BR112017017317B1 - Composto, forma cristalina, composições farmacêuticas, forma de dosagem oral ou intravenosa, processos para a preparação do composto ou da forma cristalina e uso - Google Patents

Composto, forma cristalina, composições farmacêuticas, forma de dosagem oral ou intravenosa, processos para a preparação do composto ou da forma cristalina e uso Download PDF

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Erik FENSTER
Melissa Fleury
Anne-Marie Beausoleil
Venkat R. Thalladi
Jerry Nzerem
Miroslav Rapta
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Theravance Biopharma R&D Ip, Llc
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Abstract

COMPOSTO, FORMA CRISTALINA, COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS, FORMA DE DOSAGEM ORAL E INTRAVENOSA, PROCESSOS PARA A PREPARAÇÃO DO COMPOSTO E DA FORMA CRISTALINA E USO DE UM COMPOSTO. Num aspecto, a invenção refere-se a um composto da estrutura (1), ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, e uma forma cristalina deste composto, com atividade de inibição da neprilisina. Noutro aspecto, a invenção referese às composições farmacêuticas compreendendo este composto; métodos de uso deste composto; e processos para a preparação deste composto.

Description

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO CAMPO DE INVENÇÃO
[001] A presente invenção refere-se a um novo composto e a uma forma cristalina deste que são metabolizados in vivo para formar um composto possuindo utilidade como um inibidor de neprilisina. A invenção também se refere às composições farmacêuticas compreendendo compostos, processos para a preparação deste composto e métodos de uso de compostos para tratar doenças, tais como hipertensão, insuficiência cardíaca, hipertensão pulmonar e doença renal.
ESTADO DA ARTE
[002] A neprilisina (endopeptidase neutra, EC 3.4.24.11) (NEP) é uma membrana endotelial ligada à metalopeptidase Zn2+ encontrada em muitos órgãos e tecidos, incluindo o cérebro, rins, pulmões, trato gastrointestinal, coração e vasculatura periférica. A NEP degrada e inativa uma série de peptídeos endógenos, tais como encefalinas, bradicinina circulante, peptídeos de angiotensina e peptídeos natriuréticos, o último dos quais apresenta vários efeitos, por exemplo, vasodilatação e natriurese/diurese, bem como inibição de hipertrofia cardíaca e fibrose ventricular. Assim, a NEP desempenha um papel importante na homeostase da pressão arterial e na saúde cardiovascular.
[003] Os inibidores de NEP, como o tiorfano, candoxatril e candoxatrilato, foram estudados como potenciais terapêuticos. Também são conhecidos compostos que inibem tanto a NEP como a enzima de conversão da angiotensina-I (ACE), e incluem omapatrilato, gempatrilato e sampatrilato. Referido como inibidores da vasopeptidase, esta última classe de compostos é descrita em Robl et al. (1999) Exp. Opin. Ther. Patents 9(12): 1665-1677.
[004] Numerosos inibidores de NEP são descritos na publicação do Pedido de Patente U.S. No. 2013/0109639 para Hughes, et al. Um desses compostos é o ácido (2S, 4R)-5-(5'- cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metil-4- (oxalilamino)pentanóico, que tem a estrutura:
Figure img0001
[005] Este composto exibe uma potente atividade de inibição da NEP (pKi>9). Contudo, este composto também encontrou uma biodisponibilidade oral muito baixa em espécies pré-clínicas, tornando-o inadequado ou indesejável para administração oral.
[006] Um método para aumentar a biodisponibilidade oral de um composto é formar um pró-fármaco do composto. Quando administrado por via oral, um pró-fármaco deve ter uma absorção oral aceitável e ser clivado in vivo para gerar o composto ativo. Para os inibidores de NEP, pode ser preferível que qualquer tal pró-fármaco seja clivado rapidamente (por exemplo, dentro da primeira hora após administração oral) e completamente para que um bolus inicial do composto ativo esteja disponível para desencadear uma resposta cíclica de monofosfato de guanosina (cGMP). Também pode ser desejável se o próprio pró-fármaco tenha atividade de inibição de NEP de modo que o pró-fármaco possa contribuir para a atividade farmacológica antes de ser clivado. Além disso, qualquer pró-fármaco deve ser quimicamente estável quando armazenado por um período prolongado de tempo.
[007] Assim, existe uma necessidade de um pró- fármaco do ácido (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4- il)-2-hidroximetil-2-metil-4-(oxalilamino)pentanóico que tem uma absorção oral aceitável e que é rapidamente clivado in vivo para gerar o composto ativo. O pró-fármaco também pode ter algum nível de atividade inibidora de NEP. Esta invenção é direcionada a essa necessidade.
[008] Adicionalmente, para utilizar eficazmente um composto inibidor de NEP como um agente terapêutico, seria desejável ter uma forma de estado sólido que possa ser prontamente fabricada e que tenha estabilidade química e física aceitável. Por exemplo, seria altamente desejável ter uma forma física que seja termicamente estável em uma temperatura razoavelmente alta, assim, facilitando o processamento e o armazenamento do material. Os sólidos cristalinos são, geralmente, preferidos em relação às formas amorfas, para aumentar a pureza e a estabilidade do produto fabricado. No entanto, a formação de formas cristalinas de compostos orgânicos é altamente imprevisível. Não existem métodos confiáveis para prever qual, se esse for o caso, a forma de um composto orgânico será cristalina. Além disso, não existem métodos para prever qual, se esse for o caso, a forma cristalina terá as propriedades físicas desejadas para uso como agentes farmacêuticos. Consequentemente, existe uma necessidade para uma forma estável e cristalina que tenha um ponto de fusão razoavelmente alto.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[009] A presente invenção proporciona um novo Composto (1) que é convertido in vivo para formar um composto que possui atividade de inibição de enzima de neprilisina (NEP). Consequentemente, espera-se que este composto seja útil e vantajoso como um agente terapêutico para tratar condições, tais como hipertensão e insuficiência cardíaca.
[0010] Um aspecto da invenção refere-se ao ácido (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4- (etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanóico (1):
Figure img0002
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Outro aspecto da invenção refere-se a uma forma cristalina do Composto 1. Numa modalidade, a forma cristalina (1') é um sal hemi- cálcico do Composto 1.
[0011] Outro aspecto da invenção refere-se às composições farmacêuticas compreendendo um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis e o Composto 1 ou uma forma cristalina deste. Tais composições podem opcionalmente conter outros agentes terapêuticos, incluindo, mas não limitado a, um antagonista do receptor AT1, um inibidor da enzima conversora da angiotensina, um inibidor da fosfodiesterase (PDE), um inibidor da renina, um diurético ou suas combinações.
[0012] O composto 1 possui atividade de inibição da enzima NEP e, por conseguinte, espera-se que seja útil como um agente terapêutico para o tratamento de pacientes que sofrem de uma doença ou distúrbio que é tratado por inibição da enzima NEP ou pelo aumento dos níveis dos seus substratos peptídicos. Assim, um aspecto da invenção refere-se a um método de tratamento de pacientes que sofrem de uma doença ou distúrbio que é tratado por inibição da enzima NEP, compreendendo a administração a um paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz do Composto 1.
[0013] Outro aspecto da invenção refere-se a um método de tratamento de hipertensão, insuficiência cardíaca ou doença renal, compreendendo administrar a um indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz do Composto 1. Ainda outro aspecto da invenção refere-se a um método para inibir uma enzima NEP em um indivíduo compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade inibidora de enzima NEP do Composto 1.
[0014] Uma vez que o composto 1 possui atividade de inibição de NEP, também é útil como ferramenta de pesquisa. Por conseguinte, um aspecto da invenção refere-se a um método de utilização do Composto 1 como ferramenta de pesquisa, o método compreendendo conduzir um ensaio biológico utilizando o Composto 1. O Composto 1 também pode ser utilizado para avaliar novos compostos químicos. Assim, outro aspecto da invenção refere-se a um método de avaliar um composto de teste num ensaio biológico compreendendo: (a) conduzir um ensaio biológico com um composto de teste para proporcionar um primeiro valor de ensaio; (b) conduzir o ensaio biológico com o composto da invenção para proporcionar um segundo valor de ensaio; em que a etapa (a) é conduzida antes, depois ou simultaneamente com a etapa (b); e (c) comparar o primeiro valor de ensaio da etapa (a) com o segundo valor de ensaio da etapa (b). Exemplos de ensaios biológicos incluem um ensaio de inibição da enzima NEP. Ainda outro aspecto da invenção refere-se a um método de estudo de um sistema biológico ou amostra compreendendo uma enzima NEP, o método compreendendo: (a) contatar com o sistema biológico ou amostra com o composto da invenção; e (b) determinar os efeitos causados pelo composto no sistema biológico ou na amostra.
[0015] Ainda outro aspecto da invenção refere-se aos processos úteis para a preparação do Composto 1 ou uma forma cristalina deste.
[0016] Ainda outro aspecto da invenção refere-se à utilização do Composto 1 ou uma forma cristalina deste para a fabricação de um medicamento, especialmente, para a fabricação de um medicamento útil para o tratamento de hipertensão, insuficiência cardíaca ou doença renal. Outro aspecto da invenção refere-se à utilização do Composto 1 ou da forma cristalina deste para inibir uma enzima NEP num mamífero. Outros aspectos e modalidades da invenção são aqui descritos.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0017] Vários aspectos da presente invenção são ilustrados por referência aos desenhos anexos.
[0018] A FIG. 1 mostra um padrão de difração de raios X em pó (PXRD) da forma cristalina de (2S, 4R)-5-(5'-cloro- 2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2- (hidroximetil)-2-metilpentanoato de cálcio (1’).
[0019] A FIG. 2 mostra um termograma de calorimetria de varredura diferencial (DSC) da forma cristalina de (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi- 2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de cálcio (1').
[0020] A FIG. 3 mostra um gráfico de análise gravimétrica térmica (TGA) para a forma cristalina de (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il)4-(2-etoxi-2- oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de cálcio (1').
[0021] A FIG. 4 mostra uma isoterma de absorção de umidade dinâmica (DMS) da forma cristalina de (2S, 4R)-5- (5'-cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2- oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de cálcio (1').
[0022] A FIG. 5 é uma imagem microscópica de luz polarizada (PLM) da forma cristalina de (2S, 4R)-5-(5'- cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2- oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de cálcio (1').
[0023] A FIG. 6 mostra um padrão de difração de raios X em pó (PXRD) da forma cristalina de (2S, 4R)-5-(5'-cloro- 2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2- (hidroximetil)-2-metilpentanoato de arginina (1’’).
[0024] A FIG. 7 mostra um termograma de calorimetria de varredura diferencial (DSC) da forma cristalina de (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi- 2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil) -2-metilpentanoato (1'') de arginina.
[0025] A FIG. 8 mostra um gráfico de análise gravimétrica térmica (TGA) para a forma cristalina de (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi- 2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de arginina (1").
[0026] A FIG. 9 é uma imagem microscópica de luz polarizada (PLM) da forma cristalina de (2S, 4R)-5-(5'- cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2- oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de arginina (1") .
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0027] Num aspecto, a invenção refere-se ao ácido (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4- (etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanóico (1), ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
[0028] O composto 1 da invenção contém dois centros quirais e, portanto, este composto pode ser preparado e utilizado em várias formas estereoisoméricas. Especificamente, os átomos de carbono têm uma configuração particular (R, R), (S, S), (S, R) ou (R, S) ou são enriquecidos em uma forma estereoisomérica com tal configuração. O composto 1, como mostrado e nomeado, está na configuração (S, R). Será entendido pelos peritos na técnica que pequenas quantidades de outros estereoisômeros podem estar presentes nas composições da invenção, a menos que seja indicado de outro modo, desde que a utilidade da composição como uma totalidade não seja eliminada pela presença de tais outros isômeros. Os estereoisômeros individuais podem ser obtidos por vários métodos que são bem conhecidos na técnica, incluindo cromatografia quiral utilizando uma fase ou suporte estacionário quiral adequado, ou por conversão química em diastereoisômeros, separando os diastereoisômeros por meios convencionais, tais como cromatografia ou recristalização, depois regenerando o estereoisômero original.
[0029] O composto 1 é um pró-fármaco em éster etílico, em que a unidade etil serve para melhorar a lipofilicidade do composto e, por conseguinte, melhorar a permeabilidade da membrana passiva do composto ativo, mascarando o ácido carboxílico. Uma vez no corpo, acredita- se que esta ligação éster é hidrolisada por esterases que são encontradas no sangue, no fígado e em outros órgãos e tecidos.
[0030] Verificou-se que o Composto 1 da invenção inibe a enzima Neprilisina (NEP). Além disso, o composto possui maior potência para inibição de NEP, uma vez que é metabolizado in vivo. Assim, quando se discute a atividade do composto da invenção, entende-se que o composto pode exibir um certo nível de atividade num ensaio e um nível de atividade melhorado uma vez metabolizado na sua forma ativa. Uma medida da capacidade de um composto para inibir a atividade NEP é a constante de inibição (pKi). O valor de pKi é o logaritmo negativo para a base 10 da constante de dissociação (Ki), que normalmente é relatado em unidades molares. O composto 1, quando metabolizado, forma o ácido (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil- 2-metil-4-(oxalilamino)pentanóico (o "agente ativo ou metabolito ativo"), que é relatado na Publicação do Pedido de Patente US No. 2013/0109639 como tendo um pKi na NEP >9. Outras propriedades e utilidades do Composto 1 podem ser demonstradas utilizando ensaios in vitro e in vivo que são bem conhecidos dos peritos na técnica, incluindo, nomeadamente, os descritos na Publicação do Pedido de Patente U.S. No. 2013/0109639.
[0031] O Composto 1, bem como os compostos utilizados na sua síntese, também podem incluir compostos marcados isotopicamente, isto é, onde um ou mais átomos foram enriquecidos com átomos com uma massa atômica diferente da massa atômica predominantemente encontrada na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos de fórmula I, por exemplo, incluem, mas não estão limitados a, 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 35S, 36Cl e 18F. De particular interesse é o Composto 1 enriquecido em tritio ou carbono- 14 que podem ser utilizados, por exemplo, em estudos de distribuição de tecidos; Composto 1 enriquecido em deutério especialmente em um local de metabolismo resultante, por exemplo, num composto tendo maior estabilidade metabólica; e o composto 1 enriquecido em um isótopo emissor de positron, como 11C, 18F, 15O e 13N, que pode ser usado, por exemplo, em estudos de topografia de emissão de positron (PET).
[0032] As estruturas químicas são aqui mencionadas de acordo com as convenções IUPAC, tal como implementadas no software ChemDraw (Perkin Elmer, Inc., Cambridge, MA).
Definições
[0033] Ao descrever o composto, composições, métodos e processos da invenção, os seguintes termos têm os seguintes significados, salvo indicação em contrário. Além disso, tal como aqui utilizado, as formas singulares "um", "uma", "o" e "a" incluem as formas plurais correspondentes, a menos que o contexto de uso dite claramente o contrário. Os termos "compreendendo", "incluindo" e "tendo" pretendem ser inclusivos e significam que pode haver elementos adicionais que não sejam os elementos listados. Todos os números que expressam quantidades de ingredientes, propriedades tais como peso molecular, condições de reação, e assim por diante, aqui utilizados, devem ser entendidos como sendo modificados em todos os casos pelo termo "cerca de", a menos que seja indicado de outra forma. Consequentemente, os números aqui apresentados são aproximações que podem variar dependendo das propriedades desejadas procuradas para serem obtidas pela presente invenção. Pelo menos, e não como uma tentativa de limitar a aplicação da doutrina de equivalentes ao escopo das reivindicações, cada número deve, pelo menos, ser interpretado à luz dos dígitos significativos relatados e pela aplicação das técnicas de arredondamento comuns.
[0034] O termo "cerca de" ou "aproximadamente" quando usado no contexto do comportamento térmico do Composto 1 é definido como ± 1-3°C. O termo "aproximado" quando utilizado no contexto de % de dose do Composto 1 excretado na urina é definido por uma margem de erro que normalmente é cerca de duas vezes o desvio padrão ou metade da largura de um intervalo de confiança de 95%. O termo "aproximado" em outras áreas da divulgação pode ser usado para indicar o desvio padrão ou a quantidade de variação ou dispersão de um conjunto de valores de dados.
[0035] O termo "liberação controlada", tal como aqui utilizado, é sinônimo de liberação contínua e liberação prolongada e diz respeito à quantidade de medicamento administrado durante um longo período de tempo em um indivíduo. Geralmente, comprimidos e cápsulas de liberação controlada liberam o composto ativo no indivíduo em períodos de tempo de cerca de 8, 12, 16 e 24 horas. Por outro lado, o termo "liberação imediata" refere-se ao composto ativo que está sendo liberado num indivíduo dentro de um pequeno período de tempo, tipicamente inferior a cerca de 30 minutos. O termo "liberação retardada" é direcionado aos comprimidos e cápsulas que liberam a dose farmacêutica após um período de tempo definido. Essas formas de dosagem, geralmente, são revestidas entéricas para evitar a liberação no estômago, mas permitem a liberação no trato intestinal.
[0036] Tal como aqui utilizado, a frase "da fórmula" ou "tendo a fórmula" ou "tendo a estrutura" não se destina a ser limitativa e é usada da mesma maneira que o termo "compreendendo" é comumente usado. Por exemplo, se uma estrutura é representada, entende-se que todas as formas de estereoisômeros e tautômeros são abrangidos, a menos que seja indicado o contrário.
[0037] Em geral, ao descrever os sólidos farmacêuticos, o termo "(2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2- (hidroximetil)-2-metilpentanoato de cálcio" implica uma quantidade estequiométrica de 2:1 aproximada do ânion carboxilato do Composto 1 para contraíon de cálcio. O termo sal hemi-cálcico do Composto 1 é equivalente ao sal de cálcio do Composto 1. Numa modalidade da invenção, a forma cristalina do Composto 1' é um sólido não hidroscópico.
[0038] O termo "ponto de fusão", tal como aqui utilizado, significa a temperatura à qual o fluxo de calor endotérmico máximo é observado por calorimetria de varredura diferencial, para a transição térmica que corresponde à mudança de fase de sólido para líquido.
[0039] O termo "farmaceuticamente aceitável" refere- se a um material que não é biologicamente ou, de outra forma inaceitável quando utilizado na invenção. Por exemplo, o termo "veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a um material que pode ser incorporado numa composição e administrado a um paciente sem causar efeitos biológicos inaceitáveis ou interagindo de uma maneira inaceitável com outros componentes da composição. Tais materiais farmaceuticamente aceitáveis, geralmente, cumprem os padrões exigidos de testes toxicológicos e de fabricação e incluem os materiais identificados como ingredientes inativos adequados pela administração de alimentos e medicamentos dos EUA — US Food and Drug administration.
[0040] O termo "sal farmaceuticamente aceitável" significa um sal preparado a partir de uma base ou um ácido que é aceitável para administração a um paciente, tal como um mamífero (por exemplo, sais tendo segurança aceitável para mamífero para um determinado regime de dosagem). No entanto, entende-se que os sais cobertos pela invenção não são necessários para serem sais farmaceuticamente aceitáveis, tais como sais de compostos intermediários que não se destinam à administração a um paciente. Os sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser derivados de bases inorgânicas ou orgânicas farmaceuticamente aceitáveis e de ácidos inorgânicos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis. Além disso, quando um composto contém uma porção básica, tal como uma amina, piridina ou imidazol, e uma porção ácida tal como um ácido carboxílico ou tetrazol, podem ser formados e são incluídos dentro do termo "sal" tal como aqui utilizado. Os sais derivados de bases inorgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de amônio, de cálcio, de cobre, férrico, ferroso, de lítio, de magnésio, mangânico, manganoso, de potássio, de sódio e de zinco e similares. Os sais derivados de bases orgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, incluindo aminas substituídas, aminas cíclicas, aminas de ocorrência natural e semelhantes, tais como arginina, betaína, cafeína, colina, N,N'-dibenziletilenodiamina, dietilamina, 2- dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenodiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperadina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina e semelhantes. Os sais derivados de ácidos inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de ácidos bórico, carbônico, hidrohálico (bromídrico, clorídrico, fluorídrico ou iodídrico), nítrico, fosfórico, sulfâmico e sulfúrico. Os sais derivados de ácidos orgânicos farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de ácidos hidroxil alifáticos (por exemplo, ácidos cítrico, glucônico, glicólico, láctico, lactobiônico, málico e tartárico), ácidos monocarboxílicos alifáticos (por exemplo, ácidos acético, butírico, fórmico, propiônico e trifluoroacético) aminoácidos (por exemplo, ácidos aspártico e glutâmico), ácidos carboxílicos aromáticos (por exemplo, ácidos benzóico, p-clorobenzóico, difenilacético, gentísico, hipúrico e trifenilacético), ácidos hidroxílicos aromáticos (por exemplo, ácidos o-hidroxibenzóico, p-hidroxibenzóico, 1-hidroxinaftaleno-2-carboxílico e 3-hidroxinaftaleno-2- carboxílico), ácidoa ascórbicos, dicarboxílicos (por exemplo, ácidos fumárico, maleico, oxálico e succínico), ácidos glucorônicos, mandélicos, múcico, nicotínicos, oróticos, pamóico, pantotênico e sulfônico (por exemplo, ácidos benzenossulfônico, canfossulfônico, edisílico, etanossulfônico, isetiônico, metanossulfônico, naftalenossulfônico, naftaleno-1,5-dissulfônico, naftaleno- 2,6-dissulfônico e p-toluenossulfônicos), ácido xinafóico e semelhantes.
[0041] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" significa uma quantidade suficiente para efetuar o tratamento quando administrado a um paciente que dele necessite, isto é, a quantidade de fármaco necessária para obter o efeito terapêutico desejado. Por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz para tratar a hipertensão é uma quantidade de composto necessária para, por exemplo, reduzir, suprimir, eliminar ou prevenir os sintomas da hipertensão ou tratar a causa subjacente da hipertensão. Numa modalidade, uma quantidade terapeuticamente eficaz é a quantidade de fármaco necessária para reduzir a pressão sanguínea ou a quantidade de fármaco necessária para manter a pressão sanguínea normal. Por outro lado, o termo "quantidade efetiva" significa uma quantidade suficiente para obter um resultado desejado, que pode não ser necessariamente um resultado terapêutico. Por exemplo, ao estudar um sistema compreendendo uma enzima NEP, uma "quantidade efetiva" pode ser a quantidade necessária para inibir a enzima.
[0042] O termo "tratar" ou "tratamento" tal como aqui utilizado significa o tratamento ou tratar uma doença ou condição médica (tal como hipertensão) num paciente, tal como um mamífero (particularmente, um humano) que inclui um ou mais dos seguintes: (a) prevenir a ocorrência da doença ou condição médica, ou seja, prevenir a reincidência da doença ou condição médica ou tratamento profilático de um paciente que esteja pré-disposto à doença ou condição médica; (b) melhorar a doença ou condição médica, isto é, eliminar ou causar a regressão da doença ou condição médica num paciente; (c) supremir a doença ou condição médica, isto é, retardar ou parar o desenvolvimento da doença ou condição médica em um paciente; ou (d) aliviar os sintomas da doença ou condição médica em um paciente. Por exemplo, o termo "tratar a hipertensão" incluiria a prevenção da hipertensão, a redução da hipertensão, a supressão da hipertensão e o alívio dos sintomas da hipertensão (por exemplo, baixar a pressão arterial). O termo "indivíduo" ou "paciente" destina-se a incluir aqueles mamíferos, como seres humanos, que necessitam de tratamento ou prevenção de doenças ou que estão atualmente sendo tratados para prevenção de doenças ou tratamento de uma doença específica ou condição médica, bem como como indivíduos de teste em que o composto cristalino está sendo avaliado ou utilizado em um ensaio, por exemplo, um modelo animal.
[0043] Todos os outros termos aqui utilizados pretendem ter seu significado comum, conforme entendido pelos peritos na técnica a que pertencem.
PROCEDIMENTOS SINTÉTICOS GERAIS
[0044] O Composto 1 e a sua forma de sal de cálcio cristalino podem ser sintetizados a partir de materiais de partida prontamente disponíveis como descrito abaixo e nos Exemplos. Será apreciado que, quando são dadas condições de processo típicas ou preferidas (isto é, temperaturas de reação, tempos, razões molares de reagentes, solventes, pressões, etc.), outras condições do processo também podem ser utilizadas, a menos que seja indicado de outra forma. Será apreciado que, embora sejam dadas condições de processo específicas (isto é, temperaturas de cristalização, tempos, proporções molares de reagentes, solventes, pressões, etc.), outras condições do processo também podem ser utilizadas, a menos que seja indicado o contrário. Em alguns casos, as reações ou cristalizações foram conduzidas à temperatura ambiente e não foi realizada nenhuma medida de temperatura real. Entende-se que a temperatura ambiente pode significar uma temperatura dentro da faixa comumente associada à temperatura ambiente em um ambiente de laboratório, e estará tipicamente na faixa de cerca de 15°C a cerca de 30°C, tal como cerca de 20°C a cerca de 25°C. Em outros casos, as reações ou cristalizações foram conduzidas à temperatura ambiente e a temperatura foi, realmente, medida e registrada.
[0045] Todas as razões molares descritas nos métodos da invenção podem ser facilmente determinadas por vários métodos disponíveis para os peritos na técnica. Por exemplo, tais razões molares podem ser prontamente determinadas por 1H RMN. Alternativamente, a análise elementar e os métodos de HPLC podem ser usados para determinar a razão molar.
[0046] Numa modalidade, a invenção refere-se ao ácido (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4- (etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanóico (1), ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
[0047] Noutra modalidade, o Composto 1 pode ser preparado misturando etanol e cloreto de oxalil para formar uma solução, fazendo reagir éster benzílico de ácido (2S, 4R)-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2- hidroximetil-2-metilpentanóico com a solução, e combinando a mistura resultante com paládio em carbono sob hidrogênio.
[0048] Ainda noutra modalidade, o Composto 1 pode ser preparado por (a) dissolução de etanol em diclorometano; (b) adição de cloreto de oxalil para formar uma solução e agitação à temperatura ambiente; (c) solvente de evaporação da solução; (d) adicão da solução restante ao éster benzílico do ácido (2S, 4R)-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4- il)-2-hidroximetil-2-metilpentanóico que é primeiro dissolvido em diclorometano; (e) adição de N, N- diisopropiletilamina e agitação em uma temperatura ambiente; (f) evaporação de solvente para formar um sólido; (g) combinação de sólido com paládio a 10% em peso em carbono no solvente para formar uma mistura; (h) colocação da mistura sob hidrogênio com agitação; e (i) filtração de paládio em carbono e secagem a vácuo para formar o Composto 1 sólido. Os sólidos resultantes nas etapas (f) e (i) também podem ser purificados por cromatografia.
[0049] A preparação do sal de hemi-cálcio cristalino do Composto 1 é, geralmente, conduzida num diluente inerte apropriado, exemplos dos quais incluem, mas não estão limitados a, acetona, acetonitrila, acetato de etil, metiletilcetona, metanol, etanol, isopropanol, isobutanol, diclorometano, éter metil t-butílico, éter metil ciclopentílico, hexanos e semelhantes e suas misturas, contendo, opcionalmente, água. As misturas de diluentes inertes (também conhecidos como sistemas de solventes) incluem acetona com água, acetonitrila com água, etanol e acetato de etil, acetato de etil e hexanos, e álcoois inferiores (C1-6alquil-OH) com água, por exemplo, metanol e água e isopropanol e água. Sistemas de solventes, particularmente, adequados incluem etanol, etanol:água e acetato de etil:etanol contendo propionato de cálcio ou outros sais de cálcio. Após a conclusão da cristalização, o composto cristalino pode ser isolado da mistura reacional por qualquer meio convencional, tal como precipitação, filtração, concentração, centrifugação, seco in vácuo e semelhantes.
[0050] Numa modalidade, a invenção refere-se a uma forma cristalina de ácido (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'- fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2- metilpentanóico. Noutra modalidade, a forma cristalina é (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2- etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de cálcio (1’).
[0051] Noutra modalidade, a forma cristalina 1' pode ser preparada por (a) dissolver ácido (2S, 4R)-5-(5'-cloro- 2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroximetil- 2-metilpentanóico em etanol e N,N-di-isopropiletilamina para formar a solução A; (b) dissolver sulfonato de trifluorometano de cálcio em etanol para formar a solução B; (c) adicionar gota a gota a solução B à solução A para formar uma pasta; (d) agitar em temperatura ambiente; e (e) isolar os sólidos resultantes para se obter o Composto 1'. Outra modalidade inclui uma segunda etapa de cristalização. Aqui, o segundo processo de recristalização compreende ainda (f) resfriar o Composto 1' para cerca de 5°C e adicionar uma mistura de etanol a frio sob agitação vigorosa; e (g) filtrar e secar em temperatura ambiente para se obter o Composto 1'.
Propriedades Cristalinas
[0052] Como é bem conhecido no campo da análise de difração de raios X em pó (PXRD), as alturas de pico relativas dos padrões PXRD dependem de uma série de fatores relacionados à preparação da amostra e à geometria do instrumento, enquanto as posições de pico são relativamente insensíveis aos detalhes experimentais. PXRD, calorimetria de varredura diferencial (DSC), análises termogravimétricas (TGA) e avaliação de sorção de umidade dinâmica (DMS) (também conhecida como análise de sorção-dessorção de umidade) foram realizadas, como aqui descritas.
[0053] Num aspecto, a invenção refere-se ao ácido (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4- (etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanóico na forma cristalina. Noutro aspecto, a forma cristalina é (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi- 2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de cálcio (1’). Esta forma cristalina 1' é caracterizada por um padrão PXRD, em que as posições de pico são substancialmente de acordo com as mostradas na FIG. 1. Os picos com intensidades relativas superiores a 0,1% na área estão listados na tabela abaixo. Este padrão mostra picos acentuados de difração na faixa 3-25° em 2?.
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[0054] Assim, numa modalidade, a forma cristalina 1 é caracterizada por um padrão PXRD compreendendo picos de difração em valores de 2θ de 7,18±0,2, 7,38±0,2 e 7,97±0,2.
[0055] Noutra modalidade, a forma cristalina 1 é caracterizada por um padrão PXRD compreendendo picos de difração em valores de 2θ de 3,98±0,2, 5,00±0,2, 7,18±0,2,7,38±0,2, 7,97±0,2, 8,87±0,2 e 10,91±0,2.
[0056] Noutra modalidade, a forma cristalina 1' é ainda caracterizada por ter um ou mais picos de difração adicionais a 2? valores selecionados de 3,47 ± 0,2, 9,99 ± 0,2, 15,74 ± 0,2, 15,98 ± 0,2 e 18,98 ± 0,2; e ainda noutra modalidade, a forma cristalina 1' é ainda caracterizada por ter três ou mais desses picos de difração adicionais.
[0057] Numa modalidade, a forma cristalina 1' é caracterizada pelo termograma DSC substancialmente de acordo com o mostrado na FIG. 2. A forma cristalina 1' é caracterizada por um traçado DSC registrado em uma taxa de aquecimento de 10°C por minuto, que mostra um máximo no fluxo de calor endotérmico em uma temperatura entre cerca de 237°C e cerca de 241°C. O termograma DSC ilustra uma endotérmica de fusão com um pico em aproximadamente 239°C, início em 233°C e com uma entalpia de ~67 J/g. Um segundo endotérmico incorpora a decomposição e outros eventos térmicos desconhecidos.
[0058] Numa modalidade, a forma cristalina 1' é caracterizada pelo gráfico TGA na FIG. 3. O gráfico TGA mostra o início da decomposição em uma temperatura de cerca de 225°C. O composto cristalino se decompõe após a fusão, visto por perda de peso significativa após ~250°C, o que também corresponde a uma segunda endotermia no traço DSC.
[0059] Numa modalidade, a forma cristalina 1' é caracterizada pela isoterma DMS na FIG. 4. Esta forma é um sólido não higroscópico. O ganho de umidade total observado é inferior a 1% em peso quando exposto a uma umidade relativa entre 5% e 90%. Não é encontrada histerese significativa entre ciclos consecutivos de adsorção-dessorção. O sólido obtido após os ciclos de sorção-dessorção apresentou o mesmo padrão PXRD que o material de partida, indicando nenhuma alteração na forma após essa experiência.
[0060] A forma cristalina 1' pode ser caracterizada pela imagem PLM na FIG. 5, que mostra esta forma como sendo cristais birrefringentes finos.
[0061] Cristais de (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2- (hidroximetil)-2-metilpentanoato de L-arginina (1’’) foram também preparados. No entanto, a exposição destes cristais às condições ambientais levou a uma deliquescência lenta. A forma cristalina 1'' é caracterizada por um PXRD e um traço DSC nas FIGs. 6 e 7, respectivamente. O traço DSC foi registrado a uma taxa de aquecimento de 10°C por minuto e mostra um máximo no fluxo de calor endotérmico em uma temperatura entre cerca de 113°C e cerca de 117°C. O termograma DSC ilustra uma endotérmica de fusão com um pico a aproximadamente 116,9°C, início em 106,8°C e com uma entalpia de ~70,3 J/g. A forma cristalina 1'' também é caracterizada pelo gráfico TGA na FIG. 8, onde ~6,5% de perda de peso foi observada até 140°C e uma perda contínua de massa foi observada após 140°C. A forma cristalina 1'' pode ser caracterizada pela imagem PLM na FIG. 9, que mostra esta forma como cristais birrefringentes finos.
Utilidade
[0062] A extrapolação in vitro para in vivo do comportamento de fármaco em um indivíduo continua a melhorar (ver, por exemplo, Chiba et al., AAPS J., 2009 June; 11(2): 262-276). Na presente invenção, avaliou-se a atividade de inibidor de neprilisina humana in vitro (Ensaio 1) de modo a determinar a atividade inibidora de neprilisina do Composto 1. Foi encontrado um limite de pKi >9,0 para este composto. No entanto, as experiências adicionais in vivo foram realizadas adicionalmente para prever com mais precisão o comportamento do Composto 1 em um indivíduo.
[0063] Um parâmetro crítico na avaliação da adequação de um pró-fármaco é a determinação da rapidez com que o pró-fármaco é convertido no agente ativo ou no metabolito ativo. Na presente invenção, o Composto 1, sendo um pró-fármaco em éster, é convertido no agente ativo ou metabolito ativo, Composto Comparativo C2, por uma reação enzimática, por exemplo, hidrólise de esterase, que pode ser altamente dependente das espécies. Por esse motivo, é preferível avaliar taxas de conversão em múltiplas espécies quando extrapolando para seres humanos. Além disso, existem várias propriedades úteis para avaliar se uma quantidade suficiente do medicamento será administrada ao plasma para obter o benefício terapêutico necessário, por exemplo, alta biodisponibilidade oral e baixa depuração renal para aqueles indivíduos com função renal comprometida.
[0064] Para a presente invenção, foram realizados estudos farmacocinéticos orais e intravenosos em espécies de ratos, cães e macacos para determinar a biodisponibilidade oral do Composto 1 em comparação com o Composto Comparativo C2 (Ensaio 2). Além disso, estudos farmacocinéticos orais e intravenosos foram conduzidos em espécies de ratos e cães para comparar o Composto 1 com outros pró-fármacos ou compostos de ésteres quimicamente similares (Ensaio 3).
[0065] O composto 1 inibe a enzima NEP e, portanto, espera-se que seja útil para o tratamento e/ou prevenção de condições médicas responsivas à inibição de NEP. Assim, espera-se que os pacientes que sofrem de uma doença ou distúrbio que é tratado inibindo a enzima NEP ou aumentando os níveis de seus substratos peptídicos, podem ser tratados pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do Composto 1. Por exemplo, inibindo NEP, espera-se que o Composto 1 aumente os efeitos biológicos de peptídeos endógenos que são metabolizados pela NEP, tais como os peptídeos natriuréticos, bombesina, bradicininas, calcitonina, endotelinas, encefalinas, neurotensina, substância P e peptídeo intestinal vasoativo. Assim, espera- se que este composto tenha outras ações fisiológicas, por exemplo, nos sistemas renal, nervoso central, reprodutivo e gastrointestinal.
[0066] Os fármacos são removidos de um corpo de indivíduo por vários processos de eliminação que são categorizados, geralmente, como excreção e biotransformação. A excreção refere-se à remoção do fármaco não volátil intacto, principalmente, por via renal (rim) para a bexiga para urina, enquanto outras vias de excreção incluem bile (fígado), suor, saliva, leite (via lactação) ou outros fluidos corporais. Os fármacos voláteis, como o álcool e os anestésicos gasosos são excretados através dos pulmões para o ar expirado. Por outro lado, a biotransformação, ou o metabolismo do fármaco, relaciona-se a um fármaco que é quimicamente convertido no organismo para um metabolito e, geralmente, é um processo enzimático. A exceção para isso é quando um fármaco é alterado quimicamente de forma não enzimática, por exemplo, hidrólise de éster. Enzimas envolvidas na biotransformação de fármacos estão localizadas, principalmente, no fígado. Outros tecidos, como rim, pulmão, intestino delgado e pele também contêm enzimas metabólicas.
[0067] Estudos farmacocinéticos também podem ser utilizados para investigar vias de eliminação em um indivíduo, por exemplo, depuração renal via excreção do fármaco administrado na urina ao longo do tempo. A excreção renal do Composto 1 em um modelo de cão foi conduzida para avaliar a excreção renal, como uma via de eliminação (Ensaio 4). Esta via de eliminação é importante para indivíduos que comprometeram a função renal e precisam de terapias que são minimamente eliminadas pela excreção renal. Numa modalidade, a excreção renal do Composto 1 ou sua forma cristalina no indivíduo é aproximadamente < 15%, < 10%, < 5%, < 3%, <2%, <1% ou < 0,5% da dose administrada mais de 24 horas.
[0068] Conforme descrito na seção de ensaio abaixo, incluído juntamente com o Composto 1 em um ensaio de enzima NEP in vitro e em determinações in vivo de biodisponibilidade oral e excreção renal em múltiplas espécies animais, foram compostos comparadores da estrutura química similar. Surpreendentemente, observaram-se diferenças significativas nos resultados. Embora os compostos comparadores individuais exibissem propriedades, semelhantes às do Composto 1 em um ou mais ensaios, apenas o Composto 1 exibiu, ao mesmo tempo, alta atividade inibidora da neprilisina humana, alta biodisponibilidade oral e baixa excreção renal que se espera que leve a uma utilidade particular no tratamento da doença.
[0069] Adicionalmente, para utilizar eficazmente o Composto 1, como um agente terapêutico, é desejável ter uma forma de estado sólido deste composto que possa ser facilmente fabricado e que tenha estabilidade química e física aceitável, incluindo um alto ponto de fusão. Não foram obtidos cristais do ácido livre do Composto 1. Os cristais de arginina e cálcio do Composto 1 foram finalmente fabricados, mas os cristais de arginina foram deliquescentes nas condições ambientais e foram difíceis de desenvolver ainda mais. Por outro lado, os cristais de cálcio foram estáveis e fundidos em torno de 239°C e podem ser utilizados para desenvolvimento posterior como agente terapêutico.
Doenças cardiovasculares
[0070] Ao aumentar os efeitos de peptídeos vasoativos como peptídeos natriuréticos e bradicinina, espera-se que o Composto 1 seja útil no tratamento e/ou prevenção de condições médicas, tais como doenças cardiovasculares. Veja, por exemplo, Roques et al. (1993) Pharmacol. Rev. 45:87-146 and Dempsey et al. (2009) Amer. J. of Pathology 174(3):782-796. As doenças cardiovasculares de particular interesse incluem hipertensão e insuficiência cardíaca. A hipertensão inclui, a título ilustrativo, e não limitativo: hipertensão primária, que também é referida como hipertensão essencial ou hipertensão idiopática; hipertensão secundária; hipertensão com doença renal associada; hipertensão grave com ou sem doença renal associada; hipertensão pulmonar, incluindo hipertensão arterial pulmonar; e hipertensão resistente. A insuficiência cardíaca inclui, a título ilustrativo e não limitativo: insuficiência cardíaca congestiva; insuficiência cardíaca aguda; insuficiência cardíaca crônica, por exemplo, com fração reduzida de ejeção do ventrículo esquerdo (também referida como insuficiência cardíaca sistólica) ou com fração preservada de ejeção do ventrículo esquerdo (também referida como insuficiência cardíaca diastólica); e insuficiência cardíaca descompensada aguda e crônica. Assim, uma modalidade da invenção refere-se a um método para tratar hipertensão, particularmente, hipertensão primária ou hipertensão arterial pulmonar, compreendendo administrar a um paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz do Composto 1.
[0071] Para o tratamento da hipertensão primária, a quantidade terapeuticamente eficaz é tipicamente a quantidade que é suficiente para diminuir a pressão sanguínea do paciente. Isso incluiria hipertensão leve a moderada e hipertensão grave. Quando usado para tratar a hipertensão, o Composto 1 pode ser administrado em combinação com outros agentes terapêuticos, tais como antagonistas de aldosterona, inibidores da aldosterona sintase, inibidores da enzima conversora da angiotensina e inibidores da enzima conversora da angiotensina de dupla ação/neprilisina, estimuladores e ativadores de enzima conversora da angiotensina 2 (ACE2), vacinas contra angiotensina II, agentes anti-diabéticos, agentes anti-lipídicos, agentes antitrombóticos, antagonistas dos receptores AT1 e inibidores de antagonistas do receptor AT1 de dupla ação/neprilisina, antagonistas dos receptores ei-adrenérgicos, antagonistas dos receptores ß- adrenérgicos de dupla ação/antagonistas a1-receptores, bloqueadores dos canais de cálcio, diuréticos, antagonistas dos receptores da endotelina, inibidores da enzima conversora da endotelina, inibidores da neprilisina, peptídeos natriuréticos e seus análogos, antagonistas do receptor de depuração do peptídeo natriurético, dadores de óxido nítrico, agentes anti-inflamatórios não esteroidal, inibidores de fosfodiesterase (especificamente, inibidores de PDE-V), agonistas de receptores prostaglandina, inibidores de renina, estimuladores e ativadores solúveis de guanilato ciclase e suas combinações. Numa modalidade particular da invenção, o composto da invenção é combinado com um antagonista do receptor AT1, um bloqueador do canal de cálcio, um diurético ou uma combinação destes, e usado para tratar a hipertensão primária. Noutra modalidade particular da invenção, o composto da invenção é combinado com um antagonista do receptor AT1 e utilizado para tratar a hipertensão com doença renal associada. Quando usado para tratar a hipertensão resistente, o composto pode ser administrado em combinação com outros agentes terapêuticos, tais como inibidores de aldosterona sintase.
[0072] Para o tratamento da hipertensão arterial pulmonar, a quantidade terapeuticamente eficaz é tipicamente a quantidade que é suficiente para diminuir a resistência vascular pulmonar. Outros objetivos da terapia são melhorar a capacidade de exercício de um paciente. Por exemplo, em um ambiente clínico, a quantidade terapeuticamente eficaz pode ser a quantidade que melhora a capacidade do paciente de caminhar confortavelmente por um período de 6 minutos (cobrindo uma distância de aproximadamente 20 a 40 metros). Quando usado para tratar a hipertensão arterial pulmonar, o composto pode ser administrado em combinação com outros agentes terapêuticos tais como antagonistas dos receptores a-adrenérgicos, antagonistas dos receptores e1-adrenérgicos, agonistas dos receptores e2—adrenérgicos, inibidores da enzima conversora da angiotensina, anticoagulantes, bloqueadores dos canais de cálcio, diuréticos, antagonistas dos receptores de endotelina, inibidores de PDE-V, análogos de prostaglandinas, inibidores seletivos da reabsorção de serotonina e suas combinações. Numa modalidade particular da invenção, o Composto 1 é combinado com um inibidor de PDE-V ou um inibidor seletivo de recaptação de serotonina e utilizado para tratar a hipertensão arterial pulmonar.
[0073] Outra modalidade da invenção refere-se a um método para tratar insuficiência cardíaca, em particular, insuficiência cardíaca congestiva (incluindo insuficiência cardíaca congestiva sistólica e diastólica), compreendendo administrar a um paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz do Composto 1. Tipicamente, a quantidade terapeuticamente eficaz é a quantidade que é suficiente para baixar a pressão arterial e/ou melhorar as funções renais. Em um ambiente clínico, a quantidade terapeuticamente eficaz pode ser a quantidade que é suficiente para melhorar a hemodinâmica cardíaca, como, por exemplo, redução na pressão de oclusão, pressão atrial direita, pressão de enchimento e resistência vascular. Numa modalidade, o Composto 1 é administrado como uma forma de dosagem intravenosa. Quando usado para tratar a insuficiência cardíaca, o composto pode ser administrado em combinação com outros agentes terapêuticos, tais como antagonistas dos receptores de adenosina, interruptores de produtos finais de glicação avançada, antagonistas de aldosterona, antagonistas dos receptores ATi, antagonistas dos receptores ei-adrenérgicos, antagonista receptor e—adrenérgico de dupla ação/antagonistas do ai-receptor, inibidores de quimase, digoxina, diuréticos, inibidores da enzima conversora de endotelina (ECE), antagonistas dos receptores de endotelina, peptídeos natriuréticos e seus análogos, antagonistas do receptor de depuração de peptídeos natriuréticos, dadores de óxido nítrico, análogos de prostaglandina, inibidores de PDE-V, ativadores e estimuladores solúveis de guanilato ciclase, e antagonistas dos receptores de vasopressina. Numa modalidade particular da invenção, o Composto 1 é combinado com um antagonista de aldosterona, um antagonista do receptor ei-adrenérgico, um antagonista do receptor ATi ou um diurético, e usado para tratar a insuficiência cardíaca congestiva. Diarréia
[0074] Como um inibidor de NEP, espera-se que o Composto i iniba a degradação de encefalinas endógenas e, assim, tais compostos também podem ser úteis para o tratamento de diarréia, incluindo diarréia infecciosa e secretiva/aquosa. Veja, por exemplo, Baumer et al. (i992) Gut 33:753-758; Farthing (2006) Digestive Diseases 24:47-58; e Marçais-Collado (i987) Eur. J. Pharmacol. i44(2):i25-i32. Quando usado para tratar diarréia, o Composto i pode ser combinado com um ou mais agentes antidiarréicos adicionais.
Doenças renais
[0075] Ao aumentar os efeitos de peptídeos vasoativos, como os peptídeos natriuréticos e bradicinina, espera-se que o Composto i melhore a função renal (ver Chen et al. (i999) Circulation i00:2443-2448; Lipkin et al. (i997) Kidney Int. 52:792-80i; e Dussaule et al. (i993) Clin. Sci. 84:3i-39) e encontram utilidade no tratamento e/ou prevenção de doenças renais em indivíduos com problemas renais. As doenças renais de particular interesse incluem nefropatia diabética, doença renal crônica, proteinúria e, particularmente, lesão renal aguda (causada, por exemplo, por cirurgia cardiovascular, quimioterapia ou uso de corantes de contraste em imagens médicas) ou insuficiência renal aguda (ver Sharkovska et al. (2011) Clin. Lab. 57:507515 and Newaz et al. (2010) Renal Failure 32:384-390).
[0076] Um indivíduo com problemas renais que tenha doença renal crônica (DRC) pode ser classificado de acordo com as Diretrizes Nacionais da Iniciativa de Qualidade dos Resultados de Doença Renal (NKF KDOQI) - National Kidney Foundation Kidney Disease Outcomes Quality Initiative (NKF KDOQI) Guidelines. Uma vez que a doença renal crônica é estabelecida, isto é, danos nos rins ou taxa de filtração glomerular (GFR) <60 mL/min/1,73 m2 por >3 meses, o estágio da doença pode ser atribuído de acordo com a classificação KDOQI CKD. Estes incluem o Estágio 1 (danos nos rins com GFR normal ou aumentada): GFR >90; Estágio 2 (danos nos rins com GFR discretamente leve): GFR 60-89; Estágio 3 (GFR diminuiu moderadamente): GFR 30-59; Estágio 4 (diminuição grave de GFR): GFR 15-29; e Estágio 5 (insuficiência renal): GFR <15 (ou diálise). A GFR é definida em unidades de mL/min/1,73m2.
[0077] Uma modalidade inclui um método de tratamento de um indivíduo com dano renal compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do Composto 1 ou uma forma cristalina deste, especificamente, a forma cristalina 1'. Este método inclui ainda o tratamento de um indivíduo com problemas renais com hipertensão ou insuficiência cardíaca. Quando usado para tratar a doença renal, o Composto 1 ou uma forma cristalina deste, a forma especificamente cristalina 1' pode ser administrada em combinação com outros agentes terapêuticos, tais como inibidores da enzima conversora da angiotensina, antagonistas do receptor AT1 e diuréticos.
[0078] Outra modalidade inclui um método de tratamento de um indivíduo com dano renal com doença renal crônica com uma taxa estimada de filtração glomular (eGFR) entre 60 mL/min/1,73m2 e 15 mL/min/1,73 m2 compreendendo a administração a um paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz do Composto 1 ou uma forma cristalina deste, especificamente, a forma cristalina 1'. Outra modalidade inclui um método de tratamento de um indivíduo com deficiência renal tendo doença renal crônica com uma taxa de filtração glomular estimada (eGFR) >90 mL/min/1,73 m2 (Estágio 1) ou um eGFR <15 mL/min/1,73 m2 (Estágio 5) compreendendo administrar a um paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz do Composto 1 ou uma forma cristalina deste, especificamente, a forma cristalina 1'. Para os fins desta invenção, a doença renal grave pode ser classificada como um eGFR <30 mL/min/1,73 m2. Ainda noutra modalidade, um método de tratamento de um indivíduo com dano renal tendo doença renal crônica classificada como Estágio 1, Estágio 2, Estágio 3, Estágio 4, Estágio 5 ou faixas de eGFR abrangendo um ou mais destes estágios com o Composto 1 ou uma forma cristalina deste, especificamente, a forma cristalina 1' está incluída.
Terapia preventiva
[0079] Ao aumentar os efeitos dos peptídeos natriuréticos, o Composto 1 também deverá ser útil na terapia preventiva, devido aos efeitos anti-hipertróficos e antifibróticos dos peptídeos natriuréticos (ver Potter et al. (2009) Handbook of Experimental Pharmacology 191:341366), Por exemplo, na prevenção da progressão da insuficiência cardíaca após o infarto do miocárdio, prevenindo restenose arterial após angioplastia, evitando o espessamento das paredes dos vasos sanguíneos após operações vasculares, prevenindo a aterosclerose e prevenindo a angiopatia diabética.
Glaucoma
[0080] Ao aumentar os efeitos dos peptídeos natriuréticos, espera-se que o Composto 1 seja útil para tratar o glaucoma. Veja, por exemplo, Diestelhorst et al. (1989) International Ophthalmology 12:99-101. Quando usado para tratar o glaucoma, o Composto 1 pode ser combinado com um ou mais agentes antiglaucomáticos adicionais.
Alívio da dor
[0081] Como um inibidor de NEP, espera-se que o Composto 1 iniba a degradação de encefalinas endógenas e, assim, tais compostos também podem ser úteis como analgésicos. Veja, por exemplo, Roques et al. (1980) Nature 288:286-288 and Thanawala et al. (2008) Current Drug Targets 9:887-894. Quando usado para tratar a dor, o Composto 1 pode ser combinado com um ou mais fármacos antinociceptivos adicionais, tais como inibidores de aminopeptidase N ou dipeptidil peptidase III, agentes anti-inflamatórios não esteroidal, inibidores da reabsorção de monoamina, relaxantes musculares, antagonistas dos receptores NMDA, agonistas dos receptores opioides, agonistas dos receptores de serotonina 5-HT1D e antidepressivos tricíclicos.
Outras utilidades
[0082] Devido às suas propriedades de inibição de NEP, o Composto 1 também deverá ser útil como agente antitussivo, além de encontrar utilidade no tratamento da hipertensão portal associada à cirrose hepática (ver Sansoe et al. (2005) J. Hepatol. 43:791-798), câncer (ver Vesely (2005) J. Investigative Med. 53:360-365), depressão (ver Noble et al. (2007) Exp. Opin. Ther. Targets 11:145-159), distúrbios menstruais, parto prematuro, pré-eclâmpsia, endometriose, distúrbios reprodutivos (por exemplo, infertilidade masculina e feminina, síndrome do ovário policístico, falência de implantação) e disfunção sexual masculina e feminina, incluindo disfunção erétil masculina e transtorno de excitação sexual feminina. Mais especificamente, espera-se que o Composto 1 seja útil no tratamento da disfunção sexual feminina (ver Pryde et al. (2006) J. Med. Chem. 49:4409-4424), que muitas vezes é definido como uma dificuldade do paciente do sexo feminino ou incapacidade de encontrar satisfação na expressão sexual. Isso abrange uma variedade de distúrbios sexuais femininos diversos, incluindo, a título de ilustração e não de limitação, distúrbio de desejo sexual hipoativo, transtorno de excitação sexual, transtorno orgásmico e transtorno da dor sexual. Quando usado para tratar tais distúrbios, especialmente, a disfunção sexual feminina, o composto da invenção pode ser combinado com um ou mais dos seguintes agentes secundários: inibidores de PDE-V, agonistas de dopamina, agonistas de receptores de estrogênio e/ou antagonistas, andrógenos e estrogênios. Devido à sua propriedade de inibição de NEP, o Composto 1 também deverá ter propriedades anti-inflamatórias, e espera-se que tenha utilidade como tal, particularmente, quando usado em combinação com estatinas.
[0083] Estudos recentes sugerem que a NEP desempenha um papel na regulação da função nervosa em diabetes deficiente em insulina e obesidade induzida pela dieta. Coppey et al. (2011) Neuropharmacology 60:259-266. Portanto, devido à sua propriedade de inibição de NEP, o Composto 1 também deverá ser útil para fornecer proteção contra comprometimento nervoso causado por diabetes ou obesidade induzida por dieta.
[0084] A quantidade de Composto 1 administrada por dose ou a quantidade total administrada por dia pode ser predeterminada ou pode ser determinada individualmente, levando em consideração vários fatores, incluindo a natureza e gravidade da condição do paciente, a condição a ser tratada, a idade, o peso e a saúde geral do paciente, a tolerância do paciente ao agente ativo ou metabolito ativo, a via de administração, considerações farmacológicas, como a atividade, eficácia, farmacocinética e toxicologia do composto e de qualquer agente secundário sendo administrado, e similares. O tratamento de um paciente que sofre de uma doença ou condição médica (como a hipertensão) pode começar com uma dose predeterminada ou uma dosagem determinada pelo médico e continuará por um período de tempo necessário para prevenir, melhorar, suprimir ou aliviar os sintomas da doença ou condição médica. Os pacientes submetidos a esse tratamento, normalmente, serão monitorados de forma rotineira para determinar a eficácia da terapia. Por exemplo, no tratamento da hipertensão, medidas de pressão arterial podem ser usadas para determinar a eficácia do tratamento. Indicadores semelhantes para outras doenças e condições aqui descritas, são bem conhecidos e estão prontamente disponíveis para o médico. O monitoramento contínuo pelo médico assegurará que a quantidade ideal de Composto 1 seja administrada a qualquer momento, além de facilitar a determinação da duração do tratamento. Isto é de particular valor quando agentes secundários também estão sendo administrados, pois sua seleção, dose e duração da terapia também podem requerer ajustes. Desta forma, o regime de tratamento e o esquema de dosagem podem ser ajustados ao longo da terapia, de modo que seja administrada a menor quantidade de agente ativo ou metabolito ativo que exiba a eficácia desejada e, além disso, que a administração seja continuada somente enquanto for necessário para tratar com sucesso a doença ou condição médica.
[0085] O composto 1 também encontra utilidade como um intermediário útil para a preparação de formas cristalinas do Composto 1, incluindo, por exemplo, a forma cristalina 1'.
Ferramentas de pesquisa
[0086] Uma vez que o Composto 1 possui atividade de inibição da enzima NEP, também é útil como ferramenta de pesquisa para investigar ou estudar sistemas biológicos ou amostras com uma enzima NEP, por exemplo, para estudar doenças onde a enzima NEP ou seus substratos peptídicos desempenham um papel. Qualquer sistema biológico adequado ou amostra tendo uma enzima NEP pode ser empregado e em estudos que podem ser realizados in vitro ou in vivo. Os sistemas biológicos representativos ou amostras adequadas para tais estudos incluem, mas não estão limitados a, células, extratos celulares, membranas de plasma, amostras de tecido, órgãos isolados, mamíferos (como camundongos, ratos, cobaias, coelhos, cães, porcos, seres humanos, e assim por diante), e similares, com os mamíferos sendo de particular interesse. Numa modalidade particular da invenção, a atividade da enzima NEP num mamífero é inibida pela administração de uma quantidade inibidora de NEP do Composto 1.
[0087] Quando usada como uma ferramenta de pesquisa, um sistema biológico ou amostra compreendendo uma enzima NEP é, tipicamente, posto em contato com uma quantidade inibidora de enzima NEP do Composto 1. Após o sistema biológico ou a amostra ser exposta ao composto, os efeitos da inibição da enzima NEP são determinados utilizando procedimentos e equipamentos convencionais, tais como por medir a ligação do receptor num ensaio de ligação ou medir alterações mediadas por ligante num ensaio funcional. A exposição engloba contatar células ou tecido com o composto, administrando o composto a um mamífero, por exemplo, por i.p., p.o, i.v., s.c., ou administração inalada, e assim por diante. Essa etapa determinante pode envolver a medição de uma resposta (uma análise quantitativa) ou pode envolver a realização de uma observação (uma análise qualitativa). A medição de uma resposta envolve, por exemplo, a determinação dos efeitos do composto sobre o sistema biológico ou amostra usando procedimentos e equipamentos convencionais, tais como ensaios de atividade enzimática e medição de substratos enzimáticos ou mudanças mediadas pelo produto em ensaios funcionais. Os resultados do ensaio podem ser utilizados para determinar o nível de atividade bem como a quantidade de composto necessário para alcançar o resultado desejado, isto é, uma quantidade inibidora de enzima NEP. Tipicamente, a etapa determinante envolverá a determinação dos efeitos da inibição da enzima NEP.
[0088] Adicionalmente, o Composto 1 pode ser utilizado como uma ferramenta de pesquisa para avaliar outros compostos químicos e, portanto, também é útil nos ensaios de varredura para descobrir, por exemplo, novos compostos com atividade inibidora de NEP. Desta forma, o Composto 1 é usado como um padrão em um ensaio para permitir a comparação dos resultados obtidos com um composto de teste e com o Composto 1 para identificar os compostos de teste que têm uma atividade aproximadamente igual ou superior, se houver. Por exemplo, os dados de pKi para um composto de teste ou um grupo de compostos de teste são comparados aos dados de pKi para o Composto 1 para identificar os compostos de teste que possuem as propriedades desejadas, por exemplo, compostos de teste com um valor de pKi igual ou superior ao composto da invenção. Este aspecto da invenção inclui, como modalidades separadas, tanto a geração de dados de comparação (utilizando os ensaios apropriados) como a análise de dados de teste para identificar compostos de teste de interesse. Assim, um composto de teste pode ser avaliado num ensaio biológico, por um método que compreende as etapas de: (a) conduzir um ensaio biológico com um composto de teste para proporcionar um primeiro valor de ensaio; (b) conduzir o ensaio biológico com o Composto 1 para proporcionar um segundo valor de ensaio; em que a etapa (a) é conduzida antes, depois ou simultaneamente com a etapa (b); e (c) comparar o primeiro valor de ensaio da etapa (a) com o segundo valor de ensaio da etapa (b). Exemplos de ensaios biológicos incluem um ensaio de inibição da enzima NEP.
[0089] Ainda outro aspecto da invenção refere-se a um método de estudo de um sistema ou amostra biológica compreendendo uma enzima NEP, o método compreendendo: (a) contatar com o sistema biológico ou amostra com o Composto 1; e (b) determinar os efeitos causados pelo composto no sistema biológico ou na amostra.
COMPOSIÇÕES E FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS
[0090] O Composto 1 é tipicamente administrado a um paciente na forma de uma composição ou formulação farmacêutica. Tais composições farmacêuticas podem ser administradas ao paciente por qualquer via de administração aceitável incluindo, mas não limitado a, modos de administração oral, retal, vaginal, nasal, inalada, tópica (incluindo transdérmica), ocular e parentérica. Além disso, o Composto 1 pode ser administrado, por exemplo, por via oral, em doses múltiplas por dia (por exemplo, duas, três ou quatro vezes ao dia), numa única dose diária ou numa única dose semanal. Deve entender-se que qualquer forma do Composto 1 (isto é, base livre, ácido livre, sal farmaceuticamente aceitável, solvato, etc.) que seja adequado para o modo particular de administração pode ser utilizado nas composições farmacêuticas aqui discutidas.
[0091] Consequentemente, numa modalidade, a invenção refere-se a uma composição farmacêutica compreendendo um veículo farmaceuticamente aceitável e o Composto 1. A composição pode conter outros agentes terapêuticos e/ou formulantes, se desejado. Ao discutir as composições, o "Composto 1" também pode ser referido aqui como o "agente ativo", para distinguir de outros componentes da formulação, como o veículo. Assim, entende-se que o termo "agente ativo" inclui os compostos da invenção bem como os sais farmaceuticamente aceitáveis destes.
[0092] As composições farmacêuticas da invenção tipicamente contêm uma quantidade terapeuticamente eficaz do Composto 1. Os peritos na técnica reconhecerão, no entanto, que uma composição farmacêutica pode conter mais de uma quantidade terapeuticamente eficaz, como em composições a granel, ou menos do que uma quantidade terapêutica efetiva, isto é, doses unitárias individuais projetadas para administração múltipla para alcançar uma quantidade terapeuticamente efetiva. Tipicamente, a composição conterá de cerca de 0,01-95% em peso de agente ativo, incluindo, de cerca de 0,01-30% em peso, tal como de cerca de 0,01-10% em peso, com a quantidade real dependendo da própria formulação, a rota de administração, a frequência de dosagem, e assim por diante. Numa modalidade, uma composição adequada para uma forma de dosagem oral, por exemplo, pode conter cerca de 5-70% em peso, ou de cerca de 10-60% em peso de agente ativo.
[0093] Qualquer veículo ou excipiente convencional pode ser utilizado nas composições farmacêuticas da invenção. A escolha de um veículo ou excipiente específico, ou combinações de veículos ou excipientes, dependerá do modo de administração que é usado para tratar um paciente específico ou tipo de condição médica ou estado de doença. A este respeito, a preparação de uma composição adequada para um modo particular de administração está bem dentro do alcance dos peritos na técnica farmacêutica. Adicionalmente, os veículos ou excipientes utilizados nessas composições estão comercialmente disponíveis. A título de ilustração adicional, as técnicas de formulação convencional são descritas em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); e H. C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th Edition, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999).
[0094] Exemplos representativos de materiais que podem servir como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a, os seguintes: açúcares, tais como lactose, glicose e sacarose; amidos, como amido de milho e amido de batata; celulose, tal como celulose microcristalina, e seus derivados, tais como carboximetil celulose de sódio, etilcelulose e acetato de celulose; sais de ácidos graxos, tais como estearato de magnésio; tragacanto em pó; malte; gelatina; talco; excipientes, como manteiga de cacau e ceras de supositório; óleos, como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de cártamo, óleo de gergelim, azeite, óleo de milho e óleo de soja; glicóis, tais como propilenoglicol; polióis, tais como glicerina, sorbitol, manitol e polietilenoglicol; ésteres, tais como oleato de etil e laurateto de etil; ágar; agentes tampão, tais como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; ácido algínico; água sem pirogênio; solução salina isotônica; solução de Ringer; álcool etílico; soluções tampão de fosfato; gases propulsores comprimidos, tais como clorofluorocarbonos e hidrofluorocarbonos; e outras substâncias não tóxicas compatíveis empregadas em composições farmacêuticas.
[0095] Numa modalidade da invenção, o veículo farmaceuticamente aceitável é estearato de magnésio. Por exemplo, a composição farmacêutica pode compreender o Composto 1 ou uma forma cristalina 1' e estearato de magnésio numa razão de cerca de 3:1 a cerca de 10:1 do Composto 1 ou uma forma cristalina 1' para estearato de magnésio. Outras razões do Composto 1 ou uma forma cristalina 1' para estearato de magnésio incluem, mas não estão limitadas a, 1:1, 5:1, 15:1, 20:1, 25:1, 30:1 e 50:1.
[0096] As composições farmacêuticas são, tipicamente, preparadas misturando completamente ou intimamente o agente ativo com um veículo farmaceuticamente aceitável e um ou mais ingredientes opcionais. A mistura resultante uniformemente misturada pode, então, ser moldada ou carregada em comprimidos, cápsulas, pílulas, cilindros, cartuchos, dispensadores e similares, utilizando procedimentos e equipamentos convencionais.
[0097] Numa modalidade, as composições farmacêuticas são adequadas para administração oral. As composições adequadas para administração oral podem estar na forma de cápsulas, comprimidos, pílulas, pastilhas, invólucro, drageias, pós, grânulos; soluções ou suspensões num líquido aquoso ou não aquoso; emulsões líquidas de óleo-em-água ou água-em-óleo; elixires ou xaropes; e similares; contendo cada, uma quantidade predeterminada do agente ativo.
[0098] Quando se destina a administração oral numa forma de dosagem sólida (cápsulas, comprimidos, pílulas e semelhantes), a composição compreenderá, tipicamente, o agente ativo e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, tais como citrato de sódio, fosfato dicálcico ou estearato de magnésio. As formas de dosagem sólidas também podem compreender enchimentos ou extensores, tais como amidos, celulose microcristalina, lactose, sacarose, glicose, manitol e/ou ácido silícico; ligantes, tais como carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinil pirrolidona, sacarose e/ou acácia; umectantes, tais como glicerol; agentes de desintegração, tais como agar-agar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algínico, certos silicatos e/ou carbonato de sódio; agentes retardadores da solução, como a parafina; aceleradores de absorção, tais como compostos de amônio quaternário; agentes de umidificação, tais como álcool cetílico e/ou monoestearato de glicerol; absorventes, tais como caolina e/ou argila de bentonita; lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietilenoglicóis sólidos, lauril sulfato de sódio e/ou suas misturas; agentes corantes; e agentes tamponante. Para os fins desta invenção, os termos "veículos farmaceuticamente aceitáveis" incluem todos os termos, tais como veículos, cargas ou extensores, aglutinantes, umectantes, agentes retardadores da solução, agentes de umidificação, absorventes, lubrificantes, agentes corantes e agentes tampão, descritos acima.
[0099] Agentes de liberação, agentes de umidificação, agentes de revestimento, agentes edulcorantes, aromatizantes e perfumantes, conservantes e antioxidantes também podem estar presentes nas composições farmacêuticas. Os agentes de revestimento exemplificativos para comprimidos, cápsulas, pílulas e similares incluem os utilizados para revestimentos entéricos, tais como ftalato de acetato de celulose, ftalato de acetato de polivinil, ftalato de hidroxipropil metilcelulose, copolímeros de éster de ácido metacrílico-ácido metacrílico, acetato trimelitíco de celulose, carboximetil etil celulose, succinato de hidroxipropil de acetato de metil celulose e semelhantes. Exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem: antioxidantes solúveis em água, tais como ácido ascórbico, cloridrato de cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfato de sódio, sulfito de sódio e semelhantes; antioxidantes solúveis em óleo, tais como palmitato de ascorbil, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, lecitina, galato de propil, alfa-tocoferol e semelhantes; e agentes quelantes de metais, tais como ácido cítrico, ácido etilenodiamina tetra-acético, sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico e semelhantes.
[00100] As composições também podem ser formuladas para proporcionar uma liberação lenta ou controlada do agente ativo usando, a título de exemplo, hidroxipropil metil celulose em proporções variáveis ou outras matrizes poliméricas, lipossomas e/ou microesferas. Além disso, as composições farmacêuticas da invenção podem conter agentes opacificantes e elas podem ser formuladas de modo a liberar o agente ativo apenas, ou preferencialmente, numa determinada porção do trato gastrointestinal, opcionalmente, de forma retardada. Exemplos de composições de incorporação que podem ser utilizadas incluem substâncias poliméricas e ceras. O agente ativo também pode estar em forma microencapsulada, opcionalmente, com um ou mais dos excipientes acima descritos.
[00101] Uma modalidade da invenção inclui uma forma de dosagem oral compreendendo o Composto 1 ou a forma cristalina 1' numa cápsula, comprimido, líquido ou suspensão. Outra modalidade da invenção refere-se a uma forma de dosagem oral, em que uma liberação do Composto 1 ou forma cristalina 1' num indivíduo é uma liberação imediata, controlada ou retardada. Se uma cápsula é utilizada como uma forma de dosagem oral, outra modalidade inclui a cápsula compreendendo gelatina, polissacarídeos ou polímeros sintéticos. Numa modalidade particular, a cápsula compreende hidroxipropil metil celulose.
[00102] Os materiais adequados de cápsula de acordo com a invenção são selecionados de gelatina, derivados de celulose, amido, derivados de amido, quitosana e plásticos sintéticos. Se a gelatina for utilizada como material da cápsula, ela pode ser usada em mistura com outros aditivos selecionados de polietilenoglicol (PEG), glicerol, sorbitol, polipropilenoglicol, copolímeros em blocos PEO-PPO e outros polialcóois e poliéteres. Quando é utilizado um derivado de celulose, como material de cápsula, hidroxipropilmetilcelulose, hidroxipropilcelulose, metilcelulose, hidroximetilcelulose e hidroxietilcelulose são polímeros preferidos. Se os plásticos sintéticos são usados como material de cápsula, polietileno, policarbonato, poliéster, polipropileno e tereftalato de polietileno são materiais preferidos. Particularmente preferidos são polietileno, policarbonato ou tereftalato de polietileno.
[00103] Formas de dosagem líquidas adequadas para administração oral incluem, a título ilustrativo, emulsões farmaceuticamente aceitáveis, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires. As formas de dosagem líquida compreendem, tipicamente, o agente ativo e um diluente inerte, tais como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes solubilizantes e emulsificantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etil, acetato de etil, álcool benzílico, benzoato de benzil, propilenoglicol, 1,3-butilenoglicol, óleos (por exemplo, óleo de algodão, amendoim, milho, germe, oliva, castanha e gergelim), glicerol, álcool tetrahidrofurílico, polietilenoglicóis e ésteres de ácidos graxos de sorbitano e suas misturas. As suspensões podem conter agentes de suspensão, tais como, por exemplo, álcoois isoestearílico etoxilados, sorbitol de polioxietileno e ésteres de sorbitano, celulose microcristalina, meta-hidróxido de alumínio, bentonita, agar-agar e tragacanto e suas misturas.
[00104] Quando destinados à administração oral, as composições farmacêuticas da invenção podem ser embaladas numa forma de dosagem unitária. O termo "forma de dosagem unitária" refere-se a uma unidade fisicamente discreta adequada para administração de um paciente, isto é, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada do agente ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado quer sozinho quer em combinação com uma ou mais unidades adicionais. Por exemplo, tais formas de dosagem unitária podem ser cápsulas, comprimidos, pílulas e semelhantes.
[00105] Noutra modalidade, as composições da invenção são adequadas para administração inalada e estarão tipicamente na forma de um aerossol ou um pó. Tais composições são, geralmente, administradas utilizando dispositivos de distribuição bem conhecidos, tais como um nebulizador, pó seco ou inalador de dose calibrada. Os dispositivos de nebulização produzem uma corrente de ar de alta velocidade que faz com que a composição pulverize como uma névoa que é transportada para o trato respiratório de um paciente. Uma formulação de nebulizador exemplar compreende o agente ativo dissolvido num veículo para formar uma solução, ou micronizado e combinado com um veículo para formar uma suspensão de partículas micronizadas de tamanho respirável. Os inaladores em pó seco administram o agente ativo como um pó de fluxo livre que é disperso no fluxo de ar de um paciente durante a inspiração. Uma formulação exemplar em pó seco compreende o agente ativo misturado a seco com um excipiente tal como lactose, amido, manitol, dextrose, ácido polilático, polilactida-co-glicolida e suas combinações. Os inaladores de dose calibrada descarregam uma quantidade medida do agente ativo usando gás propulsor comprimido. Uma formulação exemplar de dose calibrada compreende uma solução ou suspensão do agente ativo num propulsor liquefeito, tal como um clorofluorocarbono ou hidrofluoroalcano. Os componentes opcionais de tais formulações incluem cosolventes, tais como etanol ou pentano, e tensoativos, tais como trioleato de sorbitano, ácido oleico, lecitina, glicerina e lauril sulfato de sódio. Tais composições são, tipicamente, preparadas por adição de hidrofluoroalcano refrigerado ou pressurizado a um recipiente adequado contendo o agente ativo, etanol (se presente) e o agente tensoativo (se presente). Para preparar uma suspensão, o agente ativo é micronizado e depois combinado com o propulsor. Alternativamente, uma formulação em suspensão pode ser preparada por secagem por pulverização de um revestimento de tensoativo sobre partículas micronizadas do agente ativo. A formulação é, então, carregada em uma lata de aerossol, que forma uma porção do inalador.
[00106] O Composto 1 e suas composições também podem ser administrados parentericamente, por exemplo, por injeção subcutânea, intravenosa, intramuscular ou intraperitoneal. Para tal administração, o agente ativo é fornecido numa solução estéril, suspensão ou emulsão. Exemplos de solventes para a preparação de tais formulações incluem água, solução salina, eletrólitos, álcoois de baixo peso molecular, tais como propilenoglicol e polietilenoglicol, óleos, aminoácidos, gelatina, açúcares, ésteres de ácidos graxos, tais como oleato de etil e semelhantes. As formulações parenterais também podem conter um ou mais antioxidantes, solubilizantes, estabilizadores, conservantes, agentes de umidificação, emulsificantes e agentes dispersantes. Os tensoativos, agentes estabilizadores adicionais ou agentes de ajuste do pH (ácidos, bases ou tampões) e antioxidantes são, particularmente, úteis para proporcionar estabilidade à formulação, por exemplo, para minimizar ou evitar a hidrólise de ligações de éster e amida que possam estar presentes no composto. Estas formulações podem ser esterilizadas por meio de um meio injetável estéril, um agente de esterilização, filtração, irradiação ou calor.
[00107] Veículos aquosos aceitáveis fisiologicamente representativos incluem, a título de exemplo, água estéril para injeção, USP; injeção de dextrose, USP (por exemplo, 2,5, 5,0, 10, 20% de dextrose, incluindo 5% de injeção de dextrose (D5/W)); dextrose e injeção de cloreto de sódio, USP (por exemplo, dextrose variando de 2,5 a 10% e cloreto de sódio variando de 0,12 (19 mEq de sódio) para 0,9% (154 mEq de sódio)); injeção de manitol, USP, (por exemplo, 5, 10, 15, 20 e 25% de manitol); injeção de Ringer, USP (por exemplo, 147 mEq de sódio, 4 mEq de potássio, 4,5 mEq de cálcio e 156 mEq de cloreto por litro); Injeção de Ringer Lactated, USP (por exemplo, 2,7 mEq de cálcio, 4 mEq de potássio, 130 mEq de sódio e lactato de 28 mEq por litro); injeção de cloreto de sódio, USP (por exemplo, cloreto de sódio a 0,9%) e semelhantes.
[00108] Quando administrado a um paciente, o Composto 1 será tipicamente diluído em cerca de 0,5 mL a cerca de 10 mL do veículo aquoso por mg do Composto 1, tal como cerca de 0,6 a cerca de 8 mL por mg.
[00109] Numa modalidade particular, a formulação parentérica compreende uma solução aquosa de ciclodextrina como o veículo farmaceuticamente aceitável. As ciclodextrinas adequadas incluem moléculas cíclicas contendo seis ou mais unidades de a-D-glicopiranose ligadas nas posições 1,4 por ligações, como na amilase, ß-ciclodextrina ou ciclo-heptamilose. As ciclodextrinas exemplares incluem derivados de ciclodextrina, tais como ciclodextrinas de hidroxipropil e éter sulfobutílico, tais como hidroxipropil- ß-ciclodextrina e éter sulfobutílico ß-ciclodextrina. Os tampões exemplificativos para tais formulações incluem tampões à base de ácido carboxílico, tais como soluções tampão citrato, lactato e maleato. Numa modalidade da invenção, uma forma de dosagem intravenosa compreende o Composto 1 ou a forma cristalina 1' numa solução tamponada.
[00110] Numa modalidade, o Composto 1 ou uma composição farmacêutica deste é um pó liofilizado. Tipicamente, o pó liofilizado é estéril e é embalado num frasco ou ampola hermeticamente fechado ou recipiente semelhante.
[00111] O Composto 1 também pode ser administrado por via transdérmica utilizando sistemas e excipientes de administração transdérmica conhecidos. Por exemplo, o Composto 1 pode ser misturado com intensificadores de permeação, tais como propilenoglicol, monolaurato de polietilenoglicol, azacicloalcano-2-onas e semelhantes, e incorporados num emplastro ou sistema de administração semelhante. Excipientes adicionais, incluindo agentes gelificantes, emulsionantes e tampões, podem ser utilizados em tais composições transdérmicas, se desejado.
Agentes secundários
[00112] O Composto 1 pode ser útil como único tratamento de uma doença ou pode ser combinado com um ou mais agentes terapêuticos adicionais de modo a obter o efeito terapêutico desejado. Assim, numa modalidade, as composições farmacêuticas da invenção contêm outros fármacos que são coadministrados com o Composto 1. Por exemplo, a composição pode ainda compreender um ou mais fármacos (também referidos como "agentes secundários"). Tais agentes terapêuticos são bem conhecidos na técnica e incluem antagonistas dos receptores de adenosina, antagonistas dos receptores a- adrenérgicos, antagonistas dos receptores e1-adrenérgicos, agonistas dos receptores e2-adrenérgicos, antagonistas dos receptores e—adrenérgicos de dupla ação/antagonistas do ai- receptor, e interruptores de produtos finais de glicação avançada, antagonistas de aldosterona, inibidores de aldosterona sintase, inibidores de aminopeptidase N, androgênios, inibidores de enzimas conversoras de angiotensina e inibidores de enzima conversora de angiotensina de dupla ação/neprilisina, ativadores e estimuladores de enzima conversora de angiotensina 2, vacinas contra angiotensina II, anticoagulantes, agentes antidiabéticos, agentes antidiarréicos, agentes antiglaucoma, agentes antilipídicos, agentes antinociceptivos, agentes antitrombóticos, antagonistas dos receptores AT1 e inibidores do antagonista do receptor AT1 de dupla ação/neprilisina e bloqueadores multifuncionais dos receptores da angiotensina, antagonistas dos receptores de bradicinina, bloqueadores de canais de cálcio, inibidores de quimase, digoxina, diuréticos, agonistas dopamina, inibidores da enzima de conversão da endotelina, os antagonistas dos receptores da endotelina, os inibidores da HMG-CoA redutase, os estrogênios, agonistas de receptores de estrogênio e/ou antagonistas, os inibidores da reabsorção de monoamina, os relaxantes musculares, os peptídeos natriuréticos e os seus análogos, os antagonistas dos receptores da depuração do peptídeo natriurético, os inibidores da neprilisina, doadores de óxido nítrico, agentes anti-inflamatórios não esteroidal, antagonistas dos receptores de N-metil-d-aspartato, agonistas de receptores de opióides, inibidores de fosfodiesterase, análogos de prostaglandina, agonistas de receptores de prostaglandina, inibidores de renina, inibidores seletivos da reabsorção de serotonina, bloqueador de canais de sódio, estimuladores e ativadores de guanilato de ciclase solúvel, antidepressivos tricíclicos, antagonistas dos receptores de vasopressina e suas combinações. Exemplos específicos desses agentes são detalhados aqui.
[00113] Uma modalidade específica inclui uma composição farmacêutica compreendendo o Composto 1 ou a forma cristalina deste e um antagonista do receptor AT1, um inibidor da enzima conversora da angiotensina, um inibidor da fosfodiesterase (PDE), um inibidor da renina, um diurético ou combinações destes e, opcionalmente, um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.
[00114] Consequentemente, ainda noutro aspecto da invenção, uma composição farmacêutica compreende o Composto 1, um segundo agente ativo e um veículo farmaceuticamente aceitável. Terceiro, quarto, etc. agentes ativos também podem ser incluídos na composição. Na terapia combinada, a quantidade de composto 1 que é administrada, bem como a quantidade de agentes secundários, pode ser inferior à quantidade tipicamente administrada em monoterapia.
[00115] O composto 1 pode ser fisicamente misturado com o segundo agente ativo para formar uma composição contendo ambos os agentes; ou cada agente pode estar presente em composições separadas e distintas que são administradas ao paciente simultaneamente ou em momentos separados. Por exemplo, o Composto 1 pode ser combinado com um segundo agente ativo utilizando procedimentos e equipamentos convencionais para formar uma combinação de agentes ativos compreendendo o Composto 1 e um segundo agente ativo. Adicionalmente, os agentes ativos podem ser combinados com um veículo farmaceuticamente aceitável para formar uma composição farmacêutica compreendendo o Composto 1, um segundo agente ativo e um veículo farmaceuticamente aceitável. Nesta modalidade, os componentes da composição são, tipicamente, misturados ou combinados para criar uma mistura física. A mistura física é, então, administrada numa quantidade terapeuticamente eficaz utilizando qualquer uma das rotas, aqui descritas.
[00116] Alternativamente, os agentes ativos podem permanecer separados e distintos antes da administração ao paciente. Nesta modalidade, os agentes não são misturados fisicamente antes da administração, mas são administrados simultaneamente ou em momentos separados como composições separadas. Essas composições podem ser embaladas separadamente ou podem ser embaladas juntas em um kit. Quando administrado em momentos separados, o agente secundário será tipicamente administrado menos de 24 horas após a administração do Composto 1, variando em qualquer lugar de concorrente com a administração do composto da invenção a cerca de 24 horas após a administração. Isso também é referido como administração sequencial. Assim, o Composto 1 pode ser administrado oralmente simultaneamente ou sequencialmente com outro agente ativo usando dois comprimidos, com um tablete para cada agente ativo, onde o sequencial pode significar ser administrado imediatamente após a administração do Composto 1 ou em algum tempo predeterminado posterior (por exemplo, uma hora mais tarde ou três horas depois). Também é contemplado que o agente secundário possa ser administrado mais do que 24 horas após a administração do Composto 1. Alternativamente, a combinação pode ser administrada por diferentes rotas de administração, isto é, um oralmente e outro por inalação.
[00117] Numa modalidade, o kit compreende uma primeira forma de dosagem compreendendo o Composto 1 e pelo menos uma forma de dosagem adicional compreendendo um ou mais dos agentes secundários aqui apresentados, em quantidades suficientes para realizar os métodos da invenção. A primeira forma de dosagem e a segunda forma de dosagem (ou terceira, etc.) compreendem conjuntamente uma quantidade terapeuticamente eficaz de agentes ativos para o tratamento ou prevenção de uma doença ou condição médica num paciente.
[00118] O(s) agente(s) secundário(s), quando incluído(s), está/estão presente(s) numa quantidade terapeuticamente eficaz de tal modo que é/são tipicamente administrado(s) numa quantidade que produz um efeito terapeuticamente benéfico quando coadministrados com o Composto 1 da invenção. O agente secundário pode estar na forma de um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero opticamente puro, e assim por diante. O agente secundário pode também estar na forma de um pró-fármaco, por exemplo, um composto tendo um grupo de ácido carboxílico que tenha sido esterificado. Assim, os agentes secundários aqui listados destinam-se a incluir todas essas formas e estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparados utilizando procedimentos e reagentes convencionais.
[00119] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um antagonista do receptor de adenosina, exemplos dos quais incluem naxifilina, rolofilina, SLV-320, teofilina e tonapofilina.
[00120] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um antagonista do receptor a-adrenérgico, exemplos dos quais incluem doxazosina, prazosina, tamsulosina e terazosina.
[00121] O composto 1 também pode ser administrado em combinação com um antagonista do receptor ß1-adrenérgico ("ß1-bloqueador"), exemplos dos quais incluem acebutolol, alprenolol, amosulalol, arotinolol, atenolol, befunolol, betaxolol, bevantolol, bisoprolol, bopindolol, bucindolol, bucumolol, bufetolol, bufuralol, bunitrolol, bupranolol, bubridina, butofilolol, carazolol, carteolol, carvedilol, celiprolol, cetamolol, cloranolol, dilevalol, epanolol, esmolol, indenolol, labetolol, levobunolol, mepindolol, metipranolol, metoprolol, tal como succinato de metoprolol e tartrato de metoprolol, moprolol, nadolol, nadoxolol, nebivalol, nipradilol, oxprenolol, penbutolol, perbutolol, pindolol, practolol, pronetalol, propranolol, sotalol, sufinalol, talindol, tertatolol, tilisolol, timolol, toliprolol, xibenolol, e suas combinações. Numa modalidade particular, o ß1-antagonista é selecionado a partir de atenolol, bisoprolol, metoprolol, propranolol, sotalol e suas combinações. Tipicamente, o ß1-bloqueador será administrado numa quantidade suficiente para proporcionar de cerca de 2-900 mg por dose.
[00122] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um agonista do receptor e2-adrenérgico, exemplos dos quais incluem albuterol, bitolterol, fenoterol, formoterol, indacaterol, isoetarina, levalbuterol, metaproterenol, pirbuterol, salbutamol, salmefamol, salmeterol, terbutalina, vilanterol, e similar. Tipicamente, o agonista do receptor e2-adrenérgico será administrado numa quantidade suficiente para proporcionar de cerca de 0,05-500 µg por dose.
[00123] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um interruptor de produto final de glicação avançada (AGE), exemplos dos quais incluem alagebrium (ou ALT-711) e TRC4149.
[00124] Noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um antagonista de aldosterona, exemplos dos quais incluem eplerenona, espironolactona e suas combinações. Tipicamente, o antagonista de aldosterona será administrado numa quantidade suficiente para proporcionar de cerca de 5-300 mg por dia.
[00125] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um inibidor de aminopeptidase N ou dipeptidil peptidase III, exemplos dos quais incluem bestatina e PC18 (2-amino-4-metilssulfonil butano tiol, metionina tiol).
[00126] O composto 1 também pode ser administrado em combinação com um inibidor de enzima conversora de angiotensina (ACE), exemplos dos quais incluem acupril, alacepril, benazepril, benazeprilato, captopril, ceranapril, cilazapril, delapril, enalapril, enalaprilato, fosinopril, fosinoprilato, imidapril, lisinopril, moexipril, monopril, moveltipril, pentopril, perindopril, quinapril, quinaprilato, ramipril, ramiprilato, acetato de saralasina, espirapril, temocapril, trandolapril, zofenopril e suas combinações. Numa modalidade particular, o inibidor de ACE é selecionado de: benazepril, captopril, enalapril, lisinopril, ramipril e suas combinações. Tipicamente, o inibidor de ACE será administrado numa quantidade suficiente para proporcionar de cerca de 1-150 mg por dia.
[00127] Noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um inibidor de enzima de converora de angiotensina de dupla ação/neprilisina (ACE/NEP), exemplos dos quais incluem: AVE-0848 (ácido (4S, 7S, 12bR)-7- [3-metil-2(S)-sulfanilbutiramido]-6-oxo- 1,2,3,4,6,7,8,12b-octa-hidropirido [2,1-a] [2]-benzazepina-4- carboxílico); AVE-7688 (ilepatril) e seu composto original; BMS-182657 (ácido 2- [2-oxo-3(S)- [3-fenil-2(S)- sulfanilpropionamido]-2,3,4,5-tetrahidro-1H-1-benzazepin-1- il]acético); CGS-35601 (N- [1- [4-metil-2(S)- sulfanilpentanamido]ciclopentil-carbonil]-L-triptofano); fasidotril; fasidotrilato; enalaprilato; ER-32935 (ácido (3R, 6S, 9aR)-6- [3(S)-metil-2(S)-sulfanilpentanamido]-5- oxoperidrotiazolo [3,2-a]azepina-3-carboxílico); gempatrilato; MDL-101264 (ácido (4S, 7S, 12bR)-7- [2(S)-(2- morfolinoacetiltio)-3-fenilpropionamido]-6-oxo- 1,2,3,4,6,7,8,12b-octa-hidropirido [2,1-a] [2]benzazepina-4- carboxílico); MDL-101287 (ácido [4S- [4a, 7a(R*), 12bß]]-7- [2- (carboximetil)-3-fenilpropionamido]-6-oxo- 1,2,3,4,6,7,8,12b-octa-hidropirido [2,1-a] [2]benzazepina-4- carboxílico); omapatrilato; RB-105 (N- [2(S)- (mercaptometil)-3(R)-fenilbutil]-L-alanina); sampatrilato; SA-898 ((2R, 4R)-N- [2-(2-hidroxifenil)-3-(3- mercaptopropionil)tiazolidin-4-ilcarbonil]-L-fenilalanina); Sch-50690 (N- [1(S)-carboxi-2- [N2-(metanossulfonil)-L- lisilamino]etil]-L-valil-L-tirosina); e suas combinações, também podem ser incluídas. Numa modalidade particular, o inibidor ACE/NEP é selecionado de: AVE-7688, enalaprilato, fasidotril, fasidotrilato, omapatrilato, sampatrilato e suas combinações.
[00128] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um ativador ou estimulador da enzima 2 conversora da angiotensina (ACE2).
[00129] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com uma vacina de angiotensina II, exemplos dos quais incluem ATR12181 e CYT006-AngQb.
[00130] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um anticoagulante, exemplos dos quais incluem: cumarinas, tais como a varfarina; heparina; e inibidores diretos de trombina, como argatroban, bivalirudina, dabigatrana e lepirudina.
[00131] Ainda noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um agente antidiabético, exemplos dos quais incluem fármacos injetáveis, bem como fármacos oralmente eficazes e suas combinações. Exemplos de fármacos injetáveis incluem insulina e derivados de insulina. Exemplos de fármacos oralmente eficazes incluem: biguanidas como a metformina; antagonistas de glucagon; inibidores de a-glicosidase, tais como acarbose e miglitol; inibidores de dipeptidil peptidase IV (inibidores de DPP- IV), tais como alogliptina, denagliptina, linagliptina, saxagliptina, sitagliptina e vildagliptina; meglitinidas, tais como repaglinida; oxadiazolidinedionas; sulfonilureias tais como clorpropamida, glimepirida, glipizida, gliburida e tolazamida; tiazolidinedionas, tais como pioglitazona e rosiglitazona; e suas combinações.
[00132] Noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com tratamentos antidiarréicos. As opções representativas de tratamento incluem soluções de reidratação oral (ORS), loperamida, difenoxilato e subsalicilato de bismuto.
[00133] Ainda noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um agente antiglaucoma, exemplos dos quais incluem: agonistas a-adrenérgicos, tais como a brimonidina; antagonistas dos receptores ß1- adrenérgicos; ß1-bloqueadores tópicos, tais como betaxolol, levobunolol e timolol; inibidores da anidrase carbônica, tais como acetazolamida, brinzolamida ou dorzolamida; agonistas colinérgicos, como cevimelina e DMXB-anabaseína; compostos de epinefrina; mióticos, como a pilocarpina; e análogos de prostaglandinas.
[00134] Ainda noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um agente antilípido, exemplos dos quais incluem: inibidores da proteína de transferência de éster colesterílico (CETPs), tais como anacetrapibe, dalcetrapibe e torcetrapibe; estatinas, tais como atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, pravastatina, rosuvastatina e simvastatina; e suas combinações.
[00135] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um agente antitrombótico, exemplos dos quais incluem: aspirina; agentes antiplaquetários, tais como clopidogrel, prasugrel e ticlopidina; heparina e suas combinações.
[00136] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um antagonista do receptor AT1, também conhecido como bloqueadores do receptor de tipo 1 da angiotensina II (ARBs). Os ARBs representativos incluem abitesartan, azilsartan (por exemplo, medoxomil azilsartan), benzildosartan, candesartan, cilexetil candesartan, elisartan, embusartan, enoltasosartan, eprosartan, EXP3174, fonsartan, forasartan, glicilosartan, irbesartan, isoteolina, losartan, medoxomil, milfasartan, olmesartan (por exemplo, medoxomil olmesartan), opomisartan, pratosartan, ripisartan, saprisartan, saralasin, sarmesina, TAK-591, tasosartan, telmisartan, valsartan, zolasartan e suas combinações. Numa modalidade particular, o ARB é seleccionado de medoxomil azilsartan, cilexetil candesartan, eprosartan, irbesartan, losartan, medoxomil olmesartan, saprisartan, tasosartan, telmisartan, valsartan e suas combinações. Exemplos de sais e/ou pró-fármacos incluem cilexetil candesartan, mesilato de eprosartan, sal de losartan potássio e medoxomil olmesartan. Tipicamente, ARB será administrado numa quantidade suficiente para proporcionar de cerca de 4-600 mg por dose, com doses diárias exemplares variando de 20-320 mg por dia.
[00137] O composto 1 também pode ser administrado em combinação com um agente de dupla ação, tal como um inibidor do antagonista do receptor AT1/neprilisina (inibidor ARB/NEP), exemplos dos quais incluem compostos descritos nas Patentes americanas US Nos. 7,879,896 e 8,013,005, ambas de Allegretti et al., como o composto, ácido 4'-{2-etoxi-4- etil-5- [((S)-2-mercapto-4-metilpentanoilamino)- metil]imidazol-1-ilmetil}-3'-fluorobifenil-2-carboxílico.
[00138] O composto 1 também pode ser administrado em combinação com bloqueadores multifuncionais dos receptores de angiotensina, como descrito em Kurtz & Klein (2009) Hypertension Research 32: 826-834.
[00139] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um antagonista do receptor de bradicinina, por exemplo, icatibante (HOE-140). Espera-se que esta terapia combinada possa apresentar a vantagem de prevenir o angioedema ou outras consequências indesejadas dos níveis elevados de bradicinina.
[00140] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um bloqueador de canais de cálcio, incluindo exemplos de amlodipina, anipamil, aranipina, barnidipina, benciclano, benidipina, bepridil, clentiazem, cilnidipina, cinarizina, diltiazem, efonidipina, elgodipina, etafenona, felodipina, fendilina, flunarizina, galopamil, isradipina, lacidipina, lercanidipina, lidoflazina, lomerizina, manidipina, mibefradil, nicardipina, nifedipina, niguldipina, niludipina, nilvadipina, nimodipina, nisoldipina, nitrendipina, nivaldipina, perhexilina, prenilamina, riosidina, semotiadil, terodilina, tiapamil, verapamil e suas combinações. Numa modalidade particular, o bloqueador dos canais de cálcio é selecionado de amlodipina, bepridil, diltiazem, felodipina, isradipina, lacidipina, nicardipina, nifedipina, niguldipina, niludipina, nimodipina, nisoldipina, riosidina, verapamil e suas combinações. Tipicamente, o bloqueador dos canais de cálcio será administrado numa quantidade suficiente para proporcionar de cerca de 2-500 mg por dose.
[00141] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um inibidor de quimase, tal como TPC-806 e 2-(5-formilamino-6-oxo-2-fenil-1,6-di-hidropirimidina-1- il)-N- [{3,4-dioxo-1-fenil-7-(2-piridiloxi)}-2- heptil]acetamida (NK3201).
[00142] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um diurético, exemplos dos quais incluem: inibidores de anidrase carbônica, tais como acetazolamida e diclorfenamida; diuréticos de alça, que incluem derivados de sulfonamida, tais como acetazolamida, ambusida, azosemida, bumetanida, butazolamida, cloraminofenamida, clofenamida, clopamida, clorexolona, disulfamida, etoxazolamida, furosemida, mefrusida, metazolamida, piretanida, torsemida, tripamida e xipamida, bem como diuréticos de não sulfonamida, tais como ácido etacrínico e outros compostos de ácido fenoxiacético, tais como ácido tienílico, indacrinona e quincarbato; diuréticos osmóticos como o manitol; diuréticos distribuidor de potássio, que incluem antagonistas de aldosterona, tais como inibidores de espironolactona e canais de Na+, tais como amilorida e triamtereno; diuréticos similares à tiazida e tiazida, tais como a altiazida, bendroflumtiazida, benzilhidroclorotiazida, benztiazida, butiazida, clortalidona, clorotiazida, ciclopentiazida, ciclotiazida, epitiazida, etiazida, fenquizona, flumetiazida, hidroclorotiazida, hidroflometiazida, indapamida, metilclotiazida, meticrano, metolazona, parafluticida, politiazida, quinetazona, teclotiazida e triclorometiazida; e suas combinações. Numa modalidade particular, o diurético é selecionado de amilorida, bumetanida, clorotiazida, clortalidona, diclorfenamida, ácido etacrínico, furosemida, hidroclorotiazida, hidroflumacetiazida, indapamida, metilclotiazida, metolazona, torsemida, triamtereno e suas combinações. O diurético será administrado numa quantidade suficiente para proporcionar de cerca de 5-50 mg por dia, mais tipicamente 6-25 mg por dia, sendo as dosagens comuns 6,25 mg, 12,5 mg ou 25 mg por dia.
[00143] O composto 1 também pode ser administrado em combinação com um inibidor de enzima de conversão de endotelina (ECE), exemplos dos quais incluem fosforamidona, CGS 26303 e suas combinações.
[00144] Numa modalidade particular, o Composto 1 é administrado em combinação com um antagonista do receptor de endotelina, exemplos dos quais incluem: antagonistas seletivos do receptor da endotelina que afetam receptores de endotelina A, tais como avosentano, ambrisentano, atrasentano, BQ-123, clazosentano, darusentano, sitaxentano, e zibotentano; e os antagonistas duplos de receptores de endotelina que afetam ambos receptores de endotelina A e B, como bosentano, macitentano e tezosentano.
[00145] Ainda noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um ou mais inibidores de HMG- CoA redutase, que também são conhecidos como estatinas. As estatinas representativas incluem atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina e simvastatina.
[00146] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um inibidor da reabsorção de monoamina, exemplos dos quais incluem inibidores da reabsorção de norepinefrina, como atomoxetina, buproprion e o metabolito buproprion, hidroxibuproprion, maprotilina, reboxetina e viloxazina; inibidores seletivos da reabsorção da serotonina (ISRS), tais como o citalopram e o metabolito do citalopram, desmetilcitalopram, dapoxetina, escitalopram (por exemplo, oxalato de escitalopram), fluoxetina e norfluoxetina metabolito desmetílico da fluoxetina, fluvoxamina (por exemplo, maleato de fluvoxamina), paroxetina, sertralina e metabolito da sertralina, a desmetilsertralina; inibidores duplos de reabsorção de serotonina-norepinefrina (SNRIs), tais como bicifadina, duloxetina, milnacipran, nefazodona e venlafaxina; e suas combinações.
[00147] Noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um relaxante muscular, exemplos dos quais incluem: carisoprodol, clorzoxazona, ciclobenzaprina, diflunisal, metaxalona, metocarbamol e suas combinações.
[00148] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um peptídeo natriurético ou análogo, exemplos dos quais incluem: carperitida, CD-NP (Nile Therapeutics), CU-NP, nesiritida, PL-3994 (Palatin Technologies, Inc.), ularitida, cenderitida e compostos descritos em Ogawa et al (2004) J.Biol.Chem. 279: 28625-31. Estes compostos são também referidos como agonistas do receptor peptídico natriurético-A (NPR-A). Noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um antagonista do receptor de depuração de peptídeos natriuréticos (NPR-C), tal como SC-46542, cANF (4-23) e AP- 811 (Veale (2000) Bioorg Med Chem Lett 10: 1949-52). Por exemplo, o AP-811 mostrou sinergia quando combinado com o inibidor de NEP, o tiorfano (Wegner (1995) Clin. Exper. Hypert. 17: 861-876).
[00149] Noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um inibidor de neprilisina (NEP), exemplos dos quais incluem: AHU-377; candoxatril; candoxatrilato; éster benzílico de dexecadotril ((+)-N- [2(R)-(acetiltiometil)-3-fenilpropionil]glicina); CGS-24128 (ácido 3- [3-(bifenil-4-il)-2- (fosfonometilamino)propionamido]propiônico); CGS-24592 ácido ((S)-3- [3-(bifenil-4-il)-2- (fosfonometilamino)propionamido]propiônico); CGS-25155 (éster benzílico (N- [9(R)-(acetiltiometil)-10-oxo-1- azaciclodecan-2(S)-ilcarbonil]-4(R)-hidroxi-L-prolina); derivados de ácido 3-(1-carbamoilciclohexil)propiônico descritos em WO 2006/027680 para Hepworth et al. (Pfizer Inc.); JMV-390-1 (2(R)-benzil-3-(N- hidroxicarbamoil)propionil-L-isoleucil-L-leucina); ecadotril; fosforamidona; retrotorfano; RU-42827 (2- (mercaptometil)-N-(4-piridinil)benzenopropionamida); RU- 44004(N-(4-morfolinil)-3-fenil-2- (sulfanilmetil)propionamida); SCH-32615 ((S)-N- [N-(1- carboxi-2-feniletil)-L-fenilalanil]-p-alanina) e seu profármaco SCH-34826 ((S)-N- [N- [1- [ [(2,2-dimetil-1,3- dioxolan-4-il)metoxi]carbonil]-2-feniletil]-L-fenilalanil]- ß-alanina); sialorfina; SCH-42495 (éster etílico de N- [2(S)- (acetilsulfanilmetil)-3-(2-metilfenil)propionil]-L- metionina); espinorfina; SQ-28132 (N- [2-(mercaptometil)-1- oxo-3-fenilpropil]leucina); SQ-28603 (N- [2-(mercaptometil)- 1-oxo-3-fenilpropil]-ß-alanina); SQ-29072 (ácido 7- [ [2- (mercaptometil)-1-oxo-3-fenilpropil]amino]heptanóico); tiorfano e seu pró-fármaco racecadotril; UK-69578 (ácido cis-4- [ [ [1- [2-carboxi-3-(2- metoxietoxi)propil]ciclopentil]carbonil]amino]ciclohexanoca rboxílico); UK-447,841 (ácido 2-{1- [3-(4- clorofenil)propilcarbamoil]-ciclopentilmetil}-4- metoxibutírico); UK-505,749 (ácido (R)-2-metil-3-{1- [3-(2- metilbenzotiazol-6- il)propilcarbamoil]ciclopentil}propiônico); ácido 5- bifenil-4-il-4-(3-carboxipropionilamino)-2-metilpentanóico e éster etílico do ácido 5-bifenil-4-il-4-(3- carboxipropionilamino)-2-metilpentanóico (WO 2007/056546); daglutril [ácido (3S, 2'R)-3-{1- [2'-(etoxicarbonil)-4'- fenilbutil]-ciclopentan-1-carbonilamino}-2,3,4,5- tetrahidro-2-oxo-1H-1-benzazepina-1-acético] descrito no WO 2007/106708 a Khder et al. (Novartis AG); e suas combinações. Numa modalidade particular, o inibidor de NEP é selecionado de AHU-377, candoxatril, candoxatrilato, CGS-24128, fosforamidona, SCH-32615, SCH-34826, SQ-28603, tiorfano e suas combinações. Numa modalidade particular, o inibidor de NEP é um composto como daglutril ou CGS-26303 (ácido [N- [2- (bifenil-4-il)-1(S)-(1H-tetrazol-5- il)etil]amino]metilfosfônico), que tem atividade tanto como inibidor da enzima conversora de endotelina (ECE) quanto de NEP. Outros compostos ECE/NEP de dupla ação também podem ser usados. O inibidor de NEP será administrado numa quantidade suficiente para fornecer de cerca de 20 a 800 mg por dia, com doses diárias típicas variando entre 50-700 mg por dia, mais comumente, 100-600 ou 100-300 mg por dia.
[00150] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um doador de óxido nítrico, exemplos dos quais incluem: nicorandil; nitratos orgânicos, tais como tetranitrato de pentaeritritol; e sidnoniminas, tais como linsidomina e molsidomina.
[00151] Ainda noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um agente anti-inflamatório não esteroidal (NSAID), exemplos dos quais incluem: acemetacina, ácido acetil salicílico, alclofenaco, alminoprofeno, amfenaco, amiprilose, aloxiprina, anirolaco, apazona, azapropazona, benorilato, benoxaprofeno, bezpiperilon, broperamol, ácido buclóxico, carprofeno, clidanaco, diclofenaco, diflunisal, diftalona, enolicam, etodolaco, etoricoxibe, fenbufeno, fenclofenaco, ácido fenclózico, fenoprofeno, fentiazaco, feprazona, ácido flufenâmico, flufenisal, fluprofeno, flurbiprofeno, furofenaco, ibufenaco, ibuprofeno, indometacina, indoprofeno, isoxepaco, isoxicam, cetoprofeno, cetorolaco, lofemizol, lornoxicam, meclofenamato, ácido meclofenâmico, ácido mefenâmico, meloxicam, mesalamina, miroprofeno, mofebutazona, nabumetona, naproxeno, ácido niflúmico, oxaprozina, oxpinaco, oxifenbutazona, fenilbutazona, piroxicam, pirprofeno, pranoprofeno, salsalato, sudoxicam, sulfasalazina, sulindaco, suprofeno, tenoxicam, tiopinaco, ácido tiaprofênico, tioxaprofeno, ácido tolfenâmico, tolmetina, triflunidato, zidometacina, zomepiraco e suas combinações. Numa modalidade particular, o NSAID é selecionado de etodolaco, flurbiprofeno, ibuprofeno, indometacina, cetoprofeno, cetorolaco, meloxicam, naproxeno, oxaprozina, piroxicam e suas combinações.
[00152] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um antagonista do receptor de N-metil d- aspartato (NMDA), exemplos dos quais incluem amantadina, dextrometorfano, dextropropoxifeno, cetamina, cetobemidona, memantina, metadona e assim por diante.
[00153] Ainda noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um agonista do receptor opióide (também referido como analgésico opióide). Os agonistas de receptores de opióides representativos incluem: buprenorfina, butorfanol, codeína, dihidrocodeína, fentanil, hidrocodona, hidromorfona, levalorfano, levorfanol, meperidina, metadona, morfina, nalbufina, nalmefeno, nalorfina, naloxona, naltrexona, nalorfina, oxicodona, oximorfona, pentazocina, propoxifeno, tramadol e suas combinações. Em certas modalidades, o agonista do receptor de opióide é selecionado de codeína, dihidrocodeína, hidrocodona, hidromorfona, morfina, oxicodona, oximorfona, tramadol e suas combinações.
[00154] Numa modalidade particular, o Composto 1 é administrado em combinação com um inibidor de fosfodiesterase (PDE), particularmente, um inibidor de PDE- V. Inibidores representativos de PDE-V incluem avanafil, lodenafil, mirodenafil, sildenafil (Revatio®), tadalafil (Adcirca®), vardenafil (Levitra®) e udenafil.
[00155] Noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um análogo de prostaglandina (também referido como análogos de prostanóides ou prostaciclina). Os análogos representativos de prostaglandina incluem beraprost sódico, bimatoprost, epoprostenol, iloprost, latanoprost, tafluprost, travoprost e treprostinil, com bimatoprost, latanoprost e tafluprost sendo de particular interesse.
[00156] Ainda noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um agonista do receptor de prostaglandina, exemplos dos quais incluem bimatoprost, latanoprost, travoprost, e assim por diante.
[00157] O composto 1 também pode ser administrado em combinação com um inibidor de renina, exemplos dos quais incluem alisquireno, enalquireno, remiquireno e suas combinações.
[00158] Noutra modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um inibidor seletivo da reabsorção da serotonina (SSRI), cujos exemplos incluem: citalopram e metabolito de citalopram desmetil-citalopram, dapoxetina, escitalopram (por exemplo, escalopram oxalato), fluoxetina e o norfluoxetina metabolito de fluoxetina desmetil, fluvoxamina (por exemplo, maleato de fluvoxamina), paroxetina, sertralina e metabolismo de sertralina, desmetilsertralina, e suas combinações.
[00159] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um agonista do receptor de serotonina 5- HT1D, exemplos dos quais incluem triptanos, tais como almotriptano, avitriptano, eletriptano, frovatriptano, naratriptano, rizatriptano, sumatriptano e zolmitriptano.
[00160] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um bloqueador de canais de sódio, exemplos dos quais incluem carbamazepina, fosfenitoína, lamotrigina, lidocaína, mexiletina, oxcarbazepina, fenitoína e suas combinações.
[00161] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um estimulador ou ativador solúvel de guanilato ciclase, exemplos dos quais incluem ataciguate, riociguate e suas combinações.
[00162] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um antidepressivo tricíclico (TCA), exemplos dos quais incluem amitriptilina, amitriptililoxido, butriptilina, clomipramina, demexiptilina, desipramina, dibenzepina, dimetacrina, dosulepina, doxepina, imipramina, imipraminóxido, lofepramina, melitraceno, metapramina, nitroxazepina, nortriptilina, noxiptilina, pipofezina, propicepina, protriptilina, quinupramina e suas combinações.
[00163] Numa modalidade, o Composto 1 é administrado em combinação com um antagonista do receptor de vasopressina, exemplos dos quais incluem conivaptano e tolvaptano.
[00164] Os agentes terapêuticos secundários combinados também podem ser úteis na terapia de combinação adicional com o composto da invenção. Por exemplo, o composto da invenção pode ser combinado com um diurético e um ARB, ou um bloqueador de canais de cálcio e um ARB, ou um diurético e um inibidor de ACE, ou um bloqueador de canais de cálcio e uma estatina. Exemplos específicos incluem uma combinação do inibidor de ACE enalapril (na forma de sal de maleato) e a hidroclorotiazida diurética, que é vendida sob a marca Vaseretic®, ou uma combinação do bloqueador de canais de cálcio amlodipina (na forma de sal de besilato) e a ARB olmesartano (na forma de pró-fármaco de medoxomil), ou uma combinação de um bloqueador de canais de cálcio e uma estatina, todos também podem ser usados com o Composto 1. Outros agentes terapêuticos, como agonistas de receptores a2-adrenérgicos e antagonistas de receptores de vasopressina também podem ser úteis em terapia de combinação. Exemplos de agonistas de receptores a2-adrenérgicos incluem clonidina, dexmedetomidina e guanfacina.
[00165] As seguintes formulações ilustram composições farmacêuticas representativas da invenção. Exemplos de Cápsulas duras de gelatina para administração oral
[00166] O composto da invenção (50 g), 440 g de lactose seca por pulverização e 10 g de estearato de magnésio são completamente misturados. A composição resultante é, então, carregada em cápsulas de gelatina dura (500 mg de composição por cápsula). Alternativamente, o Composto 1 (20 mg) é completamente misturado com amido (89 mg), celulose microcristalina (89 mg) e estearato de magnésio (2 mg). A mistura é, então, passada através de uma peneira U.S. de No. 45 mesh e carregada numa cápsula de gelatina dura (200 mg de composição por cápsula).
[00167] Alternativamente, o Composto 1 (30 g), um agente secundário (20 g), 440 g de lactose seca por pulverização e 10 g de estearato de magnésio são completamente misturados e processados, como descrito acima. Exemplo de Formulação de cápsulas de gelatina para administração oral
[00168] O Composto 1 (100 mg) é completamente misturado com mono-oleato de polioxietileno sorbitano (50 mg) e pó de amido (250 mg). A mistura é, então, carregada numa cápsula de gelatina (400 mg de composição por cápsula). Alternativamente, o Composto 1 (70 mg) e um agente secundário (30 mg) são completamente misturados com mono-oleato de polioxietileno sorbitano (50 mg) e pó de amido (250 mg) e a mistura resultante é carregada numa cápsula de gelatina (400 mg de composição por cápsula).
[00169] Alternativamente, o Composto 1 (40 mg) é completamente misturado com celulose microcristalina (Avicel PH 103, 259,2 mg) e estearato de magnésio (0,8 mg). A mistura é, então, carregada numa cápsula de gelatina (Tamanho#1, Branco, Opaca) (300 mg de composição por cápsula). Exemplo de Cápsula de hidroxipropil metilcelulose (HPMC) para administração oral
[00170] O Composto 1 (50 mg ou 100 mg) é carregado diretamente numa cápsula HPMC. Exemplo de Formulação de comprimidos para administração oral
[00171] Composto 1 (10 mg), amido (45 mg) e celulose microcristalina (35 mg) são passados através de uma peneira U.S. de No. 20 mesh e misturados completamente. Os grânulos, assim, produzidos são secos a 50-60°C e passados através de uma peneira U.S. de No. 16 mesh. Uma solução de polivinilpirrolidona (4 mg como solução a 10% em água estéril) é misturada com carboximetil amido de sódio (4,5 mg), estearato de magnésio (0,5 mg) e talco (1 mg), e esta mistura é, então, passada através de um Peneira US de No. 16 mesh. O amido carboximetil de sódio, estearato de magnésio e talco são, então, adicionados aos grânulos. Após misturar, a mistura é comprimida numa máquina de comprimidos para fornecer um comprimido com 100 mg.
[00172] Alternativamente, o Composto 1 (250 mg) é completamente misturado com celulose microcristalina (400 mg), dióxido de silício fumado (10 mg) e ácido esteárico (5 mg). A mistura é, então, comprimida para formar tabletes (665 mg de composição por tabletes).
[00173] Alternativamente, o Composto 1 (400 mg) é completamente misturado com milho (50 mg), croscarmelose sódica (25 mg), lactose (120 mg) e estearato de magnésio (5 mg). A mistura é, então, comprimida para formar um tablete de pontuação única (600 mg de composição por tablete).
[00174] Alternativamente, o Composto 1 (100 mg) é completamente misturado com amido de milho (100 mg) com uma solução aquosa de gelatina (20 mg). A mistura é seca e moída em pó fino. A celulose microcristalina (50 mg) e o estearato de magnésio (5 mg) são, então, misturados com a formulação de gelatina, granulados e a mistura resultante é comprimida para formar tabletes (100 mg do composto da invenção por tablete). Exemplo de Formulação de Suspensão para Administração Oral
[00175] Os seguintes ingredientes são misturados para formar uma suspensão contendo 100 mg de Composto 1 por 10 mL de suspensão:
Figure img0005
Exemplo de Formulação líquida para administração oral
[00176] Uma formulação líquida adequada é uma com um tampão à base de ácido carboxílico, tais como soluções tampão citrato, lactato e maleato. Por exemplo, o Composto 1 (que pode ser pré-misturado com DMSO) é misturado com um tampão de citrato de amônio 100 mM e o pH ajustado para pH 5, ou é misturado com uma solução de ácido cítrico 100 mM e o pH ajustado para pH 2. Tais soluções também podem incluir um excipiente solubilizante tal como uma ciclodextrina, por exemplo, a solução pode incluir 10% em peso de hidroxipropil- ß-ciclodextrina.
[00177] Outras formulações adequadas incluem uma solução a 5% de NaHCO3, com ou sem ciclodextrina. Exemplo de Formulação parenteral IV para administração por injeção
[00178] O Composto 1 (0,2 g) é misturado com solução tampão de acetato de sódio 0,4 M (2,0 mL). O pH da solução resultante é ajustado para pH 4 utilizando 0,5 N de ácido clorídrico aquoso ou 0,5 N de hidróxido de sódio aquoso, conforme necessário, e depois é adicionada água para injeção suficiente para proporcionar um volume total de 20 mL. A mistura é, então, filtrada através de um filtro estéril (0,22 mícron) para proporcionar uma solução estéril adequada para administração por injeção.
[00179] As seguintes formulações ilustram composições farmacêuticas representativas da presente invenção.
Exemplo A da formulação
[00180] Uma solução congelada adequada para preparar uma solução injetável é preparada da seguinte forma:
Figure img0006
Água para Solução de Injeção
[00181] Procedimento se houver, são dissolvidos injeção e o Composto ativo 1 representativo: os excipientes, em cerca de 80% da água para ou 1’ é adicionado e dissolvido. O pH é ajustado com 1M de hidróxido de sódio para 3 a 4,5 e o volume é, depois, ajustado para 95% do volume final com água para injeção. O pH é verificado e ajustado, se necessário, e o volume é ajustado para o volume final com água para injeção. A formulação é, então, filtrada por esterilidade através de um filtro de 0,22 mícron e colocada num frasco estéril em condições assépticas. O frasco é tapado, rotulado e armazenado congelado.
Exemplo B da Formulação
[00182] Um pó liofilizado ou um sólido cristalino adequado para preparar uma solução injetável é preparado como se segue:
Figure img0007
[00183] Procedimento representativo: os excipientes e/ou agentes tampão, se houver, são dissolvidos em cerca de 60% da água para injeção. O Composto ativo 1 ou 1’ é adicionado e dissolvido e o pH é ajustado com 1 M de hidróxido de sódio para 3 a 4,5 e o volume é ajustado para 95% do volume final com água para injeção. O pH é verificado e ajustado, se necessário, e o volume é ajustado para o volume final com água para injeção. A formulação é, então, filtrada por esterilidade através de um filtro de 0,22 mícron e colocada num frasco estéril em condições assépticas. A formulação é, então, liofilizada usando um ciclo de liofilização apropriado. O frasco é tapado (opcionalmente sob vácuo parcial ou nitrogênio seco), rotulado e armazenado sob refrigeração.
Exemplo C da Formulação
[00184] Uma solução injetável para administração intravenosa a um paciente é preparada a partir do Exemplo B da Formulação acima, como se segue:
[00185] Procedimento representativo: O pó liofilizado do Exemplo B da Formulação (por exemplo, contendo 10 a 1000 mg de Composto ativo 1 ou 1’) é reconstituído com 20 mL de água estéril e a solução resultante é, ainda, diluída com 80 mL de solução salina estéril em um saco de infusão de100 mL. A solução diluída é, então, administrada ao paciente por via intravenosa durante 30 a 120 minutos. Exemplo de Composições para administração por inalação
[00186] O composto 1 (0,2 mg) é micronizado e, depois, misturado com lactose (25 mg). Esta mistura combinada é, então, carregada num cartucho de inalação de gelatina. O conteúdo do cartucho é administrado usando um inalador de pó seco, por exemplo.
[00187] Alternativamente, o Composto 1 micronizado (10 g) é disperso numa solução preparada por dissolução de lecitina (0,2 g) em água desmineralizada (200 mL). A suspensão resultante é seca por pulverização e, depois, micronizada para formar uma composição micronizada compreendendo partículas tendo um diâmetro médio inferior a cerca de 1,5 µm. A composição micronizada é, então, carregada em cartuchos de inalador de dose calibrada contendo 1,1,1,2- tetrafluoroetano pressurizado numa quantidade suficiente para proporcionar cerca de 10 µg a cerca de 500 µg do composto da invenção por dose quando administrado por inalador.
[00188] Alternativamente, o Composto 1 (25 mg) é dissolvido em solução salina isotônica (pH 5) tamponada com citrato (125 mL). A mistura é agitada e sonicada até dissolver o composto. O pH da solução é verificado e ajustado, se necessário, para pH 5, adicionando lentamente 1N de NaOH aquoso. A solução é administrada usando um dispositivo nebulizador que fornece cerca de 10 µg a cerca de 500 µg de Composto 1 por dose
EXEMPLOS
[00189] As seguintes preparações e exemplos são fornecidos para ilustrar modalidades específicas da invenção. Estas modalidades específicas, no entanto, não pretendem limitar o âmbito da invenção de qualquer forma, a menos que especificamente indicado.
[00190] As abreviaturas seguintes têm os seguintes significados, a menos que indicado de outra forma e quaisquer outras abreviaturas aqui utilizadas e não definidas tenham seu significado padrão, geralmente aceito:
Figure img0008
Figure img0009
[00191] Salvo indicação em contrário, todos os materiais, tais como reagentes, materiais de partida e solventes, foram adquiridos a partir de fornecedores comerciais (tais como Sigma-Aldrich, Fluka Riedel-de Haën e outros) e foram utilizados sem purificação adicional.
[00192] As reações foram operadas sob atmosfera de nitrogênio, a menos que seja observado o contrário. O progresso das reações foi monitorado por cromatografia em camada fina (TLC), cromatografia líquida analítica de alta performance (HPLC analítico) e espectrometria de massa, cujos detalhes são dados em exemplos específicos. Geralmente, os solventes utilizados na HPLC analítica foram os seguintes: o solvente A foi 98% H2O/2% MeCN/1,0 mL/L TFA; o solvente B foi 90% MeCN/10% H2O/1,0 mL/L TFA.
[00193] As reações foram tratadas como descrito especificamente em cada preparação, por exemplo; as misturas de reação comuns foram purificadas por extração e outros métodos de purificação, tais como cristalização dependente de temperatura e solvente e precipitação. Adicionalmente, as misturas reacionais foram rotineiramente purificadas por HPLC preparativa, tipicamente, usando empacotamento de coluna BDS Microsorb e Microsorb C18 e eluentes convencionais. O progresso das reações foi tipicamente medido por cromatografia líquida de espectrometria de massa (LCMS). A caracterização de isômeros foi realizada pela espectroscopia de efeito Nuclear Overhauser (NOE). A caracterização dos produtos de reação foi rotineiramente realizada por massa e espectrometria de 1H-RMN. Para a medição de RMN, as amostras foram dissolvidas em solvente deuterado (CD3OD, CDCl3 ou DMSO-d6), e os espectros de 1H-RMN foram adquiridos com um instrumento Varian Gemini 2000 (400 MHz) sob condições de observação padrão. A identificação por espectrometria de massa de compostos foi tipicamente conduzida utilizando um método de ionização por eletropulverização (ESMS) com um instrumento modelo API 150 EX da Applied Biosystems (Foster City, CA) ou um instrumento modelo LC/MSD 1200 da Agilent (Palo Alto, CA).
Técnicas de medição Difração de raios-X no pó
[00194] A análise de difração de raios X em pó foi realizada usando um difractômetro de raios X Bruker D8- Advance. A fonte de raios-X era a radiação Cu-Ka com tensão de saída de 40 kV e corrente de 40 mA. O instrumento foi operado na geometria Bragg-Brentano e usou os espelhos Goebel para obter feixe paralelo de raios-X. Qualquer divergência no feixe foi limitada por uma fenda de divergência vertical de 0,2° na fonte e fendas Soller (2,5°) na fonte e no detector. Para a medição, uma pequena quantidade de pó (525 mg) foi suavemente pressionado sobre um suporte de amostra de silício de fundo zero para formar uma superfície lisa e submetida à exposição aos raios-X. As amostras foram varridas no modo ?-2? acoplado de 2° a 35° em 2? com um tamanho de etapa de 0,02° e uma velocidade de varredura de 0,3 segundos por etapa. A aquisição de dados foi controlada pelo software Bruker DiffracSuite e analisada pelo software Jade (versão 7.5.1). O instrumento foi calibrado com um padrão de corindo, dentro de um ângulo 2? de ± 0,02°.
[00195] Deve ter em mente que a geometria de Bragg- Brentano utilizada na coleta de dados é propensa à orientação preferida. Nessas condições, é possível que as intensidades relativas dos picos de difração possam não representar as verdadeiras intensidades relativas que seriam obtidas a partir de uma distribuição idealizada de partículas esféricas ou de um padrão de difração simulado a partir de dados de um único cristal. Também é possível que alguns picos não sejam vistos em alguns padrões de difração devido à orientação preferida extensa.
Calorimetria de Varredura Diferencial
[00196] As medições de DSC foram realizadas usando um módulo TA Instruments Modelo Q-100 com um controlador Thermal Analyst (Analista Térmico). Os dados foram coletados e analisados usando o software TA Instruments Universal Analysis. Uma amostra foi pesada com precisão em um tacho de alumínio coberta. Após um período de equilíbrio isotérmico de 5 minutos a 5°C, a amostra foi aquecida usando uma rampa de aquecimento linear de 10°C/min de 0°C até 275°C.
Análise termogravimétrica
[00197] As medições de TGA foram realizadas usando um módulo de Instrumento TA de modelo Q-500 equipado com capacidade de alta resolução. Os dados foram coletados usando o controlador Analista de Instrumentos Térmicos da TA e analisados usando o software de análise universal da TA Instruments. Uma amostra pesada foi colocada sobre um tacho de platina e digitalizada com uma taxa de aquecimento de 10°C da temperatura ambiente a 200°C. As câmaras do balanço e do forno foram purgadas com fluxo de nitrogênio durante o uso.
Microscopia de luz polarizada
[00198] Para estudos de microscopia de luz polarizada (PLM), as amostras foram examinadas sob um microscópio ótico (Olympus BX51) com filtro de luz polarizada transversalmente. As imagens foram coletadas com uma câmera PaxCam controlada pelo software PaxIt Imaging (versão 6.4). As amostras foram preparadas em lâminas de vidro com óleo mineral leve, como meio de imersão. Dependendo do tamanho das partículas, uma lente objetiva 4x, 10x ou 20x foi usada para ampliação. Avaliação de Sorção de Umidade Dinâmica
[00199] As medições de DMS foram realizadas utilizando uma microbalança atmosférica VTI, sistema SGA-100 (VTI Corp., Hialeah, FL 33016). Utilizou-se uma amostra pesada e a umidade foi o menor valor possível (perto de 0% de umidade relativa) no início da análise. A análise DMS consistiu em uma taxa de varredura de 5% de umidade relativa/etapa sobre a faixa de umidade total de 5-90%. A operação DMS foi realizada isotermicamente a 25°C. Procedimentos Sintéticos e Exemplos Comparativos
[00200] Os seguintes compostos foram sintetizados e avaliados para a atividade de inibição da enzima NEP:
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[00201] (3S, 5R)-5-(5'-Cloro-2'-fluoro-bifenil-4- ilmetil)-3-hidroximetil-3-metil-pirrolidin-2-ona (2) (201,0 g, 578 mmol) foi combinada com DCM (4020 mL) para se obter uma solução castanha clara homogênea que foi, então, resfriada até 0°C com agitação. Adicionou-se 3,4-dihidro-2H- pirano (118 mL, 1,3 mol) e ácido 4-metilbenzenossulfônico (34,8 g, 202 mmol) e a mistura foi aquecida em 18,5°C ao longo de 2 horas, depois foi agitada a 18,5°C durante a noite (>98% de conversão). A reação foi extinta com NaHCO3 aquoso saturado, e as fases foram deixadas separar. A camada orgânica foi seca com Na2SO4, depois filtrada, seguida de remoção de solvente para produzir um bruto grosso castanho escuro (~300 g), que foi dissolvido em DIPE (2 L) e agitado a 5°C durante a noite para produzir uma suspensão branca. A pasta foi filtrada e os sólidos secaram durante 2 dias para se obter o Composto 3 (113,8 g). O filtrado foi seco produzindo um óleo espesso, que foi dissolvido em DIPE (~ 100 mL) e agitado durante a noite a 5°C para isolar o Composto 3 adicional (rendimento total 225 g).
Figure img0012
[00202] O Composto 3 (208 g, 482 mmol) foi dissolvido em THF (1912 mL, 23 mol) com agitação para produzir uma solução homogênea transparente. A mistura foi purgada com nitrogênio e, depois, resfriada a -10°C. Foi adicionada 1M de NaHMDS em THF (539 mL, 539 mmol) gota a gota e a mistura foi agitada durante 30 minutos. O dicarbonato de di-t-butil (131 g, 602 mmol) dissolvido em THF (393 mL, 4,8 mol) foi adicionado gota a gota e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A reação foi resfriada instantaneamante com NH4Cl aquoso saturado (5,0 L) e EtOAc foi adicionado (3,1 L). As fases foram separadas e a camada orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado (5,0 L). As fases foram separadas e a camada orgânica foi seca sobre MgSO4. A remoção de solvente produziu um óleo espesso que após a posterior secagem durante dois dias produziu o Composto 4 (265 g) como um sólido espumado.
Figure img0013
[00203] O Composto 4 (265 g, 498 mmol) foi dissolvido em THF (1,7 L) para se obter uma solução homogênea clara e castanha clara. Adicionou-se 1,0 M de LiOH em água (1,5 L, 1,5 mol) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente ao longo de 4 horas. A reação foi completa após 6 horas, mas a mistura continuou a agitar a 15°C durante a noite. Foi adicionado EtOAc (1,7 L), e a mistura foi lavada com NH4Cl aquoso saturado (1,7 L) e as fases foram separadas. A camada orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado, separada, seca sobre Na2SO4, depois, filtrada e seca para obter o Composto 5 (300 g) sob a forma de um sólido esbranquiçado branco a amarelo (o excesso é devido ao EtOAc residual).
Figure img0014
[00204] O Composto 5 (277,0 g, 498 mmol) foi dissolvido em DMF (970 mL) para produzir uma solução incolor. Adicionou-se K2CO3 (103 g, 747 mmol) e a mistura resultante foi agitada durante 15 minutos. Adicionou-se brometo de benzil (71,1 ml, 598 mmol) numa porção e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite; Completa conversão após 20 horas. NH4Cl (6 L) e EtOAc (1 L) foram adicionados e as fases foram separadas. A camada orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado (6 L) e seca sobre Na2SO4, seguida de remoção de solvente para produzir o Composto 6 bruto (335 g), que foi utilizado diretamente na etapa seguinte.
Figure img0015
[00205] 3M de HCl (1,7 L, 5,0 mol) em CPME foram combinados com o Composto 6 (319,0 g, 498 mmol) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante mais de 24 horas, produzindo uma suspensão (> 99% de conversão). Adicionou-se CPME adicional (1,0 L) e a suspensão resultante foi agitada durante 1 hora. A mistura foi filtrada e o bolo úmido foi enxaguado com CPME (500 mL). A filtração e a secagem produziram o Composto 7 (190 g) como um bolo branco. EXEMPLO 1: Ácido (2S, 4R)-5-(5'-Cloro-2,-fluorobifenil-4- il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-:metilpentanóico (Composto 1)
Figure img0016
[00206] EtOH (576 µL, 9,9 mmol) foi dissolvido em DCM (3 mL). Adicionou-se cloreto de oxalil (1,0 mL, 12,1 mmol) e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. O solvente foi evaporado sem calor, produzindo uma solução que foi utilizada diretamente na próxima etapa. O éster benzílico do ácido (2S, 4R)-4-amino- 5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2- metilpentanóico (7) (1,0 g, 2,2 mmol) foi dissolvido em DCM (3 mL). A solução anteriormente obtida foi adicionada, seguida de DIPEA (958 µL, 5,5 mmol). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos, altura em que LC/MS mostrou a massa do produto desejado. O solvente foi removido in vácuo e o resíduo em bruto foi purificado por cromatografia de fase normal (20-95% de EtOAc/hexanos) para se obter o Composto 8 (1,0 g, 1,9 mmol) foi utilizado diretamente na etapa seguinte.
Figure img0017
[00207] O composto 8 (1,0 g, 1,9 mmol) foi combinado com 10% em peso de paládio em carbono (350 mg, 185 umol), AcOH (5 mL) e EtOAc (5 mL). A mistura foi colocada sob hidrogênio e agitada à temperatura ambiente durante 2 horas, altura em que o LC/MS mostrou a conclusão da desproteção de benzil. O palladium foi removido por filtração utilizando um filtro CR de Acrodisc PTFE de 0,2 µm e o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia de fase reversa para se obter o Composto 1 (400 mg). MS m/z [M + H]+ calculado para C23H25ClFNO6, 466,14; Encontrado 466. (2S,4R)-5-(5'-Cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il-4-(2- etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de cálcio cristalino (Composto 1')
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[00208] O Composto 1 (30 g, 64,4 mmol) foi dissolvido em EtOH de 200 provas (100 mL) e DIPEA (11,25 mL, 64,4 mmol) foi subsequentemente adicionado a esta mistura à temperatura ambiente. O sulfonato de trifluorometano de cálcio (10,89 g, 32,2 mmol) foi dissolvido em EtOH (20 mL) e adicionado gota a gota à mistura contendo o Composto 1 para formar uma pasta espessa ao longo de aproximadamente 1 hora. A pasta espessa foi, então, agitada à temperatura ambiente durante dois dias. A pasta resultante foi lentamente filtrada e seca durante dois dias para produzir 33 g de Composto 1’ com >99% pureza. Um segundo processo de formar pasta foi realizado por primeiro resfriar Composto 1' (33 g, 19,80 mmol) a 5°C. Adicionou-se, então, uma mistura de EtOH:água (7:3) fria (300 mL) e a pasta resultante foi agitada vigorosamente durante 4 dias. A pasta foi, então, lentamente filtrada e seca durante 24 horas com decapagem contínua. A pasta foi, então, seca em ar à temperatura ambiente durante mais 18 horas para produzir 29,5 g de sólido do Composto 1' com >99% de pureza. Este produto foi analisado por PXRD, DSC e TGA, como aqui descrito, e os dados gerados são apresentados nas FIGs. 1-3. (2S, 4R)-5-(5'-Cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2- etoxi-2-oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de L-Arginina Cristalina (Composto 1")
Figure img0019
o
[00209] O Composto 1 (181,6 mg) foi dissolvido em EtOH de 200 provas (0,5 mL) num frasco de vidro para proporcionar uma solução límpida. A solução foi resfriada a -20°C durante cerca de 10 minutos. Num frasco de vidro separado, a L-arginina (68 mg) foi dissolvida em 0,2 mL de água e a solução foi resfriada a 5°C durante cerca de 10 minutos. A solução límpida contendo o Composto 1 foi lentamente transferida para a solução de L-arginina. Adicionou-se mais 0,2 mL de EtOH de 200 provas ao frasco contendo anteriormente o Composto 1 e adicionou-se, ainda, o conteúdo ao frasco contendo a solução de L-arginina. As sementes de cristais de L-arginina obtidas a partir de uma reação anterior utilizando um procedimento semelhante que acabou de ser descrito foram adicionadas à solução combinada e a mistura inteira foi mantida a 5°C com agitação suave para produzir uma suspensão cristalina entre 1-2 dias. Os cristais do Composto 1" foram filtrados e analisados por PXRD, DSC e TGA, como aqui descrito, e os dados gerados são apresentados nas FIGs. 6-8. Preparação 2: (2S, 4R)-4-t-butoxicarbonilamino-5-(5'-cloro- 2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-:metilpentanoico (Composto 10)
Figure img0020
[00210] O ácido (2S, 4R)-5-(4-bromofenil)-4-t- butoxicarbonilamino-2-hidroximetil-2-metilpentanóico (1,3 g, 3,1 mmol) foi combinado com Na2CO3 (993 mg, 9,4 mmol), água (0,2 mL) e dioxano (1,5 mL). O recipiente de reação foi coberto, purgado e colocado sob nitrogênio. Pd(PPh3)4 (541 mg, 468 µmol) foi rapidamente adicionado e o vaso foi novamente purgado. A mistura foi aquecida durante 45 minutos a 90°C, altura em que a LCMS mostrou a conclusão da reação. A camada orgânica foi acidificada com 1N de HCl/água até pH ~ 4 e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, lavada com NaCl aquoso saturado e seca sobre Mg2SO4. O solvente foi removido in vácuo e o resíduo bruto foi purificado por cromatografia de fase reversa para produzir o Composto 9.
Figure img0021
[00211] O Composto 9 (1,0 g, 2,1 mmol) foi dissolvido em EtOH (4 mL) e 4N de HCl em dioxano (4 mL) e agitou-se durante 3 horas a 60°C. Os solventes foram evaporados e o resíduo bruto foi dissolvido em DCM. (BOC)2O (472 µL, 2,031 mmol) e Et3N (566 µL, 4,1 mmol) foram seguidos por DMAP (5 mg). A mistura reacional foi agitada durante 3 horas. O produto bruto foi evaporado e foi triturado com DCM e filtrado sem purificação adicional para se obter o Composto 10 (800 mg). EXEMPLO 2: Ácido (2S, 4R)-5-(5'-Cloro-2'-fluorobifenil-4- il)-2-hidroximetil-2-metil-4-(oxalilamino)pentanóico (Composto Comparativo C2)
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[00212] Etil éster do ácido (2S,4R)-4-t- butoxicarbonilamino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2- hidroximetil-2-metilpentanóico (10) (2,6 g, 5,3 mmol) foi combinado com MeCN (5 mL) e 4N de HCl em dioxano (4 mL) e agitou-se durante 15 minutos. O solvente foi removido por evaporação centrífuga para se obter o Composto 11, que foi utilizado diretamente na etapa seguinte.
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[00213] Ao composto bruto 11 (2,1 g, 5,3 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado 2-cloro-2-oxoacetato de etil (1,3 mL, 11,7 mmol), seguido da adição lenta de Et3N (2,6 mL, 18,7 mmol). A mistura resultante foi agitada durante 15 minutos e a reação foi monitorada para conclusão. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (0-100% de EtOAc/hexanos) para se obter o Composto 12, que foi utilizado diretamente na etapa seguinte.
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[00214] O Composto 12 (2,2 g, 3,7 mmol) foi combinado com THF (5 mL) e NaOH (3,7 mL, 37,0 mmol), seguido da adição de água (10 mL). A mistura resultante foi agitada durante a noite. O solvente foi evaporado, AcOH foi adicionado e o produto foi purificado por cromatografia em fase reversa para se obter o Composto Comparativo C2 (540 mg). MS m/z [M + H]+ calculado para C21H21ClFNO6, 438,10; Encontrado 438,2.
[00215] Comparação do Composto C2 é descrito no exemplo 11-2 da Patente US No. 8,691,868 de Hughes et al. Preparação 3: (3S, 5R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4- ilmetil)-3-hidroximetil-3-metilpirrolidin-2-ona (Composto 21)
Figure img0025
[00216] Uma solução de ácido (R)-2-amino-3-(4- bromofenil)propiônico (3300 g, 13,5 mol, 1,0 eq.) em MeCN (46,2 L) foi colocada num balão de reação que tinha sido purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogênio. Uma solução de NaOH (1081 g, 27,0 mol, 2,0 eq.) em água (46,2 L) foi adicionada em vários lotes a -10°C. A isto adicionou- se uma solução de dicarbonato de di-t-butil (2948 g, 13,51 mol, 1,0 eq.) em MeCN (6,6 L). A solução resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, depois concentrada in vácuo. A solução resultante foi diluída com 45 L de água/gelo. O pH da solução foi ajustado para 2 com HCl (1 mol/L). A solução resultante foi extraída com DCM (50L 3x) e as camadas orgânicas combinadas. A mistura resultante foi lavada com NaCl aquoso saturado (50 L), depois seca sobre MgSO4 e concentrada in vácuo para se obter o Composto 13 (3720 g) como um sólido branco.
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[00217] Uma solução do Composto 13 (530 g, 1,54 mol, 1,0 eq.) em dioxano (9,54 L) foi combinada com ácido (5- cloro-2-fluorofenil)borônico (348 g, 2,0 mol, 1,3 eq.), uma solução de Na2CO3 (228 g, 2,2 moles, 1,4 eq.) em água (1,1 L) e Pd(PPh3)4 (8,9 g, 7,7 mmol, 0,01 eq.) num balão de reação que tinha sido purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogênio. A solução resultante foi aquecida a refluxo durante 2,5 horas num banho de óleo, então, resfriada até à temperatura ambiente com um banho de água/gelo. A solução resultante foi diluída com EtOAc (15 L), lavada com 1N de HCl (5 L) e NaCl aquoso saturado (5 L 4x). Os orgânicos combinados foram. Então. secos sobre MgSO4 e concentrados in vácuo. O resíduo foi lavado depois com PE (1L 2x) para se obter o Composto 14 (510 g) como um óleo castanho.
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[00218] Uma solução do Composto 14 (510 g, 1,3 mol, 1,0 eq.) em DCM (5 L) foi combinada com 2,2-dimetil-1,3- dioxano-4,6-diona (205 g, 1,4 mol, 1,1 eq.) e 4 dimetilaminopiridina (237 g, 1,9 mol, 1,5 eq.) num balão de reação que tinha sido purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogênio. Uma solução de DCC (294 g, 1,4 mol, 1,1 eq.) em DCM (600 mL) foi adicionada gota a gota com agitação a -10°C. A solução resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. Os sólidos foram filtrados e o filtrado foi lavado com 1N de HCl (2 L) e NaCl aquoso saturado (3 L). Os orgânicos combinados foram secos sobre MgSO4. Os sólidos foram filtrados para produzir o Composto 15, como o filtrado, que foi utilizado na etapa seguinte diretamente sem purificação adicional.
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[00219] Uma solução do Composto 15 em DCM (7 L, bruto) foi combinada com AcOH (600 mL) num balão de reação que tinha sido purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogênio. Foi adicionado NaBH4 (88,8 g, 2,4 mol, 1,8 eq.) em vários lotes a -5°C. A solução resultante foi agitada durante 3 horas a -5°C. A reação foi, então, resfriada instantaneamente pela adição gota a gota de NaCl aquoso saturado (1 L). A solução resultante foi diluída com NaCl aquoso saturado (2 L) e a mistura resultante foi lavada com água (2L 2x), NaHCO3 aquoso saturado (1 L) e NaCl aquoso saturado (2 L). Os orgânicos combinados foram secos sobre MgSO4 e concentrados in vácuo para se obter o Composto 16 (520 g) como um óleo amarelo.
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[00220] Uma solução do Composto 16 (520 g, 1,0 mol, 1,0 eq.) em acetona/DMF(1:1) (5,2 L) foi combinada com Na2CO3 (163 g, 1,5 mol, 1,5 eq) com iodeto de metil (219 g, 1,5 mol, 1,5 eq.) num balão de reação que tinha sido purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogênio. A solução resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, depois diluída com água (15 L). Após agitação durante 1 hora, os sólidos foram coletados por filtração. O resíduo foi dissolvido em DCM (5 L). Os orgânicos combinados foram secos sobre MgSO4 e concentrados in vácuo para se obter o Composto 17 (520 g) como um sólido amarelo.
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[00221] Uma solução do Composto 17 (520 g, 1,0 mol, 1,0 eq.) em CPME (2,6 L) foi colocada num balão de reação que tinha sido purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogênio. Foi adicionada uma solução 4N de HCl em CPME (2,6 L) a -5 ° C. A solução resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, então, concentrada até metade do volume in vácuo (rendendo o Composto 18). Os sólidos foram coletados por filtração, então, lavados com uma mistura 1:2 de EtOAc e DIPE para produzir o Composto 19 (220 g), como um sólido esbranquiçado.
Figure img0031
[00222] Uma solução do Composto 19 (218 g, 602,5 mmol, 1,0 eq.) em THF (4 L) e N-metilmorfolina (170 g, 1,7 mol, 2,8 eq.) foi colocada num balão de reação que foi purgada e mantida com uma atmosfera inerte de nitrogênio. Cloroformato de 2-metilpropil (164,4 g, 1,2 mol, 2,0 eq.) foi adicionado gota a gota com agitação a -5°C. A solução resultante foi agitada durante 20 minutos a -5°C. Uma solução de NaBH4 (91,5 g, 2,4 mol, 4,0 eq.) em água (400 mL) foi, então, adicionada gota a gota com agitação a -5°C. A solução resultante foi agitada durante mais 1 hora à temperatura ambiente. A reação foi, então, resfriada instantaneamente pela adição gota a gota de 1N de HCl (2,6 L), e a mistura resultante foi agitada durante 1 hora e depois concentrada in vácuo. A mistura residual foi, então, agitada durante mais 1 hora e, então, os sólidos foram coletados por filtração. Os sólidos foram lavados com água, dissolvidos em THF, secos sobre Na2SO4 e concentrados in vácuo para se obter o Composto 21 (170 g) como um sólido branco. Preparação 4: (2S, 4R)-4-t-Butoxicarbonilamino-5-(5'-cloro- 2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-metilpentanóico (Composto 23)
Figure img0032
[00223] (3S, 5R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4- ilmetil)-3-hidroximetil-3-metilpirrolidin-2-ona (21) (5,0 g, 14,4 mmol) foi dissolvido em THF (10 mL) e colocado sob nitrogênio. A solução foi colocada em um banho de gelo. Foi adicionado NaHMDS (31,6 mL, 31,6 mmol) e a mistura foi agitada durante 10 minutos de 0°C até à temperatura ambiente. (BOC)2O (7,3 mL, 31,6 mmol) foi, então, adicionado e a mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente, momento em que a LC/MS mostrou a conclusão. A esta solução bruta foi adicionada uma solução de 10N de NaOH (21,6 ml, 216 mmol) em água para se obter um pH ~12. Foi adicionado THF adicional (~10 mL) e a solução foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, altura em que o LC/MS mostrou a conclusão. Adicionou-se EtOAc seguido de uma solução de 1N de HCl até atingir um pH de 5. A camada orgânica foi extraída, seca sobre MgSO4, filtrada e evaporada. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia de fase normal (50-100% de EtOAc/hexanos) para se obter o Composto 22 (2,5 g).
Figure img0033
[00224] O Composto 22 (550 mg, 1,2 mmol), K2CO3 (179 mg, 1,3 mmol) e brometo de benzil (154 µL, 1,3 mmol) foram combinados em DMF (6 mL) e agitados durante 3-4 horas à temperatura ambiente, altura em que LC/MS mostrou a conclusão. O solvente foi removido in vácuo e o resíduo bruto foi purificado por cromatografia de fase normal para se obter o Composto 23 (453 mg). EXEMPLO 3: Etil éster do ácido (2S, 4R)-5-(5,-Cloro-2'- fluorobifenil-4-il)-2-hidroximetil-2-:metil-4- (oxalilamino)pentanóico (Composto Comparativo C3)
Figure img0034
[00225] Adicionou-se AcOH (376 µL solução de benzil éster do ácido (2S, 4R)-4-t- butoxicarbonilamino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2- hidroximetil-2-metilpentanóico (23) (730 mg, 1,3 mmol) seguido de paládio (140 mg, 131 umol). A mistura resultante foi agitada sob hidrogênio durante 3 horas, altura em que a LCMS mostrou a conclusão da reação. A mistura foi filtrada utilizando um filtro CR de Acrodisc de PTFE de 0,2 µm e concentrada para se obter o Composto 24 (599 mg), como um líquido viscoso transparente incolor.
Figure img0035
[00226] Adicionou-se 4N e HCl em dioxano (4,8 mL, 19,3 mmol) a uma solução do Composto 24 (599 mg, 1,3 mmol) em EtOH (5 mL). A mistura resultante foi agitada a 80°C durante 3 horas, então, concentrada in vácuo para produzir um líquido incolor. O líquido bruto foi purificado por cromatografia de fase reversa (20-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para se obter o Composto 25 (455 mg) como um sal de HCl de goma branca.
Figure img0036
[00227] Adicionou-se t-butanol (574 µL, 6,0 mmol) a uma solução de cloreto de oxalil (772 µL, 9,0 mmol) em DCM (3 mL) a 0°C e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura reacional foi, então, concentrada in vácuo para dar 2-cloro-2-oxoacetato de t- butil (403 mg) como um líquido incolor transparente. O líquido foi dissolvido em DCM (2,5 mL) para preparar uma 1,0 M de solução em DCM.
[00228] Adicionou-se DIPEA (261 µL, 1,5 mmol) a uma solução de Composto 25 (236 mg, 599 µmol) em DCM (3,0 mL) seguido de 2-cloro-2-oxoacetato de t-butil (1M de solução em DCM, 659 µL, 659 µmol), e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos. Foi, então, adicionado TFA (3,0 mL) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura foi concentrada in vácuo para dar um líquido amarelo pálido claro. O líquido bruto foi purificado por cromatografia de fase reversa (20-90% de MeCN em água com 0,05% de TFA) para se obter o Composto Comparativo C3 (174 mg) como um sólido branco. MS m/z [M + H]+ calculado para C23H25ClFNO6, 466,14; Encontrado 466. Preparação 5: t-butil éster do ácido (S)-2-(4-bromobenzil)- 5-oxopirrolidina-1-carboxílico (Composto 28)
Figure img0037
[00229] A uma solução de ácido (R)-2-amino-3-(4- bromofenil)propiônico (50 g, 0,2 mol) em MeCN (700 mL) adicionou-se uma solução de NaOH (16,4 g, 0,4 mol) em água (700 mL) a -5°C. Após agitação durante 10 minutos, adicionou- se uma solução de (BOC)2O (44,7 g, 0,2 mol) em MeCN (100 mL). A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante a noite. Após a evaporação do MeCN, o resíduo foi diluído com DCM (800 mL) e acidificado com 1M de HCl a pH 2 a -5°C. Extraiu-se a fase aquosa com DCM (3x 200 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (500 mL), secas sobre Na2SO4 e concentradas para se obter o Composto 13 (66,5 g) como um sólido branco. LC-MS: 366 [M + Na], 709 [2M + Na].
[00230] A uma solução do Composto 13 (66,5 g, 193 µmol), ácido de Meldrum (33,4 g, 232 mmol) e DMAP (37,7 g, 309 mmol) em DCM anidro (600 mL) foram adicionados gota a gota uma solução de DCC (47,9 g, 232 mmol) em DCM anidro (200 mL) ao longo de 1 hora a -5°C sob nitrogênio. A mistura foi agitada a -5°C durante 8 horas, então, refrigerada durante a noite. Foram observados cristais de diciclohexilureia. A mistura foi filtrada, lavada com 5% de KHSO4 (5x 200 mL) e NaCl aquoso saturado (200 mL), então, seca sobre MgSO4 anidro sob refrigeração durante a noite. A solução foi, então, evaporada para se obter o composto bruto 26 (91 g), como um sólido amarelo claro. LC-MS: 492 [M + Na] 961 [2M + Na].
Figure img0038
[00231] A uma solução do composto bruto 26 (91 g, 193 mmol) em DCM anidro (1 L) foi adicionado AcOH (127,5 g, 2,1 mol) a -5°C sob nitrogênio. A mistura foi agitada a -5°C durante 30 minutos, então, adicionou-se NaBH4 (18,3 g, 483 mmol) em pequenas porções ao longo de 1 hora. Após agitação durante mais 1 hora a -5aC, adicionou-se NaCl aquoso saturado (500 mL). A camada orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado (2 x 300 mL) e água (2 x 300 mL), seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada para produzir o produto bruto, que foi adicionalmente purificado por lavagem com Et2O para se obter o Composto 27 (68 g) como um sólido amarelo claro. LC- MS: 478 [M + Na], 933 [2M + Na].
[00232] Uma solução do Composto 27 (68 g, 149 mmol) em tolueno anidro (500 mL) foi submetida a refluxo sob nitrogênio durante 3 horas. Após evaporação do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia (hexanos: EtOAc = 10:1) para se obter o Composto 28 (38 g) como um óleo amarelo claro. LC-MS: 376 [M + Na], 729 [2M + Na]. Preparação 6: Etil éster de ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(4- bromofenil)2-hidroxipentanóico (Composto 33)
Figure img0039
[00233] A uma solução de t-butil éster do ácido (S)- 2-(4-bromobenzil)-5-oxopirrolidina-1-carboxílico (28) (38 g, 107 mmol) em DCM anidro (250 mL) adicionou-se TFA (20 ML, 0,27 mol) a -5°C sob nitrogênio. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante a noite. Após evaporação do solvente, o resíduo foi diluído com EtOAc (300 mL) e lavado com NaHCO3 aquoso saturado (3 x 200 mL), água (200 mL), NaCl aquoso saturado (250 mL), seco sobre Na2SO4 e concentrado para se obter o Composto bruto 29 (24 g), como um sólido amarelo claro. LC-MS: 254 [M + H].
[00234] A uma solução de NaH (8,6 g, 250 mmol) em THF anidro (200 mL) adicionou-se gota a gota uma solução do Composto 29 (24 g, 94 mmol) em THF anidro (200 mL) ao longo de 30 minutos a 0°C sob nitrogênio. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. Após resfriamento até 0°C, adicionou-se gota a gota cloreto de pivaloil (18 g, 150 mmol) ao longo de 30 minutos. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A reação foi resfriada instantaneamente com NH4Cl aquoso saturado (300 mL) e extraída com EtOAc (3 x 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (300 mL), secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas para produzir o produto em bruto, que foi adicionalmente purificado por cromatografia (hexanos: EtOAc = 25:1) para se obter o Composto 30 (18 g), como um sólido amarelo claro. LC-MS: 360 (M + Na).
Figure img0040
[00235] A uma solução do Composto 30 (18 g, 53 mmol) em THF anidro (250 mL) adicionou-se gota a gota NaHMDS (47,7 mL, 96 mmol) ao longo de 30 minutos a -78°C sob nitrogênio. Após agitação a -78°C durante 90 minutos, adicionou-se gota a gota uma solução de (+)-(8,8-diclorocamforilsulfonil)- oxaziridina (31,6 g, 106 mmol) ao longo de 30 minutos. Após agitação a -78°C durante 2 horas, a reação foi resfriada com NH4Cl aquoso saturado (400 mL) e extraída com EtOAc (3 x 300 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (300 mL), secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas para dar o produto bruto que foi adicionalmente purificado por cromatografia (hexanos:EtOAc = 15:1) para se obter o Composto 31 (8,9 g ), como um sólido amarelo claro. LC-MS: 376 (M + Na).
[00236] Uma solução do Composto 31 (8,9 g, 25 mmol) em HCl concentrado (81 mL, 81 mmol) foi aquecida a 100°C durante 16 horas. A mistura foi, então, concentrada para produzir o produto bruto que foi, ainda, purificado por lavagem com Et2O para dar o composto 32 (7 g), como um sal de HCl sólido amarelo claro. LC-MS: 323 (M + H).
[00237] Uma solução do composto 32 (7 g, 22 mmol) em EtOH (10 mL) foi combinada com 8M de HCl em EtOH (120 mL, 960 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida a 50°C durante 16 horas, então, concentrada. O produto bruto foi, ainda, purificado por lavagem com Et2O para se obter o Composto 33 (6 g), como um sal de HCl sólido amarelo claro. LC-MS: 352 (M + H).
Preparação 7: t-butil éster do ácido cloro-oxo-acético (Composto 34)
[00238] O cloreto de oxalil (232 µL, 2,8 mmol) e o álcool t-butílico (228 µL) foram combinados em éter (6,7 mL) sob nitrogênio a 0°C. A mistura resultante foi agitada durante 30 minutos à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado sob vácuo para formar o Composto 34. Preparação 8: Etil éster de ácido (2R, 4R)-5-(4-bromofenil)- 4-(t-butoxiloxalil-amino)-2-hidroxipentanóico (Composto 36)
Figure img0041
[00239] O cloreto de oxalil (401 µL, 4,7 mmol) em DCM (8 mL) foi combinado com álcool t-butílico (454 µL, 4,7 mmol). Adicionou-se Et3N (198 µL, 1,4 mmol) gota a gota, e a solução resultante foi agitada durante 5 minutos. Esta solução foi, então, adicionada gota a gota a uma solução de etil éster do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(4-bromofenil)2- hidroxipentanóico (35) (150 mg, 474 µmol) e Et3N (198 µL, 1,4 mmol) em DCM (5 mL) e foi agitada até completar a reação. Os solventes foram evaporados e o bruto foi purificado por cromatografia de fase normal (20-100% de EtOAc/hexanos) para se obter o Composto 36. EXEMPLO 4: Etil éster do ácido (2R, 4R)-5-(5'-cloro-2'- fluorobifenil-4-il)-2-hidroxi-4-(oxalilamino)pentanóico (Composto Comparativo C4)
Figure img0042
[00240] O etil éster do ácido (2R, 4R)-5-(4- bromofenil)-4-(t-butoxioxalil-amino)-2-hidroxipentanóico (36) (48,5 mg, 109 µmol) foi combinado com ácido 5-cloro-2- fluorofenilborônico (22,8 mg, 131 µmol) e K2CO3 (45,2 mg, 327 µmol) em álcool t-butílico (2 mL) e água (0,3 mL). Foi adicionado SilicaCat®DPP-Pd (0,28 mmol/g de carga, 39 mg, 11 µmol) e a mistura foi aquecida a 80°C durante 15 minutos, altura em que o LC/MS mostrou o produto desejado. A mistura foi filtrada e o filtrado concentrado e purificado por HPLC preparativa para se obter o Composto Comparativo C4 (20 mg). MS m/z [M + H]+ calculado para C21H21ClFNO6, 438,10; Encontrado 438,0.
[00241] Comparação do Composto C4 é descrito no exemplo 5-6 da Patente US No. 8,691,868 de Hughes et al. Preparação 9: Etil éster do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(5'- cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (Composto 42)
Figure img0043
[00242] A uma solução de t-butil éster do ácido (S)- 2-(4-bromobenzil)-5-oxopirrolidina-1-carboxílico (28) (25 g, 70,6 mmol) em 1,4-dioxano (500 mL) foi adicionado ácido 5-cloro-2-fluorofenilborônico (24,6 g, 141 mmol), Pd(PPh3)4 (4,1 g, 3,5 mmol) e uma solução de K2CO3 (17,8 g, 141 mmol) em água (90 mL), em temperatura ambiente sob nitrogênio. Aqueceu-se a mistura a 60°C e agitou-se durante a noite. Adicionou-se água (500 mL) e evaporou-se o solvente. A mistura foi extraída com EtOAc (3 x 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (300 mL) e filtradas. O filtrado foi concentrado para produzir o produto bruto que foi purificado por cromatografia para dar o Composto 37 (22,7 g), como um sólido amarelo claro. LC-MS: 829,2 [2M + Na+].
[00243] A uma solução do Composto 37 (4,9 g, 12,1 mol) em DCM (100 mL) adicionou-se TFA (4,5 mL, 60,7 mmol) a 0°C sob nitrogênio e agitou-se durante 1 hora. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Após evaporação do solvente, o resíduo foi diluído com EtOAc (100 mL), depois lavado com NaHCO3 aquoso saturado (3 x 100 mL), água (2 x 100 mL), NaCl aquoso saturado (100 mL) e então, seco sobre Na2SO4. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado para se obter o Composto 38 bruto (combinado com um lote separado para um total de 16,9 g). LC-MS: 304 [M + H].
Figure img0044
[00244] A uma solução de NaH (2,4 g, 695 mmol) em THF (200 mL) adicionou-se gota a gota uma solução de Composto 38 (8,5 g, 278 mmol) em THF (50 mL) a 0°C sob nitrogênio. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. Após resfriamento até 0°C, adicionou-se gota a gota cloreto de pivaloil (5 g, 41,7 mmol) ao longo de 30 minutos. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 9,5 horas. A reação foi resfriada instantaneamente com NH4Cl aquoso saturado (250 mL) e extraída com EtOAc (3x400 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 e concentradas para produzir o produto bruto que foi purificado por cromatografia para se obter o Composto 39 (18 g) como um sólido amarelo. LC-MS: 388 [M + H+].
[00245] A uma solução do Composto 39 (9 g, 23,2 mmol) em THF (200 mL) adicionou-se gota a gota NaHMDS (20,9 mL, 41,8 mmol) a -78°C sob nitrogênio. Após agitação durante 1 hora a -78°C, adicionou-se gota a gota uma solução de (+)- (8,8-diclorocamforilsulfonil)oxaziridina (10,4 g, 34,8 mmol) em THF (50 mL). Após agitação a -78°C durante 1 hora, a reação foi resfriada instantaneamente com NH4Cl aquoso saturado (50 mL) e extraída com EtOAc (3x 400 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1M de HCl (400 mL), NaHCO3 aquoso saturado (400 mL) e NaCl aquoso saturado (400 mL), secas sobre Na2SO4 e concentradas para dar o produto bruto que foi purificado por cromatografia para se obter o [M + Na+].
Figure img0045
[00246] Adicionou-se uma solução do Composto 40 (8,8 g, 21,8 mmol) em EtOH (12 mL) a HC1 concentrado (200 mL) e aqueceu-se a 100°C e agitou-se durante a noite. A mistura foi, então, concentrada para dar o produto bruto que foi purificado por lavagem com Et2O (100 mL) para se obter o Composto 41, como um sal sólido de HCl (7,5 g). LC-MS: 338 [M + H+].
Figure img0046
[00247] Uma solução do Composto 41 (7,5 g, 20,1 mmol) em EtOH/HCl (100 mL) foi aquecida a 50°C durante a noite. A mistura foi concentrada e o produto bruto foi purificado por lavagem com Et2O (200 mL) para se obter o Composto 42 (6,5 g) como um sal de HC1 sólido branco. LC-MS: 366,1 [M + H+]. EXEMPLO 5: Ácido (2R, 4R)-5-(5‘-Cloro-2'-fluorobifenil-4- íl^(Composto Comparativo C5)
Figure img0047
[00248] Foi adicionado 1,0N de HCl (6 mL) ao etil éster do ácido (2R, 4R)-4-amino-5-(5'-cloro-2'- fluorobifenil-4-il)-2-hidroxipentanóico (42) (114 mg, 313 µmol) e a mistura foi agitada a 90°C durante 24 horas e, então, concentrada sob pressão reduzida. O produto de zwitterion foi combinado com Et3N (157 µL, 1,1 mmol) em DCM (6 mL), seguido pela adição de uma solução de cloreto de etilxalil (34,9 µL, 313 µmol) em DCM (2 mL) a 0°C, e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Foi adicionado NaHCO3 aquoso saturado (5 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi extraída com DCM (3 x 3 mL) e concentrada e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa para se obter o Composto Comparativo C5 (5 mg). MS m/z [M + H]+ calculado para C21H21ClFNO6, 438,10; Encontrado 438,2.
[00249] Comparação do Composto C5 é descrito no exemplo 5-14 da Patente US No. 8,691,868 de Hughes et al. EXEMPLO 6: Ácido (2R, 4R)-5-(5'-cloro-2,-fluorobifenil-4- il) -2-hidroxi-4- (oxalilamino) pentanóico(Composto Comparativo C6)
Figure img0048
[00250] O ácido (2R, 4R)-5-(5'-cloro-2'- fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2- hidroxipentanóico (C5) foi combinado com 1M de LiOH em água (2,5 mL, 2,5 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, altura em que a LCMS mostrou a conclusão da reação. O solvente foi removido sob vácuo para se obter o Composto Comparativo C6 (20,8 mg). MS m/z [M + H]+ calculado para C19H17ClFNO6, 410,07; Encontrado 410,0.
[00251] Comparação do Composto C6 é descrito no exemplo 5-5 da Patente US No. 8,691,868 de Hughes et al. EXEMPLO 7: Estudo de Estabilidade de Cristais de (2S, 4R)- 5- (5'-cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2- oxoacetamido)-2-(hidroximetil)-2-metilpentanoato de cálcio (D)
[00252] Um desafio no desenvolvimento de fármacos farmacêuticos relaciona-se com a descoberta de uma forma estável e cristalina de um fármaco com um ponto de fusão razoavelmente alto. O desafio da presente invenção era que os cristais do ácido livre do Composto 1 não podiam ser obtidos. Além disso, muitas telas de cristal falharam, com exceção de dois cristais de arginina e de cálcio de ácido (2S, 4R)-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4- (etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2-metilpentanóico foi obtido. No entanto, os cristais de arginina (ver Exemplo 1) foram deliquescentes nas condições ambientais e eram difíceis de desenvolver ainda mais. Por outro lado, os cristais de cálcio foram estáveis e fundidos em torno de 239°C. Por essa razão, um estudo de estabilidade acelerada do Composto 1' foi conduzido às temperaturas e % de umidade relativa (RH) relatadas abaixo.
Figure img0049
aEnsaio = (substância em massa/massa total) *100 =% (p/p). bPureza= (AUC de substância pura/AUC de substância impura) * 100 =% (a/a). Cnt = não testado.
[00253] Esses dados demonstram que o Composto 1' permanece relativamente estável até pelo menos três meses às temperaturas e à umidade relativa testadas. ENSAIOS
[00254] O Composto 1 e os Compostos Comparativos C2, C3, C4, C5 e C6 foram avaliados nos ensaios descritos abaixo. A tabela a seguir ilustra os metabolitos que podem ser formados a partir de um ou mais compostos que são clivados em vários locais na sua estrutura.
Figure img0050
Figure img0051
ENSAIO 1: Ensaios in vitro para a quantificação de potenciais inibidores na NEP humana e de ratos
[00255] As atividades inibitórias em neprilisina humana e de rato (EC 3.4.24.11; NEP) foram determinadas usando ensaios in vitro conforme descrito abaixo.
Extração da atividade NEP de Rins de Rato
[00256] A NEP de rato foi preparada a partir dos rins de ratos Sprague Dawley adultos. Os rins inteiros foram lavados com solução salina tamponada com fosfato frio (PBS) e trazidos em tampão de lise gelada (1% Triton X-114, 150 mM de NaCl, 50 mM de tris(hidroximetil)aminometano (Tris) pH 7,5; Bordier (1981) J. Biol. Chem. 256: 1604-1607) numa razão de 5 mL de tampão para cada grama de rim. As amostras foram homogeneizadas em gelo usando um moedor de tecido de mão polytron. Os homogeneizados foram centrifugados a 1000 x g num rotor de balde de balanço durante 5 minutos a 3°C. O sedimento foi ressuspenso em 20 mL de tampão de lise gelada e incubado em gelo durante 30 minutos. As amostras (15-20 mL) foram, então, colocadas em camadas em 25 mL de tampão de almofada gelada (sacarose a 6% p/v, 50 mM, pH 7,5, Tris, 150 mM de NaCl, 0,06%, Triton X-114), aquecida a 37°C durante 35 minutos e centrifugados a 1000 xg num rotor de balde balanço à temperatura ambiente durante 3 minutos. As duas camadas superiores foram aspiradas, deixando um precipitado viscoso contendo a fração de membrana enriquecida. Adicionou-se glicerol a uma concentração de 50% e as amostras foram armazenadas a -20°C. As concentrações de proteínas foram quantificadas utilizando um sistema de detecção de BCA com albumina de soro bovino (BSA), como padrão.
Ensaios de Inibição de Enzima
[00257] A NEP humana recombinante foi obtida comercialmente (R & D Systems, Minneapolis, MN, número de catálogo 1182-ZN). O substrato peptídico fluorogênico Mca- D-Arg-Arg-Leu-Dap-(Dnp)-OH (Medeiros et al. (1997) Braz. J. Med. Biol. Res. 30: 1157-62; Anaspec, San Jose, CA).
[00258] Os ensaios foram realizados em placas opacas brancas de 384 cavidades a 37°C utilizando o substrato de peptídeo fluorogênico a uma concentração de 10 µM em tampão de ensaio (HEPES 50 mM, pH 7,5, 100 mM de NaCl, monolaurato de sorbitano de polietilenoglicol 0,01% (Tween-20), 10 nM de ZnSO4). As enzimas respectivas foram utilizadas em concentrações que resultaram em proteólise quantitativa de 1 µM de substrato após 20 minutos a 37°C.
[00259] Os compostos de teste foram ensaiados na faixa de concentrações de 10 µM a 20 pM. Os compostos de teste foram adicionados à enzima e incubados durante 30 minutos a 37°C antes de iniciar a reação pela adição de substrato. As reações foram terminadas após 20 minutos de incubação a 37°C pela adição de ácido acético glacial a uma concentração final de 3,6% (v/v).
[00260] As placas foram lidas em um fluorômetro com comprimentos de onda de excitação e emissão ajustados para 320 nm e 405 nm, respectivamente. As constantes de inibição foram obtidas por regressão não linear dos dados usando a equação (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA):
Figure img0052
em que v é a taxa de reação, v0 é a taxa de reação desinibida, I é a concentração de inibidor e K' é a constante de inibição aparente.
Figure img0053
[00261] Estes dados mostram que o Composto 1 tem potência em NEP de rato e humano semelhante ao Composto de Comparação C2, enquanto, que o Composto Comparativo C3 tem uma potência muito baixa na enzima NEP de rato e humana em comparação com o Composto Comparativo C2. Do mesmo modo, o Composto Comparativo C5 tem potência em NEP de rato e humano semelhante ao Composto Comparativo C6, enquanto que o Composto Comparativo C4 tem baixa potência na enzima NEP de ratos e humanos em comparação com o Composto Comparativo C6.
[00262] Os compostos 1, C2, C5 e C6 têm atividade significativa na enzima NEP de rato e humana e satisfazem o limite de atividade de pKi > 9,0 para ser útil como uma utilização terapêutica como descrito acima. ENSAIO 2: Estudo de Farmacocinética PO em Ratos, Cães e Macacos
[00263] Cada estudo farmacocinético de ratos, cães ou macacos começou com a formulação do composto de teste. As massas apropriadas de cada composto de teste foram adicionadas a um volume de veículo (por exemplo, 5% de bicarbonato de sódio, 5% de dextrose em água) de tal modo que a concentração final de cada composto era apropriada para ser administrada a 2 mL/kg. Embora uma suspensão homogênea fosse aceitável para administração oral, as soluções de dosagem intravenosa foram filtradas por esterilidade (0,2 µm) antes da dosagem garantir a não administração de partículas.
[00264] No estudo de ratos, os ratos Sprague-Dawley machos pré-canulados (3 por rota) entre 8 e 10 semanas de idade foram obtidos de Harlan Laboratories (Indianapolis, IN). Os ratos receberam uma única gavagem oral ou uma única dose intravenosa (via lateral da veia da cauda) da solução de dosagem. A dose final foi tipicamente 0,5-3 mg/kg. As amostras de sangue em série foram coletadas através da cânula implantada na veia jugular em 3 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas e 24 horas pós- dose. A amostragem foi realizada manualmente ou usando amostras de sangue automatizadas. As amostras foram coletadas em tubos de microtrainer contendo fluoreto de sódio, oxalato de potássio e paraoxon (anticoagulantes e inibidor de esterase, respectivamente) e foram processadas para plasma por centrifugação refrigerada.
[00265] No estudo do cão, cães machos (3 por rota) alojados em Agilux Laboratories (Worcester, MA) e pesando entre 7 a 12 kg receberam uma única dose de gavagem oral da solução de dosagem. A dose final era tipicamente 0,1-2 mg/kg. As amostras de sangue em série foram coletadas por via venosa direta em 3 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas e 24 horas pós-dose. Todas as amostras foram coletadas manualmente em tubos de microcontainer contendo fluoreto de sódio, oxalato de potássio e paraoxon, e foram processadas para plasma por centrifugação refrigerada.
[00266] No estudo do macaco, macacos cynomolgus machos (3 por via) alojados em Xenometrics (Stilwell, KS) e com peso entre 4-5 kg, receberam uma única dose de gavagem oral da solução de dosagem. A dose final foi de 2 mg/kg. As amostras de sangue em série foram coletadas das veias cefálicas ou safenas antes da administração da dose e 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas e 24 horas pós-dose. Todas as amostras foram coletadas em tubos contendo oxalato de potássio, fluoreto de sódio e paraoxon, e foram processadas para plasma por centrifugação refrigerada.
[00267] As amostras de plasma foram extraídas com 3 volumes de MeCN contendo um padrão interno adequado. Os extratos foram reconstituídos em 3 volumes de água contendo 1% de ácido fórmico e analisados através de MS/MS acoplado a HPLC. Os dados de concentração de tempo de plasma foram analisados usando o software Phoenix (Pharsight Corp., St. Louis, MO) para calcular os parâmetros farmacocinéticos.
[00268] A biodisponibilidade oral (% F) representa a percentagem de uma dose que atinge a circulação sistêmica após uma dose oral quando comparada a uma dose intravenosa, em que a dose total é administrada diretamente na circulação sistêmica. É igual à razão da área sob a curva concentração- tempo após uma dose oral para a área sob a curva concentração-tempo após uma dose intravenosa, normalizada para qualquer diferença nos níveis de dose entre as rotas.
Figure img0054
Figure img0055
aAUCúltima é a área sob a curva de concentração plasmática versus tempo desde o tempo 0 até o tempo após a dosagem, em que a última concentração quantificável foi observada, estimada pelo método trapezoidal linear. bNormalizado dividindo AUCúltima pela dose administrada.
[00269] Esses dados mostram que o Composto Comparativo C2 (metabolito ativo do Composto 1) possui baixa biodisponibilidade oral enquanto o Composto 1 possui biodisponibilidade oral relativamente alta nos três modelos animais testados. ENSAIO 3: Estudo Farmacocinético IV/PO em Ratos e Cães
[00270] Cada estudo de farmacocinética de ratos ou cães começou com a formulação do composto de teste. As massas apropriadas de cada composto de teste foram adicionadas a um volume de veículo (por exemplo, 5% de bicarbonato de sódio, 5% de dextrose em água) de tal modo que a concentração final de cada composto era apropriada para ser administrada a 2 mL/kg. Embora uma suspensão homogênea fosse aceitável para administração oral, as soluções de dosagem intravenosa foram filtradas por esterilidade (0,2 µm) antes da dosagem para garantir que não fossem administradas particulas.
[00271] No estudo de ratos, os ratos Sprague-Dawley machos pré-canulados (3 por via) entre 8 e 10 semanas de idade foram obtidos de Harlan Laboratories (Indianapolis, IN). Os ratos receberam uma única gavagem oral ou uma única dose intravenosa (via lateral da veia da cauda) da solução de dosagem. A dose final foi tipicamente 0,5-3 mg/kg. As amostras de sangue em série foram coletadas através da cânula implantada na veia jugular em 3 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas e 24 horas pós- dose. A amostragem foi realizada manualmente ou usando amostras de sangue automatizadas. As amostras foram coletadas em tubos de microtainer contendo fluoreto de sódio, oxalato de potássio e paraoxon, e foram processados para plasma por centrifugação refrigerada.
[00272] No estudo do cão, cães machos (3 por rota) alojados em Agilux Laboratories (Worcester, MA) e pesando entre 7 a 12 kg receberam uma única gavagem oral ou uma única dose intravenosa (através de cateter permanente) da solução de dosagem. A dose final era tipicamente 0,1-2 mg/kg. As amostras de sangue em série foram coletadas por via venosa direta em 3 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas e 24 horas pós-dose. Todas as amostras foram coletadas manualmente em tubos de microcontainer contendo fluoreto de sódio, oxalato de potássio e paraoxon, e foram processados para plasma por centrifugação refrigerada.
[00273] As amostras de plasma foram extraídas com 3 volumes de MeCN contendo um padrão interno adequado. Os extratos foram reconstituídos em 3 volumes de água contendo 1% de ácido fórmico e analisados através de MS/MS acoplado a HPLC. Os dados de concentração de tempo de plasma foram analisados usando o software Phoenix (Pharsight Corp., St. Louis, MO) para calcular os parâmetros farmacocinéticos. Dados de Farmacocinéticos de Ratos
Figure img0056
aAUCúltimo é uma área sob a curva de concentração plasmática versus tempo desde o tempo 0 até o tempo após uma dosagem, em que a última concentração quantificável foi observada, estimada pelo método trapezoidal linear. bA biodisponibilidade oral é calculada como AUCúltimo da molécula ativa após administração oral do pró-fármaco, dividido por AUCúltima após administração intravenosa da molécula ativa, normalizada para qualquer diferença nas doses administradas, expressa em percentagem.
[00274] Estes dados de ratos mostram que o composto da invenção, Composto 1, resultados em exposição sistêmica significativamente maior do seu metabolito ativo do que o Composto C3, C5 ou C4 (valores de biodisponibilidade de >100%, 21%, 11% e 9%, respectivamente).
Figure img0057
[00275] Tanto para o Composto 1 como para o Composto Comparativo C5, nenhum pró-fármaco foi detectado, pelo que pode ser assumido que a conversão completa dos compostos pró-fármacos para o metabolito ativo ocorreu in vivo no rato. Ambos os compostos apresentam taxas de exposição ao metabolito maiores do que o Composto Comparativo C4(17) ou o Composto Comparativo C3 (1,2).
[00276] Estes pró-fármacos se fragmentam pela hidrólise do éster, que muitas vezes ocorre mais rapidamente em ratos do que em cães ou seres humanos. Por essa razão, o modelo de rato da hidrólise de éster nem sempre é previsível de clivagem em seres humanos. Assim, os pró-fármacos como o da invenção também devem ser avaliados em cães para obter dados previsíveis adicionais para a estimativa das taxas de clivagem em seres humanos. Dados de Farmacocinética do Cão
Figure img0058
[00277] Estes dados caninos mostram que o composto da invenção, Composto 1, resulta em biodisponibilidade oral semelhante do seu metabolito ativo ao Composto Comparativo C4 e uma biodisponibilidade muito maior do que o Composto C3 ou C5 (valores de 44%, 46%, 0% e 29 %, respectivamente).
Figure img0059
[00278] Estes dados caninos mostram que o pró-fármaco da invenção, Composto 1, produz uma exposição relativa significativamente maior à sua molécula de metabolito ativo (isto é, AUCúltima) do que qualquer outro composto ou pró- fármaco testado. Tal hidrólise de pró-fármaco rápida e extensiva proporciona uma vantagem significativa e surpreendente para o composto da invenção. No cão, o Composto 1 cliva muito mais eficientemente do que o Composto Comparativo C5, resultando em mais de 10 vezes a melhoria da razão de exposição (177 versus 13). Além disso, o Composto 1 cliva ainda mais eficientemente quando comparado com o Composto Comparativo C3 (razões de exposição de 177 versus 0). A magnitude desta diferença não poderia ter sido prevista com base na comparação da extensão da hidrólise do Composto Comparativo C5 em comparação com C4 (13 versus 1,2).
ENSAIO 4: Excreção Renal do Composto 1 em Cães Beagle Masculino
[00279] Um fator importante para garantir a dosagem de fármaco a longo prazo e as concentrações corretas de fármacos em estado estacionário nos pacientes é a depuração de fármacos. Em geral, a diminuição da liberação de fármacos resulta em maiores concentrações de fármacos e maiores efeitos de fármacos. Para entender a depuração renal do Composto 1, a percentagem de dose administrada recuperada na urina após uma única dose IV foi avaliada em cães beagle machos como descrito abaixo.
[00280] Os cães de beagle macho (N = 3), tendo pesos corporais de 9,58-10,42 kg, receberam uma dose IV de 1,0 mg/kg de Composto 1. O Composto 1 foi formulado em NaHCO3 a 5% em D5W. Os cães foram submetidos a jejum durante a noite e pré-tratados com pentagastrina (60 µg/mL, 0,1 mL/kg, IM) aproximadamente 30 minutos antes da administração da dose para estimular a secreção gástrica. O alimento foi devolvido aproximadamente 4 horas pós-dose. Foram coletadas amostras de urina cercadas por pacotes de gelo frio durante o período de coleta. Após 24 horas, o peso da amostra foi registrado, a amostra foi completamente misturada e foram alíquotas e congeladas (-80°C) antes da bioanálise.
[00281] As concentrações de urina de cão do Composto 1 foram determinadas por LC/MS/MS. As amostras de estudo de urina (diluídas no plasma) foram submetidas ao vortex e 50 µL foram colocados em uma placa de 96 cavidades. As amostras foram extraídas com acetonitrila com crisina padrão interna. O extrato foi centrifugado e o sobrenadante foi transferido para uma nova placa de 96 cavidades e diluído 1 parte de amostra em 4 partes de água com 0,2% de ácido fórmico. Amostras (12 µL) foram injetadas numa coluna Waters Acquity UPLC BEH C18 (50 x 2,1mm, 1,7 µm) com uma taxa de fluxo de 0,9 mL/min. A fase móvel A consistiu em 95:5:0,1 (v:v:v) água:acetonitrila:ácido fórmico e fase móvel B consistiu em 50:50:0,1 (v:v:v) metanol:acetonitrila:ácido fórmico. A faixa de ensaio do composto 1 foi de 0,001 a 5,00 µg/mL.
[00282] A quantidade média de urina excretada durante um período de coleta de 24 horas e o % aproximado de dose administrada excretada na urina é relatado na tabela abaixo.
Figure img0060
Figure img0061
[00283] A excreção renal do Composto 1 no cão foi de aproximadamente <0,5% da dose administrada. Estes dados indicam que o Composto 1 possui baixa excreção renal em cães do beagle macho.

Claims (21)

1. Composto, CARACTERIZADO por ser de estrutura: O
Figure img0062
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
2. Composto, CARACTERIZADO por ser ácido (2S,4R)-5- (5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2- hidroximetil-2-metilpentanóico.
3. Forma cristalina de (2S,f4R)-5-(5'-cloro-2'-fluoro- [1,1'-bifenil]-4-il)-4-(2-etoxi-2-oxoacetamido)-2- (hidroximetil)-2-metilpentanoato de cálcio, em que a forma cristalina é CARACTERIZADA por ser definida por um padrão de difração de raios X em pó compreendendo picos de difração em valores de 2? de 7,18 ± 0,2, 7,38 ± 0,2 e 7,97 ± 0,2.
4. Forma cristalina, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADA pelo padrão de difração de raios X em pó compreender ainda picos de difração em valores de 2? de 3,98 ± 0,2, 5,00 ± 0,2, 8,87 ± 0,2 e 10,91 ± 0,2.
5. Forma cristalina, de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADA pelo padrão de difração de raios X em pó compreender ainda um ou mais picos de difração adicionais em valores de 2? selecionados de 3,47 ± 0,2, 9,99 ± 0,2, 15,74 ± 0,2, 15,98 ± 0,2, e 18,98 ± 0,2.
6. Forma cristalina, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADA pela forma cristalina ser definida por um traço de calorimetria de varredura diferencial registrado a uma taxa de aquecimento de 10°C por minuto, que mostra um máximo no fluxo de calor endotérmico em uma temperatura entre 237°C e 241°C.
7. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA por compreender o composto, conforme definido na reivindicação 1 ou 2, ou a forma cristalina, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 3 a 6, e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.
8. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADA pelo veículo farmaceuticamente aceitável ser estearato de magnésio.
9. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA por compreender o composto, conforme definido na reivindicação 1 ou 2, ou a forma cristalina, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 3 a 6, e um antagonista do receptor AT1, um inibidor da enzima conversora de angiotensina, um inibidor da fosfodiesterase (PDE), um inibidor da renina, um diurético ou combinações destes, e opcionalmente um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.
10. Forma de dosagem oral, CARACTERIZADA por compreender o composto, conforme definido na reivindicação 1 ou 2, ou a forma cristalina, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 3 a 6, numa cápsula, comprimido, líquido ou suspensão.
11. Forma de dosagem oral, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADA pela forma de dosagem ser formulada para uma liberação imediata, controlada ou retardada.
12. Forma de dosagem oral, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADA pela cápsula compreender gelatina, polissacarídeo, quitosana ou polímeros sintéticos.
13. Forma de dosagem oral, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADA pela cápsula ser uma cápsula rígida compreendendo gelatina, polissacarídeos ou polímeros sintéticos.
14. Forma de dosagem oral, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADA pela cápsula compreender hidroxipropilmetilcelulose.
15. Forma de dosagem intravenosa, CARACTERIZADA por compreender o composto, conforme definido na reivindicação 1 ou 2, ou a forma cristalina, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 3 a 6, numa solução tamponada.
16. Processo para a preparação do composto, conforme definido na reivindicação 1, o processo CARACTERIZADO por compreender (a) misturar etanol e cloreto de oxalil para formar uma solução; (b) reagir o éster benzílico do ácido (2S,4R)-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2- hidroximetil-2-metilpentanóico com a solução; e (c) combinar a mistura resultante com paládio em carbono sob hidrogênio para produzir o composto, conforme definido na reivindicação 1.
17. Processo para a preparação do composto, conforme definido na reivindicação 1, o processo CARACTERIZADO por compreender: (a) dissolver o etanol em diclorometano; (b) adicionar cloreto de oxalil para formar uma solução e agitação à temperatura ambiente; (c) evaporar solvente da solução; (d) adicionar solução restante ao éster benzílico do ácido (2S,4R)-4-amino-5-(5'-cloro-2'-fluorobifenil-4-il)-2- hidroximetil-2-metilpentanóico que é primeiro dissolvido em diclorometano; (e) adicionar N,N-diisopropiletilamina e agitar à temperatura ambiente; (f) evaporar solvente para formar um sólido; (g) combinar sólido com paládio 10% em peso em carbono no solvente para formar uma mistura; (h) colocar a mistura sob hidrogênio com agitação; e (i) filtrar o paládio em carbono e secar a vácuo para produzir o composto, conforme definido na reivindicação 1.
18. Processo, de acordo com a reivindicação 17, CARACTERIZADO pelos sólidos resultantes nas etapas (f) e (i) serem purificados por cromatografia.
19. Processo para a preparação da forma cristalina, conforme definida na reivindicação 3, o processo CARACTERIZADO por compreender: (a) dissolver ácido (2S,4R)-5-(5'-cloro-2'- fluorobifenil-4-il)-4-(etoxioxalilamino)-2-hidroximetil-2- metilpentanóico em etanol e N,N-diisopropiletilamina para formar a solução A; (b) dissolver sulfonato de trifluorometano de cálcio em etanol para formar a solução B; (c) adicionar gota a gota a solução B à solução A para formar uma pasta; (d) agitar à temperatura ambiente; e (e) isolar os sólidos resultantes para produzir a forma cristalina.
20. Processo, de acordo com a reivindicação 19, CARACTERIZADO pelo fato de que o processo compreende ainda: (f) resfriar a forma cristalina a 5°C e adicionar uma mistura fria de etanol:água sob agitação vigorosa; e (g) filtrar e secar à temperatura ambiente para produzir a forma cristalina.
21. Uso de um composto, conforme definido na reivindicação 1 ou 2, ou da forma cristalina, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 3 a 6, CARACTERIZADO por ser para a fabricação de um medicamento para tratar hipertensão, insuficiência cardíaca ou doença renal.
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