JP2018506535A - ネプリライシン阻害剤としての（２ｓ，４ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸 - Google Patents

ネプリライシン阻害剤としての（２ｓ，４ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸 Download PDF

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Abstract

一態様において、本発明は、ネプリライシン阻害活性を有する、構造：（１）の化合物または薬学的に許容されるその塩、およびこの化合物の結晶形態に関する。別の態様では、本発明は、この化合物を含む薬学的組成物、この化合物の使用方法、およびこの化合物の調製プロセスに関する。一局面において、本発明の化合物は、２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−４−（エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸である。

Description

本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏで代謝されてネプリライシン阻害剤として有用である化合物を形成する新規化合物およびその結晶形態に関する。本発明はまた、化合物を含む薬学的組成物、この化合物の調製プロセス、および高血圧、心不全、肺高血圧、腎疾患などの疾患を処置するための化合物の使用方法に関する。
技術水準
ネプリライシン（中性エンドペプチダーゼ、ＥＣ３．４．２４．１１）（ＮＥＰ）は、脳、腎臓、肺、消化管、心臓、および末梢血管系を含めた多くの器官および組織に見出される内皮細胞膜結合Ｚｎ２＋メタロペプチダーゼである。ＮＥＰは、いくつかの内因性ペプチド、例えばエンケファリン、循環ブラジキニン、アンジオテンシンペプチド、およびナトリウム利尿ペプチドなどを分解および不活化する（このうち後者は、例えば、血管拡張およびナトリウム***増加／利尿、ならびに心肥大および心室性線維症の阻害などを含めたいくつかの作用を有する）。したがって、ＮＥＰは、血圧ホメオスタシスおよび循環器系の健康に対して重要な役割を果たす。
ＮＥＰ阻害剤、例えばチオルファン、カンドキサトリル、およびカンドキサトリラトなどが見込みのある治療剤として研究されてきた。ＮＥＰとアンジオテンシン−Ｉ変換酵素（ＡＣＥ）の両方を阻害する化合物もまた公知であり、オマパトリラト、ジェムパトリラト、およびサムパトリラトが挙げられる。バソペプチダーゼ阻害剤と呼ばれる、この後者のクラスの化合物は、Ｒｏｂｌら、（１９９９年）Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ、９巻（１２号）：１６６５〜１６７７頁に記載されている。
数多くのＮＥＰ阻害剤が、Ｈｕｇｈｅｓらの米国特許出願公開第２０１３／０１０９６３９号に記載されている。そのような化合物の１つが、構造：
を有する（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチル−４−（オキサリルアミノ）ペンタン酸である。この化合物は、強力なＮＥＰ阻害活性を示す（ｐＫｉ≧９）。しかし、この化合物は、前臨床種において、経口生物学的利用能が非常に低く、そのために経口投与に適切でない、または望ましくないことがわかっている。
化合物の経口生物学的利用能を向上させる１つの方法は、化合物のプロドラッグを形成することである。プロドラッグは、経口投与されたとき、許容される経口吸収を有し、ｉｎ ｖｉｖｏで切断されて活性化合物を生じるはずである。ＮＥＰ阻害剤については、そのようないずれかのプロドラッグが、急速（たとえば、経口投与後の最初の１時間以内）かつ完全に切断される結果、活性化合物の初期ボーラスが環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）応答の誘発に利用可能となることが好ましいといえる。プロドラッグそれ自体がＮＥＰ阻害活性を有する結果、プロドラッグが、切断される前に薬理活性に寄与するなら、それも望ましいといえる。さらに、こうしたいかなるプロドラッグも、長期間貯蔵されたとき、化学的に安定しているべきである。
米国特許出願公開第２０１３／０１０９６３９号明細書
Ｒｏｂｌら、Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ（１９９９年）９巻（１２号）：１６６５〜１６７７頁
したがって、許容される経口吸収を有し、ｉｎ ｖｉｖｏで急速に切断されて活性化合物を生じる、（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチル−４−（オキサリルアミノ）ペンタン酸のプロドラッグが求められている。プロドラッグは、多少のレベルのＮＥＰ阻害活性を有していてもよい。本発明は、この要望に対処する。
加えて、ＮＥＰ阻害剤化合物を治療剤として有効に使用するには、容易に製造することができ、許容される化学的および物理的安定性を有する、固体状態の形態であることが望ましいであろう。たとえば、適度に高い温度で熱安定性を有することにより、材料の加工および貯蔵が容易になる物理的形態を有することが非常に望ましいであろう。結晶固体は、製品の純度および安定性を高めるため、非晶質形態よりも一般に好ましい。しかし、有機化合物の結晶形態の形成は、極めて予測不可能である。あったとしても有機化合物のどの形態が結晶となるのかを予測する信頼できる方法は存在しない。その上、あったとしてもどの結晶形態が医薬品としての使用に望ましい物理的性質を有するかを予測する方法は存在しない。したがって、融点が適度に高い安定な結晶形態が求められている。
本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏで変換されて、ネプリライシン（ＮＥＰ）酵素阻害活性を有する化合物を形成する新規化合物（１）を提供する。したがって、この化合物は、高血圧や心不全などの状態を処置するための治療剤として有用かつ有利となることが予想される。
本発明の一態様は、（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−４−（エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸（１）：
または薬学的に許容されるその塩に関する。本発明の別の態様は、化合物１の結晶形態に関する。一実施形態では、結晶形態（１’）は、化合物１のヘミカルシウム塩（ｈｅｍｉ−ｃａｌｃｉｕｍ ｓａｌｔ）である。
本発明の別の態様は、薬学的に許容される１種または複数の担体と、化合物１またはその結晶形態とを含む薬学的組成物に関する。このような組成物は、限定はしないが、ＡＴ１受容体アンタゴニスト、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤、レニン阻害剤、利尿剤、またはこれらの組合せを含む他の治療剤を任意選択で含有してもよい。
化合物１は、ＮＥＰ酵素阻害活性を保有するので、ＮＥＰ酵素を阻害することによって、またはそのペプチド基質のレベルを増加させることによって処置される疾患または障害に罹患している患者を処置するための治療剤として有用であることが予期されている。したがって、本発明の一態様は、ＮＥＰ酵素を阻害することによって処置される疾患または障害に罹患している患者を処置する方法であって、患者に化合物１の治療有効量を投与するステップを含む方法に関する。本発明の別の態様は、高血圧、心不全、または腎疾患を処置する方法であって、被験体に化合物１の治療有効量を投与するステップを含む方法に関する。本発明のさらなる別の態様は、被験体におけるＮＥＰ酵素を阻害するための方法であって、化合物１のＮＥＰ酵素阻害量を前記被験体に投与するステップを含む方法に関する。
化合物１は、ＮＥＰ阻害活性を保有するので、これはリサーチツールとしても有用である。したがって、本発明の一態様は、リサーチツールとして化合物１を使用する方法であって、化合物１を使用して生物学的アッセイを行うステップを含む方法に関する。化合物１はまた新規化学物質を評価するために使用され得る。したがって、本発明の別の態様は、生物学的アッセイにおいて試験化合物を評価する方法であって、（ａ）試験化合物を用いて生物学的アッセイを行うことによって、第１のアッセイ値を得るステップと、（ｂ）本発明の化合物を用いて生物学的アッセイを行うことによって、第２のアッセイ値を得るステップと、（ｃ）ステップ（ａ）で得た第１のアッセイ値を、ステップ（ｂ）で得た第２のアッセイ値と比較するステップとを含み、ステップ（ａ）が、ステップ（ｂ）の前もしく後、またはそれと同時に行われる方法に関する。典型的な生物学的アッセイは、ＮＥＰ酵素阻害アッセイを含む。本発明のさらなる別の態様は、ＮＥＰ酵素を含む生物学的系または試料を研究する方法であって、（ａ）前記生物学的系または試料を本発明の化合物に接触させるステップと、（ｂ）生物学的系または試料に対する、前記化合物により引き起こされた作用を決定するステップとを含む方法に関する。
本発明のさらに別の態様は、化合物１またはその結晶形態の調製に有用なプロセスに関する。
本発明のさらに別の態様は、医薬の製造のための、特に高血圧、心不全、または腎疾患を処置するのに有用な医薬の製造のための、化合物１またはその結晶形態の使用に関する。本発明の別の態様は、哺乳動物におけるＮＥＰ酵素を阻害するための化合物１またはその結晶形態の使用に関する。本発明の他の態様および実施形態は、本明細書中に開示されている。
本発明の種々の態様は、添付の図面を参照することで説明される。
図１は、（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタン酸カルシウムの結晶形態（１’）の粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを示す。
図２は、（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタン酸カルシウムの結晶形態（１’）の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
図３は、（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタン酸カルシウムの結晶形態（１’）の熱重量分析（ＴＧＡ）プロットを示す。
図４は、（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタン酸カルシウムの結晶形態（１’）の動的水分収着（ＤＭＳ）等温線を示す。
図５は、（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタン酸カルシウムの結晶形態（１’）の偏光顕微鏡（ＰＬＭ）像を示す画像である。
図６は、アルギニン（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタノエートの結晶形態（１”）の粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを示す。
図７は、アルギニン（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタノエートの結晶形態（１”）の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
図８は、アルギニン（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタノエートの結晶形態（１”）の熱重量分析（ＴＧＡ）プロットを示す。
図９は、アルギニン（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタノエートの結晶形態（１”）の偏光顕微鏡（ＰＬＭ）像を示す画像である。
一態様では、本発明は、（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−４−（エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸（１）または薬学的に許容されるその塩に関する。
本発明の化合物１は、２つのキラル中心を含み、したがって、この化合物は、種々の立体異性体型として調製し、使用することができる。詳細には、炭素原子は、特定の（Ｒ，Ｒ）、（Ｓ，Ｓ）、（Ｓ，Ｒ）、もしくは（Ｒ，Ｓ）立体配置を有し、またはこのような立体配置を有する立体異性体型が富化されている。化合物１は、表示および名称のとおり、（Ｓ，Ｒ）立体配置である。別段示さない限り、若干量の他の立体異性体が、こうした他の異性体の存在によって組成物の全体としての有用性が損なわれないという前提で、本発明の組成物中に存在する場合もあることは、当業者には理解されよう。個々の立体異性体は、安定したキラル固定相もしくは支持体を使用するキラルクロマトグラフィーを含む、当技術分野で周知されている数多くの方法によって、またはこれらをジアステレオ異性体へと化学的に変換し、ジアステレオ異性体を、クロマトグラフィーや再結晶などの従来の手段によって分離し、次いでもとの立体異性体を再生させることにより、取得することができる。
化合物１は、エチルエステルプロドラッグであり、エチル部分は、カルボン酸をマスキングすることにより、化合物の親油性を向上させ、したがって、活性化合物の受動的な膜透過性を向上させる働きをする。身体に入ると、このエステル結合は、血液、肝臓、ならびに他の臓器および組織中に見出されるエステラーゼによって加水分解されると考えられる。
本発明の化合物１は、ネプリライシン（ＮＥＰ）酵素を阻害することがわかっている。加えて、化合物は、ｉｎ ｖｉｖｏで代謝されると、ＮＥＰ阻害について、より強い効力を有する。したがって、本発明の化合物の活性について論じるとき、化合物は、アッセイではある特定のレベルの活性を示し、その活性形態へと代謝されれば、高まったレベルの活性を示しうると理解される。化合物のＮＥＰ活性阻害能の１つの尺度は、阻害定数（ｐＫｉ）である。ｐＫｉ値は、１０を底とする解離定数（Ｋｉ）の負の対数であり、通常はモル濃度単位で報告される。化合物１は、代謝されると、米国特許出願公開第２０１３／０１０９６３９号においてＮＥＰでのｐＫｉが９以上であると報告されている、（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチル−４−（オキサリルアミノ）ペンタン酸（「活性薬剤または活性代謝産物」）となる。化合物１の他の特性および有用性は、特に、米国特許出願公開第２０１３／０１０９６３９号に記載されているものを含めて、当業者に周知されているｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏアッセイを使用して実証され得る。
化合物１ならびにその合成において使用される化合物には、同位体標識された、すなわち、１個または複数の原子が、自然界で主に見出される原子質量と異なる原子質量を有する原子で富化されている化合物も含めてよい。式Ｉの化合物に組み込むことのできる同位体の例としては、たとえば、限定はしないが、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、および１８Ｆが挙げられる。特に重要なのは、たとえば組織分布研究において使用することのできる、トリチウムまたは炭素１４が富化されている化合物１、特に代謝部位において重水素が富化されているために、たとえば代謝安定性がより高い化合物となっている化合物１、および、たとえば陽電子放射トポグラフィー（ＰＥＴ）研究において使用することのできる、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏ、１３Ｎなどの陽電子放射同位体が富化されている化合物１である。
化学構造は、本明細書では、ＣｈｅｍＤｒａｗソフトウェア（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｉｎｃ．、マサチューセッツ州Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ）で実行されるとおりのＩＵＰＡＣ規則に従って命名している。
定義
本発明の化合物、組成物、方法およびプロセスを記載する場合、他に指摘されない限り以下の用語は、以下の意味を有する。さらに、本明細書で使用する場合、単数の形態「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、使用されている文脈が明らかに他を指示していない限り、対応する複数の形態を含む。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「有する」という用語は、包括的であることが意図され、列挙した要素以外のさらなる要素も存在し得ることを意味する。本明細書中で使用された成分の量、特性、例えば分子量、反応条件などを表現するすべての数は、他に指摘されない限り、すべての場合において、「約」という用語で修飾されているものと理解されたい。したがって、本明細書中に記述された数は、本発明により得ようとされている所望の特性に応じて異なり得る近似値である。少なくとも、しかも特許請求の範囲の同等物の原理の適用を限定しようと試みることなく、各数は、少なくとも、報告された有効数字を考慮して、かつ普通の丸め技法を適用することによって解釈すべきである。
用語「約」または「およそ」とは、化合物１の熱挙動に関して使用するとき、±１〜３℃であると定義される。用語「近似」とは、尿中に***された化合物１の用量％に関して使用するとき、通常は標準偏差の約２倍または９５パーセント信頼区間の半分の幅である誤差範囲によって規定される。開示の他の領域における用語「近似」は、一揃いのデータ値の標準偏差または変動もしくは分散の量を示すのに使用される場合もある。
本明細書で使用する用語「制御放出」とは、持続放出および延長放出と同義であり、被験体において、延長された期間にわたって送達される薬物の量に関する。一般に、制御放出錠剤およびカプセル剤は、約８、１２、１６、および２４時間の期間にわたって、活性化合物を被験体へと放出する。他方、用語「即時放出」とは、被験体において、短い期間内、通常は約３０分未満で放出される活性化合物を指す。用語「遅延放出」は、指定の期間後に薬学的用量を放出する錠剤およびカプセル剤を対象とする。こうした剤形は、胃での放出は妨げるが、腸管での放出は可能にするために、通常は腸溶コーティングされている。
本明細書で使用する場合、「式の」または「式を有する」または「構造を有する」という語句は、限定的であることは意図されておらず、「含む」という用語が一般的に使用されるのと同じように使用される。例えば、一つの構造が描写されている場合、別途述べられていない限り、すべての立体異性体および互変異性体の形態が包含されることを理解されたい。
一般に、薬学的固体について述べる際、用語「（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタン酸カルシウム」は、化合物１のカルボン酸アニオンのカルシウム対イオンに対する化学量論量がおよそ２：１であることを含意する。化合物１のヘミカルシウム塩という用語は、化合物１のカルシウム塩と同等である。本発明の一実施形態では、化合物１’の結晶形態は、非吸湿性固体である。
本明細書で使用する用語「融点」とは、固体から液体への相変化に対応する熱転移のために、示差走査熱量測定によって最大の吸熱熱流が認められる温度を意味する。
「薬学的に許容される」という用語は、本発明で使用する場合、生物学的に、または別の点で、許容不可能ではない物質を指す。例えば「薬学的に許容される担体」という用語は、組成物に組み込むことができ、許容できない生物学的作用を引き起こすことなく、または組成物の他の構成成分と許容できない形で相互作用することなく、患者に投与される物質を指す。このような薬学的に許容される物質は通常、毒物学的試験および製造試験の必要とされる基準を満たし、米国食品医薬品局によって適切な不活性成分として特定される物質を含む。
「薬学的に許容される塩」という用語は、患者、例えば哺乳動物などへの投与が許容される塩基または酸から調製した塩を意味する（例えば塩は、所与の投与計画に対して許容される哺乳動物の安全性を有する）。しかし、本発明に包含される塩は、薬学的に許容される塩である必要はないこと、例えば患者への投与を目的としない中間体化合物の塩などであることを理解されたい。薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される無機塩基または有機塩基から、および薬学的に許容される無機酸または有機酸から誘導することができる。さらに、化合物が塩基性部分、例えばアミン、ピリジンまたはイミダゾールなどと、酸性部分、例えばカルボン酸またはテトラゾールなどの両方を含有する場合、双性イオンを形成することができ、これは本明細書で使用する「塩」という用語に含まれる。薬学的に許容される無機塩基から誘導される塩として、アンモニウム塩、カルシウム塩、銅塩、第二鉄塩、第一鉄塩、リチウム塩、マグネシウム塩、マンガン塩、第一マンガン塩、カリウム塩、ナトリウム塩、および亜鉛塩などが挙げられる。薬学的に許容される有機塩基から誘導される塩として、置換アミン、環式アミン、および天然由来のアミンなどを含めた第一級、第二級および第三級アミン、例えばアルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン（ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ）、ピペラジン（ｐｉｐｅｒａｄｉｎｅ）、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、およびトロメタミンなどの塩が挙げられる。薬学的に許容される無機酸から誘導される塩として、ホウ酸、炭酸、ハロゲン化水素酸（臭化水素酸、塩化水素酸、フッ化水素酸またはヨウ化水素酸）、硝酸、リン酸、スルファミン酸および硫酸の塩が挙げられる。薬学的に許容される有機酸から誘導される塩として、脂肪族ヒドロキシル酸（例えば、クエン酸、グルコン酸、グリコール酸、乳酸、ラクトビオン酸、リンゴ酸、および酒石酸）、脂肪族モノカルボン酸（例えば、酢酸、酪酸、ギ酸、プロピオン酸およびトリフルオロ酢酸）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸およびグルタミン酸）、芳香族カルボン酸（例えば安息香酸、ｐ−クロロ安息香酸、ジフェニル酢酸、ゲンチシン酸、馬尿酸、およびトリフェニル酢酸）、芳香族ヒドロキシル酸（例えば、ｏ−ヒドロキシ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、１−ヒドロキシナフタレン−２−カルボン酸および３−ヒドロキシナフタレン−２−カルボン酸）、アスコルビン酸、ジカルボン酸（例えば、フマル酸、マレイン酸、シュウ酸およびコハク酸）、グルクロン（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ）酸、マンデル酸、ムチン酸、ニコチン酸、オロト酸、パモン酸、パントテン酸、スルホン酸（例えば、ベンゼンスルホン酸、カンファースルホン酸、エジシル酸、エタンスルホン酸、イセチオン酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２，６−ジスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸）、およびキシナホ酸などの塩が挙げられる。
「治療有効量」という用語は、処置を必要とする患者に投与した場合、処置を実行するのに十分な量、すなわち所望の治療効果を得るのに必要とされる薬物の量を意味する。例えば高血圧を処置するための治療有効量は、例えば、高血圧の症状を減少させる、抑制する、排除する、もしくは予防する、または根底にある高血圧の原因を処置するのに必要とされる化合物の量である。一実施形態では、治療有効量は、血圧を減少させるのに必要とされる薬物の量、または正常な血圧を維持するために必要とされる薬物の量である。他方では、「有効量」という用語は、所望の結果を得るのに十分な量を意味するが、この所望の結果とは、必ずしも治療的結果でなくてもよい。例えば、ＮＥＰ酵素を含む系を研究する場合、「有効量」は、酵素を阻害するために必要とされる量であってよい。
「処置する」または「処置」という用語は、本明細書で使用する場合、哺乳動物（特にヒト）などの患者における疾患または医学的状態（例えば高血圧）を処置すること、または処置を意味し、以下のうちの一つまたは複数を含む：（ａ）疾患または医学的状態が生じるのを予防する、すなわち、疾患もしくは医学的状態の再発を予防すること、または疾患もしくは医学的状態になる傾向がある患者の予防的処置；（ｂ）疾患または医学的状態を改善する、すなわち、患者における疾患または医学的状態を排除することまたは退化を引き起こすこと；（ｃ）疾患または医学的状態を抑制すること、すなわち患者における疾患または医学的状態の進行を遅延させるまたは止めること；あるいは（ｄ）患者における疾患または医学的状態の症状を軽減すること。例えば、「高血圧を処置する」という用語では、高血圧が生じるのを予防する、高血圧を改善する、高血圧を抑制する、および高血圧の症状を軽減する（例えば、血圧を低下させる）ことを含むことになる。「被験体」または「患者」という用語は、処置もしくは疾患予防を必要とする、または特定の疾患もしくは医学的状態の疾患の予防もしくは処置のために現在処置を受けている、ならびにアッセイにおいて結晶性化合物が評価されている、または使用されている試験被験体、例えば動物モデルなどである、ヒトなどの哺乳動物を含むことが意図される。
本明細書中で使用される他のすべての用語は、これらが関連する技術分野の当業者であれば理解されるようなこれらの普通の意味を有することが意図される。
一般合成手順
化合物１およびその結晶カルシウム塩形態は、容易に入手可能な出発材料から、以下および実施例に記載するとおりに合成することができる。典型的なまたは好ましいプロセス条件（すなわち、反応温度、時間、反応物のモル比、溶媒、圧力など）を示す場合において、別段言明しない限り、他のプロセス条件も使用してよいことは理解されよう。詳細なプロセス条件（すなわち、結晶化温度、時間、反応物のモル比、溶媒、圧力など）が示されていても、別段言明しない限り、他のプロセス条件も使用してよいことは理解されよう。一部の例では、反応または結晶化を室温で実施し、実際の温度測定は行わなかった。室温とは、実験室環境での周囲温度と一般に関連付けられる範囲内の温度を意味すると解釈することができ、通常は、約１５℃〜約３０℃、たとえば約２０℃〜約２５℃の範囲になると理解される。他の例では、反応または結晶化を室温で実施し、温度を実際に測定し、記録した。
本発明の方法において記載するいかなるモル比も、当業者に利用可能な種々の方法によって容易に求めることができる。たとえば、そのようなモル比は、１Ｈ ＮＭＲによって容易に求めることができる。別法として、元素分析およびＨＰＬＣ法を使用してモル比を求めることもできる。
一実施形態では、本発明は、（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−４−（エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸（１）または薬学的に許容されるその塩に関する。
別の実施形態では、エタノールと塩化オキサリルを混合して溶液を形成し、（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸ベンジルエステルをその溶液と反応させ、得られる混合物を水素下でパラジウム炭素と合わせることにより、化合物１を調製することができる。
さらに別の実施形態では、（ａ）エタノールをジクロロメタンに溶解させ、（ｂ）塩化オキサリルを加えて溶液を形成し、室温で撹拌し、（ｃ）溶液から溶媒を蒸発させ、（ｄ）残存する溶液を、先にジクロロメタンに溶解させた（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸ベンジルエステルに加え、（ｅ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを加え、室温で撹拌し、（ｆ）溶媒を蒸発させて固体を形成し、（ｇ）固体を溶媒中で１０ｗｔ％パラジウム炭素と合わせて混合物を形成し、（ｈ）混合物を撹拌しながら水素下に置き、（ｉ）パラジウム炭素を濾別し、真空乾燥して固体の化合物１を形成することにより、化合物１を調製することができる。ステップ（ｆ）および（ｉ）において得られる固体を、クロマトグラフィーによって精製してもよい。
化合物１の結晶ヘミカルシウム塩の調製は、一般に、適切な不活性希釈剤中で行われ、希釈剤の例としては、限定はしないが、任意選択で水を含有する、アセトン、アセトニトリル、酢酸エチル、メチルエチルケトン、メタノール、エタノール、イソプロパノール、イソブタノール、ジクロロメタン、メチルｔ−ブチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル、ヘキサンなど、およびこれらの混合物が挙げられる。（溶媒系とも呼ばれる）不活性希釈剤の混合物としては、アセトンと水、アセトニトリルと水、エタノールと酢酸エチル、酢酸エチルとヘキサン、および低級アルコール（Ｃ１−６アルキル−ＯＨ）と水、たとえば、メタノールと水やイソプロパノールと水が挙げられる。特に適切な溶媒系として、プロピオン酸カルシウムまたは他のカルシウム塩を含有するエタノール、エタノール：水、および酢酸エチル：エタノールが挙げられる。結晶化が完了したら、結晶の化合物は、沈殿、濾過、濃縮、遠心分離、真空乾燥などのいずれかの従来の手段によって、反応混合物から単離することができる。
一実施形態では、本発明は、（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−４−（エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸の結晶形態に関する。別の実施形態では、結晶形態は、（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタン酸カルシウム（１’）である。
別の実施形態では、（ａ）（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−４−（エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸をエタノールおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンに溶解させて溶液Ａを形成し、（ｂ）トリフルオロメタンスルホン酸カルシウムをエタノールに溶解させて溶液Ｂを形成し、（ｃ）溶液Ｂを溶液Ａに滴下して加えスラリーを形成し、（ｄ）室温で撹拌し、（ｅ）得られる固体を単離して化合物１’を生成することにより、結晶形態１’を調製することができる。別の実施形態は、第２の結晶化ステップを含む。ここで、第２の再結晶化プロセスは、（ｆ）化合物１’を約５℃に冷却し、激しく撹拌しながら冷エタノール：水混合物を加えるステップと、（ｇ）濾過し、室温で乾燥させて化合物１’を生成するステップをさらに含む。
結晶特性
粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）分析の分野で周知されているように、ＰＸＲＤパターンの相対ピーク高さは、試料調製および計器の幾何学的配置に関係するいくつかの要素に左右されるが、ピーク位値は、実験細目に比較的鈍感である。ＰＸＲＤ、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、および動的水分収着（ＤＭＳ）評価（水分収着−脱着分析としても公知）を、本明細書に記載のとおりに実施した。
一態様では、本発明は、結晶形態の（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−４−（エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸に関する。別の態様では、結晶形態は、（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタン酸カルシウム（１’）である。この結晶形態１’は、ピーク位値が図１に示すものと実質的に一致するＰＸＲＤパターンを特徴とする。面積が０．１％より大きい相対強度を有するピークを、以下の表に列挙する。このパターンは、２θが３〜２５°の範囲において鋭い回折ピークを示す。
したがって、一実施形態では、結晶形態１’は、７．１８±０．２、７．３８±０．２、および７．９７±０．２の２θ値に回折ピークを含むＰＸＲＤパターンを特徴とする。
別の実施形態では、結晶形態１’は、３．９８±０．２、５．００±０．２、７．１８±０．２、７．３８±０．２、７．９７±０．２、８．８７±０．２、および１０．９１±０．２の２θ値に回折ピークを含むＰＸＲＤパターンを特徴とする。
別の実施形態では、結晶形態１’は、３．４７±０．２、９．９９±０．２、１５．７４±０．２、１５．９８±０．２、および１８．９８±０．２から選択される２θ値に１つまたは複数の追加の回折ピークを有することをさらなる特徴とし、さらに別の実施形態では、結晶形態１’は、３つまたはそれを超えるそうした追加の回折ピークを有することをさらなる特徴とする。
一実施形態では、結晶形態１’は、図２に示すものと実質的に一致するＤＳＣサーモグラムを特徴とする。結晶形態１’は、毎分１０℃の加熱速度で記録したＤＳＣトレースが、約２３７℃〜約２４１℃の間の温度において吸熱熱流の極大点を示すことを特徴とする。ＤＳＣサーモグラムには、およそ２３９℃にピークを有し、２３３℃で始まり、エンタルピーが約６７Ｊ／ｇである融解吸熱が示される。第２の吸熱は、分解および他の未知の熱事象を具体的に表す。
一実施形態では、結晶形態１’は、図３のＴＧＡプロットを特徴とする。ＴＧＡプロットは、温度約２２５℃で分解の開始を示す。結晶化合物は、約２５０℃の後のかなりの重量減少からわかるとおり、融解後に分解するが、これは、ＤＳＣトレースにおける第２の吸熱とも一致する。
一実施形態では、結晶形態１’は、図４のＤＭＳ等温線を特徴とする。この形態は、非吸湿性固体である。５％〜９０％の間の相対湿度に曝したとき、観察される合計水分増加は、１重量％未満である。連続する収着−脱着サイクル間に、有意なヒステリシスは認められない。収着−脱着サイクル後に得られた固体は、出発材料と同じＰＸＲＤパターンを示し、この実験後に形態の変化がないことが示唆された。
結晶形態１’は、この形態が薄い複屈折結晶であることを示す、図５のＰＬＭ像によって特徴付けることができる。
Ｌ−アルギニン（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタノエート（１”）の結晶も調製した。しかし、こうした結晶を周囲条件に曝すと、ゆっくりと潮解する結果となった。結晶形態１”は、それぞれ図６および７のＰＸＲＤおよびＤＳＣトレースを特徴とする。ＤＳＣトレースは、毎分１０℃の加熱速度で記録されており、約１１３℃〜約１１７℃の間の温度において吸熱熱流の極大点を示す。ＤＳＣサーモグラムには、およそ１１６．９℃にピークを有し、１０６．８℃で始まり、エンタルピーが約７０．３Ｊ／ｇである融解吸熱が示される。結晶形態１”は、図８のＴＧＡプロットも特徴とし、１４０℃まで約６．５％の重量減少が認められ、１４０℃の後も、質量の減少が引き続き認められる。結晶形態１”は、この形態が薄い複屈折結晶であることを示す、図９のＰＬＭ像によって特徴付けることができる。
有用性
被験体における薬物挙動のｉｎ ｖｉｔｒｏからｉｎ ｖｉｖｏへの外挿は、向上し続けている（たとえば、Ｃｈｉｂａら、ＡＡＰＳ Ｊ．、２００９年６月、１１巻（２号）：２６２〜２７６頁を参照されたい）。本発明では、化合物１のネプリライシン阻害活性を決定するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏヒトネプリライシン阻害剤活性を評価した（アッセイ１）。この化合物は、ｐＫｉ≧９．０の閾値に達した。しかし、被験体における化合物１の挙動をより正確に予測するために、追加のｉｎ ｖｉｖｏ実験をさらに行った。
プロドラッグの適性の評価を行う際の肝要なパラメーターは、プロドラッグがどれだけ急速に活性薬剤または活性代謝産物に変換されるかを決定することである。本発明では、エステルプロドラッグである化合物１を、高度に種依存的となりうる酵素的反応、たとえばエステラーゼ加水分解によって、活性薬剤または活性代謝産物である比較化合物Ｃ２に変換する。そのため、ヒト被験体に外挿するとき、複数の種における変換速度の評価を行うことが好ましい。加えて、必要な治療利益を達成するのに十分な量の薬物が血漿に送達されるかどうか評価を行う際に有用であるいくつかの性質、たとえば、高い経口生物学的利用能や、腎臓機能が損なわれている被験体については低い腎臓クリアランスというものがある。
本発明については、ラット、イヌ、およびサルの種において経口および静脈内薬物動態研究を行って、活性代謝産物である比較化合物Ｃ２と比較した、化合物１の経口生物学的利用能を決定した（アッセイ２）。加えて、化合物１を、化学的に類似した他のエステルプロドラッグまたは化合物と比較するために、ラットおよびイヌの種において経口および静脈内薬物動態研究を行った（アッセイ３）。
化合物１は、ＮＥＰ酵素を阻害し、したがって、ＮＥＰ阻害に応答性である医学的状態の処置および／または予防に有用となることが予想される。それゆえ、ＮＥＰ酵素を阻害し、またはそのペプチド基質のレベルを増大させることにより処置される疾患または障害に罹患している患者は、化合物１の治療有効量を投与することにより処置できることが見込まれる。たとえば、化合物１は、ＮＥＰを阻害することにより、ＮＥＰによって代謝される内因性ペプチド、たとえば、ナトリウム利尿ペプチド、ボンベシン、ブラジキニン、カルシトニン、エンドセリン、エンケファリン、ニューロテンシン、サブスタンスＰ、血管作用性腸管ペプチドの生物学的効果を増強することが予想される。それゆえ、この化合物は、たとえば腎臓、中枢神経、生殖、および胃腸系に対する、他の生理学的作用を有することも見込まれる。
薬物は、***および生体内変換として一般に類別される種々の排出プロセスによって、被験体身体から除去される。***は、無傷の不揮発性薬物の、主に腎臓による、膀胱、尿への除去に関連するが、他の***経路として、胆汁（肝臓）、汗、唾液、（乳汁分泌による）乳汁、または他の体液が挙げられる。アルコールや気体麻酔剤のような揮発性薬物は、肺から呼気へと***される。他方、生体内変換または薬物代謝は、身体において化学的に代謝産物に変換される薬物に関連し、通常は酵素的プロセスである。これの例外は、薬物が非酵素的に化学的に変化するとき、たとえば、エステル加水分解である。薬物の生体内変換に関与する酵素は、主に肝臓に位置する。腎臓、肺、小腸、皮膚などの他の組織も、代謝酵素を含んでいる。
薬物動態研究を使用して、被験体における排出経路、たとえば、腎臓クリアランスを、時間をわたっての尿中の投与された薬物の***を介して調査することもできる。イヌモデルにおける化合物１の腎臓***を実施して、排出経路としての腎臓***を評価した（アッセイ４）。この排出経路は、腎臓機能が損なわれており、腎臓***によって最小限にしか除去されない治療を必要とする被験体にとって重要である。一実施形態では、被験体における化合物１またはその結晶形態の腎臓***は、２４時間で、投与された用量のおよそ１５％以下、１０％以下、５％以下、３％以下、２％以下、１％以下、または０．５％以下である。
以下のアッセイの部において記載するとおり、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＮＥＰ酵素アッセイ、ならびにいくつもの動物種における経口生物学的利用能および腎臓***のｉｎ ｖｉｖｏでの決定には、化合物１と共に、化学構造が類似している比較用化合物を含めた。驚いたことに、結果に有意差が認められた。個々の比較用化合物は、１つまたは複数のアッセイにおいて化合物１と同様の性質を示したが、同時に、化合物１だけが、疾患の処置に特定の有用性をもたらすことが見込まれる高いヒトネプリライシン阻害活性、高い経口生物学的利用能、および低い腎臓***を示した。
加えて、化合物１を治療剤として有効に使用するには、容易に製造することができ、高い融点を含む許容される化学的および物理的安定性を有する、この化合物の固体状態形態を取得することが望ましい。化合物１の遊離酸の結晶を取得することはできなかった。化合物１のアルギニンおよびカルシウム結晶が最終的に生成されたが、アルギニン結晶は、周囲条件で潮解性であり、さらに開発することは難しかった。一方、カルシウム結晶は、安定し、２３９℃付近で融解しており、治療剤としてのさらなる開発に使用することができる。
心血管疾患
ナトリウム利尿ペプチドおよびブラジキニンのような血管作用性ペプチドの作用を増強することによって、化合物１に、心血管疾患などの医学的状態を処置および／または予防することにおいて有用性が見出されると予期されている。例えば、Ｒｏｑｕｅｓら、（１９９３年）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｒｅｖ．４５巻：８７〜１４６頁およびＤｅｍｐｓｅｙら、（２００９年）Ａｍｅｒ． Ｊ． ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、１７４巻（３号）：７８２〜７９６頁を参照されたい。特に興味深い心血管疾患として、高血圧および心不全が挙げられる。高血圧は、例示として、これらに限定されずに、以下が挙げられる：原発性高血圧（これはまた本態性高血圧または特発性高血圧とも呼ばれる）；続発性高血圧；付随的腎疾患を伴う高血圧；付随的腎疾患を伴う、または伴わない重症の高血圧；肺高血圧（肺動脈高血圧を含む）；および治療抵抗性高血圧。心不全は、例示として、これらに限定されずに、以下が挙げられる：うっ血性心不全；急性心不全；慢性心不全、例えば左室駆出率の減少を有するもの（収縮期心不全とも呼ばれる）または左室駆出率が保たれているもの（拡張期心不全ともと呼ばれる）；ならびに急性および慢性の非代償性心不全。したがって、本発明の一実施形態は、患者に化合物１の治療有効量を投与することを含む、高血圧、特に原発性高血圧または肺動脈高血圧を処置する方法に関する。
原発性高血圧の処置に関して、治療有効量は通常、患者の血圧を低下させるのに十分な量である。これは、軽度から中等度の高血圧および重症の高血圧の両方を含む。高血圧を処置するために使用する場合、化合物１は、他の治療剤、例えばアルドステロンアンタゴニスト、アルドステロンシンターゼ阻害剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤および二重作用性アンジオテンシン変換酵素／ネプリライシン阻害剤、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）アクチベーターおよび刺激物質、アンジオテンシン−ＩＩワクチン、抗糖尿病剤、抗脂質剤、抗血栓剤、ＡＴ１受容体アンタゴニストおよび二重作用性ＡＴ１受容体アンタゴニスト／ネプリライシン阻害剤、β１−アドレナリン受容体アンタゴニスト、二重作用性β−アドレナリン受容体アンタゴニスト／α１−受容体アンタゴニスト、カルシウムチャネル遮断剤、利尿剤、エンドセリン受容体アンタゴニスト、エンドセリン変換酵素阻害剤、ネプリライシン阻害剤、ナトリウム利尿ペプチドおよびこれらの類似体、ナトリウム利尿ペプチドクリアランス受容体アンタゴニスト、一酸化窒素ドナー、非ステロイド性抗炎症剤、ホスホジエステラーゼ阻害剤（具体的にはＰＤＥ−Ｖ阻害剤）、プロスタグランジン受容体アゴニスト、レニン阻害剤、可溶性グアニル酸シクラーゼ刺激物質およびアクチベーターならびにこれらの組合せなどと組み合わせて投与することができる。本発明の一つの特定の実施形態では、本発明の化合物は、ＡＴ１受容体アンタゴニスト、カルシウムチャネル遮断剤、利尿剤、またはこれらの組合せと組み合わせて、原発性高血圧を処置するために使用される。本発明の別の特定の実施形態では、本発明の化合物は、ＡＴ１受容体アンタゴニストと組み合わせて、付随的腎疾患を伴う高血圧を処置するために使用される。治療抵抗性高血圧を処置するために使用する場合、化合物は、アルドステロンシンターゼ阻害剤などの他の治療剤と組み合わせて投与することができる。
肺動脈高血圧の処置に関して、治療有効量は通常、肺血管の抵抗性を低下させるのに十分な量である。療法の他の目的は、患者の運動能力を改善することである。例えば、臨床的な状況では、治療有効量は、６分間の間快適に歩行するように（約２０〜４０メートルの距離にわたり）患者の能力を改善する量とすることができる。肺動脈高血圧を処置するために使用する場合、化合物は、他の治療剤、例えばα−アドレナリン受容体アンタゴニスト、β１−アドレナリン受容体アンタゴニスト、β２−アドレナリン受容体アゴニスト、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、抗凝血剤、カルシウムチャネル遮断剤、利尿剤、エンドセリン受容体アンタゴニスト、ＰＤＥ−Ｖ阻害剤、プロスタグランジン類似体、選択的セロトニン再取り込み阻害剤、およびこれらの組合せと組み合わせて投与することができる。本発明の一つの特定の実施形態では、化合物１は、ＰＤＥ−Ｖ阻害剤または選択的セロトニン再取り込み阻害剤と組み合わせて、肺動脈高血圧を処置するために使用される。
本発明の別の実施形態は、患者に化合物１の治療有効量を投与することを含む、心不全、特にうっ血性心不全（心臓収縮期と心臓拡張期の両方のうっ血性心不全を含む）を処置するための方法に関する。通常、治療有効量は、血圧を低下させ、そして／または腎機能を改善するのに十分な量である。臨床的な状況において、治療有効量は、心臓の血流力学を改善する、例えば楔入圧、右心房圧、充満圧、および血管抵抗性における減少などに十分な量とすることができる。一実施形態では、化合物１は静脈内投与形態として投与される。心不全を処置するために使用する場合、化合物は、他の治療剤、例えばアデノシン受容体アンタゴニスト、進行糖化終末産物ブレーカー（ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔ ｂｒｅａｋｅｒ）、アルドステロンアンタゴニスト、ＡＴ１受容体アンタゴニスト、β１−アドレナリン受容体アンタゴニスト、二重作用性β−アドレナリン受容体アンタゴニスト／α１−受容体アンタゴニスト、キマーゼ阻害剤、ジゴキシン、利尿剤、エンドセリン変換酵素（ＥＣＥ）阻害剤、エンドセリン受容体アンタゴニスト、ナトリウム利尿ペプチドおよびこれらの類似体、ナトリウム利尿ペプチドクリアランス受容体アンタゴニスト、一酸化窒素ドナー、プロスタグランジン類似体、ＰＤＥ−Ｖ阻害剤、可溶性グアニル酸シクラーゼアクチベーターおよび刺激物質、ならびにバソプレッシン受容体アンタゴニストなどと組み合わせて投与することができる。本発明の一つの特定の実施形態では、化合物１は、アルドステロンアンタゴニスト、β１−アドレナリン受容体アンタゴニスト、ＡＴ１受容体アンタゴニスト、または利尿剤と併用し、うっ血性心不全を処置するために使用される。
下痢
ＮＥＰ阻害剤として、化合物１は、内因性エンケファリンの分解を阻害することが予期され、したがってこのような化合物に、伝染性および分泌性／水様性の下痢を含めた下痢の処置に対しても有用性を見出すことができる。例えば、Ｂａｕｍｅｒら、（１９９２年）Ｇｕｔ、３３巻：７５３〜７５８頁；Ｆａｒｔｈｉｎｇ（２００６年）Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ、２４巻：４７〜５８頁；およびＭａｒｃａｉｓ−Ｃｏｌｌａｄｏ（１９８７年）Ｅｕｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１４４巻（２号）：１２５〜１３２頁を参照されたい。下痢を処置するために使用する場合、化合物１は、一つまたは複数の追加の下痢止剤と併用することができる。
腎疾患
化合物１は、ナトリウム利尿ペプチドおよびブラジキニンのような血管作用性ペプチドの作用を強化することにより、腎機能を向上させることが見込まれ（Ｃｈｅｎら（１９９９年）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １００巻：２４４３〜２４４８頁、Ｌｉｐｋｉｎら（１９９７年）Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ． ５２巻：７９２〜８０１頁、およびＤｕｓｓａｕｌｅら（１９９３年）Ｃｌｉｎ． Ｓｃｉ． ８４巻：３１〜３９頁を参照されたい）、腎障害のある被験体における腎疾患の処置および／または予防において有用である。特に重要な腎疾患として、糖尿病性腎症、慢性腎臓病、タンパク質尿、および特に、（たとえば、心血管の手術、化学療法、または医用画像法における造影剤の使用によって引き起こされる）急性腎臓傷害、または急性腎不全が挙げられる（Ｓｈａｒｋｏｖｓｋａら（２０１１年）Ｃｌｉｎ． Ｌａｂ． ５７巻：５０７〜５１５頁およびＮｅｗａｚら（２０１０年）Ｒｅｎａｌ Ｆａｉｌｕｒｅ ３２巻：３８４〜３９０頁を参照されたい）。
慢性腎臓病（ＣＫＤ）を有する、腎障害のある被験体は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｋｉｄｎｅｙ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｏｕｔｃｏｍｅｓ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ（ＮＫＦ ＫＤＯＱＩ）ガイドラインに従って分類することができる。慢性腎臓病、すなわち、３か月間以上の腎臓損傷または糸球体濾過率（ＧＦＲ）６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２未満が確認されたら、疾患のステージを、ＫＤＯＱＩ ＣＫＤ分類に従って割り当てることができる。それには、ステージ１（ＧＦＲが正常または増大している腎臓損傷）：ＧＦＲ≧９０、ステージ２（ＧＦＲが軽度に低下している腎臓損傷）：ＧＦＲ６０〜８９、ステージ３（ＧＦＲの中程度の低下）：ＧＦＲ３０〜５９、ステージ４（ＧＦＲの重度の低下）：ＧＦＲ１５〜２９、およびステージ５（腎不全）：ＧＦＲ＜１５（または透析）が含まれる。ＧＦＲは、ｍＬ／分／１．７３ｍ２の単位で規定される。
一実施形態は、化合物１またはその結晶形態、詳細には結晶形態１’の治療有効量を投与することを含む、腎障害のある被験体の処置方法を含む。この方法は、高血圧または心不全を有する腎障害のある被験体を処置することをさらに含む。化合物１またはその結晶形態、詳細には結晶形態１’は、腎疾患の処置に使用するとき、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、ＡＴ１受容体アンタゴニスト、利尿剤などの他の治療剤と併用して投与してもよい。
別の実施形態は、化合物１またはその結晶形態、詳細には結晶形態１’の治療有効量を患者に投与することを含む、推定糸球体濾過率（ｅＧＦＲ）が６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２〜１５ｍＬ／分／１．７３ｍ２の間である慢性腎臓病を有する腎障害のある被験体の処置方法を含む。別の実施形態は、化合物１またはその結晶形態、詳細には結晶形態１’の治療有効量を患者に投与することを含む、推定糸球体濾過率（ｅＧＦＲ）が９０ｍＬ／分／１．７３ｍ２以上（ステージ１）またはｅＧＦＲが１５ｍＬ／分／１．７３ｍ２未満（ステージ５）である慢性腎臓病を有する腎障害のある被験体の処置方法を含む。本発明の目的では、重度の腎臓病は、ｅＧＦＲが３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２未満であるとして分類することができる。さらに別の実施形態には、ステージ１、ステージ２、ステージ３、ステージ４、ステージ５として分類される慢性腎臓病、またはこうしたステージの１つまたは複数を網羅するｅＧＦＲ範囲を有する腎障害のある被験体を、化合物１またはその結晶形態、詳細には結晶形態１’で処置する方法が含まれる。
予防療法
ナトリウム利尿ペプチドの作用を増強させることによって、化合物１はまた、予防療法において、ナトリウム利尿ペプチドの抗肥大性および抗線維性作用により（Ｐｏｔｔｅｒら、（２００９年）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１９１巻：３４１〜３６６頁を参照されたい）、例えば心筋梗塞後の心機能不全の進行を予防すること、血管形成後の動脈再狭窄を予防すること、血管手術後の血管壁の増粘を予防すること、アテローム性動脈硬化症を予防すること、および糖尿病の脈管症を予防することにおいて有用であることも予期されている。
緑内障
ナトリウム利尿ペプチドの作用を増強させることによって、化合物１は、緑内障を処置するのに有用であると予期されている。例えば、Ｄｉｅｓｔｅｌｈｏｒｓｔら、（１９８９年）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、１２巻：９９〜１０１頁を参照されたい。緑内障を処置するために使用する場合、化合物１は、一つまたは複数の追加の抗緑内障剤と併用することができる。
疼痛緩和
ＮＥＰ阻害剤として、化合物１は、内因性エンケファリンの分解を阻害すると予期されており、したがってこのような化合物に、鎮痛剤としての有用性を見出すこともできる。例えば、Ｒｏｑｕｅｓら、（１９８０年）Ｎａｔｕｒｅ、２８８巻：２８６〜２８８頁およびＴｈａｎａｗａｌａら、（２００８年）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ、９巻：８８７〜８９４頁を参照されたい。疼痛を処置するために使用する場合、化合物１は、一つまたは複数の追加の抗侵害受容性薬物、例えばアミノペプチダーゼＮまたはジペプチジルペプチダーゼＩＩＩ阻害剤、非ステロイド性抗炎症剤、モノアミン再取り込み阻害剤、筋弛緩剤、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、オピオイド受容体アゴニスト、５−ＨＴ１Ｄセロトニン受容体アゴニストおよび三環式抗うつ剤などと併用することができる。
他の有用性
このＮＥＰ阻害特性に起因して、化合物１はまた、鎮咳剤として有用であることも予期され、ならびに肝硬変に伴う門脈圧亢進症（Ｓａｎｓｏｅら、（２００５年）Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．４３巻：７９１〜７９８頁を参照されたい）、がん（Ｖｅｓｅｌｙ、（２００５年）Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｍｅｄ．５３巻：３６０〜３６５頁を参照されたい）、うつ病（Ｎｏｂｌｅら、（２００７年）Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ、１１巻：１４５〜１５９頁を参照されたい）、月経障害、早期陣痛、子癇前症、子宮内膜症、繁殖障害（例えば、男性および女性の不妊、多嚢胞性卵巣症候群、着床不全）、ならびに男性の***不全および女性の性的興奮障害を含めた男性および女性の性機能不全の処置における有用性が見出されている。さらに具体的には、化合物１は、女性の性機能不全を処置するのに有用であると予期されており（Ｐｒｙｄｅら、（２００６年）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４９巻：４４０９〜４４２４頁を参照されたい）、この性機能不全とは、多くの場合、女性患者が、性的表現に満足を見出すことが困難であること、またはできないことと定義される。性機能不全は、様々な多様な女性の性的疾患をカバーし、例示として、これらに限定されずに、性的欲求低下障害、性的興奮障害、オルガスム障害および性的疼痛障害が挙げられる。このような疾患、特に女性の性機能不全を処置するために使用する場合、本発明の化合物は、以下の第２の剤のうちの一つまたは複数と併用してもよい：ＰＤＥ−Ｖ阻害剤、ドーパミンアゴニスト、エストロゲン受容体アゴニストおよび／またはアンタゴニスト、アンドロゲン、ならびにエストロゲン。このＮＥＰ阻害特性に起因して、化合物１はまた、抗炎症特性を有することが予期され、よって、特にスタチンと組み合わせて使用する場合、有用性を有することが予期される。
最近の研究は、ＮＥＰがインスリン分泌低下型糖尿病および食生活誘発性肥満において神経機能を調整する役割を果たしていることを示唆している。Ｃｏｐｐｅｙら、（２０１１年）Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、６０巻：２５９〜２６６頁。したがって、このＮＥＰ阻害特性に起因して、化合物１はまた、糖尿病または食生活誘発性肥満により引き起こされる神経機能障害に対する保護を提供するのに有用であると予期されている。
化合物１の１回あたり投与される量または一日あたり投与される総量は、既定であってもよいし、または患者の状態の性質および重症度、処置を受けている状態、患者の年齢、体重、および全般的健康状態、活性剤または活性代謝産物に対する患者の耐性、投与経路、薬理学的考慮、例えば投与される化合物および任意の第２の剤の活性、効力、薬物動態および毒性学プロファイルなどを含めた多くの要素を考慮に入れることによって、個々の患者ベースで決定してもよい。疾患または医学的状態（例えば高血圧など）に罹患している患者の処置は、既定の用量または処置する医師によって決定された用量を用いて開始することができ、疾患または医学的状態の症状を予防、改善、抑制、または軽減するのに必要な一時期の間継続することになる。このような処置を受ける患者は通常、日常的にモニターすることによって、療法の有効性を決定する。例えば、高血圧の処置において、血圧測定を使用することによって、処置の有効性を決定することができる。本明細書中に記載されている他の疾患および状態に対する同様の指標は、周知であり、処置する医師にとっては容易に入手可能である。医師による連続的なモニタリングによって、化合物１の最適な量が任意の所定の時間に投与されること、ならびに処置期間の決定が促進されることが保証される。第２の剤も投与される場合には、これらの選択、用量、および療法の期間の調整が必要とされることもあるので、これが特に重要となる。こうして、処置レジメンおよび投薬計画は、所望の有効性を示す最低量の活性剤または活性代謝産物が投与され、さらに、疾患または医学的状態の処置を成功させるのに必要な期間だけ投与が継続するように、療法コースにわたって調整することができる。
化合物１は、たとえば結晶形態１’を含む化合物１の結晶形態の調製に有用な中間体としても有用性がある。
リサーチツール
化合物１はＮＥＰ酵素阻害活性を保有するので、これはまた、ＮＥＰ酵素を有する生物学的系または試料を調査または研究する、例えばＮＥＰ酵素またはそのペプチド基質がある役割を果たしている疾患を研究するためのリサーチツールとしても有用である。ＮＥＰ酵素を有する任意の適切な生物学的系または試料を、インビトロまたはインビボのいずれかで行うことができるような研究において利用することができる。このような研究に対して適切な代表的な生物学的系または試料として、これらに限定されないが、細胞、細胞抽出物、原形質膜、組織試料、単離した器官、および哺乳動物（例えばマウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、ブタ、およびヒトなど）などが挙げられ、哺乳動物が特に興味深い。本発明の一つの特定の実施形態では、哺乳動物におけるＮＥＰ酵素活性は、化合物１のＮＥＰ阻害量を投与することによって阻害される。
リサーチツールとして使用する場合、通常、ＮＥＰ酵素を含む生物学的系または試料を、化合物１のＮＥＰ酵素阻害量と接触させる。生物学的系または試料を化合物に曝露した後、従来の手順および機器を使用して、例えば結合アッセイで受容体結合を測定することにより、または機能アッセイでリガンドが媒介する変化を測定することにより、ＮＥＰ酵素を阻害する作用を判定する。曝露は、細胞または組織を化合物に接触させること、例えばｉ．ｐ．、ｐ．ｏ、ｉ．ｖ．、ｓ．ｃ．、または吸入による投与などにより化合物を哺乳動物に投与することを包含する。この判定ステップは、応答（定量分析）を測定するステップを含むことができるか、または観察（定性分析）を行うステップを含むことができる。応答を測定するステップは、例えば、従来の手順および機器、例えば酵素活性アッセイなどを使用して生物学的系または試料に対する化合物の作用を判定すること、ならびに機能アッセイで酵素基質または生成物が媒介する変化を測定することなどを含む。アッセイの結果を使用して、活性レベルならびに所望の結果を達成するのに必要な化合物の量、すなわち、ＮＥＰ酵素阻害量を判定することができる。通常、この判定ステップは、ＮＥＰ酵素を阻害する作用を判定することを含むことになる。
加えて、化合物１は、他の化合物を評価するためのリサーチツールとしても使用することができ、したがって、たとえば、ＮＥＰ阻害活性を有する新たな化合物を発見するためのスクリーニングアッセイにおいても有用である。この形式では、化合物１をアッセイにおける標準として使用すると、試験化合物と化合物１で得られた結果の比較が可能になって、ほぼ等しいまたはより優れた活性を有する試験化合物がもしあれば特定される。たとえば、試験化合物または試験化合物群のｐＫｉデータを化合物１のｐＫｉデータと比較して、所望の性質を有する試験化合物、たとえば、ｐＫｉ値が本発明の化合物と等しいまたはより優れている試験化合物を特定する。本発明のこの態様は、目的の試験化合物を特定するための（適切なアッセイを使用する）比較データの生成と試験データの分析を別個の実施形態として含む。したがって、試験化合物は、生物学的アッセイにおいて、（ａ）試験化合物で生物学的アッセイを実施して、第１のアッセイ値を得るステップと、（ｂ）化合物１で生物学的アッセイを実施して、第２のアッセイ値を得るステップと、（ｃ）ステップ（ａ）からの第１のアッセイ値をステップ（ｂ）からの第２のアッセイ値と比較するステップをとを含み、ステップ（ａ）は、ステップ（ｂ）の前、後、またはそれと同時に実施される方法によって、評価を行うことができる。典型的な生物学的アッセイとして、ＮＥＰ酵素阻害アッセイが挙げられる。
本発明のさらなる別の態様は、ＮＥＰ酵素を含む生物学的系または試料を研究する方法であって、（ａ）生物学的系または試料を化合物１と接触させるステップと、（ｂ）生物学的系または試料に対する、前記化合物により引き起こされた作用を決定するステップとを含む方法に関する。
薬学的組成物および製剤
化合物１は通常、薬学的組成物または製剤の形態で患者に投与される。このような薬学的組成物は、これらに限定されないが、経口、直腸、経膣、鼻、吸入、局所用（経皮的を含む）、眼、および非経口モードの投与を含めた、任意の許容される投与経路で患者に投与され得る。さらに、化合物１は、例えば経口的に、一日あたり複数回投与（例えば、毎日、２、３、または４回）するか、一日量を単回で投与するか、または週間用量を単回で投与することができる。特定のモードの投与に対して適切な化合物１の任意の形態（すなわち、遊離塩基、遊離酸、薬学的に許容される塩、溶媒和物など）が、本明細書中で考察された薬学的組成物で使用することができることを理解されたい。
したがって、一実施形態では、本発明は、薬学的に許容される担体および化合物１を含む薬学的組成物に関する。組成物は、所望する場合、他の治療剤および／または配合剤を含有してもよい。組成物を考察する場合、「化合物１」はまた、本明細書中で「活性剤」として言及されてもよく、製剤の他の成分、例えば担体などからこれを区別することもできる。したがって、「活性剤」という用語は、本発明の化合物ならびにその薬学的に許容される塩を含むことを理解されたい。
本発明の薬学的組成物は通常、化合物１の治療有効量を含有する。しかし、当業者であれば、薬学的組成物は、例えばバルク組成物などは、治療有効量よりも多い量を含有してもよく、または治療有効量よりも少ない量、すなわち、複数の投与により治療有効量を達成するように計画されている個々の単位用量を含有してもよいことを認識されよう。通常、組成物は、約０．０１〜９５重量％（約０．０１〜３０重量％、例えば約０．０１〜１０重量％を含めて）の活性剤を含有することになり、実際の量は、製剤それ自体、投与経路、投薬頻度などに依存する。一実施形態では、経口投与剤形に対して適切な組成物は、例えば、約５〜７０重量％、または約１０〜６０重量％の活性剤を含有してもよい。
任意の従来の担体または賦形剤を、本発明の薬学的組成物に使用することができる。ある特定の担体もしくは賦形剤、または担体もしくは賦形剤の組合せの選択は、ある特定の患者または種類の医学的状態もしくは疾患状態を処置するために使用されている投与の形式に依存することになる。この点について、ある特定の形式の投与に対して適切な組成物の調製は、十分に薬学的技術分野の当業者の範囲内にある。さらに、このような組成物において使用される担体または賦形剤は市販されている。さらなる例示として、従来の製剤技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｈｉｔｅ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ（２０００年）；およびＨ．Ｃ．Ａｎｓｅｌら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、第７版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｈｉｔｅ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９９９年）に記載されている。
薬学的に許容される担体として機能できる物質の代表的な例として、これらに限定されないが、以下が挙げられる：糖、例えばラクトース、グルコースおよびスクロースなど；デンプン、例えばコーンスターチおよびジャガイモデンプンなど；セルロース、例えば微結晶性セルロース、およびその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなど；脂肪酸塩、例えばステアリン酸マグネシウムなど；粉末トラガント；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤、例えばココアバターおよび坐剤ワックスなど；油、例えばピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油など；グリコール、例えばプロピレングリコール；ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなど；エステル、例えばオレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなど；寒天；緩衝剤、例えば水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなど；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張生理食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；リン酸塩緩衝液；圧縮された噴霧剤気体、例えばクロロフルオロ炭素およびヒドロフルオロカーボンなど；ならびに薬学的組成物に利用される他の無毒性の相容性物質。
本発明の一実施形態では、薬学的に許容される担体は、ステアリン酸マグネシウムである。たとえば、薬学的組成物は、化合物１または結晶形態１’とステアリン酸マグネシウムを、約３：１〜約１０：１の化合物１または結晶形態１’対ステアリン酸マグネシウムの比率で含んでよい。化合物１または結晶形態１’対ステアリン酸マグネシウムの他の比率として、限定はしないが、１：１、５：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、および５０：１が挙げられる。
薬学的組成物は通常、活性剤と、薬学的に許容される担体および一つまたは複数の任意の成分とを、十分におよび密に混合またはブレンドすることによって調製する。次いで、生成された、均一にブレンドされた混合物は、従来の手順および機器を使用して、錠剤、カプセル剤、丸剤、キャニスター、カートリッジ、およびディスペンサーなどへと成形または充填することができる。
一実施形態では、薬学的組成物は、経口投与に対して適切である。経口投与に対して適切な組成物は、カプセル剤、錠剤、丸剤、ロゼンジ剤、カシェ剤、糖衣錠、散剤、粒剤；水性または非水性の液体中の溶液または懸濁物；水中油型または油中水型の液体エマルジョン；エリキシル剤またはシロップ剤などの形態であってよく、それぞれが既定の量の活性剤を含有する。
固形剤形（カプセル剤、錠剤、および丸剤など）での経口投与を目的とする場合、組成物は通常、活性剤と、一つまたは複数の薬学的に許容される担体、例えばクエン酸ナトリウム、第二リン酸カルシウムまたはステアリン酸マグネシウムなどを含むことになる。固形剤形はまた、以下を含んでもよい：充填剤または増量剤、例えばデンプン、微結晶性セルロース、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸など；バインダー、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシアなど；保湿剤、例えばグリセロールなど；崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケート、および／または炭酸ナトリウムなど；溶解遅延剤、例えばパラフィンなど；吸収促進剤、例えば第四級アンモニウム化合物など；湿潤剤、例えばセチルアルコールおよび／またはモノステアリン酸グリセロールなど；吸収剤、例えばカオリンおよび／またはベントナイト粘土など；滑沢剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、および／またはこれらの混合物など；着色剤；ならびに緩衝剤。本発明の目的では、用語「薬学的に許容される担体」とは、上述の担体、充填剤または増量剤、バインダー、保湿剤、溶解遅延剤、湿潤剤、吸収剤、滑沢剤、着色剤、緩衝剤などのすべての用語を含むものである。
剥離剤、湿潤剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および芳香剤、保存剤ならびに抗酸化剤もまた薬学的組成物中に存在し得る。錠剤、カプセル剤、丸剤などに対する典型的コーティング剤として、腸溶コーティングに対して使用されるもの、例えば酢酸フタル酸セルロース、ポリビニルアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メタクリル酸−メタクリル酸エステルコポリマー、トリメリト酸酢酸セルロース、カルボキシメチルエチルセルロース、およびヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートなどが挙げられる。薬学的に許容される抗酸化剤の例として、以下が挙げられる：水溶性抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重硫酸ナトリウム、および亜硫酸ナトリウムなど；油溶性抗酸化剤、例えばパルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、レシチン、没食子酸プロピル、およびαトコフェロールなど；および金属キレート剤、例えばクエン酸、エチレンジアミン四酢酸、ソルビトール、酒石酸、およびリン酸など。
組成物はまた、例として、様々な割合のヒドロキシプロピルメチルセルロースまたは他のポリマーマトリクス、リポソームおよび／もしくはミクロスフェアなどを使用して、活性剤の徐放性または制御性放出を提供するように製剤化され得る。さらに、本発明の薬学的組成物は、乳白剤を含有してもよく、また、本発明の薬学的組成物は、活性剤を、消化管の特定の部分のみでまたはそこで優先的に、必要に応じて遅延型の形式で放出するように製剤化されてもよい。使用することができる包埋組成物の例として、ポリマー物質およびワックスが挙げられる。活性剤はまた、必要に応じて一つまたは複数の上記賦形剤を用いてマイクロカプセル化した形態にすることもできる。
本発明の一実施形態は、カプセル剤、錠剤、液体、または懸濁物中に化合物１または結晶形態１’を含む経口剤形を包含する。本発明の別の実施形態は、被験体における化合物１または結晶形態１’の放出が、即時放出、制御放出、または遅延放出である経口剤形に関する。カプセル剤を経口剤形として使用する場合、別の実施形態は、ゼラチン、多糖、または合成ポリマーからなるカプセルを含む。特定の実施形態では、カプセルは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む。
本発明による適切なカプセル材料は、ゼラチン、セルロース誘導体、デンプン、デンプン誘導体、キトサン、および合成プラスチックから選択される。ゼラチンをカプセル材料として使用する場合、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、グリセロール、ソルビトール、ポリプロピレングリコール、ＰＥＯ−ＰＰＯブロックコポリマー、ならびに他のポリアルコールおよびポリエーテルから選択される他の添加剤を混合して使用することができる。セルロース誘導体をカプセル材料として使用するとき、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、およびヒドロキシエチルセルロースが好ましいポリマーである。合成プラスチックをカプセル材料として使用する場合、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリプロピレン、およびポリエチレンテレフタレートが好ましい材料である。特に好ましいのは、ポリエチレン、ポリカーボネート、またはポリエチレンテレフタレートである。
経口投与に対して適切な液体剤形は、例示として、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁物、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられる。液体剤形は通常、活性剤と不活性希釈剤、例えば水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（例えば綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにこれらの混合物を含む。懸濁物は、懸濁剤、例えばエトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロオキシド、ベントナイト、寒天およびトラガント、ならびにこれらの混合物を含有してもよい。
経口投与を目的とする場合、本発明の薬学的組成物は、単位剤形で包装されていてもよい。「単位剤形」という用語は、患者への投薬に対して適切な物理的に別個の単位を指し、すなわち、各単位が、単独で、または一つもしくは複数の追加の単位と組み合わせて、所望の治療効果が生じるように計算された既定の量の活性剤を含有している。例えば、このような単位剤形は、カプセル剤、錠剤、および丸剤などであってよい。
別の実施形態では、本発明の組成物は、吸入による投与に対して適切であり、通常エアゾール剤または散剤の形態である。このような組成物は一般的に、周知のデリバリーデバイス、例えばネブライザー、ドライパウダー、または計量式吸入器などを使用して投与される。ネブライザーデバイスは、高速の空気の流れを生成し、これにより組成物がミストとして噴霧され、このミストが患者の呼吸器内へ運ばれる。典型的なネブライザー製剤は、担体に溶解して溶液を形成する活性剤、または微粉化され、担体と混合されて、呼吸に適したサイズの微粉化粒子の懸濁物を形成する活性剤を含む。ドライパウダー吸入器は、自由流動性粉末として活性剤を投与するが、この自由流動性粉末は吸息の間に患者の空気流の中に分散する。典型的なドライパウダー製剤は、ラクトース、デンプン、マンニトール、デキストロース、ポリ乳酸、ポリ乳酸−ｃｏ−グリコリド、およびこれらの組合せなどの賦形剤とドライブレンドした活性剤を含む。計量式吸入器は、圧縮された噴霧剤気体を使用して測定した量の活性剤を放出する。典型的な定量製剤は、液化性噴霧剤、例えばクロロフルオロ炭素またはヒドロフルオロアルカンなどの中に活性剤の溶液または懸濁物を含む。このような製剤の任意の構成成分は、共溶媒、例えばエタノールまたはペンタンなど、ならびに界面活性剤、例えばトリオレイン酸ソルビタン、オレイン酸、レシチン、グリセリン、およびラウリル硫酸ナトリウムなどを含む。このような組成物は通常、冷却または加圧したヒドロフルオロアルカンを、活性剤、エタノール（存在する場合）および界面活性剤（存在する場合）を含有する適切な容器に加えることによって調製する。懸濁物を調製するため、活性剤を、微粉化し、次いで噴霧剤と合わせる。あるいは、懸濁物製剤は、界面活性剤のコーティングを、活性剤の微粉化した粒子上にスプレー乾燥することによって調製することもできる。次いでこの製剤を、吸入器の一部を形成するエアゾールキャニスターに充填する。
化合物１およびその組成物は、たとえば、皮下、静脈内、筋肉内、または腹腔内注射によって、非経口投与することもできる。このような投与では、活性薬剤は、滅菌溶液、懸濁物、またはエマルジョンとして提供される。このような製剤を調製するための、典型的な溶媒として、水、食塩水、電解質、プロピレングリコールやポリエチレングリコールなどの低分子量アルコール、油、アミノ酸、ゼラチン、糖、オレイン酸エチルなどの脂肪酸エステルなどが挙げられる。非経口製剤は、１種または複数の酸化防止剤、可溶化剤、安定剤、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤も含有してよい。界面活性剤、追加の安定剤またはｐＨ調整剤（酸、塩基、もしくは緩衝剤）、および酸化防止剤は、製剤を安定させる、たとえば、化合物中に存在しうるエステルおよびアミド結合の加水分解を最小限に抑え、または回避するのに、特に有用である。こうした製剤は、注射用滅菌媒質、滅菌剤、濾過、照射、または熱の使用によって滅菌することができる。
生理学的に許容される代表的な水性担体には、例として、Ｓｔｅｒｉｌｅ Ｗａｔｅｒ ｆｏｒ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＵＳＰ、Ｄｅｘｔｒｏｓｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＵＳＰ（たとえば、５％Ｄｅｘｔｒｏｓｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（Ｄ５／Ｗ）を含む、２．５、５．０、１０、２０％デキストロース）、Ｄｅｘｔｒｏｓｅ ａｎｄ Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＵＳＰ（たとえば、２．５から１０％まで変動するデキストロースおよび０．１２（１９ミリ当量のナトリウム）から０．９％（１５４ミリ当量のナトリウム）まで変動する塩化ナトリウム）、Ｍａｎｎｉｔｏｌ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＵＳＰ（たとえば、５、１０、１５、２０、および２５％マンニトール）、Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＵＳＰ（たとえば、１リットルあたり１４７ミリ当量のナトリウム、４ミリ当量のカリウム、４．５ミリ当量のカルシウム、および１５６ミリ当量の塩化物）、Ｌａｃｔａｔｅｄ Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＵＳＰ（たとえば、１リットルあたり２．７ミリ当量のカルシウム、４ミリ当量のカリウム、１３０ミリ当量のナトリウム、および２８ミリ当量の乳酸塩）、Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＵＳＰ（たとえば、０．９％塩化ナトリウム）などが含まれる。
化合物１は、患者に投与されるとき、通常、化合物１の１ｍｇあたり約０．５ｍＬ〜約１０ｍＬ、たとえば、１ｍｇあたり約０．６〜約８ｍＬの水性担体に希釈される。
一つの特定の実施形態では、非経口製剤は、薬学的に許容される担体としてシクロデキストリン水溶液を含む。適切なシクロデキストリンとして、アミラーゼ、β−シクロデキストリンまたはシクロヘプタアミロースなどの場合のように、連結により１，４位で連結されている６つ以上のα−Ｄ−グルコピラノース単位を含有する環状分子が挙げられる。典型的なシクロデキストリンとして、シクロデキストリン誘導体、例えばヒドロキシプロピルシクロデキストリンおよびスルホブチルエーテルシクロデキストリン、例えばヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンおよびスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンなどが挙げられる。このような製剤に対する典型的な緩衝剤として、カルボン酸ベースの緩衝剤、例えばクエン酸緩衝液、乳酸緩衝液およびマレイン酸緩衝液などが挙げられる。本発明の一実施形態では、静脈内剤形は、緩衝液中に化合物１または結晶形態１’を含む。
一実施形態では、化合物１またはその薬学的組成物は、凍結乾燥粉末である。通常、凍結乾燥粉末は、滅菌されており、密閉シールされたバイアルもしくはアンプルまたは同様の容器に包装される。
化合物１はまた、公知の経皮的デリバリーシステムおよび賦形剤を使用して経皮的に投与され得る。例えば、化合物１は、透過促進剤、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコールモノラウレート、およびアザシクロアルカン−２−オンなどと混和することができ、パッチまたは同様のデリバリーシステムに組み込むことができる。所望する場合、ゲル化剤、乳化剤および緩衝剤を含めた追加の賦形剤をこのような経皮的組成物に使用することができる。
第２の剤
化合物１は、疾患の単独処置として有用であってもよいし、または所望の治療効果を得るための一つもしくは複数の追加の治療剤と併用してもよい。したがって、一実施形態では、本発明の薬学的組成物は、化合物１と共投与される他の薬物を含有する。例えば、組成物は、一つまたは複数の薬物（また「第２の剤（複数可）」とも呼ばれる）をさらに含んでもよい。このような治療剤は、当技術分野で周知であり、アデノシン受容体アンタゴニスト、α−アドレナリン受容体アンタゴニスト、β１−アドレナリン受容体アンタゴニスト、β２−アドレナリン受容体アゴニスト、二重作用性β−アドレナリン受容体アンタゴニスト／α１−受容体アンタゴニスト、進行糖化終末産物ブレーカー、アルドステロンアンタゴニスト、アルドステロンシンターゼ阻害剤、アミノペプチダーゼＮ阻害剤、アンドロゲン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤および二重作用性アンジオテンシン変換酵素／ネプリライシン阻害剤、アンジオテンシン変換酵素２アクチベーターおよび刺激物質、アンジオテンシン−ＩＩワクチン、抗凝血剤、抗糖尿病剤、下痢止剤、抗緑内障剤、抗脂質剤、抗侵害受容性剤、抗血栓剤、ＡＴ１受容体アンタゴニストおよび二重作用性ＡＴ１受容体アンタゴニスト／ネプリライシン阻害剤および多官能性アンジオテンシン受容体遮断剤、ブラジキニン受容体アンタゴニスト、カルシウムチャネル遮断剤、キマーゼ阻害剤、ジゴキシン、利尿剤、ドーパミンアゴニスト、エンドセリン変換酵素阻害剤、エンドセリン受容体アンタゴニスト、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、エストロゲン、エストロゲン受容体アゴニストおよび／またはアンタゴニスト、モノアミン再取り込み阻害剤、筋弛緩剤、ナトリウム利尿ペプチドおよびこれらの類似体、ナトリウム利尿ペプチドクリアランス受容体アンタゴニスト、ネプリライシン阻害剤、一酸化窒素ドナー、非ステロイド性抗炎症剤、Ｎ−メチルｄ−アスパラギン酸受容体アンタゴニスト、オピオイド受容体アゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、プロスタグランジン類似体、プロスタグランジン受容体アゴニスト、レニン阻害剤、選択的セロトニン再取り込み阻害剤、ナトリウムチャネル遮断剤、可溶性グアニル酸シクラーゼ刺激物質およびアクチベーター、三環式抗うつ剤、バソプレッシン受容体アンタゴニスト、ならびにこれらの組合せが挙げられる。これら剤の具体例は、本明細書中で詳述されている。
詳細な実施形態は、化合物１またはその結晶形態と、ＡＴ１受容体アンタゴニスト、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤、レニン阻害剤、利尿剤、またはこれらの組合せと、任意選択で、薬学的に許容される１種または複数の担体とを含む薬学的組成物を包含する。
したがって、本発明のさらに別の態様では、薬学的組成物は、化合物１と、第２の活性剤と、薬学的に許容される担体とを含む。第３、第４などの活性剤も組成物中に含まれていてもよい。併用療法では、投与される化合物１の量、ならびに第２の剤の量は、単剤療法（ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ）で通常投与される量より少なくてもよい。
化合物１は、第２の活性剤と物理的に混合することによって、両方の剤を含有する組成物を形成することもでき、または各剤が、患者に同時にもしくは別々の時間に投与される、別々の異なる組成物の中に存在してもよい。例えば、化合物１は、従来の手順および機器を使用して、第２の活性剤と併用することによって、化合物１と第２の活性剤とを含む、活性剤を組合せたものを形成することができる。さらに、活性剤を、薬学的に許容される担体と併用することによって、化合物１と、第２の活性剤と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を形成することができる。本実施形態では、組成物の構成成分は通常、混合またはブレンドして、物理的混合物を作り出す。次いで物理的混合物は、本明細書中に記載されている経路のいずれかを使用して治療有効量で投与する。
あるいは、活性剤は、患者への投与前、別々に、およびはっきりと区別されたままであってもよい。本実施形態では、剤は、投与前に一つに物理的に混合されることはなく、同時にまたは別々の時間に別々の組成物として投与される。このような組成物は、別々に包装することもできるし、またはキット内で一緒に包装することもできる。別々の時間に投与する場合、第２の剤は、化合物１の投与後２４時間より短い時間で、つまり本発明の化合物の投与と同時刻から、投与後約２４時間までの範囲のどこかの時点で、通常投与されることになる。これは連続投与とも呼ばれる。したがって、各活性剤を一つの錠剤にして、二つの錠剤を使用し、化合物１を別の活性剤と共に、同時または逐次的に経口投与することができ、この場合逐次とは、化合物１の投与の直後、またはいくらかの既定の時間後に（例えば、１時間後または３時間後）投与することを意味し得る。第２の剤が、化合物１の投与から２４時間超後に投与し得ることも想定される。あるいは、この組合せは、異なる投与経路により投与してもよい、すなわち、一方は経口的に、他方は吸入により投与してもよい。
一実施形態では、キットは、化合物１を含む第１の剤形と、本明細書中に記述された一つまたは複数の第２の剤を含む少なくとも一つの追加の剤形とを、本発明の方法を実行するのに十分な量で含む。第１の剤形および第２（または第３など）の剤形は一緒になって、患者における疾患または医学的状態の処置または予防のための治療有効量の活性剤を含む。
第２の剤（複数可）は、含まれるとすれば、本発明の化合物１と共投与された場合、治療上有利な作用を生じる量でこれらが通常投与されるように、治療有効量で存在する。第２の剤は、薬学的に許容される塩、溶媒和物、光学的に純粋な立体異性体などの形態とすることができる。第２の剤はまた、プロドラッグ、例えばエステル化したカルボン酸基を有する化合物の形態であってもよい。したがって、本明細書中に列挙した第２の剤は、すべてのこのような形態を含むことが意図され、市販されているか、または従来の手順および試薬を使用して調製することができる。
一実施形態では、化合物１は、アデノシン受容体アンタゴニストと組み合わせて投与される。この例としては、ナキシフィリン、ロロフィリン、ＳＬＶ−３２０、テオフィリン、およびトナポフィリンが挙げられる。
一実施形態では、化合物１は、α−アドレナリン受容体アンタゴニストと組み合わせて投与される。この例としては、ドキサゾシン、プラゾシン、タムスロシン、およびテラゾシンが挙げられる。
化合物１はまたβ１−アドレナリン受容体アンタゴニスト（「β１遮断剤」）と組み合わせて投与することができる。この例としては、アセブトロール、アルプレノロール、アモスラロール、アロチノロール、アテノロール、ベフノロール、ベタキソロール、ベバントロール、ビソプロロール、ボピンドロール、ブシンドロール、ブクモロール、ブフェトロール、ブフラロール、ブニトロロール、ブプラノロール、ブブリジン、ブトフィロロール、カラゾロール、カルテオロール、カルベジロール、セリプロロール、セタモロール、クロラノロール、ジレバロール、エパノロール、エスモロール、インデノロール、ラベトロール、レボブノロール、メピンドロール、メチプラノロール、メトプロロール、例えばコハク酸メトプロロールおよび酒石酸メトプロロール、モプロロール、ナドロール、ナドキソロール、ネビバロール、ニプラジロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ペルブトロール、ピンドロール、プラクトロール、プロネタロール、プロプラノロール、ソタロール、スフィナロール、タルインドール、テルタトロール、チリソロール、チモロール、トリプロロール、キシベノロール、ならびにこれらの組合せが挙げられる。一つの特定の実施形態では、β１−アンタゴニストは、アテノロール、ビソプロロール、メトプロロール、プロプラノロール、ソタロール、およびこれらの組合せから選択される。通常、β１遮断剤は、投与１回あたり約２〜９００ｍｇを提供するのに十分な量で投与される。
一実施形態では、化合物１は、β２−アドレナリン受容体アゴニストと組み合わせて投与される。この例としては、アルブテロール、ビトルテロール、フェノテロール、ホルモテロール、インダカテロール、イソエタリン、レバルブテロール、メタプロテレノール、ピルブテロール、サルブタモール、サルメファモール、サルメテロール、テルブタリン、およびビランテロールなどが挙げられる。通常、β２−アドレナリン受容体アゴニストは、投与１回あたり約０．０５〜５００μｇを提供するのに十分な量で投与される。
一実施形態では、化合物１は、進行糖化終末産物（ＡＧＥ）ブレーカーと組み合わせて投与され、この例としては、アラゲブリウム（またはＡＬＴ−７１１）、およびＴＲＣ４１４９が挙げられる。
別の実施形態では、化合物１は、アルドステロンアンタゴニストと組み合わせて投与される。この例としては、エプレレノン、スピロノラクトン、およびこれらの組合せが挙げられる。通常、アルドステロンアンタゴニストは、一日あたり約５〜３００ｍｇを提供するのに十分な量で投与される。
一実施形態では、化合物１は、アミノペプチダーゼＮまたはジペプチジルペプチダーゼＩＩＩ阻害剤と併用して投与され、その例としては、ベスタチンおよびＰＣ１８（２−アミノ−４−メチルスルホニルブタンチオール、メチオニンチオール）が挙げられる。
化合物１は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤と併用して投与することもでき、その例としては、アキュプリル（ａｃｃｕｐｒｉｌ）、アラセプリル、ベナゼプリル、ベナゼプリラト、カプトプリル、セラナプリル（ｃｅｒａｎａｐｒｉｌ）、シラザプリル、デラプリル、エナラプリル、エナラプリラト、ホシノプリル、ホシノプリラト、イミダプリル、リシノプリル、モエキシプリル、モノプリル（ｍｏｎｏｐｒｉｌ）、モベルチプリル（ｍｏｖｅｌｔｉｐｒｉｌ）、ペントプリル、ペリンドプリル、キナプリル、キナプリラト、ラミプリル、ラミプリラト（ｒａｍｉｐｒｉｌａｔ）、酢酸サララシン、スピラプリル、テモカプリル、トランドラプリル、ゾフェノプリル、およびこれらの組合せが挙げられる。特定の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ラミプリル、およびこれらの組合せから選択される。通常、ＡＣＥ阻害剤は、１日約１〜１５０ｍｇを提供するのに十分な量で投与される。
別の実施形態では、化合物１は、二重作用性アンジオテンシン変換酵素／ネプリライシン（ＡＣＥ／ＮＥＰ）阻害剤と組み合わせて投与される。この例としては、以下が挙げられる：ＡＶＥ−０８４８（（４Ｓ，７Ｓ，１２ｂＲ）−７−［３−メチル−２（Ｓ）−スルファニルブチルアミド］−６−オキソ−１，２，３，４，６，７，８，１２ｂ−オクタヒドロピリド［２，１−ａ］［２］−ベンゾアゼピン−４−カルボン酸）；ＡＶＥ−７６８８（イレパトリル）およびその親化合物；ＢＭＳ−１８２６５７（２−［２−オキソ−３（Ｓ）−［３−フェニル−２（Ｓ）−スルファニルプロピオンアミド］−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１−ベンゾアゼピン−１−イル］酢酸）；ＣＧＳ−３５６０１（Ｎ−［１−［４−メチル−２（Ｓ）−スルファニルペンタンアミド］シクロペンチル−カルボニル］−Ｌ−トリプトファン）；ファシドトリル；ファシドトリレート；エナラプリラート；ＥＲ−３２９３５（（３Ｒ，６Ｓ，９ａＲ）−６−［３（Ｓ）−メチル−２（Ｓ）−スルファニルペンタンアミド］−５−オキソパーヒドロチアゾロ［３，２−ａ］アゼピン−３−カルボン酸）；ジェムパトリラト；ＭＤＬ−１０１２６４（（４Ｓ，７Ｓ，１２ｂＲ）−７−［２（Ｓ）−（２−モルホリノアセチルチオ）−３−フェニルプロピオンアミド］−６−オキソ−１，２，３，４，６，７，８，１２ｂ−オクタヒドロピリド［２，１−ａ］［２］ベンゾアゼピン−４−カルボン酸）；ＭＤＬ−１０１２８７（［４Ｓ−［４α，７α（Ｒ＊），１２ｂβ］］−７−［２−（カルボキシメチル）−３−フェニルプロピオンアミド］−６−オキソ−１，２，３，４，６，７，８，１２ｂ−オクタヒドロピリド［２，１−ａ］［２］ベンゾアゼピン−４−カルボン酸）；オマパトリラト；ＲＢ−１０５（Ｎ−［２（Ｓ）−（メルカプトメチル）−３（Ｒ）−フェニルブチル］−Ｌ−アラニン）；サムパトリラト；ＳＡ−８９８（（２Ｒ，４Ｒ）−Ｎ−［２−（２−ヒドロキシフェニル）−３−（３−メルカプトプロピオニル）チアゾリジン−４−イルカルボニル］−Ｌ−フェニルアラニン）；Ｓｃｈ−５０６９０（Ｎ−［１（Ｓ）−カルボキシ−２−［Ｎ２−（メタンスルホニル）−Ｌ−リシルアミノ］エチル］−Ｌ−バリル−Ｌ−チロシン）；およびこれらの組合せもまた含まれていてもよい。一つの特定の実施形態では、ＡＣＥ／ＮＥＰ阻害剤は、ＡＶＥ−７６８８、エナラプリラート、ファシドトリル、ファシドトリレート、オマパトリラト、サムパトリラト、およびこれらの組合せから選択される。
一実施形態では、化合物１は、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）アクチベーターまたは刺激物質と組み合わせて投与される。
一実施形態では、化合物１は、アンジオテンシン−ＩＩワクチンと組み合わせて投与される。この例としては、ＡＴＲ１２１８１およびＣＹＴ００６−ＡｎｇＱｂが挙げられる。
一実施形態では、化合物１は、抗凝血剤と組み合わせて投与される。この例としては、クマリン、例えばワルファリンなど；ヘパリン；ならびにダイレクトトロンビン阻害剤、例えばアルガトロバン、ビバリルジン、ダビガトラン、およびレピルジンなどが挙げられる。
さらに別の実施形態では、化合物１は、抗糖尿病剤と併用して投与され、その例には、注射用薬物に加え、経口的に有効な薬物、およびその組合せが含まれる。注射用薬物の例としては、インスリンおよびインスリン誘導体が挙げられる。経口的に有効な薬物の例としては、メトホルミンなどのビグアナイド、グルカゴンアンタゴニスト、アカルボースやミグリトールなどのα−グルコシダーゼ阻害剤、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤（ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤）、たとえば、アログリプチン、デナグリプチン（ｄｅｎａｇｌｉｐｔｉｎ）、リナグリプチン、サクサグリプチン、シタグリプチン、およびビルダグリプチン、レパグリニドなどのメグリチニド、オキサジアゾリジンジオン、スルホニル尿素、たとえば、クロルプロパミド、グリメピリド、グリピジド、グリブリド、およびトラザミド、ピオグリタゾンやロシグリタゾンなどのチアゾリジンジオン、ならびにこれらの組合せが挙げられる。
別の実施形態では、化合物１は、抗下痢処置と組み合わせて投与される。代表的な処置の選択肢としては、経口の水分補給用飲料（ＯＲＳ）、ロペラミド、ジフェノキシラート、および次サリチル酸ビスマスが挙げられる。
さらに別の実施形態では、化合物１は、抗緑内障剤と併用して投与され、その例としては、ブリモニジンなどのα−アドレナリンアンタゴニスト、β１−アドレナリン受容体アンタゴニスト、局所的なβ１−遮断剤、たとえば、ベタキソロール、レボブノロール、およびチモロール、炭酸脱水酵素阻害剤、たとえば、アセタゾラミド、ブリンゾラミド、またはドルゾラミド、セビメリンやＤＭＸＢ−アナバセインなどのコリン作用性アゴニスト、エピネフリン化合物、ピロカルピンなどの縮瞳剤、ならびにプロスタグランジン類似体が挙げられる。
さらに別の実施形態では、化合物１は、抗脂質剤と併用して投与され、その例としては、コレステリルエステル転送タンパク質阻害剤（ＣＥＴＰ）、たとえば、アナセトラピブ、ダルセトラピブ、およびトルセトラピブ、スタチン、たとえば、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、およびシンバスタチン、ならびにこれらの組合せが挙げられる。
一実施形態では、化合物１は、抗血栓剤と併用して投与され、その例としては、アスピリン、抗血小板剤、たとえば、クロピドグレル、プラスグレル、およびチクロピジン、ヘパリン、ならびにこれらの組合せが挙げられる。
一実施形態では、化合物１は、アンジオテンシンＩＩ１型受容体遮断剤（ＡＲＢ）としても公知のＡＴ１受容体アンタゴニストと組み合わせて投与される。代表的なＡＲＢとしては、アビテサルタン、アジルサルタン（例えば、アジルサルタンメドキソミル）、ベンジルロサルタン、カンデサルタン、カンデサルタンシレキセチル、エリサルタン、エムブサルタン、エノールタソサルタン、エプロサルタン、ＥＸＰ３１７４、フォンサルタン、フォラサルタン、グリシルロサルタン、イルベサルタン、イソテオリン、ロサルタン、メドキソミル、ミファサルタン、オルメサルタン（例えば、オルメサルタンメドキソミル）、オポミサルタン、プラトサルタン、リピサルタン、サプリサルタン、サララシン、サルメシン、ＴＡＫ−５９１、タソサルタン、テルミサルタン、バルサルタン、ゾラサルタン、およびこれらの組合せが挙げられる。ある特定の実施形態では、ＡＲＢは、アジルサルタンメドキソミル、カンデサルタンシレキセチル、エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタンメドキソミル、サプリサルタン、タソサルタン、テルミサルタン、バルサルタン、およびこれらの組合せから選択される。典型的な塩および／またはプロドラッグとして、カンデサルタンシレキセチル、メシル酸エプロサルタン、ロサルタンカリウム塩、およびオルメサルタンメドキソミルが挙げられる。通常、ＡＲＢは、投与１回あたり約４〜６００ｍｇを提供するのに十分な量で投与され、典型的な毎日の用量は、一日あたり２０〜３２０ｍｇの範囲である。
化合物１はまた、二重作用性剤、例えばＡＴ１受容体アンタゴニスト／ネプリライシン阻害剤（ＡＲＢ／ＮＥＰ）阻害剤などと組み合わせて投与することもでき、この例としては、米国特許第７，８７９，８９６号および第８，０１３，００５号（両方ともＡｌｌｅｇｒｅｔｔｉらによる）に記載されている化合物、例えば化合物、４’−｛２−エトキシ−４−エチル−５−［（（Ｓ）−２−メルカプト−４−メチルペンタノイルアミノ）−メチル］イミダゾール−１−イルメチル｝−３’−フルオロビフェニル−２−カルボン酸などが挙げられる。
化合物１はまた、Ｋｕｒｔｚ ＆ Ｋｌｅｉｎ（２００９年）、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３２巻：８２６〜８３４頁に記載されているような多官能性アンジオテンシン受容体遮断剤と組み合わせて投与してもよい。
一実施形態では、化合物１は、ブラジキニン受容体アンタゴニスト、例えば、イカチバント（ＨＯＥ−１４０）などと組み合わせて投与する。本併用療法は、血管性浮腫またはブラジキニンレベルの上昇の他の望ましくない結果を予防するという利点を提示することができると予期されている。
一実施形態では、化合物１は、カルシウムチャネル遮断剤と併用して投与され、その例としては、アムロジピン、アニパミル（ａｎｉｐａｍｉｌ）、アラニピン（ａｒａｎｉｐｉｎｅ）、バルニジピン、ベンシクラン、ベニジピン、ベプリジル、クレンチアゼム、シルニジピン、シンナリジン、ジルチアゼム、エホニジピン、エルゴジピン（ｅｌｇｏｄｉｐｉｎｅ）、エタフェノン、フェロジピン、フェンジリン、フルナリジン、ガロパミル、イスラジピン、ラシジピン、レルカニジピン、リドフラジン、ロメリジン、マニジピン、ミベフラジル、ニカルジピン、ニフェジピン、ニグルジピン、ニルジピン（ｎｉｌｕｄｉｐｉｎｅ）、ニルバジピン、ニモジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、ニバルジピン（ｎｉｖａｌｄｉｐｉｎｅ）、ペルヘキシリン、プレニラミン、リオシジン（ｒｙｏｓｉｄｉｎｅ）、セモチアジル、テロジリン、チアパミル、ベラパミル、およびこれらの組合せが挙げられる。特定の実施形態では、カルシウムチャネル遮断剤は、アムロジピン、ベプリジル、ジルチアゼム、フェロジピン、イスラジピン、ラシジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニグルジピン、ニルジピン、ニモジピン、ニソルジピン、リオシジン、ベラパミル、およびこれらの組合せから選択される。通常、カルシウムチャネル遮断剤は、１用量あたり約２〜５００ｍｇを提供するのに十分な量で投与される。
一実施形態では、化合物１は、キマーゼ阻害剤、例えばＴＰＣ−８０６および２−（５−ホルミルアミノ−６−オキソ−２−フェニル−１，６−ジヒドロピリミジン−１−イル）−Ｎ−［｛３，４−ジオキソ−１−フェニル−７−（２−ピリジルオキシ）｝−２−ヘプチル］アセトアミド（ＮＫ３２０１）などと組み合わせて投与される。
一実施形態では、化合物１は、利尿剤と併用して投与され、その例としては、アセタゾラミドやジクロルフェナミドなどの炭酸脱水酵素阻害剤；アセタゾラミド、アンブシド、アゾセミド、ブメタニド、ブタゾラミド（ｂｕｔａｚｏｌａｍｉｄｅ）、クロラミノフェナミド（ｃｈｌｏｒａｍｉｎｏｐｈｅｎａｍｉｄｅ）、クロフェナミド、クロパミド、クロレキソロン、ジスルファミド、エトキシゾラミド、フロセミド、メフルシド、メタゾラミド、ピレタニド、トルセミド、トリパミド、キシパミドなどのスルホンアミド誘導体、ならびにエタクリン酸や他のフェノキシ酢酸化合物、たとえば、チエニル酸、インダクリノン、およびキンカルベート（ｑｕｉｎｃａｒｂａｔｅ）などの非スルホンアミド利尿剤を包含するループ利尿剤；マンニトールなどの浸透圧性利尿剤；スピロノラクトンなどのアルドステロンアンタゴニスト、およびアミロライドやトリアムテレンなどのＮａ＋チャネル阻害剤を包含するカリウム保持性利尿剤；チアジドおよびチアジド様利尿剤、たとえば、アルチアジド、ベンドロフルメチアジド、ベンジルヒドロクロロチアジド、ベンズチアジド、ブチアジド（ｂｕｔｈｉａｚｉｄｅ）、クロルタリドン、クロロチアジド、シクロペンチアジド、シクロチアジド、エピチアジド（ｅｐｉｔｈｉａｚｉｄｅ）、エチアジド、フェンキゾン、フルメチアジド、ヒドロクロロチアジド、ヒドロフルメチアジド、インダパミド、メチルクロチアジド（ｍｅｔｈｙｌｃｌｏｔｈｉａｚｉｄｅ）、メチクラン、メトラゾン、パラフルチジド、ポリチアジド、キネタゾン、テクロチアジド、およびトリクロルメチアジド、ならびにこれらの組合せが挙げられる。特定の実施形態では、利尿剤は、アミロライド、ブメタニド、クロロチアジド、クロルタリドン、ジクロルフェナミド、エタクリン酸、フロセミド、ヒドロクロロチアジド、ヒドロフルメチアジド、インダパミド、メチルクロチアジド、メトラゾン、トルセミド、トリアムテレン、およびこれらの組合せから選択される。利尿剤は、１日約５〜５０ｍｇ、より典型的には１日６〜２５ｍｇを提供するのに十分な量で投与され、一般的な投与量は、１日６．２５ｍｇ、１２．５ｍｇ、または２５ｍｇである。
化合物１はまた、エンドセリン変換酵素（ＥＣＥ）阻害剤と組み合わせて投与することができ、この例としては、ホスホラミドン、ＣＧＳ２６３０３、およびこれらの組合せが挙げられる。
特定の実施形態では、化合物１は、エンドセリン受容体アンタゴニストと併用して投与され、その例としては、エンドセリンＡ受容体に作用する選択的エンドセリン受容体アンタゴニスト、たとえば、アボセンタン（ａｖｏｓｅｎｔａｎ）、アンブリセンタン、アトラセンタン、ＢＱ−１２３、クラゾセンタン、ダルセンタン、シタクセンタン、およびジボテンタン；ならびにエンドセリンＡおよびＢ両受容体に作用するエンドセリン受容体二重アンタゴニスト、たとえば、ボセンタン、マシテンタン、およびテゾセンタンが挙げられる。
さらに別の実施形態では、化合物１は、スタチンとしても公知の、一つまたは複数のＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤と組み合わせて投与される。代表的なスタチンとしては、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンが挙げられる。
一実施形態では、化合物１は、モノアミン再取り込み阻害剤と組み合わせて投与され、この例としては、ノルエピネフリン再取り込み阻害剤、例えばアトモキセチン、ブプロプリオンおよびブプロプリオンメタボライトヒドロキシブプロプリオン、マプロチリン、レボキセチン、ならびにビロキサジン；選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）、例えばシタロプラムおよびシタロプラムメタボライトデスメチルシタロプラム、ダポキセチン、エスシタロプラム（例えば、シュウ酸エスシタロプラム）、フルオキセチンおよびフルオキセチンデスメチルメタボライトノルフルオキセチン、フルボキサミン（例えば、マレイン酸フルボキサミン）、パロキセチン、セルトラリンならびにセルトラリンメタボライトデメチルセルトラリン；二重セロトニン−ノルエピネフリン再取り込み阻害剤（ＳＮＲＩ）、例えばビシファジン、デュロキセチン、ミルナシプラン、ネファゾドン、およびベンラファキシン；ならびにこれらの組合せが挙げられる。
別の実施形態では、化合物１は、筋弛緩剤と組み合わせて投与される。この例としては、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、シクロベンザプリン、ジフルニサル、メタキサロン、メトカルバモール、およびこれらの組合せが挙げられる。
一実施形態では、化合物１は、ナトリウム利尿ペプチドまたは類似体と組み合わせて投与される。この例としては、：カルペリチド、ＣＤ−ＮＰ（Ｎｉｌｅ療法）、ＣＵ−ＮＰ、ネシリチド、ＰＬ−３９９４（Ｐａｌａｔｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、ウラリチド、センデリチド、およびＯｇａｗａら、（２００４年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９巻：２８６２５〜３１頁に記載されている化合物が挙げられる。これらの化合物はまた、ナトリウム利尿ペプチド受容体−Ａ（ＮＰＲ−Ａ）アゴニストとも呼ばれる。別の実施形態では、化合物１は、ナトリウム利尿ペプチドクリアランス受容体（ＮＰＲ−Ｃ）アンタゴニスト、例えばＳＣ−４６５４２、ｃＡＮＦ（４−２３）、およびＡＰ−８１１（Ｖｅａｌｅ（２０００年）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ、１０巻：１９４９〜５２頁）と組み合わせて投与される。例えば、ＡＰ−８１１は、ＮＥＰ阻害剤、チオルファン（Ｗｅｇｎｅｒ（１９９５年）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐｅｒ．Ｈｙｐｅｒｔ．１７巻：８６１〜８７６頁）と併用した場合、相乗効果を示す。
別の実施形態では、化合物１は、ネプリライシン（ＮＥＰ）阻害剤と併用して投与され、その例としては、ＡＨＵ−３７７、カンドキサトリル、カンドキサトリラト、デキセカドトリル（ｄｅｘｅｃａｄｏｔｒｉｌ）（（＋）−Ｎ−［２（Ｒ）−（アセチルチオメチル）−３−フェニルプロピオニル］グリシンベンジルエステル）、ＣＧＳ−２４１２８（３−［３−（ビフェニル−４−イル）−２−（ホスホノメチルアミノ）プロピオンアミド］プロピオン酸）、ＣＧＳ−２４５９２（（Ｓ）−３−［３−（ビフェニル−４−イル）−２−（ホスホノメチルアミノ）プロピオンアミド］プロピオン酸）、ＣＧＳ−２５１５５（Ｎ−［９（Ｒ）−（アセチルチオメチル）−１０−オキソ−１−アザシクロデカン−２（Ｓ）−イルカルボニル］−４（Ｒ）−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンベンジルエステル）、ＨｅｐｗｏｒｔｈらのＷＯ２００６／０２７６８０に記載されている３−（ｌ−カルバモイルシクロヘキシル）プロピオン酸誘導体（Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）、ＪＭＶ−３９０−１（２（Ｒ）−ベンジル−３−（Ｎ−ヒドロキシカルバモイル）プロピオニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−ロイシン）、エカドトリル（ｅｃａｄｏｔｒｉｌ）、ホスホラミドン、レトロチオルファン（ｒｅｔｒｏｔｈｉｏｒｐｈａｎ）、ＲＵ−４２８２７（２−（メルカプトメチル）−Ｎ−（４−ピリジニル）ベンゼンプロピオンアミド）、ＲＵ−４４００４（Ｎ−（４−モルホリニル）−３−フェニル−２−（スルファニルメチル）プロピオンアミド）、ＳＣＨ−３２６１５（（Ｓ）−Ｎ−［Ｎ−（１−カルボキシ−２−フェニルエチル）−Ｌ−フェニルアラニル］−β−アラニン）およびそのプロドラッグＳＣＨ−３４８２６（（Ｓ）−Ｎ−［Ｎ−［１−［［（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メトキシ］カルボニル］−２−フェニルエチル］−Ｌ−フェニルアラニル］−β−アラニン）、シアロルフィン（ｓｉａｌｏｒｐｈｉｎ）、ＳＣＨ−４２４９５（Ｎ−［２（Ｓ）−（アセチルスルファニルメチル）−３−（２−メチルフェニル）プロピオニル］−Ｌ−メチオニンエチルエステル）、スピノルフィン、ＳＱ−２８１３２（Ｎ−［２−（メルカプトメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］ロイシン）、ＳＱ−２８６０３（Ｎ−［２−（メルカプトメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］−β−アラニン）、ＳＱ−２９０７２（７−［［２−（メルカプトメチル）−１−オキソ−３−フェニルプロピル］アミノ］ヘプタン酸）、チオルファンおよびそのプロドラッグのラセカドトリル、ＵＫ−６９５７８（ｃｉｓ−４−［［［１−［２−カルボキシ−３−（２−メトキシエトキシ）プロピル］シクロペンチル］カルボニル］アミノ］シクロヘキサンカルボン酸）、ＵＫ−４４７，８４１（２−｛１−［３−（４−クロロフェニル）プロピルカルバモイル］−シクロペンチルメチル｝−４−メトキシ酪酸）、ＵＫ−５０５，７４９（（Ｒ）−２−メチル−３−｛１−［３−（２−メチルベンゾチアゾール−６−イル）プロピルカルバモイル］シクロペンチル｝プロピオン酸）、５−ビフェニル−４−イル−４−（３−カルボキシプロピオニルアミノ）−２−メチルペンタン酸および５−ビフェニル−４−イル−４−（３−カルボキシプロピオニルアミノ）−２−メチルペンタン酸エチルエステル（ＷＯ２００７／０５６５４６）、ＫｈｄｅｒらのＷＯ２００７／１０６７０８に記載されているダグルトリル（ｄａｇｌｕｔｒｉｌ）［（３Ｓ，２’Ｒ）−３−｛１−［２’−（エトキシカルボニル）−４’−フェニルブチル］−シクロペンタン−１−カルボニルアミノ｝−２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−１−ベンゾアゼピン−１−酢酸］（Ｎｏｖａｒｔｉｓ ＡＧ）、ならびにこれらの組合せが挙げられる。特定の実施形態では、ＮＥＰ阻害剤は、ＡＨＵ−３７７、カンドキサトリル、カンドキサトリラト、ＣＧＳ−２４１２８、ホスホラミドン、ＳＣＨ−３２６１５、ＳＣＨ−３４８２６、ＳＱ−２８６０３、チオルファン、およびこれらの組合せから選択される。特定の実施形態では、ＮＥＰ阻害剤は、エンドセリン変換酵素（ＥＣＥ）とＮＥＰ両方の阻害剤としての活性を有する、ダグルトリルまたはＣＧＳ−２６３０３（［Ｎ−［２−（ビフェニル−４−イル）−１（Ｓ）−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）エチル］アミノ］メチルホスホン酸）などの化合物である。他の二重作用ＥＣＥ／ＮＥＰ化合物も使用してよい。ＮＥＰ阻害剤は、１日約２０〜８００ｍｇを提供するのに十分な量で投与され、典型的な１日投与量は、１日５０〜７００ｍｇ、より一般的には１日１００〜６００または１００〜３００ｍｇの範囲である。
一実施形態では、化合物１は、一酸化窒素ドナーと組み合わせて投与される。この例としては、ニコランジル；有機ナイトレート（ｎｉｔｒａｔｅ）、例えば四硝酸ペンタエリスリトールなど；ならびにシドノンイミン、例えばリンシドミンおよびモルシドミンなどが挙げられる。
さらに別の実施形態では、化合物１は、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）と併用して投与され、その例としては、アセメタシン、アセチルサリチル酸、アルクロフェナク、アルミノプロフェン、アンフェナク、アミプリロース（ａｍｉｐｒｉｌｏｓｅ）、アロキシプリン、アニロラク（ａｎｉｒｏｌａｃ）、アパゾン、アザプロパゾン、ベノリラート、ベノキサプロフェン、ベズピペリロン（ｂｅｚｐｉｐｅｒｙｌｏｎ）、ブロペラモール、ブクロキシ酸（ｂｕｃｌｏｘｉｃ ａｃｉｄ）、カルプロフェン、クリダナク、ジクロフェナク、ジフルニサル、ジフタロン、エノリカム（ｅｎｏｌｉｃａｍ）、エトドラク、エトリコキシブ、フェンブフェン、フェンクロフェナク、フェンクロズ酸（ｆｅｎｃｌｏｚｉｃ ａｃｉｄ）、フェノプロフェン、フェンチアザク、フェプラゾン、フルフェナム酸、フルフェニサール、フルプロフェン、フルルビプロフェン、フロフェナク、イブフェナク、イブプロフェン、インドメタシン、インドプロフェン、イソキセパク（ｉｓｏｘｅｐａｃ）、イソキシカム（ｉｓｏｘｉｃａｍ）、ケトプロフェン、ケトロラク、ロフェミゾール（ｌｏｆｅｍｉｚｏｌｅ）、ロルノキシカム、メクロフェナメート、メクロフェナム酸、メフェナム酸、メロキシカム、メサラミン、ミロプロフェン（ｍｉｒｏｐｒｏｆｅｎ）、モフェブタゾン、ナブメトン、ナプロキセン、ニフルミン酸、オキサプロジン、オキスピナク（ｏｘｐｉｎａｃ）、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、ピルプロフェン、プラノプロフェン、サルサレート、スドキシカム（ｓｕｄｏｘｉｃａｍ）、スルファサラジン、スリンダク、スプロフェン、テノキシカム、チオピナク（ｔｉｏｐｉｎａｃ）、チアプロフェン酸、チオキサプロフェン、トルフェナム酸、トルメチン、トリフルミダート（ｔｒｉｆｌｕｍｉｄａｔｅ）、ジドメタシン（ｚｉｄｏｍｅｔａｃｉｎ）、ゾメピラック、およびこれらの組合せが挙げられる。特定の実施形態では、ＮＳＡＩＤは、エトドラク、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、メロキシカム、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、およびこれらの組合せから選択される。
一実施形態では、化合物１は、Ｎ−メチルｄ−アスパラギン酸塩（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニストと組み合わせて投与され、この例としては、アマンタジン、デキストロメトルファン、デキストロプロポキシフェン、ケタミン、ケトベミドン、メマンチン、メタドンなどが挙げられる。
さらなる別の実施形態では、化合物１は、オピオイド受容体アゴニスト（オピオイド鎮痛剤とも呼ばれる）と組み合わせて投与される。代表的なオピオイド受容体アゴニストとしては、：ブプレノルフィン、ブトルファノール、コデイン、ジヒドロコデイン、フェンタニル、ハイドロコドン、ヒドロモルホン、レバロルファン、レボルファノール、メペリジン、メタドン、モルヒネ、ナルブフィン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ナロルフィン、オキシコドン、オキシモルホン、ペンタゾシン、プロポキシフェン、トラマドール、およびこれらの組合せが挙げられる。特定の実施形態では、オピオイド受容体アゴニストは、コデイン、ジヒドロコデイン、ハイドロコドン、ヒドロモルホン、モルヒネ、オキシコドン、オキシモルホン、トラマドール、およびこれらの組合せから選択される。
ある特定の実施形態では、化合物１は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤、特にＰＤＥ−Ｖ阻害剤と組み合わせて投与される。代表的なＰＤＥ−Ｖ阻害剤としては、アバナフィル、ロデナフィル、ミロデナフィル、シルデナフィル（Ｒｅｖａｔｉｏ（登録商標））、タダラフィル（Ａｄｃｉｒｃａ（登録商標））、バルデナフィル（Ｌｅｖｉｔｒａ（登録商標））、およびウデナフィルが挙げられる。
別の実施形態では、化合物１は、プロスタグランジン類似体（プロスタノイドまたはプロスタサイクリン類似体とも呼ばれる）と組み合わせて投与される。代表的なプロスタグランジン類似体としては、ベラプロストナトリウム、ビマトプロスト、エポプロステノール、イロプロスト、ラタノプロスト、タフルプロスト、トラボプロスト、およびトレプロスチニルが挙げられ、特に興味深いのはビマトプロスト、ラタノプロスト、およびタフルプロストである。
さらに別の実施形態では、化合物１は、プロスタグランジン受容体アゴニストと組み合わせて投与される。この例としては、ビマトプロスト、ラタノプロスト、トラボプロストなどが挙げられる。
化合物１はまた、レニン阻害剤と組み合わせて投与されてもよい。この例としては、アリスキレン、エナルキレン、レミキレン、およびこれらの組合せが挙げられる。
別の実施形態では、化合物１は、選択的セロトニン再取込み阻害薬（ＳＳＲＩ）と併用して投与され、その例としては、シタロプラムおよびシタロプラム代謝産物のデスメチルシタロプラム、ダポキセチン、エスシタロプラム（たとえば、シュウ酸エスシタロプラム）、フルオキセチンおよびフルオキセチンの脱メチル代謝産物であるノルフルオキセチン、フルボキサミン（たとえば、マレイン酸フルボキサミン）、パロキセチン、セルトラリンおよびセルトラリン代謝産物のデメチルセルトラリン、ならびにこれらの組合せが挙げられる。
一実施形態では、化合物１は、５−ＨＴ１Ｄセロトニン受容体アゴニストと組み合わせて投与され、この例としては、トリプタン、例えばアルモトリプタン、アビトリプタン、エレトリプタン、フロバトリプタン、ナラトリプタンリザトリプタン、スマトリプタン、およびゾルミトリプタンが挙げられる。
一実施形態では、化合物１は、ナトリウムチャネル遮断剤と組み合わせて投与され、この例としては、カルバマゼピン、ホスフェニトイン、ラモトリギン、リドカイン、メキシレチン、オキシカルバゼピン、フェニトイン、およびこれらの組合せが挙げられる。
一実施形態では、化合物１は、可溶性グアニル酸シクラーゼ刺激物質またはアクチベーターと組み合わせて投与される。この例としては、アタシグアト、リオシグアト、およびこれらの組合せが挙げられる。
一実施形態では、化合物１は、三環式抗うつ剤（ＴＣＡ）と組み合わせて投与され、この例としては、アミトリプチリン、アミトリプチリノキシド、ブトリプチリン、クロミプラミン、デメキシプチリン、デシプラミン、ジベンゼピン、ジメタクリン、ドスレピン、ドキセピン、イミプラミン、イミプラミノキシド、ロフェプラミン、メリトラセン、メタプラミン、ニトロザゼピン、ノルトリプチリン、ノキシプチリン、ピポフェジン、プロピゼピン、プロトリプチリン、キヌプラミン、およびこれらの組合せが挙げられる。
一実施形態では、化合物１は、バソプレッシン受容体アンタゴニストと組み合わせて投与され、この例としては、コニバプタンおよびトルバプタンが挙げられる。
併用される第２の治療剤は、本発明の化合物とのさらなる併用療法においても役立つことができる。例えば、本発明の化合物は、利尿剤とＡＲＢ、またはカルシウムチャネル遮断剤とＡＲＢ、または利尿剤とＡＣＥ阻害剤、またはカルシウムチャネル遮断剤とスタチンを併用することができる。具体例として、ＡＣＥ阻害剤エナラプリル（マレイン酸塩形態）と利尿剤ヒドロクロロチアジド（Ｖａｓｅｒｅｔｉｃ（登録商標）というマークの下で販売されている）の組合せ、またはカルシウムチャネル遮断剤アムロジピン（ベシル酸塩形態）とＡＲＢオルメサルタン（メドキソミルプロドラッグ形態）の組合せ、またはカルシウムチャネル遮断剤とスタチンの組合せが挙げられ、これらはすべて化合物１と共に使用することができる。他の治療剤、例えばα２−アドレナリン受容体アゴニストおよびバソプレッシン受容体アンタゴニストなどもまた、併用療法に役立ち得る。典型的なα２−アドレナリン受容体アゴニストとして、クロニジン、デクスメデトミジン、およびグアンファシンが挙げられる。
以下の製剤は、本発明の代表的な薬学的組成物を例示している。
典型的な経口投与用硬質ゼラチンカプセル
本発明の化合物（５０ｇ）、スプレー乾燥したラクトース４４０ｇおよびステアリン酸マグネシウム１０ｇを十分にブレンドする。次いで得られた組成物を硬質ゼラチンカプセルに充填する（カプセル剤１個あたり組成物５００ｍｇ）。あるいは、化合物１（２０ｍｇ）をデンプン（８９ｍｇ）、微結晶性セルロース（８９ｍｇ）およびステアリン酸マグネシウム（２ｍｇ）と十分にブレンドする。次いでこの混合物を米国製の４５番メッシュの篩に通し、硬質ゼラチンカプセルに充填する（カプセル剤１個あたり組成物２００ｍｇ）。
あるいは、化合物１（３０ｇ）、第２の剤（２０ｇ）、スプレー乾燥したラクトース４４０ｇおよびステアリン酸マグネシウム１０ｇを十分にブレンドし、上記のように処理する。
典型的な経口投与用ゼラチンカプセル製剤
化合物１（１００ｍｇ）を、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（５０ｍｇ）およびデンプン粉末（２５０ｍｇ）と十分にブレンドする。次いでこの混合物をゼラチンカプセル剤に充填する（カプセル剤１個あたり組成物４００ｍｇ）。あるいは、化合物１（７０ｍｇ）および第２の剤（３０ｍｇ）をポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（５０ｍｇ）およびデンプン粉末（２５０ｍｇ）と十分にブレンドし、得られた混合物をゼラチンカプセル剤に充填する（カプセル剤１個あたり組成物４００ｍｇ）。
あるいは、化合物１（４０ｍｇ）を、微結晶性セルロース（アビセルＰＨ１０３；２５９．２ｍｇ）およびステアリン酸マグネシウム（０．８ｍｇ）と十分にブレンドする。次いでこの混合物をゼラチンカプセル剤（サイズ＃１、白色、不透明）に充填する（カプセル剤１個あたり組成物３００ｍｇ）。
典型的な経口投与用ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）カプセル剤
化合物１（５０ｍｇまたは１００ｍｇ）をＨＰＭＣカプセルに直接充填する。
典型的な経口投与用錠剤製剤
化合物１（１０ｍｇ）、デンプン（４５ｍｇ）および微結晶性セルロース（３５ｍｇ）を米国製２０番メッシュの篩に通し、十分混合する。こうして生成された粒剤を５０〜６０℃で乾燥させ、米国製１６番メッシュの篩に通す。ポリビニルピロリドン溶液（４ｍｇを滅菌水中の１０％溶液として）を、カルボキシメチルデンプンナトリウム（４．５ｍｇ）、ステアリン酸マグネシウム（０．５ｍｇ）、およびタルク（１ｍｇ）と混合し、次いでこの混合物を、米国製１６番メッシュの篩に通す。次いでカルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクをこの粒剤に加える。混合後、この混合物を錠剤機上で圧縮して、重さ１００ｍｇの錠剤を生成する。
あるいは、化合物１（２５０ｍｇ）を、微結晶性セルロース（４００ｍｇ）、ヒュームド二酸化ケイ素（１０ｍｇ）、およびステアリン酸（５ｍｇ）と十分にブレンドする。次いでこの混合物を圧縮して、錠剤を形成する（錠剤一錠あたり組成物６６５ｍｇ）。
あるいは、化合物１（４００ｍｇ）を、コーンスターチ（５０ｍｇ）、クロスカルメロースナトリウム（２５ｍｇ）、ラクトース（１２０ｍｇ）、およびステアリン酸マグネシウム（５ｍｇ）と十分にブレンドする。次いでこの混合物を圧縮して、単一の分割錠を形成する（錠剤一錠あたり組成物６００ｍｇ）。
あるいは、化合物１（１００ｍｇ）を、コーンスターチ（１００ｍｇ）と、ゼラチン（２０ｍｇ）水溶液と共に十分にブレンドする。この混合物を乾燥させ、粉砕して微細な粉末にする。次いで微結晶性セルロース（５０ｍｇ）およびステアリン酸マグネシウム（５ｍｇ）をゼラチン製剤と混和し、顆粒化し、得られた混合物を圧縮して、錠剤を形成する（錠剤一錠あたり本発明の化合物１００ｍｇ）。
典型的な経口投与用懸濁製剤
以下の成分を混合して、懸濁物１０ｍＬあたり、１００ｍｇの化合物１を含有する懸濁物を形成する。
典型的な経口投与用液体製剤
適切な液体製剤は、カルボン酸ベースの緩衝剤、例えばクエン酸緩衝液、乳酸緩衝液およびマレイン酸緩衝液などを用いたものである。例えば、化合物１（ＤＭＳＯと予備混合しておいてもよい）を、１００ｍＭクエン酸アンモニウム緩衝剤とブレンドし、ｐＨをｐＨ５に調整するか、または１００ｍＭクエン酸溶液とブレンドし、ｐＨをｐＨ２に調整する。このような溶液はまた、シクロデキストリンなどの可溶化賦形剤を含んでもよく、例えば溶液は、１０重量％のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含んでもよい。
他の適切な製剤としては、シクロデキストリンを伴うかまたは伴わない５％ＮａＨＣＯ３溶液が挙げられる。
注射による投与のための典型的な非経口ＩＶ製剤
化合物１（０．２ｇ）を０．４Ｍの酢酸ナトリウム緩衝液（２．０ｍＬ）とブレンドする。得られる溶液のｐＨを、必要に応じて０．５Ｎ塩酸水溶液または０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を使用してｐＨ４に調整し、次いで、注射に十分な水を加えて、合計体積を２０ｍＬとする。次いで、混合物を滅菌フィルター（０．２２ミクロン）で濾過して、注射による投与に適する滅菌溶液とする。
次の製剤は、本発明の代表的な薬学的組成物の実例である。
製剤例Ａ
注射用溶液の調製に適する凍結した溶液を、次のとおりに調製する。
代表的手順：存在する場合、賦形剤を約８０％の注射用水に溶解させ、活性化合物１または１’を加え、溶解させる。１Ｍ水酸化ナトリウムでｐＨを３〜４．５に調整し、次いで、注射用水で体積を最終体積の９５％に調整する。ｐＨをチェックし、必要なら調整し、注射用水で体積を最終体積に調整する。次いで、製剤を０．２２ミクロンのフィルターで滅菌濾過し、無菌条件下で滅菌バイアルに入れる。バイアルにふたを被せ、ラベルを貼り、凍結貯蔵する。
製剤例Ｂ
注射用溶液の調製に適する凍結乾燥粉末または結晶固体を、次のとおりに調製する。
代表的手順：存在する場合、賦形剤および／または緩衝剤を約６０％の注射用水に溶解させる。活性化合物１または１’を加え、溶解させ、１Ｍ水酸化ナトリウムでｐＨを３〜４．５に調整し、注射用水で体積を最終体積の９５％に調整する。ｐＨをチェックし、必要なら調整し、注射用水で体積を最終体積に調整する。次いで、製剤を０．２２ミクロンのフィルターで滅菌濾過し、無菌条件下で滅菌バイアルに入れる。次いで、適切な凍結乾燥サイクルを使用して製剤を凍結乾燥する。（任意選択で部分真空または乾燥窒素中で）バイアルにふたを被せ、ラベルを貼り、冷蔵した。
製剤例Ｃ
患者に静脈内投与するための注射用溶液を、上記製剤例Ｂから、次のとおりに調製する。
代表的手順：（たとえば、１０〜１０００ｍｇの活性化合物１または１’を含有する）製剤例Ｂの凍結乾燥粉末を、２０ｍＬの滅菌水で再構成し、得られる溶液を、１００ｍＬの注入バッグ中の８０ｍＬの滅菌食塩水でさらに希釈する。次いで、希釈した溶液を、３０〜１２０分かけて患者に静脈内投与する。
吸入による投与のための典型的な組成物
化合物１（０．２ｍｇ）を微粉化し、次いでラクトース（２５ｍｇ）とブレンドする。次いでこのブレンドした混合物をゼラチン吸入カートリッジに充填する。カートリッジの内容物を、例えばドライパウダー吸入器を使用して投与する。
あるいは、脱塩水（２００ｍＬ）中にレシチン（０．２ｇ）を溶解することによって調製した溶液中に、微粉化した化合物１（１０ｇ）を分散させる。得られた懸濁物をスプレー乾燥し、次いで微粉化して、平均直径が約１．５μｍ未満の粒子を含む微粉化組成物を形成する。次いで微粉化組成物を、吸入器で投与した場合に投与１回あたり本発明の化合物約１０μｇ〜約５００μｇを提供するのに十分な量で、加圧した１，１，１，２−テトラフルオロエタンを含有する計量式吸入器カートリッジに充填する。
あるいは、化合物１（２５ｍｇ）を、クエン酸緩衝化（ｐＨ５）等張生理食塩水（１２５ｍＬ）に溶解させる。この混合物を撹拌し、化合物が溶解するまで超音波処理する。溶液のｐＨをチェックし、必要に応じて、水性の１Ｎ ＮａＯＨをゆっくりと加えることによってｐＨ５に調整する。溶液はネブライザーデバイスを使用して投与し、このネブライザーデバイスは、投与１回あたり、約１０μｇ〜約５００μｇの化合物１を提供する。
以下の調製および実施例は、本発明の特定の実施形態を例示するために提供されている。しかしこれらの特定の実施形態は、具体的に指摘されていない限り、本発明の範囲を限定することを決して意図するものではない。
以下の略語は、他に指摘されない限り、以下の意味を有し、本明細書中で使用され、定義されていない任意の他の略語は、これらの標準的で、一般的に受け入れられた意味を有する。
ＡｃＯＨ 酢酸
ＢＯＣ ｔ−ブトキシカルボニル（−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）
（ＢＯＣ）２Ｏ 二炭酸ジ−ｔ−ブチル
Ｂｎ ベンジル
ＣＰＭＥ シクロペンチルメチルエーテル
ＤＣＣ １，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＭ ジクロロメタンまたは塩化メチレン
ＤＩＰＥ ジイソプロピルエーテル
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ ４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
Ｅｔ３Ｎ トリエチルアミン
ＥｔＯＨ エタノール
Ｅｔ２Ｏ ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ＮａＨＭＤＳ ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド
Ｐｄ（ＰＰｈ３）４ テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
ＰＥ 石油エーテル
ＳｉｌｉｃａＣａｔ（登録商標）ＤＰＰ−Ｐｄ シリカをベースとするジフェニルホスフィンパラジウム（ＩＩ）触媒
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
特に示されていない限り、すべての材料、例えば試薬、出発物質および溶媒などは、民間の供給者（例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、およびＦｌｕｋａ Ｒｉｅｄｅｌ−ｄｅ Ｈａｅｎなど）から購入し、さらなる精製なしで使用した。
特に示されていない限り、反応は、窒素雰囲気下で行った。反応の進行は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、分析用高速液体クロマトグラフィー（分析ＨＰＬＣ）、および質量分析法でモニターし、これらの詳細は具体例において示されている。一般に、分析用ＨＰＬＣで使用した溶媒は、以下のとおりであった。
溶媒Ａは、９８％Ｈ２Ｏ／２％ＭｅＣＮ／１．０ｍＬ／ＬのＴＦＡ；溶媒Ｂは、９０％ＭｅＣＮ／１０％Ｈ２Ｏ／１．０ｍＬ／ＬのＴＦＡであった。
各調製において具体的に記載されているように反応の後処理を行った。例えば、一般的には、抽出および他の精製方法、例えば温度依存性、および溶媒依存性の結晶化、および沈殿などによって、反応混合物を精製した。さらに、反応混合物は、通常Ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ Ｃ１８およびＭｉｃｒｏｓｏｒｂ ＢＤＳカラム充填材料ならびに従来の溶離液を使用して、分取ＨＰＬＣにより規定通りに精製した。反応の進行は、通常液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣＭＳ）で測定した。異性体の特徴付けは、核オーバーハウザー効果スペクトロスコピー（ＮＯＥ）で行った。反応生成物の特徴付けを質量分析法および１Ｈ−ＮＭＲ分光分析で規定通りに行った。ＮＭＲ測定のため、試料を重水素化溶媒（ＣＤ３ＯＤ、ＣＤＣｌ３、またはＤＭＳＯ−ｄ６）に溶解させ、標準的な観察条件下、Ｖａｒｉａｎ Ｇｅｍｉｎｉ２０００装置（４００ＭＨｚ）を用いて、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを取得した。質量分析による化合物の同定は通常、エレクトロスプレーイオン化方法（ＥＳＭＳ）を使用して、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）モデルＡＰＩ１５０ＥＸ装置またはＡｇｉｌｅｎｔ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）モデル１２００ＬＣ／ＭＳＤ装置を用いて行った。
測定技術
粉末Ｘ線回折
粉末Ｘ線回折分析は、Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８−Ａｄｖａｎｃｅ Ｘ線回折計を使用して行った。Ｘ線源は、Ｃｕ−Ｋα放射とし、出力電圧を４０ｋＶ、電流は４０ｍＡとした。計器は、Ｂｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏの幾何学的配置で作動させ、Ｇｏｅｂｅｌ Ｍｉｒｒｏｒｓを使用して、平行のＸ線ビームを得た。線源における０．２°の垂直発散スリットと線源および検出器におけるＳｏｌｌｅｒスリット（２．５°）とによって、ビームのいかなる発散も制限した。測定のために、少量の粉末（５〜２５ｍｇ）を、バックグラウンドゼロのケイ素試料ホルダーに穏やかに押し込んで、滑らかな表面を形成し、Ｘ線に曝露させた。試料は、２θにおける２°から３５°までを、０．０２°のステップサイズ、１ステップ０．３秒の走査スピードで、連結θ−２θモードにおいて走査した。データ取得は、Ｂｒｕｋｅｒ ＤｉｆｆｒａｃＳｕｉｔｅソフトウェアによって制御し、Ｊａｄｅソフトウェア（バージョン７．５．１）によって分析した。計器は、コランダム標準を用いて、±０．０２° ２θ角内で較正した。
データ収集において使用したＢｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏの幾何学的配置は、優先配向（ｐｒｅｆｅｒｒｅｄ ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ）の傾向があることを留意すべきである。こうした条件下では、回折ピークの相対強度が、理想的と考えられる球形粒子分布、または単結晶データからシミュレートされた回折パターンから得られるであろう、真の相対強度となりえない可能性がある。また、広範囲の優先配向のために、一部の回折パターンにおいていくつかのピークが認められない可能性もある。
示差走査熱量測定
ＤＳＣ測定は、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｍｏｄｅｌ Ｑ−１００モジュールをＴｈｅｒｍａｌ Ａｎａｌｙｓｔコントローラと共に使用して行った。データは、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアを使用して収集および分析した。試料は、正確に秤量して、覆いをしたアルミニウム皿に入れた。５℃で５分の等温平衡期間の後、０℃から２７５℃まで１０℃／分の線形加熱傾斜を使用して、試料を加熱した。
熱重量分析
ＴＧＡ測定は、高分解性能を備えたＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｍｏｄｅｌ Ｑ−５００モジュールを使用して行った。データは、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｔｈｅｒｍａｌ Ａｎａｌｙｓｔコントローラを使用して収集し、ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアを使用して分析した。秤量した試料を白金皿に載せ、周囲温度から１０℃の加熱速度で２００℃に加熱しながら走査した。天秤および炉室は、使用中、窒素流でパージした。
偏光顕微鏡法
偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）研究については、光学顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ ＢＸ５１）下で交差偏光フィルターを用いて試料を調べた。像は、ＰａｘＩｔ Ｉｍａｇｉｎｇソフトウェア（バージョン６．４）制御下のＰａｘＣａｍカメラで収集した。試料は、軽鉱油（ｌｉｇｈｔ ｍｉｎｅｒａｌ ｏｉｌ）を浸漬媒として用いてガラススライド上に調製した。粒子の大きさに応じて、４倍、１０倍、または２０倍の対物レンズを拡大に使用した。
動的水分収着評価
ＤＭＳ測定は、ＶＴＩの大気微量天秤（ａｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃ ｍｉｃｒｏｂａｌａｎｃｅ）であるＳＧＡ−１００システム（ＶＴＩ Ｃｏｒｐ．、３３０１６フロリダ州ハイアレア）を使用して行った。秤量した試料を使用し、分析開始時に、湿度を可能な最低値（相対湿度０％近く）とした。ＤＭＳ分析は、５〜９０％の全湿度範囲にわたり相対湿度５％／ステップの走査速度からなるものとした。ＤＭＳ試行は、２５℃で等温で行った。
合成手順および比較例
以下の化合物を合成し、ＮＥＰ酵素阻害活性について評価を行った。
調製１： （２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸ベンジルエステル（化合物７）
（３Ｓ，５Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−ビフェニル−４−イルメチル）−３−ヒドロキシメチル−３−メチル−ピロリジン−２−オン（２）（２０１．０ｇ、５７８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（４０２０ｍＬ）と合わせて、均質な褐色の透明の溶液を生成し、次いでこれを撹拌しながら０℃に冷却した。３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（１１８ｍＬ、１．３ｍｏｌ）および４−メチルベンゼンスルホン酸（３４．８ｇ、２０２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２時間かけて１８．５℃に加熱し、次いで終夜１８．５℃で撹拌した（＞９８％の変換）。反応を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチし、相を分離させた。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過した後、溶媒を除去して、濃厚な暗褐色の粗生成物（約３００ｇ）を生成し、これをＤＩＰＥ（２Ｌ）に溶解させ、終夜５℃で撹拌して、白色のスラリーを生成した。スラリーを濾過し、固体を２日かけて乾燥させて、化合物３（１１３．８ｇ）を生成した。濾液を乾燥させて濃厚な油状物を得、これをＤＩＰＥ（約１００ｍＬ）に溶解させ、終夜５℃で撹拌して、追加の化合物３を単離した（合計収量２２５ｇ）。
化合物３（２０８ｇ、４８２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１９１２ｍＬ、２３ｍｏｌ）に撹拌しながら溶解させて、均質な透明の溶液を生成した。混合物を窒素パージし、次いで−１０℃に冷却した。１Ｍ ＮａＨＭＤＳ ＴＨＦ溶液（５３９ｍＬ、５３９ｍｍｏｌ）を滴下して加え、混合物を３０分間撹拌した。ＴＨＦ（３９３ｍＬ、４．８ｍｏｌ）に溶解させた二炭酸ジ−ｔ−ブチル（１３１ｇ、６０２ｍｍｏｌ）を滴下して加え、得られる混合物を室温で終夜撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（５．０Ｌ）で反応をクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３．１Ｌ）を加えた。相を分離し、有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（５．０Ｌ）で洗浄した。相を分離し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒を除去すると、濃厚な油状物が得られ、これを２日かけてさらに乾燥させると、化合物４（２６５ｇ）が泡立った固体として得られた。
化合物４（２６５ｇ、４９８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．７Ｌ）に溶解させて、均質な淡褐色の透明な溶液を生成した。１．０Ｍ ＬｉＯＨ水溶液（１．５Ｌ、１．５ｍｏｌ）を加え、得られる混合物を室温で４時間撹拌した。６時間後に反応が完了したが、混合物を１５℃で終夜撹拌したままとした。ＥｔＯＡｃ（１．７Ｌ）を加え、混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１．７Ｌ）で洗浄し、相を分離した。有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、乾燥させて、化合物５（３００ｇ）をオフホワイト色から黄色の泡立った固体として生成した（過剰分は、残留ＥｔＯＡｃによるものである）。
化合物５（２７７．０ｇ、４９８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（９７０ｍＬ）に溶解させて、無色の溶液を生成した。Ｋ２ＣＯ３（１０３ｇ、７４７ｍｍｏｌ）を加え、得られる混合物を１５分間撹拌した。臭化ベンジル（７１．１ｍｌ、５９８ｍｍｏｌ）を１回で加え、混合物を室温で終夜撹拌して、２０時間後に変換を完了した。ＮＨ４Ｃｌ（６Ｌ）およびＥｔＯＡｃ（１Ｌ）を加え、相を分離した。有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（６Ｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、溶媒を除去すると、粗化合物６（３３５ｇ）が生成し、これを次のステップでそのまま使用した。
３Ｍ ＨＣｌ ＣＰＭＥ溶液（１．７Ｌ、５．０ｍｏｌ）を化合物６（３１９．０ｇ、４９８ｍｍｏｌ）と合わせ、得られる混合物を室温で２４時間かけて撹拌して、スラリーを得た（＞９９％の変換）。追加のＣＰＭＥ（１．０Ｌ）を加え、得られるスラリーを１時間撹拌した。混合物を濾過し、湿ったケークをＣＰＭＥ（５００ｍＬ）ですすいだ。濾過し、乾燥させると、化合物７（１９０ｇ）が白色のケークとして得られた。
（実施例１：（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−４−（エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸（化合物１））
ＥｔＯＨ（５７６μＬ、９．９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解させた。塩化オキサリル（１．０ｍＬ、１２．１ｍｍｏｌ）を加え、得られる溶液を室温で３０分間撹拌した。溶媒を熱せずに蒸発させて溶液を得、これを次のステップでそのまま使用した。（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸ベンジルエステル（７）（１．０ｇ、２．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解させた。以前に得ていた溶液を加えた後、ＤＩＰＥＡ（９５８μＬ、５．５ｍｍｏｌ）を加えた。得られる溶液を室温で１５分間撹拌し、この時点で、所望の生成物の質量がＬＣ／ＭＳによって示された。真空中で溶媒を除去し、粗残渣を順相クロマトグラフィー（２０〜９５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、化合物８（１．０ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を生成し、次のステップでそのまま使用した。
化合物８（１．０ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を、１０ｗｔ％パラジウム炭素（３５０ｍｇ、１８５μｍｏｌ）、ＡｃＯＨ（５ｍＬ）、およびＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）と合わせた。混合物を水素下に置き、室温で２時間撹拌し、この時点で、ベンジル脱保護が完了したことが、ＬＣ／ＭＳによって示された。０．２μｍのＰＴＦＥ Ａｃｒｏｄｉｓｃ ＣＲフィルターを使用してパラジウムを濾別し、真空中で溶媒を除去した。粗残渣を逆相クロマトグラフィーによって精製して、化合物１（４００ｍｇ）を生成した。Ｃ２３Ｈ２５ＣｌＦＮＯ６についてのＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値 ４６６．１４、実測値 ４６６。
結晶の（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタン酸カルシウム（化合物１’）
化合物１（３０ｇ、６４．４ｍｍｏｌ）を２００プルーフＥｔＯＨ（１００ｍＬ）に溶解させ、引き続いてこの混合物に室温でＤＩＰＥＡ（１１．２５ｍＬ、６４．４ｍｍｏｌ）を加えた。トリフルオロメタンスルホン酸カルシウム（１０．８９ｇ、３２．２ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（２０ｍＬ）に溶解させ、化合物１を含有する混合物に滴下して加え、およそ１時間かけて濃厚なスラリーを形成した。次いで、濃厚なスラリーを室温で２日間撹拌した。得られるスラリーをゆっくりと濾過し、２日かけて乾燥させて、９９％を超えて純粋な３３ｇの化合物１’を生成した。化合物１’（３３ｇ、１９．８０ｍｍｏｌ）をまず５℃に冷却することにより、第２のリスラリープロセスを実施した。次いで、冷ＥｔＯＨ：水（７：３）混合物（３００ｍＬ）を加え、得られるスラリーを４日間激しく撹拌した。次いで、スラリーをゆっくりと濾過し、継続的にほぐし（ｄｅ−ｌｕｍｐｉｎｇ）ながら２４時間乾燥させた。次いで、スラリーを室温でさらに１８時間風乾して、９９％を超えて純粋な化合物１’の固体２９．５ｇを生成した。この生成物を、ＰＸＲＤ、ＤＳＣ、およびＴＧＡによって本明細書に記載のとおりに分析しており、生成されたデータを図１〜３に示す。
結晶のＬ−アルギニン（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタノエート（化合物１”）
化合物１（１８１．６ｍｇ）をガラスバイアル中の２００プルーフＥｔＯＨ（０．５ｍＬ）に溶解させて、透明な溶液を得た。溶液を約１０分間−２０℃に冷却した。別のガラスバイアルにおいて、Ｌ−アルギニン（６８ｍｇ）を０．２ｍＬの水に溶解させ、溶液を約１０分間５℃で冷却した。化合物１を含有する透明な溶液を、Ｌ−アルギニン溶液へとゆっくりと移した。化合物１を予め含有するバイアルに、追加の０．２ｍＬの２００プルーフＥｔＯＨを加え、中身を、Ｌ−アルギニン溶液を含有するバイアルにさらに加えた。合わせた溶液に、直前で記載した同様の手順を使用してより早期の反応から取得したＬ−アルギニン結晶のシードを加え、混合物全部を穏やかに撹拌しながら５℃に保って、１〜２日の間に結晶性懸濁物を生成した。化合物１”の結晶を濾過し、ＰＸＲＤ、ＤＳＣ、およびＴＧＡによって本明細書に記載のとおりに分析しており、生成されたデータを図６〜８に示す。
調製２： （２Ｓ，４Ｒ）−４−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸エチルエステル（化合物１０）
（２Ｓ，４Ｒ）−５−（４−ブロモフェニル）−４−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸（１．３ｇ、３．１ｍｍｏｌ）を、Ｎａ２ＣＯ３（９９３ｍｇ、９．４ｍｍｏｌ）、水（０．２ｍＬ）、およびジオキサン（１．５ｍＬ）と合わせた。反応容器にふたを被せ、パージし、窒素中に置いた。Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（５４１ｍｇ、４６８μｍｏｌ）を手早く加え、容器を再びパージした。混合物を９０℃で４５分間加熱し、この時点で、ＬＣＭＳによって反応の完了が示された。有機層を１Ｎ ＨＣｌ／水でｐＨ約４に酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｍｇ２ＳＯ４で乾燥させた。真空中で溶媒を除去し、粗残渣を逆相クロマトグラフィーによって精製して、化合物９を生成した。
化合物９（１．０ｇ、２．１ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（４ｍＬ）および４Ｎ ＨＣｌジオキサン溶液（４ｍＬ）に溶解させ、６０℃で３時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、粗残渣をＤＣＭに溶解させた。（ＢＯＣ）２Ｏ（４７２μＬ、２．０３１ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（５６６μＬ、４．１ｍｍｏｌ）を加えた後、ＤＭＡＰ（５ｍｇ）を加えた。反応混合物を３時間撹拌した。粗生成物を蒸発させ、ＤＣＭで摩砕し、それ以上精製せずに濾過して、化合物１０（８００ｍｇ）を生成した。
（実施例２：（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチル−４−（オキサリルアミノ）ペンタン酸（比較化合物Ｃ２））
（２Ｓ，４Ｒ）−４−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸エチルエステル（１０）（２．６ｇ、５．３ｍｍｏｌ）を、ＭｅＣＮ（５ｍＬ）および４Ｎ ＨＣｌジオキサン溶液（４ｍＬ）と合わせ、１５分間撹拌した。溶媒を遠心蒸発によって除去して、化合物１１を生成し、これを次のステップでそのまま使用した。
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の粗化合物１１（２．１ｇ、５．３ｍｍｏｌ）に、エチル２−クロロ−２−オキソアセテート（１．３ｍＬ、１１．７ｍｍｏｌ）を加えた後、Ｅｔ３Ｎ（２．６ｍＬ、１８．７ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。得られる混合物を１５分間撹拌し、反応を、完了についてモニターした。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（０〜１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、化合物１２を生成し、これを次のステップでそのまま使用した。
化合物１２（２．２ｇ、３．７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ）およびＮａＯＨ（３．７ｍＬ、３７．０ｍｍｏｌ）と合わせた後、水（１０ｍＬ）を加えた。得られる混合物を終夜撹拌した。溶媒を蒸発させ、ＡｃＯＨを加え、生成物を逆相クロマトグラフィーによって精製して、比較化合物Ｃ２（５４０ｍｇ）を生成した。Ｃ２１Ｈ２１ＣｌＦＮＯ６についてのＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値 ４３８．１０、実測値 ４３８．２。
比較化合物Ｃ２は、Ｈｕｇｈｅｓらの米国特許第８，６９１，８６８号の実施例１１−２に記載されている。
調製３： （３Ｓ，５Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イルメチル）−３−ヒドロキシメチル−３−メチルピロリジン−２−オン（化合物２１）
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持しておいた反応フラスコに、（Ｒ）−２−アミノ−３−（４−ブロモフェニル）プロピオン酸（３３００ｇ、１３．５ｍｏｌ、１．０当量）のＭｅＣＮ（４６．２Ｌ）溶液を入れた。ＮａＯＨ（１０８１ｇ、２７．０ｍｏｌ、２．０当量）の水（４６．２Ｌ）溶液を数回分のバッチにして−１０℃で加えた。これに、二炭酸ジ−ｔ−ブチル（２９４８ｇ、１３．５１ｍｏｌ、１．０当量）のＭｅＣＮ（６．６Ｌ）溶液を加えた。得られる溶液を室温で終夜撹拌し、次いで、真空中で濃縮した。得られる溶液を４５Ｌの水／氷で希釈した。溶液ｐＨをＨＣｌ（１ｍｏｌ／Ｌ）で２に調整した。得られる溶液をＤＣＭ（５０Ｌ×３）で抽出し、有機層を合わせた。得られる混合物を飽和ＮａＣｌ水溶液（５０Ｌ）で洗浄し、次いでＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮して、化合物１３（３７２０ｇ）を白色の固体として生成した。
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持しておいた反応フラスコにおいて、化合物１３（５３０ｇ、１．５４ｍｏｌ、１．０当量）のジオキサン（９．５４Ｌ）溶液を、（５−クロロ−２−フルオロフェニル）ボロン酸（３４８ｇ、２．０ｍｏｌ、１．３当量）、Ｎａ２ＣＯ３（２２８ｇ、２．２ｍｏｌ、１．４当量）の水（１．１Ｌ）溶液、およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（８．９ｇ、７．７ｍｍｏｌ、０．０１当量）と合わせた。得られる溶液を油浴において２．５時間加熱還流し、次いで水／氷浴で室温に冷却した。得られる溶液をＥｔＯＡｃ（１５Ｌ）で希釈し、１Ｎ ＨＣｌ（５Ｌ）および飽和ＮａＣｌ水溶液（５Ｌ×４）で洗浄した。次いで、合わせた有機物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をＰＥ（１Ｌ×２）で洗浄して、化合物１４（５１０ｇ）を褐色の油状物として生成した。
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持しておいた反応フラスコにおいて、化合物１４（５１０ｇ、１．３ｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（５Ｌ）溶液を、２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（２０５ｇ、１．４ｍｏｌ、１．１当量）および４−ジメチルアミノピリジン（２３７ｇ、１．９ｍｏｌ、１．５当量）と合わせた。ＤＣＣ（２９４ｇ、１．４ｍｏｌ、１．１当量）のＤＣＭ（６００ｍＬ）溶液を−１０℃で撹拌しながら滴下して加えた。得られる溶液を室温で終夜撹拌した。固体を濾過し、濾液を１Ｎ ＨＣｌ（２Ｌ）および飽和ＮａＣｌ水溶液（３Ｌ）で洗浄した。合わせた有機物をＭｇＳＯ４で乾燥させた。固体を濾過して、化合物１５を濾液として生成し、これをそれ以上精製せずにそのまま次のステップで使用した。
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持しておいた反応フラスコにおいて、化合物１５のＤＣＭ溶液（７Ｌ、粗製）をＡｃＯＨ（６００ｍＬ）と合わせた。ＮａＢＨ４（８８．８ｇ、２．４ｍｏｌ、１．８当量）を数回分のバッチにして−５℃で加えた。得られる溶液を−５℃で３時間撹拌した。次いで、飽和ＮａＣｌ水溶液（１Ｌ）を滴下して加え反応をクエンチした。得られる溶液を飽和ＮａＣｌ水溶液（２Ｌ）で希釈し、得られる混合物を水（２Ｌ×２）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１Ｌ）、および飽和ＮａＣｌ水溶液（２Ｌ）で洗浄した。合わせた有機物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮して、化合物１６（５２０ｇ）を黄色の油状物として生成した。
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持しておいた反応フラスコにおいて、化合物１６（５２０ｇ、１．０ｍｏｌ、１．０当量）のアセトン／ＤＭＦ（１：１）（５．２Ｌ）溶液を、Ｎａ２ＣＯ３（１６３ｇ、１．５ｍｏｌ、１．５当量）およびヨウ化メチル（２１９ｇ、１．５ｍｏｌ、１．５当量）と合わせた。得られる溶液を室温で終夜撹拌し、次いで、水（１５Ｌ）で希釈した。１時間撹拌した後、濾過によって固体を集めた。残渣をＤＣＭ（５Ｌ）に溶解させた。合わせた有機物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮して、化合物１７（５２０ｇ）を黄色の固体として生成した。
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持しておいた反応フラスコに、化合物１７（５２０ｇ、１．０ｍｏｌ、１．０当量）のＣＰＭＥ（２．６Ｌ）溶液を入れた。４Ｎ ＨＣｌ ＣＰＭＥ溶液（２．６Ｌ）を−５℃で加えた。得られる溶液を室温で終夜撹拌し、次いで、真空中で半分の体積に濃縮した（化合物１８を得た）。固体を濾過によって集め、次いで、ＥｔＯＡｃとＤＩＰＥの１：２混合物で洗浄して、化合物１９（２２０ｇ）をオフホワイト色の固体として生成した。
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持しておいた反応フラスコに、化合物１９（２１８ｇ、６０２．５ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（４Ｌ）溶液およびＮ−メチルモルホリン（１７０ｇ、１．７ｍｏｌ、２．８当量）を入れた。クロロギ酸２−メチルプロピル（１６４．４ｇ、１．２ｍｏｌ、２．０当量）を、−５℃で撹拌しながら滴下して加えた。得られる溶液を−５℃で２０分間撹拌した。次いで、ＮａＢＨ４（９１．５ｇ、２．４ｍｏｌ、４．０当量）の水（４００ｍＬ）溶液を、−５℃で撹拌しながら滴下して加えた。得られる溶液を室温でさらに１時間撹拌した。次いで、１Ｎ ＨＣｌ（２．６Ｌ）を滴下して加え反応をクエンチし、得られる混合物を１時間撹拌し、次いで真空中で濃縮した。次いで、残りの混合物をさらに１時間撹拌し、次いで、濾過によって固体を集めた。固体を水で洗浄し、ＴＨＦに溶解させ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮して、化合物２１（１７０ｇ）を白色の固体として生成した。
調製４： （２Ｓ，４Ｒ）−４−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸ベンジルエステル（化合物２３）
（３Ｓ，５Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イルメチル）−３−ヒドロキシメチル−３−メチルピロリジン−２−オン（２１）（５．０ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解させ、窒素中に置いた。溶液を氷浴に置いた。ＮａＨＭＤＳ（３１．６ｍＬ、３１．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃〜室温で１０分間撹拌した。次いで、（ＢＯＣ）２Ｏ（７．３ｍＬ、３１．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌し、この時点で、ＬＣ／ＭＳによって完了が示された。この粗製溶液に、１０Ｎ ＮａＯＨ水溶液（２１．６ｍｌ、２１６ｍｍｏｌ）を加えて、ｐＨを約１２とした。追加のＴＨＦ（約１０ｍＬ）を加え、溶液を終夜室温で撹拌し、この時点で、ＬＣ／ＭＳによって完了が示された。ＥｔＯＡｃを加えた後、ｐＨ５になるまで１Ｎ ＨＣｌ溶液を加えた。有機層を抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗残渣を順相クロマトグラフィー（５０〜１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、化合物２２（２．５ｇ）を生成した。
化合物２２（５５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１７９ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）、および臭化ベンジル（１５４μＬ、１．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６ｍＬ）中で合わせ、室温で３〜４時間撹拌し、この時点で、ＬＣ／ＭＳによって完了が示された。真空中で溶媒を除去し、粗残渣を順相クロマトグラフィーによって精製して、化合物２３（４５３ｍｇ）を生成した。
（実施例３：（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチル−４−（オキサリルアミノ）ペンタン酸エチルエステル（比較化合物Ｃ３））
（２Ｓ，４Ｒ）−４−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸ベンジルエステル（２３）（７３０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＡｃＯＨ（３７６μＬ、６．６ｍｍｏｌ）を加えた後、パラジウム（１４０ｍｇ、１３１μｍｏｌ）を加えた。得られる混合物を水素下で３時間撹拌し、この時点で、ＬＣＭＳによって反応の完了が示された。０．２μｍのＰＴＦＥ Ａｃｒｏｄｉｓｃ ＣＲフィルターを使用して混合物を濾過し、濃縮して、化合物２４（５９９ｍｇ）を粘稠な無色透明の液体として生成した。
化合物２４（５９９ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５ｍＬ）溶液に、４Ｎ ＨＣｌジオキサン溶液（４．８ｍＬ、１９．３ｍｍｏｌ）を加えた。得られる混合物を８０℃で３時間撹拌し、次いで真空中で濃縮して、無色透明の液体を生成した。粗製液体を逆相クロマトグラフィー（２０〜９０％の水中ＭｅＣＮ ０．０５％のＴＦＡ含有）によって精製して、化合物２５（４５５ｍｇ）を白色のゴム質であるＨＣｌ塩として生成した。
塩化オキサリル（７７２μＬ、９．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）溶液に、０℃でｔ−ブタノール（５７４μＬ、６．０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、反応混合物を真空中で濃縮して、ｔ−ブチル２−クロロ−２−オキソアセテート（４０３ｍｇ）を無色透明の液体として生成した。液体をＤＣＭ（２．５ｍＬ）に溶解させて、１．０Ｍ ＤＣＭ溶液を調製した。
化合物２５（２３６ｍｇ、５９９μｍｏｌ）のＤＣＭ（３．０ｍＬ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（２６１μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた後、ｔ−ブチル２−クロロ−２−オキソアセテート（１Ｍ ＤＣＭ溶液、６５９μＬ、６５９μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで、ＴＦＡ（３．０ｍＬ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。混合物を真空中で濃縮して、透明な淡黄色の液体を生成した。粗製液体を逆相クロマトグラフィー（２０〜９０％の水中ＭｅＣＮ ０．０５％のＴＦＡ含有）によって精製して、比較化合物Ｃ３（１７４ｍｇ）を白色の固体として生成した。Ｃ２３Ｈ２５ＣｌＦＮＯ６についてのＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値 ４６６．１４、実測値 ４６６。
調製５： （Ｓ）−２−（４−ブロモベンジル）−５−オキソピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（化合物２８）
（Ｒ）−２−アミノ−３−（４−ブロモフェニル）プロピオン酸（５０ｇ、０．２ｍｏｌ）のＭｅＣＮ（７００ｍＬ）溶液に、−５℃で、ＮａＯＨ（１６．４ｇ、０．４ｍｏｌ）の水（７００ｍＬ）溶液を加えた。１０分間撹拌した後、（ＢＯＣ）２Ｏ（４４．７ｇ、０．２ｍｏｌ）のＭｅＣＮ（１００ｍＬ）溶液を加えた。混合物を室温に温め、終夜撹拌した。ＭｅＣＮを蒸発させた後、残渣をＤＣＭ（８００ｍＬ）で希釈し、−５℃において１Ｍ ＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。水相をＤＣＭ（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、化合物１３（６６．５ｇ）を白色の固体として生成した。ＬＣ−ＭＳ：３６６［Ｍ＋Ｎａ］、７０９［２Ｍ＋Ｎａ］。
化合物１３（６６．５ｇ、１９３μｍｏｌ）、メルドラム酸（３３．４ｇ、２３２ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（３７．７ｇ、３０９ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（６００ｍＬ）に溶かした溶液に、窒素中にて−５℃で、ＤＣＣ（４７．９ｇ、２３２ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２００ｍＬ）溶液を１時間かけて滴下して加えた。混合物を−５℃で８時間撹拌し、次いで終夜冷蔵した。ジシクロヘキシル尿素の結晶が認められた。混合物を濾過し、５％ＫＨＳＯ４（５×２００ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ水溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、次いで、冷蔵しながら無水ＭｇＳＯ４で終夜乾燥させた。次いで、溶液を蒸発させ、粗化合物２６（９１ｇ）を淡黄色の固体として生成した。ＬＣ−ＭＳ：４９２［Ｍ＋Ｎａ］、９６１［２Ｍ＋Ｎａ］。
粗化合物２６（９１ｇ、１９３ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１Ｌ）溶液に、窒素中にて−５℃で、ＡｃＯＨ（１２７．５ｇ、２．１ｍｏｌ）を加えた。混合物を−５℃で３０分間撹拌し、次いでＮａＢＨ４（１８．３ｇ、４８３ｍｍｏｌ）を１時間かけて少量ずつ加えた。−５℃でもう１時間撹拌した後、飽和ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）を加えた。有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（２×３００ｍＬ）および水（２×３００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を生成し、これをＥｔ２Ｏでの洗浄によってさらに精製して、化合物２７（６８ｇ）を淡黄色の固体として生成した。ＬＣ−ＭＳ：４７８［Ｍ＋Ｎａ］、９３３［２Ｍ＋Ｎａ］。
化合物２７（６８ｇ、１４９ｍｍｏｌ）の無水トルエン（５００ｍＬ）溶液を、窒素中で３時間還流させた。溶媒を蒸発させた後、残渣をクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して、化合物２８（３８ｇ）を淡黄色の油状物として生成した。ＬＣ−ＭＳ：３７６［Ｍ＋Ｎａ］、７２９［２Ｍ＋Ｎａ］。
調製６： （２Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−５−（４−ブロモフェニル）２−ヒドロキシペンタン酸エチルエステル（化合物３３）
（Ｓ）−２−（４−ブロモベンジル）−５−オキソピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（２８）（３８ｇ、１０７ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２５０ｍＬ）溶液に、窒素中にて−５℃で、ＴＦＡ（２０ｍＬ、０．２７ｍｏｌ）を加えた。混合物を室温に温め、終夜撹拌した。溶媒を蒸発させた後、残渣をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×２００ｍＬ）、水（２００ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（２５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、粗化合物２９（２４ｇ）を淡黄色の固体として生成した。ＬＣ−ＭＳ：２５４［Ｍ＋Ｈ］。
ＮａＨ（８．６ｇ、２５０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液に、窒素中にて０℃で、化合物２９（２４ｇ、９４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液を３０分かけて滴下して加えた。混合物を室温に温め、２時間撹拌した。０℃に冷却した後、塩化ピバロイル（１８ｇ、１５０ｍｍｏｌ）を３０分かけて滴下して加えた。混合物を室温に温め、終夜撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（３００ｍＬ）で反応をクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（３００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を生成し、これをクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝２５：１）によってさらに精製して、化合物３０（１８ｇ）を淡黄色の固体として生成した。ＬＣ−ＭＳ：３６０（Ｍ＋Ｎａ）。
化合物３０（１８ｇ、５３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２５０ｍＬ）溶液に、窒素中にて−７８℃で、ＮａＨＭＤＳ（４７．７ｍＬ、９６ｍｍｏｌ）を３０分かけて滴下して加えた。−７８℃で９０分間撹拌した後、（＋）−（８，８−ジクロロカンホリルスルホニル）−オキサジリジン（３１．６ｇ、１０６ｍｍｏｌ）溶液を３０分かけて滴下して加えた。−７８℃で２時間撹拌した後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（４００ｍＬ）で反応をクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（３００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を生成し、これをクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝１５：１）によってさらに精製して、化合物３１（８．９ｇ）を淡黄色の固体として生成した。ＬＣ−ＭＳ：３７６（Ｍ＋Ｎａ）。
化合物３１（８．９ｇ、２５ｍｍｏｌ）の濃ＨＣｌ（８１ｍＬ、８１ｍｍｏｌ）溶液を、１００℃で１６時間加熱した。次いで、混合物を濃縮して粗生成物を生成し、これをＥｔ２Ｏでの洗浄によってさらに精製して、化合物３２（７ｇ）を淡黄色の固体ＨＣｌ塩として生成した。ＬＣ−ＭＳ：３２３（Ｍ＋Ｈ）。
化合物３２（７ｇ、２２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１０ｍＬ）溶液を、室温で、８Ｍ ＨＣｌ ＥｔＯＨ溶液（１２０ｍＬ、９６０ｍｍｏｌ）と合わせた。混合物を５０℃で１６時間加熱し、次いで濃縮した。粗生成物をＥｔ２Ｏでの洗浄によってさらに精製して、化合物３３（６ｇ）を淡黄色の固体ＨＣｌ塩として生成した。ＬＣ−ＭＳ：３５２（Ｍ＋Ｈ）。
調製７：クロロ−オキソ−酢酸ｔ−ブチルエステル（化合物３４）
窒素中にて０℃で、塩化オキサリル（２３２μＬ、２．８ｍｍｏｌ）とｔ−ブチルアルコール（２２８μＬ）をエーテル（６．７ｍＬ）中で合わせた。得られる混合物を室温で３０分間撹拌した。減圧下で溶媒を蒸発させて、化合物３４を形成した。
調製８： （２Ｒ，４Ｒ）−５−（４−ブロモフェニル）−４−（ｔ−ブトキシオキサリル−アミノ）−２−ヒドロキシペンタン酸エチルエステル（化合物３６）
ＤＣＭ（８ｍＬ）中の塩化オキサリル（４０１μＬ、４．７ｍｍｏｌ）を、ｔ−ブチルアルコール（４５４μＬ、４．７ｍｍｏｌ）と合わせた。Ｅｔ３Ｎ（１９８μＬ、１．４ｍｍｏｌ）を滴下して加え、得られる溶液を５分間撹拌した。次いで、この溶液を、（２Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−５−（４−ブロモフェニル）２−ヒドロキシペンタン酸エチルエステル（３５）（１５０ｍｇ、４７４μｍｏｌ）とＥｔ３Ｎ（１９８μＬ、１．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液に滴下して加え、反応が完了するまで撹拌した。溶媒を蒸発させ、粗生成物を順相クロマトグラフィー（２０〜１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、化合物３６を生成した。
（実施例４：（２Ｒ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシ−４−（オキサリルアミノ）ペンタン酸エチルエステル（比較化合物Ｃ４））
（２Ｒ，４Ｒ）−５−（４−ブロモフェニル）−４−（ｔ−ブトキシオキサリル−アミノ）−２−ヒドロキシペンタン酸エチルエステル（３６）（４８．５ｍｇ、１０９μｍｏｌ）を、ｔ−ブチルアルコール（２ｍＬ）および水（０．３ｍＬ）中の５−クロロ−２−フルオロフェニルボロン酸（２２．８ｍｇ、１３１μｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（４５．２ｍｇ、３２７μｍｏｌ）と合わせた。ＳｉｌｉｃａＣａｔ（登録商標）ＤＰＰ−Ｐｄ（０．２８ｍｍｏｌ／ｇのローディング、３９ｍｇ、１１μｍｏｌ）を加え、混合物を８０℃で１５分間加熱し、この時点で、ＬＣ／ＭＳによって所望の生成物が示された。混合物を濾過し、濾液を濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製して、比較化合物Ｃ４（２０ｍｇ）を生成した。Ｃ２１Ｈ２１ＣｌＦＮＯ６についてのＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値 ４３８．１０、実測値 ４３８．０。
比較化合物Ｃ４は、Ｈｕｇｈｅｓらの米国特許第８，６９１，８６８号の実施例５−６に記載されている。
調製９： （２Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシペンタン酸エチルエステル（化合物４２）
（Ｓ）−２−（４−ブロモベンジル）−５−オキソピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（２８）（２５ｇ、７０．６ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（５００ｍＬ）溶液に、窒素中にて室温で、５−クロロ−２−フルオロフェニルボロン酸（２４．６ｇ、１４１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（４．１ｇ、３．５ｍｍｏｌ）、およびＫ２ＣＯ３（１７．８ｇ、１４１ｍｍｏｌ）の水（９０ｍＬ）溶液を加えた。混合物を６０℃に加熱し、終夜撹拌した。水（５００ｍＬ）を加え、溶媒を蒸発させた。混合物をＥｔＯＡｃ（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（３００ｍＬ）で洗浄し、濾過した。濾液を濃縮して粗生成物を生成し、これをクロマトグラフィーによって精製して、化合物３７（２２．７ｇ）を淡黄色の固体として生成した。ＬＣ−ＭＳ：８２９．２［２Ｍ＋Ｎａ＋］。
化合物３７（４．９ｇ、１２．１ｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）溶液に、窒素中にて０℃で、ＴＦＡ（４．５ｍＬ、６０．７ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。混合物を１．５時間室温に温めた。溶媒を蒸発させた後、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×１００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、粗化合物３８を生成した（別のロットと合わせて合計１６．９ｇ）。ＬＣ−ＭＳ：３０４［Ｍ＋Ｈ］。
ＮａＨ（２．４ｇ、６９５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液に、窒素中にて０℃で、化合物３８（８．５ｇ、２７８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を滴下して加えた。混合物を室温に温め、２時間撹拌した。０℃に冷却した後、塩化ピバロイル（５ｇ、４１．７ｍｍｏｌ）を３０分かけて滴下して加えた。混合物を室温に温め、９．５時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２５０ｍＬ）で反応をクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×４００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して粗生成物を生成し、これをクロマトグラフィーによって精製して、化合物３９（１８ｇ）を黄色の固体として生成した。ＬＣ−ＭＳ：３８８［Ｍ＋Ｈ＋］。
化合物３９（９ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液に、窒素中にて−７８℃で、ＮａＨＭＤＳ（２０．９ｍＬ、４１．８ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。−７８℃で１時間撹拌した後、（＋）−（８，８−ジクロロカンホリルスルホニル）オキサジリジン（１０．４ｇ、３４．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を滴下して加えた。−７８℃で１時間撹拌した後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（５０ｍＬ）で反応をクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×４００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、１Ｍ ＨＣｌ（４００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（４００ｍＬ）、および飽和ＮａＣｌ水溶液（４００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して粗生成物を生成し、これをクロマトグラフィーによって精製して、化合物４０（８．８ｇ）を白色の半固体として生成した。ＬＣ−ＭＳ：４２６．１［Ｍ＋Ｎａ＋］。
化合物４０（８．８ｇ、２１．８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１２ｍＬ）溶液を濃ＨＣｌ（２００ｍＬ）に加え、１００℃で加熱し、終夜撹拌した。次いで、混合物を濃縮して粗生成物を生成し、これをＥｔ２Ｏ（１００ｍＬ）での洗浄によって精製して、化合物４１を固体ＨＣｌ塩（７．５ｇ）として生成した。ＬＣ−ＭＳ：３３８［Ｍ＋Ｈ＋］。
化合物４１（７．５ｇ、２０．１ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ／ＨＣｌ（１００ｍＬ）溶液を、５０℃で終夜加熱した。混合物を濃縮し、粗生成物をＥｔ２Ｏ（２００ｍＬ）での洗浄によって精製して、化合物４２（６．５ｇ）を白色の固体ＨＣｌ塩として得た。ＬＣ−ＭＳ：３６６．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
（実施例５：（２Ｒ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−４−（エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシペンタン酸（比較化合物Ｃ５））
（２Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシペンタン酸エチルエステル（４２）（１１４ｍｇ、３１３μｍｏｌ）に、１．０Ｎ ＨＣｌ（６ｍＬ）を加え、混合物を９０℃で２４時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。双性イオン生成物を、ＤＣＭ（６ｍＬ）中のＥｔ３Ｎ（１５７μＬ、１．１ｍｍｏｌ）と合わせた後、０℃で、エチルオキサリルクロリド（３４．９μＬ、３１３μｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）溶液を加え、得られる混合物を室温で３０分間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物をＤＣＭ（３×３ｍＬ）で抽出し、濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣによって精製して、比較化合物Ｃ５（５ｍｇ）を生成した。Ｃ２１Ｈ２１ＣｌＦＮＯ６についてのＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値 ４３８．１０、実測値 ４３８．２。
比較化合物Ｃ５は、Ｈｕｇｈｅｓらの米国特許第８，６９１，８６８号の実施例５−１４に記載されている。
（実施例６：（２Ｒ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシ−４−（オキサリルアミノ）ペンタン酸（比較化合物Ｃ６））
（２Ｒ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−４−（エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシペンタン酸（Ｃ５）を、１ＭのＬｉＯＨ水溶液（２．５ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）と合わせた。混合物を室温で１時間撹拌し、この時点で、ＬＣＭＳによって反応の完了が示された。真空中で溶媒を除去して、比較化合物Ｃ６（２０．８ｍｇ）を生成した。Ｃ１９Ｈ１７ＣｌＦＮＯ６についてのＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値 ４１０．０７、実測値 ４１０．０。
比較化合物Ｃ６は、Ｈｕｇｈｅｓらの米国特許第８，６９１，８６８号の実施例５−５に記載されている。
（実施例７：（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタン酸カルシウム（１’）の結晶の安定性研究）
医薬品開発における１つの課題は、適度に融点の高い安定した結晶形態の薬物を発見することに関する。本発明の課題は、化合物１の遊離酸の結晶を得られないことであった。さらに、多くの結晶スクリーニングは失敗したが、例外として、（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−４−（エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸の２種のアルギニンおよびカルシウム結晶が得られた。しかし、アルギニン結晶（実施例１を参照されたい）は、周囲条件で潮解性であり、それ以上開発することは難しかった。一方、カルシウム結晶は、安定しており、２３９℃付近で融解した。これらの理由から、化合物１’の加速安定性研究を、以下で報告する温度および相対湿度（ＲＨ）％で行った。
これらのデータは、化合物１’が、試験した温度および相対湿度で、少なくとも３か月まで比較的安定したままであることを示している。
アッセイ
化合物１と比較化合物Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、およびＣ６は、以下に記載のアッセイにおいて評価を行った。次の表は、その構造における種々の位置で切断される１種または複数の化合物から形成されうる代謝産物を示すものである。
アッセイ１：ヒトおよびラットＮＥＰにおける阻害剤効力を定量化するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ
以下に記載するとおりのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを使用して、ヒトおよびラットネプリライシン（ＥＣ３．４．２４．１１、ＮＥＰ）における阻害活性を決定した。
ラット腎臓からのＮＥＰ活性の抽出
Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット成体の腎臓からラットＮＥＰを調製した。全腎臓を冷たいリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）の中で洗浄し、氷冷した溶解緩衝剤（１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１１４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）ｐＨ７．５；Ｂｏｒｄｉｅｒ（１９８１年）Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．２５６巻：１６０４〜１６０７頁）の中に、腎臓１グラムあたり５ｍＬの緩衝剤の比率で入れた。ポリトロン手持ち組織粉砕機を使用して氷上で試料をホモジナイズした。スイングバケットローターで、３℃で５分間、１０００×ｇでホモジネートを遠心分離した。ペレットを２０ｍＬの氷冷した溶解緩衝剤中に再懸濁させ、氷上で３０分間インキュベートした。次いで試料（１５〜２０ｍＬ）を、２５ｍＬの氷冷したクッション緩衝剤（６％ｗ／ｖスクロース、５０ｍＭ ｐＨ７．５トリス、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０６％、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１１４）の上に重ね、３〜５分間３７℃に加熱し、スイングバケットローターで、室温で３分間、１０００×ｇで遠心分離した。二つの上部の層を吸引して、膜画分を豊富に含有する粘性の油性の沈殿物を残した。グリセロールを濃度５０％まで加え、試料を−２０℃で保存した。標準としてウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を用いて、ＢＣＡ検出システムで、タンパク質濃度を定量した。
酵素阻害アッセイ
組換え型ヒトＮＥＰは、市販品を入手した（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネソタ州ミネアポリス、カタログ番号１１８２−ＺＮ）。蛍光発生ペプチド基質Ｍｃａ−Ｄ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｄａｐ−（Ｄｎｐ）−ＯＨ（Ｍｅｄｅｉｒｏｓら（１９９７）Ｂｒａｚ． Ｊ． Ｍｅｄ． Ｂｉｏｌ． Ｒｅｓ． ３０巻：１１５７〜６２頁；カリフォルニア州サンホゼ、Ａｎａｓｐｅｃ）を使用した。
アッセイは、３８４ウェル不透明白色プレートにおいて、アッセイ緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１００ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％のモノラウリン酸ソルビタンポリエチレングリコール（Ｔｗｅｅｎ−２０）、１０μＭのＺｎＳＯ４）中で蛍光発生ペプチド基質を１０μＭの濃度で使用して、３７℃で行った。それぞれの酵素は、３７℃で２０分後に１μＭの基質の定量的なタンパク質分解をもたらす濃度で使用した。
１０μＭ〜２０ｐＭの濃度範囲にわたり試験化合物を評価した。試験化合物を酵素に加え、３７℃で３０分間インキュベートしてから、基質の添加により反応を開始した。反応は、３７℃でのインキュベーションから２０分後に、氷酢酸を最終濃度３．６％（ｖ／ｖ）まで加えることによって停止した。
プレートは、励起波長および発光波長をそれぞれ３２０ｎｍおよび４０５ｎｍに設定した蛍光光度計で読み取った。以下の式
ν＝ν０／［１＋（Ｉ／Ｋ’）］
（式中、νは反応速度であり、ν０は無阻害の反応速度であり、Ｉは阻害剤の濃度であり、Ｋ’はみかけの阻害定数である）を使用して、データの非線形回帰により阻害定数を得た（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）。
これらのデータは、化合物１が、ラットおよびヒトＮＥＰにおいて、比較化合物Ｃ２と同じような効力を有するのに対し、比較化合物Ｃ３は、ラットおよびヒトＮＥＰ酵素における効力が、比較化合物Ｃ２に比べて非常に低いことを示している。同様に、比較化合物Ｃ５は、ラットおよびヒトＮＥＰにおいて、比較化合物Ｃ６と同じような効力を有するのに対し、比較化合物Ｃ４は、ラットおよびヒトＮＥＰ酵素における効力が、比較化合物Ｃ６に比べて低い。
化合物１、Ｃ２、Ｃ５、およびＣ６は、ラットおよびヒトＮＥＰ酵素において有意な活性を有し、ｐＫｉ≧９．０の活性閾値を満たして、上述のような治療用途として有用となる。
アッセイ２：ラット、イヌ、およびサルにおけるＰＯ薬物動態研究
ラット、イヌ、またはサルの各薬物動態研究を、試験化合物の製剤化から始めた。適切な質量の各試験化合物を、各化合物の最終濃度が２ｍＬ／ｋｇでの投薬に適当となるような体積のビヒクル（たとえば、水中５％の炭酸水素ナトリウム、５％のデキストロース）に加えた。経口投薬には均質な懸濁物が許容されるが、静脈内投薬溶液を投薬前に滅菌濾過（０．２μｍ）して、微粒子が投与されないことを確実にした。
ラットの研究では、予めカニューレが挿入された８週齢〜１０週齢の間の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（１経路あたり３匹）を、Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（インディアナ州インディアナポリス）から入手した。ラットに、１回の経口胃管栄養または１回の（外側尾静脈からの）静脈内いずれかの用量の投薬溶液を与えた。最終用量は、通常０．５〜３ｍｇ／ｋｇとした。用量後３分、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、および２４時間の時点で、頚静脈に植え込まれたカニューレから、逐次的な血液試料を採取した。試料採取は、手作業で、または自動採血器を使用して行った。試料は、フッ化ナトリウム、シュウ酸カリウム、およびパラオクソン（それぞれ、抗凝血剤およびエステラーゼ阻害剤）を含有するｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒチューブに集め、低温遠心分離によって血漿に加工した。
イヌの研究では、Ａｇｉｌｕｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（マサチューセッツ州ウースター）で飼育され、体重が７ｋｇ〜１２ｋｇの間である雄性ビーグル犬（１経路あたり３匹）に、１回の経口胃管栄養用量の投薬溶液を与えた。最終用量は、通常０．１〜２ｍｇ／ｋｇとした。用量後３分、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、および２４時間の時点で、直接静脈穿刺によって、逐次的な血液試料を採取した。試料はすべて、フッ化ナトリウム、シュウ酸カリウム、およびパラオクソンを含有するｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒチューブに手作業で集め、低温遠心分離によって血漿に加工した。
サルの研究では、Ｘｅｎｏｍｅｔｒｉｃｓ（カンザス州Ｓｔｉｌｗｅｌｌ）で飼育され、体重が４ｋｇ〜５ｋｇの間である雄性カニクイザル（１経路あたり３匹）に、１回の経口胃管栄養用量の投薬溶液を与えた。最終用量は、２ｍｇ／ｋｇとした。用量投与前、ならびに用量後５分、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、８時間、１２時間、および２４時間の時点で、橈側皮静脈または伏在静脈から、逐次的な血液試料を採取した。試料はすべて、シュウ酸カリウム、フッ化ナトリウム、およびパラオクソンを含有するチューブに集め、低温遠心分離によって血漿に加工した。
血漿試料を、適切な内部標準を含有する３容量のＭｅＣＮで抽出した。抽出物を、１％ギ酸を含有する３容量の水の中へ再構成し、ＨＰＬＣを連結したＭＳ／ＭＳを介して分析した。Ｐｈｏｅｎｉｘソフトウエア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を使用して血漿中濃度−時間データを分析することによって、薬物動態学的パラメータを計算した。
経口生物学的利用能（％Ｆ）は、経口用量後に全身循環に到達する用量の、全用量が全身循環に直接投与される静脈内用量に対しての百分率を表す。これは、経路間の用量レベルのあらゆる差について正規化された、経口用量後の濃度−時間曲線下面積の、静脈内用量後の濃度−時間曲線下面積に対する比に等しい。
これらのデータは、試験した３種すべての動物モデルにおいて、比較化合物Ｃ２（化合物１の活性代謝産物）は、経口生物学的利用能が低く、化合物１は、比較的高い経口生物学的利用能を有することを示している。
アッセイ３：ラットおよびイヌにおけるＩＶ／ＰＯ薬物動態研究
ラットまたはイヌの各薬物動態研究を、試験化合物の製剤化から始めた。適切な質量の各試験化合物を、各化合物の最終濃度が２ｍＬ／ｋｇでの投薬に適当となるような体積のビヒクル（たとえば、水中５％の炭酸水素ナトリウム、５％のデキストロース）に加えた。経口投薬には均質な懸濁物が許容されるが、静脈内投薬溶液を投薬前に滅菌濾過（０．２μｍ）して、微粒子が投与されないことを確実にした。
ラットの研究では、予めカニューレが挿入された８週齢〜１０週齢の間の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（１経路あたり３匹）を、Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（インディアナ州インディアナポリス）から入手した。ラットに、１回の経口胃管栄養または１回の（外側尾静脈からの）静脈内いずれかの用量の投薬溶液を与えた。最終用量は、通常０．５〜３ｍｇ／ｋｇとした。用量後３分、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、および２４時間の時点で、頚静脈に植え込まれたカニューレから、逐次的な血液試料を採取した。試料採取は、手作業で、または自動採血器を使用して行った。試料は、フッ化ナトリウム、シュウ酸カリウム、およびパラオクソンを含有するｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒチューブに集め、低温遠心分離によって血漿に加工した。
イヌの研究では、Ａｇｉｌｕｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（マサチューセッツ州ウースター）で飼育され、体重が７ｋｇ〜１２ｋｇの間である雄性ビーグル犬（１経路あたり３匹）に、１回の経口胃管栄養または１回の（留置カテーテルからの）静脈内いずれかの用量の投薬溶液を与えた。最終用量は、通常０．１〜２ｍｇ／ｋｇとした。用量後３分、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、および２４時間の時点で、直接静脈穿刺によって、逐次的な血液試料を採取した。試料はすべて、フッ化ナトリウム、シュウ酸カリウム、およびパラオクソンを含有するｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒチューブに手作業で集め、低温遠心分離によって血漿に加工した。
血漿試料は、適切な内部標準を含有する３体積のＭｅＣＮで抽出した。抽出物を、１％のギ酸を含有する３体積の水で再構成し、ＨＰＬＣ連結型ＭＳ／ＭＳによって分析した。Ｐｈｏｅｎｉｘソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐ．、ミズーリ州セントルイス）を使用して血漿濃度−時間データを分析して、薬物動態パラメーターを算出した。
これらのラットのデータは、本発明の化合物である化合物１において、その活性代謝産物の全身曝露が、化合物Ｃ３、Ｃ５、またはＣ４より有意に大きくなることを示している（それぞれ、＞１００％、２１％、１１％、および９％の代謝産物生物学的利用能値）。
化合物１および比較化合物Ｃ５の両者については、プロドラッグが検出されなかったため、プロドラッグ化合物がラットにおいてｉｎ ｖｉｖｏで活性代謝産物に完全に変換されたと仮定することができる。これらの化合物は両方とも、代謝産物曝露比率が比較化合物Ｃ４（１７）または比較化合物Ｃ３（１．２）より大きい。
こうしたプロドラッグは、エステル加水分解によって切断され、多くの場合、切断は、ラットにおいてイヌまたはヒトより急速に起こる。そのため、エステル加水分解のラットモデルは、ヒトにおける切断を必ずしも予測するものでない。したがって、本発明のもののようなプロドラッグは、イヌにおいても評価を行って、ヒトにおける切断速度を推定するための追加の予測データを取得すべきである。
これらのイヌのデータは、本発明の化合物である化合物１において、その活性代謝産物の経口生物学的利用能が、比較化合物Ｃ４と同様となり、化合物Ｃ３またはＣ５より生物学的利用能がはるかに高くなることを示している（それぞれ、４４％、４６％、０％、および２９％の値）。
これらのイヌのデータは、本発明のプロドラッグである化合物１において、その活性代謝産物分子への相対的曝露（すなわち、ＡＵＣｌａｓｔ）が、試験した他の化合物またはプロドラッグのいずれよりも有意に大きくなることを示している。このような急速かつ広域なプロドラッグ加水分解によって、本発明の化合物に意義深く意外な利点がもたらされる。イヌにおいて、化合物１は、比較化合物Ｃ５よりはるかに効率よく切断される結果、曝露比率の向上は１０倍を超える（１３に対して１７７）。さらに、化合物１は、比較化合物Ｃ３と比較すると、より一層効率よく切断される（０に対して１７７の曝露比率）。この差の度合いは、比較化合物Ｃ５の加水分解の程度をＣ４と比べた比較（１．２に対して１３）を踏まえると、予測し得なかったことであった。
アッセイ４：雄性ビーグル犬における化合物１の腎臓***
患者において適切な長期の薬物投薬および適正な定常状態薬物濃度を保証するための重要な要素が、薬物クリアランスである。一般に、薬物クリアランスが低下すると、薬物濃度はより高くなり、薬物の効果はより強まる。化合物１の腎臓クリアランスを理解するために、１回のＩＶ用量の後の尿中に回収された投与用量のパーセントを、雄性ビーグル犬において以下に記載するとおりに評価した。
体重が９．５８〜１０．４２ｋｇである雄性ビーグル犬（Ｎ＝３）に、１．０ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量の化合物１を与えた。化合物１は、Ｄ５Ｗ中５％ＮａＨＣＯ３中に製剤化した。イヌを終夜絶食させ、用量投与のおよそ３０分前にペンタガストリン（６０μｇ／ｍＬ、０．１ｍＬ／ｋｇ、ＩＭ）で前処置して、胃液分泌を刺激した。用量からおよそ４時間後に食物を戻した。尿試料は、回収期間の間、冷えたアイスパックで囲んだ状態で回収した。２４時間後、試料重量を記録し、試料を十分に混合し、生体分析の前にアリコートを取得し、凍結させた（−８０℃）。
化合物１のイヌ尿中濃度は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって求めた。（血漿中に希釈した）尿研究試料をボルテックス撹拌し、５０μＬを９６ウェルプレートに入れた。試料を、内部標準のクリシンと共にアセトニトリルで抽出した。抽出物を遠心分離し、上清を新たな９６ウェルプレートに移し、１部の試料を、０．２％のギ酸を含有する４部の水に希釈した。試料（１２μＬ）をＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８（５０×２．１ｍｍ、１．７μｍ）カラムに０．９ｍＬ／分の流量で注入した。移動相Ａは、９５：５：０．１（ｖ：ｖ：ｖ）の水：アセトニトリル：ギ酸からなるものとし、移動相Ｂは、５０：５０：０．１（ｖ：ｖ：ｖ）のメタノール：アセトニトリル：ギ酸からなるものとした。化合物１のアッセイ範囲は、０．００１〜５．００μｇ／ｍＬとした。
２４時間の回収期間にかけて***された尿の平均量および尿中に***された投与用量の概算％を以下の表に示す。
イヌにおける化合物１の腎臓***は、投与された用量のおよそ０．５％未満であった。このデータから、化合物１は、雄性ビーグル犬における腎臓***が低いことが示される。

Claims (29)

  1. 構造：
    の化合物または薬学的に許容されるその塩。
  2. （２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−４−（エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸。
  3. （２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−４−（２−エトキシ−２−オキソアセトアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルペンタン酸カルシウムの結晶形態。
  4. ７．１８±０．２、７．３８±０．２、および７．９７±０．２の２θ値に回折ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項３に記載の結晶形態。
  5. ３．９８±０．２、５．００±０．２、７．１８±０．２、７．３８±０．２、７．９７±０．２、８．８７±０．２、および１０．９１±０．２の２θ値に回折ピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項３に記載の結晶形態。
  6. ３．４７±０．２、９．９９±０．２、１５．７４±０．２、１５．９８±０．２、および１８．９８±０．２から選択される２θ値に１つまたは複数の追加の回折ピークを有することをさらに特徴とする、請求項５に記載の結晶形態。
  7. ピーク位置が、図１に示すパターンのピーク位置と実質的に一致する粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項３に記載の結晶形態。
  8. 毎分１０℃の加熱速度で記録した示差走査熱量測定トレースが、約２３７℃〜約２４１℃の間の温度において吸熱熱流の極大点を示すことを特徴とする、請求項３に記載の結晶形態。
  9. 図２に示すものと実質的に一致する示差走査熱量測定トレースを特徴とする、請求項３に記載の結晶形態。
  10. 請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容される１種または複数の担体とを含む薬学的組成物。
  11. 前記薬学的に許容される担体がステアリン酸マグネシウムである、請求項１０に記載の薬学的組成物。
  12. 請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物と、ＡＴ１受容体アンタゴニスト、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤、レニン阻害剤、利尿剤、またはこれらの組合せと、任意選択で、薬学的に許容される１種または複数の担体とを含む薬学的組成物。
  13. 請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物をカプセル、錠剤、液体、または懸濁物中に含む経口剤形。
  14. 被験体における前記化合物の放出が、即時放出、制御放出、または遅延放出である、請求項１３に記載の経口剤形。
  15. 前記カプセルの材料が、ゼラチン、多糖、キトサン、または合成ポリマーである、請求項１３に記載の経口剤形。
  16. 硬質カプセルが、ゼラチン、多糖、または合成ポリマーを含む、請求項１３に記載の経口剤形。
  17. 前記カプセルが、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む、請求項１３に記載の経口剤形。
  18. 請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物を緩衝液中に含む静脈内剤形。
  19. （ａ）エタノールと塩化オキサリルを混合して溶液を形成するステップと、（ｂ）（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸ベンジルエステルを前記溶液と反応させるステップと、（ｃ）得られる混合物を水素下でパラジウム炭素と合わせて、請求項１の化合物を生成するステップとを含む、請求項１に記載の化合物の調製プロセス。
  20. （ａ）エタノールをジクロロメタンに溶解させるステップと、
    （ｂ）塩化オキサリルを加えて溶液を形成し、室温で撹拌するステップと、
    （ｃ）溶液から溶媒を蒸発させるステップと、
    （ｄ）残存する溶液を、先にジクロロメタンに溶解させた（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸ベンジルエステルに加えるステップと、
    （ｅ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを加え、室温で撹拌するステップと、
    （ｆ）溶媒を蒸発させて固体を形成するステップと、
    （ｇ）固体を溶媒中で１０ｗｔ％パラジウム炭素と合わせて混合物を形成するステップと、
    （ｈ）混合物を撹拌しながら水素下に置くステップと、
    （ｉ）パラジウム炭素を濾別し、真空乾燥して、請求項１に記載の化合物を生成するステップと
    を含む、請求項１に記載の化合物の調製プロセス。
  21. ステップ（ｆ）および（ｉ）において得られる前記固体をクロマトグラフィーによって精製する、請求項２０に記載のプロセス。
  22. （ａ）（２Ｓ，４Ｒ）−５−（５’−クロロ−２’−フルオロビフェニル−４−イル）−４−（エトキシオキサリルアミノ）−２−ヒドロキシメチル−２−メチルペンタン酸をエタノールおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンに溶解させて溶液Ａを形成するステップと、
    （ｂ）トリフルオロメタンスルホン酸カルシウムをエタノールに溶解させて溶液Ｂを形成するステップと、
    （ｃ）溶液Ｂを溶液Ａに滴下して加えスラリーを形成するステップと、
    （ｄ）室温で撹拌するステップと、
    （ｅ）得られる固体を単離して結晶形態を生成するステップと
    を含む、請求項３に記載の結晶形態の調製プロセス。
  23. （ｆ）前記結晶形態を約５℃に冷却し、激しく撹拌しながら冷エタノール：水混合物を加えるステップと、
    （ｇ）濾過し、室温で乾燥させて結晶形態を生成するステップと
    をさらに含む、請求項２２に記載のプロセス。
  24. 治療において使用するための、請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物。
  25. 高血圧、肺高血圧、心不全、または腎疾患の処置において使用するための、請求項２４に記載の化合物。
  26. 高血圧、心不全、または腎疾患を処置するための医薬の製造のための、請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物の使用。
  27. 請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物の治療有効量を患者に投与することを含む、高血圧、心不全、または腎疾患を処置するための方法。
  28. 腎障害のある被験体を処置する方法であって、前記被験体に請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物の治療有効量を投与することを含む、方法。
  29. 前記腎障害のある被験体が、推定糸球体濾過率（ｅＧＦＲ）が６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２〜１５ｍＬ／分／１．７３ｍ２の間である慢性腎臓病を有する、請求項２８に記載の方法。
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