ES2886973T3 - Derivado pirazolo-heteroarilo, método de preparación y uso médico del mismo - Google Patents

Abstract

Compuesto de fórmula (I): **(Ver fórmula)** o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero y diastereómero de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la que: el anillo A se selecciona del grupo que consiste en arilo y heteroarilo, preferentemente el anillo A es fenilo, G es N, X1 es alquileno, en el que el alquileno se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, alquilo, alcoxi, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo y heterociclilo, L1 se selecciona del grupo que consistes en -NR4-, -O-, -S-, -C(O)-, -S(O)m-, -N(R4)C(O)-, -C(O)N(R4)-, - N(R4)S(O)2-, -S(O)2N(R4)- y un enlace covalente, R1 se selecciona del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, haloalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo heteroarilo, en el que el alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo se sustituyen opcionalmente, cada uno independientemente, de entre uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 y - C(O)NR6R7, cada R2 es idéntico o diferente y cada uno se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halógeno, alquilo, alcoxi, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, en el que el alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo se sustituyen opcionalmente, cada uno independientemente, de entre uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, hidroxi, hdiroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 y -C(O)NR6R7, L2 es alquileno, en el que el alquileno se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 y - C(O)NR6R7, R3 se selecciona del grupo que consiste en haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 y -C(O)NR6R7, en el que el cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo se sustituyen opcionalmente, cada uno independientemente, de entre uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR8, - C(O)R8, -S(O)mR8, -NR9R10 y -C(O)NR9R10, R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, R5 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, amino, hidroxi, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, R6 y R7 son idénticos o diferentes y se seleccionan, cada uno independientemente, del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo heteroarilo, -C(O)R8, -S(O)mR8 y - C(O)NR9R10, en el que el alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo se sustituyen opcionalmente, cada uno independientemente, de entre uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, amino, ciano, nitro, hidroxi, hidroxialquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, o R6 y R7 junto con el nitrógeno al que se encuentran unidos forman un heterociclilo, en el que el heterociclilo contiene opcionalmente uno o dos heteroátomos idénticos o diferentes seleccionados del grupo que consiste en N, O y S, además de un átomo de nitrógeno, y el heterociclilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, amino, ciano, nitro, hidroxi, hidroxialquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, R8 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, amino, hidroxi, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, R9 y R10 son idénticos o diferentes y cada uno se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, amino, hidroxi, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, n es 0, 1, 2, 3 o 4, y m es 0, 1 o 2.

Description

DESCRIPCIÓN

Derivado pirazolo-heteroarilo, método de preparación y uso médico del mismo

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un nuevo derivado pirazolo-heteroarilo de fórmula (I), a un método de preparación del mismo y a una composición farmacéutica que comprende el mismo, así como a la utilización del mismo como agente terapéutico, particularmente como un agonista de TLR7.

Antecedentes de la invención

Los receptores de tipo Toll (TLR, por sus siglas en inglés) son una clase de importantes moléculas proteicas que participan en la inmunidad innata. Los TLR son receptores no catalíticos individuales transmembranales, habitualmente expresados sobre las células centinela, tales como macrófagos y células dendríticas, y pueden reconocer moléculas estructuralmente conservadas producidas por los microorganismos. Una vez dichos microorganismos han roto las barreras físicas, tales como la piel o la mucosa del tracto intestinal, resultan reconocidas por TLR, que activa respuestas celulares inmunitarias (Mahla, R.S. et al., Front. Immunol. 4: 248, 2013). La capacidad del sistema inmunitario de reconocer ampliamente los microorganismos patogénicos se debe, en parte, a la presencia generalizada de inmunorreceptores de tipo Toll (TLR).

Existen por lo menos diez TLR diferentes en los mamíferos. Se han identificado ligandos y cascadas de señalización correspondientes para algunos de dichos receptores. TLR7 es un elemento del subgrupo de TLR (TLR 3, 7, 8 y 9), localizado en el compartimiento endosómico de las células que están especializadas en la detección de ácidos nucleicos no propios. TLR7 desempeña un papel clave en la defensa antivírica mediante el reconocimiento de ARNcs (Diebold S.S. et al., Science: 303, 1529-1531, 2004 y Lund J. M. et al., PNAS 101, 5598-5603, 2004). TLR presenta un perfil de expresión restringido en el ser humano, y se expresa predominantemente en células B y células dendríticas plasmacitoides (pDC, por sus siglas en inglés) y en menor grado en monocitos. Las DC plasmacitoides son una población única de células dendríticas derivadas de linfoides (0,2% a 0,8% de las células mononucleares de sangre periférica (PBMC, por sus siglas en inglés)), que son las principales células productoras de interferón de tipo I, que secretan niveles elevados de interferón-alfa (iFNa) e interferón-beta (IFNp) en respuesta a infecciones víricas (Liu Y-J. Annu. Rev. Immunol. 23:275-306, 2005).

Varias enfermedades y trastornos están relacionados con anormalidades en las TLR, tales como melanoma, carcinoma pulmonar de células no pequeñas, carcinoma hepatocelular, carcinoma de células basales, carcinoma de células renales, mieloma, rinitis alérgica, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), colitis ulcerosa, fibrosis hepática e infecciones víricas, tales como VHB, virus Flaviviridae, VHC, VHP, VSR, SARS, VIH o influenza. Por lo tanto, la utilización de un agonista de TLR para tratar enfermedades relacionadas resulta muy prometedor. Debido a que TLR7 y TLR8 son altamente homólogos, el ligando de TLR7 en la mayoría de casos también lo es de TLR8. La estimulación de TLR8 induce principalmente la producción de citoquinas, tales como el factor a de necrosis tumoral (TNF-a) y quimioquina. El interferón a es una de los fármacos principales para el tratamiento de la hepatitis B o hepatitis C crónica, mientras que TNF-a es una citoquina proinflamatoria, y su secreción excesiva puede causar efectos secundarios graves. Por lo tanto, la selectividad de TLR7 y TLR8 resulta crucial para el desarrollo de agonistas de TLR7 en el tratamiento de enfermedades infecciosas víricas.

Actualmente existen solicitudes de patente relacionadas con los agonistas de TLR7, tales como los documentos n° WO2005025583, n° WO2007093901, n° WO2008011406, n° WO2009091032, n° WO2010077613, n° WO2010133882, n° WO2011031965 y n° WO2012080730.

El documento n°WO2016/023511 se refiere a determinados compuestos pirrolopirimidina que se utilizan como agonistas de TLR7.

Sin embargo, todavía existe una necesidad de continuar desarrollando agonistas de TLR7 que resulten más seguros y más terapéuticamente eficaces.

En vista de Los problemas técnicos anteriormente indicados, la presente invención proporciona un compuesto farmacéutico que presenta una concentración inicial más baja, mejor selectividad (selectivo para TLR7, y sin efecto de activación de TLR8), un efecto de activación más eficaz y, simultáneamente, debido a un débil efecto inhibidor de CYP que es débil, resulta un agonista de TLR7 más seguro y más eficaz.

Descripción resumida de la invención

El objetivo de la presente invención es proporcionar un compuesto de fórmula (I):

o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero y diastereómero del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

en el que:

el anillo A se selecciona del grupo que consiste en arilo y heteroarilo, preferentemente el anillo A es fenilo, G es N,

X¹ es alquileno, en el que el alquileno se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, alquilo, alcoxi, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo y heterociclilo,

L¹ se selecciona del grupo que consistes en -NR⁴-, -O-, -S-, -C(O)-, -S(O)^m-, -N(R⁴)C(O)-, -C(O)N(R⁴)-, -N(R⁴)S(O)²-, -S(O)² N(R⁴)- y un enlace covalente,

R¹ se selecciona del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, haloalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo heteroarilo, en el que el alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo se sustituyen opcionalmente, cada uno independientemente, de entre uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR⁵ , -C(O)R⁵, -S(O)^mR⁵, -NR⁶R⁷ y -C(O)NR⁶R⁷ ,

cada R² es idéntico o diferente y cada uno se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halógeno, alquilo, alcoxi, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, en el que el alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo se sustituyen opcionalmente, cada uno independientemente, de entre uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, hidroxi, hdiroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR⁵, -C(O)R⁵, -S(O)^mR⁵, -NR⁶R⁷ y -C(O)NR⁶R⁷,

L² es alquileno, en el que el alquileno se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR⁵ , -C(O)R⁵, -S(O)^mR⁵, -NR⁶R⁷ y -C(O)NR⁶R⁷ ,

R³ se selecciona del grupo que consiste en haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR⁵ , -C(O)R⁵, -S(O)^mR⁵, -NR⁶R⁷ y -C(O)NR⁶R⁷, en el que el cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo se sustituyen opcionalmente, cada uno independientemente, de entre uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR⁸ , -C(O)R⁸, -S(O)^mR⁸ , -NR⁹R¹⁰ y -C(O)NR⁹R¹⁰, R⁴ se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo,

R⁵ se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, amino, hidroxi, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo,

R⁶ y R⁷ son idénticos o diferentes y se seleccionan, cada uno independientemente, del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo heteroarilo, -C(O)R⁸, -S(O)^mR⁸ y -C(O)NR⁹R¹⁰, en el que el alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo se sustituyen opcionalmente, cada uno independientemente, de entre uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, amino, ciano, nitro, hidroxi, hidroxialquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo,

o R⁶ y R⁷ junto con el nitrógeno al que se encuentran unidos forman un heterociclilo, en el que el heterociclilo contiene opcionalmente uno o dos heteroátomos idénticos o diferentes seleccionados del grupo que consiste en N, O y S, además de un átomo de nitrógeno, y el heterociclilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, amino, ciano, nitro, hidroxi, hidroxialquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo,

R⁸ se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, amino, hidroxi, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo,

R⁹ y R¹⁰ son idénticos o diferentes y cada uno se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, amino, hidroxi, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo,

n es 0, 1, 2, 3 o 4, y

m es 0, 1 o 2.

En una realización preferente de la presente invención, en el compuesto de fórmula (I), R³ es heterociclilo, y el heterociclilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, amino, ciano, nitro, hidroxi, hdiroxialquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo.

En una realización preferente de la presente invención, en el compuesto de fórmula (I), R3 es -NR6R7, y R6 y R7 junto con el nitrógeno al que se encuentran unidos forman un heterociclilo, en el que el heterociclilo contiene opcionalmente uno o dos heteroátomos idénticos o diferentes seleccionados del grupo que consiste en N, O y S además de un átomo de nitrógeno, y el heterociclilo está sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, amino, ciano, nitro, hidroxi, hidroxialquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo.

En una realización preferente de la presente invención, en el compuesto de fórmula (I), el anillo A se selecciona del grupo que consiste en fenilo y piridilo.

En una realización preferente de la presente invención, en el compuesto de fórmula (I), el piridilo se selecciona del grupo que consiste en:

En el compuesto de fórmula (I), X1 es alquileno.

En una realización preferente de la presente invención, el compuesto de fórmula (I) es un compuesto de fórmula (II):

o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero y diastereómero del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

en el que G, L1- L2, R1~R2, R6~R7 y n son tal como se define en la fórmula (I).

En el compuesto de fórmula (I), G es N.

En el compuesto de fórmula (I), L2 es alquileno.

En una realización preferente de la presente invención, el compuesto de fórmula (I) es un compuesto de fórmula (III):

aceptable del mismo,

en el que:

s es 0, 1 o 2 ,

L1, R1- R 2 y n son tal como se define en la fórmula (I).

En una realización preferente de la presente invención, en el compuesto de fórmula (I), L1 se selecciona del grupo que consiste en -O-, -NR4-, -C(O)- y -C(O)N(R4)-, y R4 es hidrógeno o alquilo.

En una realización preferente de la presente invención, en el compuesto de fórmula (I), R1 es alquilo sustituido opcionalmente con uno o más alcoxi.

En una realización preferente de la presente invención, en el compuesto de fórmula (I), cada R2 es idéntico o diferente y cada uno es, independientemente, hidrógeno o halógeno.

Entre los compuestos típicos de la presente invención se incluyen, aunque sin limitarse a ellos:

(continuación)

(continuación)

o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o umezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I-C):

o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero y diastereómero del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

en el que:

W es un grupo protector de amino seleccionado de entre terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo o pmetoxibencilo,

X es halógeno, preferentemente cloro,

anillo A, G, X1, L2, R2~R3 y n son tal como se define en la fórmula (I).

Los compuestos de fórmula (I-C) incluyen, aunque sin limitarse a ellos:

(continuación)

(continuación)

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I-E):

o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero y diastereómero del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

en el que:

W es un grupo protector de amino seleccionado de entre terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo o pmetoxibencilo,

anillo A, G, X1, L1~L2, R1~R3 y n son tal como se define en la fórmula (I).

El compuesto de fórmula (I-E) incluye, aunque sin limitación:

(continuación)

(continuación)

(continuación)

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para la preparación del compuesto de fórmula (I-E), que comprende una etapa de:

someter un compuesto de fórmula (I-C) y un compuesto de fórmula (I-D) a una reacción de sustitución nucleofmca bajo condiciones alcalinas con el fin de obtener el compuesto de fórmula (I-E),

en el que:

W es un grupo protector de amino, preferentemente terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo o p-metoxibencilo, X es halógeno, preferentemente cloro,

L1 se selecciona del grupo que consiste en -NR4-, -O-, -S-, -C(O)N(R4)-, -S(O)2N(R4)- y un enlace covalente, anillo A, G, L2, X1, R1~R3 y n son tal como se define en la fórmula (I-E).

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para la preparación del compuesto de fórmula (I), que comprende una etapa de:

eliminar el grupo protector del compuesto de fórmula (I-E) bajo condiciones ácidas a fin de obtener el compuesto de fórmula (I),

en el que:

W es un grupo protector de amino, preferentemente terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo o p-metoxibencilo, anillo A, G, L1~L2, X1, R1~R3 y n son tal como se define en la fórmula (I).

En la presente memoria se describen además compuestos de fórmula (II-B):

o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero y diastereómero de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos,

en los que:

W es un grupo protector de amino, preferentemente terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo o p-metoxibencilo, X es halógeno, preferentemente cloro,

G, L2, R2, R6~R7 y n son tal como se define en la fórmula (II).

En la presente memoria se describen además compuestos de fórmula (II-C):

o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero y diastereómero de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos,

en los que:

W es un grupo protector de amino, preferentemente terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo o p-metoxibencilo, G, L1~L2, R1~R2, R6~R7 y n son tal como se define en la fórmula (II).

En la presente memoria se describe además un método para la preparación del compuesto de fórmula (II-C), que comprende una etapa de:

someter un compuesto de fórmula (II-B) y un compuesto de fórmula (I-D) a una reacción de sustitución nucleofilica bajo condiciones alcalinas con el fin de obtener el compuesto de fórmula (II-C),

en el que:

W es un grupo protector de amino, preferentemente terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo o p-metoxibencilo, X es halógeno, preferentemente cloro,

G, L1~L2, R1~R2, R6~R7 y n son tal como se define en la fórmula (II).

En la presente memoria se describe además un método para la preparación del compuesto de fórmula (II), que comprende una etapa de:

eliminar el grupo protector del compuesto de fórmula (II-C) bajo condiciones ácidas a fin de obtener el compuesto de fórmula (II),

en el que:

W es un grupo protector de amino, preferentemente terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo o p-metoxibencilo, G, L1~L2, R1~R2, R6~R7 y n son tal como se define en la fórmula (II).

En la presente memoria se describe además un método para la preparación del compuesto de fórmula (III), que comprende una etapa de:

eliminar el grupo protector del compuesto de fórmula (III-C) bajo condiciones ácidas a fin de obtener el compuesto de fórmula (III),

en el que:

W es un grupo protector de amino, preferentemente terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo o p-metoxibencilo, L1, R1~R2, s y n son tal como se define en la fórmula (III).

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, y uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.

El compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o la composición farmacéutica que comprende los mismos, puede utilizarse en la preparación de un medicamento para la activación de TLR7.

El compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o la composición farmacéutica que comprende los mismos, puede utilizarse en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una infección causada por un virus seleccionado del grupo que consiste en virus dengue, virus de la fiebre amarilla, virus del Nilo Occidental, virus de la encefalitis japonesa, virus de la encefalitis transmitida por garrapatas, virus Kunjin, virus de la encefalitis del valle de Murray, virus de la encefalitis de St. Louis, virus de la fiebre hemorrágica de Omsk, virus de la diarrea vírica bovina, virus Zika, VIH, VHB, VHC, VHP, VSR, SARS y virus influenza.

El compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o la composición farmacéutica que comprende los mismos puede utilizarse en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento o prevención del melanoma, carcinoma pulmonar de células no pequeñas, carcinoma hepatocelular, carcinoma de células basales, carcinoma de células renales, mieloma, rinitis alérgica, asma, EPOC, colitis ulcerosa y fibrosis hepática.

La presente invención se refiere además al compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que comprende los mismos, para la utilización como medicamento.

Los compuestos de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero de los mismos, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o la composición farmacéutica que comprende los mismos, puede utilizarse en la activación de TLR7.

La presente invención se refiere además al compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o la composición farmacéutica que comprende los mismos, para la utilización en el tratamiento de una infección causada por un virus seleccionado del grupo que consiste en virus dengue, virus de la fiebre amarilla, virus del Nilo Occidental, virus de la encefalitis japonesa, virus de la encefalitis transmitida por garrapatas, virus Kunjin, virus de la encefalitis del valle de Murray, virus de la encefalitis de St. Louis, virus de la fiebre hemorrágica de Omsk, virus de la diarrea vírica bovina, virus Zika, VIH, VHB, VHC, VHP, VSR, SARS y virus influenza.

La presente invención se refiere además al compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero del mismo, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o la composición farmacéutica que comprende los mismos, para la utilización en el tratamiento o prevención del melanoma, carcinoma pulmonar de células no pequeñas, carcinoma hepatocelular, carcinoma de células basales, carcinoma de células renales, mieloma, rinitis alérgica, asma, EPOC, colitis ulcerosa y fibrosis hepática.

El compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero y diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o la composición farmacéutica que comprende los mismos, puede utilizarse en un método para activar TLR7, que comprende administrar en el paciente que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula (I) de la presente invención, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o la composición farmacéutica que comprende los mismos.

El compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero del mismo, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o la composición farmacéutica que comprende los mismos, puede utilizarse en un método de tratamiento de una infección causada por un virus seleccionado del grupo que consiste en virus dengue, virus de la fiebre amarilla, virus del Nilo Occidental, virus de la encefalitis japonesa, virus de la encefalitis transmitida por garrapatas, virus Kunjin, virus de la encefalitis del valle de Murray, virus de la encefalitis de St. Louis, virus de la fiebre hemorrágica de Omsk, virus de la diarrea vírica bovina, virus Zika, VIH, VHB, VHC, VHP, VSR, SARS y virus influenza, que comprende administrar en el paciente que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula (I) de la presente invención, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o la composición farmacéutica que comprende los mismos.

El compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o la composición farmacéutica que comprende los mismos, puede utilizarse en un método para tratar o prevenir el melanoma, carcinoma pulmonar de células no pequeñas, carcinoma hepatocelular, carcinoma de células basales, carcinoma de células renales, mieloma, rinitis alérgica, asma, EPOC, colitis ulcerosa y fibrosis hepática, que comprende administrar en el paciente que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de fórmula (I) de la presente invención, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o la composición farmacéutica que comprende los mismos.

Las composiciones farmacéuticas que contienen el ingrediente activo pueden encontrarse en una forma adecuada para la administración oral, por ejemplo, una tableta, trocisco, suspensión acuosa o aceitosa, polvos o gránulos dispersables, emulsión, cápsulas duras o blandas, o jarabe o elixir. Pueden prepararse composiciones orales según cualquier método conocido de la técnica para la preparación de una composición farmacéutica. Dicha composición farmacéutica puede contener uno o más ingredientes seleccionados del grupo que consiste en agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes y conservantes, a fin de proporcionar una preparación farmacéutica agradable y palatable. Las tabletas contienen el ingrediente activo en mezcla con excipientes farmacéuticamente aceptables no tóxicos adecuados para la preparación de tabletas.

Una suspensión acuosa contiene el ingrediente activo en mezcla con excipientes adecuados para la preparación de una suspensión acuosa. La suspensión acuosa puede contener además uno o más conservantes, tales como etilparabeno o n-propilparabeno, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes saborizantes y uno o más agentes edulcorantes.

Puede formularse una suspensión aceitosa mediante la suspensión del ingrediente activo en un aceite vegetal. La suspensión aceitosa puede contener un espesante. Los agentes edulcorantes y agentes saborizantes anteriormente indicados pueden añadirse para proporcionar una formulación palatable.

El ingrediente activo en mezcla con los agentes dispersantes o humectantes, agente de suspensión, o uno o más conservantes, puede prepararse en forma de unos polvos o gránulos dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua. Los agentes dispersantes o humectantes y los agentes de suspensión adecuados se ejemplifican mediante los ya indicados anteriormente. También pueden añadirse excipientes adicionales, tales como agentes edulcorantes, agentes saborizantes y agentes colorantes. Dichas composiciones pueden conservarse mediante la adición de un antioxidante, tal como ácido ascórbico.

La composición farmacéutica de la presente invención también puede encontrarse en forma de una emulsión de aceite en agua.

La composición farmacéutica puede encontrarse en forma de una solución acuosa inyectable estéril. Los vehículos y solventes aceptables que pueden utilizarse son agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro sódico. La formulación inyectable estéril puede ser una microemulsión de aceite en agua inyectable estéril en la que se disuelve el ingrediente activo en la fase aceite. Por ejemplo, el ingrediente activo se disuelve en una mezcla de aceite de soja y lecitina; a continuación, la solución aceitosa se añade a una mezcla de agua y glicerol, y se procesa para formar una microemulsión. La solución o microemulsión inyectable puede inyectarse en el torrente sanguíneo del paciente mediante inyección local de bolo. Alternativamente, puede resultar ventajoso administrar la solución y microemulsión de manera que se mantenga una concentración circulante constante del compuesto de la presente invención. Con el fin de mantener dicha concentración constante, puede utilizarse un dispositivo de administración intravenosa continua. Un ejemplo de dicho dispositivo es una bomba de inyección intravenosa Deltec CADD-PLUS. TM 5400.

La composición farmacéutica puede encontrarse en forma de una suspensión acuosa o aceitosa inyectable estéril para la administración intramuscular y subcutánea. Dicha suspensión puede formularse con agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes de suspensión tal como se ha indicado anteriormente según técnicas conocidas. La formulación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril preparada en un diluyente o solvente parenteralmente aceptable no tóxico. Además, los aceites fijos estériles pueden utilizarse fácilmente como solvente o medio de suspensión.

El compuesto de la presente invención puede administrarse en forma de un supositorio para la administración rectal. Dichas composiciones farmacéuticas pueden prepararse mediante la mezcla del fármaco con un excipiente no irritante adecuado que es sólido a temperatura ambiente, aunque líquido en el recto, fundiéndose de esta manera en el recto para liberar el fármaco. Entre dichos materiales se incluyen manteca de cacao, gelatina de glicerina, aceites vegetales hidrogenados, mezclas de polietilenglicoles con diversos pesos moleculares y ésteres de ácidos grasos de polietilenglicoles.

Es bien conocido por el experto en la materia que la dosis de un fármaco depende de una diversidad de factores, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, los factores siguientes: actividad de un compuesto específico, edad del paciente, peso del paciente, salud general del paciente, comportamiento del paciente, dieta del paciente, tiempo de administración, vía de administración, tasa de excreción, combinación de fármacos y similares. Además, el tratamiento óptimo, tal como el modo de tratamiento, la dosis diaria del compuesto de fórmula (I) o el tipo de sal farmacéuticamente aceptable del mismo, puede verificarse mediante regímenes terapéuticos convencionales.

Descripción detallada de la invención

A menos que se indique lo contrario, las expresiones utilizadas en la especificación y reivindicaciones, presentan los significados proporcionados a continuación.

El término "alquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo alifático saturado, que es un grupo de cadena lineal o ramificada que comprende 1 a 20 átomos de carbono, preferentemente un alquilo que presenta 1 a 12 átomos de carbono. Entre los ejemplos no limitativos se incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, sec-butilo, npentilo, 1,1-dimetilpropilo, 1,2-dimetilpropilo, 2,2-dimetilpropilo, 1-etilpropilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, n-hexilo, 1-etil-2-metilpropilo, 1,1,2-trimetilpropilo, 1,1-dimetilbutilo, 1,2-dimetilbutilo, 2,2-dimetilbutilo, 1,3-dimetilbutilo, 2-etilbutilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo, 4-metilpentilo, 2,3-dimetilbutilo, n-heptilo, 2-metilhexilo, 3-metilhexilo, 4-metilhexilo, 5-metilhexilo, 2,3-dimetilpentilo, 2,4-dimetilpentilo, 2,2-dimetilpentilo, 3,3-dimetilpentilo, 2-etilpentilo, 3-etilpentilo, noctilo, 2,3-dimetilhexilo, 2,4-dimetilhexilo, 2,5-dimetilhexilo, 2,2-dimetilhexilo, 3,3-dimetilhexilo, 4,4-dimetilhexilo, 2-etilhexilo, 3-etilhexilo, 4-etilhexilo, 2-metil-2-etilpentilo, 2-metil-3-etilpentilo, n-nonilo, 2-metil-2-etilhexilo, 2-metil-3-etilhexilo, 2,2-dietilpentilo, n-decilo, 3,3-dietilhexilo, 2,2-dietilhexilo, y diversos isómeros ramificados de los mismos. Más preferentemente, un grupo alquilo es un alquilo inferior que presenta 1 a 6 átomos de carbono, y entre los ejemplos no limitativos se incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, sec-butilo, n-pentilo, 1 ,1-dimetilpropilo, 1,2-dimetilpropilo, 2,2-dimetilpropilo, 1-etilpropilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, n-hexilo, 1 -etil-2-metilpropilo, 1,1,2-trimetilpropilo, 1,1-dimetilbutilo, 1,2-dimetilbutilo, 2,2-dimetilbutilo, 1,3-dimetilbutilo, 2-etilbutilo, 2­ metilpentilo, 3-metilpentilo, 4-metilpentilo, 2,3-dimetilbutilo, y similares. El grupo alquilo puede estar sustituido o no sustituido. En caso de sustituirse, el grupo o grupos sustituyentes pueden sustituirse en cualquier punto de conexión disponible. El grupo o grupos sustituyentes preferentemente son uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltio, alquilamino, halógeno, tiol, hidroxi, nitro, ciano, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, cicloalcoxi, heteroalcoxi, cicloalquiltio, heterocicliltio, oxo, -OR⁵, -C(O)R⁵ , -S(O)^mR⁵, -NR⁶R⁷ y -C(O)NR⁶R⁷.

El término "alquileno" se refiere a un grupo hidrocarburo alifático lineal o ramificado saturado que presenta dos residuos derivados de la eliminación de dos átomos de hidrógeno del mismo átomo de carbono o de dos átomos de carbono diferentes del alcano parental. El alquileno lineal o ramificado presenta 1 a 20 átomos de carbono, preferentemente 1 a 12 átomos de carbono, y más preferentemente 1 a 6 átomos de carbono. Entre los ejemplos no limitativos de grupos alquileno se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, metileno (-CH²-), 1,1-etileno (-CH(CH³)-), 1,2-etileno (-CH²CH² )-, 1,1-propileno (-CH(CH²CH³ )-), 1,2-propileno (-CH²CH(CH³ )-), 1,3-propileno (-CH²CH²CH²-), 1,4-butileno (-CH²CH²CH²CH²-) y similares. El grupo alquileno puede estar sustituido o no sustituido. En caso de estar sustituido, el grupo o grupos sustituyentes pueden sustituirse en cualquier punto de conexión disponible. El grupo o grupos sustituyentes preferentemente son uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltio, alquilamino, halógeno, tiol, hidroxi, nitro, ciano, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, cicloalcoxi, heteroalcoxi, cicloalquiltio, heterocicliltio, oxo, -OR⁵, -C(O)R⁵, -S(O)^mR⁵, -NR⁶R⁷ y -C(O)NR⁶R⁷

El término "alquenilo" se refiere a un grupo hidrocarburo formado por la eliminación de uno o más átomos de hidrógeno en una molécula de olefina. El grupo alquenilo puede estar sustituido o no sustituido. En caso de estar sustituido, el grupo o grupos sustituyentes son preferentemente uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR⁵ , -C(O)R⁵, -S(O)^mR⁵, -NR⁶R⁷ y -C(O)NR⁶R⁷

El término "alquinilo" se refiere a un grupo hidrocarburo que contiene un triple enlace carbono-carbono en la molécula. El grupo alquinilo puede estar sustituido o no sustituido. En caso de estar sustituido, el grupo o grupos sustituyentes son preferentemente uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR⁵, -C(O)R⁵ , -S(O)^mR⁵ , -NR⁶R⁷ y -C(O)NR⁶R⁷

El término "cicloalquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo monocíclico o policíclico saturado o parcialmente insaturado que presenta 3 a 20 átomos de carbono, preferentemente 3 a 12 átomos de carbono, preferentemente 3 a 10 átomos de carbono, y más preferentemente 3 a 6 átomos de carbono. Entre los ejemplos no limitativos de cicloalquilo monocíclico se incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, ciclohexadienilo, cicloheptilo, cicloheptatrienilo, ciclooctilo, y similares. El cicloalquilo policíclico incluye un cicloalquilo que presenta un anillo espiro, anillos fusionados o anillos puenteados.

La expresión "grupo protector de amino" se refiere a un grupo que evita que un grupo amino reaccione en el caso de que otras partes de la molécula esté sujetas a reacción, y puede eliminarse fácilmente. Entre los ejemplos no limitativos se incluyen terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo y p-metoxibencilo y similares. Dichos grupos pueden sustituirse opcionalmente con uno a tres grupos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, alcoxi y nitro. El grupo protector de amino es preferentemente p-metoxibencilo.

El término "heterociclilo" se refiere a un grupo sustituyente hidrocarburo monocíclico o policíclico saturado o parcialmente insaturado de 3 a 20 elementos, en el que uno o más átomos anulares son heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en N, O y S(O)^m (en el que 'm' es un número entero entre 0 y 2 ), aunque excluyendo -O-O-, -O-S- o -S-S- en el anillo, siendo el resto de átomos anulares, átomos de carbono. Preferentemente, el heterocicilo presenta 3 a 12 átomos anulares, en el que 1 a 4 átomos son heteroátomos, más preferentemente 3 a 10 átomos anulares, en el que 1 a 4 átomos son heteroátomos, y más preferentemente, 5 a 6 átomos anulares, en el que 1 a 3 átomos son heteroátomos. Entre los ejemplos no limitativos de heterociclilo monocíclico se incluyen pirrolidinilo, tetrahidropiranilo, 1,2,3,6-tetrahidropiridilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiperazinilo y similares. El heterociclilo policíclico incluye un heterociclilo que presenta un anillo espiro, anillos fusionados o anillos puenteados.

El anillo del heterociclilo puede fusionarse con el anillo de arilo, heteroarilo o cicloalquilo, en el que el anillo unido a la estructura parental es heterociclilo. Entre los ejemplos no limitativos se incluyen:

El heterociclilo puede estar opcionalmente sustituido o no sustituido. En caso de estar sustituido, el grupo o grupos sustituyentes preferentemente son uno o más grupos opcionalmente seleccionados independientemente del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltio, alquilamino, halógeno, tiol, hidroxi, nitro, ciano, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, cicloalcoxi, heteroalcoxi, cicloalquiltio, heterocicliltio, oxo, -OR5, -C(O)R5, -S(O)mR5, -NR6R7 y -C(O)NR6R7.

El término "arilo" se refiere a un anillo monocíclico o policíclico de anillos fusionados totalmente de carbonos de 6 a 14 elementos (es decir, cada anillo en el sistema comparte un par contiguo de átomos de carbono con otro anillo en el sistema) que presenta un sistema de electrones n conjugado, preferentemente arilo de 6 a 10 elementos, por ejemplo, fenilo y naftilo. El anillo arilo puede estar fusionado con el anillo de heteroarilo, heterociclilo o cicloalquilo, en el que el anillo unido a la estructura parental es un anillo arilo. Entre los ejemplos no limitativos se incluyen:

El arilo puede estar sustituido o no sustituido. En caso de estar sustituido, el grupo o grupos sustituyentes preferentemente son uno o más grupos opcionalmente seleccionados independientemente del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltio, alquilamino, halógeno, tiol, hidroxi, nitro, ciano, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, cicloalcoxi, heteroalcoxi, cicloalquiltio, heterocicliltio, -OR⁵ , -C(O)R⁵, -S(O)^mR⁵ , -NR⁶R⁷ y -C(O)NR⁶R⁷

El término "heteroarilo" se refiere a un sistema heteroaromático de 5 a 14 elementos que presenta 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en O, S y N. El heteroarilo es preferentemente heteroarilo de 5 a 10 elementos, más preferentemente heteroarilo de 5 o 6 elementos, por ejemplo, furanilo, tienilo, piridilo, pirrolilo, N-alquilpirrolilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo, imidazolilo, pirazolilo, tetrazolilo y similares. El anillo heteroarilo puede estar fusionado con el anillo de arilo, heterociclilo o cicloalquilo, en el que el anillo unido a la estructura parental es un anillo heteroarilo. Entre los ejemplos no limitativos se incluyen:

El heteroarilo puede estar opcionalmente sustituido o no sustituido. En caso de estar sustituido, el grupo o grupos sustituyentes preferentemente son uno o más grupos opcionalmente seleccionados independientemente del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, alquiltio, alquilamino, halógeno, tiol, hidroxi, nitro, ciano, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, cicloalcoxi, heteroalcoxi, cicloalquiltio, heterocicliltio, -OR⁵ , -C(O)R⁵, -S(O)^mR⁵, -NR⁶R⁷ y -C(O)NR⁶R⁷.

El término "alcoxi" se refiere a un -O-(alquilo) o a un grupo -O-(cicloalquilo no sustituido), en el que el alquilo es tal como se ha definido anteriormente. Entre los ejemplos no limitativos de alcoxi se incluyen metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, ciclopropiloxi, ciclobutiloxi, ciclopentiloxi y ciclohexiloxi. El alcoxi puede estar opcionalmente sustituido o no sustituido. En caso de estar sustituido, el grupo o grupos sustituyentes son preferentemente uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, alquilo, alcoxi, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo.

El término "haloalquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno o más halógenos, en el que el alquilo es tal como se ha definido anteriormente. El término "hidroxi" se refiere a un grupo -OH.

El término "hidroxialquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno o más hidroxi, en el que el alquilo es tal como se ha definido anteriormente.

El término "halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.

El término "amino" se refiere al grupo -NH2.

El término "ciano" se refiere al grupo -CN.

El término "nitro" se refiere al grupo -NO2.

El término "oxo" se refiere al grupo =O.

El término "opcional", u "opcionalmente", se refiere a que el suceso o circunstancia indicado seguidamente puede producirse, aunque ello no resulta necesario, y la descripción incluye la situación en que el suceso o circunstancia ocurre y en los que no ocurre. Por ejemplo, "el heterociclilo sustituido opcionalmente con un alquilo" se refiere a que un grupo alquilo puede encontrarse presente, aunque no necesariamente, y dicha descripción incluye la situación en que el heterociclilo está sustituido con un alquilo y en que el heterociclilo no está sustituido con un alquilo.

El término "sustituido" se refiere a uno o más átomos de hidrógeno en un grupo, preferentemente hasta 5, más preferentemente 1 a 3 átomos de hidrógeno, sustituidos independientemente con un número correspondiente de sustituyentes. Resulta evidente que los sustituyentes únicamente existen en su posición química posible. El experto en la materia podrá determinar si la sustitución resulta posible o imposible mediante experimentos o teoría sin necesidad de esfuerzos excesivos. Por ejemplo, la combinación de amino o hidroxi que presenta átomos libres de hidrógeno y carbono que presentan enlaces insaturados (tal como olefínicos) puede resultar inestable.

Una "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de uno o más compuestos indicados en la presente memoria o sales o profármacos fisiológica/farmacéuticamente aceptables de los mismos con otros componentes químicos, y otros componentes, tales como portadores y excipientes fisiológica/farmacéuticamente aceptables. El propósito de la composición farmacéutica es facilitar la administración de un compuesto en un organismo, lo que conduce a la absorción del ingrediente activo de manera que muestre actividad biológica.

Una "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sal del compuesto de la presente invención que resulta seguro y eficaz en mamíferos y que presenta la actividad biológica deseada.

m y R5 a R7 son tal como se define en el compuesto de fórmula (I).

Método de síntesis del compuesto de la presente invención

Con el fin de conseguir el objetivo de la presente invención, la presente invención utiliza las soluciones técnicas siguientes:

Esquema I

Un método para preparar el compuesto de fórmula (I) de la presente invención o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero del mismo, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, que comprende las etapas de:

en la primera etapa, un compuesto de fórmula (I-A) y un compuesto de fórmula (I-B) se someten a una reacción de sustitución nucleofílica bajo condiciones alcalinas para obtener un compuesto de fórmula (I-C),

en la segunda etapa, un compuesto de fórmula (I-C) y un compuesto de fórmula (I-D) se someten a una reacción de sustitución nucleofílica bajo condiciones alcalinas para obtener un compuesto de fórmula (I-E),

en la tercera etapa, el grupo protector del compuesto de fórmula (I-E) se elimina bajo condiciones ácidas, obteniendo el compuesto de fórmula (I),

en la que:

M es un hidrógeno o un ion metálico, en el que el ion metálico es preferentemente ion sodio,

W es un grupo protector de amino, preferentemente terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo o p-metoxibencilo, X es halógeno, preferentemente cloro,

anillo A, G, L1~L2, X1, R1~R3 y n son tal como se define en la fórmula (I).

El reactivo que proporciona condiciones alcalinas incluye bases orgánicas y bases inorgánicas. Entre las bases orgánicas se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, trietilamina, N,N-diisopropiletilamina, n-butil-litio, diisopropilamida de litio, bis(trimetilsilil)amina de litio, acetato potásico, terc-butóxido sódico, terc-butóxido potásico y n-butóxido sódico. Entre las bases inorgánicas se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, hidruro sódico, fosfato potásico, carbonato sódico, carbonato potásico, acetato potásico, carbonato de cesio, hidróxido sódico e hidróxido de litio.

El reactivo que proporciona condiciones ácidas incluye, aunque sin limitación, cloruro de hidrógeno, una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano, ácido trifluoroacético, ácido fórmico, ácido acético, ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido metanosulfónico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido p-toluenosulfónico, Me3SiCl y TMSOTf.

Las reacciones anteriormente indicadas preferentemente se llevan a cabo en un solvente. El solvente incluye, aunque sin limitación, ácido acético, metanol, etanol, n-butanol, tolueno, tetrahidrofurano, diclorometano, éter de petróleo, acetato de etilo, n-hexano, dimetilsulfóxido, 1,4-dioxano, agua y N,N-dimetilformamida.

Esquema II

Un método para preparar el compuesto de fórmula (II) de la presente invención o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, que comprende las etapas de:

en la primera etapa, un compuesto de fórmula (I-A) y un compuesto de fórmula (II-A) se someten a una reacción de sustitución nucleofílica bajo condiciones alcalinas, obteniendo un compuesto de fórmula (II-B), en la segunda etapa, el compuesto de fórmula (II-B) y un compuesto de fórmula (I-D) se someten a una reacción de sustitución nucleofílica bajo condiciones alcalinas, obteniendo un compuesto de fórmula (II-C), en la tercera etapa, el grupo protector del compuesto de fórmula (II-C) se elimina bajo condiciones ácidas, obteniendo el compuesto de fórmula (II),

en la que:

M es un hidrógeno o un ion metálico, en el que el ion metálico es preferentemente ion sodio,

W es un grupo protector de amino, preferentemente terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo o p-metoxibencilo, X es halógeno, preferentemente cloro,

G, L1~L2, R1~R2, R6~R7 y n son tal como se define en la fórmula (II).

El reactivo que proporciona condiciones alcalinas incluye bases orgánicas y bases inorgánicas. Entre las bases orgánicas se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, trietilamina, N,N-diisopropiletilamina, n-butil-litio, diisopropilamida de litio, bis(trimetilsilil)amina de litio, acetato potásico, terc-butóxido sódico, terc-butóxido potásico y n-butóxido sódico. Entre las bases inorgánicas se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, hidruro sódico, fosfato potásico, carbonato sódico, carbonato potásico, acetato potásico, carbonato de cesio, hidróxido sódico e hidróxido de litio.

El reactivo que proporciona condiciones ácidas incluye, aunque sin limitación, cloruro de hidrógeno, una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano, ácido trifluoroacético, ácido fórmico, ácido acético, ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido metanosulfónico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido p-toluenosulfónico, Me^aSiCl y TMSOTf.

Las reacciones anteriormente indicadas preferentemente se llevan a cabo en un solvente. El solvente incluye, aunque sin limitación, ácido acético, metanol, etanol, n-butanol, tolueno, tetrahidrofurano, diclorometano, éter de petróleo, acetato de etilo, n-hexano, dimetilsulfóxido, 1,4-dioxano, agua y N,N-dimetilformamida.

Esquema III

Un método para preparar el compuesto de fórmula (III) de la presente invención o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los

en la primera etapa, un compuesto de fórmula (I-A) y un compuesto de fórmula (III-A) se someten a una reacción de sustitución nucleofílica bajo condiciones alcalinas, obteniendo un compuesto de fórmula (III-B), en la segunda etapa, el compuesto de fórmula (III-B) y un compuesto de fórmula (I-D) se someten a una reacción de sustitución nucleofílica bajo condiciones alcalinas, obteniendo un compuesto de fórmula (III-C), en la tercera etapa, el grupo protector del compuesto de fórmula (III-C) se elimina bajo condiciones ácidas, obteniendo el compuesto de fórmula (III),

en la que:

M es un hidrógeno o un ion metálico, en el que el ion metálico es preferentemente ion sodio,

W es un grupo protector de amino, preferentemente terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo o p-metoxibencilo, X es halógeno, preferentemente cloro,

L¹, R¹~R² , s y n son tal como se define en la fórmula (III).

El reactivo que proporciona condiciones alcalinas incluye bases orgánicas y bases inorgánicas. Entre las bases orgánicas se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, trietilamina, N,N-diisopropiletilamina, n-butil-litio, diisopropilamida de litio, bis(trimetilsilil)amina de litio, acetato potásico, terc-butóxido sódico, terc-butóxido potásico y n-butóxido sódico. Entre las bases inorgánicas se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, hidruro sódico, fosfato potásico, carbonato sódico, carbonato potásico, acetato potásico, carbonato de cesio, hidróxido sódico e hidróxido de litio.

El reactivo que proporciona condiciones ácidas incluye, aunque sin limitación, cloruro de hidrógeno, una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano, ácido trifluoroacético, ácido fórmico, ácido acético, ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido metanosulfónico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido p-toluenosulfónico, Me^aSiCl y TMSOTf.

Las reacciones anteriormente indicadas preferentemente se llevan a cabo en un solvente. El solvente incluye, aunque sin limitación, ácido acético, metanol, etanol, n-butanol, tolueno, tetrahidrofurano, diclorometano, éter de petróleo, acetato de etilo, n-hexano, dimetilsulfóxido, 1,4-dioxano, agua y N,N-dimetilformamida.

Realizaciones preferentes

La presente invención se describe adicionalmente en referencia a los ejemplos siguientes, aunque los ejemplos no deben considerarse limitativos del alcance de la presente invención.

Ejemplos

Se identificaron las estructuras de los compuestos mediante resonancia magnética nuclear (RMN) y/o espectrometría de masas (EM). Los desplazamientos de RMN (8) se expresan en 10^{' 6} (ppm). La RMN se determinó con un aparato Bruker AVANCE-400. Los solventes para la determinación fueron dimetilsulfóxido deuterado (DMSO-c^fe), cloroformo deuterado (CDCl^a ) y metanol deuterado (CD³OD), y el estándar interno era tetrametilsilano (TMS).

La EM se determinó con un espectrómetro de masas FINNIGAN LCQAd (ESI) (fabricante: Thermo, tipo: Finnigan LCQ advantage MAX).

La cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) se determinó en los cromatógrafos líquidos de alto rendimiento Agilent HPLC 1200DAD, Agilent HPLC 1200VWD y Waters HPLC e2695-2489.

Se determinó la HPLC quiral en un cromatógrafo líquido de alto rendimiento Agilent HPLC 1260 DAD.

La preparacion líquida de alto rendimiento se llevó a cabo en cromatógrafos preparativos Waters 2767, Waters 2767-SQ Detecor2, Shimadzu LC-20AP y Gilson-281.

La preparación quiral se llevó a cabo en un cromatógrafo preparativo Shimadzu LC-20AP.

El instrumento de preparación rápida CombiFlash utilizado fue un Combiflash Rf200 (TELEDYNE ISCO).

Se utilizó una placa de gel de sílice Yantai Huanghai HSGF254 o Qingdao GF254 como placa de cromatografía de gel de sílice de capa fina (TLC, por sus siglas en inglés). Las dimensiones de la placa de gel de sílice utilizadas en la TLC fueron de 0,15 mm a 0,2 mm y las dimensiones de la placa de gel de sílice utilizada en la purificación del producto fue de 0,4 mm a 0,5 mm.

Se utilizó generalmente gel de sílice Yantai Huanghai de 200 a 300 de malla como portador para la cromatografía de columna.

Se determinaron las tasas medias de inhibición de quinasa y valores de IC⁵⁰ con un ELISA NovoStar (BMG Co., Alemania).

Los materiales de partida conocidos de la presente invención pueden prepararse mediante métodos de la técnica conocidos, o pueden adquirirse de ABCR GmbH & Co. KG, Acros Organnics, Aldrich Chemical Company, Accela ChemBio Inc., o Dari chemical Company, etc.

A menos que se indique lo contrario, las reacciones se llevaron a cabo bajo una atmósfera de argón o una atmósfera de nitrógeno.

La atmósfera de argón o la atmósfera de nitrógeno implica que el matraz de reacción está dotado de un balón de argón o nitrógeno (de aproximadamente 1 l).

Una atmósfera de hidrógeno se refiere a que el matraz de reacción está dotado de un balón de hidrógeno (de aproximadamente 1 l).

Se llevaron a cabo reacciones presurizadas de hidrogenación en un instrumento de hidrogenación Parr 3916EKX y en un generador de hidrógeno Quinglan QL-500 o en un instrumento de hidrogenación HC2-SS.

En las reacciones de hidrogenación, el sistema de reacción generalmente se sometió a vacío y se llenó con hidrógeno, repitiendo la operación anteriormente indicada tres veces.

Se utilizó un reactor de microondas de tipo CEM Discover-S 908860 en las reacciones de microondas.

A menos que se indique lo contrario, la solución se refiere a una solución acuosa.

A menos que se indique lo contrario, la temperatura de reacción es la temperatura ambiente, de 20°C a 30°C.

El procedimiento de reacción en los ejemplos se monitorizó mediante cromatografía de capa fina (TLC). El solvente de revelado utilizado en las reacciones, el sistema de elución en la cromatografía de columna y el sistema de solventes de revelado en la cromatografía de capa fina para la purificación de los compuestos incluían: A: sistema de diclorometano/metanol, y B: sistema de n-hexano/acetato de etilo. La proporción de volúmenes de solventes se ajustó según la polaridad de los compuestos y también puede añadirse una pequeña cantidad de reactivo alcalino, tal como trietilamina o reactivo ácido, tal como ácido acético, para el ajuste.

Ejemplo 1

6-ButoxM-(4-(pirrolidín-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-4-amina

Etapa 1

6-Cloro-W-(4-metox¡benc¡l)-1 H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡dín-4-am¡na 1c

Se d¡solv¡ó 4,6-d¡cloro-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡na 1a (120 mg, 0.63 mmol), 4-metox¡benc¡lam¡ne 1b (87,1 mg, 0,63 mmoles) y tr¡et¡lam¡na (64,13 mg, 0,63 mmoles) en 2 ml de tetrah¡drofurano, y la soluc¡ón de reacc¡ón se somet¡ó a ag¡tac¡ón a temperatura amb¡ente durante 1 hora. Se detuvo la reacc¡ón y la soluc¡ón de reacc¡ón se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna de gel de síl¡ce con el s¡stema de eluc¡ón A, obten¡endo el compuesto del título 1c (140 mg, rend¡m¡ento: 76,1%).

EM m/z (ESI): 290,2 [M+1]

Etapa 2

6-Cloro-W-(4-metox¡benc¡l)-1-(4-(p¡rrol¡dín-1-¡lmet¡l)benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d ]p¡r¡m¡dín-4-am¡na 1e

El compuesto 1c (140 mg, 0,48 mmoles), 1-(4-(cloromet¡l)benc¡l)p¡rrol¡d¡na 1d (101,34 mg, 0,48 mmoles, preparado según el método dado a conocer en la sol¡c¡tud de patente n° WO2002012224) y carbonato potás¡co (66,79 mg, 0,48 mmoles) se d¡solv¡eron en 2 ml de W,A/-d¡met¡lformam¡da. La reacc¡ón se detuvo después de la ag¡tac¡ón a temperatura amb¡ente durante 16 horas. Se concentró la soluc¡ón de reacc¡ón bajo pres¡ón reduc¡da y el res¡duo se pur¡f¡có med¡ante cromatografía de columna de gel de síl¡ce con el s¡stema de eluc¡ón A, obten¡endo el compuesto del título 1e (70 mg, rend¡m¡ento: 31,3%).

EM m/z (ESI): 463,2 [M+1]

Etapa 3

6-Butox¡-W-(4-metox¡benc¡l)-1-(4-(p¡rrol¡dín-1-¡lmet¡l)benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d ]p¡r¡m¡dín-4-am¡na 1f

Se añad¡ó compuesto 1e (70 mg, 0,15 mmoles), n-butóx¡do sód¡co (0,3 ml, 0,60 mmoles) y 1 ml de n-butanol a un tubo de m¡croondas sucesivamente, se calentaron a 160°C y se somet¡eron a ag¡tac¡ón durante 15 horas. Se detuvo la reacc¡ón y la soluc¡ón de reacc¡ón se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna de gel de síl¡ce con el s¡stema de eluc¡ón A, obten¡endo el compuesto del título 1f (40 mg, rend¡m¡ento: 52,8%).

EM m/z (ESI): 501,2 [M+1]

Etapa 4

6-Butox¡-1-(4-(p¡rrol¡dín-1-¡lmet¡l)benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡dín-4-am¡na 1

Se añadió el compuesto 1f (40 mg, 0,08 mimóles) y 2 ml de ácido trifluoroacético a un matraz de reacción, se calentó bajo reflujo y se sometió a agitación durante 24 horas. Se detuvo la reacción y la solución de reacción se concentró bajo presión reducida y se añadió a 1 ml de amonio en metanol. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice con el sistema de elución A, obteniendo el compuesto del título 1 (15 mg, rendimiento: 46,0%). EM m/z (ESI): 381,2 [M+1]

RMN ¹H (400MHz, CD³OD) 87,98 (s, 1H), 7,41 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 5,48 (s, 2H), 4,39 (t, 2H), 4,13 (s, 2H), 3,12-3,08 (m, 4H), 2,02-1,98 (m, 4H), 1,80-1,76 (m, 2H), 1,55-1,49 (m, 2H), 1,01 (t, 3H).

Ejemplo 2

1-(4-(Azetidm-1-ilmetil)bencil)-6-butoxi-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidm-4-amina 2

Etapa 1

4-(Azetidín-1-ilmetil)benzoato de metilo 2c

Se disolvió 4-(bromometil)benzoato de metilo 2a (1,0 g, 4,37 mmoles), azetidina 2b (299 mg, 5,24 mmoles) y trietilamina (529 mg, 5,24 mmoles) en 10 ml de tetrahidrofurano y la solución de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 16 horas. A la solución de reacción se añadió agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La fase orgánica se lavó con solución saturada de cloruro sódico (100 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró. El filtrado se concentró bajo presión reducida, obteniendo el compuesto del título 2c en bruto (880 mg), que se utilizó directamente en la etapa siguiente sin purificación.

EM m/z (ESI): 206,1 [M+1]

Etapa 2

4-(Azetidín-1-ilmetil)fenilcarbinol 2d

El compuesto en bruto 2c (880 mg, 0,33 mmoles) se disolvió en 10 ml de éter dietílico, se añadió hidruro de litioaluminio (326 mg, 8,57 mmoles) a 0°C y la solución de reacción se sometió a agitación a 0°C durante 2 horas. Se añadió sucesivamente 0,3 ml de agua, 0,3 ml de solución de hidróxido sódico al 15% y 0,9 ml de agua para desactivar la reacción. Se filtró la solución de reacción y el filtrado se concentró bajo presión reducida, obteniendo el compuesto del título 2d en bruto (700 mg), que se utilizó directamente en la etapa siguiente sin purificación.

EM m/z (ESI): 178,3 [M+1]

Etapa 3

1-(4-(Clorometil)bencil)azetidina 2e

El compuesto en bruto 2d (700 mg, 3,95 mimóles) se disolvió en 10 ml de diclorometano, se añadió cloruro de tionilo (0,58 ml, 7,90 mmoles) a 0°C y la solución de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 3 horas. La solución de reacción se concentró bajo presión reducida y el residuo resultante se añadió con solución saturada de carbonato sódico (50 ml) y se extrajo con diclorometano (l00 ml x 2). Se agruparon las fases orgánicas, se secaron sobre sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró bajo presión reducida, obteniendo el compuesto del título 2e en bruto (720 mg), que se utilizó directamente en la etapa siguiente sin purificación.

EM m/z (ESI): 197,2 [M+1]

Etapa 4

1-(4-(Azetidm-1-ilmetil)bencil)-6-cloro-W-(4-metoxibencil)-1H-pirazolo[3,4-d]p yrimidin-4-amina 2f

Se disolvió compuesto 1c (600 mg, 2,07 mmoles), el compuesto en bruto 2e (405 mg, 2,07 mmoles) y carbonato potásico (286 mg, 2,07 mmoles) en 10 ml de N,N-dimetilformamida, y la solución de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 16 horas. Se concentró la solución de reacción bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice con el sistema de elución A, obteniendo el compuesto del título 2f (300 mg, rendimiento: 32,3%).

EM m/z (ESI): 449,2 [M+1]

Etapa 5

1-(4-(Azetidm-1-ilmetil)bencil)-6-butoxi-W-(4-metoxibencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-4-amina 2g

Se añadió compuesto 2f (150 mg, 0,33 moles), n-butóxido sódico (0,7 ml, 1,40 mmoles) y 2 ml de n-butanol a un tubo de microondas sucesivamente, se calentaron a 160°C y se sometieron a agitación durante 1,5 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice con el sistema de elución A, obteniendo el compuesto del título 2g (60 mg, rendimiento: 36,9%).

EM m/z (ESI): 487,3 [M+1]

Etapa 6

1-(4-(Azetidm-1-ilmetil)bencil)-6-butoxi-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-4-amina 2

Se añadió el compuesto 2g (60 mg, 0,12 mmoles) y 2 ml de ácido trifluoroacético a un matraz de reacción, se calentó bajo reflujo y se sometió a agitación durante 24 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. A la mezcla de reacción se añadió una solución 7 N de amonio en metanol (1 ml) y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (Waters-2767, sistema de elución: bicarbonato amónico 10 mmoles/l, agua y acetonitrilo), obteniendo el compuesto del título 2 (15 mg, rendimiento: 33,2%).

EM m/z (ESI): 367,2 [M+1]

RMN ¹H (400 MHz, CD³OD) 67,97 (s, 1H), 7,34-7,26 (m, 4H), 5,44 (s, 2H), 4,39 (t, 2H), 3,77 (s, 2H), 3,47 (t, 4H), 2,22­ 2,18 (m, 2H), 1,80-1,76 (m, 2H), 1,55-1,49 (m, 2H), 1,01 (t, 3H).

Ejemplo 3

6-Butoxi-1-(4-(piperidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-4-amina 3

Etapa 1

1 -(4-(Clorometil)bencil)piperidina 3b

Se disolvió 4-(piperidín-1-ilmetil)fenilcarbinol 3a (1,17 g, 5,70 mimóles, preparado según el método conocido que se da a conocer en Journal of Medicinal Chemistry 46(8), 1523-1530, 2003) en 20 ml de diclorometano, se añadió cloruro de tionilo (0,83 ml, 11,4 mmoles) a 0°C, y la solución de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 3 horas. La solución de reacción se calentó hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. A la solución de reacción se añadió solución saturada de carbonato sódico (50 ml) y se extrajo con diclorometano (100 ml x 2). Se agruparon las fases orgánicas, se secaron sobre sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró bajo presión reducida, obteniendo el compuesto del título 3b en bruto (1,2 g), que se utilizó directamente en la etapa siguiente sin purificación.

EM m/z (ESI): 224,2 [M+1]

Etapa 2

6-Cloro-W-(4-metoxibencil)-1-(4-(pipendm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidín-4-amina 3c

Se disolvió compuesto 1c (1,5 g, 5,18 mmoles), el compuesto en bruto 3b (1,16 g, 5,18 mmoles) y carbonato potásico (716 mg, 5,18 mmoles) en 20 ml de N,N-dimetilformamida, y la solución de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 16 horas. Se concentró la solución de reacción bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice con el sistema de elución A, obteniendo el compuesto del título 3c (400 mg, rendimiento: 16,2%).

EM m/z (ESI): 477,3 [M+1]

Etapa 3

6-Butoxi-W-(4-metoxibencil)-1-(4-(piperidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidín-4-amina 3d

Se añadió compuesto 3c (100 mg, 0,21 mmoles), n-butóxido sódico (0,2 ml, 0,80 mmoles) y 1 ml de n-butanol a un tubo de microondas sucesivamente, se calentaron a 160°C y se sometieron a agitación durante 1,5 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice con el sistema de elución A, obteniendo el compuesto del título 3d (50 mg, rendimiento: 46,3%).

EM m/z (ESI): 515,3 [M+1]

Etapa 4

6-Butoxi-1-(4-(piperidín-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-4-amina 3

Se añadió el compuesto 3d (60 mg, 0,12 mimóles) y 2 ml de ácido trifluoroacético a un matraz de reacción. La solución de reacción se calentó bajo reflujo y se sometió a agitación durante 24 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. A la mezcla de reacción se añadió una solución 7 N de amonio en metanol (1 ml) y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía de capa fina con el sistema de revelado A, obteniendo el compuesto del título 3 (20 mg, rendimiento: 49,5%).

EM m/z (ESI): 395,3 [M+1]

RMN ¹H (400 MHz, CD³OD) 87,99 (s, 1H), 7,47-7,38 (m, 4H), 5,49 (s, 2H), 4,39 (t, 2H), 4,18 (s, 2H), 3,09-3,00 (m, 4H), 1,81-1,76 (m, 6H), 1,68-1,62 (m, 2H), 1,55-1,49 (m, 2H), 1,00 (t, 3H).

Ejemplo 4

6-Butoxi-1-(3-(pirrolidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidm-4-amina 4

Etapa 1

6-Cloro-W-(3-metoxibencil)-1-(4-(pirrolidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d ]pirimidín-4-amina 4b

El compuesto 1c (1,0g, 3,45 mmoles), 1-(3-(clorometil)bencil)pyrrolidine 4a (724 mg, 3,45 mmoles, preparado según el método dado a conocer en la solicitud de patente n° WO2016040419) y carbonato potásico (377 mg, 3,45 mmoles) se disolvieron en 10 ml de W,A/-dimetilformamida. La reacción se detuvo después de la agitación a temperatura ambiente durante 16 horas. Se concentró la solución de reacción bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice con el sistema de elución A, obteniendo el compuesto del título 4b (300 mg, rendimiento: 18,7%).

EM m/z (ESI): 463,2 [M+1]

Etapa 2

6-Butoxi-W-(3-metoxibencil)-1-(4-(pirrolidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d ]pirimidín-4-amina 4c

Se añadió compuesto 4b (300 mg, 0,65 moles), n-butóxido sódico (1,3 ml, 2,60 mmoles) y 2 ml de n-butanol a un tubo de microondas sucesivamente, se calentaron a 160°C y se sometieron a agitación durante 1,5 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice con el sistema de elución A, obteniendo el compuesto del título 4c (140 mg, rendimiento: 43,1%).

EM m/z (ESI): 501,2 [M+1]

Etapa 3

6-Butoxi-1-(3-(pirrolidín-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-4-amina 4

Se añadió el compuesto 4c (140 mg, 0,08 mimóles) y 2 ml de ácido trifluoroacético a un matraz de reacción, se calentó bajo reflujo y se sometió a agitación durante 24 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. A la mezcla de reacción se añadió una solución 7 N de amonio en metanol (1 ml) y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (Waters-2767, sistema de elución: bicarbonato amónico 10 mmoles/l, agua y acetonitrilo), obteniendo el compuesto del título 4 (60 mg, rendimiento: 56,3%).

EM m/z (ESI): 381,2 [M+1]

RMN ¹H (400 MHz, CD³OD) 87,98 (s, 1H), 7,35-725 (m, 4H), 5,47 (s, 2H), 4,39 (t, 2H), 3,81 (s, 2H), 2,76-2,70 (m, 4H), 1,98-1,93 (m, 4H), 1,79-1,76 (m, 2H), 1,55-1,50 (m, 2H), 1,01 (t, 3H).

Ejemplo 5

1-(3-(Azetidm-1-ilmetil)bencil)-6-butoxi-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidm-4-amina 5

Etapa 1

3-(Azetidín-1-ilmetil)benzoato de metilo 5b

Se disolvió 3-(bromometil)benzoato de metilo 5a (1,0 g, 4,37mmoles), azetidina 2b (299 mg, 5,24 mmoles) y trietilamina (529 mg, 5,24 mmoles) en 10 ml de tetrahidrofurano y la solución de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 16 horas. A la solución de reacción se añadió agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La fase orgánica se lavó con solución saturada de cloruro sódico (100 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró. El filtrado se concentró bajo presión reducida, obteniendo el compuesto del título 5b en bruto (840 mg), que se utilizó directamente en la etapa siguiente sin purificación.

EM m/z (ESI): 206,1 [M+1]

Etapa 2

3-(Azetidín-1-ilmetil)fenilcarbinol 5c

El compuesto en bruto 5b (840 mg, 4,09 mimóles) se disolvió en 10 ml de éter dietílico, se añadió hidruro de litioaluminio (310 mg, 8,19 mmoles) a 0°C y se sometió a agitación a 0°C durante 2 horas. Se añadió sucesivamente 0,3 ml de agua, 0,3 ml de solución de hidróxido sódico al 15% y 0,9 ml de agua para desactivar la reacción. Se filtró la solución de reacción y el filtrado se concentró bajo presión reducida, obteniendo el compuesto del título 5c en bruto (700 mg), que se utilizó directamente en la etapa siguiente sin purificación.

EM m/z (ESI): 178,3 [M+1]

Etapa 3

1-(3-(Clorometil)bencil)azetidina 5d

El compuesto en bruto 5c (700 mg, 3,95 mmoles) se disolvió en 10 ml de diclorometano, se añadió cloruro de tionilo (0,58 ml, 7,90 mmoles) a 0°C y se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 3 horas. La solución de reacción se concentró bajo presión reducida, se añadió solución saturada de carbonato sódico (50 ml) y se extrajo con diclorometano (100 ml x 2). Se agruparon las fases orgánicas, se secaron sobre sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró bajo presión reducida, obteniendo el compuesto del título 5d en bruto (700 mg), que se utilizó directamente en la etapa siguiente sin purificación.

EM m/z (ESI): 197,2 [M+1]

Etapa 4

1-(3-(Azetidm-1-ilmetil)bencil)-6-cloro-W-(4-metoxibencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-4-amina 5e

Se disolvió compuesto 1c (300 mg, 1,04 mmoles), el compuesto en bruto 5d (203 mg, 1,04 mmoles) y carbonato potásico (144 mg, 1,04 mmoles) en 5 ml de N,N-dimetilformamida, y la solución de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 16 horas. Se concentró la solución de reacción bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice con el sistema de elución A, obteniendo el compuesto del título 5e (30 mg, rendimiento: 6,5%).

EM m/z (ESI): 449,2 [M+1]

Etapa 5

1-(3-(Azetidm-1-ilmetil)bencil)-6-butoxi-W-(4-metoxibencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidm-4-amina 5f

Se añadió compuesto 5e (50 mg, 0,11 mmoles), n-butóxido sódico (0,2 ml, 0,40 mmoles) y 1 ml de n-butanol a un tubo de microondas sucesivamente, se calentaron a 160°C y se sometieron a agitación durante 1,5 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía de capa fina con el sistema de revelado A, obteniendo el compuesto del título 5f (35 mg, rendimiento: 64,8%).

EM m/z (ESI): 487,3 [M+1]

Etapa 6

1-(3-(Azetidm-1-ilmetil)bencil)-6-butoxi-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-4-amina 5

Se añadió el compuesto 5f (35 mg, 0,07 mmoles) y 1 ml de ácido trifluoroacético a un matraz de reacción. La solución de reacción se calentó bajo reflujo y se sometió a agitación durante 24 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. A la mezcla de reacción se añadió una solución 7 N de amonio en metanol (1 ml) y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (Waters-2767, sistema de elución: bicarbonato amónico 10 mmoles/l, agua y acetonitrilo), obteniendo el compuesto del título 5 (2,0 mg, rendimiento: 7,9%).

EM m/z (ESI): 367,2 [M+1]

RMN ¹H (400 MHz, CD³OD) 67,98 (s, 1H), 7,30-7,28 (m, 1H), 7,22-7,19 (m, 3H), 5,45 (s, 2H), 4,39 (t, 2H), 3,60 (s, 2H), 3,28 (t, 4H), 2,12-2,09 (m, 2H), 1,80-1,76 (m, 2H), 1,55-1,49 (m, 2H), 1,00 (t, 3H).

Ejemplo 6

6-Butoxi-1-(3-(piperidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-4-amina 6

Etapa 1

1-(3-(Clorometil)bencil)piperidina 6b

Se disolvió 3-(piperidín-1-ilmetil)fenilcarbinol 6a (1,7 g, 8,28 mimóles, preparado según el método conocido que se da a conocer en Bioorganic & Medicinal Chemistry 12(10), 2727-2736, 2004) en 20 ml de diclorometano, se añadió cloruro de tionilo (1,2 ml, 16,56 mmoles) a 0°C, y la solución de reacción se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 3 horas. La solución de reacción se concentró bajo presión reducida, se añadió solución saturada de carbonato sódico (50 ml) y se extrajo con diclorometano (100 ml x 2). Se agruparon las fases orgánicas, se secaron sobre sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró bajo presión reducida, obteniendo el compuesto del título 6b en bruto (1,7 g), que se utilizó directamente en la etapa siguiente sin purificación.

EM m/z (ESI): 224,2 [M+1]

Etapa 2

6-Cloro-W-(3-metoxibencil)-1-(4-(pipendm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pinmidm-4-amina 6c

Se disolvió compuesto 1c (300 mg, 1,04 mmoles), el compuesto en bruto 6b (232 mg, 1,04 mmoles) y carbonato potásico (144 mg, 1,04 mmoles) en 5 ml de N,N-dimetilformamida. La reacción se detuvo después de la agitación a temperatura ambiente durante 16 horas. Se concentró la solución de reacción bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice con el sistema de elución A, obteniendo el compuesto del título 6c (50 mg, rendimiento: 10,1%).

EM m/z (ESI): 477,3 [M+1]

Etapa 3

6-Butoxi-W-(3-metoxibencil)-1-(4-(piperidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pinmidm-4-amina 6d

Se añadió compuesto 6c (50 mg, 0,10 mmoles), n-butóxido sódico (0,2 ml, 0,40 mmoles) y 1 ml de n-butanol a un tubo de microondas sucesivamente, se calentaron a 160°C y se sometieron a agitación durante 1,5 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice con el sistema de elución A, obteniendo el compuesto del título 6d (30 mg, rendimiento: 55,5%).

EM m/z (ESI): 515,3 [M+1]

Etapa 4

6-Butoxi-1-(3-(piperidín-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-4-amina 6

Se añadió el compuesto 6d (30 mg, 0,06 mmoles) y 2 ml de ácido trifluoroacético a un matraz de reacción, se calentó bajo reflujo y se sometió a agitación durante 24 horas. Se detuvo la reacción y la solución de reacción se concentró bajo presión reducida y se añadió una solución 7 N de amonio en metanol (1 ml). Se concentró la solución de reacción bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice con el sistema de revelado A, obteniendo el compuesto del título 6 (7,0 mg, rendimiento: 29,2%).

EM m/z (ESI): 395,3 [M+1]

RMN ¹H (400 MHz, CD³OD) 87,99 (s, 1H), 738-7,31 (m, 4H), 5,48 (s, 2H), 4,38 (t, 2H), 3,86 (s, 2H), 2,87-2,80 (m, 4H), 1,79-1,75 (m, 2H), 1,71-1,68 (m, 4H), 1,54-1,40 (m, 4H), 1,00 (t, 3H).

Ejemplo 7

6-(2-Metoxietoxi)-1-(4-(pirrolidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pyrimidi n-4-amina 7

Etapa 1

W-(4-Metoxibencil)-6-(2-metoxietoxi)-1-(4-(pirrolidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidm-4-amina 7a

Se añadió compuesto 1e (90 mg, 0,19 mmoles), 2-metoxietanol sódico (0,3 ml, 0,60 mmoles) y 1 ml de 2-metoxietanol a un tubo de microondas sucesivamente, se calentaron a 160°C y se sometieron a agitación durante 1,5 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice con el sistema de elución A, obteniendo el compuesto del título 7a (30 mg, rendimiento: 30,7%).

EM m/z (ESI): 503,3 [M+1]

Etapa 2

6-(2-Metoxietoxi)-1-(4-(pirrolidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidm-4-amina 7

Se añadió el compuesto 7a (30 mg, 0,06 mmoles) y 5 ml de ácido trifluoroacético a un matraz de reacción, se calentó a 100°C y se sometió a agitación durante 2 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (Waters-2767, sistema de elución: bicarbonato amónico 10 mmoles/l, agua y acetonitrilo), obteniendo el compuesto del título 7 (5 mg, rendimiento: 19,7%).

EM m/z (ESI): 383,2 [M+1]

RMN ¹H (400 MHz, CD³OD) 87,96 (s, 1H), 7,30-7,28 (d, 2H), 7,25-7,23 (d, 2H), 5,42 (s, 2H), 4,51-4,48 (t, 2H), 3,74­ 3,72 (t, 2H), 3,65 (s, 2H), 3,39 (s, 3H), 2,57(s, 4H), 1,81-1,78 (m, 4H).

Ejemplo 8

6-((1-Metoxipropán-2-il)oxi)-1-(4-(pirrolidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d ]pirimidín-4-amina 8

Etapa 1

W-(4-Metox¡benc¡l)-6-((1-metox¡propán-2-¡l)ox¡)-1-(4-(p¡rrol¡dm-1-¡lmet¡l)benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡dm-4-am¡na 8a Se añadió compuesto 1e (200 mg, 0,43 mmoles), 2-metox¡-1-met¡l-etox¡ sódico (96,9 mg, 0,86 mmoles) y 5 ml de met¡léter de prop¡lengl¡col a un tubo de m¡croondas sucesivamente, se calentó a 160°C y se somet¡ó a ag¡tac¡ón durante 1,5 horas. La soluc¡ón de reacc¡ón se enfr¡ó hasta la temperatura amb¡ente y se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo resultante se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna de gel de síl¡ce con el s¡stema de eluc¡ón A, obten¡endo el compuesto del título 8a (150 mg, rend¡m¡ento: 67,2%).

EM m/z (ESI): 517,3 [M+1]

Etapa 2

6-((1-Metox¡propán-2-¡l)ox¡)-1-(4-(p¡rrol¡dm-1-¡lmet¡l)benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d ]p¡r¡m¡dín-4-am¡na 8

Se añad¡ó el compuesto 8a (80 mg, 0,15 mmoles) y 5 ml de ác¡do tr¡fluoroacét¡co a un matraz de reacc¡ón, se calentaron a 80°C y se somet¡eron a ag¡tac¡ón durante 1 hora. La soluc¡ón de reacc¡ón se enfr¡ó hasta la temperatura amb¡ente y se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo resultante se pur¡f¡có med¡ante cromatografía líquida de alto rend¡m¡ento (Waters-2767, s¡stema de eluc¡ón: b¡carbonato amón¡co 10 mmoles/l, agua y aceton¡tr¡lo), obten¡endo el compuesto del título 8 (20 mg, rend¡m¡ento: 32,6%).

EM m/z (ESI): 397,2 [M+1]

RMN ¹H (400 MHz, CD³OD) 67,95 (s, 1H), 7,35-7,33 (d, 2H), 7,29-7,27 (d, 2H), 5,43 (m, 3H), 3,83 (s, 2H), 3,60-3,52 (m, 2H), 3,37 (s, 3H), 2,76(s, 4H), 1,87 (s, 4H), 1,34-1,32 (t, 3H).

Ejemplo 9

6-Butox¡-1-(3-fluoro-4-(p¡rrol¡dm-1-¡lmet¡l)benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡dm-4-am¡na 9

Etapa 1

3-Fluoro-4-(pirrolidín-1-ilmetil)benzonitrilo 9c

Se disolvió 4-(bromometil)-3-fluorobenzonitrile 9a (1 g, 4,67 mimóles), pirrolidina 9b (332 mg, 4,67 mimóles) y N,N-diisopropiletilamina (1,21 g, 9,34 mmoles) en 10 ml de acetonitrilo. Tras someter a agitación durante 2 horas, la solución de reacción se concentró bajo presión reducida, obteniendo el compuesto del título 9c en bruto (1 g), que se utilizó directamente en la etapa siguiente sin purificación.

EM m/z (ESI): 205,4 [M+1]

Etapa 2

Ácido 3-fluoro-4-(pirrolidín-1-ilmetil)benzoico 9d

El compuesto en bruto 9c (1 g, 4,9 mmoles) se disolvió en un solvente mixto de 5 ml de ácido sulfúrico, 5 ml de agua y 10 ml de ácido acético. La reacción se detuvo después de la agitación a 90°C durante 16 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. Se añadió metanol al residuo y se filtró para eliminar las materias insolubles. El filtrado se concentró bajo presión reducida, obteniendo el compuesto del título 9d en bruto (1 g), que se utilizó directamente en la etapa siguiente sin purificación.

EM m/z (ESI): 224,4 [M+1]

Etapa 3

(3-Fluoro-4-(pirrolidín-1-ilmetil)fenil)metanol 9e

El compuesto en bruto 9d (1 g, 4,48 mmoles) se disolvió en 20 ml de tetrahidrofurano. La solución de reacción se enfrió a 0°C, se añadió hidruro de litio-aluminio (607 mg, 17,9 mmoles) y se sometió a agitación durante 3 horas. Se añadió sucesivamente 1 ml de solución 2 N de hidróxido sódico y 3 ml de agua para desactivar la reacción. Se filtró la solución de reacción y el filtrado se recogió y se concentró bajo presión reducida, obteniendo el compuesto del título 9e en bruto (820 mg), que se utilizó directamente en la etapa siguiente sin purificación.

EM m/z (ESI): 210,4 [M+1]

Etapa 4

6-Cloro-1-(3-fluoro-4-(pirrolidín-1-ilimetN)bencil)-A/-(4-imetoxibencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pinimidín-4-aimina 9f

El compuesto en bruto 9e (100 mg, 0,48 mmoles), compuesto 1c (141,34 mg, 0,48 mmoles) y trifenilfosfina (192 mg, 0,73 mmoles) se disolvieron en 10 ml de 1,4-dioxano y a continuación se añadió gota a gota azodicarboxilato de diisopropilo. La solución de reacción se calentó a 85°C y se sometió a agitación durante 4 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice con el sistema de elución A, obteniendo el compuesto del título 9f (90 mg, rendimiento: 38,3%).

EM m/z (ESI): 481,4 [M+1]

Etapa 5

6-Butox¡-1-(3-fluoro-4-(p¡rrol¡dm-1-¡lmet¡l)benc¡l)-W-(4-metox¡benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡dm-4-am¡na 9g

Se añad¡ó compuesto 9f (90 mg, 0,19 mmoles), n-butóx¡do sód¡co (18 mg, 0,18 mmoles) y 5 ml de n-butanol a un tubo de m¡croondas sucesivamente, se calentaron a 160°C y se somet¡eron a ag¡tac¡ón durante 1,5 horas. Se detuvo la reacc¡ón y la soluc¡ón de reacc¡ón se enfr¡ó hasta la temperatura amb¡ente y se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo resultante se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna de gel de síl¡ce con el s¡stema de eluc¡ón A, obten¡endo el compuesto del título 9g (35 mg, rend¡m¡ento: 36,1%).

EM m/z (ESI): 519,5 [M+1]

Etapa 6

6-Butox¡-1-(3-fluoro-4-(p¡rrol¡dm-1-¡lmet¡l)benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡dm-4-am¡na 9

Se añad¡ó el compuesto 9g (35 mg, 0,07 mmoles) y 10 ml de ác¡do tr¡fluoroacét¡co a un tubo sellado, se calentaron a 100°C y se somet¡eron a ag¡tac¡ón durante 1 hora. Se detuvo la reacc¡ón y la soluc¡ón de reacc¡ón se enfr¡ó hasta la temperatura amb¡ente y se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo resultante se pur¡f¡có med¡ante cromatografía líquida de alto rend¡m¡ento (Waters-2767, s¡stema de eluc¡ón: b¡carbonato amón¡co 10 mmoles/l, agua y aceton¡tr¡lo), obten¡endo el compuesto del título 9 (20 mg, rend¡m¡ento: 74,3%).

EM m/z (ESI): 399,5 [M+1]

RMN ¹H (400 MHz, CD³OD) 67,97 (s, 1H), 7,37-7,33 (m, 1H), 7,07-6,99 (m, 2H), 5,42 (s, 2H), 4,38-4,35 (t, 2H), 3,68 (s, 2H), 2,56 (s, 4H), 1,79-1,73(m, 6H), 1,52-1,46 (m, 2H), 0,99-0,96 (t, 3H).

Ejemplo 10

W⁶-But¡l-1-(4-(p¡rrol¡dm-1-¡lmet¡l)benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡dm-4,6-d¡am¡na 10

Etapa 1

W6-But¡l-W4-(4-metox¡benc¡l)-1-(4-(p¡rrol¡dín-1-¡lmet¡l)benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d ]p¡r¡m¡dín-4,6-d¡am¡na 10a

Se añad¡ó el compuesto 1e (50 mg, 0,11 mmoles), n-but¡lam¡na (23,7 mg, 0,32 mmoles) y N,N-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (41,9 mg, 0,32 mmoles) a 5 ml de n-butanol sucesivamente. La soluc¡ón de reacc¡ón se calentó a 120°C y se somet¡ó a ag¡tac¡ón bajo m¡croondas durante 1 hora. La soluc¡ón de reacc¡ón se enfr¡ó hasta la temperatura amb¡ente y se concentró bajo pres¡ón reduc¡da, obten¡endo el compuesto del título 10a en bruto (20 mg), que se ut¡l¡zó d¡rectamente en la etapa s¡gu¡ente s¡n pur¡f¡cac¡ón.

Etapa 2

W6-But¡l-1-(4-(p¡rrol¡dín-1-¡lmet¡l)benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡dín-4,6-d¡am¡na 10

Se añad¡ó el compuesto 10a (20 mg, 0,04 mmoles) y 5 ml de ác¡do tr¡fluoroacét¡co a un matraz de reacc¡ón, se calentaron a 100°C y se somet¡eron a ag¡tac¡ón durante la noche. Se detuvo la reacc¡ón y la soluc¡ón de reacc¡ón se enfr¡ó hasta la temperatura amb¡ente y se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo resultante se purificó med¡ante cromatografía líquida de alto rendimiento (Waters-2767, sistema de elución: bicarbonato amónico 10 mmoles/l, agua y acetonitrilo), obteniendo el compuesto del título 10 (15,2 mg, un sólido amarillo, rendimiento: 62,5%).

EM m/z (ESI): 380,3 [M+1]

RMN ¹H (400 MHz, CD³OD) 88,04 (s, 1H), 7,49-7,47 (d, 2H), 7,42-7,40 (d, 2H), 5,44 (s, 2H), 4,34 (s, 2H), 3,49-3,45 (m, 4H), 3,15 (s, 2H), 2,13(s, 2H), 1,93 (s, 2H), 1,65-1,60 (m, 2H), 1,45-1,39 (m, 2H), 0,98-0,94 (t, 3H).

Ejemplo 11

4-Amino-N-propil-1-(4-(pirrolidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-6-carboxamida 11

Etapa 1

4-((4-metoxibencil)amino)-1-(4-(pirrolidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-6-carboxilato de metilo 11a Se disolvió compuesto 1e (200 mg, 0,43 mmoles), acetato de paladio (2,9 mg, 0,013 mmoles), 4,5-bisdifenilfosfino-9,9-dimetiloxanteno (15 mg, 0,026 mmoles) y trietilamina (44 mg, 0,4 mmoles) en 3 ml de n-butanol y 3 ml de N,N-dimetilformamida. El sistema de reacción se purgó con monóxido de carbono tres veces. La solución de reacción se calentó a 70°C y se sometió a agitación durante 16 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice con el sistema de elución A, obteniendo el compuesto del título 11a (150 mg, rendimiento: 71,4%). EM m/z (ESI): 487,5 [M+1]

Etapa 2

4-((4-Metoxibencil)amino)-N-propil-1-(4-(pirrolidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-6-carboxamida 11b Se disolvió el compuesto 11a (50 mg, 0,1 mmoles) y N-propilamina (12 mg, 0,2 mmoles) en 5 ml de etanol sucesivamente. La solución de reacción se añadió a un tubo sellado, se calentó a 60°C y se sometió a agitación durante 16 horas. Se detuvo la reacción y la solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida, obteniendo el compuesto del título 11b en bruto (20 mg), que se utilizó directamente en la etapa siguiente sin purificación.

Etapa 3

4-Amino-N-propil-1-(4-(pirrolidm-1-ilmetil)bencil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidín-6-carboxamida 11

Se añadió el compuesto 11b (20 mg, 0,04 mmoles) y 5 ml de ácido trifluoroacético a un matraz de reacción, se calentaron a 100°C y se sometieron a agitación durante 12 horas. La solución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (Waters-2767, sistema de elución: bicarbonato amónico 10 mmoles/l, agua y acetonitrilo), obteniendo el compuesto del título 11 (10 mg, rendimiento: 60,3%).

EM m/z (ESI): 394,5 [M+1]

RMN ¹H (400 MHz, CD³OD) 8 8,12 (s, 1H), 7,28 (m, 4H), 5,64 (s, 2H), 3,62 (s, 2H), 3,41-3,37 (t, 2H), 2,55-2,52 (m, 4H), 1,80-1,77 (m, 4H), 1,70-1,64 (m, 2H), 0,98-1,02 (t, 3H).

Ejemplo 12

1-(4-Am¡no-1-(4-p¡rrol¡dm-1-¡lmet¡l)benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡dín-6-¡l)pentán-1-ona 12

Etapa 1

4-((4-Metox¡benc¡l)am¡no)-1-(4-(p¡rrol¡dm-1-¡lmet¡l)benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡dm-6-carbon¡tr¡lo 12a

Se suspend¡ó compuesto 1e (260 mg, 0,56 mmoles), tr¡s(d¡benc¡l¡dén-acetona)d¡palad¡o (52 mg, 0,056 mmoles), 1,1'-b¡s(d¡fen¡lfosf¡no)ferroceno (31 mg, 0,056 mmol), c¡anuro de c¡nc (99 mg, 0,84 mmoles) y c¡nc en polvo (37 mg, 0,56 mmoles) en 5 ml de A/,W-d¡met¡lacetam¡da. La soluc¡ón de reacc¡ón se calentó a 140°C y se somet¡ó a ag¡tac¡ón durante 16 horas bajo una atmósfera de argón. La soluc¡ón de reacc¡ón se enfr¡ó hasta la temperatura amb¡ente y se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo resultante se pur¡f¡có med¡ante cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de revelado A, obten¡endo el compuesto del título 12a (160 mg, rend¡m¡ento: 63%).

EM m/z (ESI): 454,5 [M+1]

Etapa 2

1-(4-((4-Metox¡benc¡l)am¡no)-1-(4-(p¡rrol¡dm-1-¡lmet¡l)benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡dín-6-¡l)pentán-1-ona 12b Se d¡solv¡ó el compuesto 12a (160 mg, 0,35 mmoles) en 5 ml de tetrah¡drofurano y a cont¡nuac¡ón, se añad¡ó una soluc¡ón 2 M de cloruro de n-but¡lmagnes¡o en tetrah¡drofurano (0,9 ml, 1,77 mmoles) a 0°C. La soluc¡ón de reacc¡ón se calentó a 60°C y se somet¡ó a ag¡tac¡ón durante 2 horas bajo una atmósfera de argón. La soluc¡ón de reacc¡ón se enfr¡ó hasta la temperatura amb¡ente, se añad¡ó una soluc¡ón acuosa de cloruro amón¡co y se extrajo con acetato de et¡lo. Se agruparon las fases orgán¡cas y se concentraron bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo resultante se pur¡f¡có med¡ante cromatografía de capa f¡na con el s¡stema de revelado A, obten¡endo el compuesto del título 12b (150 mg, rend¡m¡ento: 83%).

EM m/z (ESI): 513,6 [M+1]

Etapa 3

1-(4-Am¡no-1-(4-p¡rrol¡dm-1-¡lmet¡l)benc¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡dín-6-¡l)pentán-1-ona 12

Se d¡solv¡ó el compuesto 12b (150 mg, 0,29 mmoles) en 10 ml de ác¡do tr¡fluoroacét¡co. La soluc¡ón de reacc¡ón se añad¡ó a un tubo sellado, se calentó a 110°C y se somet¡ó a ag¡tac¡ón durante 16 horas. La soluc¡ón de reacc¡ón se enfr¡ó hasta la temperatura amb¡ente y se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo resultante se pur¡f¡có med¡ante cromatografía líquida de alto rend¡m¡ento (Waters-2767, s¡stema de eluc¡ón: b¡carbonato amón¡co 10 mmoles/l, agua y aceton¡tr¡lo), obten¡endo el compuesto del título 12 (19 mg, rend¡m¡ento: 17%).

EM m/z (ESI): 393,5 [M+1]

RMN 1H (400 MHz, CDCI3): 58,01 (s, 1H), 7,35-7,29 (q, 4H), 5,62 (s, 2H), 3,62 (s, 2H), 3,26 (t, 2H), 2,53 (s, 4H), 1,78 (s, 4H), 1,76-1,70 (m, 2H), 1,48-1,42 (m, 2H), 0,98 (t, 3H).

Ejemplos de ensayo:

ensayo biológico

Ejemplo de ensayo 1. Determinación de la actividad agonista de los compuestos de la presente invención sobre TLR7 humano.

Se determinó el efecto de activación de los compuestos de la presente invención sobre la proteína TLR7_h expresada por células HEK-Blue™ TLR7_h establemente transfectadas mediante el método experimental siguiente:

I. Materiales experimentales e instrumentos

1. DMEM (Gibco, 10564-029),

2. Suero de feto bovino (GI^b C^o , 10099).

3. Penicilina-estreptomicina (Gibco, 15140-122).

4. Solución de azul tripán (Sigma, T8154-100ML).

5. Lector de microplacas multifunción Flexstation 3 (Molecular Devices).

6. Línea celular HEK-Blue™ HTLR7 (InvivoGen, hkb-hTLR7).

7. Reactivo de detección HEK-Blue (InvivoGen, hb-det3).

II. Procedimientos experimentales

Una bolsa de polvos secos de detección de HEK-Blue se disolvió en 50 ml de agua libre de endotoxinas y a continuación la solución se introdujo en un incubador a 37°C durante 10 minutos, seguido de la filtración estéril para preparar un medio de detección de HEK-Blue. El compuesto en primer lugar se formuló en una solución madre 20 mM; después, se diluyó con DMSO puro hasta una concentración máxima de 6x10⁶ nM y se obtuvo un total de 10 puntos mediante una dilución de gradiente de 3 veces.

El compuesto anteriormente formulado en primer lugar se diluyó 20 veces con el medio; después, se añadieron 20 pl del compuesto diluido a cada pocillo. Se eliminó el sobrenadante de las células HEK-Blue™ hTLR7, a las que a continuación se añadieron 2 a 5 ml de PBS precalentado. Se introdujeron las células en un incubador durante 1 a 2 minutos, se pipetearon suavemente y se contaron mediante tinción de azul tripán. Las células se resuspendieron en el medio de detección HEK-Blue para ajustar la concentración a 2,2 x 10⁵ células/ml. Se añadieron 180 pl de células a la placa de 96 pocillos anteriormente indicada con 20 pl de los compuestos y se incubaron a 37°C durante 6 a 16 horas.

El lector de microplacas se leyó a una longitud de onda de 620 nm para obtener los valores de DO correspondientes y se calcularon los valores de EC⁵⁰ de los compuestos con Graphpad Prism.

El efecto de activación de los compuestos de la presente invención sobre TLR7 humano puede determinarse mediante el ensayo anteriormente indicado, y los valores de EC⁵⁰ obtenidos se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1. EC⁵⁰ de los compuestos de la presente invención sobre TLR7 humano

Conclusión: los compuestos de la presente invención presentan un efecto de activación significativo sobre TLR7 humano.

Ejemplo de ensayo 2. Determinación de la actividad agonista de los compuestos de la presente invención sobre TLR8 humano.

Se determinó el efecto de activación de los compuestos de la presente invención sobre la proteína TLR8_h expresada por células HEK-Blue™ TLR8_h establemente transfectadas mediante el método experimental siguiente:

I. Materiales experimentales e instrumentos

1. DMEM (Gibco, 10564-029),

2. Suero de feto bovino (GIBCO, 10099).

3. Penicilina-estreptomicina (Gibco, 15140-122).

4. Solución de azul tripán (Sigma, T8154-100ML).

5. Lector de microplacas multifunción Flexstation 3 (Molecular Devices).

6. Línea celular HEK-Blue™ HTLR8 (InvivoGen, hkb-hTLR8).

7. Reactivo de detección HEK-Blue (InvivoGen, hb-det3).

II. Procedimientos experimentales

Una bolsa de polvos secos de detección de HEK-Blue se disolvió en 50 ml de agua libre de endotoxinas y a continuación la solución se introdujo en un incubador a 37°C durante 10 minutos, seguido de la filtración estéril para preparar un medio de detección de HEK-Blue. El compuesto en primer lugar se formuló en una solución madre 20 mM; después, se diluyó con DMSO puro hasta una concentración máxima de 6x10⁶ nM y se obtuvo un total de 10 puntos mediante una dilución de gradiente de 3 veces. El compuesto en primer lugar se diluyó 20 veces con el medio; después, se añadieron 20 pl del compuesto diluido a cada pocillo.

Se eliminó el sobrenadante de las células HEK-Blue™ hTLR8, a las que a continuación se añadieron 2 a 5 ml de PBS precalentado. Se introdujeron las células en un incubador durante 1 a 2 minutos, se pipetearon suavemente y se contaron mediante tinción de azul tripán. Las células se resuspendieron en el medio de detección HEK-Blue para ajustar la concentración a 2,2 x 10⁵ células/ml. Se añadieron 180 pl de células a la placa de 96 pocillos anteriormente indicada con 20 pl de los compuestos y se incubaron a 37°C durante 6 a 16 horas.

El lector de microplacas se leyó a una longitud de onda de 620 nm para obtener los valores de DO correspondientes y se calcularon los valores de EC⁵⁰ de los compuestos con Graphpad Prism.

El efecto de activación de los compuestos de la presente invención sobre TLR8 humano puede determinarse mediante el ensayo anteriormente indicado, y los valores de EC⁵⁰ obtenidos se muestran en la Tabla 2.

Tabla 2. EC⁵⁰ de los compuestos de la presente invención sobre TLR8 humano

Conclusión: los compuestos de la presente invención no presentan ningún efecto de activación de TLR8 humano, indicando que los compuestos de la presente invención presentan una elevada selectividad para TLR7.

Ejemplo de ensayo 3. Determinación de la capacidad de los compuestos de la presente invención de estimular la secreción de IFN-a a partir de células mononucleares de sangre periférica (PBMC).

La capacidad de los compuestos de la presente invención de estimular la secreción de IFN-a a partir de PBMC se determinó mediante el método experimental siguiente:

I. Materiales experimentales e instrumentos

1. RPMI 1640 (Invitrogen,11875).

2. FBS (Gibco,10099-141).

3. Penicilina-estreptomicina (Gibco, 15140-122).

4. Ficoll-Paque PREMIUM (GE, 17-5442-02).

5. Solución de azul tripán (Sigma, T8154-100ML).

6. SepMateTM-50 (Stemcell, 15460).

7. Contado de células sanguíneas Bright-Line™ (Sigma, Z359629-1EA).

8. Kit de IFN-a humano (cisbio, 6FHIFPEB).

9. Lector de microplacas multifunción PHERAStar (BMG, PHERAStar).

II. Procedimientos experimentales

El compuesto se diluyó con DMSO puro hasta una concentración máxima de 5 mM y se obtuvo un total de 9 puntos mediante una dilución de gradiente de 4 veces. A continuación, se añadieron 4 pl del compuesto a 196 pl de medio RPMI 1640 que contenía 10% de FBS y se mezcló bien. Se extrajeron 50 pl de la mezcla de cada pocillo y se añadieron a una nueva placa de 96 pocillos.

Todos los reactivos se equilibraron a temperatura ambiente. Se añadieron 60 ml de sangre y PBS+FBS al 2% a un matraz de cultivo de 250 ml, se pipetearon suavemente, se mezclaron bien y se diluyeron. Se añadieron 15 ml de solución de separación de linfocitos Ficoll-Paque PREMIUM y después se añadieron 30 ml de sangre diluida a un tubo de centrífuga SepMateTM-50 con 50 ml de PBMC. La mezcla se centrifugó a 12000 g durante 10 minutos a temperatura ambiente. Se separó el sobrenadante y después se centrifugó a 300 g durante 8 minutos. Las células se resuspendieron en el medio RPMI 1640 que contenía 10% de FBS y se contaron y se ajustó el número de PBMC a 3,33 x 106 células/ml. Se añadieron 150 pl de la solución de células a la placa con adición de los compuestos y se incubaron en un incubador a 37°C con 5,0% de CO2 durante 24 horas.

Se introdujo la placa de cultivo celular en una centrífuga y se centrifugó a 1200 rpm durante 10 minutos a temperatura ambiente. Se extrajeron 150 pl del sobrenadante de cada pocillo. Los reactivos en el kit de IFN-a humano en primer lugar se equilibraron a la temperatura normal. Se formuló el conjugado anti-IFN-a-Eu3+-criptato y el conjugado anti-IFN-a-d2 en la oscuridad siguiendo las instrucciones del kit y ambos se mezclaron bien con el tampón de conjugado en una proporción 1:40. A continuación, se añadieron 16 pl del sobrenadante obtenido mediante centrifugación a cada pocillo. A continuación, se añadieron a cada pocillo 2 pl del conjugado anti-IFN-a-Eu3+-criptato y el conjugado anti-IFN-a-d2 formulado inmediatamente. La placa se sometió a agitación y se mezcló bien, y se incubó en la oscuridad a temperatura ambiente durante 3 horas.

El PHERAStar se leyó en el modo HTRF. La concentración de compuesto más baja que estimula el nivel de citoquinas por lo menos 3 veces sobre el límite de detección mínimo se definió como el valor de la concentración eficaz mínima (CEM) del compuesto en el ensayo de estimulación de citoquinas.

Se determinó la capacidad de los compuestos de la presente invención de estimular la secreción de IFN-a a partir de PBMC mediante el ensayo anterior y se muestran en la Tabla 3 los valores de CEM obtenidos.

Tabla 3. CEM de los compuestos de la presente invención de estimular la secreción de IFN-a a partir de PBMC.

Conclusión: puede observarse a partir de los datos de actividad de estimulación de la secreción de IFN-a a partir de PBMC que los compuestos de la presente invención presentan la ventaja de reducir la concentración eficaz.

Ejemplo de ensayo 4. Efecto de inhibición de los compuestos de la presente invención sobre la actividad enzimática del sitio de metabolización de midazolam de CYP3A4 en microsomas hepáticos humanos.

Se determinó el efecto de los compuestos de la presente invención sobre la actividad enzimática del sitio de metabolización del midazolam de CYP3A4 en microsomas hepáticos humanos:

I. Materiales experimentales e instrumentos

1. Tampón de fosfato (PBS).

2. NADPH (Sigma N-1630).

3. Microsomas hepáticos humanos (Corning Gentest).

4. Cromatógrafo líquido ABI QTrap 4000/espectrómetro de masas (AB Sciex).

5. Columna Inertsil C8-3, 4,6*50mm, 5 |jm (Dikma Technologies Inc., EE.UU.).

6. Sustrato de sonda CYP (midazolam/10 jM ) e inhibidor de control positivo (ketoconazol).

II. Procedimientos experimentales

Se formuló tampón de PBS 100 mM, que a continuación se utilizó para formular solución de microsomas 2,5 mg/ml y solución de NADPH 5 mM. La concentración 5X de la solución de trabajo de compuesto se diluyó con un gradiente de PBS (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015 y 0 jM ). La concentración 5X de la solución de trabajo de ketoconazol se diluyó con un gradiente de PBS (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015 y 0 jM ). La solución de trabajo de dextrometorfano se diluyó con PBS hasta una concentración de 50 jM .

20 j l de solución de microsomas 2,5 mg/ml, 20 j l de solución de trabajo de testosterona 50 jM , 20 j l de solución de MgCl² y 20 j l de la solución de trabajo de compuesto (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015 y 0 jM , diferentes sistemas de reacción para cada concentración) se mezclaron bien. Para el grupo de control positivo, el compuesto se sustituyó por la misma concentración de ketoconazol. La mezcla junto con solución de nA d HP 5 mM se preincubaron a 37°C durante 5 minutos. Tras 5 minutos, se añadieron 20 j l de NADPH a cada pocillo, se inició la reacción y se incubó durante 30 minutos. Todas las muestras incubadas se encontraban presentes por duplicado. Tras 30 minutos, se añadieron 250 j l de estándar interno que contenía acetonitrilo a todas las muestras, se mezclaron bien, se sometieron a agitación a 800 rpm durante 10 minutos y después se centrifugaron a 3700 rpm durante 10 minutos. Se extrajeron 80 j l del sobrenadante y se analizaron mediante CL-EM/EM.

Los datos se calcularon con Graphpad Prism para obtener los valores de IC⁵⁰ de los compuestos en el sitio de metabolización del midazolam de CYP3A4.

Valores de IC⁵⁰ de los compuestos de la presente invención sobre el sitio de metabolización de midazolam de CYP3A4 en microsomas hepáticos humanos.

Conclusión: los compuestos de la presente invención presentan un débil efecto de inhibición del sitio de metabolización de midazolam de CYP3A4 en microsomas hepáticos humanos y muestran una mejor seguridad, indicando que no se produce la interacción metabólica del fármaco basada en el sitio metabólico del midazolam de CYP3A4.

Ejemplo de ensayo 5. Efecto de inhibición de los compuestos de la presente invención sobre la actividad enzimática de CYP2D6 en microsomas hepáticos humanos.

Se determinó el efecto de los compuestos de la presente invención sobre la actividad enzimática de CYP2D6 en microsomas hepáticos humanos mediante el método experimental siguiente:

I. Materiales experimentales e instrumentos

1. Tampón de fosfato (PBS).

2. NADPH (Sigma N-1630).

3. Microsomas hepáticos humanos (Corning Gentest).

4. Cromatógrafo líquido ABI QTrap 4000/espectrómetro de masas (AB Sciex).

5. Columna Inertsil C8-3, 4,6*50mm, 5 jm (Dikma Technologies Inc., EE.UU.).

6. Sustrato de sonda CYP (dextrametorfano/10 jM ) e inhibidor de control positivo (quinidina).

II. Procedimientos experimentales

Se formuló tampón de PBS 100 mM, que a continuación se utilizó para formular solución de microsomas 2,5 mg/ml y solución de NADPH 5 mM. La concentración 5X de la solución de trabajo de compuesto se diluyó con un gradiente de PBS (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015 y 0 jM). La concentración 5X de la solución de trabajo de quinidina se diluyó con un gradiente de PBS (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015 y 0 jM). La solución de trabajo de dextrometorfano se diluyó con PBS hasta una concentración de 50 jM .

20 j l de solución de microsomas 2,5 mg/ml, 20 j l de solución de trabajo de testosterona 50 jM , 20 j l de solución de MgCl2 y 20 j l de la solución de trabajo de compuesto (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015 y 0 jM , diferentes sistemas de reacción para cada concentración) se mezclaron bien. Para el grupo de control positivo, el compuesto se sustituyó por la misma concentración de quinidina. La mezcla junto con solución de NADHP 5 mM se preincubaron a 37°C durante 5 minutos. Tras 5 minutos, se añadieron 20 j l de NADPH a cada pocillo, se inició la reacción y se incubó durante 30 minutos. Todas las muestras incubadas se encontraban presentes por duplicado. Tras 30 minutos, se añadieron 250 j l de estándar interno que contenía acetonitrilo a todas las muestras, se mezclaron bien, se sometieron a agitación a 800 rpm durante 10 minutos y después se centrifugaron a 3700 rpm durante 10 minutos. Se extrajeron 80 j l del sobrenadante y se analizaron mediante CL-EM/EM.

Los datos se calcularon con Graphpad Prism para obtener los valores de IC⁵⁰ de los compuestos en el sitio de metabolización de CYP2D6.

Valores de IC⁵⁰ de los compuestos de la presente invención para la no inhibición de CYP2D6 en microsomas hepáticos humanos.

Conclusión: los compuestos de la presente invención presentan un débil efecto de inhibición de la actividad enzimática de CYP2D6 en microsomas hepáticos humanos y muestran una mejor seguridad, indicando que no se produce la interacción metabólica del fármaco basada en CYP2 D6.

Ejemplo de ensayo 6. Efecto de inhibición de los compuestos de la presente invención sobre la actividad enzimática del sitio de metabolización de testosterona de CYP3A4 en microsomas hepáticos humanos.

Se determinó el efecto de los compuestos de la presente invención sobre la actividad enzimática del sitio de metabolización de testosterona de CYP3A4 en microsomas hepáticos humanos mediante el método experimental siguiente:

I. Materiales experimentales e instrumentos

1. Tampón de fosfato (PBS).

2. NADPH (Sigma N-1630).

3. Microsomas hepáticos humanos (Corning Gentest).

4. Cromatógrafo líquido ABI QTrap 4000/espectrómetro de masas (AB Sciex).

5. Columna Inertsil C8-3, 4,6*50mm, 5 jm (Dikma Technologies Inc., EE.UU.).

6. Sustrato de sonda CYP (testosterona/10 jM ) e inhibidor de control positivo (ketoconazol).

II. Procedimientos experimentales

Se formuló tampón de PBS 100 mM, que a continuación se utilizó para formular solución de microsomas 2,5 mg/ml y solución de NADPH 5 mM. La concentración 5X de la solución de trabajo de compuesto se diluyó con un gradiente de PBS (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015 y 0 jM ). La concentración 5X de la solución de trabajo de ketoconazol se diluyó con un gradiente de PBS (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015 y 0 jM ). La solución de trabajo de dextrometorfano se diluyó con PBS hasta una concentración de 50 jM .

20 j l de solución de microsomas 2,5 mg/ml, 20 j l de solución de trabajo de testosterona 50 jM , 20 j l de solución de MgCl² y 20 j l de la solución de trabajo de compuesto (150, 50, 15, 5, 1,5, 0,15, 0,015 y 0 jM , diferentes sistemas de reacción para cada concentración) se mezclaron bien. Para el grupo de control positivo, el compuesto se sustituyó por la misma concentración de ketoconazol. La mezcla junto con solución de NADHP 5 mM se preincubaron a 37°C durante 5 minutos. Tras 5 minutos, se añadieron 20 j l de NADPH a cada pocillo, se inició la reacción y se incubó durante 30 minutos. Todas las muestras incubadas se encontraban presentes por duplicado. Tras 30 minutos, se añadieron 250 j l de estándar interno que contenía acetonitrilo a todas las muestras, se mezclaron bien, se sometieron a agitación a 800 rpm durante 10 minutos y después se centrifugaron a 3700 rpm durante 10 minutos. Se extrajeron 80 j l del sobrenadante y se analizaron mediante CL-EM/EM.

Los datos se calcularon con Graphpad Prism para obtener los valores de IC⁵⁰ de los compuestos en el sitio de metabolización de testosterona de CYP3A4.

Valores de IC50 de los compuestos de la presente invención sobre el sitio de metabolización de testosterona de CYP3A4 en microsomas hepáticos humanos.

Conclusión: los compuestos de la presente invención presentan un débil efecto de inhibición del sitio de metabolización de la testosterona de CYP3A4 en microsomas hepáticos humanos y muestran una mejor seguridad.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES

   Compuesto de fórmula (I):

   

   o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero y diastereómero de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos,

   en la que:

   el anillo A se selecciona del grupo que consiste en arilo y heteroarilo, preferentemente el anillo A es fenilo, G es N,

   X¹ es alquileno, en el que el alquileno se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, alquilo, alcoxi, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo y heterociclilo,

   L¹ se selecciona del grupo que consistes en -NR⁴-, -O-, -S-, -C(O)-, -S(O)^m-, -N(R⁴)C(O)-, -C(O)N(R⁴)-, -N(R⁴)S(O)²-, -S(O)² N(R⁴)- y un enlace covalente,

   R¹ se selecciona del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, haloalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo heteroarilo, en el que el alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo se sustituyen opcionalmente, cada uno independientemente, de entre uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR⁵ , -C(O)R⁵ , -S(O)^mR⁵ , -NR⁶R⁷ y -C(O)NR⁶R⁷ ,

   cada R² es idéntico o diferente y cada uno se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halógeno, alquilo, alcoxi, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, en el que el alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo se sustituyen opcionalmente, cada uno independientemente, de entre uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, hidroxi, hdiroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR⁵ , -C(O)R⁵, -S(O)^mR⁵ , -NR⁶R⁷ y -C(O)NR⁶R⁷ ,

   L² es alquileno, en el que el alquileno se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR⁵ , -C(O)R⁵ , -S(O)^mR⁵ , -NR⁶R⁷ y -C(O)NR⁶R⁷ ,

   R³ se selecciona del grupo que consiste en haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR⁵, -C(O)R⁵, -S(O)^mR⁵, -NR⁶R⁷ y -C(O)NR⁶R⁷ , en el que el cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo se sustituyen opcionalmente, cada uno independientemente, de entre uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, ciano, amino, nitro, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, -OR⁸ , -C(O)R⁸ , -S(O)^mR⁸ , -NR⁹R¹⁰ y -C(O)NR⁹R¹⁰,

   R⁴ se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo,

   R⁵ se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, amino, hidroxi, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo,

   R⁶ y R⁷ son idénticos o diferentes y se seleccionan, cada uno independientemente, del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo heteroarilo, -C(O)R⁸ , -S(O)^mR⁸ y -C(O)NR⁹R¹⁰, en el que el alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo se sustituyen opcionalmente, cada uno independientemente, de entre uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, amino, ciano, nitro, hidroxi, hidroxialquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo,

   o R⁶ y R⁷ junto con el nitrógeno al que se encuentran unidos forman un heterociclilo, en el que el heterociclilo contiene opcionalmente uno o dos heteroátomos idénticos o diferentes seleccionados del grupo que consiste en N, O y S, además de un átomo de nitrógeno, y el heterociclilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, amino, ciano, nitro, hidroxi, hidroxialquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo, R⁸ se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, amino, hidroxi, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo,

   R9 y R10 son idénticos o diferentes y cada uno se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, haloalquilo, amino, hidroxi, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo,

   n es 0, 1, 2, 3 o 4, y

   m es 0, 1 o 2.

   2. Compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en el que R3 es heterociclilo, y el heterociclilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, amino, ciano, nitro, hidroxi, hidroxialquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo.

   3. Compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1 o 2, en el que R3 es -NR6R7, y R6 y R7 junto con el nitrógeno al que se encuentran unidos forman un heterociclilo, en el que el heterociclilo contiene opcionalmente uno o dos heteroátomos idénticos o diferentes seleccionados del grupo que consiste en N, O y S además de un átomo de nitrógeno, y el heterociclilo está sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, alcoxi, halógeno, amino, ciano, nitro, hidroxi, hidroxialquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo.

   4. Compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que es un compuesto de fórmula ( I I ) :

   

   o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero y diastereómero de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos,

   en el que G, L1~ L2, R1~R2, R6~R7 y n son tal como se define en la reivindicación 1.

   5. Compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que es un compuesto de fórmula (III):

   

   o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero y diastereómero de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos,

   en la que:

   s es 0, 1 o 2,

   L1, R1~R2 y n son tal como se define en la reivindicación 1.

   6. Compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que L1 se selecciona del grupo que consiste en -O-, -NR4-, -C(O)- y -C(O)N(R4)-, y R4 es hidrógeno o alquilo.

   7. Compuestos de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en los que R1 es alquilo sustituido opcionalmente con uno o más alcoxi.

   8. Compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que R2 es idéntico o diferente y cada uno es, independientemente, hidrógeno o halógeno.

   9. Compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, seleccionado del grupo que consiste en:

   

   10. Compuesto de fórmula (I-C):

   

   o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

   en la que:

   W es un grupo protector de amino seleccionado de entre terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo o pmetoxibencilo,

   X es halógeno,

   anillo A, G, X1, L2, R2~R3 y n son tal como se define en la reivindicación 1.

   11. Compuesto de fórmula (I-C) según la reivindicación 10, seleccionado del grupo que consiste en:

   

   12. Compuesto de fórmula (I-E):

   

   o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero de los mismos, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos,

   en la que:

   W es un grupo protector de amino seleccionado de entre terc-butoxicarbonilo, acetilo, bencilo, alilo o pmetoxibencilo,

   anillo A, G, X1, L1~L2, R1~R3 y n son tal como se define en la reivindicación 1.

   13. Compuesto de fórmula (I-E) según la reivindicación 12, seleccionado del grupo que consiste en:

   

   14. Método para la preparación del compuesto de fórmula (I-E) según la reivindicación 12, que comprende una etapa de:

   

   someter un compuesto de fórmula (I-C) y un compuesto de fórmula (I-D) a una reacción de sustitución nucleofílica bajo condiciones alcalinas con el fin de obtener el compuesto de fórmula (I-E),

   en la que:

   W es un grupo protector de amino,

   X es halógeno,

   L1 se selecciona del grupo que consiste en -NR4-, -O-, -S-, -C(O)N(R4)-, -S(O)2N(R4)- y un enlace covalente,

   anillo A, G, L2, X1, R1~R3 y n son tal como se define en la reivindicación 12.

   Método para la preparación del compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, que comprende una etapa de:

   

   eliminar el grupo protector del compuesto de fórmula (I-E) bajo condiciones ácidas a fin de obtener el compuesto de fórmula (I),

   en la que:

   W es un grupo protector de amino,

   anillo A, G, L1~L2, X1, R1~R3 y n son tal como se define en la reivindicación 1.

   Composición farmacéutica, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, y uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.

   Compuesto, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o la composición farmacéutica según la reivindicación 16, para la utilización en el tratamiento de una infección causada por un virus seleccionado del grupo que consiste en virus dengue, virus de la fiebre amarilla, virus del Nilo Occidental, virus de la encefalitis japonesa, virus de la encefalitis transmitida por garrapatas, virus Kunjin, virus de la encefalitis del valle de Murray, virus de la encefalitis de St. Louis, virus de la fiebre hemorrágica de Omsk, virus de la diarrea vírica bovina, virus Zika, VIH, VHB, VHC, VHP, VSR, SARS y virus influenza.

   Compuesto, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero o diastereómero del mismo, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o la composición farmacéutica según la reivindicación 16, para la utilización en el tratamiento o prevención del melanoma, carcinoma pulmonar de células no pequeñas, carcinoma hepatocelular, carcinoma de células basales, carcinoma de células renales, mieloma, rinitis alérgica, asma, EPOC, colitis ulcerosa y fibrosis hepática.

   19. Compuesto, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero y diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una composición farmacéutica que comprende los mismos, para la utilización como un medicamento.