se filtró a esterilidad la formulación con un filtro de 0,22 micrómetros y se introdujo en un vial estéril bajo condiciones asépticas. Se tapó el vial, se etiquetó y se almacenó bajo congelación.
Ejemplo de formulación B
Se prepararon unos polvos liofilizados o un sólido cristalino adecuado para la preparación de una solución inyectable, de la manera siguiente:
Figure imgf000024_0001
Procedimiento representativo: Los excipientes y/o agentes tamponadores, en caso de haber, se disolvieron en aproximadamente 60 % del agua para inyección. Se añadió el compuesto activo 1 o 1' y se disolvió y se ajustó el pH con hidróxido sódico 1 M a pH 3 a 4,5, y se ajustó el volumen a 95 % del volumen final con agua para inyección. Se comprobó el pH y se ajustó, en caso necesario, y se ajustó el volumen al volumen final con agua para inyección. A continuación, se filtró a esterilidad la formulación con un filtro de 0,22 micrómetros y se introdujo en un vial estéril bajo condiciones asépticas. A continuación, se liofilizó la formulación utilizando un ciclo de liofilización apropiado. Se tapó el vial (opcionalmente bajo vacío parcial o nitrógeno seco), se etiquetó y se almacenó bajo refrigeración.
Ejemplo de formulación C
Se preparó una solución inyectable para la administración intravenosa en un paciente a partir del Ejemplo de formulación B, anteriormente, de la manera siguiente:
Procedimiento representativo: Los polvos liofilizados del Ejemplo de formulación B (p. ej., que contiene 10 a 1000 mg de compuesto activo 1 o 1') se reconstituyeron con 20 ml de agua estéril y la solución resultante se diluyó adicionalmente con 80 ml de solución salina estéril en una bolsa de infusión de 100 ml. A continuación, se administró la solución diluida en el paciente por vía intravenosa durante 30 a 120 minutos.
Composiciones ejemplares para la administración mediante inhalación
El compuesto 1 (0,2 mg) se micronizó y después se combinó con lactosa (25 mg). Dicha mezcla combinada seguidamente se cargó en un cartucho de inhalación de gelatina. El contenido del cartucho se administró mediante la utilización de un inhalador de polvos secos, por ejemplo.
Alternativamente, se dispersó compuesto 1 micronizado (10 g) en una solución preparada mediante disolución de lecitina (0,2 g) en agua desmineralizada (200 ml). La suspensión resultante se secó por pulverización y después se micronizó, formando una composición micronizada que comprendía partículas con un diámetro medio inferior a aproximadamente 1,5 pm. A continuación, la composición micronizada se cargó en un cartuchos inhalador de dosis medida que contenía 1,1,1,2-tetrafluoroetano presurizado en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 10 pg y aproximadamente 500 pg del compuesto de la invención en cada dosis al administrarla con el inhalador.
Alternativamente, se disolvió el compuesto 1 (25 mg) en solución salina isotónica (125 ml) tamponada con citrato (pH 5). La mezcla se sometió a agitación y se sonicó hasta disolver el compuesto. Se comprobó el pH de la solución y se ajustó, en caso necesario, a pH 5 mediante la adición lenta de NaOH acuoso 1 N. La solución se administró mediante la utilización de un dispositivo nebulizador que proporcionaba entre aproximadamente 10 pg y aproximadamente 500 pg de compuesto 1 en cada dosis.
Ejemplos
Se proporcionan las Preparaciones y Ejemplos siguientes con el fin de ilustrar realizaciones específicas de la invención. Sin embargo, dichas realizaciones específicas no pretenden ser limitativas del alcance de la invención en modo alguno, a menos que se indique específicamente.
Las abreviaturas siguientes presentan los significados siguientes, a menos que se indique lo contrario, y cualquier otra abreviatura utilizada en la presente memoria y no definida presenta su significado estándar generalmente aceptado:
AcOH ácido acético
BOC f-butoxicarbonilo (-C(O)OC(CH3)3)
(BOC)2O dicarbonato de di-f-butilo
Bn bencilo
CPME éter ciclopentilmetílico
DCC 1,3-diciclohexilcarbodiimida
DCM diclorometano o cloruro de metileno
DIPE éter diisopropílico
DIPEA W,W-diisopropiletilamina
DMAP 4-dimetilaminopiridina
DMF W,W-dimetilformamida
Et3N trietilamina
EtOH etanol
Et2O éter dietílico
EtOAc acetato de etilo
MeCN acetonitrilo
NaHMDS bis(trimetilsilil)amida sódica
Pd(PPh3)4 tetrakis(trifenilfosfina)paladio (0)
PE éter de petróleo
SilicaCat®DPP-Pd catalizador de difenilfosfina paladio (II) basado en sílice
TFA ácido trifluoroacético
THF tetrahidrofurano
A menos que se señale lo contrario, todos los materiales, tales como reactivos, materiales de partida y solventes, se adquirieron de proveedores comerciales (tales como Sigma-Aldrich, Fluka Riedel-de Haen, y similares) y se utilizaron sin purificación adicional.
Las reacciones se llevaron a cabo bajo una atmósfera de nitrógeno, a menos que se señale lo contrario. El avance de las reacciones se siguió mediante cromatografía de capa fina (CCF), cromatografía líquida de alto rendimiento analítica (HPLC anal.) y espectrometría de masas, los detalles de las cuales se proporcionan en los ejemplos específicos. Generalmente, los solventes utilizados en la HPLC analítica fueron los siguientes: el solvente A era 98 % H2O/2 % MeCN/1,0 ml/l TFA; el solvente B era 90 % MeCN/10 % H2O/1,0 ml/l TFA.
Las reacciones se prepararon tal como se indica específicamente en cada preparación, por ejemplo; habitualmente se purificaron mezclas de reacción mediante extracción y otros métodos de purificación, tales como la cristalización dependiente de la temperatura y del solvente, y la precipitación. Además, se purificaron rutinariamente las mezclas de reacción mediante HPCL preparativa, típicamente utilizando empaquetamientos de columna Microsorb C18 y Microsorb BDS y eluyentes convencionales. El avance de las reacciones se midió típicamente mediante cromatografía líquida-espectrometría de masas (CL-EM). La caracterización de los isómeros se llevó a cabo mediante espectroscopía de efecto nuclear Overhauser (ENO). La caracterización de los productos de reacción se llevó a cabo rutinariamente mediante espectrometría de masas y RMN-1H. Para las mediciones de RMN, las muestras se disolvieron en solvente deuterado (CD3OD, CDCh, o DMSO-cfe), y se adquirieron los espectros de RMN-1H con un instrumento Varian Gemini 2000 (400 MHz) bajo condiciones de observación estándares. La identificación mediante espectrometría de masas de los compuestos se llevó a cabo típicamente utilizando un método de ionización por electropulverización (ESMS, por sus siglas en inglés) con un instrumento modelo API 150 EX de Applied Biosystems (Foster City, CA) o un instrumento modelo 120 LC/MSD de Agilent (Palo Alto, CA).
Técnicas de medición
Difracción de rayos X de los polvos
El análisis de difracción de rayos X de los polvos se llevó a cabo mediante la utilización de un difractómetro de rayos X Bruker D8-Advance. La fuente de rayos X era radiación de Cu-Ka con un voltaje de salida de 40 kV y una corriente de 40 mA. El instrumento se hizo funcionar en geometría de Bragg-Brentano y se utilizaron espejos de Goebel para obtener haces paralelos de rayos X. Cualquier divergencia en el haz estaba limitada por una ranura de divergencia vertical de 0,2° en la fuente y ranuras de Soller (2,5°) en la fuente y el detector. Para la medición, se aplicó suavemente una pequeña cantidad de polvos (5 a 25 mg) sobre un soporte de muestras de fondo cero de silicio para formar una superficie suave y se sometió a exposición de rayos X. Las muestras se escanearon en un modo acoplado 0-20 de 2° a 35° en 20 con un tamaño de paso de 0,02° y una velocidad de escaneo de 0,3 segundos por paso. La adquisición de los datos se controló con el software Bruker DiffracSuite y se analizó con el software Jade (versión 7.5.1). El instrumento se calibró con un estándar de corindón, dentro de ±0.02° de ángulo 20.
Debe tenerse en cuenta que la geometría de Bragg-Brentano utilizada en la recolección de datos es sensible a la orientación preferente. Bajo estas condiciones resulta posible que las intensidades relativas de los picos de difracción no representen las intensidades relativas verdaderas que se obtendrían de una distribución idealizada de partículas esféricas o de un patrón de difracción simulado a partir de los datos de un único cristal. También resulta posible que no se observen algunos picos en algunos patrones de difracción debido a la extensiva orientación preferente.
Calorimetría diferencial de barrido
Se llevaron a cabo mediciones de DSC utilizando un módulo modelo Q-100 de TA Instruments con un controlador Thermal Analyst. Los datos se recogieron y analizaron utilizando software de análisis universal de TA Instruments. Se pesó con precisión una muestra en una cápsula de aluminio cubierta. Tras un periodo de equilibrado isotérmico de 5 minutos a 5°C, se calentó la muestra utilizando una rampa de calentamiento lineal de 10°C/min de 0°C hasta 275°C. Análisis termogravimétrico
Las mediciones de TGA se llevaron a cabo utilizando un módulo modelo Q-500 de TA Instruments con capacidad de alta resolución. Los datos se recogieron utilizando un controlador Thermal Analyst de TA Instruments y se analizaron utilizando el software de análisis universal de TA Instruments. Se depositó una muestra que había sido pesada, sobre una cápsula de platino y se escaneó a una tasa de calentamiento de 10°C desde la temperatura ambiente hasta 200°C. La balanza y cámaras del horno se purgaron con flujo de nitrógeno durante el uso.
Microscopía óptica polarizada
Para los estudios de microscopía de luz polarizada (MLP), las muestras se examinaron bajo un microscopio óptico (Olympus BX51) con un filtro de luz de polarización cruzada. Las imágenes se recogieron con una cámara PaxCam controlada por el software Paxlt Imaging (versión 6.4). Las muestras se prepararon sobre portaobjetos de vidrio con aceite mineral ligero como medio de inmersión. Según el tamaño de las partículas, se utilizó un lente objetivo 4x, 10x o 20x para la ampliación.
Evaluación mediante sorción dinámica de humedad
Las mediciones de SDH se llevaron a cabo utilizando una microbalanza atmosférica VTI, sistema SGA-100 (VTI Corp., Hialeah, FL 33016). Se utilizó una muestra que había sido pesada y la humedad era el valor más bajo posible (próximo a 0 % de humedad relativa) al inicio del análisis. El análisis de SDH consistió en una tasa de escaneo de 5 % de humedad relativa/paso a lo largo de todo el rango de humedad, de 5 % a 90 %. La SDH se llevó a cabo isotérmicamente a 25°C.
Procedimientos sintéticos y Ejemplos comparativos
Se sintetizaron los compuestos siguientes y se evaluaron para la actividad de inhibición del enzima NEP:
Figure imgf000027_0001
(continuación)
Figure imgf000028_0003
Preparación 1: bencil-éster de ácido í2S.4ft)-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico (Compuesto 7)
Figure imgf000028_0001
Se combinó (3S,5RJ-5-(5'-cloro-2'-fluoro-bifenil-4-ilmetil)-3-hidroximetil-3-metil-pirrolidm-2-ona (2) (201.0 g. 578 mmoles) con DCM (4020 ml). obteniendoobteniendo una solución marrón transparente homogénea que a continuación se enfrió a 0°C bajo agitación. Se añadió 3,4-dihdiro-2H-pirano (118 ml. 1.3 moles) y ácido 4-metilbencenosulfónico (34.8 g. 202 mmoles) y la mezcla se calentó a 18.5°C durante 2 horas; después. se sometió a agitación a 18.5°C durante la noche (conversión >98 %). La reacción se desactivó con solución acuosa saturada de NaHCO3 y se dejó que las fases se separasen. La capa orgánica se secó con Na2SO4. después se filtró. seguido de la eliminación del solvente. obteniendoobteniendo un producto en bruto marrón oscuro espeso (~300 g). que se disolvió en DIPE (2 l) y se sometió a agitación a 5°C durante la noche. obteniendoobteniendo una suspensión blanca. Se filtró la suspensión y los sólidos se secaron durante 2 días. obteniendoobteniendo el compuesto 3 (113.8 g). Se secó el filtrado. obteniendoobteniendo un aceite espeso. que se disolvió en DIPE (~100 ml) y se sometió a agitación durante la noche a 5°C. aislando el compuesto 3 adicional (rendimiento total: 225 g).
Figure imgf000028_0002
Se disolvió el compuesto 3 (208 g. 482 mmoles) en THF (1912 ml. 23 moles) bajo agitación. obteniendo una solución homogénea transparente. La mezcla se purgó con nitrógeno y después se enfrió a -10°C. Se añadió NaHMDS 1 M en THF (539 ml. 539 mmoles) gota a gota y la mezcla se sometió a agitación durante 30 minutos. Se añadió gota a gota dicarbonato de di-t-butilo (131 g. 602 mmoles) disuelto en THF (393 ml. 4.8 moles) y la mezcla resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se desactivó con solución acuosa saturada de NH4Cl (5.0 l) y se añadió EtOAc (3.1 l). Se separaron las fases y la capa orgánica se lavó con NaCl acuoso saturado (5.0 l). Se separaron las fases y la capa orgánica se secó sobre MgSO4. La eliminación del solvente produjo un aceite espeso que. tras el secado adicional durante dos días produjo el Compuesto 4 (265 g) en forma de un sólido espumado.
Figure imgf000029_0001
Se disolvió el Compuesto 4 (265 g, 498 mmoles) en THF (1,7 l), obteniendo una solución marrón pálido homogénea transparente. Se añadió LiOH 1,0 M en agua (1,5 l, 1,5 moles) y la mezcla resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 4 horas. Se completó la reacción tras 6 horas, aunque la mezcla se dejó bajo agitación a 15°C durante la noche. Se añadió EtOAc (1,7 l) y la mezcla se lavó con solución acuosa saturada de NH4Cl (1,7 l) y se separaron las fases. La capa orgánica se lavó con NaCl acuoso saturado, se separó, secó sobre Na2SO4; después, se filtró y se secó, obteniendo el Compuesto 5 (300 g) en forma de un sólido blanquecino a amarillo espumado (el envejecimiento excesivo se debe al EtOAc residual).
Figure imgf000029_0002
Se disolvió el Compuesto 5 (277,0 g, 498 mmoles) en DMF (970 ml), obteniendo una solución incolora. Se añadió K2CO3 (103 g, 747 mmoles) y la mezcla resultante se sometió a agitación durante 15 minutos. Se añadió bromuro de bencilo (71,1 ml, 598 moles) en una porción y la mezcla se sometió a agitación a temperatura ambiente durante la noche; la conversión se había completado tras 20 horas. Se añadió NH4Cl (6 l) y EtOAc (1 l) y se separaron las fases. Se lavó la capa orgánica con solución acuosa saturada de NaCl (6 l) y se secó sobre Na2SO4, seguido de la eliminación del solvente, obteniendo Compuesto 6 en bruto (335 g), que se utilizó directamente en la etapa siguiente.
Figure imgf000029_0003
Se combinó HCl 3 M (1,7 l, 5,0 moles) en CPME con Compuesto 6 (319,0 g, 498 mmoles), y la mezcla resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante más de 24 horas, obteniendo una suspensión (conversión >99 %). Se añadió CPME adicional (1,0 l) y la suspensión resultante se sometió a agitación durante 1 hora. Se filtró la mezcla y la torta de filtración húmeda se enjuagó con CPME (500 ml). La filtración y el secado produjeron Compuesto 7 (190 g) en forma de una torta blanca.
EJEMPLO 1: ácido 2S.4ft)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico (Compuesto 1)
Figure imgf000030_0001
Se disolvió EtOH (576 pl, 9,9 mmoles) en DCM (3 ml). Se añadió cloruro de oxalilo (1,0 ml, 12,1 mmoles) y la solución resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se evaporó el solvente sin calor, obteniendo una solución que se utilizó directamente en la etapa siguiente. Se disolvió bencil-éster de ácido (2S,4R)-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico (7) (1,0 g, 2,2 mmoles) en DCM (3 ml). Se añadió la solución previamente obtenida, seguido de DIPEA (958 pl, 5,5 mmoles). La solución resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 15 minutos, punto en que la CL/EM mostró la masa del producto deseado. Se eliminó el solvente al vacío y el residuo en bruto se purificó mediante cromatografía de fase normal (EtOAc al 20­ 95 %/hexanos), obteniendo el Compuesto 8 (1,0 g, 1,9 mmoles) que se utilizó directamente en la etapa siguiente.
Figure imgf000030_0002
El compuesto 8 (1,0 g, 1,9 mmoles) se combinó con paladio al 10 % en peso sobre carbono (350 mg, 185 pmoles), AcOH (5 ml) y EtOAc (5 ml). La mezcla se sometió a hidrógeno y se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 2 horas, punto en que la CL/EM mostró que se había completado la desprotección del bencilo. Se separó el paladio mediante filtración, utilizando un filtro Acrodisc CR de PTFE de 0,2 pm y se eliminó el solvente al vacío. El residuo en bruto se purificó mediante cromatografía de fase inversa, obteniendo el Compuesto 1 (400 mg). EM m/z [M+H]+ calc. para C23H25ClFNO6, 466,14; observado: 466.
(2S, 4R)-5-(5'-Clom-2'-fíuoro-[1,1 '-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de calcio cristalino (Compuesto 1')
Figure imgf000030_0003
Se disolvió el compuesto 1 (30 g, 64,4 mmoles) en EtOH 200 grados proof (100 ml) y seguidamente se añadió DIPEA (11,25 ml, 64,4 mmoles) a dicha mezcla a temperatura ambiente. Se disolvió trifluorometanosulfonato de calcio (10,89 g, 32,2 mmoles) en EtOH (20 ml) y se añadió gota a gota a la mezcla que contenía compuesto 1 para formar una suspensión espesa durante el curso de aproximadamente 1 hora. A continuación, la suspensión espesa se sometió a agitación a temperatura ambiente durante dos días. La suspensión resultante se filtró lentamente y se secó durante dos días, obteniendo 33 g de compuesto 1' de pureza >99 %. Se llevó a cabo un segundo procedimiento de resuspensión en primer lugar enfriando el compuesto 1' (33 g, 19,80 mmoles) a 5°C. A continuación, se añadió una mezcla fría de EtOH:agua (7:3) (300 ml) y la suspensión resultante se sometió a agitación vigorosa durante 4 días. A continuación, la suspensión se filtró lentamente y se secó durante 24 horas con desagregación continua. A continuación, la suspensión se secó al aire a temperatura ambiente durante 18 horas adicionales, obteniendo 29,5 g de sólido de pureza >99 % de compuesto 1'. Se analizó este producto mediante PXRD, DSC y TGA tal como se indica en la presente memoria, y los datos generados se presentan en las FIGS. 1 a 3.
(2S, 4R)-5-(5'-Cloro-2'-fluoro-[1,1 '-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de L-arginina cristalina (Compuesto 1")
Figure imgf000031_0001
Se disolvió el compuesto 1 (181,6 mg) en EtOH de 200 grados proof (0,5 ml) en un vial de vidrio, proporcionando una solución transparente. La solución se enfrió a -20°C durante aproximadamente 10 minutos. En un vial de vidrio separado, se disolvió L-arginina (68 mg) en 0,2 ml de agua y la solución se enfrió a 5°C durante aproximadamente 10 minutos. La solución transparente que contenía compuesto 1 se transfirió lentamente a la solución de L-arginina. Se añadieron 0,2 ml adicionales de EtOH de 200 grados proof al vial que previamente contenía Compuesto 1 y el contenido se añadió adicionalmente al vial que contenía la solución de L-arginina. Se añadieron inóculos de cristales de L-arginina de una reacción anterior utilizando un procedimiento similar que se acaba de describir a la solución combinada y toda la mezcla se mantuvo a 5°C bajo agitación suave, obteniendo una suspensión cristalina durante 1 a 2 días. Se filtraron los cristales de Compuesto 1'' y se analizaron mediante PXRD, DSC y TGA, tal como se indica en la presente memoria, y los datos generados se presentan en las FIGS. 6 a 8.
Preparación 2: etil-éster de ácido (2S, 4R)-4-t-butoxicarbonilamino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico (Compuesto 10)
Figure imgf000031_0002
Se combinó ácido (2S, 4R)-5-(4-bromofenil)-4-t-butoxicarbonilamino-2-hidroximetil-2-metilpentanoico (1,3 g, 3,1 mmoles) con Na2CO3 (993 mg, 9,4 mmoles), agua (0,2 ml) y dioxano (1,5 ml). El recipiente de reacción se tapó, se purgó y se dejó bajo nitrógeno. Se añadió rápidamente Pd(PPh3)4 (541 mg, 468 emoles) y el recipiente nuevamente se purgó. La mezcla se calentó durante 45 minutos a 90°C, punto en que la LC-EM mostró que se había completado la reacción. Se acidificó la capa orgánica con HCl 1 N/agua a pH ~4 y se extrajo con EtOAc. Se separó la capa orgánica, se lavó con solución acuosa saturada de NaCl y se secó sobre MgSO4. Se eliminó el solvente al vacío y el residuo en bruto se purificó mediante cromatografía de fase inversa, obteniendo el Compuesto 9.
Figure imgf000032_0001
Se disolvió Compuesto 9 (1,0 g, 2,1 mmoles) en EtOH (4 ml) y HCl 4 N en dioxano (4 ml) y se sometió a agitación durante 3 horas a 60°C. Se evaporaron los solventes y el residuo en bruto se disolvió en DCM. Se añadió (BOC)2O (472 pl, 2,031 mmoles) y Et3N (566 pl, 4,1 mmoles), seguido de DMAP (5 mg). La mezcla de reacción se sometió a agitación durante 3 horas. Se evaporó la masa en bruto y se trituró con DCM y se filtró sin purificación adicional, obteniendo el Compuesto 10 (800 mg).
EJEMPLO_____ 2: ácido____ í2S.4ft)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metil-4-(oxalilamino)pentanoico (Compuesto comparativo C2)
Figure imgf000032_0002
Se combinó etil-éster de ácido (2S,4RJ-4-f-butoxicarbonilamino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico (10) (2,6 g, 5,3 mmoles) con MeCN (5 ml) y HCl 4 N en dioxano (4 ml) y se sometió a agitación durante 15 minutos. Se eliminó el solvente mediante evaporación centrífuga, obteniendo Compuesto 11, que se utilizó directamente en la etapa siguiente.
Figure imgf000032_0003
Al Compuesto 11 en bruto (2,1 g, 5,3 mmoles) en DCM (10 ml) se añadió 2-cloro-2-oxoacetato de etilo (1,3 ml, 11,7 mmoles), seguido de la adición lenta de Et3N (2,6 ml, 18,7 mmoles). La mezcla resultante se sometió a agitación durante 15 minutos y se realizó un seguimiento del nivel de completitud de la reacción. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía flash (EtOAc al 0-100%/hexanos), obteniendo Compuesto 12, que se utilizó directamente en la etapa siguiente.
Figure imgf000033_0001
El Compuesto 12 (2,2 g, 3,7 mmoles) se combinó con THF (5 ml) y NaOH (3,7 ml, 37,0 mmoles), seguido de la adición de agua (10 ml). La mezcla resultante se sometió a agitación durante la noche. Se evaporó el solvente, se añadió AcOH y el producto se purificó mediante cromatografía de fase inversa, obteniendo el Compuesto comparativo C2 (540 mg). EM m/z [M+H]+ calc. para C21H21CFNO6, 438,10; observado: 438,2.
El Compuesto comparativo C2 se describe en el Ejemplo 11-2 de la patente US n° 8.691.868, de Hughes et al.
Preparación 3: (3S, 5ft)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)-3-hidroximetil-3-metilpirrolidín-2-ona (Compuesto 21)
Figure imgf000033_0002
Una solución de ácido (R)-2-amino-3-(4-bromofenil)propiónico (3300 g, 13,5 moles, 1,0 eq.) en MeCN (46,2 l) se introdujo en un matraz de reacción que había sido purgado y mantenido bajo una atmósfera inerte de nitrógeno. Se añadió una solución de NaOH (1081 g, 27,0 moles, 2,0 eq.) en agua (46,2 l) en varios lotes a -10°C. A lo anterior se añadió una solución de dicarbonato de di-t-butilo (2948 g, 13,51 moles, 1,0 eq.) en MeCN (6,6 l). La solución resultante se sometió a agitación durante la noche a temperatura ambiente; después se concentró al vacío. La solución resultante se diluyó con 45 l de agua/hielo. Se ajustó el pH de la solución a 2 con HCl (1 mol/l). La solución resultante se extrajo con d Cm (50 l x 3) y se agruparon las capas orgánicas. La mezcla resultante se lavó con solución acuosa saturada de NaCl (50 l); después, se secó sobre MgSO4 y se concentró al vacío, obteniendo el Compuesto 13 (3720 g) en forma de un sólido blanco.
Figure imgf000033_0003
Una solución de Compuesto 13 (530 g, 1,54 moles, 1,0 eq.) en dioxano (9,54 l) se combinó con ácido (5-cloro-2-fluorofenil)borónico (348 g, 2,0 moles, 1,3 eq.), una solución de Na2CO3 (228 g, 2,2 moles, 1,4 eq.) en agua (1,1 l) y Pd(PPh3)4 (8,9 g, 7,7 mmoles, 0,01 eq.) en un matraz de reacción que había sido purgado y mantenido con una atmósfera inerte de nitrógeno. La solución resultante se calentó bajo reflujo durante 2,5 horas en un baño de aceite; después, se enfrió hasta la temperatura ambiente con un baño de agua/hielo. La solución resultante se diluyó con EtOAc (15 l), se lavó con HCl 1 N (5 l) y solución acuosa saturada de NaCl (5 l x 4). A continuación, las capas orgánicas agrupadas se secaron sobre MgSo4 y se concentraron al vacío. Seguidamente, el residuo se lavó con PE (1 l x 2), obteniendo Compuesto 14 (510 g) en forma de un aceite marrón.
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Una solución de Compuesto 14 (510 g, 1,3 moles, 1,0 eq.) en DCM (5 l) se combinó con 2,2-dimetil-1,3-dioxano-4,6-diona (205 g, 1,4 moles, 1,1 eq.) y 4-dimetilaminopiridina (237 g, 1,9 moles, 1,5 eq.) en un matraz de reacción que había sido purgado y mantenido con una atmósfera inerte de nitrógeno. Se añadió gota a gota bajo agitación una solución de DCC (294 g, 1,4 moles, 1,1 eq.) en DCM (600 ml), a -10°C. La solución resultante se sometió a agitación durante la noche a temperatura ambiente. Se filtraron los sólidos y el filtrado se lavó con HCl 1 N (2 l) y solución acuosa saturada de NaCl (3 l). Las capas orgánicas agrupadas se secaron sobre MgSO4. Se filtraron los sólidos, obteniendo Compuesto 15 en forma de filtrado, que se utilizó en la etapa siguiente directamente sin purificación adicional.
Figure imgf000034_0002
Una solución de Compuesto 15 en DCM (7 l, en bruto) se agrupó con AcOH (600 ml) en un matraz de reacción que había sido purgado y mantenido con una atmósfera inerte de nitrógeno. Se añadió NaBH4 (88,8 g, 2,4 moles, 1,8 eq.) en varios lotes a -5°C. La solución resultante se sometió a agitación durante 3 horas a -5°C. A continuación, la reacción se desactivó mediante la adición gota a gota de solución acuosa saturada de NaCl (1 l). La solución resultante se diluyó con solución acuosa saturada de NaCl (2 l) y la mezcla resultante se lavó con agua (2 l x 2), solución acuosa saturada de NaHCO3 (1 l) y solución acuosa saturada de NaCl (2 l). Las capas orgánicas agrupadas se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vacío, obteniendo Compuesto 16 (520 g) en forma de un aceite amarillo.
Figure imgf000034_0003
Una solución de Compuesto 16 (520 g, 1,0 moles, 1,0 eq.) en acetona/DMF (1:1) (5,2 l) se combinó con Na2CO3(163 G, 1,5 moles, 1,5 eq.) y yoduro de metilo (219 g, 1,5 moles, 1,5 eq.) en un matraz de reacción que había sido purgado y mantenido con una atmósfera inerte de nitrógeno. La solución resultante se sometió a agitación durante la noche a temperatura ambiente; después se diluyó con agua (15 l). Tras someter a agitación durante 1 hora, se recogieron los sólidos mediante filtración. El residuo se disolvió en dCm (5 l). Las capas orgánicas agrupadas se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vacío, obteniendo Compuesto 17 (520 g) en forma de un sólido amarillo.
Figure imgf000034_0004
Una solución de Compuesto 17 (520 g, 1,0 moles, 1,0 eq.) en CPME (2,6 l) se introdujo en un matraz de reacción que había sido purgado y mantenido bajo una atmósfera inerte de nitrógeno. Se añadió una solución 4 N de HCl en Cp Me (2,6 l) a -5°C. La solución resultante se sometió a agitación durante la noche a temperatura ambiente; después, se concentró a la mitad del volumen al vacío (obteniendo Compuesto 18). Se recogieron los sólidos mediante filtración; después, se lavaron con una mezcla 1:2 de EtOAc y DIPE, obteniendo Compuesto 19 (220 g) en forma de un sólido blanquecino.
Figure imgf000035_0001
Una solución de Compuesto 19 (218 g, 602,5 mmoles, 1,0 eq.) en THF (4 l) y N-metilmorfolina (170 g, 1,7 moles, 2,8 eq.) se introdujo en un matraz de reacción que había sido purgado y mantenido bajo una atmósfera inerte de nitrógeno. Se añadió gota a gota cloroformato de 2-metilpropilo (164,4 g, 1,2 moles, 2,0 eq.) bajo agitación a -5°C. La solución resultante se sometió a agitación durante 20 minutos a -5°C. A continuación, se añadió gota a gota una solución de NaBH4 (91,5 g, 2,4 moles, 4,0 eq.) en agua (400 ml) bajo agitación a -5°C. La solución resultante se sometió a agitación durante 1 hora adicional a temperatura ambiente. A continuación, la reacción se desactivó mediante la adición gota a gota de HCl 1 N (2,6 l), y la mezcla resultante se sometió a agitación durante 1 hora y después se concentró al vacío. Seguidamente, la mezcla residual se sometió a agitación durante 1 hora adicional y después se recogieron los sólidos mediante filtración. Los sólidos se lavaron con agua, se disolvieron en THF, se secaron sobre Na2SO4, y se concentraron al vacío, obteniendo Compuesto 21 (170 g) en forma de un sólido blanco.
Preparación 4: bencil-éster de ácido (2S, 4ft)-4-f-butoxicarbonilamino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico (Compuesto 23)
Figure imgf000035_0002
Se disolvió (3S,5RJ-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-ilmetil)-3-hidroximetil-3-metilpirrolidín-2-ona (21) (5,0 g, 14,4 mmoles) en THF (10 ml) y se mantuvo bajo nitrógeno. La solución se introdujo en un baño de hielo. Se añadió NaHMDS (31,6 ml, 31,6 mmoles) y la mezcla se sometió a agitación durante 10 minutos a una temperatura entre 0°C y la temperatura ambiente. A continuación, se añadió (BOC)2O (7,3 ml, 31,6 mmoles) y la mezcla se sometió a agitación durante 1 hora a temperatura ambiente, punto en que la CL/e M mostró que se había completado. A dicha solución en bruto se añadió una solución de NaOH 10 N (21,6 ml, 216 mmoles) en agua, hasta alcanzar un pH~12. Se añadió THF adicional (~10 ml) y la solución se sometió a agitación durante la noche a temperatura ambiente, punto en que la CL/EM mostró que se había completado. Se añadió EtOAc, seguido de una solución de HCl 1 N hasta alcanzar un pH de 5. Se extrajo la capa orgánica, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó. El residuo en bruto se purificó mediante cromatografía de fase normal (EtOAc al 50-100 %/hexanos), obteniendo Compuesto 22 (2,5 g).
Figure imgf000035_0003
Se agrupó Compuesto 22 (550 mg, 1,2 mmoles), K2CO3 (179 mg, 1,3 mmoles) y bromuro de bencilo (154 pl, 1,3 mmoles) en DMF (6 ml) y se sometieron a agitación durante 3 a 4 horas a temperatura ambiente, punto en que la CL/EM mostró que se había completado. Se eliminó el solvente al vacío y el residuo en bruto se purificó mediante cromatografía de fase normal, obteniendo Compuesto 23 (453 mg).
EJEMPLO_____ 3: etil-éster_____ de_____ ácido_____(2S.4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metil-4-(oxalilamino)pentanoico (Compuesto comparativo C3)
Figure imgf000036_0001
Se añadió AcOH (376 pl, 6,6 mmoles) a una solución de bencil-éster de ácido (2S,4RJ-4-t-butoxicarbonilamino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico (23) (730 mg, 1,3 mmoles), seguido de paladio (140 mg, 131 pmoles). La mezcla resultante se sometió a agitación bajo hidrógeno durante 3 horas, punto en que la CL-EM mostró que se había completado la reacción. Se filtró la mezcla utilizando un filtro Acrodisc CR de PTFE de 0,2 pm, y se concentró, obteniendo Compuesto 24 (599 mg) en forma de un líquido viscoso incoloro transparente.
Figure imgf000036_0002
Se añadió HCl 4 N en dioxano (4,8 ml, 19,3 mmoles) a una solución de Compuesto 24 (599 mg, 1,3 mmoles) en EtOH (5 ml). La mezcla resultante se sometió a agitación a 80°C durante 3 horas; después, se concentró al vacío, obteniendo un líquido incoloro transparente. El líquido en bruto se purificó mediante cromatografía de fase inversa (20 % a 90 % de MeCN en agua con TfA al 0,05 %), obteniendo Compuesto 25 (455 mg) en forma de una sal HCl de una goma blanca.
Figure imgf000036_0003
Se añadió t-butanol (574 pl, 6,0 mmoles) a una solución de cloruro de oxalilo (772 pl, 9,0 mmoles) en DCM (3 ml) a 0°C y la mezcla se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 30 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se concentró al vacío, obteniendo 2-cloro-2-oxoacetato de t-butilo (403 mg) en forma de un líquido incoloro transparente. El líquido se disolvió en DCM (2,5 ml9 para preparar una solución 1,0 M en DCM.
Se añadió DIPEA (261 pl, 1,5 mmoles) a una solución de Compuesto 25 (236 mg, 599 pmoles) en DCM (3,0 ml), seguido de 2-cloro-2-oxoacetato de t-butilo (solución 1 M en d CM; 659 pl, 659 pmoles), y la mezcla se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 15 minutos. A continuación, se añadió TfA (3,0 ml) y la mezcla se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla se concentró al vacío, obteniendo un líquido amarillo pálido transparente. El líquido en bruto se purificó mediante cromatografía de fase inversa (20 % a 90 % de MeCN en agua con TfA al 0,05 %), obteniendo Compuesto comparativo C3 (174 mg) en forma de un sólido blanco. EM m/z [M+H]+ calc. para C23H25CFNO6, 466,14; observado: 466.
Preparación 5: t-butil-éster de ácido (S)-2-(4-bromobencil)-5-oxopirrolidín-1-carboxílico (Compuesto 28)
Figure imgf000037_0001
A una solución de ácido (R)-2-amino-3-(4-bromofenil)propiónico (50 g, 0,2 moles) en MeCN (700 ml) se añadió una solución de NaOH (16,4 g, 0,4 moles) en agua (700 ml) a -5°C. Tras someter a agitación durante 10 minutos, se añadió una solución de (b 0 c )2O (44,7 g, 0,2 moles) en MeCN (100 ml). La mezcla se calentó hasta la temperatura ambiente y se sometió a agitación durante la noche. Tras la evaporación del MeCN, el residuo se diluyó con DCM (800 ml) y se acidificó con HCl 1 M a pH 2 a -5°C. Se extrajo la fase acuosa con DCM (3x200 ml). Las capas orgánicas agrupadas se lavaron con solución acuosa saturada de NaCl (500 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron, obteniendo Compuesto 13 (66,5 g) en forma de un sólido blanco. CL-Em : 366 [M+Na], 709 [2M+Na].
A una solución de Compuesto 13 (66,5 g, 193 emoles), ácido de Meldrum (33,4 g, 232 mmoles) y DMAP (37,7 g, 309 mmoles) en DCM anhidro (600 ml), se añadió gota a gota una solución de DCC (47,9 g, 232 mmoles) en DCM anhidro (200 ml) durante 1 hora a -5°C bajo nitrógeno. La mezcla se sometió a agitación a -5°C durante 8 horas; después, se refrigeró durante la noche. Se observaron cristales de diciclohexilurea. Se filtró la mezcla, se lavó con KHSO4 al 5 % (5x200 ml) y solución acuosa saturada de NaCl (200 ml); después, se secó sobre MgSO4 anhidro bajo refrigeración durante la noche. A continuación, la solución se evaporó, obteniendo Compuesto 26 en bruto (91 g) en forma de un sólido amarillo pálido. CL-EM: 492 [M+Na], 961 [2M+Na].
Figure imgf000037_0002
A una solución de Compuesto 26 en bruto (91 g, 193 mmoles) en DMC anhidro (1 l) se añadió AcOH (127,5 g, 2,1 moles) a -5°C bajo nitrógeno. La mezcla se sometió a agitación a -5°C durante 30 minutos; después, se añadió NaBH4 (18,3 g, 483 mmoles) en partes pequeñas durante 1 hora. Tras someterla a agitación durante 1 hora adicional a -5°C, se añadió solución acuosa saturada de NaCl (500 ml). La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de NaCl (2x300 ml) y agua (2x300 ml), se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró, obteniendo el producto en bruto, que se purificó adicionalmente mediante lavado con Et2O, obteniendo Compuesto 27 (68 g) en forma de un sólido amarillo pálido. CL-EM: 478 [M+Na], 933 [2M+Na].
Una solución de Compuesto 27 (68 g, 149 mmoles) en tolueno anhidro (500 ml) se sometió a reflujo bajo nitrógeno durante 3 horas. Tras la evaporación del solvente, el residuo se purificó mediante cromatografía (hexanos:EtOAc=10:1), obteniendo Compuesto 28 (38 g) en forma de un aceite amarillo pálido. CL-EM: 376 [M+Na], 729 [2M+Na].
Preparación 6: etil-éster de ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(4-bromofenil)2-hidroxipentanoico (Compuesto 33)
Figure imgf000037_0003
A una solución de t-butil-éster de ácido (S)-2-(4-bromobencil)-5-oxopirrolidín-1-carboxílico (28) (38 g, 107 mmoles) en DCM anhidro (250 ml) se añadió TFA (20 ml, 0,27 moles) a -5°C bajo nitrógeno. La mezcla se calentó hasta la temperatura ambiente y se sometió a agitación durante la noche. Tras la evaporación del solvente, el residuo se diluyó con EtOAc (300 ml) y se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO3 (3x200 ml), agua (200 ml), solución acuosa saturada de NaCl (250 ml), se secó sobre Na2SO4 y se concentró, obteniendo Compuesto 29 en bruto (24 g) en forma de un sólido amarillo pálido. CL-EM: 254 [M+H].
A una solución de NaH (8,6 g, 250 mmoles) en THF anhidro (200 ml) se añadió gota a gota una solución de Compuesto 29 (24 g, 94 mmoles) en THF anhidro (200 ml) durante 30 minutos a 0°C bajo nitrógeno. La mezcla se calentó hasta la temperatura ambiente y se sometió a agitación durante 2 horas. Tras enfriar a 0°C, se añadió gota a gota cloruro de pivaloílo (18 g, 150 mmoles) durante 30 minutos. La mezcla se calentó hasta la temperatura ambiente y se sometió a agitación durante la noche. La reacción se desactivó con solución acuosa saturada de NH4Cl (300 ml) y se extrajo con EtOAc (3x200 ml). Las capas orgánicas agrupadas se lavaron con solución acuosa saturada de NaCl (300 ml), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron, obteniendo el producto en bruto, que se purificó adicionalmente mediante cromatografía (hexanos:EtOAc=25:1), obteniendo Compuesto 30 (18 g) en forma de un sólido amarillo pálido. CL-EM: 360 (M+Na).
Figure imgf000038_0001
A una solución de Compuesto 30 (18 g, 53 mmoles) en THF anhidro (250 ml) se añadió gota a gota NaHMDS (47,7 ml, 96 mmoles) durante 30 minutos a -78°C bajo nitrógeno. Tras someterla a agitación a -78°C durante 90 minutos, se añadió gota a gota una solución de (+)-(8,8-diclorocanforilsulfonil)-oxaziridina (31,6 g, 106 mmoles) durante 30 minutos. Tras someter a agitación a -78°C durante 2 horas, la reacción se desactivó con solución acuosa saturada de NH4Cl (400 ml) y se extrajo con EtOAc (3x300 ml). Las capas orgánicas agrupadas se lavaron con solución acuosa saturada de NaCl (300 ml), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron, proporcionando el producto en bruto, que se purificó adicionalmente mediante cromatografía (hexanos:EtOAc=15:1), obteniendo Compuesto 31 (8,9 g) en forma de un sólido amarillo pálido. CL-EM: 376 (M+Na).
Una solución de Compuesto 31 (8,9 g, 25 mmoles) en HCl concentrado (81 ml, 81 mmoles) se calentó a 100°C durante 16 horas. A continuación, la mezcla se concentró, obteniendo el producto en bruto, que se purificó adicionalmente mediante lavado con Et2O, obteniendo Compuesto 32 (7 g) en forma de una sal HCl sólida de color amarillo pálido. CL-EM: 323 (M+H).
Una solución de Compuesto 32 (7 g, 22 mmoles) en EtOH (10 ml) se agrupó con HCl 8 M en EtOH (120 ml, 960 mmoles) a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a 50°C durante 16 horas; después se concentró. El producto en bruto se purificó adicionalmente mediante lavado con Et2O, obteniendo Compuesto 33 (6 g) en forma de una sal HCl sólida de color amarillo pálido. CL-EM: 352 (M+H).
Preparación 7: t-butil-éster de ácido cloro-oxoacético (Compuesto 34)
Se agrupó cloruro de oxalilo (232 pl, 2,8 mmoles) y alcohol t-butílico (228 pl) en éter (6,7 ml) bajo nitrógeno a 0°C. La mezcla resultante se sometió a agitación durante 30 minutos a temperatura ambiente. El solvente se evaporó al vacío, formando Compuesto 34.
Preparación 8: etil-éster de ácido 2R4ft)-5-(4-bromofenil)-4-(f-butoxioxalil-amino)-2-hidroxipentanoico (Compuesto 36)
Figure imgf000038_0002
Se agrupó cloruro de oxalilo (401 pl, 4,7 mmoles) en DCM (8 ml) con alcohol t-butílico (454 pl, 4,7 mmoles). Se añadió Et3N (198 pl, 1,4 mmoles) gota a gota y la solución resultante se sometió a agitación durante 5 minutos. A continuación, dicha solución se añadió gota a gota a una solución de etil-éster de ácido (2R,4R)-4-amino-5-(4-bromofenil)-2-hidroxipentanoico (35) (150 mg, 474 pmoles) y Et3N (198 pl, 1,4 mmoles) en DCM (5 ml) y se sometió a agitación hasta completar la reacción. Se evaporaron los solventes y el producto en bruto se purificó mediante cromatografía de fase normal (20 % a 100 % de EtoAc/hexanos), obteniendo Compuesto 36.
EJEMPLO 4: etil-éster de ácido (2R, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanoico
Figure imgf000039_0001
Se agrupó etil-éster de ácido (2R, 4R)-5-(4-bromofenil)-4-(f-butoxioxalil-amino)-2-hidroxipentanoico (36) (48,5 mg, 109 emoles) con ácido 5-cloro-2-fluorofenilborónico (22,8 mg, 131 emoles) y K2CO3 (45,2 mg, 327 emoles) en alcohol tbutílico (2 ml) y agua (0,3 ml). Se añadió SilicaCat®DPP-Pd (carga de 0,28 mmol/g; 39 mg, 11 emoles) y la mezcla se calentó a 80°C durante 15 minutos, punto en que la CL/EM mostró el producto deseado. Se filtró la mezcla y el filtrado se concentró y purificó mediante HPLC preparativa, obteniendo el Compuesto comparativo C4 (20 mg). EM m/z [M+H]+ calc. para C21H21CFNO6, 438,10; observado: 438,0.
El Compuesto comparativo C4 se describe en el Ejemplo 5-6 de la patente US n° 8.691.868, de Hughes et al.
Preparación 9: etil-éster de ácido (2R.4R)-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanoico (Compuesto 42)
Figure imgf000039_0002
A una solución de t-butil-éster de ácido (S)-2-(4-bromobencil)-5-oxopirrolidín-1-carboxílico (28) (25 g, 70,6 mmoles) en 1,4-dioxano (500 ml) se añadió ácido 5-cloro-2-fluorofenilborónico (24,6 g, 141 mmoles), Pd(PPh3)4 (4,1 g, 3,5 mmoles) y una solución de K2CO3 (17,8 g, 141 mmoles) en agua (90 ml), a temperatura ambiente bajo nitrógeno. La mezcla se calentó a 60°C y se sometió a agitación durante la noche. Se añadió agua (500 ml) y se evaporó el solvente. La mezcla se extrajo con EtOAc (3x200 ml). Las capas orgánicas agrupadas se lavaron con solución acuosa saturada de NaCl (300 ml) y se filtraron. Se concentró el filtrado, obteniendo el producto en bruto, que se purificó mediante cromatografía, obteniendo Compuesto 37 (22,7 g) en forma de un sólido amarillo pálido. CL-EM: 829,2 [2M+Na+].
A una solución de Compuesto 37 (4,9 g, 12,1 mmoles) en DCM (100 ml) se añadió TFA (4,5 ml, 60,7 mmoles) a 0°C bajo nitrógeno y se sometió a agitación durante 1 hora. La mezcla se calentó hasta la temperatura ambiente durante 1,5 horas. Tras la evaporación del solvente, el residuo se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO3 (3x100 ml), agua (2x100 ml), solución acuosa saturada de NaCl (100 ml), y después se secó sobre Na2SO4. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró, obteniendo Compuesto 38 en bruto (agrupado con un lote separado para un total de 16,9 g). CL-EM: 304 [M+H].
Figure imgf000039_0003
A una solución de NaH (2,4 g, 695 mmoles) en THF (200 ml) se añadió gota a gota una solución de Compuesto 38 (8,5 g, 278 mmoles) en THF (50 ml) a 0°C bajo nitrógeno. La mezcla se calentó hasta la temperatura ambiente y se sometió a agitación durante 2 horas. Tras enfriar a 0°C, se añadió gota a gota cloruro de pivaloilo (5 g, 41,7 mmoles) durante 30 minutos. La mezcla se calentó hasta la temperatura ambiente y se sometió a agitación durante 9,5 horas.
La reacción se desactivó con solución acuosa saturada de NH4Cl (250 ml) y se extrajo con EtOAc (3x400 ml). Las capas orgánicas agrupadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron, obteniendo el producto en bruto, que se purificó mediante cromatografía, obteniendo Compuesto 39 (18 g) en forma de un sólido amarillo pálido. CL-e M: 388 [M+H+].
A una solución de Compuesto 39 (9 g, 23,2 mmoles) en THF (200 ml) se añadió gota a gota NaHMDS (20,9 ml, 41,8 mmoles) a -78°C bajo nitrógeno. Tras someter a agitación a -78°C, se añadió gota a gota una solución de (+)-(8,8-diclorocanforilsulfonil)oxaziridina (10,4 g, 34,8 mmoles) en THF (50 ml). Tras someter a agitación a -78°C durante 1 hora, la reacción se desactivó con solución acuosa saturada de NH4Cl (50 ml) y se extrajo con EtOAc (3x400 ml). Las capas orgánicas agrupadas se lavaron con HCl 1 M (400 ml), solución acuosa saturada de NaHCO3 (400 ml) y solución acuosa saturada de NaCl (400 ml), se secaron sobre Na2sO 4y se concentraron, proporcionando el producto en bruto, que se purificó mediante cromatografía, obteniendo Compuesto 40 (8,8 g) en forma de un semisólido blanco. CL-EM: 426,1 [M+Na+].
Figure imgf000040_0001
Se añadió una solución de Compuesto 40 (8,8 g, 21,8 mmoles) en EtOH (12 ml) a HCl concentrado (200 ml) y se calentó a 100°C y se sometió a agitación durante la noche. A continuación, la mezcla se concentró, proporcionando el producto en bruto, que se purificó mediante lavado con Et2O (100 ml), obteniendo Compuesto 41 en forma de una sal HCl sólida (7,5 g). CL-EM: 338 [M+ H+].
Figure imgf000040_0002
Una solución de Compuesto 41 (7,5 g, 20,1 mmoles) en EtOH/HCl (100 ml) se calentó a 50°C durante la noche. La mezcla se concentró y el producto en bruto se purificó mediante lavado con Et2O (200 ml), obteniendo Compuesto 42 (6,5 g) en forma de una sal HCl sólida blanca. CL-EM: 366,1 [M+ H+].
EJEMPLO 5: ácido (2R, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroxipentanoico (Compuesto comparativo C5)
Figure imgf000040_0003
Se añadió HCl 1,0 N (6 ml) a etil-éster de ácido (2R, 4RJ-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanoico (42) (114 mg, 313 emoles) y la mezcla se sometió a agitación a 90°C durante 24 horas; después, se concentró bajo presión reducida. El producto zwiterión se agrupó con Et3N (157 pl, 1,1 mmoles) en DCM (6 ml), seguido de la adición de una solución de cloruro de etiloxalilo (34,9 pl, 313 pmoles) en DCM (2 ml) a 0°C, y la mezcla resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió solución acuosa saturada de NaHCO3 (5 ml) y la mezcla se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se extrajo con DCM (3x3 ml) y se concentró, y el residuo se purificó mediante HPLC preparativa, obteniendo Compuesto comparativo C5 (5 mg). EM m/z [M+H]+ calc. para C2iH2iClFNO6, 438,10; observado: 438,2.
El Compuesto comparativo C5 se describe en el Ejemplo 5-14 de la patente US n° 8.691.868, de Hughes et al. EJEMPLO 6: ácido (2R.4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanoico (Compuesto comparativo C6)
Figure imgf000041_0001
Se agrupó ácido (2R, 4RJ-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroxipentanoico (C5) con LiOH 1 M en agua (2,5 ml, 2,5 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 1 hora, punto en que la CL-EM mostró que se había completado la reacción. Se eliminó el solvente al vacío, obteniendo el Compuesto comparativo C6 (20,8 mg). EM m/z [M+H]+ calc. para C19H17CFNO6, 410,07; observado: 410,0.
El Compuesto comparativo C6 se describe en el Ejemplo 5-5 de la patente US n° 8.691.868, de Hughes et al.
EJEMPLO 7: estudio de estabilidad de los cristales de (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil1-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de calcio (1')
Un reto en el desarrollo farmacéutico de medicamentos se refiere a identificar una forma cristalina estable de un fármaco que presente un punto de fusión razonablemente elevado. El reto de la presente invención fue que no podían obtenerse cristales del ácido libre del Compuesto 1. Además, muchas selecciones de cristales fracasaron, con la excepción de dos: se obtuvieron cristales de arginina y calcio del ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico. Sin embargo, los cristales de arginina (ver el Ejemplo 1) eran delicuescentes bajo condiciones ambientales y resultaron difíciles de desarrollar adicionalmente. Por otra parte, los cristales de calcio eran estables y se fundían a aproximadamente 239°C. Por este motivo, se llevó a cabo un estudio acelerado de estabilidad del Compuesto 1' a las temperaturas y % de humedad relativa (HR) indicadas a continuación.
Figure imgf000041_0002
Estos datos demuestran que el Compuesto 1' se mantiene relativamente estable durante por lo menos tres meses a las temperaturas y humedades relativas sometidas a ensayo.
Ensayos
El Compuesto 1 y los Compuestos comparativos C2, C3, C4, C5 y C6 fueron evaluados en los ensayos indicados posteriormente. La Tabla a continuación ilustra los metabolitos que pueden formarse a partir del corte de uno o más compuestos en diversas localizaciones de su estructura.
Figure imgf000041_0003
ENSAYO 1: ensayos in vitro para la cuantificación de las potencias de inhibidor de NEP humana y de rata
Se determinaron las actividades de inhibición de la neprilisina humana y de rata (EC 3.4.24.11; NEP) mediante la utilización de ensayos in vitro tal como se indica posteriormente.
Extracción de la actividad de NEP de riñones de rata
Se preparó NEP de rata a partir de riñones de ratas Sprague Dawley adultas. Se lavaron riñones enteros en solución salina tamponada con fosfato fría (PBS) y se añadió tampón de lisis helado (Triton X-114 al 1 %, NaCl 150 mM, tris(hidroximetil)aminometano (Tris) 50 mM, pH 7,5; Bordier (1981) J. Biol. Chem. 256: 1604-1607) en una proporción de 5 ml de tampón por cada gramo de riñón. Se homogenizaron las muestras sobre hielo con un triturador de tejidos manual Polytron. Se centrifugaron los homogenados a 1000xg en un rotor basculante durante 5 minutos a 3°C. Se resuspendió el pellet en 20 ml de tampón de lisis helado y se incubó sobre hielo durante 30 minutos. A continuación, se aplicaron las muestras (15 a 20 ml) sobre 25 ml de tampón de amortiguación helado (sucrosa al 6 % p/v, Tris 50 mM, pH 7,5, NaCl 150 mM, Triton X-114 al 0,06 %), se calentaron a 37°C durante 3 a 5 minutos y se centrifugaron a 1000xg en un rotor basculante a temperatura ambiente durante 3 minutos. Las dos capas superiores se eliminaron mediante aspiración, dejando un precipitado aceitoso viscoso que contenía la fracción enriquecida en membranas. Se añadió glicerol a una concentración de 50 % y las muestras se almacenaron a -20°C. Se cuantificaron las concentraciones de proteínas mediante la utilización de un sistema de detección BCA con albúmina de suero bovino (BSA) como estándar.
Ensayos de inhibición enzimática
Se obtuvo NEP humana recombinante comercialmente (R&D Systems, Minneapolis, MN, número de catálogo: 1182-ZN). Se utilizó el sustrato peptídico fluorogénico Mca-D-Arg-Arg-Leu-Dap-(Dnp)-OH (Medeiros et al. (1997) Braz. J. Med. Biol. Res. 30:1157-62; Anaspec, San Jose, CA).
Los ensayos se llevaron a cabo en placas opacas blancas de 384 pocillos a 37°C utilizando el sustrato peptídico fluorogénico a una concentración de 10 ^M en tampón de ensayo (HEpES 50 mM, pH 7,5, NaCl 100 mM, monolaurato de polietilenglicol-sorbitán al 0,01 % (Tween-20), ZnSO4 10 ^M). Se utilizaron los enzimas respectivos a concentraciones que resultaron en la proteolisis cuantitativa de 1 ^M de sustrato tras 20 minutos a 37°C.
Los compuestos de ensayo se sometieron a ensayo en el intervalo de concentraciones de 10 ^M a 20 pM. Se añadieron los compuestos de ensayo al enzima y se incubaron durante 30 minutos a 37°C antes de iniciar la reacción mediante la adición de sustrato. Las reacciones se terminaron tras 20 minutos de incubación a 37°C, mediante la adición de ácido acético glacial hasta una concentración final de 3,6 % (v/v).
Se leyeron las placas en un fluorímetro con longitudes de onda de excitación y emisión fijadas en 320 nm y 405 nm, respectivamente. Se obtuvieron las constantes de inhibición mediante regresión no lineal de los datos utilizando la ecuación (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA):
Figure imgf000042_0001
en la que v es la velocidad de reacción, v0 es la velocidad de reacción sin inhibición, I es la concentración de inhibidor y K' es la constante de inhibición aparente.
Figure imgf000042_0002
Estos datos muestran que el Compuesto 1 presenta una potencia frente a la NEP de rata y humana que es similar a la del Compuesto comparativo C2, mientras que el Compuesto comparativo C3 presenta una potencia muy baja sobre el enzima NEP de rata y humano, en comparación con la del Compuesto comparativo C2. De manera similar, el Compuesto comparativo C5 presenta una potencia frente a la NEP de rata y humana similar a la del Compuesto comparativo C6, mientras que el Compuesto comparativo C4 presenta una potencia baja frente al enzima NEP de rata y humano comparado con la del Compuesto comparativo C6.
Los Compuestos 1, C2, C5 y C6 presentan una actividad significativa en el enzima NEP de rata y humano y cumplen el umbral de actividad de pKi> 9,0 para resultar útil en su uso terapéutico tal como se ha indicado anteriormente.
ENSAYO 2: estudio farmacocinético PO en ratas, perros y monos
Cada estudio farmacocinético en ratas, perros o monos se inició con la formulación del compuesto de ensayo. Se añadieron las masas apropiadas de cada compuesto de ensayo a un volumen de vehículo (p. ej., 5 % de bicarbonato sódico, 5 % de dextrosa en agua), de manera que la concentración final de cada compuesto fuese apropiada para la administración a una dosis de 2 ml/kg. Aunque una suspensión homogénea resultaba aceptable para la administración oral, se filtraron a esterilidad (0,2 |jm) soluciones de administración intravenosa antes de la administración con el fin de garantizar que no se administrasen materias particuladas.
En el estudio con ratas, se obtuvieron ratas Sprague-Dawley macho precanuladas (3 por cada vía) de entre 8 y 10 semanas de edad, de Harlan Laboratories (Indianapolis, IN). Las ratas recibieron una única sonda esofágica o una única dosis intravenosa (mediante la vena lateral de la cola) de la solución de administración. La dosis final era típicamente de entre 0,5 y 3 mg/kg. Se recolectaron muestras de sangre en serie mediante la cánula implantada en la vena yugular a los 3 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas y 24 horas después de la administración. Se llevó a cabo el muestreo manualmente o utilizando muestreadores de sangre automatizados. Se recogieron muestras en tubos Microtainer que contenía fluoruro sódico, oxalato potásico y paraoxon (anticoagulantes e inhibidor de esterasa, respectivamente) y se procesaron a plasma mediante centrifugación refrigerada.
En el estudio con perros, perros Beagle macho (3 por cada vía) alojados en Agilux Laboratories (Worcester, MA) y que pesaban entre 7 y 12 kg recibieron una única dosis oral con sonda esofágica de la solución de administración. La dosis final era típicamente de entre 0,1 y 2 mg/kg. Se recolectaron muestras de sangre en serie mediante venipunción directa a los 3 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas y 24 horas después de la administración. Todas las muestras se recogieron manualmente en tubos Microtainer que contenían fluoruro sódico, oxalato potásico y paraoxon y se procesaron a plasma mediante centrifugación refrigerada.
En el estudio con monos, monos Cynomolgus macho (3 por cada vía) alojados en Xenometrics (Stilwell, KS) y que pesaban entre 4 y 5 kg recibieron una única dosis oral con sonda esofágica de la solución de administración. La dosis final fue de 2 mg/kg. Se recolectaron muestras de sangre en serie de las venas cefálicas o sáfenas antes de la administración de la dosis y a los 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 12 horas y 24 horas después de la administración. Todas las muestras se recogieron en tubos que contenían oxalato potásico, fluoruro sódico y paraoxon, y se procesaron a plasma mediante centrifugación refrigerada.
Las muestras de plasma se extrajeron con 3 volúmenes de MeCN que contenía un estándar interno adecuado. Los extractos se reconstituyeron en 3 volúmenes de agua que contenían ácido fórmico al 1 % y se analizaron mediante EM/EM acoplada con HPLC. Los datos de concentración plasmática-tiempo se analizaron utilizando el software Phoenix (Pharsight Corp., St. Louis, MO) para calcular los parámetros farmacocinéticos.
La biodisponibilidad oral (% F) representa el porcentaje de una dosis que alcanza la circulación sistémica después de una dosis oral en comparación con una dosis intravenosa en la que la dosis completa se administra directamente en la circulación sistémica. Es igual a la proporción de la superficie bajo la curva de concentración-tiempo después de una dosis oral y la superficie bajo la curva de concentración-tiempo después de una dosis intravenosa, normalizada frente a cualesquiera diferencias en niveles de dosis entre vías.
Figure imgf000043_0001
Estos datos muestran que el Compuesto comparativo C2 (metabolito activo de Compuesto 1) presenta una baja biodisponibilidad oral, mientras que el Compuesto 1 presenta una biodisponibilidad oral relativamente elevada en la totalidad de los tres modelos animales sometidos a ensayo.
ENSAYO 3: estudio farmacocinético IV/PO en ratas y perros
Cada estudio farmacocinético en ratas o perros se inició con la formulación del compuesto de ensayo. Se añadieron las masas apropiadas de cada compuesto de ensayo a un volumen de vehículo (p. ej., 5 % de bicarbonato sódico, 5 % de dextrosa en agua), de manera que la concentración final de cada compuesto fuese apropiada para la administración a una dosis de 2 ml/kg. Aunque una suspensión homogénea resultaba aceptable para la administración oral, se filtraron a esterilidad (0,2 jm ) soluciones de administración intravenosa antes de la administración con el fin de garantizar que no se administrasen materias particuladas.
En el estudio con ratas, se obtuvieron ratas Sprague-Dawley macho precanuladas (3 por cada vía) de entre 8 y 10 semanas de edad, de Harlan Laboratories (Indianapolis, IN). Las ratas recibieron una única sonda esofágica o una única dosis intravenosa (mediante la vena lateral de la cola) de la solución de administración. La dosis final era típicamente de entre 0,5 y 3 mg/kg. Se recolectaron muestras de sangre en serie mediante la cánula implantada en la vena yugular a los 3 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas y 24 horas después de la administración. Se llevó a cabo el muestreo manualmente o utilizando muestreadores de sangre automatizados. Todas las muestras se recogieron en tubos Microtainer que contenían fluoruro sódico, oxalato potásico y paraoxon, y se procesaron a plasma mediante centrifugación refrigerada.
En el estudio con perros, perros Beagle macho (3 por cada vía) alojados en Agilux Laboratories (Worcester, MA) y que pesaban entre 7 y 12 kg recibieron una única dosis oral con sonda esofágica o una única dosis intravenosa (mediante catéter permanente) de la solución de administración. La dosis final era típicamente de entre 0,1 y 2 mg/kg. Se recolectaron muestras de sangre en serie mediante venipunción directa a los 3 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas y 24 horas después de la administración. Todas las muestras se recogieron manualmente en tubos Microtainer que contenían fluoruro sódico, oxalato potásico y paraoxon y se procesaron a plasma mediante centrifugación refrigerada.
Las muestras de plasma se extrajeron con 3 volúmenes de MeCN que contenía un estándar interno adecuado. Los extractos se reconstituyeron en 3 volúmenes de agua que contenían ácido fórmico al 1 % y se analizaron mediante EM/EM acoplada con HPLC. Los datos de concentración plasmática-tiempo se analizaron utilizando el software Phoenix (Pharsight Corp., St. Louis, MO) para calcular los parámetros farmacocinéticos.
Datos farmacocinéticos en ratas
Figure imgf000044_0002
Estos datos en la rata muestran que el compuesto de la invención, el compuesto 1, resulta en una exposición sistémica significativamente superior de su metabolito activo que el compuesto C3, C5 o C4 (valores de biodisponibilidad de metabolito de >100 %, 21 %, 11 % y 9 %, respectivamente).
Figure imgf000044_0001
Para tanto el compuesto 1 como el compuesto comparativo C5, no se detectó profármaco, por lo que se asumió que se había producido la conversión completa de los compuestos profármacos en metabolito activo in vivo en la rata. Ambos compuestos presentan proporciones de exposición a metabolito superiores a los del compuesto comparativo C4 (17) o del compuesto comparativo C3 (1.2).
Dichos profármacos se cortan mediante hidrólisis del éster, que con frecuencia ocurre más rápidamente en ratas que en perros o en seres humanos. Por ese motivo, el modelo de rata de la hidrólisis de éster no siempre es predictivo del corte en seres humanos. De esta manera, los profármacos tales como el de la invención también deberían evaluarse en perros para obtener datos predictivos adicionales para la estimación de las ratas de corte en seres humanos.
Datos farmacocinéticos en perros
Figure imgf000045_0002
Estos datos caninos muestran que el compuesto de la invención, el compuesto 1, resulta en una exposición oral similar de su metabolito activo a la del compuesto C4 y una biodisponibilidad mucho mayor que el compuesto C3 o C5 (valores de 44 %, 46 %, 0 % y 29 %, respectivamente).
Figure imgf000045_0001
Estos datos caninos muestran que el profármaco de la invención, el compuesto 1, produce una exposición relativa significativamente superior a su molécula de metabolito activo (es decir, AUCúltimo) que cualquiera de los demás compuestos o profármacos sometidos a ensayo. Dicha hidrólisis rápida y extensiva del profármaco proporciona una ventaja significativa e inesperada al compuesto de la invención. En el perro, el compuesto 1 corta mucho más eficientemente que el compuesto comparativo C5, resultando en una mejora superior a 10 veces de la proporción de exposición (177 frente a 13). Además, el compuesto 1 corta todavía más eficientemente que el compuesto comparativo C3 (proporciones de exposición de 177 frente a 0). La magnitud de dicha diferencia no podía haberse predicho basándose en la comparación del grado de hidrólisis del compuesto comparativo C5 con la de C4 (13 frente a 1,2).
ENSAYO 4: excreción renal de compuesto 1 en perros Beagle macho
Un factor importante para garantizar una administración de fármaco a largo plazo apropiada y concentraciones de fármaco de estado estable correctas en el paciente es el aclaramiento del fármaco. En general, un aclaramiento reducido del fármaco resulta en concentraciones más altas y mayores efectos del mismo. Con el fin de entender el aclaramiento renal del compuesto 1, se evaluó el porcentaje de dosis administrada que se había recuperado en la orina tras una única dosis IV en perros Beagle macho tal como se indica a continuación.
Perros Beagle macho (N=3) con pesos corporales de 9,58 a 10,42 kg recibieron una dosis IV de 1,0 mg/kg de compuesto 1. Se formuló el compuesto 1 en NaHCO3 al 5 % en D5W. Los perros fueron sometidos a ayuno durante la noche y pretratados con pentagastrina (60 pg/ml, 0,1 ml/kg, IM) aproximadamente 30 minutos antes de la administración de dosis para estimular la secreción gástrica. Se retornó la alimentación aproximadamente 4 horas después de la dosis. Se recogieron muestras de orina protegidas con paquetes de hielo durante el periodo de recolección. Tras 24 horas, se registró el peso de cada muestra, se mezcló a fondo cada muestra y se obtuvieron alícuotas y se congelaron (-80°C) antes del bioanálisis.
Se determinaron las concentraciones en orina de perro del compuesto 1 mediante CL/EM/EM. Las muestras de estudio de orina (diluidas en plasma) se agitaron con vórtex y se introdujeron 50 pl en una placa de 96 pocillos. Las muestras se extrajeron con acetonitrilo con el estándar interno crisina. El extracto se centrifugó y el sobrenadante se transfirió a una nueva placa de 96 pocillos y se diluyó 1 parte de muestra en 4 partes de agua con ácido fórmico al 0,2 %. Se inyectaron las muestras (12 pl) en una columna Waters Acquity UPLC BEH C18 (50 x 2,1 mm, 17 pm) con un caudal de 0,9 ml/min. La fase móvil A consistía en 95:5:0,1 (v:v:v) de agua:acetonitrilo:ácido fórmico y la fase móvil B consistía en 50:50:0,1 (v.v:v) de metanol:acetonitrilo:ácido fórmico. El intervalo de ensayo del compuesto 1 era 0,001 a 5,00 pg/ml.
La cantidad media de orina excretada durante un periodo de recolección de 24 h y el % aproximado de dosis administrada excretada en la orina se informan en la tabla a continuación.
Figure imgf000046_0001
La excreción renal de compuesto 1 en el perro era aproximadamente <0,5 % de la dosis administrada. Estos datos indican que el compuesto 1 presenta una baja excreción renal en perros Beagle macho.

Claims (19)

REIVINDICACIONES
1. Compuesto de la estructura:
Figure imgf000047_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. Compuesto según la reivindicación 1, que es ácido (2S, 4RJ-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico.
3. Compuesto según la reivindicación 1, que es una forma cristalina de (2S,4RJ-5-(5'-cloro-2'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de calcio.
4. Compuesto según la reivindicación 3, en el que la forma cristalina se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X de los polvos que comprende picos de difracción en valores de 20 de 7,18±0,2, 7,38±0,2 y 7,97±0,2, en el que el patrón de difracción de rayos X se obtuvo utilizando radiación de Cu-Ka.
5. Compuesto según la reivindicación 3, en el que la forma cristalina se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X de los polvos que comprende picos de difracción en valores de 20 de 3,98±0,2, 5,00±0,2, 7,18±0,2, 7,38±0,2, 7,97±0,2, 8,87±0,2 y 10,91±0,2, en el que el patrón de difracción de rayos X se obtuvo utilizando radiación Cu-Ka.
6. Compuesto según la reivindicación 5, en el que el patrón de difracción de rayos X de los polvos comprende además uno o más picos de difracción adicionales en valores de 20 seleccionados de entre 3,47±0,2, 9,99±0,2, 15,74±0,2, 15,98±0,2, y 18,98±0,2, en el que el patrón de difracción de rayos X se obtiene utilizando radiación de Cu-Ka.
7. Compuesto según la reivindicación 3, en el que la forma cristalina se caracteriza mediante calorimetría diferencial de barrido registrada a una tasa de calentamiento de 10°C por minuto que muestra un máximo de flujo de calor endotérmico a una temperatura de entre 237°C y 241°C.
8. Composición farmacéutica que comprende el compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y uno o más portadores farmacéuticamente aceptables.
9. Composición farmacéutica según la reivindicación 8, en la que el portador farmacéuticamente aceptable es estearato de magnesio.
10. Composición farmacéutica según la reivindicación 8, que comprende además un antagonista de receptor AT1, un inhibidor del enzima conversor de la angiotensina, un inhibidor de fosfodiesterasa (PDE), un inhibidor de renina, un diurético o combinaciones de los mismos.
11. Composición farmacéutica según la reivindicación 8, en una forma de administración oral que comprende el compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en una cápsula, tableta, líquido o suspensión.
12. Composición farmacéutica según la reivindicación 8, en una forma de administración intravenosa que comprende el compuesto según la reivindicación 1 o 2, en una solución tamponada.
13. Procedimiento de preparación del compuesto según la reivindicación 1, en el que el procedimiento comprende:
(a) mezclar etanol y cloruro de oxalilo para formar una solución; (b) hacer reaccionar bencil-éster de ácido (2S, 4RJ-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico con la solución, y (c) combinar la mezcla resultante con paladio sobre carbono bajo hidrógeno, obteniendo el compuesto según la reivindicación 1.
14. Procedimiento según la reivindicación 13, que comprende:
(a) disolver etanol en diclorometano,
(b) añadir cloruro de oxalilo para formar una solución y someter a agitación a temperatura ambiente, (c) evaporar el solvente de la solución,
(d) añadir la solución restante a bencil-éster de ácido (2S, 4R/M-amino-5-(5-cloro-2-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico que en primer lugar se ha disuelto en diclorometano,
(e) añadir N,N-diisopropiletilamina y someter a agitación a temperatura ambiente,
(f) evaporar el solvente para formar un sólido,
(g) combinar sólido con paladio al 10 % en peso sobre carbono en solvente para formar una mezcla, (h) dejar la mezcla bajo hidrógeno y bajo agitación, y
(i) separar mediante filtración el paladio sobre carbono y secar al vacío, obteniendo el compuesto según la reivindicación 1.
15. Procedimiento de preparación de la forma cristalina según la reivindicación 3, en el que el procedimiento comprende:
(a) disolver ácido (2S, 4R/M-amino-5-(5-cloro-2-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanoico en etanol y N,N-diisopropiletilamina para formar la solución A,
(b) disolver trifluorometanosulfonato de calcio en etanol para formar la solución B,
(c) añadir gota a gota la solución B a la solución A para formar una suspensión,
(d) someter a agitación a temperatura ambiente, y
(e) aislar los sólidos resultantes, obteniendo la forma cristalina.
16. Procedimiento según la reivindicación 15, en el que el procedimiento comprende, además:
(f) enfriar la forma cristalina a aproximadamente 5°C y añadir una mezcla fría de etanol:agua bajo agitación vigorosa, y
(g) filtrar y secar a temperatura ambiente, obteniendo una forma cristalina.
17. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para la utilización en terapia.
18. Compuesto para la utilización según la reivindicación 17 en el tratamiento de la hipertensión, la hipertensión pulmonar, la insuficiencia cardiaca o la enfermedad renal.
19. Compuesto para la utilización según la reivindicación 18 en el tratamiento de enfermedad renal, en el que el sujeto presenta enfermedad renal crónica con una tasa de filtración glomerular estimada (eGFR) de entre 60 ml/min/1,73 m2 y 15 ml/min/1,73 m2
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