ES2252540T3 - Tieno (2,3-d) pirimidinas glicino-sustituidas con actividad agonistas combinada lh y fsh. - Google Patents
Tieno (2,3-d) pirimidinas glicino-sustituidas con actividad agonistas combinada lh y fsh.Info
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- A61P5/08—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH for decreasing, blocking or antagonising the activity of the anterior pituitary hormones
Abstract
Un derivado tieno[2, 3-d]pirimidina de acuerdo con la Fórmula General I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en el que X es O o H, H A es S, NH, N(R6), O o un enlace; R1 es alquilo (1-4C), alquenilo (2-4C), fenilo o heteroarilo (2-5C), estando el anillo de fenilo o del heteroarilo sustituido opcionalmente con uno o más del grupo de sustituyentes: hidroxi, halógeno, nitro, trifluorometilo, ciano, amino o (di) alquil (1-4C) amino; R2 es H, alquilo (1-4C), alcoxi (1-4C) alquilo (2-4C) o hidroxialquilo (2-4C); R3 y R4 pueden ser seleccionados independientemente de H, alquilo (1-4C) e e hhidroxialquilo (1-4C); R5 es H o alquilo (1-4C); R6 puede ser seleccionado de los mismos grupos que los descritos para R1, o ter-butil 55-amino-2-metiltio4-(3-((2, 3-dihidroxi-prop-1-il)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2, 3-d]pirimidina-6-carboxamida.
Description
Tieno[2,3-d]pirimidinas
glicino-sustituidas con actividad agonista combinada
LH y FSH.
La invención se refiere a compuestos que tienen
actividad agonista de hormonas glicoproteicas, en particular a
compuestos que tienen actividad agonista de la Hormona Luteinizante
(LH) y de la Hormona Estimulante del Folículo (FSH). La invención se
refiere además a composiciones farmacéuticas que contienen los
mismos así como a la utilización de estos compuestos en terapia
médica, particularmente a la utilización en el control de la
fertilidad.
Las gonadotropinas desempeñan papeles importantes
en una variedad de funciones del organismo incluyendo el
metabolismo, la regulación de la temperatura y el proceso
reproductor. Las gonadotropinas hipofisarias FSH y LH, por ejemplo,
desempeñan una función fundamental en la estimulación del desarrollo
y maduración del folículo, mientras que la LH está implicada en la
inducción del proceso ovulatorio (Sharp, R.M., Clin. Endocrinol.
33:787-807, 1990; Dorrington y Armstrong,
Recent Prog. Horm. Res. 35:301-342, 1979 ;
Levy y col., Human Reproduction 15:2258-2265,
2000).
Actualmente, la LH es aplicada en clínica, en
combinación con la FSH, para la estimulación ovárica, esto es la
hiperestimulación ovárica para fertilización in vitro (FIV) y
la inducción de ovulación en mujeres anovulatorias estériles
(Insler, V., Int. J. Fertility 33:85-97,
1988; Navot y Rosenwaks, J. Vitro Fert: Embryo Transfer
5:3-13, 1988), así como para el hipogonadismo
masculino y la esterilidad masculina.
Las gonadotropinas actúan sobre tipos celulares
de las gónadas específicos para iniciar la diferenciación y la
esteroidogénesis ovárica y testicular. Las acciones de estas
hormonas de la pituitaria y de la placenta están mediadas por
receptores específicos de la membrana plasmática que son miembros de
la gran familia de receptores acoplados a proteína G. Constan de un
único polipéptido con siete dominios transmembranales y son capaces
de interaccionar con la proteína Gs, dando lugar a la activación de
la adenil ciclasa.
Las gonadotropinas destinadas a fines
terapéuticos pueden ser aisladas de fuentes de orina humana y son de
baja pureza (Morse y col., Amer. J. Reproduct. Immunol. and
Microbiology 17:143, 1988). Alternativamente, pueden ser
preparadas como gonadotropinas recombinantes. Además de por estas
proteínas, los receptores de gonadotropinas pueden ser activados o
desactivados por compuestos sintéticos de bajo peso molecular. Se
han descrito compuestos heteroaromáticos bicíclicos en WO 00/61586.
Se ha demostrado mediante experimentos in vitro e in
vivo que son útiles como agonistas de la LH.
En las mujeres normales, la liberación de la LH y
de la FSH por la hipófisis se caracteriza por una irrupción a mitad
del ciclo que precede a la ovulación. La ovulación se caracteriza
por tres fenómenos fisiológicos distintos, a saber, la maduración
del oocito, la ruptura folicular y la luteinización. Mientras que la
función de la irrupción de LH en la inducción in vivo de
estos fenómenos es incontestable, la función de la irrupción de FSH
está menos clara. Sin embargo, se ha demostrado recientemente que la
FSH induce la maduración de oocitos in vitro mediante la
inducción de la producción de un factor por las células del cúmulo
que resuelve positivamente la detención meiótica inducida por
hipoxantina (Lu y col., Mol. Cell. Endocrinol.
164:191-196, 2000). Se cree que este factor
es un esterol activador de la meiosis (MAS).
La presente invención proporciona compuestos de
bajo peso molecular que presentan actividad LH. Además de la
actividad LH, tienen también inesperadamente actividad FSH. En
general, estos compuestos son tieno[2,3-d]pirimidinas
que están sustituidas en la posición 4 del anillo de pirimidina por
un grupo fenilo que a su vez está sustituido en la posición meta.
Este sustituyente comprende un espaciador de tres átomos
(NH-C(O)-CH_{2}), que está
además funcionalizado con un grupo amino sustituido. Generalmente,
los compuestos tienen actividad agonista de FSH en grados
variables, pero típicamente menor que la actividad agonista de
LH.
La presente invención se basa en derivados
tieno[2,3-d]pirimidina sustituidos con glicina de
acuerdo con la Fórmula General I,
(Fórmula
I)
o una sal del mismo
farmacéuticamente aceptable, en los
que
X es O o H,H
A es S, NH, N(R^{6}), O o un enlace;
R^{1} es alquilo(1-4C),
alquenilo(2-4C), fenilo o
heteroarilo(2-5C), estando el anillo de
fenilo o del heteroarilo sustituido opcionalmente con uno o más del
grupo de sustituyentes: hidroxi, halógeno, nitro, trifluorometilo,
ciano, amino o
(di)alquil(1-4C)amino; y
R^{2} es H,
alquilo(1-4C),
alcoxi(1-4C)alquilo(2-4C)
o hidroxialquilo(2-4C);
R^{3} y R^{4} pueden ser seleccionados
independientemente de H, alquilo(1-4C) e
hidroxialquilo(1-4C);
R^{5} es H o
alquilo(1-4C);
R^{6} puede ser seleccionado de los mismos
grupos que los descritos para R^{1}.
El término alquilo(1-4C),
según es utilizado en la definición de la Fórmula I, significa un
grupo alquilo ramificado o no ramificado que tiene
1-4 átomos de carbono, siendo metilo, etilo,
n-propilo, isopropilo, n-butilo,
sec-butilo o ter-butilo.
El término
alquenilo(2-4C), según es utilizado en la
definición de la Fórmula I, significa un grupo alquenilo ramificado
o no ramificado que tiene 2-4 átomos de carbono,
siendo vinilo, 1-propenilo,
2-propenilo,
1-metil-vinilo,
1-butenilo, 2-butenilo,
3-butenilo,
2-metil-1-propenilo,
2-metil-2-propenilo,
1-metil-1-propenilo,
1-etil-vinilo.
El término
alcoxi(1-4C)alquilo(1-4C),
significa un grupo alquilo que tiene 1-4 átomos de
carbono, unido mediante un átomo de oxígeno a otro grupo alquilo que
tiene 1-4 átomos de carbono, teniendo los restos
alquilo el mismo significado que el definido previamente.
El término
alcoxi(1-4C)alquilo(2-4C),
significa un grupo alquilo que tiene 1-4 átomos de
carbono, unido mediante un átomo de oxígeno a otro grupo alquilo que
tiene 2-4 átomos de carbono, teniendo los restos
alquilo el mismo significado que el definido previamente.
El término
hidroxialquilo(1-4C), significa un grupo
hidroxilo unido a un grupo alquilo que tiene 1-4
átomos de carbono, teniendo el resto alquilo el mismo significado
que el definido previamente.
El término
hidroxialquilo(2-4C), significa un grupo
hidroxilo unido a un grupo alquilo que tiene 2-4
átomos de carbono, teniendo el resto alquilo el mismo significado
que el definido previamente.
El término
(di)alquil(1-4C)amino,
significa uno o dos grupos alquilo que tienen 1-4
átomos de carbono según se definió previamente, unidos a un átomo de
nitrógeno.
El término
heteroarilo(2-5C), significa un grupo
aromático, opcionalmente sustituido, que tiene 2-5
átomos de carbono, que incluye al menos un heteroátomo seleccionado
de N, O y/o S, como imidazolilo, tienilo, furilo o piridilo.
El término halógeno significa flúor, cloro, bromo
o yodo.
Se ha demostrado que compuestos que tienen la
Fórmula I anteriormente mencionada presentan actividad agonista de
LH y FSH. En un bioensayo in vitro utilizando células CHO
transfectadas de manera estable con el receptor de la LH o de la FSH
humano, respectivamente, se encontró que la CE_{50} con respecto
al receptor de LH era inferior a 5\cdot10^{-8} M, mientras que
con respecto al receptor de FSH la CE_{50} era inferior a
10^{-5} M. Típicamente, la actividad FSH varía desde una actividad
del 1% aproximadamente de la estimulación agonista de la LH hasta el
10% aproximadamente de la estimulación agonista de LH.
La invención se basa además en una composición
farmacéutica que contiene un compuesto derivado de
tieno[2,3-d]pirimidina, o sales del mismo, que tiene
la Fórmula General I.
Por tanto, los compuestos de acuerdo con la
invención pueden ser utilizados en terapia. Un aspecto más de la
invención reside en la utilización de un compuesto
tieno[2,3-d]pirimidina que tiene la Fórmula General I
para la fabricación de un medicamento para el control de la
fertilidad, más preferiblemente para la inducción de la ovulación.
Los presentes compuestos son utilizados para activar los receptores
de LH y FSH. El compuesto de la presente invención puede ser
utilizado por tanto en un método para tratar mujeres con problemas
de fertilidad.
Los compuestos
tieno[2,3-d]pirimidina de esta invención pueden tener
uno o más átomos de carbono quirales. Los compuestos pueden ser por
tanto obtenidos como compuestos quiralmente puros o como una mezcla
de diastereómeros y/o enantiómeros. Los métodos para obtener los
compuestos quiralmente puros son bien conocidos en la técnica, por
ejemplo cristalización o cromatografía.
Para uso terapéutico, las sales de los compuestos
de Fórmula I son aquéllas en las que el contraión es
farmacéuticamente aceptable. Sin embargo, las sales de adición de
ácido de las bases de acuerdo con la Fórmula I, pueden ser también
útiles, por ejemplo, para la preparación o purificación de un
compuesto farmacéuticamente aceptable. Todas las sales, sean o no
farmacéuticamente aceptables, están incluidas en el ámbito de la
presente invención.
Ejemplos de sales de adición de ácido incluyen
las derivadas de ácidos minerales tales como ácido clorhídrico,
ácido fosfórico, ácido sulfúrico, preferiblemente de ácido
clorhídrico, y de ácidos orgánicos como ácido cítrico, ácido
tartárico, ácido acético, ácido láctico, ácido maleico, ácido
malónico, ácido fumárico, ácido glicólico, ácido succínico y
similares.
Las vías de administración adecuadas para los
compuestos de Fórmula I o de las sales farmacéuticamente aceptables
de los mismos, referidos también en la presente como ingredientes
activos, son inyecciones intramusculares, inyecciones subcutáneas,
inyecciones intravenosas o inyecciones intraperitoneales,
administración oral e intranasal. Preferiblemente, los compuestos
pueden ser administrados oralmente. La dosis exacta y el régimen de
administración del ingrediente activo, o de una composición
farmacéutica del mismo, dependerán necesariamente del efecto
terapéutico a conseguir (tratamiento de la infertilidad;
anticoncepción), y pueden variar con el compuesto particular, con la
vía de administración y con la edad y la condición del sujeto
individual al que se va a administrar el medicamento.
En general, la administración parenteral requiere
dosis menores que los demás métodos de administración que dependen
más de la absorción. Sin embargo, una dosis para humanos contiene
preferiblemente 0,0001-25 mg por kg de peso
corporal. La dosis deseada puede ser presentada como una dosis o
como subdosis múltiples administradas a intervalos apropiados a lo
largo del día. En el caso de receptores femeninos, las dosis pueden
ser administradas a intervalos diarios apropiados a lo largo del
ciclo menstrual para soporte folicular o como una única dosis para
inducción de la ovulación. La dosificación así como el régimen de
administración pueden diferir entre un receptor femenino y un
receptor masculino.
En el caso de aplicaciones in vitro o
ex vivo, como en aplicaciones para FIV, los compuestos de la
invención deben ser utilizados en el medio de incubación en una
concentración de 0,01-5 \mug/ml
aproximadamente.
La presente invención se refiere por tanto a
composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto
tieno[2,3-d]pirimidina de acuerdo con la Fórmula I en
mezcla con agentes auxiliares farmacéuticamente aceptables y,
opcionalmente, con otros agentes terapéuticos. Los agentes
auxiliares deben ser "aceptables" en el sentido de ser
compatibles con los demás ingredientes de la composición y de no ser
nocivos para los receptores de los mismos.
Las composiciones farmacéuticas incluyen aquéllas
que son adecuadas para administración oral, rectal, nasal, tópica
(incluyendo transdérmica, bucal y sublingual), vaginal o parenteral
(incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica).
Las composiciones pueden ser preparadas mediante cualquier método
bien conocido en la técnica de la farmacia, por ejemplo utilizando
métodos como los descritos en Gennaro y col.,
Remington's-Pharmaceutical Sciences (18ª ed., Mack
Publishing Company, 1990, ver especialmente la Parte 8:
Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture).
Tales métodos incluyen la etapa de asociar el
ingrediente activo con cualquier agente auxiliar. El(los)
agente(s) auxiliar(es), denominados también
ingredientes accesorios, incluyen los convencionales en la técnica
(Gennaro, supra), tales como agentes de carga, aglutinantes,
diluyentes, desintegrantes, lubricantes, colorantes, agentes
aromatizantes y agentes humectantes.
Las composiciones farmacéuticas adecuadas para
administración oral pueden ser presentadas como unidades discretas
de dosificación tales como píldoras, tabletas o cápsulas, o como un
polvo o gránulos, o como una solución o una suspensión. El
ingrediente activo puede ser también presentado como un bolo o una
pasta. Las composiciones pueden ser además procesadas para dar lugar
a un supositorio o a un enema para administración rectal.
Para la administración parenteral, las
composiciones adecuadas incluyen inyecciones estériles acuosas y no
acuosas. Las composiciones pueden ser presentadas en recipientes de
una dosis unidad o de multidosis, por ejemplo viales y ampollas
cerrados herméticamente, y pueden ser almacenadas en una condición
de congelación-desecación al vacío (liofilización)
que requiere únicamente la adición de un vehículo líquido estéril,
por ejemplo agua, antes de su utilización.
Las composiciones o formulaciones adecuadas para
administración mediante inhalación nasal incluyen polvos finos o
vapores que pueden ser generados por medio de aerosoles presurizados
de dosis medida, nebulizadores o insufladores.
Los compuestos
tieno[2,3-d]pirimidina de la invención pueden ser
también administrados en forma de dispositivos farmacéuticos
implantables, que constan de un núcleo central de material activo
revestido con una membrana que regula la velocidad de liberación.
Tales implantes deben ser aplicados subcutáneamente o localmente, y
liberarán el ingrediente activo a una velocidad aproximadamente
constante durante periodos de tiempo relativamente grandes, por
ejemplo de semanas a años. Métodos para la preparación de
dispositivos farmacéuticos implantables como éstos son conocidos en
la técnica, por ejemplo como los descritos en la Patente Europea
0.303.306 (AKZO N.V.).
Por tanto, los compuestos de acuerdo con la
presente invención pueden ser utilizados para los mismos fines
clínicos que la LH nativa, con la ventaja de que poseen actividad
FSH, presentan propiedades de estabilidad alteradas y pueden ser
administrados de forma diferente.
Los compuestos de la presente invención,
representados por la Fórmula (I), pueden ser preparados de manera
general mediante la sustitución nucleofílica de compuestos de
Fórmula General (II) en los que Q = Cl o Br con aminas de Fórmula
General (III) en un solvente apropiado tal como
N,N-dimetilformamida o THF, a temperatura ambiente, en
presencia de una base terciaria tal como
N,N-diisopropiletilamina. Están disponibles comercialmente
muchas aminas de Fórmula General (III).
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Pueden prepararse derivados de Fórmula (II) en
los que Q = Cl o Br mediante acilación regioselectiva de derivados
meta anilina de Fórmula (V-a) con cloruros de acilo
de tipo (IV), en los que Q = Cl o Br, en presencia de una base
terciaria tal como N,N-diisopropiletilamina en un solvente
adecuado tal como diclorometano o THF.
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Los compuestos de Fórmula (V) son accesibles
mediante la reducción conocida en la técnica de la función nitro en
los derivados de Fórmula (VI), utilizando un agente reductor
apropiado tal como hidrógeno en presencia de un catalizador metálico
(Pd/Pt). Reducciones relacionadas han sido descritas en: P.M.
Carabateas, P.R. Brundage, K.O. Gelotte, M.D. Gruett, R.R. Lorenz,
J. Heterocycl. Chem. 21:1849 (1984). Alternativamente, la
reducción puede ser efectuada con cloruro de estaño (II) en un
solvente prótico tal como etanol en presencia de ácido clorhídrido a
temperatura elevada (J. Heilbron, J. Chem. Soc., 1279 (1940)).
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Las tienopirimidinas de Fórmula General (VI) son
accesibles por condensación de ácidos carboxílicos (VII) con
ter-butil amina bajo la influencia de un agente de
acoplamiento tal como tetrafluoroborato de
O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
(TBTU) o hexafluorofosfato de bromotripirrolidinofosfonio (PyBrOP) y
una base terciaria, por ejemplo N,N-diisopropiletilamina.
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La saponificación de los ésteres de etilo (VIII)
correspondientes a ácidos carboxílicos (VII) tiene lugar en
presencia de una base tal como hidróxido de litio, hidróxido de
potasio o hidróxido de sodio en dioxano acuoso a temperatura elevada
(80ºC a reflujo).
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Los sistemas bicíclicos de Fórmula General (VIII)
son formados por la sustitución de los cloruros de Fórmula (X) con
mercaptoacetato de etilo por mediación de
N,N-diisopropiletilamina, seguido por el cierre del anillo
catalizado por una base de los tioéteres intermedios (IX). Este tipo
de formaciones de anillos de tieno[2,3-d]pirimidina ha
sido descrito en: S.A. Abdel-Hady, M.A. Badawy, Y.A.
Ibrahim, Sulfur. Lett. 9:101 (1989) y S. Tumkevicius, Liebigs
Ann., 1703 (1995).
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Las condiciones adecuadas para la reacción de
ciclación son etóxido de sodio en etanol o
N,N-diisopropiletilamina en tolueno/etanol (1/1, v/v) a
temperatura de reflujo.
Los compuestos de Fórmula (X) pueden ser
sintetizados siguiendo procedimientos de la literatura tales como
los descritos, por ejemplo, por A.A. Santili, D.H. Kim y S.V.
Wanser, J. Heterocicl. Chem. 8:445, 1971. En un experimento
típico, una amida de estructura general (XI) es tratada con
POCl_{3} a temperatura elevada (80ºC a reflujo). La adición de un
solvente apropiado, por ejemplo dioxano, y/o la adición de PCl_{5}
o de N,N-dimetilanilina a la mezcla de reacción puede tener
como resultado tiempos de reacción más cortos y mayores rendimientos
de los cloruros (X).
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Una ruta general hacia las lactamas de Fórmula
(XI) comprende la condensación de cianoacetato de etilo con
3-nitro-benzaldehído y los
compuestos (XII), que pueden ser isotiourea (XII-a),
isourea (XII-b), guanidinas monosustituidas
(XII-c), guanidinas disustituidas
(XII-d) o amidinas (XII-e).
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En un experimento típico, cianoacetato de etilo,
3-nitrobenzaldehído y el derivado (XII) son
suspendidos en un solvente apropiado, por ejemplo etanol, metanol,
N,N-dimetilformamida, N-metilpirrolidinona,
tetrahidrofurano o piridina y se añade una base tal como carbonato
de potasio, acetato de sodio, metóxido de sodio o etóxido de sodio.
La reacción tiene lugar a temperatura elevada (70ºC a reflujo).
Después de la filtración, los residuos son recogidos en agua y
acidificados (pH 2), después de lo cual precipitan los productos
(XI) (S. Kambe, K. Saito y H. Kishi, Synthesis, 287 (1979); A.M.
Abd-Elfattah, S.M. Hussain y A.M.
El-Reedy, Tetrahedron 39:3197 (1983); S.M.
Hussain, A.A. El-Barbary y S.A. Mansour, J.
Heterocycl. Chem. 22:169 (1985)).
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Alternativamente, los compuestos de la presente
invención en los que A = N, representados por la Fórmula
(I-a), pueden ser preparados a partir de derivados
sulfóxido de Fórmula General (XIII) mediante sustitución
nucleofílica con nucleófilos amina de estructura general (XIV). La
reacción es llevada a cabo típicamente a temperatura elevada en
presencia de una base terciaria tal como
N,N-diisopropiletilamina en un solvente apropiado tal como
1,4-dioxano.
De manera similar, pueden prepararse compuestos
de la presente invención en los que A = O, representados por la
Fórmula (I-b), a partir de derivados sulfóxido de
Fórmula General (XIII) mediante sustitución nucleofílica con
nucleófilos alcóxido de estructura general (XV). La reacción se
lleva a cabo en presencia de ter-butóxido de potasio con un
exceso de alcohol R^{1}-OH.
Los derivados sulfóxido de Fórmula General (XIII)
son accesibles por oxidación de los compuestos de Fórmula General
(I), en los que R^{1} = Me y A = S, representados por la Fórmula
(I-c). La oxidación es efectuada por ácido
3-cloroperbenzoico en ácido trifluoroacético. La
naturaleza ácida del solvente impide la oxidación del grupo
5-amino al derivado 5-nitroso
correspondiente.
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Los métodos para determinar la unión a receptores
así como los ensayos in vitro e in vivo para
determinar la actividad biológica de las gonadotropinas son bien
conocidos. En general, el receptor expresado es puesto en contacto
con el compuesto a analizar y se mide la unión o la estimulación o
la inhibición de una respuesta funcional.
Para medir una respuesta funcional, se expresa en
células huésped adecuadas ADN que codifica el gen del receptor de la
LH o de la FSH, preferiblemente del receptor humano. Tales células
podrían ser Células de Ovario de Hámster Chino, pero son también
adecuadas otras células. Preferiblemente, las células son de origen
mamífero (Jia y col., Mol. Endocrin.
5:759-776, 1991).
Los métodos para construir líneas celulares que
expresen LH o FSH recombinante son bien conocidos en la técnica
(Sambrook y col., Molecular Cloning: a Laboratory Manual, Cold
Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, última
edición). La expresión del receptor se alcanza por la expresión del
ADN que codifica la proteína deseada. Las técnicas de mutagénesis
dirigida a un sitio, de ligadura de secuencias adicionales, de PCR y
de construcción de sistemas de expresión adecuados son todas,
actualmente, bien conocidas en el oficio. Pueden construirse
sintéticamente porciones o todo el ADN que codifica la proteína
deseada utilizando técnicas estándar de fase sólida, preferiblemente
para incluir sitios de restricción con el fin de facilitar la
ligadura. Pueden proporcionarse a las secuencias codificadoras de
ADN elementos de control adecuados de la transcripción y de la
traducción de la secuencia codificadora incluida. Como es bien
conocido, actualmente hay sistemas de expresión disponibles que son
compatibles con una amplia variedad de huéspedes, incluyendo
huéspedes procarióticos tales como bacterias y huéspedes
eucarióticos tales como levaduras, células vegetales, células de
insecto, células de mamífero, células de ave y similares.
Las células que expresan el receptor son puestas
en contacto posteriormente con el compuesto de ensayo con el fin de
observar la unión o la estimulación o la inhibición de una respuesta
funcional.
Alternativamente, pueden utilizarse membranas
celulares aisladas que contengan el receptor expresado para medir la
unión del compuesto.
Para medir la unión, pueden utilizarse compuestos
marcados radiactivamente o fluorescentemente. Como compuesto de
referencia puede utilizarse LH o FSH recombinante humana.
Alternativamente, pueden realizarse también ensayos de unión
competitiva.
Otro ensayo implica la selección de compuestos
agonistas de los receptores de LH o FSH mediante la determinación de
la estimulación de los receptores mediada por la acumulación de
AMPc. Así, tal método implica la expresión del receptor en la
superficie celular de una célula huésped y la exposición de la
célula al compuesto de ensayo. Se mide luego la cantidad de AMPc. El
nivel de AMPc estará reducido o incrementado, dependiendo del efecto
inhibidor o estimulante del compuesto de ensayo después de su unión
al receptor.
Además de la medida directa de, por ejemplo, los
niveles de AMPc en la célula expuesta, pueden utilizarse células que
además de la transfección con ADN que codifica el receptor son
también transfectadas con un segundo ADN que codifica un gen
informador, cuya expresión responde al nivel de AMPc. Tales genes
informadores podrían ser inducibles por AMPc o podrían ser
construidos de tal manera que estén conectados a nuevos elementos
sensibles a AMPc. En general, la expresión del gen informador podría
estar controlada por cualquier elemento de respuesta que reaccione a
un cambio de los niveles de AMPc. Genes informadores adecuados son,
por ejemplo, LacZ, fosfatasa alcalina, luciferasa de la luciérnaga y
proteína fluorescente verde. Los principios de tales ensayos de
transactivación son bien conocidos en la técnica y están descritos
en, por ejemplo, Stratowa, Ch., Himmler, A. y Czernilofsky, A.P.
(1995) Curr. Opin. Biotechnol. 6:574.
Para la selección de compuestos activos sobre el
receptor de LH o FSH, el ensayo a 10^{-5} M debe tener como
resultado una actividad de más del 20% de la actividad máxima cuando
se utiliza LH o FSH como referencia. Otro criterio podría ser el
valor de la CE_{50}, que debe ser < 10^{-5} M,
preferiblemente < 10^{-7} M.
El técnico experto reconocerá que los valores
deseables de la CE_{50} dependen del compuesto analizado. Por
ejemplo, un compuesto con una CE_{50} que es menor de 10^{-5} M
es considerado, generalmente, un candidato para la selección de
fármacos. Preferiblemente, este valor es menor de 10^{-7} M. Sin
embargo, un compuesto que tenga una CE_{50} mayor, pero que sea
selectivo para el receptor particular, puede ser incluso un
candidato mejor.
La selección de compuestos agonistas de los
receptores de LH puede ser llevada a cabo también mediante la
utilización de un bioensayo con células de Leydig de ratón (Van
Damme, M., Robersen, D. y Diczfalusy, E. (1974), Acta Endocrinol.
77:655-671; Mannaerts, B., Kloosterboer, H. y
Schuurs, A. (1987), Neuroendocrinology of reproduction. R. Rolland y
col., Eds., Elsevier Science Publishers B.V.,
49-58). En este ensayo, la estimulación de la
producción de testosterona mediada por el receptor de LH puede ser
medida en células de Leydig aisladas de ratones macho.
La actividad agonista de FSH de los compuestos
puede ser también determinada en un modelo ex vivo utilizando
folículos de ratón cultivados de acuerdo con Nayudu, P. y Osborn, S.
(1992, J. Reproduction and Fertility
95:349-362). Por tanto, folículos ováricos de
ratón son aislados y cultivados en presencia de compuestos agonistas
de FSH para inducir el crecimiento folicular. Las medidas del
diámetro folicular y del estradiol en el medio de cultivo son
indicativas de crecimiento folicular.
Para medir la actividad LH in vivo de los
compuestos, puede estudiarse la inducción de la ovulación en ratones
inmaduros. En este ensayo, ratones hembra inmaduros son estimulados
con FSH de orina y tratados 48 más tarde aproximadamente con un
compuesto agonista de LH. Los animales son sacrificados después del
tratamiento con el agonista de LH y se determina microscópicamente
el número de óvulos en el oviducto.
Para medir la actividad FSH in vivo de los
compuestos, ratas hembra inmaduras son tratadas a las 0, 8, 24 y 32
horas con un compuesto agonista de FSH para inducir el crecimiento
folicular. A las 52 horas después del inicio del experimento, se
inyecta a los animales hCG para inducir la ovulación. Los animales
son sacrificados 72 horas después del inicio del experimento y se
determina microscópicamente el número de óvulos en el oviducto.
Además, se determina el peso de los ovarios.
Los compuestos de la presente invención pueden
ser aplicados clínicamente en aquellos regímenes en los que se
utiliza actualmente LH o hCG. Éstos incluyen la sustitución de LH en
sujetos con hipogonadismo hipogonadal, masculinos o femeninos, la
administración a la mitad del ciclo para inducir la ovulación
(inducción de la ovulación (IO) o hiperestimulación controlada (COH)
o estimulación del cuerpo lúteo).
Los ejemplos siguientes son ilustrativos de la
invención y no deben ser interpretados de ninguna manera como
limitantes del ámbito de la invención.
Una mezcla de sulfato de
S-metilisotiourea (69,0 g),
3-nitrobenzaldehído (75,0 g), cianoacetato de etilo
(56,0 ml) y carbonato de potasio (72,5 g) en EtOH absoluto (1500 ml)
fue agitada a 60ºC durante 16 horas. La mezcla de reacción fue
enfriada hasta 0ºC en un baño de hielo. El precipitado resultante
fue extraído por filtración, lavado con EtOH absoluto y disuelto en
agua caliente (100ºC). La solución fue enfriada a temperatura
ambiente, acidificada con HCl 2 N hasta pH 2 y enfriada hasta 0ºC en
un baño de hielo. El precipitado resultante fue recogido por
filtración y lavado con agua enfriada con hielo. El agua residual
del precipitado fue eliminada mediante coevaporación con
1,4-dioxano.
1,4-dioxano.
- Rendimiento:
- 54,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 289,0
- TLC:
- R_{f} = 0,3, gel de sílice, DCM/MeOH = 9/1 (v/v).
Se añadió POCl_{3} (100 ml) a una solución
agitada de
5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-metiltio-6-hidroxi-pirimidina
(Ejemplo 1(a), 25,0 g) en 1,4-dioxano seco
(300 ml). Después de 3 horas a 90ºC, la mezcla fue enfriada hasta
temperatura ambiente y concentrada bajo presión reducida. El residuo
fue disuelto en 1,4-dioxano (100 ml) y la solución
resultante fue enfriada hasta 0ºC. Se añadió con precaución agua
enfriada con hielo. El precipitado resultante fue recogido por
filtración y lavado con agua. El agua residual del precipitado fue
eliminada mediante coevaporación con
1,4-dioxano.
1,4-dioxano.
- Rendimiento:
- 26,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 307,0
- TLC:
- R_{f} = 0,5, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió DIPEA (15,7 ml) a una solución agitada
de 2-mercaptoacetato de etilo (9,3 ml) y
6-cloro-5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-metiltio-pirimidina
(Ejemplo 1(b), 26,0 g) en una mezcla de EtOH (250 ml) y DCM
(250 ml). Después de 1 hora a temperatura ambiente, se añadió HCl
acuoso 0,1 N (500 ml) a la mezcla que fue extraída posteriormente
con DCM (3 x 500 ml), secada (MgSO_{4}) y concentrada bajo presión
reducida.
- Rendimiento:
- 28,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 391,4
- TLC:
- R_{f} = 0,5, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Una mezcla de etil
5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-metiltio-6-(etoxicarbonilmetiltio)-pirimidina
(Ejemplo 1(c), 28,0 g) y DIPEA (30 ml) en una mezcla de
tolueno (150 ml) y EtOH (150 ml) fue agitada a temperatura de
reflujo (100ºC) durante 16 horas. La mezcla fue enfriada
posteriormente hasta temperatura ambiente y concentrada bajo
presión reducida. El DIPEA residual fue eliminado mediante
coevaporación con tolueno.
- Rendimiento:
- 28,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 391,4
- TLC:
- R_{f} = 0,6, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió EtOH (400 ml) a una mezcla de etil
5-amino-4-(3-nitrofenil)-2-metiltio-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxilato
(Ejemplo 1(d), 28,0 g), HCl acuoso concentrado (15 ml) y
cloruro de estaño (II) (41,0 g) en 1,4-dioxano (400
ml). La mezcla fue agitada a 90ºC durante 16 horas. La mezcla fue
posteriormente enfriada hasta temperatura ambiente y concentrada
bajo presión reducida. El residuo fue suspendido en EtOAc (1000 ml).
Se añadió NaOH acuoso 4 N hasta obtener un pH de
10-11. La mezcla fue agitada vigorosamente y la capa
orgánica fue separada, secada (MgSO_{4}) y concentrada bajo
presión reducida.
- Rendimiento:
- 21,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 361,0
- TLC:
- R_{f} = 0,6, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió hidróxido de potasio (32,4 g) a una
solución de etil
5-amino-4-(3-aminofenil)-2-metiltio-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxilato
(Ejemplo 1(e), 21,0 g) en una mezcla de
1,4-dioxano (300 ml) y agua (100 ml). Después de 16
horas a 90ºC, la mezcla fue enfriada hasta 10ºC y se añadió ácido
cítrico acuoso 2 N (300 ml) bajo agitación vigorosa. El precipitado
resultante fue recogido por filtración, lavado con agua (180 ml) y
secado in vacuo.
- Rendimiento:
- 14,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 333,0
- TLC:
- R_{f} = 0,5, gel de sílice, DCM/MeOH = 9/1 (v/v).
Se añadió TBTU (16,1 g) a una solución de
5-amino-4-(3-aminofenil)-2-metiltio-tieno[2,3-d]pirimidina-6-ácido
carboxílico (Ejemplo 1(f), 14,0 g), DIPEA (17,4 ml) y
ter-butilamina (7,3 g) en DCM/DMF (1/1, v/v, 250 ml). Después
de 3 horas a temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con DCM (50
ml), lavada con NaHCO_{3} acuoso saturado (3 x 100 ml), HCl
acuoso 0,1 N (100 ml) y agua (100 ml). La capa orgánica fue
concentrada bajo presión reducida. El producto bruto fue purificado
mediante cristalización a partir de EtOH absoluto templado (300
ml).
- Rendimiento:
- 10,5 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 388,2
- HPLC:
- R_{t} = 30,72 minutos, Luna C-18(2), 5 \mum, 250 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente agua/ACN/MeOH = 90/9,5/0,5 a 0/95/5, tiempo de procesamiento = 50 minutos.
Se añadió cloruro de bromoacetilo (615 mg) a una
solución de ter-butil
5-amino-2-metiltio-4-(3-aminofenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 1(g), 1,08 g) y DIPEA (2,43 ml) en DCM seco (20
ml). Después de 3 horas a temperatura ambiente, la mezcla fue
diluida con DCM, lavada con NaHCO_{3} acuoso saturado, secada
(MgSO_{4}) y concentrada bajo presión reducida. El producto bruto
fue purificado mediante cromatografía en gel de sílice utilizando
como eluyente heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
\newpage
- Rendimiento:
- 910 mg
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 510,2
- TLC:
- R_{f} = 0,3, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió
N-metil-2-amino-etanol
(250 mg) a una solución de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-metiltio-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 1(h), 250 mg) en DCM (5 ml). Después de 16 horas a
temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con DCM (50 ml), lavada
con NaHCO_{3} acuoso saturado, secada (MgSO_{4}) y concentrada
bajo presión reducida. El producto bruto fue purificado mediante
HPLC utilizando una columna Luna C-18 con el
gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN =
90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue
liofilizado posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 112 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 503,2
- HPLC:
- R_{t} = 11,45 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Se añadió
2-amino-2-metil-propanol
(250 mg) a una solución de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-metiltio-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 1(h), 250 mg) en DCM (5 ml). Después de 16 horas a
temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con DCM (50 ml), lavada
con NaHCO_{3} acuoso saturado, secada (MgSO_{4}) y concentrada
bajo presión reducida. El producto bruto fue purificado mediante
HPLC utilizando una columna Luna C-18 con el
gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN =
90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue
liofilizado posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 67 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 517,2
- HPLC:
- R_{t} = 12,67 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Se añadió metil éster de glicina clorhidrato (200
mg) a una solución de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-metiltio-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 1(h), 250 mg) y N,N-diisopropiletilamina
(0,20 ml) en DCM (5 ml). Después de 16 horas a temperatura ambiente,
la mezcla fue diluida con DCM (50 ml), lavada con NaHCO_{3} acuoso
saturado, secada (MgSO_{4}) y concentrada bajo presión reducida.
El producto bruto fue purificado mediante HPLC utilizando una
columna Luna C-18 con el gradiente siguiente: TFA
acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a 10/90 (v/v) en 30
minutos. El compuesto del título fue liofilizado posteriormente a
partir de una mezcla de 1,4-dioxano, TFA acuoso al
0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 133 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 517,2
- HPLC:
- R_{t} = 11,87 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Se añadió
N-(2-metoxietil)-etilamina (266 mg)
a una solución de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-metiltio-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 1(h), 200 mg) en DCM (5 ml). Después de 16 horas a
temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con DCM (50 ml), lavada
con NaHCO_{3} acuoso saturado, secada (MgSO_{4}) y concentrada
bajo presión reducida. El producto bruto fue purificado mediante
HPLC utilizando una columna Luna C-18 con el
gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN =
90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue
liofilizado posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 84 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 531,2
- HPLC:
- R_{t} = 12,62 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Se añadió metil éster de D-valina
clorhidrato (250 mg) a una solución de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-metiltio-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 1(h), 250 mg) y N,N-diisopropiletilamina
(0,20 ml) en DCM (5 ml). Después de 16 horas a temperatura ambiente,
la mezcla fue diluida con DCM (50 ml), lavada con NaHCO_{3} acuoso
saturado, secada (MgSO_{4}) y concentrada bajo presión reducida.
El producto bruto fue purificado mediante HPLC utilizando una
columna Luna C-18 con el gradiente siguiente: TFA
acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a 10/90 (v/v) en 30
minutos. El compuesto del título fue liofilizado posteriormente a
partir de una mezcla de 1,4-dioxano, TFA acuoso al
0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 77 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 559,2
- HPLC:
- R_{t} = 13,22 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Se añadió
N,N-bis-(2-metoxietil)-amina
(400 mg) a una solución de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-metiltio-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 1(h), 250 mg) en DCM (5 ml). Después de 16 horas a
temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con DCM (50 ml), lavada
con NaHCO_{3} acuoso saturado, secada (MgSO_{4}) y concentrada
bajo presión reducida. El producto bruto fue purificado mediante
HPLC utilizando una columna Luna C-18 con el
gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN =
90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue
liofilizado posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 166 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 561,3
- HPLC:
- R_{t} = 13,62 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Se añadió
3-amino-2-hidroxi-propanol
(250 mg) a una solución de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-metiltio-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 1(h), 250 mg) en DCM (5 ml). Después de 16 horas a
temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con DCM (50 ml), lavada
con NaHCO_{3} acuoso saturado, secada (MgSO_{4}) y concentrada
bajo presión reducida. El producto bruto fue purificado mediante
HPLC utilizando una columna Luna C-18 con el
gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN =
90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue
liofilizado posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA
\hbox{acuoso al 0,1% y
agua.}
- Rendimiento:
- 164 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 519,2
- HPLC:
- R_{t} = 12,62 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Se añadió
2-amino-3-hidroxi
propanol (250 mg) a una solución de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-metiltio-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 1(h), 250 mg) en DCM (5 ml). Después de 16 horas a
temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con DCM (50 ml), lavada
con NaHCO_{3} acuoso saturado, secada (MgSO_{4}) y concentrada
bajo presión reducida. El producto bruto fue purificado mediante
HPLC utilizando una columna Luna C-18 con el
gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN =
90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue
liofilizado posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 117 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 519,2
- HPLC:
- R_{t} = 12,62 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Una mezcla de benzamidina clorhidrato (16,4 g),
3-nitrobenzaldehído (15,1 g), cianoacetato de etilo
(11,2 ml) y carbonato de potasio (16,6 g) en EtOH absoluto (250 ml)
fue agitada a 60ºC durante 8 horas. La mezcla de reacción fue
enfriada hasta 0ºC en un baño de hielo. El precipitado resultante
fue extraído por filtración, lavado con EtOH absoluto y calentado en
agua (100ºC) hasta que se obtuvo una solución clara. La solución fue
enfriada hasta 50ºC, acidificada hasta pH 2 por la adición de HCl
acuoso 2 N y enfriada hasta 0ºC en un baño de hielo. El precipitado
resultante fue extraído por filtración y lavado con agua enfriada en
hielo. El agua residual fue eliminada mediante coevaporación con
1,4-dioxano.
- Rendimiento:
- 15,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 319,2
- TLC:
- R_{f} = 0,3, gel de sílice, DCM/MeOH = 9/1 (v/v).
Se añadió POCl_{3} (50 ml) a una solución
agitada de
5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-fenil-6-hidroxi-pirimidina
(Ejemplo 9(a), 15,0 g) y dimetilanilina (0,4 ml) en
1,4-dioxano seco p.a. (200 ml). Después de 3 horas a
90ºC, la mezcla caliente fue filtrada y el filtrado fue concentrado
bajo presión reducida. El residuo fue disuelto en
1,4-dioxano y se añadió agua enfriada con hielo. El
precipitado resultante fue extraído por filtración y lavado con
agua. El agua residual fue eliminada mediante coevaporación con
1,4-dioxano.
- Rendimiento:
- 15,8 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 337,4
- TLC:
- R_{f} = 0,8, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió DIPEA (8,71 ml) a una solución agitada
de 2-mercaptoacetato de etilo (5,15 ml) y
6-cloro-5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-fenil-pirimidina
(Ejemplo 9(b), 15,8 g) en una mezcla de EtOH (125 ml) y DCM
(125 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 2 horas a
temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con DCM hasta disolución
completa, lavada con HCl acuoso 0,5 N, secada (MgSO_{4}) y
concentrada bajo presión reducida.
- Rendimiento:
- 19,7 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 421,2
- TLC:
- R_{f} = 0,7, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió DIPEA (20,0 ml) a una solución agitada
de etil
5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-fenil-6-(etoxicarbonilmetiltio)-pirimidina
(Ejemplo 9(c), 19,7 g) en una mezcla de EtOH absoluto (100
ml) y tolueno p.a. (100 ml). Después de 48 horas a 100ºC, la mezcla
fue enfriada a 0ºC. El precipitado resultante fue extraído por
filtración, lavado con EtOH frío y secado in vacuo a
40ºC.
- Rendimiento:
- 17,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 421,2
- TLC:
- R_{f} = 0,5, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Una solución de cloruro de estaño (II) (23,0 g)
en EtOH absoluto (250 ml) fue añadida a una solución de etil
5-amino-4-(3-nitrofenil)-2-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxilato
(Ejemplo 9(d), 16,6 g) en 1,4-dioxano p.a.
(250 ml). Se añadió HCl acuoso al 37% (6,9 ml) y la mezcla fue
calentada bajo reflujo (90ºC) durante 16 horas. Se dejó enfriar la
mezcla hasta temperatura ambiente y se concentró bajo presión
reducida. El residuo fue suspendido en EtOAc (500 ml). Se añadió
NaOH acuoso 4 N hasta obtener un pH de 10-11. La
mezcla fue diluida mediante la adición de NaCl acuoso saturado. La
capa orgánica fue separada, secada (MgSO_{4}) y concentrada bajo
presión reducida.
- Rendimiento:
- 17,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 421,2
- TLC:
- R_{f} = 0,5, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió hidróxido de potasio (20,0 g) a una
solución de etil
5-amino-4-(3-aminofenil)-2-fenil-tieno[2,3-d]pirimi-
dina-6-carboxilato (Ejemplo 9(e), 17,0 g) en una mezcla de 1,4-dioxano (210 ml) y agua (80 ml). Después de 16 horas a 90ºC, la mezcla fue enfriada hasta 0ºC. El precipitado resultante fue recogido por filtración, suspendido en agua (300 ml) y enfriado hasta 0ºC. La mezcla fue acidificada hasta pH 3 mediante la adición de ácido cítrico acuoso 2 N y agitada a 0ºC hasta temperatura ambiente durante 2 horas. El precipitado resultante fue recogido por filtración, lavado con agua y secado in vacuo a 40ºC
dina-6-carboxilato (Ejemplo 9(e), 17,0 g) en una mezcla de 1,4-dioxano (210 ml) y agua (80 ml). Después de 16 horas a 90ºC, la mezcla fue enfriada hasta 0ºC. El precipitado resultante fue recogido por filtración, suspendido en agua (300 ml) y enfriado hasta 0ºC. La mezcla fue acidificada hasta pH 3 mediante la adición de ácido cítrico acuoso 2 N y agitada a 0ºC hasta temperatura ambiente durante 2 horas. El precipitado resultante fue recogido por filtración, lavado con agua y secado in vacuo a 40ºC
- Rendimiento:
- 13,3 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 363,0
- TLC:
- R_{f} = 0,2, gel de sílice, DCM/MeOH = 95/5 (v/v).
Se añadieron DIPEA (15,3 ml),
ter-butilamina (9,3 ml) y TBTU (14,1 g) a una mezcla de
5-amino-4-(3-aminofenil)-2-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-ácido
carboxílico (Ejemplo 9(f), 13,3 g) en una mezcla de DCM (250
ml) y DMF (50 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 3
horas a temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con DCM y lavada
con NaHCO_{3} acuoso saturado, HCl acuoso 0,1 N y NaCl acuoso
saturado. La capa orgánica fue secada (MgSO_{4}) y concentrada
bajo presión reducida. El producto bruto fue purificado mediante
cromatografía en gel de sílice, utilizando como eluyente
heptano/EtOAc = 3/7 a 1/1 (v/v).
- Rendimiento:
- 14,7 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 418,4
- TLC:
- R_{f} = 0,4, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió cloruro de bromoacetilo (2,80 ml) gota
a gota a una solución de ter-butil
5-amino-4-(3-aminofenil)-2-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 9(g), 5,8 g) y DIPEA (12,2 ml) en DCM (50 ml).
Después de 3 horas a temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con
DCM, lavada con NaHCO_{3} acuoso saturado, secada (MgSO_{4}) y
concentrada bajo presión reducida. El producto bruto fue purificado
mediante cromatografía en gel de sílice utilizando como eluyente
heptano/EtOAc = 3/2 (v/v). Se obtuvo una mezcla 1:1 (mol/mol) de
ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
y ter-butil
5-amino-4-(3-(2-cloroacetamido)-fenil)-2-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida.
- Rendimiento:
- 2,6 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 540,2, [M'+H]^{+} = 494,2
- TLC:
- R_{f} = 0,3, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
A una solución agitada de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 9(h), 500 mg) en DCM (5 ml) se añadió
N-etil-2-amino-etanol
(500 mg). Después de agitar durante 17 horas a temperatura
ambiente, la mezcla de reacción fue diluida con DCM (100 ml), lavada
con NaHCO_{3} acuoso (1 M, 2 x 50 ml), secada (MgSO_{4}) y
concentrada in vacuo. El residuo fue purificado mediante HPLC
utilizando una columna Luna C-18 con el siguiente
gradiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a
10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue liofilizado
posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 271 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 547,2
- HPLC:
- R_{t} = 11,88 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
A una solución agitada de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-fenil-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 9(h), 500 mg) y N,N-diisopropiletil amina
(DIPEA, 1 ml) en DCM (5 ml) se añadió metil éster de glicina
clorhidrato (700 mg). Después de agitar durante 17 horas a
temperatura ambiente, la mezcla de reacción fue diluida con DCM (100
ml), lavada con NaHCO_{3} acuoso (1 M, 2 x 50 ml), secada
(MgSO_{4}) y concentrada in vacuo. El residuo fue
purificado mediante HPLC utilizando una columna Luna
C-18 con el siguiente gradiente: TFA acuoso al 0,1%
+ ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El
compuesto del título fue liofilizado posteriormente a partir de una
mezcla de 1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y
agua.
- Rendimiento:
- 321 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 547,2
- HPLC:
- R_{t} = 12,54 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Se añadió HCl etanólico saturado y enfriado (0ºC)
(40 ml) a un recipiente de reacción refrigerado (baño de hielo, 0ºC)
que contenía 2-furonitrilo (13 ml). Se dejó que la
solución resultante alcanzara la temperatura ambiente y se agitó
bajo una atmósfera de nitrógeno durante 48 horas. Después de la
concentración de la mezcla de reacción in vacuo, el residuo,
que contenía el
2-furil-etil-imidato
correspondiente, fue redisuelto en etanol (20 ml) y agitado a 0ºC
bajo una atmósfera de nitrógeno. Posteriormente, se añadió amonio
etanólico saturado (40 ml) y la mezcla de reacción se agitó en un
vaso de reacción cerrado herméticamente durante 48 horas. Después de
filtrar la mezcla de reacción, el filtrado fue concentrado bajo
presión reducida. El compuesto bruto fue utilizado en la etapa
siguiente sin purificación posterior.
- Rendimiento:
- 15,0 g
Una mezcla de 2-amidinofurano
(Ejemplo 11(a), 15 g), 3-nitrobenzaldehído
(24 g), cianoacetato de etilo (17 ml) y carbonato de potasio (25 g)
en EtOH absoluto (300 ml) fue agitada a 60ºC durante 16 horas. La
mezcla de reacción fue enfriada hasta 0ºC en un baño de hielo. El
precipitado resultante fue recogido por filtración, lavado con EtOH
absoluto y calentado en agua (100ºC) bajo agitación hasta que se
obtuvo una suspensión lechosa. La suspensión fue enfriada hasta
50ºC, acidificada hasta pH 2 mediante la adición de HCl acuoso 2 N y
enfriada hasta 0ºC en un baño de hielo. El precipitado resultante
fue recogido por filtración y lavado con agua enfriada en hielo. El
agua residual fue eliminada mediante coevaporación con
1,4-dioxano.
- Rendimiento:
- 16,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 309,2
- TLC:
- R_{f} = 0,3, gel de sílice, DCM/MeOH = 9/1 (v/v).
Se añadió POCl_{3} (50 ml) a una solución
agitada de
5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-(2-furil)-6-hidroxi-pirimidina
(Ejemplo 11(b), 16,0 g) y dimetilanilina (0,5 ml) en
1,4-dioxano seco p.a. (250 ml). Después de 2 horas
a 90ºC, la mezcla caliente fue filtrada y el filtrado fue
concentrado bajo presión reducida. El residuo fue disuelto en
1,4-dioxano y se añadió agua enfriada en hielo. El
precipitado resultante fue recogido por filtración y lavado con
agua. El agua residual fue eliminada mediante coevaporación con
1,4-dioxano.
- Rendimiento:
- 16,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 327,2
- TLC:
- R_{f} = 0,75, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió DIPEA (9,1 ml) a una solución agitada
de 2-mercaptoacetato de etilo (5,4 ml) y
6-cloro-5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-(2-furil)-pirimidina
(Ejemplo 11(c), 16,0 g) en una mezcla de EtOH (125 ml) y DCM
(125 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 2 horas a
temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con DCM hasta disolución
completa, lavada con HCl acuoso 0,5 N, secada (MgSO_{4}) y
concentrada bajo presión reducida.
- Rendimiento:
- 20,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 411,2
- TLC:
- R_{f} = 0,7, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió DIPEA (20,0 ml) a una solución agitada
de etil
5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-(2-furil)-6-(etoxicarbonilmetil-
tio)-pirimidina (Ejemplo 11(d), 20 g) en una mezcla de EtOH absoluto (100 ml) y tolueno p.a. (100 ml). Después de 48 horas a 100ºC, la mezcla fue enfriada hasta 0ºC. El precipitado resultante fue recogido por filtración, lavado con EtOH frío y secado in vacuo a 40ºC.
tio)-pirimidina (Ejemplo 11(d), 20 g) en una mezcla de EtOH absoluto (100 ml) y tolueno p.a. (100 ml). Después de 48 horas a 100ºC, la mezcla fue enfriada hasta 0ºC. El precipitado resultante fue recogido por filtración, lavado con EtOH frío y secado in vacuo a 40ºC.
- Rendimiento:
- 20 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 411,2
- TLC:
- R_{f} = 0,6, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Una solución de cloruro de estaño (II) (28,0 g)
en EtOH absoluto (250 ml) fue añadida a una solución de etil
5-amino-4-(3-nitrofenil)-2-(2-furil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxilato
(Ejemplo 11(e), 20 g) en 1,4-dioxano p.a.
(250 ml). Se añadió HCl acuoso al 37% (8,5 ml) y la mezcla fue
calentada bajo reflujo (90ºC) durante 16 horas. Se dejó enfriar la
mezcla hasta temperatura ambiente y se concentró bajo presión
reducida. El residuo fue suspendido en EtOAc (500 ml). Se añadió
NaOH acuoso 4 N hasta obtener un pH de 10-11. La
mezcla fue diluida mediante la adición de NaCl acuoso saturado. La
capa orgánica fue separada, secada (MgSO_{4}) y concentrada bajo
presión reducida.
- Rendimiento:
- 17,5 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 381,2
- TLC:
- R_{f} = 0,4, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió hidróxido de potasio (23,0 g) a una
solución de etil
5-amino-4-(3-aminofenil)-2-(2-furil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxilato
(Ejemplo 11(f), 17,5 g) en una mezcla de
1,4-dioxano (210 ml) y agua (80 ml). Después de 8
horas a 90ºC, la mezcla fue enfriada hasta 0ºC. El precipitado
resultante fue recogido por filtración, suspendido en agua (300 ml)
y enfriado hasta 0ºC. La mezcla fue acidificada hasta pH 3 mediante
la adición de ácido cítrico acuoso 2 N y agitada a 0ºC hasta
temperatura ambiente durante 2 horas. El precipitado resultante fue
recogido por filtración, lavado con agua y secado in vacuo a
40ºC.
- Rendimiento:
- 16,9 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 353,2
- TLC:
- R_{f} = 0,2, gel de sílice, DCM/MeOH = 95/5 (v/v).
Se añadieron DIPEA (19,2 ml),
ter-butilamina (11,6 ml) y TBTU (17,7 g) a una solución de
5-amino-4-(3-aminofenil)-2-(2-furil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-ácido
carboxílico (Ejemplo 11(g), 16,9 g) en una mezcla de DCM
(250 ml) y DMF (50 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 3
horas a temperatura ambiente, se formó una cantidad sustancial de un
precipitado amarillo, que fue extraído por filtración. El residuo
fue lavado con éter dietílico y secado in vacuo a 40ºC.
- Rendimiento:
- 18,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 408,2
- TLC:
- R_{f} = 0,4, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió cloruro de bromoacetilo (100 ml) gota a
gota a una solución de ter-butil
5-amino-4-(3-aminofenil)-2-(2-furil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 11(h), 250 mg) y DIPEA (0,5 ml) en DCM (5 ml).
Después de 3 horas a temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con
DCM, lavada con NaHCO_{3} acuoso saturado, secada (MgSO_{4}) y
concentrada bajo presión reducida. El producto bruto fue purificado
mediante cromatografía en gel de sílice utilizando como eluyente
heptano/EtOAc = 3/2 (v/v). Se obtuvo una mezcla 1:1 (mol/mol) de
ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-(2-tienil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
y ter-butil
5-amino-4-(3-(2-cloroacetamido)-fenil)-2-(2-tienil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida.
- Rendimiento:
- 124 mg
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 540,2, [M'+H]^{+} = 494,2
- TLC:
- R_{f} = 0,3, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
A una solución agitada de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-(2-furil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 11(i), 130 mg) en DCM (5 ml) se añadió
N-metil-2-amino-etanol
(200 mg). Después de agitar durante 17 horas a temperatura ambiente,
la mezcla de reacción fue diluida con DCM (50 ml), lavada con
NaHCO_{3} acuoso (1 M, 2 x 10 ml), secada (MgSO_{4}) y
concentrada in vacuo. El residuo fue purificado mediante HPLC
utilizando una columna Luna C-18 con el gradiente
siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a
10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue liofilizado
posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 81 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 523,2
- HPLC:
- R_{t} = 11,01 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
A una solución agitada de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-(2-furil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 11(i), 130 mg) en DCM (5 ml) se añadió
2-amino-2-metil-propanol
(260 mg). Después de agitar durante 17 horas a temperatura
ambiente, la mezcla de reacción fue diluida con DCM (50 ml), lavada
con NaHCO_{3} acuoso (1 M, 2 x 10 ml), secada (MgSO_{4}) y
concentrada in vacuo. El residuo fue purificado mediante
HPLC utilizando una columna Luna C-18 con el
gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN =
90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue
liofilizado posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 54 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 537,2
- HPLC:
- R_{t} = 11,15 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
A una solución agitada de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-(2-furil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 11(i), 130 mg) y DIPEA (0,5 ml) en DCM (5 ml) se
añadió metil éster de glicina clorhidrato (324 mg). Después de
agitar durante 17 horas a temperatura ambiente, la mezcla de
reacción fue diluida con DCM (50 ml), lavada con NaHCO_{3} acuoso
(1 M, 2 x 10 ml), secada (MgSO_{4}) y concentrada in vacuo.
El residuo fue purificado mediante HPLC utilizando una columna Luna
C-18 con el gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1%
+ ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El
compuesto del título fue liofilizado posteriormente a partir de una
mezcla de 1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y
agua.
- Rendimiento:
- 74 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 537,2
- HPLC:
- R_{t} = 12,09 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Una mezcla de 2-amidinotiofeno
clorhidrato (10,0 g), 3-nitrobenzaldehído (9,7 g),
cianoacetato de etilo (6,81 ml) y carbonato de potasio (10,1 g) en
EtOH absoluto (200 ml) fue agitada a 60ºC durante 8 horas. La mezcla
de reacción fue enfriada hasta 0ºC en un baño de hielo, filtrada,
lavada con EtOH absoluto y el residuo fue disuelto en agua (100ºC).
La solución fue enfriada hasta 50ºC, acidificada con HCl acuoso 2 N
hasta pH 2 y enfriada hasta 0ºC en un baño de hielo. El precipitado
resultante fue recogido por filtración y lavado con agua enfriada en
hielo. El agua residual fue eliminada mediante coevaporación con
1,4-dioxano.
- Rendimiento:
- 10,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 325,0
- TLC:
- R_{f} = 0,3, gel de sílice, DCM/MeOH = 9/1 (v/v).
Se añadió POCl_{3} (30 ml) a una solución
agitada de
5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-(2-tienil)-6-hidroxi-pirimidina
(Ejemplo 14(a), 10,0 g) y dimetilanilina (unas cuantas gotas)
en 1,4-dioxano seco (150 ml). Después de 3 horas a
90ºC, la mezcla fue enfriada hasta temperatura ambiente y
concentrada bajo presión reducida. El residuo fue disuelto en
1,4-dioxano y se añadió con precaución agua enfriada
en hielo. El precipitado resultante fue recogido por filtración y
lavado con agua. El agua residual fue eliminada mediante
coevaporación con 1,4-dioxano y secado in
vacuo a 40ºC.
- Rendimiento:
- 9,8 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 343,4
- TLC:
- R_{f} = 0,8, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió DIPEA (5,57 ml) a una solución agitada
de 2-mercaptoacetato de etilo (3,28 ml) y
6-cloro-5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-(2-tienil)-pirimidina
(Ejemplo 14(b), 9,8 g) en una mezcla de EtOH (80 ml) y DCM
(80 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 2 horas a
temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con DCM hasta disolución
completa, lavada con HCl acuoso 0,5 N, secada (MgSO_{4}) y
concentrada bajo presión reducida.
- Rendimiento:
- 12,9 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 427,2
- TLC:
- R_{f} = 0,7, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió DIPEA (13,0 ml) a una solución agitada
de etil
5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-(2-tienil)-6-(etoxicarbonilme-
tiltio)-pirimidina (Ejemplo 14(c), 12,9 g) en una mezcla de EtOH absoluto (75 ml) y tolueno p.a. (75 ml). Después de 48 horas a 100ºC, la mezcla fue enfriada hasta 0ºC. El precipitado resultante fue recogido por filtración, lavado con EtOH frío y secado in vacuo a 40ºC.
tiltio)-pirimidina (Ejemplo 14(c), 12,9 g) en una mezcla de EtOH absoluto (75 ml) y tolueno p.a. (75 ml). Después de 48 horas a 100ºC, la mezcla fue enfriada hasta 0ºC. El precipitado resultante fue recogido por filtración, lavado con EtOH frío y secado in vacuo a 40ºC.
- Rendimiento:
- 11,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 427,2
- TLC:
- R_{f} = 0,6, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Una solución de cloruro de estaño (II) (15 g) en
EtOH absoluto (150 ml) fue añadida a una solución de etil
5-amino-4-(3-nitrofenil)-2-(2-tienil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxilato
(Ejemplo 14(d), 10,86 g) en 1,4-dioxano (150
ml). Se añadió HCl acuoso al 37% (4,5 ml) y la mezcla fue calentada
bajo reflujo durante 16 horas. Se dejó enfriar la mezcla hasta
temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El
residuo fue suspendido en EtOAc (400 ml) y se añadió THF hasta
disolución completa. Se añadió NaOH acuoso 4 N hasta obtener un pH
de 10-11. La mezcla fue diluida mediante la adición
de NaCl acuoso saturado. La capa orgánica fue separada, secada
(MgSO_{4}) y concentrada bajo presión reducida.
- Rendimiento:
- 12,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 397,2
- TLC:
- R_{f} = 0,4, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió hidróxido de potasio (13 g) a una
solución de etil
5-amino-4-(3-aminofenil)-2-(2-tienil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxilato
(Ejemplo 14(e), 10,1 g) en una mezcla de
1,4-dioxano (150 ml) y agua (50 ml). Después de 16
horas a 90ºC, la mezcla fue enfriada hasta 0ºC. El precipitado
resultante fue recogido por filtración, suspendido en agua (180 ml)
y enfriado hasta 0ºC. La mezcla fue acidificada hasta pH 3 mediante
la adición de ácido cítrico acuoso 2 N y agitada a 0ºC durante 2
horas. El precipitado resultante fue recogido por filtración, lavado
con agua y secado in vacuo a 40ºC
- Rendimiento:
- 6,3 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 369,2
- TLC:
- R_{f} = 0,2, gel de sílice, DCM/MeOH = 95/5 (v/v).
Se añadieron DIPEA (7,1 ml),
ter-butilamina (4,3 ml) y TBTU (6,6 g) a una mezcla de
5-amino-4-(3-aminofenil)-2-(2-tienil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-ácido
carboxílico (Ejemplo 14(f), 6,3 g) en una mezcla de DCM (125
ml) y DMF (N,N-dimetilformamida) (25 ml) bajo una atmósfera
de nitrógeno. Después de 3 horas a temperatura ambiente, la mezcla
fue diluida con DCM y lavada con NaHCO_{3} acuoso saturado, HCl
acuoso 0,1 N y NaCl acuoso saturado. La capa orgánica fue secada
(MgSO_{4}) y concentrada bajo presión reducida. El producto bruto
fue purificado mediante cromatografía en gel de sílice utilizando
como eluyente heptano/EtOAc = 3/7 a 1/1 (v/v).
- Rendimiento:
- 6,45 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 424,2
- TLC:
- R_{f} = 0,3, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió cloruro de bromoacetilo (2,40 ml) a una
solución de ter-butil
5-amino-4-(3-aminofenil)-2-(2-tienil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 14(g), 5,0 g) y DIPEA (10,5 ml) en DCM (50 ml).
Después de 3 horas a temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con
DCM, lavada con NaHCO_{3} acuoso saturado, secada (MgSO_{4}) y
concentrada bajo presión reducida. El producto bruto fue purificado
mediante cromatografía en gel de sílice utilizando como eluyente
heptano/EtOAc = 3/2 (v/v). Se obtuvo una mezcla de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-(2-tienil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
y ter-butil
5-amino-4-(3-(2-cloroacetamido)-fenil)-2-(2-tienil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida.
- Rendimiento:
- 3,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 546,2, [M'+H]^{+} = 500,2
- TLC:
- R_{f} = 0,2, gel de sílice, tolueno/EtOAc = 7/1 (v/v).
A una solución agitada de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-(2-tienil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 14(h), 100 mg) en DCM (5 ml) se añadió
N-metil-2-aminoetanol
(140 mg). Después de agitar durante 17 horas a temperatura
ambiente, la mezcla de reacción fue diluida con DCM (50 ml), lavada
con NaHCO_{3} acuoso (1 M, 2 x 10 ml), secada (MgSO_{4}) y
concentrada in vacuo. El residuo fue purificado mediante HPLC
utilizando una columna Luna C-18 con el gradiente
siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a
10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue liofilizado
posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
\newpage
- Rendimiento:
- 59 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 539,2
- HPLC:
- R_{t} = 11,01 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
A una solución agitada de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-(2-tienil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 14(h), 100 mg) y DIPEA (0,5 ml) en DCM (5 ml) se
añadió metil éster de glicina clorhidrato (250 mg). Después de
agitar durante 17 horas a temperatura ambiente, la mezcla de
reacción fue diluida con DCM (50 ml), lavada con NaHCO_{3} acuoso
(1 M, 2 x 10 ml), secada (MgSO_{4}) y concentrada in
vacuo. El residuo fue purificado mediante HPLC utilizando una
columna Luna C-18 con el gradiente siguiente: TFA
acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a 10/90 (v/v) en 30
minutos. El compuesto del título fue liofilizado posteriormente a
partir de una mezcla de 1,4-dioxano, TFA acuoso al
0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 74 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 553,0
- HPLC:
- R_{t} = 12,57 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
A una solución agitada de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-(2-tienil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 14(h), 100 mg) en DCM (5 ml) se añadió
N,N-di-(2-metoxietil)-amina
(200 mg). Después de agitar durante 17 horas a temperatura ambiente,
la mezcla de reacción fue diluida con DCM (50 ml), lavada con
NaHCO_{3} acuoso (1 M, 2 x 10 ml), secada (MgSO_{4}) y
concentrada in vacuo. El residuo fue purificado mediante HPLC
utilizando una columna Luna C-18 con el gradiente
siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a
10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue liofilizado
posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 59 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 597,4
- HPLC:
- R_{t} = 13,84 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
A una solución agitada de ter-butil
5-amino-2-metiltio-4-(3-((N-etil-N-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 4, 1,0 g) en ácido trifluoroacético (TFA, 25 ml) se añadió
ácido 3-cloroperbenzoico (m-CPBA, 1,0 g).
Después de 17 horas, la mezcla de reacción fue concentrada bajo
presión reducida a temperatura ambiente (20ºC), disuelta de nuevo
en DCM (100 ml), lavada cuidadosamente con NaHCO_{3} acuoso
saturado (2 x 50 ml) y agua (50 ml), secada (MgSO_{4}) y
concentrada in vacuo. El residuo bruto fue utilizado en la
siguiente etapa sin una purificación posterior.
\newpage
- Rendimiento:
- 820 mg
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 547,3
- TLC:
- R_{f} = 0,2, gel de sílice, DCM/MeOH = 9/1 (v/v).
Se añadió etilamina clorhidrato (150 mg) a una
solución agitada de ter-butil
5-amino-2-metanosulfinil-4-(3-((N-etil-N-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 17(a), 100 mg) y DIPEA (0,5 ml) en
1,4-dioxano (5 ml) y la mezcla de reacción fue
calentada a 60ºC durante 3 horas. Después de concentrar la mezcla
de reacción bajo presión reducida, el residuo fue recogido en DCM
(50 ml) y lavado con salmuera (1 M, 25 ml) y agua (25 ml).
Posteriormente, la capa orgánica fue secada (MgSO_{4}) y
concentrada in vacuo. El residuo así obtenido fue purificado
mediante HPLC utilizando una columna Luna C-18 con
el gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN =
90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue
liofilizado posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 36 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 528,4
- HPLC:
- R_{t} = 10,21 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
A una solución agitada de ter-butil
5-amino-2-metiltio-4-(3-((N-metil-N-(2-hidroxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 1(i), 1,0 g) en ácido trifluoroacético (TFA, 25 ml)
se añadió ácido 3-cloroperbenzoico (m-CPBA,
1,0 g). Después de 17 horas, la mezcla de reacción fue concentrada
bajo presión reducida a temperatura ambiente (20ºC), disuelta de
nuevo en DCM (100 ml), lavada cuidadosamente con NaHCO_{3} acuoso
saturado (2 x 50 ml) y agua (50 ml), secada (MgSO_{4}) y
concentrada in vacuo. El residuo bruto fue utilizado en la
siguiente etapa sin una purificación posterior.
- Rendimiento:
- 910 mg
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 519,6
- TLC:
- R_{f} = 0,15, gel de sílice, DCM/MeOH = 9/1 (v/v).
Se añadió dimetilamina clorhidrato (150 mg) a una
solución agitada de ter-butil
5-amino-2-metanosulfinil-4-(3-((N-metil-N-(2-hidroxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 18(a), 100 mg) y DIPEA (0,5 ml) en
1,4-dioxano (5 ml) y la mezcla de reacción fue
calentada hasta 60ºC durante 3 horas. Después de concentrar la
mezcla de reacción bajo presión reducida, el residuo fue recogido
en DCM (50 ml) y lavado con salmuera (1 M, 25 ml) y agua (25 ml).
Posteriormente, la capa orgánica fue secada (MgSO_{4}) y
concentrada in vacuo. El residuo así obtenido fue purificado
mediante HPLC utilizando una columna Luna C-18 con
el gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN =
90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue
liofilizado posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 36 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 500,2
- HPLC:
- R_{t} = 10,03 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
A una solución agitada de ter-butil
5-amino-2-metiltio-4-(3-((N-(metoxicarbonilmetil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 3, 1,0 g) en ácido trifluoroacético (TFA, 25 ml) se añadió
ácido 3-cloroperbenzoico (m-CPBA, 1,0 g).
Después de 17 horas, la mezcla de reacción fue concentrada bajo
presión reducida a temperatura ambiente (20ºC), disuelta de nuevo
en DCM (100 ml), lavada cuidadosamente con NaHCO_{3} acuoso
saturado (2 x 50 ml) y agua (50 ml), secada (MgSO_{4}) y
concentrada in vacuo. El residuo bruto fue utilizado en la
siguiente etapa sin una purificación posterior.
- Rendimiento:
- 680 mg
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 533,6
- TLC:
- R_{f} = 0,17, gel de sílice, DCM/MeOH = 9/1 (v/v).
Se añadió etilamina clorhidrato (150 mg) a una
solución agitada de ter-butil
5-amino-2-metanosulfinil-4-(3-((N-(metoxicarbonilmetil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 19(a), 100 mg) y DIPEA (0,5 ml) en
1,4-dioxano (5 ml) y la mezcla de reacción fue
calentada a 60ºC durante 3 horas. Después de concentrar la mezcla de
reacción bajo presión reducida, el residuo fue recogido en DCM (50
ml) y lavado con salmuera (1 M, 25 ml) y agua (25 ml).
Posteriormente, la capa orgánica fue secada (MgSO_{4}) y
concentrada in vacuo. El residuo así obtenido fue purificado
mediante HPLC utilizando una columna Luna C-18 con
el gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN =
90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue
liofilizado posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 57 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 514,2
- HPLC:
- R_{t} = 12,56 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Se añadió isopropilamina (150 mg) a una solución
agitada de ter-butil
5-amino-2-metanosulfinil-4-(3-((N-etil-N-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 17(a), 100 mg) y DIPEA (0,5 ml) en
1,4-dioxano (5 ml) y la mezcla de reacción fue
calentada a 60ºC durante 3 horas. Después de concentrar la mezcla
de reacción bajo presión reducida, el residuo fue recogido en DCM
(50 ml) y lavado con salmuera (1 M, 25 ml) y agua (25 ml).
Posteriormente, la capa orgánica fue secada (MgSO_{4}) y
concentrada in vacuo. El residuo así obtenido fue purificado
mediante HPLC utilizando una columna Luna C-18 con
el gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN =
90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue
liofilizado posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 57 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 542,4
- HPLC:
- R_{t} = 11,01 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Se añadió alilamina (200 mg) a una solución
agitada de ter-butil
5-amino-2-metanosulfinil-4-(3-((N-(metoxicarbo-
nilmetil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida (Ejemplo 19(a), 100 mg) y DIPEA (0,5 ml) en 1,4-dioxano (5 ml) y la mezcla de reacción fue calentada a 60ºC durante 3 horas. Después de concentrar la mezcla de reacción bajo presión reducida, el residuo fue recogido en DCM (50 ml) y lavado con salmuera (1 M, 25 ml) y agua (25 ml). Posteriormente, la capa orgánica fue secada (MgSO_{4}) y concentrada in vacuo. El residuo así obtenido fue purificado mediante HPLC utilizando una columna Luna C-18 con el gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue liofilizado posteriormente a partir de una mezcla de 1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
nilmetil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida (Ejemplo 19(a), 100 mg) y DIPEA (0,5 ml) en 1,4-dioxano (5 ml) y la mezcla de reacción fue calentada a 60ºC durante 3 horas. Después de concentrar la mezcla de reacción bajo presión reducida, el residuo fue recogido en DCM (50 ml) y lavado con salmuera (1 M, 25 ml) y agua (25 ml). Posteriormente, la capa orgánica fue secada (MgSO_{4}) y concentrada in vacuo. El residuo así obtenido fue purificado mediante HPLC utilizando una columna Luna C-18 con el gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue liofilizado posteriormente a partir de una mezcla de 1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 65 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 526,4
- HPLC:
- R_{t} = 13,18 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Se añadió ter-butóxido de potasio (100 mg)
a una solución agitada de ter-butil
5-amino-2-metanosulfinil-4-(3-((N-etil-N-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 17(a), 200 mg) en metanol (5 ml) y la mezcla de
reacción fue calentada a 50ºC durante 3 horas. Después de concentrar
la mezcla de reacción bajo presión reducida, el residuo fue recogido
en DCM (50 ml) y lavado con cloruro de amonio acuoso (1 M, 25 ml),
salmuera (1 M, 25 ml) y agua (25 ml). Posteriormente, la capa
orgánica fue secada (MgSO_{4}) y concentrada in vacuo. El
residuo así obtenido fue purificado mediante HPLC utilizando una
columna Luna C-18 con el gradiente siguiente: TFA
acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a 10/90 (v/v) en 30
minutos. El compuesto del título fue liofilizado posteriormente a
partir de una mezcla de 1,4-dioxano, TFA acuoso al
0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 92 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 515,4
- HPLC:
- R_{t} = 12,21 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Se añadió ter-butóxido de potasio (100 mg)
a una solución agitada de ter-butil
5-amino-2-metanosulfinil-4-(3-((N-etil-N-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 17(a), 200 mg) en alcohol alílico (5 ml) y la mezcla
de reacción fue calentada a 50ºC durante 3 horas. Después de
concentrar la mezcla de reacción bajo presión reducida, el residuo
fue recogido en DCM (50 ml) y lavado con cloruro de amonio acuoso (1
M, 25 ml), salmuera (1 M, 25 ml) y agua (25 ml). Posteriormente, la
capa orgánica fue secada (MgSO_{4}) y concentrada in vacuo.
El residuo así obtenido fue purificado mediante HPLC utilizando una
columna Luna C-18 con el gradiente siguiente: TFA
acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a 10/90 (v/v) en 30
minutos. El compuesto del título fue liofilizado posteriormente a
partir de una mezcla de 1,4-dioxano, TFA acuoso al
0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 63 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 541,4
- HPLC:
- R_{t} = 12,71 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Se añadió ter-butóxido de potasio (100 mg)
a una solución agitada de ter-butil
5-amino-2-metanosulfinil-4-(3-((N-etil-N-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 17(a), 200 mg) en isopropanol (5 ml) y la mezcla de
reacción fue calentada a 50ºC durante 3 horas. Después de
concentrar la mezcla de reacción bajo presión reducida, el residuo
fue recogido en DCM (50 ml) y lavado con cloruro de amonio acuoso (1
M, 25 ml), salmuera (1 M, 25 ml) y agua (25 ml). Posteriormente, la
capa orgánica fue secada (MgSO_{4}) y concentrada in vacuo.
El residuo así obtenido fue purificado mediante HPLC utilizando una
columna Luna C-18 con el gradiente siguiente: TFA
acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a 10/90 (v/v) en 30
minutos. El compuesto del título fue liofilizado posteriormente a
partir de una mezcla de 1,4-dioxano, TFA acuoso al
0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 32 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 543,4
- HPLC:
- R_{t} = 12,93 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
Una mezcla de
4-amidino-piridina clorhidrato (16,5
g), 3-nitrobenzaldehído (15,1 g), cianoacetato de
etilo (11,2 ml) y carbonato de potasio (16,6 g) en EtOH absoluto
(250 ml) fue agitada a 60ºC durante 16 horas. La mezcla de reacción
fue enfriada a 0ºC en un baño de hielo. El precipitado resultante
fue recogido por filtración, lavado con EtOH absoluto y calentado en
agua (100ºC) hasta que se obtuvo una solución clara. La solución fue
enfriada hasta 50ºC, acidificada hasta pH 2 mediante la adición de
HCl acuoso 2 N y enfriada hasta 0ºC en un baño de hielo. El
precipitado resultante fue recogido por filtración y lavado con agua
de hielo. El agua residual fue eliminada mediante coevaporación con
1,4-dioxano.
- Rendimiento:
- 18,3 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 320,2
- TLC:
- R_{f} = 0,2, gel de sílice, DCM/MeOH = 9/1 (v/v).
Se añadió POCl_{3} (50 ml) a una solución
agitada de
5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-(4-piridil)-6-hidroxi-pirimidina
(Ejemplo 25(a), 18,3 g) y dimetilanilina (0,5 ml) en
1,4-dioxano seco p.a. (200 ml). Después de 3 horas
a 90ºC, la mezcla caliente fue filtrada y el filtrado fue
concentrado bajo presión reducida. El residuo fue disuelto en
1,4-dioxano y se añadió agua enfriada en hielo. El
precipitado resultante fue recogido por filtración y lavado con
agua. El agua residual fue eliminada mediante coevaporación con
1,4-dioxano.
- Rendimiento:
- 17,2 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 338,4
- TLC:
- R_{f} = 0,7, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió DIPEA (9,8 ml) a una solución agitada
de 2-mercaptoacetato de etilo (5,7 ml) y
6-cloro-5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-(4-piridil)-pirimidina
(Ejemplo 25(b), 17,2 g) en una mezcla de EtOH (125 ml) y DCM
(125 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 2 horas a
temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con DCM hasta disolución
completa, lavada con HCl acuoso 0,5 N, secada (MgSO_{4}) y
concentrada bajo presión reducida.
- Rendimiento:
- 20,5 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 422,0
- TLC:
- R_{f} = 0,6, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió DIPEA (20,0 ml) a una solución agitada
de etil
5-ciano-4-(3-nitrofenil)-2-(4-piridil)-6-(etoxicarbonilme-
tiltio)-pirimidina (Ejemplo 25(c), 20,5 g) en una mezcla de EtOH absoluto (100 ml) y tolueno p.a. (100 ml). Después de 48 horas a 100ºC, la mezcla fue enfriada hasta 0ºC. El precipitado resultante fue recogido por filtración, lavado con EtOH frío y secado in vacuo a 40ºC.
tiltio)-pirimidina (Ejemplo 25(c), 20,5 g) en una mezcla de EtOH absoluto (100 ml) y tolueno p.a. (100 ml). Después de 48 horas a 100ºC, la mezcla fue enfriada hasta 0ºC. El precipitado resultante fue recogido por filtración, lavado con EtOH frío y secado in vacuo a 40ºC.
- Rendimiento:
- 15,7 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 422,2
- TLC:
- R_{f} = 0,5, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Una solución de cloruro de estaño (II) (21,0 g)
en EtOH absoluto (250 ml) fue añadida a una solución de etil
5-amino-4-(3-nitrofenil)-2-(4-piridil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxilato
(Ejemplo 25(d), 15,7 g) en 1,4-dioxano p.a.
(250 ml). Se añadió HCl acuoso al 37% (6,9 ml) y la mezcla se
calentó bajo reflujo (90ºC) durante 16 horas. Se dejó enfriar la
mezcla hasta temperatura ambiente y se concentró bajo presión
reducida. El residuo fue suspendido en EtOAc (500 ml). Se añadió
NaOH acuoso 4 N para obtener un pH de 10-11. La
mezcla fue diluida mediante la adición de NaCl acuoso saturado. La
capa orgánica fue separada, secada (MgSO_{4}) y concentrada bajo
presión reducida.
- Rendimiento:
- 12,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 392,2
- TLC:
- R_{f} = 0,3, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
Se añadió hidróxido de potasio (15,7 g) a una
solución de etil
5-amino-4-(3-aminofenil)-2-(4-piridil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxilato
(Ejemplo 25(e), 12,0 g) en una mezcla de
1,4-dioxano (210 ml) y agua (80 ml). Después de 16
horas a 90ºC, la mezcla fue enfriada hasta 0ºC. El precipitado
resultante fue recogido por filtración, suspendido en agua (300 ml)
y enfriado hasta 0ºC. La mezcla fue acidificada hasta pH 3 mediante
la adición de ácido cítrico acuoso 2 N y agitada a 0ºC hasta
temperatura ambiente durante 2 horas. El precipitado resultante fue
recogido por filtración, lavado con agua y secado in vacuo a
40ºC.
- Rendimiento:
- 12,0 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 364,2
- TLC:
- R_{f} = 0,1, gel de sílice, DCM/MeOH = 95/5 (v/v).
Se añadieron DIPEA (12,9 g),
ter-butilamina (7,8 ml) y TBTU (11,9 g) a una mezcla de
5-amino-4-(3-aminofenil)-2-(4-piridil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-ácido
carboxílico (Ejemplo 25(f), 12,0 g) en una mezcla de DCM
(250 ml) y DMF (50 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 2
horas a temperatura ambiente, la mezcla fue diluida con DCM y lavada
con NaHCO_{3} acuoso saturado, HCl acuoso 0,1 N y NaCl acuoso
saturado. La capa orgánica fue secada (MgSO_{4}) y concentrada
bajo presión reducida. El producto bruto fue purificado mediante
cromatografía en gel de sílice, utilizando diclorometano/metanol =
1/0 a 95/5 (v/v) como eluyente.
- Rendimiento:
- 12,2 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 419,4
- TLC:
- R_{t} = 0,3, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v)
Una solución de bromuro de bromoacetilo (0,59 ml)
en THF (25 ml) fue añadida gota a gota a una solución de
ter-butil
5-amino-4-(3-aminofenil)-2-(4-piridil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 25(g), 2,0 g) y N,N-dimetil anilina
(3,0 ml) en THF (50 ml). Después de 30 minutos a temperatura
ambiente, la mezcla fue concentrada bajo presión reducida, disuelta
posteriormente en DCM (100 ml), lavada con NaHCO_{3} acuoso
saturado, secada (MgSO_{4}) y concentrada in vacuo. El
residuo fue utilizado en la etapa siguiente sin una purificación
posterior.
- Rendimiento:
- 2,3 g
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 539,2
- TLC:
- R_{f} = 0,3, gel de sílice, heptano/EtOAc = 3/2 (v/v).
A una solución agitada de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-(4-piridil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 25(h), 200 mg) en DCM (5 ml) se añadió
2-amino-2-metil-propanol
(300 mg). Después de agitar durante 17 horas a temperatura
ambiente, la mezcla de reacción fue diluida con DCM (100 ml),
lavada con NaHCO_{3} acuoso (1 M, 2 x 50 ml), secada (MgSO_{4})
y concentrada in vacuo. El residuo fue purificado mediante
HPLC utilizando una columna Luna C-18 con el
gradiente siguiente: TFA acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN =
90/10 a 10/90 (v/v) en 30 minutos. El compuesto del título fue
liofilizado posteriormente a partir de una mezcla de
1,4-dioxano, TFA acuoso al 0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 73 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 548,2
- HPLC:
- R_{t} = 9,65 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
A una solución agitada de ter-butil
5-amino-4-(3-(2-bromoacetamido)-fenil)-2-(4-piridil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida
(Ejemplo 25(h), 200 mg) en DCM (5 ml) se añadió
bis-(2-metoxietil)amina (300 mg). Después de
agitar durante 17 horas a temperatura ambiente, la mezcla de
reacción fue diluida con DCM (100 ml), lavada con NaHCO_{3}
acuoso (1 M, 2 x 50 ml), secada (MgSO_{4}) y concentrada in
vacuo. El residuo fue purificado mediante HPLC utilizando una
columna Luna C-18 con el gradiente siguiente: TFA
acuoso al 0,1% + ACN acuoso al 10%/ACN = 90/10 a 10/90 (v/v) en 30
minutos. El compuesto del título fue liofilizado posteriormente a
partir de una mezcla de 1,4-dioxano, TFA acuoso al
0,1% y agua.
- Rendimiento:
- 170 mg (TFA-sal)
- MS-ESI:
- [M+H]^{+} = 592,2
- HPLC:
- R_{t} = 12,02 minutos, columna Luna C-18(2), 3 \mum, 100 x 2,0 mm, detección UV = 210 nm, temperatura de la estufa = 40ºC, flujo = 0,25 ml/minuto, eluyente tampón fosfato 50 mM pH 2,1/agua/ACN = 10/80/10 a 10/10/80 (v/v/v), tiempo de procesamiento = 20 minutos.
La actividad agonista de LH de los compuestos fue
analizada en células de Ovario de Hámster Chino (CHO) transfectadas
de manera estable con el receptor de LH humano y cotransfectadas con
un elemento sensible a AMPc (CRE)/promotor que dirige la expresión
del gen de la luciferasa de la luciérnaga informador. La unión del
ligando al receptor de LH acoplado a Gs tendrá como resultado un
incremento de AMPc, que a su vez inducirá una transactivación
incrementada de la construcción del gen de la luciferasa informador.
La señal de la luciferasa fue cuantificada utilizando un contador de
luminiscencia. Se calcularon los valores de la CE_{50} para los
compuestos de ensayo (concentración del compuesto de ensayo que
produce una estimulación semimáxima (50%)). Para este fin se utilizó
el programa de ordenador GraphPad PRISM, versión 3.0 (GraphPad
Software Inc., San Diego).
De manera similar, se analizó la actividad
agonista de FSH de los compuestos en células CHO transfectadas con
el gen de la luciferasa informador y el receptor de FSH humano. Los
resultados están mostrados en la Tabla 1.
Para medir la actividad in vivo de los
compuestos agonistas de los receptores de LH/FSH, se estudió la
inducción de la ovulación en ratones inmaduros. En este ensayo,
ratones hembra inmaduros fueron estimulados con FSH de orina
(Humegon 12,5 UI/animal). Aproximadamente 48 horas más tarde los
animales fueron tratados con un compuesto agonista de LH/FSH, cuya
preparación se describió en los Ejemplos 1, 4, 9 y 17, a un nivel de
dosis de 50 mg/kg. Los animales fueron sacrificados 24 horas después
del tratamiento con el agonista de LH/FSH y se determinó
microscópicamente el número de óvulos en el oviducto. Se analizó un
promedio de 10-15 animales. El número medio de
óvulos ascendió a 8, con la excepción del compuesto del Ejemplo 17
(que fueron 0,4).
Claims (10)
1. Un derivado
tieno[2,3-d]pirimidina de acuerdo con la Fórmula
General I,
(Fórmula
I)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
o una sal del mismo
farmacéuticamente aceptable, en el
que
X es O o H,H
A es S, NH, N(R^{6}), O o un enlace;
R^{1} es alquilo(1-4C),
alquenilo(2-4C), fenilo o
heteroarilo(2-5C), estando el anillo de
fenilo o del heteroarilo sustituido opcionalmente con uno o más del
grupo de sustituyentes: hidroxi, halógeno, nitro, trifluorometilo,
ciano, amino o
(di)alquil(1-4C)amino;
R^{2} es H,
alquilo(1-4C),
alcoxi(1-4C)alquilo(2-4C)
o hidroxialquilo(2-4C);
R^{3} y R^{4} pueden ser seleccionados
independientemente de H, alquilo(1-4C) e
hidroxialquilo(1-4C);
R^{5} es H o
alquilo(1-4C);
R^{6} puede ser seleccionado de los mismos
grupos que los descritos para R^{1}, o ter-butil
5-amino-2-metiltio-4-(3-((2,3-dihidroxi-prop-1-il)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida.
2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que X es H,H.
3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 ó 2, en el que R^{5} es
alquilo(1-4C).
4. El compuesto de acuerdo con las
reivindicaciones 1-3, en el que R^{3} =
R^{4}.
5. El compuesto de acuerdo con las
reivindicaciones 1-4, en el que R^{3} = R^{4} =
H.
6. El compuesto de acuerdo con las
reivindicaciones 1-5, en el que R^{2} es
alquilo(1-4C).
7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 seleccionado de:
ter-Butil
5-amino-2-metiltio-4-(3-((N-metil-N-(2-hidroxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-metiltio-4-(3-((N-(1-hidroxi-2-metil-prop-2-il)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-metiltio-4-(3-((N-(metoxicarbonilmetil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-metiltio-4-(3-((N-etil-N-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-metiltio-4-(3-((N-(R-1-metoxicarbonil-2-metil-prop-1-il)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]
pirimidina-6-carboxamida;
pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-metiltio-4-(3-((N,N-bis-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-car-
boxamida;
boxamida;
ter-Butil
5-amino-2-metiltio-4-(3-((2,3-dihidroxi-prop-1-il)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-car-
boxamida;
boxamida;
ter-Butil
5-amino-2-metiltio-4-(3-((1,3-dihidroxiprop-2-il)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-fenil-4-(3-((N-etil-N-(2-hidroxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-fenil-4-(3-(N-(metoxicarbonilmetil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-(2-furil)-4-(3-((N-metil-N-(2-hidroxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-(2-furil)-4-(3-(N-(1-hidroxi-2-metil-prop-2-il)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-(2-furil)-4-(3-(N-(metoxicarbonilmetil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-car-
boxamida;
boxamida;
ter-Butil
5-amino-2-(2-tienil)-4-(3-((N-metil-N-(2-hidroxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-
carboxamida;
carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-(2-tienil)-4-(3-((N-(metoxicarbonilmetil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-(2-tienil)-4-(3-((N,N-di-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-etilamino-4-(3-((N-etil-N-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-(N,N-dimetilamino)-4-(3-((N-metil-N-(2-hidroxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]piri-
midina-6-carboxamida;
midina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-etilamino-4-(3-((N-(metoxicarbonilmetil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-
carboxamida;
carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-isopropilamino-4-(3-((N-etil-N-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-alilamino-4-(3-((N-(metoxicarbonilmetil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-
carboxamida;
carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-metoxi-4-(3-((N-etil-N-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-aliloxi-4-(3-((N-etil-N-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-isopropoxi-4-(3-((N-etil-N-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-
carboxamida;
carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-(4-piridil)-4-(3-((N-(1-hidroxi-2-metil-prop-2-il)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimi-
dina-6-carboxamida;
dina-6-carboxamida;
ter-Butil
5-amino-2-(4-piridil)-4-(3-((N,N-bis-(2-metoxietil)-glicinil)-amino)-fenil)-tieno[2,3-d]pirimidina-6-carboxamida.
8. El compuesto de acuerdo con las
reivindicaciones 1-7 para ser utilizado en
terapia.
9. Una composición farmacéutica que contiene un
compuesto tieno[2,3-d]pirimidina de acuerdo con las
reivindicaciones 1-7 o una sal o solvato del mismo
farmacéuticamente aceptable, en mezcla con un agente auxiliar
farmacéuticamente aceptable.
10. La utilización de los compuestos
tieno[2,3-d]pirimidina de acuerdo con las
reivindicaciones 1-7, o de una sal o solvato del
mismo farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un
medicamento para el control de la fertilidad.
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