ES2347134T3 - Mezclas de polisacaridos derivados de heparina, su preparacion y las composiciones farmaceuticas que los contienen. - Google Patents
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Abstract
Mezclas de polisacáridos sulfatados que poseen la estructura general de los polisacáridos que constituyen la heparina y que presentan las características siguientes:# -tienen un peso molecular medio de 1.500 a 3.000 daltons, una actividad anti-Xa de 100 a 150 UI/mg, una actividad anti-IIa de 0 a 10 UI/mg y una relación actividad anti-Xa/actividad anti-IIa superior a 10,# con la excepción:# - de un polisacárido que presenta un peso molecular de 2.777 daltons, una actividad anti-Xa de 100 UI/mg y una actividad anti-IIa de 4 UI/mg,#- de un polisacárido que presenta un peso molecular de 2.161 daltons, una actividad anti-Xa de 100 UI/mg y una actividad anti-IIa de 2 UI/mg,#- los polisacáridos que constituyen las mezclas contienen 2 a 26 restos sacarídicos y tienen un resto de ácido glucurónico-4,5 insaturado 2-O-sulfato en uno de sus extremos,# en forma de una sal de metal alcalino o alcalinotérreo.
Description
Mezclas de polisacáridos derivados de heparina,
su preparación y las composiciones farmacéuticas que los
contienen.
La presente invención se refiere a mezclas de
polisacáridos derivados de heparina, a su procedimiento de
preparación y a las composiciones farmacéuticas que las
contienen.
La heparina es una mezcla de mucopolisacáridos
sulfatados de origen animal, utilizada principalmente por sus
propiedades anticoagulantes y antitrombóticas.
La heparina presenta sin embargo inconvenientes
que limitan las condiciones de su utilización. En particular, su
actividad anticoagulante (actividad anti-IIa)
importante puede ocasionar hemorragias.
Se han propuesto las heparinas de bajo peso
molecular obtenidas por despolimerización básica de ésteres de
heparina (EP40144); sin embargo, estos productos tienen todavía una
actividad anti-IIa importante.
La patente EP 1 070 503 (Artículo 54(3)
CBE) describe mezclas de polisacáridos que presentan un peso
molecular de 2.000 a 4.000 daltons, una actividad
anti-Xa comprendida entre 100 y 150 UI/mg y una
relación anti-Xa/anti-IIa
comprendida entre 15 y 50.
Este documento divulga específicamente:
- -
- una heparina de peso molecular medio de 2.777 daltons que presenta una actividad anti-Xa de 100 UI/mg y una actividad anti-IIa de 4 UI/mg,
- -
- una heparina de peso molecular medio de 2.161 daltons que presenta una actividad anti-Xa de 100 UI/mg y una actividad anti-IIa de 2 UI/mg.
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La invención se refiere a mezclas de
polisacáridos derivados de heparina que poseen una actividad más
selectiva frente al factor X activado (factor Xa) y el factor II
activado (factor IIa) que la heparina.
La presente invención tiene más particularmente
por objeto las mezclas de polisacáridos sulfatados que poseen la
estructura general de los polisacáridos que constituyen la heparina
y que presentan las características siguientes:
- -
- tienen un peso molecular medio de 1.500 a 3.000 daltons, una actividad anti-Xa de 100 a 150 UI/mg, una actividad anti-IIa de 0 a 10 UI/mg y una relación actividad anti-Xa/actividad anti-IIa superior a 10,
- \quad
- con la excepción:
- \circ
- de un polisacárido que presenta un peso molecular de 2.777 daltons, una actividad anti-Xa de 100 UI/mg y una actividad anti-IIa de 4 UI/mg,
- \circ
- de un polisacárido que presenta un peso molecular de 2.161 daltons, una actividad anti-Xa de 100 UI/mg y una actividad anti-IIa de 2 UI/mg,
- -
- los polisacáridos que constituyen las mezclas contienen 2 a 26 restos sacarídicos y tienen un resto de ácido glucurónico-4,5 insaturado 2-O-sulfato en uno de sus extremos,
en forma de una sal de metal alcalino o
alcalinotérreo.
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Como la sal de metal alcalino o alcalinotérreo,
se prefieren las sales de sodio, potasio, calcio y magnesio.
El peso molecular medio se determina por
cromatografía líquida de alta presión utilizando dos columnas en
serie por ejemplo las comercializadas con el nombre de TSK G3000 XL
y TSK G2000 XL. La detección se realiza por refractometría. El
eluyente utilizado es nitrato de litio y el caudal es 0,6 ml/min. El
sistema se calibra con estándares preparados por fraccionamiento de
la enoxaparina (AVENTIS) por cromatografía en gel de
agarosa-poliacrilamida (IBF). Esta preparación se
realiza según la técnica descrita por Barrowcliffe et al.,
Thromb. Res., 12, 27-36 (1977-78) o
D.A. Lane et al., Thromb. Res., 12, 257-271
(1977-78). Los resultados se calculan mediante el
programa informático GPC6 (Perkin Elmer).
La actividad anti-Xa se mide por
el método amidolítico sobre un sustrato cromogénico descrito por
Teien et al., Thromb. Res., 10, 399-410
(1977), con como patrón el primer patrón internacional de las
heparinas de bajo peso molecular.
\newpage
La actividad anti-IIa se mide
por la técnica descrita por Anderson L.O. et al., Thromb.
Res., 15, 531-541 (1979), con como patrón el primer
patrón internacional de las heparinas de bajo peso molecular.
Preferentemente, las mezclas tales como las
descritas más arriba presentan una actividad anti Xa comprendida
entre 125 y 150 UI/mg.
Muy particularmente, las mezclas tales como las
descritas más arriba presentan una actividad anti Xa comprendida
entre 140 y 150 UI/mg y tienen un peso molecular medio comprendido
entre 2.000 y 3.000 dalton.
Preferentemente, las mezclas según la invención
tienen una actividad anti-IIa de 0 a 5 UI/mg.
Aún más preferentemente, las mezclas presentan
una relación actividad anti-Xa/actividad
anti-IIa superior a 25.
Las mezclas de oligosacáridos según la invención
pueden prepararse por despolimerización de una sal de amonio
cuaternario del éster bencílico de la heparina en medio orgánico,
mediante una base orgánica fuerte de pka superior a 20 elegida entre
2-terc-butilimino-2-dietilamino-1,3-dimetil-perhidro-1,3,2-diazafosforina,
las bases de la familia de las guanidinas y los fosfacenos, o de
imidazolato de sodio, transformación de la sal de amonio cuaternario
del éster bencílico de la heparina despolimerizada en sal de sodio,
saponificación del éster y opcionalmente purificación.
La sal de amonio cuaternario del éster bencílico
de la heparina es preferentemente la sal de bencetonio, de
cetilpiridinio o de cetiltrimetilamonio.
La despolimerización se efectúa generalmente en
un disolvente orgánico inerte tal como un disolvente clorado
(diclorometano por ejemplo), tetrahidrofurano, anisol, a una
temperatura de -20ºC a 40ºC.
Las bases de la familia de las guanidinas son
preferentemente las de fórmula:
en la que R_{1} es hidrógeno o
alquilo, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} idénticos o diferentes
representan cada uno un radical
alquilo.
\vskip1.000000\baselineskip
Más particularmente, R_{1} es hidrógeno y
R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} son radicales metilo.
Las bases orgánicas fuertes emparentadas con la
familia de los fosfacenos se definen por ejemplo según R.
Schwesinger et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 26,
1167-1169 (1987), R. Schwesinger et al.,
Angew. Chem. 105, 1420 (1993).
Entre las bases de la familia de los fosfacenos
se utilizan, preferentemente, las de fórmula:
en la que los radicales R_{1} a
R_{7} son idénticos o diferentes y representan radicales
alquilo.
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En las fórmulas anteriores, los radicales
alquilo contienen 1 a 6 átomos de carbono en cadena recta o
ramificada.
Ventajosamente, la relación en mol base orgánica
fuerte de pka superior a 20 o imidazolato de sodio/sal de amonio
cuaternario del éster bencílico de la heparina está comprendida
entre 0,2 y 5 y, preferentemente, entre 1 y 4.
Más particularmente, la tasa de esterificación
de la sal de amonio cuaternario del éster bencílico de la heparina
está comprendida entre 50 y 100% y, preferentemente, entre 70 y 90%.
Esta tasa de esterificación corresponde al porcentaje molar de
esterificación de los ácidos urónicos de la heparina.
La transformación de la sal de amonio
cuaternario del éster bencílico de la heparina despolimerizada en
sal de sodio se efectúa, generalmente, por tratamiento del medio de
reacción con una disolución alcohólica de acetato de sodio y,
preferentemente, con una disolución al 10% de acetato de sodio en
metanol (peso/volumen), a una temperatura comprendida entre 15 y
25ºC. El equivalente en peso de acetato añadido es preferentemente 3
veces superior a la masa de sal de amonio cuaternario del éster
bencílico de la heparina aplicada en la reacción de
despolimerización.
La saponificación se efectúa generalmente
mediante un hidróxido de metal alcalino tal como sosa, potasa,
hidróxido de litio, en medio acuoso, a una temperatura comprendida
entre 0 y 20ºC y, preferentemente, entre 0 y 10ºC. Se utilizarán de
forma general de 1 a 5 equivalentes molares de hidróxido de metal
alcalino. Preferentemente, la saponificación se realizará en
presencia de 2 a 3 equivalentes molares de hidróxido de metal
alcalino.
El producto final puede purificarse
opcionalmente por cualquier método conocido de purificación de las
heparinas despolimerizadas y principalmente según el método descrito
en la patente EP 0037319. Preferentemente, se purifica mediante
peróxido de hidrógeno, en medio acuoso, a una temperatura de 10 a
50ºC. Preferentemente, esta operación se realizará entre 20 y
40ºC.
La sal de amonio cuaternario del éster bencílico
de la heparina puede prepararse según el esquema de reacción
siguiente:
- a)
- transformación de la heparina en forma de sal de sodio mediante cloruro de bencetonio para obtener el heparinato de bencetonio,
- b)
- esterificación de la sal de bencetonio obtenida anteriormente mediante cloruro de bencilo y tratamiento con una disolución alcohólica de acetato de sodio para obtener la sal de sodio del éster bencílico de la heparina,
- c)
- transalificación de la sal de sodio del éster bencílico de la heparina en sal de amonio cuaternario y, preferentemente en sal de bencetonio, de cetilpiridinio o de cetiltrimetilamonio,
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La reacción de la etapa a) se realiza en medio
acuoso, por acción del cloruro de bencetonio en exceso, sobre la
heparina en forma de sal de sodio, a una temperatura cercana a 15 a
25ºC. De manera ventajosa, la relación molar cloruro de
bencetonio/heparina en forma de sal de sodio está comprendida entre
2 y 3 y más particularmente 2,5.
La heparina en forma de sal de sodio de partida
utilizada es preferentemente una heparina de cerdo. Ésta puede
purificarse previamente para disminuir su tasa de dermatán sulfato
según el procedimiento descrito en la patente FR2663639.
La esterificación de la etapa b) se efectúa
preferentemente en un disolvente orgánico clorado (cloroformo,
cloruro de metileno por ejemplo), a una temperatura comprendida
entre 25 y 45ºC y, preferentemente entre 30 y 40ºC. El éster en
forma de sal de sodio se recupera por precipitación mediante acetato
de sodio al 10% en peso/volumen en un alcohol tal como metanol. Se
emplean generalmente 1 a 1,2 volúmenes de alcohol por volumen de
medio de reacción. La cantidad de cloruro de bencilo y el tiempo de
reacción se adaptan para obtener una tasa de esterificación
comprendida entre 50 y 100% y, preferentemente, entre 70 y 90%. De
forma preferente, se utilizan 0,5 a 1,5 partes en peso de cloruro de
bencilo para 1 parte en peso de la sal de bencetonio de la heparina.
Asimismo, de forma preferente, el tiempo de reacción estará
comprendido entre 10 y 35 horas.
La transalificación de la etapa c) se efectúa
mediante un cloruro de amonio cuaternario y, preferentemente,
mediante cloruro de bencetonio, cloruro de cetilpiridinio o cloruro
de cetiltrimetilamonio, en medio acuoso, a una temperatura
comprendida entre 10 y 25ºC. De manera ventajosa, la relación en mol
cloruro de amonio cuaternario/sal de sodio del éster bencílico de la
heparina está comprendida entre 2 y 3.
Las mezclas según la invención en forma de sal
de sodio, pueden transformarse en otra sal de un metal alcalino o
alcalinotérreo. Se pasa opcionalmente de una sal a otra utilizando
el método descrito en la patente US4168377.
Las mezclas según la invención no son tóxicas y
pueden utilizarse así como medicamentos.
Las mezclas de la presente invención pueden
utilizarse como agentes antitrombóticos. En particular, son útiles
para la prevención de las trombosis venosas, de los accidentes
trombóticos arteriales, principalmente en el caso del infarto de
miocardio. Son útiles igualmente en la prevención y el tratamiento
de la proliferación de las células musculares lisas, de la
angiogénesis, y como agentes neuroprotectores de la aterosclerosis y
de la arteriosclerosis.
La presente invención se refiere igualmente a
las composiciones farmacéuticas que contienen como principio activo
una mezcla de polisacáridos según la invención opcionalmente en
asociación con uno o varios excipientes inertes.
Las composiciones farmacéuticas son por ejemplo
disoluciones inyectables por vía subcutánea o intravenosa. Son
útiles igualmente por vía pulmonar (inhalación).
La posología puede variar en función de la edad,
del peso y del estado de salud del paciente. Para un adulto, está
comprendida en general entre 20 y 100 mg al día por vía
intramuscular o subcutánea.
Los ejemplos siguientes ilustran la
invención.
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Ejemplo
A
A una disolución de 10 g de heparina en forma de
sal de sodio en 100 ml de agua a una temperatura cercana a 20ºC, se
añade una disolución de 25 g de cloruro de bencetonio en 125 ml de
agua. El producto se filtra, se lava con agua y se seca.
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A una disolución de 20 g de heparinato de
bencetonio en 80 ml de cloruro de metileno, se añaden 16 ml de
cloruro de bencilo. La disolución se calienta a una temperatura de
30ºC durante 12 horas. Se añaden 108 ml de una disolución al 10% de
acetato de sodio en metanol, se filtra, se lava con metanol y se
seca. Se obtienen así 7,6 g de éster bencílico de heparina en forma
de sal de sodio cuya tasa de esterificación es 77%.
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En un erlenmeyer A de 2 litros, se introducen 36
g (0,0549 moles) de éster bencílico de heparina (sal de sodio) y 540
ml de agua destilada. Después de homogeneizar a una temperatura de
aproximadamente 20ºC, se obtiene una disolución amarilla clara. Con
agitación magnética, se prepara en un erlenmeyer B de 1 litro, una
disolución de 64,45 g (0,1438 moles) de cloruro de bencetonio y de
450 ml de agua. La disolución del erlenmeyer B se vierte en
aproximadamente 35 minutos en la disolución del erlenmeyer A con
agitación. Se observa la formación de un precipitado blanco
abundante. El erlenmeyer B se lava con 200 ml de agua destilada y el
agua de lavado se introduce en el erlenmeyer A. La agitación se para
y se deja depositar la suspensión durante 12 horas. La parte
transparente del sobrenadante se recoge y se separa. Sobre el
precipitado sedimentado (aspecto de papilla), se añaden 560 ml de
agua y se agita durante 20 minutos. Se deja
re-sedimentar el precipitado en 30 minutos
aproximadamente. El sobrenadante se recoge y se separa (560 ml).
Sobre el precipitado sedimentado, se repite dos veces esta operación
de lavado con aproximadamente 560 ml de agua destilada. En la última
operación de lavado, se deja el precipitado en suspensión y se
filtra sobre Vidrio Fritado 3. La torta se lava 4 veces con 200 ml
de agua destilada. El sólido blanco húmedo se filtra con succión y
se seca bajo presión reducida (2,7 kPa), a una temperatura cercana a
60ºC. Después de 12 horas de secado, se obtienen 87,5 g de éster
bencílico de heparina, sal de bencetonio. El rendimiento obtenido es
94,9%.
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(Referencia)
En un erlenmeyer A de 50 ml, se introducen 28 ml
de diclorometano. Con agitación, se cargan lentamente 4 g (0,00238
moles) de éster bencílico de heparina (tasa de esterificación: 77%,
sal de bencetonio) obtenido como se ha descrito en el ejemplo A.
Después de la disolución completa, se añaden 1,32 g (0,00948 moles)
de
1,5,7-triazabiciclo[4.4.0]dec-5-eno.
Se agita a una temperatura cercana a 20ºC, durante 3 horas y 30
minutos. Durante este tiempo, se prepara a 4ºC en un erlenmeyer B,
una disolución de 12 g de acetato de sodio en 120 ml de metanol. Con
agitación magnética, la mezcla de reacción del erlenmeyer A se
vierte en la disolución metanólica de acetato de sodio. Aparece un
precipitado amarillo gelatinoso cuasi-translúcido.
La agitación se para y se deja decantar la suspensión durante una
hora. La parte transparente del sobrenadante se recoge y se separa
(62 ml). Sobre el precipitado sedimentado (aspecto de papilla
amarilla), se añaden 50 ml de metanol y se agita durante 20 minutos.
Se deja re-sedimentar el precipitado 30 minutos
aproximadamente. El sobrenadante se recoge y se separa (49 ml).
Sobre el precipitado sedimentado, se añaden 50 ml de metanol y se
agita durante 20 minutos. El precipitado en suspensión se filtra
sobre Vidrio Fritado 4. La torta amarilla oro obtenida se lava 2
veces con 25 ml de metanol. El sólido húmedo se filtra con succión y
se seca bajo presión reducida (2,7 kPa), a una temperatura cercana a
60ºC. Después de 12 horas de secado, se obtienen 1,21 g de heparina
despolimerizada (éster de bencilo, sal de sodio). El rendimiento
obtenido es 77,2%.
\vskip1.000000\baselineskip
En un erlenmeyer de 25 ml, se introducen 1,21 g
(0,0018 moles) de la heparina despolimerizada (éster de bencilo, sal
de sodio) obtenida anteriormente y 11 ml de agua. Con agitación
magnética, se introducen 0,18 ml (0,0018 moles) de detergente de
sosa al 30%. Después de la adición, la mezcla se enfría a 4ºC y se
agita durante 2 horas. Se añaden 1,43 g de NaCl y se neutraliza la
disolución por adición de HCl a 1 mol/l (14 ml). La mezcla se
trasvasa a un erlenmeyer de 100 ml y se añaden 52 ml de metanol. Se
observa la formación de un precipitado amarillo. La agitación se
para y se deja sedimentar la suspensión durante 12 horas a una
temperatura cercana a 20ºC. El sobrenadante se recoge y se separa
(44 ml). Sobre el precipitado sedimentado (aspecto de papilla
amarilla), se añaden 25 ml de metanol y se agita durante 20 minutos.
Se deja re-sedimentar el precipitado 30 minutos
aproximadamente. El sobrenadante se recoge y se separa (21 ml).
Sobre el precipitado sedimentado, se añaden 25 ml de metanol y se
agita durante 20 minutos. El precipitado en suspensión se filtra
sobre Vidrio Fritado 3. La torta amarilla clara obtenida se lava 2
veces con 10 ml de metanol. El sólido húmedo se filtra con succión y
se seca bajo presión reducida (2,7 kPa), a una temperatura cercana a
60ºC. Después de 12 horas de secado, se obtienen 0,66 g de heparina
despolimerizada bruta (sal de sodio). El rendimiento obtenido es
60%.
\vskip1.000000\baselineskip
En un erlenmeyer de 10 ml, se introducen 0,66 g
de heparina despolimerizada bruta obtenida anteriormente y 5,9 ml de
agua destilada. La mezcla se lleva a 40ºC con agitación magnética.
Por adición de sosa a 0,1 mol/l, se lleva el pH entre 9 y 10 y se
añaden 33 microlitros de una disolución acuosa de peróxido de
hidrógeno al 30%. Después de aproximadamente 2 horas de agitación,
se añaden 0,65 g de cloruro de sodio. La mezcla se neutraliza por
adición de HCl a 0,1 mol/l. La disolución se filtra y se trasvasa a
un erlenmeyer de 25 ml. Se vierten 23,3 ml de metanol. Se observa la
formación de un precipitado blanco. La agitación se para y se deja
sedimentar la suspensión durante 12 horas a una temperatura cercana
a 20ºC. El sobrenadante se recoge y se separa (5 ml). Sobre el
precipitado sedimentado (aspecto de papilla), se añaden 5 ml de
metanol y se agita durante 20 minutos. Se deja
re-sedimentar el precipitado 30 minutos
aproximadamente. El sobrenadante se recoge y se separa (5 ml). Sobre
el precipitado sedimentado, se añaden 5 ml de metanol y se agita
durante 20 minutos. El precipitado en suspensión se filtra sobre
Vidrio Fritado 3. La torta blanca obtenida se lava 2 veces con 5 ml
de metanol. El sólido húmedo se filtra con succión y se seca bajo
presión reducida (2,7 kPa), a una temperatura cercana a 60ºC.
Después de 12 horas de secado, se obtienen 0,51 g de una mezcla
purificada de polisacáridos (sal de sodio). El rendimiento obtenido
es 77,2%.
Las características de esta mezcla son las
siguientes:
- Peso molecular medio: 1.600 daltons
- Actividad anti-Xa: 94 UI/mg
- Actividad anti-IIa: < 0,1 UI/mg
- Relación actividad anti-Xa/actividad anti-IIa: >100
\vskip1.000000\baselineskip
En un erlenmeyer A de 100 ml, se introducen 70
ml de diclorometano. Con agitación, se cargan lentamente 10 g
(0,00595 moles) de éster bencílico de heparina (tasa de
esterificación: 77%, sal de bencetonio) obtenido como se ha descrito
en el ejemplo A. Después de la disolución completa, se añaden 1,7 ml
(0,00587 moles) de
2-terc-butilimino-2-dietilamino-1,3-dimetil-perhidro-1,3,2-diazafosforina.
A una temperatura cercana a 20ºC, se deja que la reacción continúe
durante aproximadamente 3 horas y 30 minutos. Durante este tiempo,
se prepara a 4ºC en un erlenmeyer B, una disolución de 30 g de
acetato de sodio en 300 ml de metanol. Con agitación magnética, la
mezcla de reacción del erlenmeyer A se vierte en la disolución
metanólica de acetato de sodio. Aparece un precipitado amarillo
gelatinoso cuasi-translúcido. La agitación se para y
se deja decantar la suspensión durante una hora. La parte
transparente del sobrenadante se recoge y se separa (204 ml). Sobre
el precipitado sedimentado (aspecto de papilla amarilla), se añaden
125 ml de metanol y se agita durante 20 minutos. Se deja
re-sedimentar el precipitado 30 minutos
aproximadamente. El sobrenadante se recoge y se separa (162 ml).
Sobre el precipitado sedimentado, se añaden 125 ml de metanol y se
agita durante 20 minutos. El precipitado gelatinoso en suspensión se
filtra sobre Vidrio Fritado 3. La torta gelatinosa amarilla obtenida
se lava con 2 partes de 63 ml de metanol. El sólido gelatinoso se
filtra con succión y se seca bajo presión reducida (2,7 kPa), a una
temperatura cercana a 60ºC. Después de 12 horas de secado, se
obtienen 3,34 g de heparina despolimerizada (éster de bencilo, sal
de sodio). El rendimiento obtenido es 85,3%.
\newpage
Se saponifican 1,67 g de heparina
despolimerizada (éster de bencilo, sal de sodio) obtenida
anteriormente según el procedimiento de saponificación descrito en
el ejemplo 1. Se obtienen 0,94 g de un polvo amarillo claro. El
rendimiento en heparina despolimerizada bruta (sal de sodio) es
61%.
\vskip1.000000\baselineskip
Se purifican 0,94 g de heparina despolimerizada
bruta (sal de sodio) obtenida anteriormente según el procedimiento
de purificación descrito en el ejemplo 1. Se obtienen 0,71 g de un
polvo blanco. El rendimiento es 75,5%.
La mezcla purificada de polisacáridos (sal de
sodio) obtenida presenta las características siguientes:
- Peso molecular medio: 2.500 Daltons
- Actividad anti-Xa: 146,6 UI/mg
- Actividad anti-IIa: 2,15 UI/mg
- Relación actividad anti-Xa/actividad anti-IIa: 68
\vskip1.000000\baselineskip
(Referencia)
En un erlenmeyer A de 50 ml, se introducen 28 ml
de diclorometano. Con agitación, se cargan lentamente 4 g (0,00238
moles) de éster bencílico de heparina (tasa de esterificación: 77%,
sal de bencetonio) obtenido según el ejemplo A. Después de la
disolución completa y de enfriar a 2ºC, se añaden 0,333 g (0,00239
moles) de
1,5,7-triazabiciclo[4.4.0]dec-5-eno.
A una temperatura cercana a 20ºC, se deja que la reacción continúe
durante aproximadamente 3 horas y 30 minutos. Durante este tiempo,
se prepara a 4ºC en un erlenmeyer B, una disolución de 12 g de
acetato de sodio en 120 ml de metanol. Con agitación magnética, la
mezcla de reacción del erlenmeyer A se vierte en la disolución
metanólica de acetato de sodio. Aparece un precipitado amarillo. La
agitación se para y se deja decantar la suspensión durante una hora.
La parte transparente del sobrenadante se recoge y se separa (90
ml). Sobre el precipitado sedimentado (aspecto de papilla amarilla),
se añaden 50 ml de metanol y se agita durante 20 minutos. Se deja
re-sedimentar el precipitado 30 minutos
aproximadamente. El sobrenadante se recoge y se separa (61 ml).
Sobre el precipitado sedimentado, se añaden 50 ml de metanol y se
agita durante 20 minutos. El precipitado en suspensión se filtra
sobre Vidrio Fritado 4. La torta obtenida se lava 2 veces con 25 ml
de metanol. El sólido húmedo se filtra con succión y se seca bajo
presión reducida (2,7 kPa), a una temperatura cercana a 60ºC.
Después de 12 horas de secado, se obtienen 1,19 g de heparina
despolimerizada (éster de bencilo, sal de sodio). El sólido es
amarillo intenso. El rendimiento obtenido es 75,9%.
\vskip1.000000\baselineskip
Se saponifican 1,19 g de heparina
despolimerizada (éster de bencilo, sal de sodio) obtenida
anteriormente según el procedimiento de saponificación descrito en
el ejemplo 1. Se obtienen 0,78 g de un polvo amarillo claro. El
rendimiento en heparina despolimerizada bruta (sal de sodio) es
71,5%.
\vskip1.000000\baselineskip
Se purifican 0,78 g de heparina despolimerizada
bruta (sal de sodio) obtenida anteriormente según el método de
purificación descrito en el ejemplo 1. Se obtienen 0,58 g de un
polvo blanco. El rendimiento es 72,5%.
La mezcla purificada de polisacáridos (sal de
sodio) obtenida presenta las características siguientes:
- Peso molecular medio: 2.700 Daltons
- Actividad anti-Xa: 100,1 UI/mg
- Actividad anti-IIa: 3,3 UI/mg
- Relación actividad anti-Xa/actividad anti-IIa: 27,3
\vskip1.000000\baselineskip
En un erlenmeyer A de 50 ml, se introducen 28 ml
de diclorometano. Con agitación, se cargan lentamente 4 g (0,00238
moles) de éster bencílico de heparina (tasa de esterificación: 77%,
sal de bencetonio) obtenido como se ha descrito en el ejemplo A.
Después de la disolución completa y a 2ºC, se añaden 0,6 ml (0,00222
moles) de
2-terc-butilimino-tris(dimetilamino)fosforano.
A una temperatura cercana a 0ºC, se deja que la reacción continúe
durante aproximadamente 3 horas y 30 minutos. Durante este tiempo,
se prepara a 4ºC en un erlenmeyer B, una disolución de 12 g de
acetato de sodio en 120 ml de metanol. Con agitación magnética, la
mezcla de reacción del erlenmeyer A se vierte en la disolución
metanólica de acetato de sodio. Aparece un precipitado amarillo
gelatinoso cuasi-translúcido. La agitación se para y
se deja decantar la suspensión durante una hora. La parte
transparente del sobrenadante se recoge y se separa (108 ml). Sobre
el precipitado sedimentado (aspecto de papilla amarillenta), se
añaden 50 ml de metanol y se agita durante 20 minutos. Se deja
re-sedimentar el precipitado 30 minutos
aproximadamente. El sobrenadante se recoge y se separa (60 ml).
Sobre el precipitado sedimentado, se añaden 50 ml de metanol y se
agita durante 20 minutos. El precipitado blanco amarillento en
suspensión se filtra sobre Vidrio Fritado 4. La torta obtenida se
lava 2 veces con 25 ml de metanol. El sólido se filtra con succión y
se seca bajo presión reducida (2,7 kPa), a una temperatura cercana a
60ºC. Después de 12 horas de secado, se obtienen 1,22 g de heparina
despolimerizada (éster de bencilo, sal de sodio). El rendimiento
obtenido es 77,8%.
\vskip1.000000\baselineskip
Se saponifican 1,22 g de heparina
despolimerizada (éster de bencilo, sal de sodio) obtenida
anteriormente según el protocolo de saponificación descrito en el
ejemplo 1.
Se obtienen 0,69 g de un polvo amarillo muy
claro. El rendimiento en heparina despolimerizada bruta (sal de
sodio) es 61,6%.
\vskip1.000000\baselineskip
Se purifican 0,69 g de heparina despolimerizada
bruta (sal de sodio) obtenida anteriormente según el protocolo de
purificación descrito en el ejemplo 1. Se obtienen 0,67 g de un
polvo blanco. El rendimiento es 97,1%.
La mezcla purificada de polisacáridos (sal de
sodio) obtenida presenta las características siguientes:
- Peso molecular medio: 2.900 Daltons
- Actividad anti-Xa: 145,2 UI/mg
- Actividad anti-IIa: 4,5 UI/mg
- Relación actividad anti-Xa/actividad anti-IIa: 32,6
\vskip1.000000\baselineskip
En un matraz A de 50 ml, se introducen 28 ml de
diclorometano. Con agitación, se cargan lentamente 4 g (0,00238
moles) de heparinato de bencilo (tasa de esterificación: 77%, sal de
bencetonio). Después de la disolución completa y a 40ºC, se añaden
0,95 g (0,00949 moles) de imidazolato de sodio. A reflujo de
diclorometano, se deja que la reacción continúe durante
aproximadamente 4 horas. Durante este tiempo, se prepara a 4ºC en un
erlenmeyer B, una disolución de 12 g de acetato de sodio en 120 ml
de metanol. Con agitación magnética, la mezcla de reacción del
erlenmeyer A se vierte en la disolución metanólica de acetato de
sodio. Aparece un precipitado amarillo gelatinoso
cuasi-translúcido. La agitación se para y se deja
decantar la suspensión durante una hora. La parte transparente del
sobrenadante naranja se recoge y se separa (88 ml). Sobre el
precipitado sedimentado (aspecto de papilla naranja), se añaden 50
ml de metanol y se agita durante 20 minutos. Se deja
re-sedimentar el precipitado 30 minutos
aproximadamente. El sobrenadante se recoge y se separa (51 ml).
Sobre el precipitado sedimentado, se añaden 50 ml de metanol y se
agita durante 20 minutos. El precipitado naranja en suspensión se
filtra sobre Vidrio Fritado 4. La torta obtenida se lava 2 veces con
25 ml de metanol. El sólido se filtra con succión y se seca bajo
presión reducida (2,7 kPa), a una temperatura cercana a 60ºC.
Después de 12 horas de secado, se obtienen 1,34 g de heparina
despolimerizada (éster de bencilo, sal de sodio).
El rendimiento obtenido es 76,6%.
\vskip1.000000\baselineskip
Se saponifican 1,2 g de heparina despolimerizada
(éster de bencilo, sal de sodio) obtenida anteriormente según el
protocolo de saponificación descrito en el ejemplo 1.
Se obtienen 0,63 g de un polvo beige. El
rendimiento en heparina despolimerizada bruta (sal de sodio) es
52,5%.
\vskip1.000000\baselineskip
Se purifican 0,63 g de heparina despolimerizada
bruta (sal de sodio) obtenida anteriormente según el método de
purificación descrito en el ejemplo 1. Se obtienen 0,42 g de un
polvo blanco beige. El rendimiento es 66,7%.
La mezcla purificada de polisacáridos (sal de
sodio) obtenida presenta las características siguientes:
- Peso molecular medio: 2.250 Daltons
- Actividad anti-Xa: 134,5 UI/mg
- Actividad anti-IIa: 1,5 UI/mg
- Relación actividad anti-Xa/actividad anti-IIa: 90,5
\vskip1.000000\baselineskip
(Referencia)
En un erlenmeyer A de 50 ml, se introducen 28 ml
de diclorometano. Con agitación, se cargan lentamente 4 g (0,00238
moles) de éster bencílico de heparina (tasa de esterificación: 77%,
sal de bencetonio) obtenido como se ha descrito en el ejemplo A.
Después de la disolución completa, se añaden 1,33 g (0,00956 moles)
de
1,5,7-triazabiciclo[4.4.0]dec-5-eno.
Se agita a una temperatura cercana a 20ºC, durante 3 horas y 30
minutos. Durante este tiempo, se prepara a 4ºC en un erlenmeyer B,
una disolución de 12 g de acetato de sodio en 120 ml de metanol. Con
agitación magnética, la mezcla de reacción del erlenmeyer A se
vierte en la disolución metanólica de acetato de sodio. Aparece un
precipitado amarillo gelatinoso cuasi-translúcido.
La agitación se para y se deja decantar la suspensión durante una
hora. La parte transparente del sobrenadante se recoge y se separa
(56 ml). Sobre el precipitado sedimentado (aspecto de papilla
amarilla), se añaden 60 ml de metanol y se agita durante 20 minutos.
Se deja re-sedimentar el precipitado 30 minutos
aproximadamente. El sobrenadante se recoge y se separa (70 ml).
Sobre el precipitado sedimentado, se añaden 50 ml de metanol y se
agita durante 15 minutos. El precipitado en suspensión se filtra
sobre Vidrio Fritado 4. La torta amarilla oro obtenida se lava 2
veces con 50 ml de metanol. El sólido húmedo se filtra con succión y
se seca bajo presión reducida (2,7 kPa), a una temperatura cercana a
60ºC. Después de 12 horas de secado, se obtienen 0,92 g de heparina
despolimerizada (éster de bencilo, sal de sodio). El rendimiento
obtenido es 64%.
\vskip1.000000\baselineskip
En un erlenmeyer de 25 ml, se introducen 0,92 g
(0,0014 moles) de la heparina despolimerizada (éster de bencilo, sal
de sodio) obtenida anteriormente y 17,5 ml de agua. Con agitación
magnética, se introducen 0,38 ml (0,00379 moles) de detergente de
sosa al 30%. Después de la adición, la mezcla se mantiene a una
temperatura cercana a 20ºC y se agita durante 5 horas. Se añaden 1,8
g de NaCl y se neutraliza la disolución por adición de HCl
concentrado (volumen final de la disolución aproximadamente 18 ml).
La mezcla se trasvasa a un erlenmeyer de 100 ml y se añaden 46 ml de
metanol. Se observa la formación de un precipitado amarillo. La
agitación se para y se deja sedimentar la suspensión durante 12
horas a una temperatura cercana a 20ºC. El sobrenadante se recoge y
se separa (52 ml). Sobre el precipitado sedimentado (aspecto de
papilla amarilla), se añaden 25 ml de metanol y se agita durante 20
minutos. Se deja re-sedimentar el precipitado 1 hora
aproximadamente. El sobrenadante se recoge y se separa (27 ml).
Sobre el precipitado sedimentado, se añaden 25 ml de metanol y se
agita durante 1 hora aproximadamente. El precipitado en suspensión
se filtra sobre Vidrio Fritado 4. La torta obtenida se lava 2 veces
con 10 ml de metanol. El sólido húmedo se filtra con succión y se
seca bajo presión reducida (2,7 kPa), a una temperatura cercana a
60ºC. Después de 3 horas de secado, se obtienen 0,42 g de heparina
despolimerizada bruta (sal de sodio). El rendimiento obtenido es
45,6%.
\vskip1.000000\baselineskip
En un erlenmeyer de 10 ml, se introducen 0,42 g
de heparina despolimerizada bruta obtenida anteriormente y 3,8 ml de
agua destilada. La mezcla se lleva a 38ºC con agitación magnética.
Por adición de sosa a 0,1 mol/l, se lleva el pH entre 9 y 10 y se
añaden 25 microlitros de una disolución acuosa de peróxido de
hidrógeno al 30%. Después de aproximadamente 2 horas 30 minutos de
agitación, se añaden 0,5 g de cloruro de sodio. La mezcla se
neutraliza por adición de HCl a 0,1 mol/l. La disolución se filtra y
se trasvasa a un erlenmeyer de 25 ml. Se vierten 11,3 ml de metanol.
Se observa la formación de un precipitado blanco. La agitación se
para y se deja sedimentar la suspensión durante 12 horas a una
temperatura cercana a 20ºC. El sobrenadante se recoge y se separa
(9,8 ml). Sobre el precipitado sedimentado (aspecto de papilla), se
añaden 5 ml de metanol y se agita durante 15 minutos. Se deja
re-sedimentar el precipitado 3 horas
aproximadamente. El sobrenadante se recoge y se separa (6,2 ml).
Sobre el precipitado sedimentado, se añaden 5 ml de metanol y se
agita durante 20 minutos. El precipitado en suspensión se filtra
sobre Vidrio Fritado 3. La torta blanca obtenida se lava 2 veces con
5 ml de metanol. El sólido húmedo se filtra con succión y se seca
bajo presión reducida (2,7 kPa), a una temperatura cercana a 60ºC.
Después de aproximadamente 2 horas 20 minutos
de secado, se obtienen 0,39 g de heparina despolimerizada pura (sal de sodio). El rendimiento obtenido es 92,8%.
de secado, se obtienen 0,39 g de heparina despolimerizada pura (sal de sodio). El rendimiento obtenido es 92,8%.
Las características de la heparina
despolimerizada así obtenida son las siguientes:
- Peso molecular medio: 1.950 daltons
- Actividad anti-Xa: 115,6 UI/mg
- Actividad anti-IIa: < 2 UI/mg
- Relación actividad anti-Xa/actividad anti-IIa: >57
\vskip1.000000\baselineskip
En un reactor A de 400 ml, se introducen 140 ml
de diclorometano. Con agitación, se cargan lentamente 20 g (0,0119
moles) de éster bencílico de heparina (tasa de esterificación: 77%,
sal de bencetonio) obtenido como se ha descrito en el ejemplo A.
Después de la disolución completa, se mide el contenido en agua del
medio de reacción por el método de Karl Fisher. El valor obtenido es
0,1% de agua. Se añaden 3,5 ml (0,0121 moles) de
2-terc-butilimino-2-dietilamino-1,3-dimetil-perhidro-1,3,2-diazafosforina.
A una temperatura cercana a 25ºC, se deja que la reacción continúe
durante aproximadamente 24 horas. Durante este tiempo, se prepara a
4ºC en un erlenmeyer B, una disolución de 30 g de acetato de sodio
en 300 ml de metanol. Con agitación magnética, la mitad de la mezcla
de reacción del reactor A se vierte en la disolución metanólica de
acetato de sodio. Aparece un precipitado amarillo gelatinoso
cuasi-translúcido. La agitación se mantiene durante
una hora y se deja decantar la suspensión durante aproximadamente 12
horas a 4ºC. La parte transparente del sobrenadante se recoge y se
separa (220 ml). Sobre el precipitado sedimentado (aspecto de
papilla amarilla), se añaden 220 ml de metanol y se agita durante 50
minutos. Se deja re-sedimentar el precipitado 40
minutos aproximadamente. El sobrenadante se recoge y se separa (204
ml). Sobre el precipitado sedimentado, se añaden 204 ml de metanol y
se agita durante 40 minutos. El precipitado gelatinoso en suspensión
se filtra sobre Vidrio Fritado 3. La torta gelatinosa amarilla
obtenida se lava con 2 partes de 100 ml de metanol. El sólido
gelatinoso se filtra con succión y se seca bajo presión reducida
(2,7 kPa), a una temperatura cercana a 60ºC. Después de
aproximadamente 12 horas de secado, se obtienen 2,6 g de heparina
despolimerizada (éster de bencilo, sal de sodio). El rendimiento
obtenido es 70,6% (calculado sobre la base de la mitad del medio de
reacción tratada).
\vskip1.000000\baselineskip
Se saponifican 2,6 g de heparina despolimerizada
(éster de bencilo, sal de sodio) obtenida anteriormente según el
procedimiento de saponificación descrito en el ejemplo 1. Se
obtienen 1,48 g de un polvo amarillo claro. El rendimiento en
heparina despolimerizada bruta (sal de sodio) es 62,9%.
\vskip1.000000\baselineskip
En un erlenmeyer de 50 ml, se introducen 1,48 g
de heparina despolimerizada bruta obtenida anteriormente y 15 ml de
agua destilada. La mezcla se lleva a 40ºC con agitación magnética.
Por adición de sosa a 1 mol/l, se lleva el pH entre 9 y 10. La
disolución se filtra sobre una membrana filtrante de porosidad 1
\mum. Se añaden 76 microlitros de una disolución acuosa de
peróxido de hidrógeno al 30%. Después de aproximadamente 2 horas de
agitación, se añaden 1,5 g de cloruro de sodio. La mezcla se
neutraliza por adición de HCl a 1mol/l. La disolución se filtra
sobre una membrana filtrante de porosidad 1 \mum. Se vierten 38 ml
de metanol. Se observa la formación de un precipitado blanco. La
agitación se para y se deja sedimentar la suspensión durante 1 hora
a una temperatura cercana a 20ºC. El sobrenadante se recoge y se
separa (37 ml). Sobre el precipitado, se añaden 37 ml de metanol y
se agita durante 45 minutos. Se deja re-sedimentar
el precipitado 45 minutos aproximadamente. El sobrenadante se recoge
y se separa (34 ml). Sobre el precipitado sedimentado, se añaden 34
ml de metanol y se agita durante 15 minutos. El precipitado en
suspensión se filtra sobre Vidrio Fritado 3. La torta blanca
obtenida se lava 2 veces con 25 ml de metanol. El sólido húmedo se
filtra con succión y se seca bajo presión reducida (2,7 kPa), a una
temperatura cercana a 60ºC. Después de 12 horas de secado, se
obtienen 1,29 g de heparina despolimerizada pura (sal de sodio). El
rendimiento obtenido es 87,2%.
La heparina despolimerizada purificada (sal de
sodio) obtenida presenta las características siguientes:
- Peso molecular medio: 2.250 Daltons
- Actividad anti-Xa: 149,6 UI/mg
- Actividad anti-IIa: 0,85 UI/mg
- Relación actividad anti-Xa/actividad anti-IIa: 176
Claims (19)
1. Mezclas de polisacáridos sulfatados que
poseen la estructura general de los polisacáridos que constituyen la
heparina y que presentan las características siguientes:
- -
- tienen un peso molecular medio de 1.500 a 3.000 daltons, una actividad anti-Xa de 100 a 150 UI/mg, una actividad anti-IIa de 0 a 10 UI/mg y una relación actividad anti-Xa/actividad anti-IIa superior a 10,
- \quad
- con la excepción:
- \circ
- de un polisacárido que presenta un peso molecular de 2.777 daltons, una actividad anti-Xa de 100 UI/mg y una actividad anti-IIa de 4 UI/mg,
- \circ
- de un polisacárido que presenta un peso molecular de 2.161 daltons, una actividad anti-Xa de 100 UI/mg y una actividad anti-IIa de 2 UI/mg,
- -
- los polisacáridos que constituyen las mezclas contienen 2 a 26 restos sacarídicos y tienen un resto de ácido glucurónico-4,5 insaturado 2-O-sulfato en uno de sus extremos,
en forma de una sal de metal alcalino o
alcalinotérreo.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Mezclas según la reivindicación 1
caracterizadas porque la actividad anti Xa está comprendida
entre 125 y 150 UI/mg.
3. Mezclas según la reivindicación 1 ó 2
caracterizadas porque la actividad anti Xa está comprendida
entre 140 y 150 UI/mg y el peso molecular medio está comprendido
entre 2.000 y 3.000 dalton.
4. Mezclas según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3 en forma de sal de sodio, de potasio, de
calcio o de magnesio.
5. Mezclas según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4 que tienen una actividad
anti-IIa de 0 a 5 UI/mg.
6. Mezclas según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5 que presentan una relación actividad
anti-Xa/actividad anti-IIa superior
a 25.
7. Procedimiento de preparación de las mezclas
de la reivindicación 1, caracterizado porque:
- -
- se despolimeriza una sal de amonio cuaternario del éster bencílico de la heparina en medio orgánico, mediante:
- \circ
- una base orgánica fuerte de pka superior a 20 elegida entre 2-terc-butilimino-2-dietilamino-1,3-dimetilperhidro-1,3,2-diazafosforina, las bases de la familia de la guanidina y los fosfacenos,
- \circ
- o imidazolato de sodio,
- -
- se transforma la sal de amonio cuaternario del éster bencílico de la heparina despolimerizada en sal de sodio,
- -
- se saponifica el éster y opcionalmente se purifica el producto.
\vskip1.000000\baselineskip
8. Procedimiento según la reivindicación 7 para
el que la sal de amonio cuaternario del éster bencílico de la
heparina es la sal de bencetonio, de cetilpiridinio o de
cetiltrimetilamonio.
9. Procedimiento según la reivindicación 7 para
el que las bases de la familia de las guanidinas son las de
fórmula:
en la que R_{1} es hidrógeno o
alquilo, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} idénticos o diferentes
representan cada uno un radical alquilo, teniendo los radicales
alquilo 1 a 6 átomos de carbono en cadena recta o
ramificada.
\vskip1.000000\baselineskip
10. Procedimiento según la reivindicación 9 para
el que R_{1} es hidrógeno y R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5}
son radicales metilo.
11. Procedimiento según la reivindicación 7 para
el que las bases de la familia de los fosfacenos son las de
fórmula:
en la que los radicales R_{1} a
R_{7} son idénticos o diferentes y representan los radicales
alquilo que contienen 1 a 6 átomos de carbono, en cadena recta o
ramificada.
\vskip1.000000\baselineskip
12. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 7 a 11 para el que la relación en mol base orgánica
fuerte de pka superior a 20 o imidazolato de sodio/sal de amonio
cuaternario del éster bencílico de la heparina está comprendida
entre 0,2 y 5.
13. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 7 a 12 para el que la sal de amonio cuaternario del
éster bencílico de la heparina tiene una tasa de esterificación
comprendida entre 50 y 100%.
14. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 7 a 13 para el que la transformación de la sal de
amonio cuaternario del éster bencílico de la heparina
despolimerizada en sal de sodio se efectúa por tratamiento del medio
de reacción con una disolución alcohólica de acetato de sodio.
15. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 7 a 14 para el que la saponificación se efectúa
mediante un hidróxido de metal alcalino.
16. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 7 a 15 para el que la purificación se efectúa
mediante peróxido de hidrógeno.
17. Mezclas tales como se han definido en una
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 como medicamentos.
18. Mezclas tales como se han definido en una
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 como medicamentos
antitrombóticos.
19. Composiciones farmacéuticas que comprenden
como principio activo una mezcla según una de las reivindicaciones 1
a 6.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0009572 | 2000-07-21 | ||
| FR0009572A FR2811992B1 (fr) | 2000-07-21 | 2000-07-21 | Melanges de polysaccharides derives d'heparine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant |
| PCT/FR2001/002332 WO2002008295A1 (fr) | 2000-07-21 | 2001-07-18 | Melanges de polysaccharides derives d'heparine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
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Cited By (2)
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