ES2241139T3 - Un monoeter de probucol y procedimientos para la inhibicion de la expresion de vcam-1. - Google Patents

Abstract

Esta invención está en el área de los procedimientos y composiciones para la inhibición de la expresión de VCAM-1 y, en particular, para el tratamiento de enfermedades mediadas por VCAM-1, incluyendo enfermedades cardiovasculares e inflamatorias.

Description

Un monoéter de probucol y procedimientos para la inhibición de la expresión de VCAM-1.

Esta invención se encuentra en el área de los compuestos y composiciones para el tratamiento de enfermedades mediadas por VCAM-1, incluyendo enfermedades cardiovasculares e inflamatorias.

Antecedentes de la invención

La enfermedad cardiaca coronaria (ECC) se mantiene como la principal causa de muerte en los países industrializados. La primera causa de la ECC es la ateroesclerosis, una enfermedad caracterizada por la deposición de lípidos en las paredes de las arterias, dando lugar a un estrechamiento de los pasajes vasculares, y finalmente endureciendo el sistema vascular.

La ateroesclerosis, manifestada en su mayor complicación clínica, la enfermedad cardiaca isquémica, sigue siendo la principal causa de muerte en los países industrializados. Hoy en día se acepta normalmente que la ateroesclerosis puede comenzar con un daño local en el endotelio arterial, seguido de proliferación de células musculares lisas arteriales entre las capas media e íntima, seguido de la deposición de lípidos y acumulación de células espumosas en la lesión. A medida que la placa ateroesclerótica se desarrolla, esta ocluye más y más al vaso sanguíneo afectado, y puede llevar eventualmente a isquemia o infarto. Por tanto, es deseable el proveer procedimientos de inhibición del progreso de la ateroesclerosis en pacientes que lo necesiten.

La enfermedad cardiovascular ha estado unida a muchos factores causales, los cuales incluyen hipercolesterolemia, hiperlipidemia, y la expresión de VCAM-1 en células endoteliales vasculares.

Expresión de VCAM-1

La adhesión de los leucocitos al endotelio representa un evento temprano fundamental en una amplia variedad de condiciones inflamatorias, incluyendo ateroesclerosis, trastornos autoinmunes e infecciones bacterianas y virales. El reclutamiento de leucocitos en el endotelio comienza cuando los receptores de moléculas de adhesión inducible en la superficie celular, interactúan con los contrarreceptores de las células inmunológicas. Las células del endotelio vascular determinan qué tipo de leucocitos (monocitos, linfocitos, o neutrófilos) son reclutados, expresando selectivamente moléculas de adhesión específicas, tales como moléculas de adhesión celular vasculares-1 (VCAM-1), moléculas de adhesión intracelular-1 (ICAM-1), y E-selectina. En las etapas más tempranas de la lesión ateroescelerótica, hay una expresión endotelial localizada de VCAM-1, y un reclutamiento selectivo de leucocitos mononucleares que expresan la integrina contrarreceptora VLA-4. Debido a la expresión selectiva de VLA-4 en monocitos y linfocitos, pero no en neutrófilos, VCAM-1 es importante en la mediación de la adhesión selectiva de leucocitos mononucleares. La conversión posterior de leucocitos a macrófagos espumosos, da lugar a la síntesis de una amplia variedad de citoquinas inflamatorias, factores de crecimiento, y quimioatrayentes, que ayudan a propagar el reclutamiento de leucocitos y plaquetas, la proliferación de células musculares lisas, la activación de células endoteliales, y la síntesis de la matriz extracelular característica de la maduración de la placa ateroesclerótica.

VCAM-1 es un mediador en los trastornos inflamatorios crónicos tales como el asma, artritis reumatoide, y diabetes autoinmune. Por ejemplo, se sabe que la expresión de VCAM-1 e ICAM-1 aumenta en los asmáticos. Pilewski, J.M., et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 12, 1-3 (1995); Ohkawara, Y., et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 12, 4-12 (1995). Adicionalmente, bloqueando las integrinas receptoras para VCAM-1 e ICAM-1 (VLA-4 y LFA-1, respectivamente), se suprimieron tanto la fase temprana como la tardía, de las respuestas en un modelo de rata sensibilizada a ovoalbúmina, de respuestas alérgicas de vía aérea. Rabb, 11. A., et al., Am. J. Respir. Care Med. 149, 1186-1191 (1994). Hay también una expresión incrementada de las moléculas de adhesión endoteliales, incluyendo la VCAM-1, en la micro-vasculación del sinovio reumatoide. Koch, A.E. et al., Lab. Invest. 64, 313-322 (1991); Morales-Ducret, J. et al., Immunol. 149, 1421-1431 (1992). Neutralizando anticuerpos dirigidos contra VCAM-1 o su contrarreceptor, VLA-4, se puede retrasar el inicio de la diabetes en un modelo de ratón (ratones NOD) que desarrolla la enfermedad espontáneamente. Yang, X.D. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 10494-10498 (1993); Burkly L.C. et al., Diabetes 43, 523-534 (1994); Baron, J.L. et al., J. Clin. Invest. 93, 1700-1708 (1994). Los anticuerpos monoclonales para VCAM-1 también pueden tener un efecto beneficioso en modelos animales de rechazo a aloinjertos, sugiriendo que los inhibidores de la expresión de VCAM-1 pueden tener utilidad en la prevención de rechazos a transplantes. Oroez, C.G. et al., Immuno. Lett. 32, 7-12 (1992).

La VCAM-1 es expresada por células, tanto en forma de unión a membrana como en forma soluble. Se ha demostrado que la forma soluble de VCAM-1 induce la quimiotaxis de células endoteliales vasculares in vitro, y estimula una respuesta angiogénica en la córnea de rata. Koch, A.F. et al., Nature 376, 517-519 (1995). Los inhibidores de la expresión de VCAM-1 soluble tienen un valor terapéutico potencial en el tratamiento de enfermedades con un fuerte componente angiogénico, incluyendo crecimiento tumoral y metástasis. Folkman, J., and Shing, Y., Biol. Chem. 10931-10934 (1992).

La VCAM-1 es expresada en células endoteliales humanas cultivadas, tras la activación por lipopolisacáridos (LPS), y citoquinas como la interleuquina-1 (IL-1) y el factor de necrosis tumoral (TNF-\alpha). Estos factores no son selectivos para la activación de la expresión de moléculas de adhesión celular.

La U. S. Patent No. 5,380,747 de Medford, et al., desvela el uso de ditiocarbamatos tales como el ditiocarbamato de pirrolidina, para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares, y otras enfermedades inflamatorias.

La U. S. Patent No. 5,750,351 de Medford, et al., y la WO95/30415 de la Emory University, describen el descubrimiento de que los ácidos grasos poliinsaturados (AGPs), y sus hidroperóxidos (ox-AGPs), los cuales son componentes importantes de la lipoproteína de baja densidad (LDL) oxidativamente modificada, inducen la expresión de VCAM-1, pero no de la molécula de adhesión intracelular-1 (ICAM-1) o de la E-selectina, en células endoteliales aórticas de humano, a través de un mecanismo que no está mediado por citoquinas u otras señales no citoquínicas. Este es un descubrimiento fundamental de un importante, y previamente desconocido, camino biológico en las respuestas inmunes mediadas por VCAM-1.

Como ejemplos no limitantes, el ácido linoleico, el ácido linolénico, el ácido araquidónico, el linoleil hidroperóxido (13-HPODE), y el hidroperóxido araquidónico (15-HPETE), inducen la expresión de genes de la VCAM-1 de la superficie celular, pero no de la ICAM-1 o de la E-selectina. Los ácidos grasos saturados (tales como el ácido esteárico), y los ácidos grasos monoinsaturados (tales como el ácido oleico) no inducen la expresión de VCAM-1, ICAM-1 o E-selectina.

La inducción de VCAM-1 por AGPs y sus hidroperóxidos de ácidos grasos, es suprimida por los ditiocarbamatos, incluyendo el ditiocarbamato de pirrolidina (PDTC). Esto indica que la inducción es mediada por una molécula señal oxidada, y que la inducción es prevenida cuando la oxidación de la molécula es bloqueada (es decir, la oxidación no ocurre), invertida (es decir, la molécula señal es reducida), o cuando la señal modificada por redox es, de otro modo, prevenida de interactuar con su objetivo regulador.

Las células que son expuestas crónicamente a niveles mayores de lo normal de ácidos grasos poliinsaturados, o sus homólogos oxidados, pueden iniciar una respuesta inmune que no es normal, y que está fuera de la proporción para la amenaza presentada, llevando a un estado de enfermedad. La sobre-sensibilización de las células endoteliales vasculares a los AGPs y a los ox-AGPs, puede acelerar la formación, por ejemplo, de la placa ateroesclerótica.

Basado en estos descubrimientos, se ha descrito en WO95/30415 un procedimiento de tratamiento de la ateroesclerosis, la reestenosis post-angioplastia, enfermedades de las arterias coronarias, angina, enfermedad de las pequeñas arterias, y otras enfermedades cardiovasculares, además de enfermedades inflamatorias no-cardiovasculares que son mediadas por la VCAM-1. Este procedimiento incluye la eliminación, disminución en la concentración de, o la prevención de la formación de ácidos grasos poliinsaturados oxidados, que incluyen, aunque no quedan limitados a, los ácidos oxidados linoleico (C_{18}\Delta^{9,12}), linolénico (C_{18}\Delta^{6,9,12}), araquidónico (C_{20}\Delta^{5,8,11,14}) y eicosatrienoico (C_{20}\Delta^{8,11,14}).

Ejemplos no limitantes de enfermedades inflamatorias no-cardiovasculares mediadas por VCAM-1 incluyen artritis ósea y reumatoide, asma, dermatitis, y múltiples esclerosis.

Hipercolesterolemia e hiperlipidemia

La hipercolesterolemia es un importante factor de riesgo asociado con la enfermedad cardiovascular. Las lipoproteínas del suero son los transportadores para los lípidos en la circulación. Las lipoproteínas son clasificadas de acuerdo a su densidad: quilomicrones, lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL), lipoproteínas de baja densidad (LDL) y lipoproteínas de alta densidad (HDL). Los quilomicrones participan en primer lugar en el transporte del colesterol y los triglicéridos de la dieta, desde el intestino hasta el tejido adiposo y el hígado. Las VLDL llevan triglicéridos sintetizados endógenamente, desde el hígado al tejido adiposo, y otros tejidos. Las LDL transportan colesterol a los tejidos periféricos y regulan los niveles de colesterol endógeno en los mismos. Los HDL transportan colesterol desde los tejidos periféricos al hígado. EL colesterol de las paredes arteriales se deriva casi exclusivamente de las LDL. Brown and Goldstein, Ann. Rev. Biochem. 52, 223 (1983); Miller, Ann. Rev. Med. 31, 97 (1980). En los pacientes con bajos niveles de LDL, el desarrollo de ateroesclerosis es raro.

Steinberg, et al., (N. Eng. J. Med. 1989; 320: 915-924) hipotetizaron que la modificación de lipoproteínas de baja densidad (LDL) a LDL modificadas oxidativamente (ox-LDL) mediante especies reactivas de oxígeno, es el evento central que inicia y propaga la ateroesclerosis. LDL oxidado es una compleja estructura constituida por al menos varios materiales oxidados distintos químicamente, cada uno de los cuales, solos o en combinación, pueden modular la expresión de los genes de las moléculas de adhesión activadas por citoquinas. Los hidroperóxidos de los R-ácidos grasos tales como el linoleil hidroperóxido (13-HPODE), son producidos mediante lipoxigenasas, a partir de ácidos grasos libres, y son un importante componente de las LDL oxidadas.

Se ha propuesto que una generación de lípidos oxidados se forma por la acción del sistema celular de lipoxigenasas, y que los lípidos oxidados son posteriormente transferidos a las LDL. A partir de entonces hay una reacción de propagación con las LDL en el medio catalizada por metales de transición y/o compuestos sulfhidrilos. Investigaciones previas han demostrado que la modificación de los ácidos grasos de células endoteliales cultivadas, pueden alterar su susceptibilidad a daños oxidantes, mientras que la complementación con ácidos grasos poliinsaturados (AGPs) realza la susceptibilidad a daños oxidantes. La complementación con ácidos grasos mono o poliinstaurados de las células endoteliales cultivadas, reducen su susceptibilidad al daño oxidante, mientras que la complementación con ácidos grasos poliinsaturados (AGPs) realzan la susceptibilidad a daños oxidantes.

Usando análisis HPLC de fase inversa, de los extractos líquidos y saponificados de las LDL, se ha demostrado que el 13-HPODE es el ácido graso oxidado predominante en las LDL oxidadas, por monocitos humanos activados. La exposición crónica la las LDL oxidadas provee una señal oxidativa a las células endoteliales vasculares, posiblemente a través de un hidroperóxido de ácido graso específico, que aumenta selectivamente la expresión del gen de VCAM-1 inducida por citoquinas.

Mediante un mecanismo que no está bien definido, áreas de paredes vasculares predispuestas a la ateroesclerosis, cogen preferentemente LDL de circulación. A través de un camino mal conocido, las células endoteliales, musculares lisas, y/o inflamatorias, convierten entonces las LDL a ox-LDL. En contraste con las LDL, las cuales son tomadas mediante el receptor de LDL, los monocitos toman ávidamente las ox-LDL mediante un receptor "carroñero" cuya expresión, a diferencia del receptor de LDL, no es inhibida mientras el contenido de lípidos intracelulares se eleva. De este modo, los monocitos prosiguen tomando ox-LDL y se convierten en células macrófagas-espumosas hinchadas con lípidos, que forman la raya grasa.

Hay ahora mismo una gran evidencia que demuestra que la hipercolesterolemia es un importante factor de riesgo asociado con le enfermedad cardiaca. Por ejemplo, en diciembre de 1984, el National Institute of Health Consensus Development Conference Panel concluía que bajando definitivamente los elevados niveles de colesterol en sangre (específicamente los niveles en sangre de colesterol de lipoproteínas de baja densidad), se reduciría el riesgo de ataques de corazón debido a enfermedad cardiaca coronaria.

Típicamente, el colesterol es transportado en la sangre de animales de sangre caliente por ciertos complejos de lipoproteínas tales como los quilomicrones, lipoproteína de muy baja densidad (VLDL), lipoproteína de baja densidad (LDL), y lipoproteína de alta densidad (HDL). Se acepta abiertamente que la LDL funciona de modo que resulta directamente en la deposición del colesterol LDL en la pared de los vasos sanguíneos, y que la HDL funciona de modo que recoge el colesterol de la pared vascular y lo transporta hasta el hígado, donde es metabolizado [Brown and Goldstein, Ann. Rev. Biochem. 52, 223 (1983); Miller, Ann. Rev. Med. 31, 97 (1980)]. Por ejemplo, en varios estudios epidemiológicos, los niveles de colesterol LDL se correlacionan bien con el riesgo de enfermedad cardiaca coronaria, mientras que los niveles de colesterol HDL están inversamente asociados con la enfermedad cardiaca coronaria [Patton et al., Clin. Chem. 29, 1980 (1983)]. Aquellos entendidos en la materia, aceptan por lo general que la reducción de los niveles de colesterol LDL anormalmente altos es una terapia eficaz, no solo en el tratamiento de la hipercolesterolemia, si no también en el tratamiento de la ateroesclerosis.

Es más, hay evidencias basadas en descubrimientos animales y de laboratorio, de que la peroxidación de lípido LDL, tal como las porciones de ácido graso insaturado de colesteril ésteres y fosfolípidos de LDL, facilitan la acumulación de colesterol en monocitos/macrófagos, que son eventualmente transformados en células espumosas, y acaban depositados en el espacio sub-endotelial de la pared vascular. La acumulación de células espumosas en la pared vascular es reconocida como un evento temprano en la formación de la placa ateroesclerótica. Por tanto, se cree que la peroxidación del lípido LDL es un pre-requisito importante para la acumulación facilitada de colesterol en la pared vascular, y la posterior formación de una placa ateroesclerótica. Por ejemplo, se ha demostrado que los monocitos/macrófagos recogen y degradan LDL nativo con tasas relativamente bajas, y sin acumulación marcada de colesterol. En contraste, el LDL oxidado es recogido por estos monocitos/macrófagos con tasas mucho más altas, y con acumulación marcada de colesterol [Parthasarathy et al., J. Clin. Invest. 77, 641 (1986)]. Es por tanto deseable el proveer procedimientos de inhibición de la peroxidación del lípido LDL, en un paciente que lo necesite.

Niveles elevados de colesterol se asocian con distintos estados de enfermedad, incluyendo restenosis, angina, ateroesclerosis cerebral, y xantoma. Es deseable el proveer un procedimiento para reducir el colesterol en plasma en pacientes con, o con riesgo de desarrollar, restenosis, angina, ateroesclerosis cerebral, xantoma, y otros estados de enfermedad asociados con niveles elevados de colesterol.

Desde que se ha determinado que la hipercolesterolemia se debe a elevados niveles de LDL (hiperlipidemia), se intenta el descenso de esos niveles mediante terapia dietética. Hay varias clases de fármacos que se usan comúnmente para bajar los niveles de LDL, incluyendo secuestrantes del ácido bílico, e inhibidores del ácido nicotínico (niacina), y de la 3-hidroxi-3-metilglutaril coenzima A (HMG CoA) reductasa. El probucol y los fibratos derivados son usados a veces como terapia añadida, usualmente en combinación con otras medicaciones. Los inhibidores de la HMG CoA reductasa han sido llamados estatinas y vastatinas. Las estatinas son uno de los agentes más efectivos del mercado, para la hipercolesterolemia, e incluyen la pravastatina (Pravchol, Bristol Myers Squibb), la atorvastatina (Warner Lambert/Pfizer), la simvastatina (Zocor, Merck), la lovastatina (Mevacor, Merck), y la fluvastatina (Lescol).

La evidencia sugiere que los efectos aterogénicos de la lipoproteína de baja densidad (LDL) pueden estar mediados en parte por su modificación oxidativa. El probucol ha demostrado tener potentes propiedades antioxidantes y de bloqueo de la modificación oxidativa del LDL. Consecuentemente con estos hallazgos, el probucol ha demostrado poder ralentizar realmente la progresión de la ateroesclerosis en conejos con déficit de receptores de LDL, tal como se discute en Carew et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84: 7725-7729 (1987). Muy probablemente, el probucol es efectivo porque es altamente soluble en lípidos, y es transportado por lipoproteínas, protegiéndolas así contra daños oxidativos.

El probucol está relacionado químicamente con los aditivos para alimentos ampliamente usados, 2,[3]-ter-butil-4-hidroxianisol (BHA) y 2,6-di-ter-butil-4-metilfenol (BHT). Su nombre químico completo es 4,4'-(isopropilideneditio) bis (2,6-di-ter-butilfenol).

El probucol es usado principalmente para bajar los niveles de colesterol en suero en pacientes hipercolesterolémicos. El probucol es administrado comúnmente en forma de comprimidos disponibles bajo la marca Lorelco™. Desafortunadamente, el probucol es insoluble en agua, y por tanto no puede ser inyectado intravenosamente. De hecho, es difícil para las células absorber el probucol in vitro debido a su pobre miscibilidad en tampones y medios de cultivo celular. El probucol sólido es pobremente absorbido por la sangre, y es secretado en una forma sustancialmente sin cambios. Es más, la forma de comprimido de probucol es absorbida con tasas significativamente distintas y en distintas cantidades, por distintos pacientes. En un estudio (Heeg et al., Plasma Levels of Probucol in Man After Single and Repeated Oral Doses, La Nouvelle Presse Medicale, 9: 2990-2994 (1980)), se descubrió que los niveles pico de probucol en suero variaban tanto como un factor de 20 de paciente a paciente. En otro estudio, Kazuya et al. J. Lipid Res. 32; 197-204 (1991), se observó una incorporación de menos de 1 \mug de probucol /10^{6} células, cuando las células endoteliales eran incubadas durante 24 horas con probucol 50 \muM.

La U.S. Patent No 5,262,439 de Parthasarathy desvela análogos de probucol con solubilidad en agua incrementada, en los cuales uno o ambos de los grupos hidroxilo son reemplazados con grupos éster, que elevan la solubilidad del compuesto en el agua. En una forma de realización, el derivado es seleccionado del grupo constituido por un mono- o di- éster probucol de ácido succínico, ácido glutárico, ácido adípico, ácido sebérico, ácido sebácico, ácido azelaico, o ácido málico. En otra forma de realización, el derivado de probucol es un mono- o di- éster en el cual el éster contiene un grupo alquilo a alquenilo que contiene una funcionalidad seleccionada del grupo constituido por un grupo ácido carboxílico, grupo amino, sal de un grupo amino, grupos amida, y grupos aldehído. Fármaco, Ed. Sci., 1985, vol 40, p.833-844 y U.S. 5,262,439 referido a los mono éteres y mono ésteres de derivados de probucol, respectivamente.

Una serie de patentes francesas desvelan que ciertos derivados de probucol son agentes hipocolesterolémicos e hipolipémicos: FR 2168137 (ésteres bis 4-hidroxifeniltioalcano); FR 2140771 (ésteres tetralinil fenoxi alcanoico de probucol); FR 2140769 (derivados ácido benzofuriloxialcanoico de probucol); FR 2134810 (bis-(3-alquil-5-t-alquil-4-tiazol-5-carboxi)feniltio)alcanos; FR 2133024 (bis-(4-nicotinoiloxifeniltio)propanos; y FR 2130975 (bis(4-(fenoxialcanoiloxi)-feniltio)alcanos).

La U.S. Patent No. 5,155,250 de Parker et al. desvela que los 2,6-dialquil-4-sililfenoles son agentes antiateroescleróticos. Los mismos compuestos se desvelan como agentes reducidores del colesterol en suero en la PCT Publication No. WO 95/15760, publicada el 15 de Junio de 1995. La U.S. Patent No. 5,608,095 para Parker et al. desvela que los 4-silil-fenoles alquilados inhiben la peroxidación del LDL, reducen el colesterol en plasma, e inhiben la expresión de VCAM-1, y por tanto son útiles en el tratamiento de la ateroesclerosis.

Una serie de solicitudes de patentes europeas para Shionogi Seiyaku Kabushiki Kaisha, desvelan el uso de los tioéteres fenólicos para el tratamiento de la arteriosclerosis. La European Patent Application No. 348 203 desvela los tioéteres fenólicos como inhibidores de la desnaturalización del LDL y de la incorporación del LDL a los macrófagos. Los compuestos son útiles como agentes anti-arteriosclerosis. Los derivados ácido hidroxámico de estos compuestos son desvelados en la European Patent Application No. 405 788, y son útiles para el tratamiento de arteriosclerosis, úlcera, inflamación y alergia. Los carbamoil y ciano derivados de los tioéteres fenólicos son desvelados en la U.S. Patent No. 4,954,514 para Kita, et al.

La U.S. Patent No. 4,752,616 de Hall et al., desvela los ácidos ariltioalquilfenilcarboxílicos para el tratamiento de enfermedad trombótica. Los compuestos desvelados son útiles como inhibidores de la agregación de plaquetas, para el tratamiento de trombosis coronaria o cerebral, y para la inhibición de la broncoconstricción, entre otros.

Una serie de patentes para Adir et Compagnie desvelan a los ácidos y ésteres fenoxiisobutírico sustituidos, como útiles agentes antioxidantes e hipolipémicos. Esta serie incluye las U.S. Patent Nos. 5,206,247 y 5,627,205 para Regnier, et al. (las cuales corresponden a las European Patent Application No. 621 255) y la European Patent Application No. 763 527.

La WO97/15546 de Nippon Shinyaku Co. Ltd. desvela a los ácido carboxílico derivados para el tratamiento de esclerosis arterial, enfermedades cardiacas isquémicas, infarto cerebral, y restenosis post-PTCA.

La Dow Chemical Company es la beneficiaria de las patentes para las 2-(3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenil)tio carboxamidas hipolipidémicas. Por ejemplo, U.S. Patent Nos. 4,029,812, 4,076,841 y 4,078,084 para Wagner et al., desvelan que esos compuestos reducen los lípidos en el suero sanguíneo, especialmente los niveles de colesterol y triglicéridos.

Dado que la enfermedad cardiovascular es corrientemente la primera causa de muerte en los Estados Unidos, y el 90% de la enfermedad cardiovascular es diagnosticada presentemente como ateroesclerosis, existe una fuerte necesidad de identificar nuevos procedimientos y agentes farmacéuticos par su tratamiento. Es importante respecto a esta cuestión, la identificación y manipulación de los específicos compuestos biológicos oxidados, que actúan como reguladores selectivos de la expresión de mediadores del proceso inflamatorio, y en particular, VCAM-1. Un objetivo más general es identificar procedimientos selectivos de supresión de la expresión de genes sensibles a redox, o de activación de genes sensibles a redox que son suprimidos.

Es por lo tanto un objeto de la presente invención el proveer de nuevos compuestos y composiciones para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares e inflamatorias.

Es también otro objeto de la presente invención el proveer de nuevos compuestos y composiciones que sean útiles como inhibidores de la peroxidación del lípido LDL.

Es también otro objeto de la presente invención el proveer de nuevos compuestos y composiciones que sean útiles como agentes antiateroescleróticos.

Es también otro objeto de la presente invención el proveer de nuevos compuestos y composiciones que sean útiles como agentes reductores del lípido LDL.

Resumen de la invención

La presente invención proporciona un compuesto y composición para inhibir la expresión de VCAM-1, y por tanto puede ser usada en el tratamiento de una enfermedad mediada por VCAM-1, lo que incluye la administración del compuesto de la invención, o de una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, opcionalmente en un transportador farmacéuticamente aceptable.

Por consiguiente, la presente invención proporciona un compuesto con la siguiente fórmula:

1

o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

La invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva para el tratamiento, del compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

La invención también proporciona el uso del compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno inflamatorio, o una enfermedad cardiovascular, o un trastorno seleccionado del asma, dermatitis, esclerosis múltiple, psoriasis, artritis reumatoide, y artritis ósea, o un trastorno seleccionado de la ateroesclerosis, la restenosis post-angioplastia, enfermedad arterio coronaria, angina y enfermedad de arteria pequeña.

Descripción detallada de la invención

El término alquilo, tal como se lo usa aquí, a menos que se especifique de otro modo, se refiere a un hidrocarburo saturado, de cadena lineal, ramificada, o cíclica, primaria, secundaria o terciaria, de C_{1} a C_{10}, e incluye específicamente metilo, etilo, propilo, isopropilo, ciclopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, ciclopentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, isohexilo, ciclohexilo, ciclohexilmetilo, 3-metilpentilo, 2,2-dimetilbutilo, y 2,3-dimetilbutilo. El grupo alquilo puede ser sustituido opcionalmente con uno o más segmentos seleccionados de un grupo constituido por alquilo, halo, hidroxilo, carboxilo, acilo, aciloxi, amino, alquilamino, arilamino, alcoxi, ariloxi, nitro, ciano, ácido sulfónico, sulfato, ácido fosfónico, fosfato, o fosfonato, tanto sin proteger, como protegidos todo lo necesario, tal como saben los expertos en la materia, por ejemplo, tal como se enseña en Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991, incorporado por la presente como referencia.

El término alquilo inferior, tal como se usa aquí, y a menos que se especifique de otro modo, se refiere a una cadena lineal, ramificada, con C_{1} a C_{5}, o si es apropiado, a un grupo alquilo cíclico (por ejemplo, ciclopropilo).

Del mismo modo, el término alquileno se refiere a un radical hidrocarbildiilo saturado, con configuración de cadena lineal o ramificada, formado por entre uno y diez átomos de carbono. Incluidos en el alcance de este término están el metileno, 1,2-etano-diilo, 1,1-etano-diilo, 1,3-propano-diilo, 1,2-propano-diilo, 1,3-butano-diilo, 1,4-butano-diilo, y similares. El grupo alquileno puede ser sustituido opcionalmente con uno o más segmentos seleccionados del grupo constituido por alquilo, halo, hidroxilo, carboxilo, acilo, aciloxi, amino, alquilamino, arilamino, alcoxi, ariloxi, nitro, ciano, ácido sulfónico, sulfato, ácido fosfónico, fosfato, o fosfonato, tanto desprotegidos, como protegidos todo lo necesario que sea posible, tal como entienden los expertos en la materia, por ejemplo, tal como se enseña en Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991, incorporado por la presente como referencia.

El término "-(CH_{2})_{n}-" representa un radical hidrocarbildiilo saturado, con configuración de cadena lineal. El término "n" se define como del 1 al 10. El segmento "-(CH_{2})_{n}-" representa por tanto un enlace (p.e., cuando n=0), metileno, 1,2-etanodiil, o 1,3-propanodiil, etc.

El término arilo, tal como se lo usa aquí, y a menos que se especifique de otro modo, se refiere al fenil, bifenil, o naftil, y preferiblemente fenil. El término aralquil, tal como se lo usa aquí, y a menos que se indique de otro modo, se refiere a un grupo arilo similar al definido anteriormente, unido a la molécula mediante un grupo alquilo tal como el definido anteriormente. El término alcaril, tal como se lo usa aquí, y a menos que se especifique algo distinto, se refiere a un grupo alquilo tal como el definido anteriormente, unido a la molécula a través de un grupo arilo tal como el definido más arriba. En cada uno de esos grupos, el grupo alquilo puede ser sustituido opcionalmente tal como se describe antes, y el grupo arilo puede ser sustituido opcionalmente con uno o más segmentos seleccionado del grupo constituido por alquilo, halo, hidroxilo, carboxilo, acilo, aciloxi, amino, alquilamino, arilamino, alcoxi, ariloxi, nitro, ciano, ácido sulfónico, sulfato, ácido fosfónico, fosfato, o fosfonato, tanto desprotegidos, como protegidos todo lo necesario, tal como entienden los expertos en la materia, por ejemplo, tal como se enseña en Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991. Incluidos específicamente en el rango del término arilo, están fenilo; naftilo; fenilmetilo; feniletilo; 3,4,5-trihidroxifenilo; 3,4,5-trimetoxifenilo; 3,4,5-trietoxifenilo; 4-clorofenilo; 4-metilfenilo; 3,5-di-ter-butil-4-hidroxifenilo; 4-fluorofenilo; 4-cloro-1-naftilo; 2-metil-1-naftilmetilo; 2-naftilmetilo; 4-clorofenilmetilo; 4-ter-butilfenilo; 4-ter-butilfenilmetilo; y similares.

El término "protegido", tal como se lo usa aquí, y a menos que se defina de otro modo, se refiere a un grupo que está añadido a un átomo de oxígeno, nitrógeno o fósforo, para prevenir una reacción posterior, o para otros propósitos. Aquellos entendidos en la materia de la síntesis orgánica, conocen una amplia variedad de grupos oxígeno y nitrógeno protectores.

El término halo, tal como se lo usa aquí, incluye cloro, bromo, yodo y flúor.

El término alcoxi, tal como se lo usa aquí, y a menos que se especifique de otra manera, se refiere a un segmento de con la estructura -O-alquilo, en donde alquilo está definido anteriormente.

El término acilo, tal como se lo usa aquí, se refiere a un grupo de fórmula C(O)R', en donde R' es un grupo alquilo, arilo, alcarilo, o aralquilo; o alquilo, arilo, aralquilo o alcarilo sustituidos, en donde esos grupos son los definidos anteriormente.

Tal como se usa aquí, el término ácido graso poliinsaturado (AGP) se refiere a un ácido graso (típicamente C_{8} a C_{24}) que tiene al menos dos enlaces alquenilo, e incluye, aunque no queda limitado a, los ácidos linoleico (C_{18}\Delta^{9,12}), linolénico (C_{18}\Delta^{6,9,12}) y araquidónico (C_{20}\Delta^{8,11,14}).

El término ácido graso poliinsaturado oxidado (ox-AGP) se refiere a un ácido graso insaturado en el cual al menos uno de los enlaces alquenilo se ha convertido en un hidroperóxido. Ejemplos no limitantes son el 13-HPODE y el 15-HPETE.

El término sales o complejos farmacéuticamente aceptables, se refiere a las sales o complejos que retienen la actividad biológica deseada de los compuestos de la presente invención, y que exhiben los mínimos efectos toxicológicos indeseables. Ejemplos no limitantes de estas sales son: (a) sales de adición a ácidos, formadas con ácidos inorgánicos (por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico, y similares), y sales formadas con ácidos orgánicos tales como el ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzoico, ácido tánico, ácido pamoico, ácido algínico, ácido poliglutámico, ácido naftalensulfónico, ácido naftalendisulfónico, y ácido poligalacturónico; (b) sales de adición a bases, formadas con cationes metálicos tales como el zinc, calcio, bismuto, bario, magnesio, aluminio, cobre, cobalto, niquel, cadmio, sodio, potasio, y similares, o con un catión formado a partir del amoníaco, N,N-dibenciletilendiamina, D-glucosamina, tetraetilamonio, o etilendiamina; (c) combinaciones de (a) y (b); p.e. una sal de tanato de zinc, o similares. También están incluidos en esta definición las sales cuaternarias aceptables farmacéuticamente conocidas por los expertos en la materia, las cuales incluyen específicamente las sale de amonio de fórmula -NR^{+}A^{-}, en donde R es un alquilo, un alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, alquil-COOH, alquil-COOalquilo, aquil-COOarilo, heteroarilo o heteroarilo sustituido; y donde A es un contra-ión, incluyendo cloruro, bromuro, yoduro, -O-alquilo, toluenosulfonato, metilsulfonato, sulfonato, fosfato, o carboxilato (tal como benzoato, succinato, acetato, glicolato, maleato, malato, citrato, tartrato, ascorbato, benzoato, cinamato, mandelato, bencilato, y difenilacetato).

Las enfermedades mediadas por la VCAM-1 incluyen, aunque no están limitadas a, ateroesclerosis, restenosis post-angioplastia, enfermedad arterio coronaria, angina, enfermedad de pequeñas arterias, y otras enfermedades cardiovasculares, además de enfermedades inflamatorias no cardiovasculares, tales como artritis reumatoide, oesteoartritis, asma, dermatitis, esclerosis múltiple, y psoriasis.

El compuesto de la invención puede ser preparado por procedimientos y técnicas conocidas, o por modificaciones rutinarias de los mismos. En el Esquema A se dispone un esquema sintético general para la preparación de compuestos de la invención, en donde todos los sustituyentes, a menos que se indique lo contrario, son definidos previamente.

Esquema A

Una cantidad de probucol (disponible comercialmente en Sigma Chemicals) en una solución 0,1 M de tetrahidrofurano, es tratada con 2 equivalentes de hidruro sódico, y removido a temperatura ambiente, durante 30 minutos. A la mezcla resultante de la reacción, se le añaden 3 equivalentes de un bromuro, o yoduro, de alquilo primario, y la reacción se remueve a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción es apagada con HCl acuoso 1 N, y diluida con etil acetato. La capa acuosa es extraída, y la capa de etil acetato es lavada con agua, y después con una solución acuosa saturada de cloruro sódico. La solución de etil acetato es secada sobre sulfato de magnesio, filtrada por gravedad o vacío, y después concentrada. El producto es purificado mediante cromatografía de gel de sílice.

Un procedimiento alternativo para la preparación del compuesto de la invención es el tratamiento del probucol con un alcohol primario, de acuerdo con el procedimiento de Mitsunobu (Synthesis, 1981, 1).

Un segundo procedimiento alternativo para la preparación del compuesto de la invención es el tratamiento del probucol con un bromuro, o yoduro, primario de alquilo en acetonitrilo, en presencia de fluoruro potásico absorbido en alúmina, de acuerdo con el procedimiento de Ando et al. (Bull. Chem. Soc. Jpn., 55, 1982, 2504-2507).

Los materiales de iniciación usados en los procedimientos sintéticos generales subrayados en el esquema de reacción anterior, están fácilmente disponibles o pueden ser preparados de acuerdo con procedimientos y técnicas estándar. El probucol está fácilmente disponible en Sigma Chemicals.

El siguiente ejemplo presenta una síntesis típica, tal como se la describe en el Esquema A. Se comprende que este ejemplo es solamente ilustrativo, y no se intenta que limite de ningún modo el alcance de la presente invención.

Ejemplo 1 Ácido acético, [4-[[1-[[3,5-bis(1,1-dimetiletil)-4-hidroxifenil]tio]-1-metiletil]tio]2,6-bis(1,1-dimetiletil)fenoxi] Descripción de la reacción

A la dimetilformamida (1,5 mL) se le añadió probucol (0,5 mg, 0,967 mmol), y etil-2-yodo acetato (0,31 g, 1,45 mmol), y 40% de fluoruro de potasio en alúmina (0,7 g), y la reacción se removió durante 24 horas. La mezcla resultante de la reacción se diluyó con éter (25 mL), y se filtró y lavó con agua (2X5 mL). La capa de éter se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y concentró. El aceite resultante se purificó mediante cromatografía de gel de sílice radial, por elución con éter/hexanos 5:95, dando lugar a 160 mg del etil éster del producto. El etil éster se disolvió en THF:H_{2}O:MeOH (4:1:1) (4 mL) y se añadió LiOH-H_{2}O (50 mg), y se removió la reacción durante 1 hora. Se neutralizó la reacción con HCl 1 N y se extrajo con éter (2X10 mL), se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y concentró. Se realizó una cromatografía sobre gel de sílice, con elución de éter/hexanos 50:50, dando 90 mg del producto. ^{1}H NMR (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta 7,55 (s, 2H), 7,40 (s, 2H), 5,35 (s, 1H), 4,40 (s, 2H), 1,43 (s, 6H), 1,41 (s, 9H), 1,39 (s, 9H).

Los siguientes ejemplos ilustran el uso del compuesto de acuerdo con la presente invención. Estos ejemplos son solamente ilustrativos, y no se intenta que limiten en ningún modo el alcance de la invención.

Ejemplo 2 Determinación de protocolo de pantalla de lípido e IC_{50}

Preparación de HEPG2

La célula HEPG2 fue iniciada en 10 ml de MEM, FBS 10%, piruvato sódico 1 mM. Las células se incubaron en una incubadora de cultivo tisular. Las células se distribuyeron en placas de 4X96 pocillos, con MEM, 10% FBS, piruvato sódico 1 mM, y se les permitió crecer hasta el 50% de confluencia, y entonces se las extrajo.

Día 1 Tratamiento

Las células fueron tratadas con la concentración deseada de compuestos, en 100 \mul DMEM, 1% RSA durante 24 horas. Los compuestos se disuelven en DMSO. Para IC_{50}, el rango de la concentración es 10 uM - 40 uM, con cada concentración siendo realizada por triplicado.

El mismo día, la placa NunclmmunoSorb de 4X96 pocillos se recubrió con 100 \mul de 1D1 ApoB monoclonal anti-humano, de ratón (dilución 1:1000 en 1XPBS, pH 7.4). La cobertura reposó toda la noche.

Día 2 ApoB ELISA

La placa recubierta es lavada 3 veces con 1XPBS, pH 7.4, Tween 20 -0,05%. Se añaden a los pocillos seleccionados, 100 \mul de los estándares. Los estándares ApoB son preparados a 6,25, 3,12, 1,56, 0,78, 0,39 ng, y cada concentración se hace por triplicado.

Para muestras:

Se añaden 90 \mul de 1XPBS, pH 7.4, -0,05% Tween 20 a cada pocillo correspondiente a la muestra. Se transfieren 10 \mul del medio, de las placas HEPG2 tratadas a la placa ApoB ELISA. La placa es incubada a temperatura ambiente durante 2 horas, meciéndose suavemente.

Se lava 3X la placa recubierta, con 1XPBS, pH 7.4, Tween 20 -0,05%. Se añaden 100 \mul de ApoB policlonal anti-humano, de oveja, de Boehringer Mannheim. (Dilución 1:2000 en 1XPBS, pH 7.4, Tween 20 -0,05%) de Boheringer Mannheim. Se incuba a temperatura ambiente durante 1 hora, meciéndose suavemente. Se lava 3X la placa recubierta, con 1XPBS, pH 7.4, Tween 20 -0,05%. Se añaden 100 \mul de IgG anti-oveja, de conejo, (Dilución 1:2000 en 1XPBS, pH 7.4, Tween 20 -0,05%). Se incuba a temperatura ambiente durante 1 hora, meciéndose suavemente. Se lava 3X la placa recubierta, con 1XPBS, pH 7.4, Tween 20 -0,05%. Se añaden 100 \mul de sustrato. (10 ml de agua destilada, 100 \mul de TMB (10 mg/ml), y 1 \mul de peróxido de hidrógeno). Se permite que emerja el color, y se detiene la reacción con 25 ul de ácido sulfúrico 8 N. Se leen los pocillos con un MicroPlate Reader @ 450 nM. La gráfica de acumulación de ApoB en medio, como un porcentaje de control para cada muestra y su concentración. Se obtiene una determinación de IC_{50} a partir de la gráfica.

Ejemplo 3

Ensayo VCAM-1

Repartiendo las células

De dos a cuatro placas P150 confluentes son tripsinizadas, y se transfieren las células a un tubo cónico centrífugo de 50 mL. Las células son sedimentadas, resuspendidas, y contadas usando el procedimiento de exclusión de azul de tripan.

Las células son resuspendidas a una concentración de 36.000 células/mL, y se coloca una alícuota de 1 mL por pocillo.

Las células se reparten en placas de cultivo tisular de 24 pocillos. las células en cada pocillo deberían ser confluentes aproximadamente al 90-95% al día siguiente. Las células no deberían ser más antiguas que en el pasaje 8.

Preparación de los compuestos

Compuestos solubles en agua

Los compuestos son monitorizados inicialmente a 50 \muM y 10 \muM. Se prepara en medio de cultivo un stock de solución 50 mM. El stock de solución se diluye a 5 mM y 1 mM. Cuando se añaden al pocillo (1 mL medio/pocillo), 10 \muL de la solución 5 mM, la concentración final será de 50 \muM. Añadiendo 10 \muL de la solución 1 mM al pocillo, dará una concentración final de 10 \muM.

Compuestos insolubles en agua

Los compuestos que no irán en la solución en el medio de cultivo, son resuspendidos en DMSO a una concentración de 25 mM. La solución stock se diluye entonces hasta la concentración final en el medio de cultivo. Se aspira el viejo medio, y se añade 1 mL del nuevo medio con el compuesto. Por ejemplo, si la concentración final es 50 \muM, se añaden 2 \muL del stock 25 mM, por mL de medio de cultivo. La solución 50 mM se diluye para concentraciones menores.

Añadiendo los compuestos

Los compuestos son añadidos a la placa (cada compuesto se realiza por duplicado). Una placa se hace para expresión VCAM y una placa se hace para expresión ICAM.

Inmediatamente después de añadir los compuestos, se añade TNF a cada pocillo. Usualmente se añaden 100 unidades/mL de TNF a cada pocillo. Puesto que cada lote de TNF varía en el número de unidades, cada nuevo lote es titrado para determinar la concentración óptima. Por tanto, esta concentración variará. Si se usan 100 unidades/mL, se diluye el TNF a 10 unidades/\muL y se añaden 10 \muL a cada pocillo.

Las placas son incubadas a 37ºC, CO_{2} 5% durante toda la noche (aproximadamente 16 horas). Al día siguiente, se chequean las placas bajo el microscopio para ver si hay algún signo visual de toxicidad. Se registra cualquier célula muerta, restos, o cambios morfológicos, además de compuestos insolubles (partículas o turbidez).

Ejemplo 4

Ensayo ELISA

Para evaluar MCP-1, se salva el medio (500 \muL) y se congela a -70ºC. Se lavan las células una vez con aproximadamente 1 ml/pocillo de solución salina balanceada de Hanks (HBSS) o de PBS. Se vacía suavemente la solución lavada, y entonces se dan golpecitos con la placa sobre toallas de papel. Se añaden, o 250 \muL/pocillo de HBSS +5% FCSS a la tabla (sin pocillos con anticuerpos primarios), o 250 \muL/pocillo de anticuerpo primario diluido en HBSS +5% FCS. Se incuba durante 30 minutos, a 37ºC. Se lavan los pocillos dos veces con 0,5 mL/pocillo de HBSS o PBS, y se golpean suavemente las placas sobre toallas de papel, tras el último lavado. Se añaden 250 \muL/pocillo de HRP-anticuerpo secundario conjugado, diluido en HBSS +5% FCS, en cada pocillo, incluyendo los pocillos vacíos (sin anticuerpo primario). Se incuba a 37ºC, durante 30 minutos. Se lavan los pocillos cuatro veces con 0,5 mL/pocillo de HBSS o PBS, y se golpea suavemente con las placas sobre toallas de papel tras el último lavado. Se añaden 250 \muL/pocillo de solución sustrato. Se incuba a temperatura ambiente, en la oscuridad, hasta que haya un adecuado desarrollo del color (azul). Nótese que la longitud del tiempo de incubación fue preparada (típicamente entre 15 y 30 minutos). Se añaden 75 \muL/pocillo de solución de detención (ácido sulfúrico 8 N), y se lee A450 nm.

Anticuerpos y soluciones

1. La solución sustrato se hace inmediatamente antes de su uso, y contiene:

agua	10 mL
30% peróxido de hidrógeno	1 \muL
TMB (3,3',5,5'-tetrametilbencidina)	100 \muL

La solución stock de TMB: a 10 mg de TMB se le añade 1 mL de acetona. Se almacena a 4ºC, protegida de la luz.

2. Ab VCAM-1: stock 0,1 \mug/\muL

\hskip1cm

concentración final 0,25 \mug/mL

Se mezclan 25 \muL de stock de VCAM-1 (Southern Biotechnology) y 10 mL de HBSS +5% FCS.

3. Ab ICAM-1: stock 0,1 \mug/\muL

\hskip1cm

concentración final 0,25 \mug/mL

Se mezclan 25 \muL de stock ICAM-1 (Southern Biotechnology) y 10 mL de HBSS +5% FCS.

4. Ab secundario: IgG de cabra, anti-ratón, HRP-conjugado, diluido 1:500

Se mezclan 20 \muL de stock (Southern Biotechnology) y 10 mL de HBSS +5% FCS.

El grado de inhibición del compuesto de la invención, fue determinado mediante los ensayos descritos en los Ejemplos 2 a 4. Los resultados se proporcionan en la Tabla 1.

TABLA 1

Compuesto	IC_{50} o % de inhibición a	LD_{50}	IC_{50} o % de inhibición a
	[\muM] de VCAM-1		[\muM] ApoB/HepG2
\begin{minipage}[t]{40mm} Ácido acético, [4-[[1-[[3,5-bis(1,1-dimetiletil)-4-hidroxifenil]tio]-1-metiletil]tio]2,6-bis(1,1-dimetiletil)fenoxi]-\end{minipage}	10	50	NE

Composiciones farmacéuticas

Los mamíferos, y específicamente los humanos, que sufren cualquiera de las condiciones descritas anteriormente, pueden ser tratados mediante la administración tópica, sistémica, o transdermal, de una composición que contiene una cantidad efectiva del compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, opcionalmente en un transportador o diluyente farmacéuticamente aceptable.

La composición es administrada de manera subcutánea, intravenosamente, intraperitonealmente, intramuscularmente, parenteralmente, oralmente, submucosamente, por inhalación, transdermalmente, usando un parche de liberación lenta, o tópicamente, en una rango de dosis efectiva para tratar la condición objetivo. Una dosis efectiva puede ser fácilmente determinada mediante el uso de técnicas convencionales, y observando los resultados obtenidos bajo circunstancias análogas. Al determinar la dosis efectiva, se consideran algunos factores incluyendo, aunque no quedando limitados a: la especie del paciente; su tamaño, edad, y estado de salud general; le enfermedad específica que sufre; el grado de implicación o la severidad de la enfermedad; la respuesta del paciente individual; el compuesto administrado en particular; el modo de administración; las características de bio-disponibilidad de la preparación administrada; el régimen de dosis seleccionado; y el uso de medicación concomitante. Las dosis sistémicas típicas para todas las condiciones descritas en esta patente, son aquellas que van de un rango de 0,1 mg/kg a 500 mg/kg de peso corporal por día, como una dosis diaria simple, o como dosis diarias divididas. Las dosis preferidas para las condiciones descritas van de los 5 a los 1500 mg por día. Una dosis preferida en particular para las condiciones deseadas va de los 25 a los 750 mg por día. Las dosis típicas para la aplicación tópica son aquellas que van de los 0,001 al 100% por peso del compuesto activo.

El compuesto es administrado durante un período de tiempo suficiente como para aliviar los síntomas indeseados, y los signos clínicos asociados con la condición que está siendo tratada.

El compuesto activo está incluido en el transportador farmacéutica mente aceptable, o en el diluyente, en una cantidad suficiente como para liberar en un paciente una cantidad terapéutica del compuesto in vivo, en ausencia de serios efectos tóxicos.

La concentración del compuesto activo en la composición del fármaco, dependerá de las tasas de absorción, desactivación, y excreción del fármaco, además de otros factores conocidos por los expertos en la materia. Ha de ser notado que los valores de las dosis variarán con la severidad de la condición a ser aliviada. Ha de ser bien comprendido que para cualquier sujeto particular, los regímenes de dosis específicos deberían estar ajustados sobre el tiempo, de acuerdo con la necesidad del individuo, y con el juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y que el conjunto de rangos de dosis establecidos aquí, son solo ejemplares, y no se intenta que limiten el alcance o la práctica de la composición reivindicada. El ingrediente activo puede ser administrado de una vez, o puede ser dividido en dosis menores, para ser administradas durante intervalos variables de tiempo.

Un modo preferido de administración del compuesto activo, para la liberación sistémica, es el modo oral. Las composiciones orales incluirán generalmente un diluyente inerte, o un transportador comestible. Pueden estar encerrados en cápsulas de gelatina, o comprimidos en pastillas. Para el propósito de la administración terapéutica oral, el compuesto activo puede ser incorporado con excipientes, y utilizado en forma de comprimidos, pastillas, o cápsulas. Se pueden incorporar, como parte de la composición, a agentes aglomerantes farmacéuticamente compatibles, y/o materiales adyuvantes.

Los comprimidos, píldoras, cápsulas, pastillas, y similares, pueden contener cualquiera de los siguiente ingredientes, o compuestos de naturaleza similar: un aglomerante tal como la celulosa microcristalina, tragacanto gomoso o gelatina; un excipiente como el almidón o la lactosa, un agente desintegrante como el ácido algínico, el Primogel, o almidón de maíz; un lubricante como el estearato de magnesio o Sterotes; un deslizante como dióxido coloidal de silicona; un agente endulzador como la sucrosa o la sacarina; o un agente para dar sabor, como la menta, el metil salicilato, o sabor de naranja.

Cuando la forma de unidad de dosis es una cápsula, esta puede contener, en adición al material explicado antes, un transportador líquido tal como un aceite graso. Además, las formas de unidad de dosis pueden contener otros materiales que modifiquen la forma física de la unidad de dosis, por ejemplo, coberturas de azúcar, laca, u otros agentes entéricos.

El compuesto, o sus sales, pueden ser administrados como un componente de un elixir, suspensión, jarabe, oblea, goma de mascar, o similares. Un jarabe puede contener, además de los compuestos activos, sacarosa como un agente endulzante, y ciertos preservadores, tintes y colorantes y agentes para dar sabor.

El compuesto puede ser mezclado también con otros materiales activos que no debiliten la acción deseada, o con materiales que complementen la acción deseada. Los compuestos activos pueden ser administrados junto con otros medicamentos usados en el tratamiento de enfermedad cardiovascular, incluyendo agentes reductores de los lípidos, tal como el probucol y el ácido nicotínico; inhibidores de la agregación de plaquetas, como la aspirina; agentes anti-trombóticos, como la coumadina; bloqueadores de los canales de calcio, como el varapamil, diltiazem, nifedipina; inhibidores de la enzima convertidora de la angiotensina (ECA), como el captopril y enalopril, y \beta-bloqueadores como el propanalol, terbutalol, y labetalol. Los compuestos pueden ser administrados también en combinación con anti-inflamatorios no esteroideos, como el ibuprofeno, indometacina, fenoprofeno, ácido mefenámico, ácido flufenámico, sulindac. El compuesto puede ser administrado también con corticoesteroides.

Las soluciones o suspensiones usadas para la aplicación parenteral, intradermal, subcutánea, o tópica, pueden incluir los siguientes componentes: un diluyente estéril, como agua para inyección, solución salina, aceites fijados, polietilen-glicoles, glicerina, propilen-glicol, u otros solventes sintéticos; agentes antibacterianos, como en alcohol de bencilo o metil parabienes; antioxidantes como el ácido ascórbico o el bisulfito sódico; agentes quelantes, como el ácido etilendiaminatetraacético; tampones, como acetatos, citratos, o fosfatos, y agentes para el ajuste de la tonicidad, como cloruro sódico o dextrosa. El pH puede ajustarse con ácidos o bases, como el ácido clorhídrico o el hidróxido sódico. La preparación parenteral puede ser encerrada en ampollas, jeringas desechables, o frascos de múltiples dosis, hechos de cristal o plástico.

Si se administra intravenosamente, los transportadores preferidos son suero salino fisiológico, agua bacteriostática, Cremophor EL^{TM} (BASF, Parsippany, NJ) o tampón fosfato salino (PBS).

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En una forma de realización preferida, los compuestos activos son preparados con transportadores que protegerán al compuesto contra la rápida eliminación del cuerpo, tal como una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes y sistemas microencapsulados de liberación. Pueden usarse polímeros biocompatibles y biodegradables, como el acetato de etilenvinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, y ácido poliláctico. Los procedimientos de preparación de estas formulaciones, serán evidentes para aquellos expertos en la materia. Los materiales también pueden ser obtenidos comercialmente desde Alza Corporation y Nova Pharmaceuticals, Inc. Las suspensiones liposomales (incluyendo liposomas marcados para células infectadas con anticuerpos monoclonales para antígenos virales) son preferidas también como transportadores farmacéuticamente aceptables. Estas pueden ser preparadas de acuerdo con los procedimientos conocidos por los expertos en la materia, por ejemplo, tal como se describe en la U.S. Patent No. 4,522,811. Por ejemplo, las formulaciones de liposomas pueden ser preparadas mediante la disolución de lípidos apropiados (tal como es la estearoil fosfatidil etanolamina, la estearoil fosfatidil colina, la aracadoil fosfatidil colina, y el colesterol), en un solvente inorgánico, que es entonces evaporado, dejando detrás una fina capa de lípidos secos, sobre la superficie del contenedor. El contenedor es entonces revuelto a mano, para liberar material de los costados del contenedor, y para dispersar los agregados de lípidos, formando de ese modo la suspensión liposomal.

Vehículos o transportadores apropiados para la aplicación tópica, pueden ser preparados mediante técnicas convencionales, como lociones, suspensiones, ungüentos, cremas, geles, tinturas, sprays, polvos, pastas, parches de liberación transdermal lenta, supositorios para aplicación en las mucosas rectal, vaginal, nasal u oral. Además de los otros materiales listados anteriormente para la administración sistémica, los agentes espesantes, emolientes, y estabilizantes, pueden ser usados para preparar composiciones tópicas. Ejemplos de agentes espesantes incluyen el petrolatum, la cera de abejas, la goma xantana, o polietileno; humectantes como el sorbitol; emolientes como un aceite mineral, lanolina y sus derivados, o el escualeno.

Claims (18)

1. Un compuesto con la siguiente fórmula:

2

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva para el tratamiento, del compuesto de la Reivindicación 1.

3. La composición de la Reivindicación 2, apropiada para administración oral.

4. La composición de la Reivindicación 2, apropiada para administración tópica o transdermal.

5. La composición de la Reivindicación 2, apropiada para administración intravenosa, subcutánea, intraperitoneal, o intramuscular.

6. La composición de la Reivindicación 2, apropiada para administración submucosal.

7. La composición de la Reivindicación 2, apropiada para administración mediante inhalación.

8. Un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 1, para uso en terapia.

9. El uso de un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 1, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno inflamatorio.

10. El uso de un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 1, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad cardiovascular.

11. El uso de un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 1, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno seleccionado del asma, dermatitis, esclerosis múltiple, psoriasis, artritis reumatoide u osteoartritis.

12. El uso de un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 1, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la artritis reumatoide.

13. El uso de un compuesto de acuerdo con la Reivindicación 1, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno seleccionado de la ateriosclerosis, restenosis post-angioplastia, enfermedad arterio coronaria, angina, enfermedad de arterias pequeñas.

14. Un compuesto de la Reivindicación 1 en conjunción con otro fármaco anti-inflamatorio para el uso en terapia.

15. Un compuesto de la Reivindicación 1 en conjunción con un fármaco anti-inflamatorio no-esteroideo, seleccionado del ibuprofeno, indometacina, fenoprofeno, ácido mefenámico, ácido flufenámico, y sulindac, para el uso en terapia.

16. Un compuesto de la Reivindicación 1, en conjunción con un corticoesteroide para su uso en terapia.

17. Un compuesto de la Reivindicación 1, en conjunción con un fármaco cardiovascular para su uso en terapia.

18. Un compuesto de la Reivindicación 1, en conjunción con un fármaco cardiovascular, seleccionado de agentes reductores de lípidos, inhibidores de la agregación de plaquetas, agentes anti-trombóticos, bloqueadores de los canales de calcio, inhibidores de la enzima convertidora de la angiotensina (ECA), y \beta-bloqueadores, para su uso en terapia.