ES2329419T3 - 7h-pirido(3,4-d)pirimidin-8-onas, su preparacion y uso como inhibidores de proteinas cinasas. - Google Patents

Abstract

Un compuesto según la fórmula I, **(Ver fórmula)** donde R1 es halógeno, alquilo, alcoxi, alquilo halogenado o alcoxi halogenado; R2 es hidrógeno, halógeno, alquilo, alcoxi, alquilo halogenado o alcoxi halogenado; R3 es alquilo, opcionalmente sustituido una o varias veces con ciano, -OR, -NRR'', -C(O)NRR'', -NR-C(O)-alquilo, -S(O)2NRR'', -NR-S(O)2-alquilo, heteroarilo, hetero-ciclilo, fenilo no sustituido o fenilo sustituido una o varias veces con halógeno, alquilo, alcoxi o ciano; R4 es a) alquilo, opcionalmente sustituido una o varias veces con -OR o -NRR''; b) fenilo, opcionalmente sustituido una o varias veces con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -C(O)NRR'', -NR-C (O)-alquilo, -S(O)-alquilo, -S(O)2NR-alquilo o -NR-S(O)2-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi están opcionalmente sustituidos una o varias veces con -OR o -NRR''; o c) heterociclilo; R y R'' son hidrógeno o alquilo; donde el término "alquilo", tal como se utiliza aquí, significa un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que tiene 1 a 4 átomos de carbono; el término "alquilo halogenado", tal como se utiliza aquí, significa un grupo alquilo como el definido arriba, que está sustituido una o varias veces con halógeno; el término "alcoxi", tal como se utiliza aquí, significa un grupo alquilo-O en que el alquilo se define como arriba; el término "alcoxi halogenado", tal como se utiliza aquí, significa un grupo alcoxi como el definido arriba, que está sustituido una o varias veces con halógeno; el término "heteroarilo" significa un anillo aromático mono- o bicíclico de 5 a 10, preferiblemente 5 a 6, átomos, que lleva hasta 3 heteroátomos elegidos independientemente entre N, O o S, siendo de carbono los restantes átomos del anillo. Estos grupos heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos una a tres veces con alquilo; el término "heterociclilo" significa un anillo monocíclico de hidrocarburo saturado, de 5 a 6 átomos, que lleva hasta 3, heteroátomos escogidos independientemente entre N, O o S, siendo de carbono los restantes átomos del anillo. Este grupo heterocíclico saturado puede estar sustituido opcionalmente una a tres veces, con alquilo; y todas las sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

Description

7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-onas, su preparación y uso como inhibidores de proteínas cinasas.

La presente invención se refiere a nuevos derivados de 7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona, a un proceso para su preparación, a composiciones farmacéuticas que los contienen y a su elaboración, así como al empleo de estos compuestos como agentes farmacéuticamente activos.

Antecedentes de la presente invención

Las proteínas cinasas son unos enzimas que catalizan la transferencia de un grupo fosfato del ATP a un resto amino-ácido, tal como tirosina, serina, treonina o histidina, de una proteína. La regulación de estas proteínas cinasas es esencial para controlar una gran variedad de eventos celulares, incluyendo la proliferación y la migración.

Es sabido que la activación inapropiada de las tirosina-cinasas está implicada en una serie de estados patológicos, incluyendo trastornos inflamatorios, inmunológicos, alteraciones del SNC, trastornos oncológicos o enfermedades óseas. Véase por ejemplo Susva, M., y otros, Trends Pharmacol. Sci. 21 (2000) 489-495; Biscardi, J.S., y otros, Adv. Cancer Res. 76 (2000) 61-119.

Las tirosina-cinasas son una clase de proteíncinasas. La familia Src, formada por al menos ocho miembros (Src, Fyn, Lyn, Yes, Lck, Fgr, Hck y Blk) que participan en varias vías señalizadoras, representan la familia principal de proteín-tirosina-cinasas citoplasmáticas (Schwartzberg, P.L., Oncogene 17 (1998) 1463-1468). El miembro prototípico de esta familia de tirosina-cinasas es la Src, que interviene en respuestas proliferativas y migratorias de muchos tipos de células (Sawyer, T., y otros, Expert Opin. Investig. Drugs 10 (2001) 1327-1344). Se ha demostrado que la actividad de la Src es elevada en diferentes cánceres, p. ej. en los tumores de mama, colon (>90%), páncreas (>90%) e hígado (>90%). La mayor actividad de la Src también está relacionada con la metástasis (>90%) y el pronóstico malo. El mensaje Src antisentido dificulta el crecimiento de células tumorales de colon en ratones desnudos (Staley, C.A., Cell Growth Differ. 8 (1997) 269-274), lo cual sugiere que los inhibidores de la Src podrían ralentizar el crecimiento tumoral. Por otra parte, además de su papel en la proliferación celular, la Src también actúa en las vías de respuesta al estrés, incluyendo la respuesta a la hipoxia. Se ha demostrado en estudios que ratones desnudos con células tumorales de colon que expresan mensaje Src antisentido tienen una vascularización reducida (Ellis, L.M., y otros, J. Biol. Chem. 273 (1998) 1052-1057), lo cual sugiere que los inhibidores de la Src podrían ser tanto antiangiogénicos como antiproliferativos.

La Src interrumpe las interacciones célula-célula relacionadas con la E-cadherina (Avizienyte, E., y otros, Nature Cell Bio. 4 (2002) 632-638). Un inhibidor de bajo peso molecular de la Src evita esta interrupción y por tanto disminuye la metástasis de las células cancerosas (Nam, J.S., y otros, Clin. Cancer Res. 8 (2002) 2430-2436).

Los inhibidores de Src pueden evitar la lesión secundaria resultante de un incremento de la permeabilidad vascular mediada por VEGF, como la observada tras el ictus (Eliceiri, B.P., y otros, Mol. Cell. 4 (1999) 915-924; Paul, R., y otros, Nat. Med. 7 (2001) 222-227).

El bloqueo de la Src evita la disociación del complejo que incluye Flk, VE-cadherina y \beta-catenina mediante la misma cinética que evita el VP/edema mediado por VEGF y explica la demanda de Src en la permeabilidad mediada por VEGF, y ofrece una base para la inhibición de Src como opción terapéutica en caso de pacientes con infarto de miocardio agudo (Weis, S., y otros, J. Clin. Invest. 113 (2004) 885-894).

La Src también juega un papel en la osteoporosis. Se ha visto que los ratones manipulados genéticamente para una producción deficiente de Src presentan osteoporosis, el fallo de reabsorción de hueso (Soriano, P., y otros, Cell 64 (1991) 693-702; Boyce, B.F., y otros, J. Clin., Invest., 90 (1992) 1622-1627). Este defecto se caracteriza por la falta de actividad osteoclástica. Como los osteoclastos expresan normalmente altos niveles de Src, la inhibición de la actividad de la cinasa Src puede ser útil para el tratamiento de la osteoporosis (Missbach, M., y otros, Bone 24 (1999) 437-449).

Los inhibidores de bajo peso molecular para las proteíncinasas son ampliamente conocidos en el estado técnico. Para inhibir la Src y otras cinasas, dichos inhibidores se basan efectivamente en derivados de 8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (ver p. ej. patentes WO 96/34867, WO 96/ 15128, US 5,733,914, WO 02/018379, WO 02/018380, WO 2005/034869, Klutchko, S.R, y otros, J. Med. Chem. 41 (1998) 3276-3292 o Blankley, C.J., J. Med. Chem. 41 (1998) 1752-1763) o de 3,4-dihidro-1H-pirimido-[4,5-d]pirimidin-2-ona (ver p. ej. las patentes WO 99/61444, WO 00/024744, WO 01/029041, WO 01/029042, WO 2004/011465, WO 2004/041821, WO 2004/041823, WO 2004/075852, WO 2004/089955 o WO 2005/011597). Algunos derivados de pirido-pirimidinona son conocidos por estudios de reacciones de acoplamiento cruzado (Sakamoto, T., y otros, Chemical & Pharmaceutical Bulletin 30 (1982) 2410-2416).

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Resumen de la presente invención

La presente invención se refiere a derivados de 7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona, de fórmula general I

1

donde

R^{1}

es halógeno, alquilo, alcoxi, alquilo halogenado o alcoxi halogenado;

R^{2}

es hidrógeno, halógeno, alquilo, alcoxi, alquilo halogenado o alcoxi halogenado;

R^{3}

es alquilo, opcionalmente sustituido una o varias veces con ciano, -OR, -NRR', -C(O)NRR', -NR-C(O)-alquilo, -S(O)_{2}NRR', -NR-S(O)_{2}-alquilo, heteroarilo, hetero-ciclilo, fenilo no sustituido o fenilo sustituido una o varias veces con halógeno, alquilo, alcoxi o ciano;

R^{4}

es a) alquilo, opcionalmente sustituido una o varias veces con -OR o -NRR';

\quad

b) fenilo, opcionalmente sustituido una o varias veces con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -C(O)NRR', -NR-C(O)-alquilo, -S(O)-alquilo, -S(O)_{2}NR-alquilo o -NR-S(O)_{2}-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi están opcionalmente sustituidos una o varias veces con -OR o -NRR'; o

\quad

c) heterociclilo;

R y R' son hidrógeno o alquilo;

y a todas sus sales farmacéuticamente aceptables.

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Los compuestos según la presente invención tienen actividad como inhibidores de proteíncinasas, en particular como inhibidores de la familia Src de tirosina-cinasas (sobre todo como inhibidores de src y lck) y también como inhibidores de las tirosina-cinasas Abl, PDGFR, Raf, y por tanto pueden ser útiles para tratar enfermedades mediadas por dichas tirosina-cinasas.

La familia de las tirosina-cinasas juega un papel importante en la regulación de la señalización y la proliferación celular, fosforilando residuos de tirosina de péptidos y proteínas. Se sabe que la activación inadecuada de las tirosina-cinasas está implicada en una serie de estados patológicos, incluyendo trastornos inflamatorios, inmunológicos, alteraciones del SNC, trastornos oncológicos o enfermedades óseas. Véase por ejemplo Susva, M., y otros, Trends Pharmacol. Sci. 21 (2000) 489-495; Biscardi, J.S., y otros, Adv. Cancer Res. 76 (2000) 61-119.

La inhibición de las cinasas Src, Abl, PDGFR y Raf tiene un efecto antiproliferativo en líneas de células tumorales, lo cual indica que los inhibidores de las cinasas Src, Abl, PDGFR y Raf pueden ser útiles para tratar p. ej. enfermedades hiperproliferativas tales como el cáncer, particularmente el de tipo colorrectal, mamario, pulmonar, prostático, pancreático, gástrico, vesical, ovárico, melanoma, neuroblastoma, cervical o renal, leucemias o linfomas.

Asimismo es sabido que la familia de cinasas Src está involucrada en otros estados patológicos distintos. Los compuestos de la presente invención también se pueden usar como inhibidores de la familia de cinasas Src, especialmente como inhibidores de la cinasa Src, para la prevención y terapia de, por ejemplo, rechazo de trasplantes, síndrome inflamatorio intestinal, artritis reumatoide, psoriasis, reestenosis, asma alérgico, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, ictus, osteoporosis.

También es conocido que la familia de cinasas Abl está implicada en otros estados patológicos diferentes. Los compuestos de la presente invención también se pueden usar como inhibidores de la familia de cinasas Abl, especialmente como inhibidores de la cinasa Abl, para la prevención y terapia de, por ejemplo, enfermedades neurodegenerativas, artritis reumatoide y diabetes, incluyendo las de tipo I o II.

Además es conocido que la familia de cinasas PDGFR está involucrada en otros estados patológicos diferentes. Los compuestos de la presente invención también se pueden usar como inhibidores de la familia de cinasas PDGFR, sobre todo como inhibidores de la cinasa PDGFR, para la prevención y terapia de, por ejemplo, la diabetes, incluyendo las de tipo I o II, la reestenosis (p. ej. la inducida por lesión con catéteres de globo), la aterosclerosis o la fibrosis pulmonar.

Son objeto de la presente invención los compuestos de la fórmula I y sus tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, formas enantiómeras, diastereoisómeros y racematos, su uso para inhibir el crecimiento tumoral, la preparación de los compuestos arriba citados, medicamentos que los contienen y su elaboración, así como el uso de los compuestos arriba citados para el control o prevención de enfermedades, especialmente de cánceres como el colorrectal, mamario, pulmonar, prostático, pancreático, gástrico, vesical, ovárico, melanoma, neuroblastoma, cervical o renal, leucemias o linfomas, o para la elaboración de los correspondientes medicamentos.

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Descripción detallada de la presente invención 1. Definiciones

El término "halógeno" significa flúor, cloro o bromo, preferiblemente flúor o cloro y especialmente cloro.

El término "alquilo", tal como se usa aquí, significa un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que tiene 1 a 4, preferiblemente 1 a 3, átomos de carbono. Como ejemplos de dichos grupos alquilo cabe mencionar metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, 2-butilo y t-butilo, preferiblemente metilo.

El término "alcoxi", tal como se usa aquí, significa un grupo alquilo-O en que el alquilo se define como arriba. Como ejemplos de dichos grupos alcoxi cabe citar metoxi, etoxi, n-propoxi e isopropoxi, preferiblemente
metoxi.

El término "alquilo halogenado", tal como se usa aquí, significa un grupo alquilo como el definido arriba, que está sustituido una o varias veces, preferiblemente una a seis y especialmente una a tres veces, con halógeno, sobre todo con flúor o cloro, especialmente con flúor. Como ejemplos cabe mencionar difluorometilo, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoro-etilo, perfluoroetilo y análogos, sobre todo trifluorometilo.

El término "alcoxi halogenado", tal como se usa aquí, significa un grupo alcoxi como el definido arriba, que está sustituido una o varias veces con halógeno, sobre todo con flúor o cloro, especialmente con flúor. Como ejemplos cabe mencionar difluorometoxi, trifluorometoxi, 2,2,2-trifluoro-etoxi, perfluoroetoxi y análogos, sobre todo trifluorometoxi.

El término "heteroarilo" significa un anillo aromático mono- o bicíclico de 5 a 10, preferiblemente 5 a 6, átomos, que lleva hasta 3, preferiblemente 1 o 2 heteroátomos elegidos independientemente entre N, O o S, siendo de carbono los restantes átomos del anillo. Estos grupos heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos una a tres, preferiblemente una o dos veces con alquilo, preferiblemente con metilo. Como ejemplos de tales grupos heteroarilo cabe citar pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, metilpirazolilo, dimetilpirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, furanilo, oxazolilo, isoxazolilo, tienilo, metiltienilo, tiazolilo, metiltiazolilo, piridilo, pirimidilo, piridazinilo, pirazinilo, indolilo, indazolilo, benzimidazolilo, benzotiofenilo, benzofuranilo, quinolilo, isoquinolilo, quinazolinilo y análogos, preferiblemente pirazolilo, metilpirazolilo o dimetilpirazolilo, y especialmente dimetilpirazolilo.

El término "heterociclilo" significa un anillo monocíclico de hidrocarburo saturado, de 5 a 6 átomos, que lleva hasta 3, preferiblemente 1 o 2 heteroátomos elegidos independientemente entre N, O o S, siendo de carbono los restantes átomos del anillo. Este grupo heterocíclico saturado puede estar sustituido opcionalmente una a tres, preferiblemente una o dos veces, con alquilo, preferiblemente metilo. Como ejemplos de tales grupos heterocíclicos saturados cabe citar tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo, piperazinilo, N-metil-piperazinilo, piperidilo, pirrolidinilo y análogos, preferiblemente tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo o N-metil-piperazinilo.

Tal como se usa aquí, el término "una cantidad terapéuticamente efectiva" de un compuesto significa una cantidad del mismo que es efectiva para prevenir, aliviar o mejorar los síntomas de la enfermedad o prolongar la supervivencia del sujeto sometido a tratamiento. La determinación de una cantidad terapéuticamente efectiva forma parte del estado técnico.

La cantidad terapéuticamente efectiva o dosificación de un compuesto según la presente invención puede variar dentro de amplios límites y se puede determinar del modo conocido en el estado técnico. La dosificación se ajustará a las necesidades de cada caso particular, incluyendo el o los compuestos específicos administrados, la vía de administración, las enfermedades tratadas y el paciente sometido a tratamiento. De manera general, en caso de administración oral o parenteral a adultos humanos con un peso aproximado de 70 kg sería idónea una dosis diaria de unos 10 a 10.000 mg, preferiblemente de unos 200 a 1.000 mg, pero el límite superior puede superarse cuando esté indicado. La dosis diaria se puede administrar en una sola o en varias tomas; para la administración parenteral se puede suministrar como infusión continua.

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2. Descripción detallada

R^{1} es halógeno, alquilo, alcoxi, alquilo halogenado o alcoxi halogenado, preferiblemente halógeno, alquilo o alcoxi y con mayor preferencia halógeno o alquilo.

R^{2} es hidrógeno, halógeno, alquilo, alcoxi, alquilo halogenado o alcoxi halogenado, preferiblemente hidrógeno.

R^{3} es alquilo opcionalmente sustituido una o más veces, preferiblemente una o dos veces, con ciano, -OR, -NRR', -C(O)NRR', -NR-C(O)-alquilo, -S(O)_{2}NRR', -NR-S(O)_{2}-alquilo, heteroarilo, heterociclilo, fenilo no sustituido o fenilo sustituido una o varias veces con halógeno, alquilo, alcoxi o ciano. Si el alquilo de la definición de R^{3} va sustituido, lo está preferiblemente con -OR, -C(O)NRR', heteroarilo (preferentemente dimetilpirazolilo), heterociclilo (preferentemente tetrahidrofuranilo) o fenilo sustituido una o dos veces con alcoxi.

R^{4} es a) alquilo, opcionalmente sustituido una o varias veces, preferiblemente una o dos veces, con -OR o -NRR'; b) fenilo, opcionalmente sustituido una o varias veces, preferiblemente una o dos veces, con alquilo, alcoxi, heterociclilo (sobre todo morfolinilo o N-metil-piperazinilo), -C(O)NRR', -NR-C(O)-alquilo, -S(O)-alquilo, -S(O)_{2}NR-alquilo o -NR-S(O)_{2}-alquilo, preferiblemente con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -S(O)-alquilo o -S(O)_{2}NR-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi, preferiblemente los grupos alquilo, alcoxi o -S(O)_{2}NR-alquilo, están opcionalmente sustituidos una o más veces, preferiblemente una o dos veces, con -OR o -NRR'; o c) heterociclilo, preferentemente tetrahidrofuranilo.

R y R' son hidrógeno o alquilo.

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Una forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{1}

es halógeno o alquilo;

R^{2}

es hidrógeno;

R^{3}

es alquilo opcionalmente sustituido una o varias veces, con -OR, -C(O)NRR', heteroarilo, heterociclilo, fenilo no sustituido o fenilo sustituido una o varias veces con alcoxi; y

R^{4}

es a) alquilo, opcionalmente sustituido una o más veces con -OR o -NRR'; b) fenilo, opcionalmente sustituido una o más veces con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -S(O)-alquilo o -S(O)_{2}NR-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi están opcionalmente sustituidos una o más veces con -OR o -NRR'; o c) heterociclilo.

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Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{1}

es halógeno.

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Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{1}

es alquilo.

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Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{4}

es a) alquilo, opcionalmente sustituido una o más veces con -OR o -NRR'; b) heterociclilo.

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Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{4}

es alquilo, opcionalmente sustituido una o más veces con -OR o -NRR'.

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Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{1}

es halógeno o alquilo;

R^{2}

es hidrógeno;

R^{3}

es alquilo opcionalmente sustituido una o varias veces, con -OR, -C(O)NRR', heteroarilo, heterociclilo, fenilo no sustituido o fenilo sustituido una o varias veces con alcoxi; y

R^{4}

es alquilo, opcionalmente sustituido una o más veces con -OR o -NRR'.

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Dichos compuestos pueden seleccionarse, por ejemplo, del grupo formado por:

2-(2-hidroxi-1-hidroximetil-etilamino)-7-metil-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilmetil)-2-(2-hidroxi-1-hidroximetil-etilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]-pirimidin-
8-ona; y

3-[6-(2-cloro-fenil)-2-(2-hidroxi-1-hidroximetil-etilamino)-8-oxo-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-propionamida.

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Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{4}

es fenilo, opcionalmente sustituido una o varias veces con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -S(O)-alquilo o -S(O)_{2}NR-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi están opcionalmente sustituidos una o más veces con -OR o -NRR'.

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Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{1}

es halógeno o alquilo;

R^{2}

es hidrógeno;

R^{3}

es alquilo opcionalmente sustituido una o varias veces, con -OR, -C(O)NRR', heteroarilo, heterociclilo, fenilo no sustituido o fenilo sustituido una o varias veces con alcoxi; y

R^{4}

es fenilo, opcionalmente sustituido una o varias veces con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -S(O)-alquilo o -S(O)_{2}NR-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi están opcionalmente sustituidos una o más veces con -OR o -NRR'.

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Dichos compuestos pueden seleccionarse, por ejemplo, del grupo formado por:

7-Metil-2-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

2-(3-Hidroximetilfenilamino)-7-metil-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-Metil-2-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-fenilamino]-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

2-{2-[4-(2-Hidroxietilsulfamoíl)-fenilamino]-8-oxo-6-o-tolil-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il}-acetamida;

N-(2-Hidroxietil)-4-(7-metil-8-oxo-6-o-tolil-7,8-dihidro-pirido[3,4-d]pirimidin-2-ilamino)-bencenosulfonamida;

2-[4-(2-Dietilaminoetoxi)-fenilamino]-7-metil-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d] pirimidin-8-ona;

2-[2-(3-Metanosulfinilfenilamino)-8-oxo-6-o-tolil-8H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-il]-acetamida;

2-(3-Metanosulfinilfenilamino)-7-metil-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(1,5-Dimetil-1H-pirazol-3-ilmetil)-2-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(3-Hidroxipropil)-2-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-fenil-amino]-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

N-(2-Hidroxietil)-4-[7-(3-hidroxipropil)-8-oxo-6-o-tolil-7,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-2-ilamino]-benceno-
sulfonamida;

2-[4-(2-Dietilaminoetoxi)-fenilamino]-7-(3-hidroxi-propil)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(3-Hidroxipropil)-2-(3-metanosulfinilfenilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(3-Metoxibencil)-2-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-fenil-amino]-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

N-(2-Hidroxietil)-4-(7-(3-metoxibencil)-8-oxo-6-o-tolil-7,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-2-ilamino]-benceno-
sulfonamida;

2-[4-(2-Dietilaminoetoxi)-fenilamino]-7-(3-metoxibencil)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

2-(3-Metanosulfinilfenilamino)-7-(3-metoxibencil)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

3-[2-(3-Hidroximetilfenilamino)-8-oxo-6-o-tolil-8H-pirido[3,4-d] pirimidin-7-il]-propionamida;

3-{2-[4-(2-Hidroxietilsulfamoíl)-fenilamino]-8-oxo-6-o-tolil-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il}-propionamida;

3-[2-(3-Metanosulfinilfenilamino)-8-oxo-6-o-tolil-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-propionamida;

6-(2-Clorofenil)-7-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilmetil)-2-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-fenilamino]-7H-pirido[3,4-d]-
pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-2-[4-(2-dietilaminoetoxi)-fenilamino]-7-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilmetil)-7H-pirido[3,4-d]-
pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-7-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilmetil)-2-(3-metanosulfinilfenilamino)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-
8-ona;

6-(2-Clorofenil)-7-(3-hidroxipropil)-2-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-fenilamino]-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-7-(3-metoxibencil)-2-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-fenilamino]-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

4-[6-(2-Clorofenil)-7-(3-metoxibencil)-8-oxo-7,8-dihidro-pirido[3,4-d]pirimidin-2-ilamino]-N-(2-hidroxietil)-
bencenosulfonamida;

6-(2-Clorofenil)-2-[4-(2-dietilaminoetoxi)-fenilamino]-7-(3-metoxibencil)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-2-(3-metanosulfinilfenilamino)-7-(3-metoxibencil)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-2-(3-hidroximetilfenilamino)-7-(tetrahidrofuran-2-ilmetil)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-2-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-fenil-amino]-7-(tetrahidrofuran-2-ilmetil)-7H-pirido[3,4-d]-pirimi-
din-8-ona;

4-[6-(2-Clorofenil)-8-oxo-7-(tetrahidrofuran-2-ilmetil)-7,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-2-ilamino]-N-(2-hidro-
xietil)-bencenosulfonamida;

6-(2-Clorofenil)-2-[4-(2-dietilaminoetoxi)-fenilamino]-7-(tetrahidrofuran-2-ilmetil)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona; y

6-(2-Clorofenil)-2-(3-metanosulfinilfenilamino)-7-(tetrahidrofuran-2-ilmetil)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona.

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Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{4}

es heterociclilo.

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Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{1}

es halógeno o alquilo;

R^{2}

es hidrógeno;

R^{3}

es alquilo opcionalmente sustituido una o varias veces, con -OR, -C(O)NRR', heteroarilo, heterociclilo, fenilo no sustituido o fenilo sustituido una o varias veces con alcoxi; y

R^{4}

es heterociclilo.

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Dichos compuestos pueden seleccionarse, por ejemplo, del grupo formado por:

2-[8-Oxo-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-6-o-tolil-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-acetamida;

7-Metil-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(1,5-Dimetil-1H-pirazol-3-ilmetil)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(3-Hidroxipropil)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(3-Metoxibencil)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

3-[8-Oxo-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-6-o-tolil-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-propionamida;

2-[6-(2-Clorofenil)-8-oxo-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-acetamida;

6-(2-Clorofenil)-7-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilmetil)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-
ona;

6-(2-Clorofenil)-7-(3-hidroxipropil)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-7-(3-metoxibencil)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona; y

6-(2-Clorofenil)-7-(tetrahidrofuran-2-ilmetil)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona.

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Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{1}

es halógeno o alquilo;

R^{2}

es hidrógeno;

R^{3}

es alquilo; y

R^{4}

es a) alquilo, opcionalmente sustituido una o más veces con -OR o -NRR'; b) fenilo, opcionalmente sustituido una o más veces con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -S(O)-alquilo o -S(O)_{2}NR-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi están opcionalmente sustituidos una o más veces con OR o -NRR'; o c) heterociclilo.

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Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{3}

es alquilo sustituido una vez con -OH.

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Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{1}

es halógeno o alquilo;

R^{2}

es hidrógeno;

R^{3}

es alquilo sustituido una vez con -OH; y

R^{4}

es a) alquilo, opcionalmente sustituido una o más veces con -OR o -NRR'; b) fenilo, opcionalmente sustituido una o más veces con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -S(O)-alquilo o -S(O)_{2}NR-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi están opcionalmente sustituidos una o más veces con OR o -NRR'; o c) heterociclilo.

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Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{3}

es alquilo sustituido una vez con -C(O)NRR'; y

R y R' son hidrógeno.

\vskip1.000000\baselineskip

Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{1}

es halógeno o alquilo;

R^{2}

es hidrógeno;

R^{3}

es alquilo sustituido una vez con -C(O)NRR';

R^{4}

es a) alquilo, opcionalmente sustituido una o más veces con -OR o -NRR'; b) fenilo, opcionalmente sustituido una o más veces con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -S(O)-alquilo o -S(O)_{2}NR-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi están opcionalmente sustituidos una o más veces con OR o -NRR'; o c) heterociclilo; y

R y R' son hidrógeno.

\vskip1.000000\baselineskip

Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{3}

es alquilo sustituido una vez con heteroarilo.

\vskip1.000000\baselineskip

Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{1}

es halógeno o alquilo;

R^{2}

es hidrógeno;

R^{3}

es alquilo sustituido una vez con heteroarilo; y

R^{4}

es a) alquilo, opcionalmente sustituido una o más veces con -OR o -NRR'; b) fenilo, opcionalmente sustituido una o más veces con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -S(O)-alquilo o -S(O)_{2}NR-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi están opcionalmente sustituidos una o más veces con OR o -NRR'; o c) heterociclilo.

\vskip1.000000\baselineskip

Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{3}

es alquilo sustituido una vez con heterociclilo.

\vskip1.000000\baselineskip

Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{1}

es halógeno o alquilo;

R^{2}

es hidrógeno;

R^{3}

es alquilo sustituido una vez con heterociclilo; y

R^{4}

es a) alquilo, opcionalmente sustituido una o más veces con -OR o -NRR'; b) fenilo, opcionalmente sustituido una o más veces con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -S(O)-alquilo o -S(O)_{2}NR-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi están opcionalmente sustituidos una o más veces con OR o -NRR'; o c) heterociclilo.

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Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{3}

es alquilo sustituido una o varias veces con alcoxi.

\vskip1.000000\baselineskip

Otra forma de ejecución de la presente invención son los compuestos de la fórmula I en que

R^{1}

es halógeno o alquilo;

R^{2}

es hidrógeno;

R^{3}

es alquilo sustituido una o varias veces con alcoxi; y

R^{4}

es a) alquilo, opcionalmente sustituido una o más veces con -OR o -NRR'; b) fenilo, opcionalmente sustituido una o más veces con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -S(O)-alquilo o -S(O)_{2}NR-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi están opcionalmente sustituidos una o más veces con OR o -NRR'; o c) heterociclilo.

\newpage

Otra forma de ejecución de la presente invención es un proceso para la preparación de los compuestos de fórmula I, que comprende las etapas de

(a)

hacer reaccionar un compuesto de la fórmula VIII

2

donde R^{1}, R^{2} y R^{3} tienen el significado arriba indicado para la fórmula I y L es un grupo saliente elegido entre alquilsulfonilo y alquilsulfinilo, preferiblemente alquilsulfonilo y con mayor preferencia metilsulfonilo,

con un compuesto de la fórmula VIIIa

fórmula VIIIa,R^{4}-NH_{2}

donde R^{4} tiene el significado arriba indicado para la fórmula I,

para dar el respectivo compuesto de la fórmula I

3

donde R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen el significado arriba indicado para la fórmula I,

(b)

aislar dicho compuesto de fórmula I de la mezcla de reacción, y

(c)

si se desea, transformarlo en una sal farmacéuticamente aceptable.

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Los derivados de fórmula general I o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos se pueden preparar mediante cualquier proceso conocido del especialista que sea aplicable para la obtención de compuestos químicamente relacionados. Estos procesos, cuando se emplean para preparar los derivados de la fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, se consideran una característica más de la presente invención y están ilustrados mediante los siguientes ejemplos representativos del esquema 1, en los cuales, de no decirse lo contrario, R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen el significado indicado anteriormente para la fórmula I. Los necesarios materiales de partida se pueden obtener por procedimientos estándar de la química orgánica. La preparación de tales materiales de partida se describe en los ejemplos adjuntos. Otros materiales alternativos de partida pueden obtenerse por procedimientos análogos a los ilustrados, los cuales también son práctica ordinaria de un químico orgánico.

\newpage

Esquema 1

4

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En el esquema 1, R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen el significado anteriormente indicado para la fórmula I, X es bromo o yodo y n es 1 o 2.

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Etapa 1

El 5-bromo-2-metilsulfanil-pirimidin-4-carboxilato de metilo es un compuesto conocido. El ácido carboxílico libre se puede preparar en condiciones básicas partiendo de ácido mucobrómico y S-metiltiourea. Luego se puede transformar en el éster metílico por métodos estándar, p. ej. por condensación con metanol en presencia de ácido clorhídrico anhidro.

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Etapa 2

Los fenilacetilenos sustituidos de fórmula III son bien conocidos del estado técnico y pueden prepararse a partir de los correspondientes bromo- o yodoarenos de fórmula II y un etino protegido, mediante la llamada reacción de Sonogashira. Esta reacción de acoplamiento se lleva a cabo con un catalizador de cobre, como CuI o CuCl, y un catalizador de paladio, como PdCl_{2}(PPh_{3})_{2} o PdCl_{2}(PhCN)_{2}/PtBu_{3}, y una base como la di-isopropilamina, dietilamina o trietilamina, que también puede servir de disolvente, o en un disolvente inerte como tetrahidrofurano (THF), dioxano, N,N-dimetilformamida (DMF) o acetonitrilo. La reacción transcurre a la temperatura ambiente o superior, hasta 160ºC. Como grupo protector para el etino es adecuado el trimetilsililo, que después puede separarse por tratamiento con un reactivo que lleve fluoruro, como el fluoruro de tetrabutilamonio, en un disolvente aprótico inerte como el tetrahidrofurano, o por tratamiento con una base fuerte como el hidróxido potásico en disolventes alcohólicos como el metanol. Esta reacción de desprotección se efectúa preferiblemente a temperaturas moderadas hasta bajas, dentro de un margen comprendido entre -30ºC y 50ºC.

\newpage

Etapa 3

El acoplamiento de los fenilacetilenos de fórmula III al 5-bromo-2-metilsulfanil-pirimidin-4-carboxilato de metilo se puede conseguir en las condiciones de la llamada reacción de Sonogashira, tal como se ha descrito para la etapa 2.

Como alternativa, el etinil-areno puede convertirse primero en un derivado alquinil-Zn o -Sn, más reactivo, mediante procedimientos conocidos del estado técnico: el etinil-areno se desprotona con una base fuerte, como el butil-litio, para formar un alquinil-Li intermedio que se hace reaccionar con ZnCl_{2} o Bu_{3}SnCl, dando el deseado producto intermedio de cinc o de estaño, los cuales pueden acoplarse a continuación con el 5-bromo-2-metilsulfanil-pirimidin-4-carboxilato de metilo en condiciones de acoplamiento cruzado estándar, por ejemplo mediante catálisis con un complejo de paladio-fosfina como Pd(PPh_{3})_{4} o PdCl_{2}(PPh_{3})_{2} o Pd_{2}(dba)_{3}/PtBu_{3} en disolventes como dimetilacetamida, THF o tolueno.

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Etapa 4

La ciclación de los derivados de etinilpirimidina de la fórmula IV a derivados de piranona de la fórmula V se puede lograr en condiciones ácidas, opcionalmente en presencia de agua, lo cual es factible en un disolvente como tetrahidrofurano, dioxano, N-metilpirrolidinona o sulfolano. Los ácidos apropiados para esta reacción pueden ser el trifluoroacético, clorhídrico, sulfúrico, toluensulfónico, metanosulfónico o polifosfórico. La reacción puede catalizarse opcionalmente con sales de mercurio como HgO. Como alternativa se emplea un ácido de Lewis como el ZnBr_{2} en un disolvente inerte como el tetrahidrofurano.

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Etapa 5

Los derivados de piranona de la fórmula V se hacen reaccionar con aminas R^{3}NH_{2} de fórmula Va para dar las pirimidincarboxamidas de anillo abierto de la fórmula VI, lo cual se puede conseguir calentando los reactantes puros en un exceso de la amina o en un disolvente inerte como el diclorometano, tetrahidrofurano (THF), etanol, xileno o N-metilpirrolidinona (NMP), a temperaturas comprendidas entre 40ºC y 170ºC. Opcionalmente puede agregarse un ácido para facilitar la reacción.

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Etapa 6

Las pirimidincarboxamidas de la fórmula VI se ciclan de nuevo, formando las pirimidopiridonas de la fórmula VII por calentamiento en presencia de un ácido. En principio sirven las mismas condiciones descritas para la etapa 4.

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Etapa 6a

Como alternativa, en algunos casos los pirimidincarboxilatos de la fórmula IV se pueden transformar directamente en las pirimidopiridonas de la fórmula VII, calentándolos con la amina R^{3}NH_{2} adecuada, bien tal cual o en un disolvente inerte como diclorometano, tetrahidrofurano (THF), xileno, etanol o N-metilpirrolidinona (NMP). Opcionalmente puede agregarse un ácido como el trifluoroacético o el clorhídrico o un catalizador de metal de transición, como un complejo de paladio-fosfina, para facilitar la reacción.

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Etapa 7

El grupo metiltio de las pirimidopiridonas VII se transforma en un grupo saliente por oxidación a un grupo metilsulfinilo o metilsulfonilo. Como oxidantes para tal fin son adecuados el ácido meta-cloroperbenzoico o la 3-fenil-2-(toluen-4-sulfonil)-oxaziridina en disolventes como diclorometano o THF, o la oxona o el peryodato sódico en metanol o en mezclas THF/agua. La reacción de oxidación se efectúa a temperaturas comprendidas en el intervalo de -20ºC a 60ºC, y las metilsulfinil- o metilsulfonil-pirimidopiridonas resultantes de la fórmula VIII (n = 1 o 2) se pueden usar de manera opcional directamente en la etapa 8, sin aislamiento previo.

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Etapa 8

El grupo metilsulfinilo o metilsulfonilo de los compuestos de la fórmula VIII es desplazado por una amina R^{4}NH_{2} de fórmula VIIIa para dar los productos finales de la fórmula I, calentando los reactantes puros o diluidos en un disolvente inerte como N-metilpirrolidinona, dimetilacetamida, sulfolano, diclorometano, tetrahidrofurano (THF) o acetonitrilo. Se puede añadir un ácido como el trifluoroacético o el clorhídrico anhidro para facilitar la reacción. Ésta se realiza a temperaturas elevadas, comprendidas entre 60ºC y 180ºC. Como alternativa, las aminas R^{4}NH_{2} pueden desprotonarse con una base fuerte como litio-hexametildisilazida o litio-diisopro-pilamida y hacerse reaccionar con compuestos de fórmula VIII a temperaturas entre -50ºC y la temperatura ambiente, en un disolvente inerte como dietiléter o THF.

Los compuestos conforme a la presente invención pueden existir en forma de sus sales farmacéuticamente aceptables. El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a las sales corrientes de adición de ácido que conservan la efectividad y propiedades biológicas de los compuestos de fórmula I y que están formadas a partir de bases atóxicas apropiadas, orgánicas o inorgánicas, o de ácidos atóxicos apropiados, orgánicos o inorgánicos. Los ejemplos de sales de adición de base incluyen las derivadas de los hidróxidos de sodio, potasio, amonio, amonio cuaternario (por ejemplo el hidróxido de tetrametilamonio), especialmente de sodio. Los ejemplos de sales de adición de ácido incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos como el clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, sulfúrico, sulfámico, fosfórico y nítrico, y las derivadas de ácidos orgánicos como p-toluensulfónico, salicílico, metanosulfónico, oxálico, succínico, cítrico, málico, láctico, fumárico y análogos. La modificación química de un compuesto farmacéutico (es decir, un fármaco) para dar una sal es una técnica bien conocida de los químicos farmacéuticos, a fin de mejorar la estabilidad física y química, la higroscopicidad, la fluidez y la solubilidad de los compuestos. Véase p. ej. Stahl, P. H., y Wermuth, G., (editors), Handbook of Pharmaceutical Salts, Verlag Helvetica Chimica Acta (VHCA), Zürich, (2002) o Bastin, R.J., y otros, Organic Proc. Res. Dev. 4 (2000) 427-435.

Los compuestos de la fórmula I pueden contener uno o más centros quirales y por tanto pueden estar en forma racémica u ópticamente activa. Los racematos se pueden separar en los enantiómeros. Por ejemplo, las sales diastereoisómeras que se pueden separar por cristalización se forman a partir de las mezclas racémicas mediante reacción con un ácido ópticamente activo tal como p. ej. el ácido D- o L-canforsulfónico. Como alternativa, la separación de los enantiómeros también puede lograrse por cromatografía en fases de HPLC quirales comercialmente
disponibles.

Los medicamentos que contienen un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos y un soporte terapéuticamente inerte son objeto de la presente invención, así como un proceso para su producción, que comprende la reunión de uno o más compuestos de la presente invención y/o sales farmacéuticamente aceptables y, si se desea, una o más sustancias terapéuticamente valiosas en una forma de administración galénica con uno o más soportes terapéuticamente inertes.

Una forma de ejecución de la presente invención es una composición farmacéutica que contiene uno o más compuestos según la fórmula I, junto con excipientes farmacéuticamente aceptables.

Otra forma de ejecución de la presente invención es una composición farmacéutica que contiene uno o más compuestos según la fórmula I, para inhibir el crecimiento tumoral.

Otra forma de ejecución de la presente invención es una composición farmacéutica que contiene uno o más compuestos según la fórmula I, para tratar el cáncer.

Otra forma de ejecución de la presente invención es un medicamento que lleva uno o más compuestos según la fórmula I como ingredientes activos, junto con adyuvantes farmacéuticamente aceptables, para tratar el cáncer colorrectal, mamario, pulmonar, prostático, pancreático, gástrico, vesical, ovárico, melanoma, neuroblastoma, cervical o renal, leucemias o linfomas.

Otra forma de ejecución de la presente invención es el empleo de un compuesto según la fórmula I, para elaborar los correspondientes medicamentos destinados a la inhibición del crecimiento tumoral.

Otra forma de ejecución de la presente invención es el empleo de un compuesto según la fórmula I, para elaborar los correspondientes medicamentos destinados al tratamiento del cáncer.

Otra forma de ejecución de la presente invención es el empleo de los compuestos de la fórmula I como agentes antiproliferativos.

Otra forma de ejecución de la presente invención es el empleo de uno o más compuestos de la fórmula I para el tratamiento del cáncer.

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Actividad farmacológica

Los compuestos de la fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables poseen valiosas propiedades farmacológicas. Se ha encontrado que dichos compuestos presentan actividad como inhibidores de tirosina-cinasas de la familia Src. Por consiguiente los compuestos de la presente invención sirven para la terapia y/o prevención de enfermedades proliferativas como el cáncer. La actividad de estos compuestos se demuestra p. ej. mediante el siguiente ensayo biológico:

\newpage

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Parámetros de ensayo de los inhibidores de Src

Mezcla reactiva:

ATP

5 \muM

Péptido (Ro + Ja133-Ro):

10 \muM

Ja133-Ro

196 nM

Ro

9,8 \muM

PT66

230 ng/ml

Tampón de ensayo:

MgCl_{2} 4 mM

\quad

TCEP 2 mM

\quad

HEPES 50 mM

\quad

0,1% de Tween 20

\quad

pH 7,3

Enzima:

2,5 U/ml

Inhibidor:

máx. 25 \muM

\quad

mín. 0,42 nM

Material

Anticuerpo contra fosfotirosina marcado con Eu:

\quad

- para LcK Cisbio Mab PT66-K,

\quad

- para Src EG&G Wallac PT66 Eu-W1024

\quad

(ambos comercialmente disponibles).

Péptidos:

\hskip0.6cm

Ro:

\hskip1.8cm

NH_{2}-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH_{2}, y

Ja133-Ro:

Ja133-G-ácido aminocaprílico-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH_{2}, donde Ja133 es Rojo LightCycler 640-N-hidroxi-succinimida éster;

\quad

ambos péptidos se sintetizaron mediante un protocolo optimizado de síntesis peptídica en fase sólida (Merrifield, Fed. Proc. Fed. Amer. Soc. Exp. Biol. 21 (1962) 412) en un sintetizador de péptidos Zinsser SMP350. En resumen, el péptido se ensambló en 160 mg (escala 22,8 \mumolar) de una fase sólida de poliestireno modificado con un conector de Rink, conjugando repetidamente aminoácidos veinte veces en exceso, cada uno de ellos protegido con el grupo temporal Fmoc sensible a piperidina y con los grupos permanentes terc-BU, BOC y O-terc-BU sensibles a ácidos, según la funcionalidad de la cadena lateral. La secuencia AEEEIYGEFEAKKKK del substrato se montó adicionalmente de forma N-terminal con los aminoácidos espaciadores ácido aminocaprílico y glicina. Después de separar el grupo protector temporal del N-terminal, el péptido todavía ligado y protegido se marcó con Rojo LightCycler 640-N-hidroxisuccinimida éster (adquirido a Roche Diagnostics GmbH) en un exceso de 1,5 veces y con trietilamina. Al cabo de 3 horas, la resina se lavó con dimetilformamida e isopropanol hasta que los eluatos de la resina azul resultaron incoloros. El péptido plenamente protegido y marcado se retiró de la fase sólida y se liberó de los grupos protectores permanentes mediante tratamiento con una mezcla de 80% de ácido trifluoroacético, 10% de etanoditiol, 5% de tioanisol y 5% de agua. Por último el substrato se aisló mediante purificación por HPCL de fase inversa. La purificación dio 12,2 mg de material azul puro (liofilizado) correspondiente al pico individual de la RP-HPCL. La identidad se demostró por espectroscopía de masas MALDI [2720,0].

Enzimas:

Upstate Lck (p56lck, activo), Upstate Src (p60c-src, parcialmente purificado) se adquirieron a UBI, Upstate Biotech, Inc..

Ensayo de fluorescencia resuelta en el tiempo:

\quad

Lector: Perkin Elmer, contador multilabel Wallac Viktor 1420-040; sistema de tratamiento de líquidos: Beckman Coulter, Biomek 2000.

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El ATP, el Tween® 20 y el ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinetanosulfónico (HEPES) se adquirieron a Roche Molecular Biochemicals, el MgCl_{2} y el MnCl_{2} a Merck Eurolab, el hidrocloruro de tris(2-carboxietil)fosfina (TCEP) a Pierce y las placas de bajo volumen de 384 pocillos para fluorescencia a Falcon.

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Descripción del ensayo

Primero se preincuba el enzima durante 15 min. a 15ºC en solución acuosa con las correspondientes cantidades de los inhibidores según la presente invención. Luego se inicia la reacción de fosforilación, añadiendo una mezcla reactiva que contiene ATP, péptido y PT66, y agitando después. El curso de esta reacción se controla inmediatamente por espectroscopía de fluorescencia resuelta en el tiempo, en un lector adecuado de placas multipocillo.

Los valores IC_{50} pueden obtenerse de las velocidades de reacción, utilizando un ajuste de curva no lineal (programa XLfit (ID Business Solution Ltd., Guilford, Surrey, UK)). Los resultados se indican en la tabla 1.

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TABLA 1

5

Determinación de IC_{50} para inhibidores de la cinasa Abl

El ensayo de Abl se realizó usando proteína de fusión correspondiente a Abl de ratón (extremo-27), substrato peptídico marcado con fluoresceína (con una secuencia de EAIYAAPFAKKK) y cuantificado mediante tecnología de polarización por fluorescencia IMAP de Molecular Devices. Los compuestos se ensayaron a concentraciones diluidas en serie, en placas de 384 pocillos. La reacción de cinasa se efectuó en tampón KAB (HEPES 10 mM, pH 7, NaCl 50 mM, MgCl_{2} 5 mM, DTT 1 mM, NaVO_{4} 0,1 mM, 0,02% de BSA) en presencia de ATP 22,8 \muM y se incubó a 37ºC durante 60 minutos. La reacción se paró con mezcla de perlas IMAP (diluida 1:400). Después de incubar a temperatura ambiente durante 3 horas, el producto de reacción se analizó en un LJL Acquest (excitación 485 nM y emisión
530 nM).

Para calcular la velocidad de reacción se usó la lectura FP (en mP). El ensayo se llevó a cabo de manera semiautomatizada mediante el monitor Tomtec Quadra. Los resultados están indicados en la tabla 2.

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TABLA 2

6

Determinación de IC_{50} para inhibidores de la cinasa PDGFR Principio del ensayo

El ensayo de PDGFR se realizó con PDGFR beta humana recombinante, substrato peptídico marcado con fluoresceína (con una secuencia peptídica de ALTSNQEYLDLSMPL) y los compuestos de ensayo (diluidos en serie), usando placas de 384 pocillos. La reacción de cinasa se efectuó en tampón MOPS (MOPS 20 mM, pH 7,1, acetato sódico 5 mM, MgCl_{2} 6,25 mM, EDTA 0,5 mM, DTT 1 mM, NaVO_{4} 0,04 mM, 0,02% de BSA) en presencia de ATP 48 \muM y se incubó 60 minutos a temperatura ambiente. La reacción se paró con un sistema de fijación de perlas IMAP (de Molecular Devices). Tras incubar a temperatura ambiente durante 2 horas el producto de reacción se analizó en un LJL Acquest.

Para calcular la velocidad de reacción se usó la lectura FP (en mP). El ensayo se llevó a cabo de manera semiautomatizada mediante el monitor Tomtec Quadra. Los resultados están indicados en la tabla 3.

TABLA 3

7

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Actividad antiproliferativa

La actividad de los compuestos de la presente invención como agentes antiproliferativos puede demostrarse mediante el siguiente ensayo biológico:

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Ensayo CellTiter-Glo® en células HCT 116

El ensayo de viabilidad celular CellTiter-Glo® por luminiscencia es un método homogéneo para determinar el número de células viables en cultivo, basado en la cuantificación del ATP presente, el cual señala la presencia de células metabólicamente activas.

Las células HCT 116 (de carcinoma de colon humano, ATCC-nº CCl-247) se cultivan en medio RPMI 1640 con GlutaMAX® I (Invitrogen, nº de cat. 61870-010), 5% de suero fetal bovino (FCS, Sigma nº de cat. F4135 (FBS)), 100 unidades/ml de penicilina/100 \mug/ml de estreptomicina (= Pen/Strep de Invitrogen nº de cat. 15140). Para el ensayo, las células se siembran en placas de 384 pocillos, 1000 células por pocillo, en el mismo medio. Al día siguiente se añaden los compuestos de ensayo a varias concentraciones, desde 30 \muM hasta 0,0015 \muM (10 concentraciones, diluidas 1:3). Al cabo de 5 días se realiza el ensayo CellTiter-Glo® según las instrucciones del fabricante (ensayo de viabilidad celular por luminiscencia CellTiter-Glo®, de Promega). Brevemente: la placa celular se equilibra a la temperatura ambiente durante unos 30 minutos y luego se añade el reactivo CellTiter-Glo®. El contenido se mezcla cuidadosamente durante 15 minutos para inducir la lisis celular. Transcurridos 45 minutos se mide la señal luminiscente en un Victor 2 (espectrofotómetro de barrido multipocillo, Wallac).

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Detalles

1^{er} día:

-

Medio: RPMI 1640 con GlutaMAX® I (Invitrogen, nº de cat. 61870), 5% de FCS (Sigma, nº de cat. F4135), Pen/Strep (Invitrogen, nº de cat. 15140).

-

HCT116 (ATCC-nº CCl-247): 1000 células en 60 \mul por cada pocillo de placas de 384 pocillos (Greiner 781098, placa \muClear blanca).

-

Después de la siembra incubar las placas 24 h a 37ºC, con 5% de CO_{2}.

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2º día: inducción (tratamiento con los compuestos, 10 concentraciones)

Para obtener una concentración final máxima de 30 \muM se añaden directamente 3,5 \mul de solución inicial 10 \muM de compuesto a 163 \mul de medio. Después se continúa con la etapa e) del proceso de dilución descrito más adelante.

Para obtener las demás concentraciones, desde la segunda concentración máxima hasta la más baja, se procede por etapas de dilución 1:3 en serie, siguiendo el método (a-e) descrito a continuación:

a)

para la segunda concentración máxima añadir 10 \mul de solución inicial 10 \muM de compuesto a 20 \mul de dimetilsulfóxido (DMSO)

b)

diluir 8x 1:3 (siempre 10 \mul a 20 \mul de DMSO) en esta fila de dilución con DMSO (resultan 9 pocillos con concentraciones desde 3333,3 \muM hasta 0,51 \muM)

c)

diluir cada concentración 1:47,6 (dilución de 3,5 \mul de compuesto a 163 \mul de medio)

d)

añadir 10 \mul de cada concentración a 60 \mul de medio en la placa celular, con lo cual resulta una concentración final de 0,3% de DMSO en cada pocillo y 10 concentraciones de compuesto, desde 30 \muM hasta 0,0015 \muM.

e)

- Cada compuesto se ensaya por triplicado.

- Incubar 120 h (5 días) a 37ºC, con CO_{2}.

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Análisis

-

Añadir 30 \mul de reactivo CellTiter-Glo® (preparado a partir de tampón CellTiter-Glo® y substrato CellTiter-Glo® (liofilizado) adquirido a Promega) por pocillo,

-

agitar 15 minutos a temperatura ambiente,

-

incubar otros 45 minutos a temperatura ambiente, sin agitación.

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Medición

-

Espectrofotómetro de barrido multipocillo Victor 2 (Wallac), modo de luminiscencia (0,5 s/lectura, 477 nm)

-

Determinación de IC_{50} mediante un ajuste de curva no lineal (programa XLfit (ID Business Solution Ltd., Guilford, Surrey, UK))

Los compuestos según la presente invención y sus sales farmacéuticamente aceptables pueden usarse como medicamentos, p. ej. en forma de composiciones farmacéuticas. Las composiciones farmacéuticas pueden administrarse oralmente, p. ej. en forma de tabletas, pastillas recubiertas, grageas, cápsulas de gelatina dura y blanda, soluciones, emulsiones o suspensiones. No obstante la administración también se puede efectuar por vía rectal, p. ej. en forma de supositorios, o por vía parenteral, p. ej. en forma de soluciones inyectables.

Las composiciones farmacéuticas arriba citadas se pueden obtener procesando los compuestos conforme a la presente invención con soportes inorgánicos u orgánicos farmacéuticamente inertes. La lactosa, el almidón de maíz o sus derivados, el talco, los ácidos esteáricos o sus sales y análogos pueden utilizarse, por ejemplo, como dichos soportes para tabletas, pastillas recubiertas, grageas y cápsulas de gelatina dura. Los soportes adecuados para cápsulas de gelatina blanda son, por ejemplo, los aceites vegetales, las ceras, las grasas, los polioles semisólidos y líquidos, y análogos. Sin embargo, según la naturaleza de la sustancia activa, no suele necesitarse ningún soporte en el caso de las cápsulas de gelatina blanda. Los soportes idóneos para la producción de soluciones y jarabes son, por ejemplo, agua, polioles, glicerina, aceite vegetal y similares. Los soportes adecuados para supositorios son, por ejemplo, aceites naturales o endurecidos, ceras, grasas, polioles semilíquidos o líquidos y similares.

Además las composiciones farmacéuticas pueden contener conservantes, solubilizantes, estabilizantes, humectantes, emulsionantes, edulcorantes, colorantes, saborizantes, sales para variar la presión osmótica, tampones, agentes de enmascaramiento o antioxidantes. También pueden contener otras sustancias terapéuticamente valiosas.

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Una composición farmacéutica lleva p. ej. lo siguiente:

a) Formulación de tabletas (granulación en húmedo):

8

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Procedimiento de elaboración:

1.

Mezclar los ingredientes 1, 2, 3 y 4 y granular con agua purificada.

2.

Secar los gránulos a 50ºC.

3.

Pasar los gránulos por un equipo de molienda idóneo.

4.

Añadir el ingrediente 5 y mezclar durante tres minutos; comprimir en una prensa adecuada.

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b) Formulación de cápsulas:

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Procedimiento de elaboración:

1.

Mezclar los ingredientes 1, 2 y 3 en un mezclador adecuado durante 30 minutos.

2.

Incorporar los ingredientes 4 y 5, y mezclar durante 3 minutos.

3.

Rellenar una cápsula adecuada.

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Se proporcionan los siguientes ejemplos para ayudar a la comprensión de la presente invención, cuyo verdadero ámbito se establece en las reivindicaciones adjuntas. Se entiende que cabe hacer modificaciones en los procedimientos descritos sin apartarse del espíritu de la presente invención.

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Procedimientos experimentales Métodos experimentales

Los espectros RMN-H^{1} se registraron con un espectrómetro Bruker 250 Avance. Los desplazamientos químicos se expresaron en partes por millón (ppm) en la escala \delta respecto al patrón interno de trimetilsilano. La identificación y la pureza se determinaron mediante LC-MS analítica realizada en un sistema HP 100, usando una columna Phenomenex Gemini C18 (5 \mum, 30 mm x 2,0 mm), fase móvil 5-95% de acetonitrilo/agua (que lleva un 0,05% de amoniaco) durante 4,5 min., retención 1,5 min., caudal 1 ml/min., detección por red de diodos a 210-220 nm. Como espectrómetro de masas se usó un Micromass Platform LC, funcionando en modo conmutable de ionización positiva y negativa por electropulverización. La CG analítica se efectuó en un sistema Agilent 6890 N GC, usando una columna Z5-5 (15 m, 0,32 mm x 0,25 mm), 2,5 min. a 50ºC, 50ºC-275ºC a lo largo de 10 min., 1 ml/min., temperatura de inyección 300ºC, detección por ionización de llama a 300ºC.

Se llevaron a cabo reacciones de microondas en viales de proceso de vidrio grueso Smith con tapones revestidos de aluminio y sello de silicona. El calentamiento por microondas se realizó en un sistema "Personal Chemistry Creator EXP" según la temperatura y la duración especificadas. Todas las reacciones se efectuaron en atmósfera de nitrógeno.

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Síntesis de los intermedios principales Ejemplo A 5-bromo-2-metilsulfanilpirimidin-4-carboxilato de metilo

10

Se añadió trietilamina (161,5 ml, 1,16 moles) por goteo durante 25 minutos a una suspensión agitada de hidroyoduro de 5-metilisotiourea (85,0 g, 0,39 moles) y ácido mucobrómico (100,0 g, 0,39 moles) en agua (500 ml). Durante este tiempo se observó una exotermia (de 20ºC a 50ºC). La mezcla se agitó 18 h a temperatura ambiente, luego se acidificó a 0-5ºC hasta pH 2 con ácido clorhídrico al 10%. El precipitado resultante se recogió por filtración y se secó al vacío, para dar ácido 5-bromo-2-metilsulfanil-pirimidin-4-carboxílico (71,4 g), en forma de un sólido marrón que se utilizó sin purificarlo más.

A 0-5ºC se añadió por goteo cloruro de acetilo (6,26 ml, 0,088 moles) a metanol (100 ml). La mezcla se agitó 5 min. a 0-5ºC. Se agregó ácido 5-bromo-2-metilsulfanilpirimidin-4-carboxílico (20 g, 0,08 moles) en porciones a 0-5ºC y luego la mezcla se calentó a reflujo 1 h; durante este tiempo se disolvió la suspensión, después se enfrió hasta temperatura ambiente y se vertió en solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (100 ml). El producto se extrajo en diclorometano (3 x 100 ml), los extractos se lavaron con agua (100 ml), se secaron (MgSO_{4}) y se evaporaron al vacío. El residuo sólido se cristalizó a partir de hexano para dar 5-bromo-2-metil-sulfanilpirimidin-4-carboxilato de metilo (12,27 g) en forma de sólido cristalino blancuzco, p.f. 67-70ºC; RMN-H^{1} 250 MHz (CDCl_{3}) \delta (ppm): 2,6 (s, 3H) (-SCH_{3}), 4,05 (s, 3H) (-OCH_{3}), 8,7 (s, 1H) (ArH); m/z (M+H)^{+} 249; 96% de pureza por HPLC; tiempo de retención en HPLC 1,58 min.

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Los fenilacetilenos sustituidos de fórmula II eran conocidos de la literatura o se prepararon según los siguientes ejemplos B1 y B2:

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Ejemplo B1 1-etinil-2-metilbenceno

11

Se disolvió 2-yodotolueno (81,5 ml, 0,64 moles) y trimetilsililacetileno (99 ml, 0,71 moles) en trietilamina (250 ml). Se añadió trifenilfosfina (0,427 g, 1,6 mmoles), yoduro de cobre (I) (0,3 g, 1,6 mmoles) y dicloruro de bis-trifenil-fosfinpaladio (II) (0,53 g, 0,71 mmoles), y la mezcla se calentó 18 h a reflujo. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se agregó cuidadosamente a ácido clorhídrico al 10% (480 ml) y el producto se extrajo en hexano (3 x 200 ml). Los extractos se lavaron con ácido clorhídrico al 10% (200 ml) y agua (2 x 200 ml), luego se secaron (MgSO_{4}) y se evaporaron al vacío dando trimetil-(2-metilfenil)etinilsilano (114,06 g) en forma de un aceite amarillo, que se usó sin purificarlo más. Se agregó hidróxido potásico (100 g, 1,8 moles) en 4 porciones a una solución agitada de trimetil-(2-metilfenil)-etinilsilano (114,0 g, 0,61 moles) en metanol (400 ml) a 0ºC. La mezcla se agitó a 0ºC hasta completar la reacción (por ccf con acetato de etilo:hexano 1:1). La mezcla se neutralizó añadiendo ácido clorhídrico al 10% y el producto se extrajo en diclorometano (2 x 150 ml). Los extractos combinados se secaron (MgSO_{4}) y se evaporaron al vacío. El aceite residual se purificó por destilación de paso corto (tubo de bolas), para dar 1-etinil-2-metilbenceno (52,03 g) en forma de aceite transparente. P.eb. 45ºC/12 mbar. RMN-H^{1} 250 MHz (CDCl_{3}) \delta (ppm): 2,35 (s, 3H) (ArCH_{3}), 3,2 (s, 1H) (CH), 7,0-7,2 (m, 3H) (3 x ArH), 7,4 (m, 1H) (ArH); pureza por CG 98%, tiempo de retención en CG 7,94 min.

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Ejemplo B2 1-cloro-2-etinilbenceno

12

Se disolvió 2-bromoclorobenceno (54,1 ml, 0,46 moles) y trimetilsililacetileno (72 ml, 0,51 moles) en trietilamina (250 ml). Se añadió trifenilfosfina (0,4 g, 1,5 mmoles), yoduro de cobre (I) (0,3 g, 1,6 mmoles) y dicloruro de bis-trifenilfosfinpaladio (II) (0,5 g, 0,67 mmoles), y la mezcla se calentó 18 h a reflujo. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se agregó cuidadosamente a ácido clorhídrico al 10% (480 ml). El producto se extrajo en hexano (3 x 200 ml), los extractos se lavaron con ácido clorhídrico al 10% (200 ml) y agua (2 x 200 ml), luego se secaron (MgSO_{4}) y se evaporaron al vacío para dar (2-clorofeniletinil)-trimetilsilano (95,4g) en forma de un aceite anaranjado, que se utilizó sin purificarlo más.

Se agregó hidróxido potásico (77,5 g, 1,38 moles) en 4 porciones a una disolución agitada de (2-clorofeniletinil)-trimetilsilano (95,0 g, 0,46 moles) en metanol (250 ml) a 0ºC. La mezcla se agitó a 0ºC hasta completar la reacción (por ccf con acetato de etilo:hexano 1:1). La mezcla se neutralizó añadiendo ácido clorhídrico al 10% y el producto se extrajo en diclorometano (2 x 150 ml). Los extractos combinados se secaron (MgSO_{4}) y se evaporaron al vacío. El aceite residual se purificó por destilación de paso corto (tubo de bolas), para dar 1-cloro-2-etinilbenceno (41,23 g) en forma de aceite transparente. P.eb. 38ºC/10 mbar. RMN-H^{1} 250 MHz (CDCl_{3}) \delta (ppm): 3,25 (s, 1H) (CH), 7,1-7,5 (m, 4H) (ArH); pureza por CG 89%, tiempo de retención en CG 2,67 min.

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Ejemplo C1 2-metilsulfanil-6-(2-metilfenil)-pirano[3,4-d]pirimidin-8-ona

13

Una mezcla formada por 1-etinil-2-metilbenceno (0,53 g, 4,6 mmoles), 5-bromo-2-metilsulfanilpirimidin-4-carboxilato de metilo (1,0 g, 3,8 mmoles), trietilamina (2,5 ml), trifenilfosfina (0,125 g, 0,48 mmoles), yoduro de cobre (I) (0,025 g, 0,13 mmoles), dicloruro de bis-trifenilfosfinpaladio (II) (0,10 g, 0,14 mmoles) y dimetilformamida (1 ml) se agitó en un vial de proceso de vidrio grueso Smith y se irradió con microondas para mantener 100ºC durante 20 minutos. La mezcla enfriada se diluyó con diclorometano (20 ml) y se lavó con ácido clorhídrico al 5% (20 ml), agua (20 ml), disolución acuosa saturada de bicarbonato sódico (20 ml) y agua (20 ml), luego se secó (MgSO_{4}) y se evaporó al vacío. El aceite residual se purificó por cromatografía flash en columna de sílice con una mezcla de hexano y diclorometano 1:4 como eluyente. Se combinaron fracciones apropiadas y los disolventes se eliminaron al vacío, para dar 2-metilsulfanil-5-(2-metilfenil)-etinilpirimidin-4-carboxilato de metilo (0,9 g) en forma de un aceite anaranjado. RMN-H^{1} 250 MHz (CDCl_{3}) \delta (ppm): 2,45 (s, 3H) (ArCH_{3}), 2,55 (s, 3H) (-SCH_{3}), 3,95 (s, 3H) (CO_{2}CH_{3}), 7,05-7,25 (m, 3H) (3 x ArH), 7,45 (m, 1H) (ArH), 8,7 (s, 1H) (ArH); m/z (M+H)^{+} 299, 96% de pureza por HPLC, tiempo de retención en HPLC 4,15 min.

Una mezcla de 2-metilsulfanil-5-(2-metilfenil)etinil-pirimidin-4-carboxilato de metilo (5,0 g, 16,8 mmoles) (preparado de modo similar al descrito arriba), ácido trifluoroacético al 50% (v/v) en diclorometano (15 ml) y agua (1 ml) se agitó en un vial de proceso de vidrio grueso Smith y se irradió a 120ºC durante 45 min. La mezcla se evaporó al vacío hasta sequedad y el aceite residual se purificó por cromatografía flash en columna de sílice, con una mezcla de hexano y diclorometano 3:7 como eluyente. Se combinaron las fracciones adecuadas y los disolventes se eliminaron al vacío, dando 2-metilsulfanil-6-(2-metilfenil)-pirano-[3,4-d]pirimidin-8-ona (3,75 g) en forma de un aceite anaranjado. RMN-H^{1} 250 MHz (CDCl_{3}) \delta (ppm): 2,45 (s, 3H) (ArCH_{3}), 2,65 (s, 3H) (-SCH_{3}), 6,45 (s, 1H) (=CHAr), 7,15-7,45 (m, 4H) (4 x ArH), 8,85 (s, 1H) (ArH); m/z (M+H)^{+} 285, 98% de pureza por HPLC, tiempo de retención en HPLC 3,64 min.

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Ejemplo C2 6-(2-clorofenil)-2-metilsulfanilpirano[3,4-d]pirimidin-8-ona

14

Una mezcla formada por 1-cloro-2-etinilbenceno (0,63 g, 4,6 mmoles), 5-bromo-2-metilsulfanilpirimidin-4-carboxilato de metilo (1,0 g, 3,8 mmoles), trietilamina (2,5 ml), trifenilfosfina (0,125 g, 0,48 mmoles), yoduro de cobre (I) (0,025 g, 0,13 mmoles), dicloruro de bis-trifenilfosfinpaladio (II) (0,10 g, 0,14 mmoles) y dimetilformamida (1 ml) se agitó en un vial de proceso de vidrio grueso Smith y se irradió con microondas para mantener 100ºC durante 20 minutos. La mezcla se diluyó con diclorometano (20 ml) y se lavó con ácido clor-hídrico al 5% (20 ml), agua (20 ml), solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (20 ml) y agua (20 ml), luego se secó (MgSO_{4}) y se evaporó al vacío. El aceite residual se purificó por cromatografía flash en columna de sílice, utilizando una mezcla de hexano y diclorometano 1:4 como eluyente. Se combinaron fracciones apropiadas y los disolventes se eliminaron al vacío, para dar 5-(2-clorofeniletinil)-2-metil-sulfanil-pirimidin-4-carboxilato de metilo (0,9 g), en forma de un aceite amarillo. RMN-H^{1} 250 MHz (CDCl_{3}) \delta (ppm): 2,5 (s, 3H) (-SCH_{3}), 3,9 (s, 3H) (-CO_{2}CH_{3}), 7,1-7,5 (m, 4H) (ArH), 8,65 (s, 1H) (ArH); m/z (M+H)^{+} 319, 91% de pureza por HPLC, tiempo de retención en HPLC 4,08 min.

Una mezcla de 5-(2-clorofeniletinil)-2-metilsulfanil-pirimidin-4-carboxilato de metilo (5,0 g, 9,4 mmoles) (preparado de modo similar al descrito arriba), ácido trifluoroacético al 50% (v/v) en diclorometano (15 ml) y agua (1 ml) se agitó en un vial de proceso de vidrio grueso Smith y se irradió a 120ºC durante 45 min. La mezcla se evaporó al vacío hasta sequedad y el aceite residual se purificó por cromatografía flash en columna de sílice, con una mezcla de hexano y diclorometano 3:7 como eluyente. Se combinaron fracciones apropiadas y los disolventes se eliminaron al vacío, dando 6-(2-clorofenil)-2-metilsulfanil-pirano-[3,4-d]pirimidin-8-ona (3,15 g) en forma de aceite amarillo pálido. RMN-H^{1} 250 MHz (CDCl_{3}) \delta (ppm): 2,65 (s, 3H) (-SCH_{3}), 6,95 (s, 1H) (=CHAr), 7,25-7,4 (m, 3H) (ArH), 7,65 (m, 1H)
(ArH), 8,85 (s, 1H) (ArH); m/z (M+H)^{+} 305, 100% de pureza por HPLC, tiempo de retención en HPLC 3,66 min.

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Ejemplo D 2-Metilsulfanil-5-(2-oxo-2-o-tolil-etil)-pirimidin-4-carboxilamidas

15

Una mezcla de 2-metilsulfanil-6-(2-metilfenil)-pirano-[3,4-d]pirimidin-8-ona (0,5 g, 1,8 mmoles), la amina adecuada (3,6 mmoles) y diclorometano (3,5 ml) se agitó en un vial de proceso de vidrio grueso Smith y se irradió a 120ºC durante 15 minutos. La mezcla se diluyó con diclorometano (10 ml), se lavó con agua (2 x 10 ml), luego se secó (MgSO_{4}) y se evaporó al vacío para dar en cada caso la amina deseada, en forma de aceite oscuro, que se usó sin posterior purificación.

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Compuestos sintetizados

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16

17

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Ejemplo E 2-Metilsulfanil-6-o-tolil-7H-pirido-[3,4-d]pirimidin-8-onas sustituidas en posición 7

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18

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Una mezcla de la amida idónea (1,8 mmoles) (preparada en (D)) y ácido trifluoroacético al 10% (v/v) en diclorometano (4ml) se agitó en un vial de proceso de vidrio grueso Smith y se irradió a 120ºC durante 20 minutos. La mezcla se vertió en solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (20 ml) y el producto se extrajo en diclorometano (2 x 20 ml). Los extractos combinados se secaron (MgSO_{4}) y se evaporaron al vacío, para dar la lactama deseada, que se usó sin posterior purificación.

Compuestos sintetizados

19

Ejemplo F 2-Metanosulfonil-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-onas sustituidas en posición 7

20

La lactama apropiada (0,7 mmoles) (preparada en (E)) se disolvió en cloroformo (4 ml). Se añadió ácido 3-cloroperoxi-benzoico (mCPBA) (1,0 mmoles) y la mezcla se agitó 1 h a temperatura ambiente. Se agregó una segunda porción de ácido 3-cloroperoxibenzoico y la mezcla se agitó otras 18 h. La mezcla se vertió en solución acuosa saturada de sulfito sódico (25 ml) y el producto se extrajo en diclorometano (2x 15 ml). Los extractos reunidos se lavaron con solución acuosa de carbonato sódico 2 M (25 ml), luego se secaron (MgSO_{4}) y se evaporaron al vacío. El aceite residual se purificó por cromatografía flash en columna de sílice, usando diclorometano como eluyente. Se reunieron las fracciones apropiadas y el disolvente se eliminó al vacío, dando la sulfona deseada.

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Compuestos sintetizados

21

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Ejemplo G 5-[2-(2-Clorofenil)-2-oxo-etil]-2-metilsulfanil-pirimidin-4-carboxilamidas

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23

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La síntesis se llevó a cabo según el método descrito arriba en (D), usando 5-(2-clorofeniletinil)-2-metilsulfanil-pirimidin-4-carboxilato de metilo y las aminas apropiadas.

Compuestos sintetizados

24

Ejemplo H 6-(2-Clorofenil)2-metilsulfanil-7H-pirido[3,4-d]-pirimidin-8-onas sustituidas en posición 7

26

La síntesis se llevó a cabo según el método descrito arriba en (E), usando la amina apropiada sintetizada en (G).

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Compuestos sintetizados

27

Ejemplo I 6-(2-Clorofenil)-2-metanosulfonil-7H-pirido[3,4-d]-pirimidin-8-onas sustituidas en posición 7

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28

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La síntesis se llevó a cabo según el método descrito arriba en (F), usando la lactama adecuada sintetizada en (H).

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Compuestos sintetizados

29

Síntesis de los compuestos finales

30

Una mezcla formada por la sulfona adecuada (0,4 mmoles) del ejemplo F o I, la amina denominada R^{4}NH_{2} (0,8 mmoles) y N-metilpirrolidinona (0,1 ml) se agitó en un vial de proceso de vidrio grueso Smith. Se le agregó ácido trifluoroacético (0,12 mmoles) y la mezcla se irradió a 120ºC durante 2 h. El aceite resultante se diluyó en metanol y se purificó directamente por HPLC/MS preparativa. Las fracciones que contenían producto se juntaron, se evaporaron y opcionalmente se purificaron de nuevo mediante cromatografía a través de sílice, con mezclas acetato de etilo/hexano, para dar los derivados idóneos de 7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona.

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Compuestos sintetizados

Ejemplos 1-47

31

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(Continuación)

32

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(Continuación)

33

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(Continuación)

34

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(Continuación)

35

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(Continuación)

36

\newpage

(Continuación)

37

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(Continuación)

38

Claims (9)

1. Un compuesto según la fórmula I,

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39

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donde

R^{1}

es halógeno, alquilo, alcoxi, alquilo halogenado o alcoxi halogenado;

R^{2}

es hidrógeno, halógeno, alquilo, alcoxi, alquilo halogenado o alcoxi halogenado;

R^{3}

es alquilo, opcionalmente sustituido una o varias veces con ciano, -OR, -NRR', -C(O)NRR', -NR-C(O)-alquilo, -S(O)_{2}NRR', -NR-S(O)_{2}-alquilo, heteroarilo, hetero-ciclilo, fenilo no sustituido o fenilo sustituido una o varias veces con halógeno, alquilo, alcoxi o ciano;

R^{4}

es a) alquilo, opcionalmente sustituido una o varias veces con -OR o -NRR';

\quad

b) fenilo, opcionalmente sustituido una o varias veces con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -C(O)NRR', -NR-C(O)-alquilo, -S(O)-alquilo, -S(O)_{2}NR-alquilo o -NR-S(O)_{2}-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi están opcionalmente sustituidos una o varias veces con -OR o -NRR'; o

\quad

c) heterociclilo;

R y R' son hidrógeno o alquilo;

donde

el término "alquilo", tal como se utiliza aquí, significa un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que tiene 1 a 4 átomos de carbono;

el término "alquilo halogenado", tal como se utiliza aquí, significa un grupo alquilo como el definido arriba, que está sustituido una o varias veces con halógeno;

el término "alcoxi", tal como se utiliza aquí, significa un grupo alquilo-O en que el alquilo se define como arriba;

el término "alcoxi halogenado", tal como se utiliza aquí, significa un grupo alcoxi como el definido arriba, que está sustituido una o varias veces con halógeno;

el término "heteroarilo" significa un anillo aromático mono- o bicíclico de 5 a 10, preferiblemente 5 a 6, átomos, que lleva hasta 3 heteroátomos elegidos independientemente entre N, O o S, siendo de carbono los restantes átomos del anillo. Estos grupos heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos una a tres veces con alquilo;

el término "heterociclilo" significa un anillo monocíclico de hidrocarburo saturado, de 5 a 6 átomos, que lleva hasta 3, heteroátomos escogidos independientemente entre N, O o S, siendo de carbono los restantes átomos del anillo. Este grupo heterocíclico saturado puede estar sustituido opcionalmente una a tres veces, con alquilo;

y todas las sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

\newpage

2. Los compuestos según la reivindicación 1, donde

R^{1}

es halógeno o alquilo;

R^{2}

es hidrógeno;

R^{3}

es alquilo opcionalmente sustituido una o varias veces, con -OR, -C(O)NRR', heteroarilo, heterociclilo, fenilo no sustituido o fenilo sustituido una o varias veces con alcoxi; y

R^{4}

es a) alquilo, opcionalmente sustituido una o más veces con -OR o -NRR'; b) fenilo, opcionalmente sustituido una o más veces con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -S(O)-alquilo o -S(O)_{2}NR-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi están opcionalmente sustituidos una o más veces con -OR o -NRR'; o c) heterociclilo.

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3. Los compuestos según una de las reivindicaciones 1 a 2, donde

R^{4}

es a) alquilo, opcionalmente sustituido una o más veces con -OR o -NRR'; o b) heterociclilo

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4. Los compuestos según una de las reivindicaciones 1 a 2, donde

R^{4}

es fenilo, opcionalmente sustituido una o varias veces con alquilo, alcoxi, heterociclilo, -S(O)-alquilo o -S(O)_{2}NR-alquilo, donde todos los grupos alquilo y alcoxi están opcionalmente sustituidos una o más veces con -OR o -NRR'.

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5. Los compuestos según la reivindicación 1, seleccionados del grupo formado por:

2-(2-Hidroxi-1-hidroximetiletilamino)-7-metil-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(1,5-Dimetil-1H-pirazol-3-ilmetil)-2-(2-hidroxi-1-hidroximetiletilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]-pirimidin-
8-ona;

3-[6-(2-Clorofenil)-2-(2-hidroxi-1-hidroximetiletilamino)-8-oxo-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-propionamida;

7-Metil-2-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

2-(3-Hidroximetilfenilamino)-7-metil-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-Metil-2-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-fenilamino]-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

2-{2-[4-(2-Hidroxietilsulfamoíl)-fenilamino]-8-oxo-6-o-tolil-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il}-acetamida;

N-(2-Hidroxietil)-4-(7-metil-8-oxo-6-o-tolil-7,8-dihidro-pirido[3,4-d]pirimidin-2-ilamino)-bencenosulfonamida;

2-[4-(2-Dietilaminoetoxi)-fenilamino]-7-metil-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

2-[2-(3-Metanosulfinilfenilamino)-8-oxo-6-o-tolil-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-acetamida;

2-(3-Metanosulfinilfenilamino)-7-metil-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(1,5-Dimetil-1H-pirazol-3-ilmetil)-2-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(3-Hidroxipropil)-2-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-fenil-amino]-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

N-(2-Hidroxietil)-4-[7-(3-hidroxipropil)-8-oxo-6-o-tolil-7,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-2-ilamino]-benceno-
sulfonamida;

2-[4-(2-Dietilaminoetoxi)-fenilamino)-7-(3-hidroxi-propil)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(3-Hidroxipropil)-2-(3-metanosulfinilfenilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(3-Metoxibencil)-2-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-fenil-amino]-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

N-(2-Hidroxietil)-4-[7-(3-metoxibencil)-8-oxo-6-o-tolil-7,8-dihidro-pirido[3,4-d]pirimidin-2-ilamino]-benceno-
sulfonamida;

2-[4-(2-Dietilaminoetoxi)-fenilamino]-7-(3-metoxibencil)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

2-(3-Metanosulfinilfenilamino)-7-(3-metoxibencil)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

3-[2-(3-Hidroximetilfenilamino)-8-oxo-6-o-tolil-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-propionamida;

3-{2-[4-(2-Hidroxietilsulfamoíl)-fenilamino]-8-oxo-6-o-tolil-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il}-propionamida;

3-[2-(3-Metanosulfinilfenilamino)-8-oxo-6-o-tolil-8H-pirido(3,4-d]pirimidin-7-il]-propionamida;

6-(2-Clorofenil)-7-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilmetil)-2-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-fenilamino]-7H-pirido[3,4-d]-
pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-2-[4-(2-dietilaminoetoxi)-fenilamino]-7-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilmetil)-7H-pirido[3,4-d]-
pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-7-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilmetil)-2-(3-metanosulfinilfenilamino)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-
8-ona;

6-(2-Clorofenil)-7-(3-hidroxipropil)-2-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-fenilamino]-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-7-(3-metoxibencil)-2-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-fenilamino]-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

4-[6-(2-Clorofenil)-7-(3-metoxibencil)-8-oxo-7,8-dihidro-pirido[3,4-d]pirimidin-2-ilamino]-N-(2-hidroxietil)-
bencenosulfonamida;

6-(2-clorofenil)-2-[4-(2-dietilaminoetoxi)-fenilamino]-7-(3-metoxibencil)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-2-(3-metanosulfinil-fenilamino)-7-(3-metoxibencil)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-2-(3-hidroximetilfenilamino)-7-(tetrahidrofuran-2-ilmetil)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-2-[4-(4-metilpiperazin-1-il)-fenil-amino]-7-(tetrahidrofuran-2-ilmetil)-7H-pirido[3,4-d]-piri-
midin-8-ona;

4-[6-(2-Clorofenil)-8-oxo-7-(tetrahidrofuran-2-ilmetil)-7,8-dihidropirido[3,4-d]pirimidin-2-ilamino]-N-(2-hidro-
xietil)-bencenosulfonamida;

6-(2-Clorofenil)-2-[4-(2-dietilaminoetoxi)-fenilamino]-7-(tetrahidrofuran-2-ilmetil)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-2-(3-metanosulfinilfenilamino)-7-(tetrahidrofuran-2-ilmetil)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

2-[8-Oxo-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-6-o-tolil-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-acetamida;

7-Metil-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(1,5-Dimetil-1H-pirazol-3-ilmetil)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(3-Hidroxipropil)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

7-(3-Metoxibencil)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-6-o-tolil-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

3-[8-Oxo-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-6-o-tolil-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-propionamida;

2-[6-(2-Clorofenil)-8-oxo-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-8H-pirido[3,4-d]pirimidin-7-il]-acetamida;

6-(2-Clorofenil)-7-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilmetil)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-
ona;

6-(2-Clorofenil)-7-(3-hidroxipropil)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona;

6-(2-Clorofenil)-7-(3-metoxibencil)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona; y

6-(2-Clorofenil)-7-(tetrahidrofuran-2-ilmetil)-2-(tetrahidropiran-4-ilamino)-7H-pirido[3,4-d]pirimidin-8-ona.

\newpage

6. Un proceso para la preparación de los compuestos de la fórmula I de la reivindicación 1, que comprende las etapas de

(a)

hacer reaccionar un compuesto de la fórmula VIII

40

donde R^{1}, R^{2} y R^{3} tienen el significado arriba indicado para la fórmula I en la reivindicación 1 y L es un grupo saliente seleccionado entre alquilsulfonilo y alquilsulfinilo,

con un compuesto de la fórmula VIIIa

fórmula VIIIa,R^{4}-NH_{2}

donde R^{4} tiene el significado arriba indicado para la fórmula I en la reivindicación 1,

para dar el respectivo compuesto de la fórmula I

41

donde R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen el significado arriba indicado para la fórmula I en la reivindicación 1,

(b)

aislar dicho compuesto de fórmula I de la mezcla de reacción, y

(c)

si se desea, transformarlo en una sal farmacéuticamente aceptable.

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7. Una composición farmacéutica que contiene uno o más compuestos, como los reivindicados en cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 5, junto con adyuvantes farmacéuticamente aceptables.

8. Una composición farmacéutica según la reivindicación 7, para el tratamiento del cáncer.

9. El uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 5, para elaborar los correspondientes medicamentos destinados al tratamiento del cáncer.