ES2238463T3 - Hidroxiimino-fluorenos heterociclicos y uso para inhibir proteina-quinasas. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de la fórmula I: en donde: R5 y R6 son cada uno independientemente hidrógeno, halo, o un grupo alquilo C1-C8, alcoxi C1-C8, arilo, heteroarilo, aciIo, tio-alquilo C1-C12, sulfonilo, o sulfoxilo sustituidos o no sustituidos; y X es C-Y ó N, donde Y es hidrógeno, halo, NH2, NO2, o un grupo alquilo C1-C12, cicloalquilo C3-C12, heterocicloalquilo, alcoxi C1-C12, alquenilo C2-C12, arilo, heteroarilo, ariloxi, alquil C1-C12-amino, dialquil C1-C12- amino, tio-alquilo C1-C12, acilo, sulfonilo, sulfóxido, o tioarilo, sustituidos o no sustituidos. o un solvato de dicho compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto.

Description

Hidroxiimino-fluorenos heterocíclicos y uso para inhibir proteína-quinasas.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a compuestos con núcleos de hidroxiimino-fluoreno heterocíclicos que median y/o inhiben la actividad de ciertas proteína-quinasas, y a composiciones farmacéuticas que contienen dichos compuestos. La invención también se refiere al uso terapéutico o profiláctico de dichos compuestos y composiciones, y a métodos de tratar cáncer, así como otros estados morbosos asociados con angiogénesis y/o proliferación celular no deseadas, por administración de cantidades eficaces de dichos compuestos.

Fundamento de la invención

Las proteína-quinasas son una familia de enzimas que catalizan la fosforilación del grupo hidroxilo de residuos específicos de tirosina, serina, o treonina en proteínas. Típicamente, dicha fosforilación altera de modo acusado la función de la proteína, y por consiguiente las proteína-quinasas son de suma importancia en la regulación de una amplia variedad de procesos celulares, incluyendo el metabolismo, la proliferación celular, la diferenciación celular, y la supervivencia de las células. De las numerosas y diferentes funciones celulares en las que se sabe que se requiere la actividad de las proteína-quinasas, algunos procesos representan dianas atractivas para intervención terapéutica para ciertos estados morbosos. Dos ejemplos son el control del ciclo celular y la angiogénesis, en los que las proteína-quinasas juegan un papel crucial; estos procesos son esenciales para el crecimiento de tumores sólidos, así como para otras enfermedades.

La proliferación celular incontrolada es el aspecto clave del cáncer. La proliferación celular en respuesta a diversos estímulos se manifiesta por una des-regulación del ciclo de división celular, que es el proceso por el cual se multiplican y dividen las células. Los tumores celulares típicamente tienen dañado los genes que directa o indirectamente regulan la progresión a través del ciclo de división celular.

Las quinasas dependientes de ciclina (abreviadamente CDK, por la expresión inglesa Cyclin-dependent kinases) son proteína-quinasas de serina-treonina que desempeñan un papel crítico en regular las transiciones entre diferentes fases del ciclo celular, tal como la progresión desde un fase quiescente en G_{1} (el tiempo muerto entre la mitosis y el comienzo de la replicación del DNA para una nueva ronda de división celular) hasta la fase S (el periodo de síntesis activa de DNA), o la progresión desde la fase G_{2} a la M, en la cual ocurre la mitosis activa y la división celular. Véanse, por ejemplo, los artículos compilados en Science, 274, 1643-1677 (1996); y Ann. Rev. Cell Dev. Biol., 13, 261-291 (1997). Los complejos CDK se formar por asociación de una subunidad de ciclina reguladora (por ejemplo, ciclina A, B1, B2, D1, D2, D3, y E) y una subunidad de quinasa catalítica (por ejemplo, CDC2 (CDK1), CDK2, CDK4, CDK5, y CDK6). Como el nombre implica, las CDK exhiben una dependencia absoluta de la subunidad de ciclina para fosforilar sus sustratos dianas, y diferentes pares quinasa/ciclina funcionan regulando la progresión a través de fases específicas del ciclo celular.

La progresión desde la fase G_{1} a la S, conseguida por la acción de CDK4/ciclina D y CDK2/ciclina E, está sometida a una variedad de mecanismos reguladores del crecimiento, tanto negativos como positivos. Estímulos, tales como mitógenos, causan un aumento de la síntesis de ciclina D1 y por tanto aumentan la CDK4 funcional. En contraste, el crecimiento celular puede regularse en disminución en respuesta a daño del DNA o estímulos negativos para el crecimiento, por la inducción de proteínas inhibidoras endógenas. Estos inhibidores de proteínas de origen natural incluyen p21^{WAF1/CI1I}, p27^{KIP1}, y la familia p16^{INK4}, las ultimas de las cuales inhibe exclusivamente la CDK4 (véase Harper, Cancer Surv., 29, 91-107 (1997). Las aberraciones en este sistema de control, particularmente las que afectan a la función de CDK4 y CDK2, han estado implicadas en el avance de las células al estado altamente proliferativo característico de los procesos malignos, particularmente melanomas familiares, carcinomas esofágicos, y cánceres de páncreas. Véanse, por ejemplo, Hall et al., Adv. Cancer Res., 68, 67-108 (1996); Kamb, Trends in Genetics, 11, 136-140 (1995); Kamb et al., Science, 264, 436-440 (1994).

La sobre-expresión de la ciclina D1 está asociada a carcinomas esofágicos, de pecho, y de células escamosas (véase, por ejemplo, DelSal et al., Critical Rev. Oncogenesis, 71, 127-142 (1996)). Los genes que codifican los inhibidores específicos de CDK4 de la familia p16 frecuentemente tiene deleciones y mutaciones en melanoma familiar, gliomas, leucemias, sarcomas, y carcinomas de páncreas, de células de pulmón no pequeñas, y de cabeza y cuello (véase Nobori et al., Nature, 368, 753-756 (1994)). La amplificación y/o sobre-expresión de ciclina E también se ha observado en una amplia variedad de tumores sólidos, y altas concentraciones (niveles) de ciclina E se ha correlacionado con una prognosis defectuosa. Además, los niveles del inhibidor p27 de CDK, que actúa tanto como sustrato como inhibidor de CDK2/ciclina E, son anormalmente bajos en cánceres de pecho, colon, y próstata, y los niveles de expresión de p27 están inversamente correlacionados con la fase de la enfermedad (véase Loda et al., Nature Medicine, 3, 231-234 (1997)). Recientemente hay pruebas de que la CDK4/ciclina D podría secuestrar la p27, como se describe en la revisión de Sherr et al., Genes Dev., 13, 1501-1512 (1999). Las proteínas p21 también parecen transmitir la señal supresora del tumor de p53 a las CDK (véase El-Deiry et al., Cell, 75, 817-825 (1993)); así, la mutación de p53 en aproximadamente 50% de todos los cánceres humanos pueden indirectamente dar como resultado la desregulación de la actividad de las CDK.

El uso de compuestos como agentes terapéuticos anti-proliferativos que inhiben la actividad proteína-quinasa es el objeto de varias patentes y publicaciones. Por ejemplo, la Publicación de patente Internacional WIPO Nº WO 97/45397 describe ciertas fluorenonas sustituidas con alquiloxiamino que controlan la actividad de la proteína-quinasa C (por ejemplo, la actividad de la quinasa CDC2) en mamíferos. La Publicación de patente Internacional WIPO Nº WO 99/21845 describe 4-aminotiazoles como inhibidores de las CDK. Derivados de isotiazol útiles como agentes anticáncer se describen en la Publicación de patente Internacional WIPO Nº WO 99/62890. La Patente de EE.UU. Nº 5.621.082 concedida a Xiong et al. describe derivados de ácidos nucleicos que codifican inhibidores de CDK6. Inhibidores peptídicos y peptidomiméticos, incluyendo antagonistas del sitio del sustrato, se describen en la publicación de la Patente Europea Nº 0666270A2 de Bandara et al., Nature Biotechnology, 15, 896-901 (1997), y Chen et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 96, 4325-4329 (1999). Aptámeros peptídicos se identifican en Cohen et al., Proc. Natl. Acad. Sci., U S. A., 95, 14272-14277 (1998). Se han identificado otras pequeñas moléculas como inhibidores de CDK (para recientes revisiones, véase Webster, Exp. Opin. Invest. Drugs, 7, 865-887 (1998), Stover et al., Current Opinion in Drug Discovery y Development, 2, 274-285 (1999), y Rosania et al., Exp. Opin. Ther. Patents, 10, 215-230 (2000)). La flavona flavopiridol, presenta una modesta selectividad para la inhibición de las CDK sobre otras quinasas, pero inhibe equipotentemente CDK4, CDK2, y CDK1, con valores de la CI_{50} en el intervalo de 0,1-0,3 \muM. El flavopiridol está actualmente en ensayos clínicos en fase II como quimioterapia oncológica (Stadler et al., J. Clin. Oncol., 18, 371-375 (2000) y Sedlacek et al., Int. J. Oncol., 9, 1143-1168 (1996)). Los análogos de flavopiridol son el objeto de otras publicaciones, por ejemplo, la Patente de EE.UU. Nº 5.733.920 concedida a Mansuri et al. (Publicación de patente Internacional Nº WO 97/16447) y WIPO Publicación de patente Internacional N^{os} WO 97/42949, y WO 98/17662. Los resultados de inhibición de las CDK con derivados a base de purinas se describen en Schow et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 7, 2697-2702 (1997); Grant et al., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res,. 39, Abst. 1207 (1998); Legraverend et al., Bioorg. Med. Ciem. Lett., 8, 793-798 (1998); Legraverend et al., J. Med. Chem., 43, 1282-1292 (2000); Gray et al., Science, 281, 533-538 (1998); Chang et al., Chemistry & Biology, 6, 361-375 (1999); y WIPO Publicación de patente Internacional N^{os} WO 99/02162, WO 99/43675, y WO 99/43676.

Además, las siguientes publicaciones describen ciertas pirimidinas que inhiben las quinasas dependientes de ciclina y otras quinasas mediadas por factores de crecimiento: publicaciones de patentes internacionales WIPO WO 00/12485, WO 00/12486, y WO 98/33798; Ruetz et al., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res., 39, Abst. 3796 (1998); y Meyer et al., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res., 39, Abst. 3794 (1998). Bencenosulfonamidas que bloquean células en la fase G_{1} se encuentran en desarrollo por Eisai, véase Owa et al., J. Med. Chem., 42, 3789-3799 (1999). Un inhibidor de CDK constituido por un oxiindol está en curso de desarrollo por Glaxo-Wellcome, véase Luzzio et al., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res., Abst. 4102 (1999) y la publicación de patente internacional WIPO WO 99/15500. La paulonas fueron encontradas en colaboración con el NCI (Instituto Nacional del Cáncer de EE.UU), Schultz et al., J. Med. Chem., 2909-2019 (1999) y Kunick et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 10, 567-569 (2000). Se describen indenopirazoles en las publicaciones de patentes internacionales N^{os}. WO 99/17769 y WO 99/54308. Pirazolo-piridinas se describen en la publicación de patente internacional Nº WO 99/30710. También son conocidos los derivados de fluoreno mostrados más adelantes en los ejemplos comparativos 1 y 2; véase también Pan et al., Chem. & Ind., 240-241 (1969), quienes describen el compuesto del Ejemplo de comparación 2(a) y otra oximas de 9-oxofluoreno:

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Sin embargo, sigue habiendo necesidad de otros compuestos de pequeño peso molecular que puedan ser sintetizados fácilmente y que sean potentes inhibidores de una o más CDK o complejos de CDK/ciclina. Véase Gray et al., Curr. Med. Chem., 6, 859-875 (1999) y Sielecki et al., J. Med. Chem., 43, 1-18 (2000). Debido a que la CDK4 puede servir como activador general de la división celular en la mayoría de las células, y debido a que los complejos de CDK4/ciclina D y CDK2/ciclina E gobiernan la fase G1 temprana del ciclo celular, existe la necesidad de inhibidores eficaces y específicos de CDK4 y/o CDK2 para tratar uno o más tipos de tumores. Además, las importantes actividades de las quinasas ciclina E/CDK2 y ciclina B/CDK1 en la fase G_{1}/S y en las transiciones G_{2}/M, respectivamente ofrecen dianas adicionales para intervención terapéutica en suprimir la progresión del ciclo celular desregulado en el cáncer.

Otra proteína-quinasa, la CHK-1, desempeña un papel importante como punto de verificación de la progresión del ciclo celular. Los puntos de verificación son sistemas de control que coordinan la progresión del ciclo celular influyendo en la formación, activación y subsiguiente inactivación de las quinasas dependientes de ciclina. Los puntos de verificación impiden la progresión del ciclo celular en momentos no apropiados, manteniendo el equilibrio metabólico de las células, mientras que las células están paradas, y en algunos casos pueden inducir apoptosis (muerte programada de las células) cuando no se hayan cumplido los requisitos del punto de verificación. Véase, por ejemplo, Chen et al., Cell, 100, 681-692 (2000); O'Connor, Cancer Surveys, 29, 151-182 (1997); Nurse, Cell, 91, 865-867 (1997); Hartwell et al., Science, 266, 1821-1828 (1994); y Hartwell et al., Science, 246, 629-634 (1989).

Una serie de puntos de la verificación monitoriza la integridad del genoma y, detectando el daño del DNA, estos "puntos de verificación del daño del DNA" bloquean la progresión del ciclo celular en las fases G_{1} y G_{2}, y la progresión lenta a través de la fase S. O'Connor, Cancer Surveys, 29, 151-182 (1997); Hartwell et al., Science, 266, 1821-1828 (1994). Esta acción permite que los procesos de reparación del DNA completen sus tareas antes de la replicación del genoma y tenga lugar la subsiguiente separación de este material genético en las nuevas células hijas. Importantemente, el gen más comúnmente mutado en el cáncer humano, el gen supresor de tumores p53, produce una proteína de punto de verificación del daño del DNA que bloquea el progresión del ciclo celular en la fase G, y/o induce apoptosis (muerte programada de la célula) tras el daño del DNA. Hartwell et al., Science, 266, 1821-1828 (1994). Para el gen supresor de tumores p53 también se ha demostrado que refuerza la acción de un punto de verificación del daño de DNA en la fase G_{2} del ciclo celular. Véase, por ejemplo, Bunz et al., Science, 28, 1497-1501 (1998); Winters et al., Oncogene, 17, 673-684 (1998); Thompson, Oncogene, 15, 3025-3035 (1997).

Teniendo en cuenta la importantísima naturaleza de la vía del supresor de tumor p53 en el cáncer humano, se han buscado activamente intervenciones terapéuticas que exploten las vulneralidades del cáncer defectuoso en p53. Una vulnerabilidad emergente reside en la operación del punto de verificación de G_{2} en células cancerosas defectuosas en el gen p53. Las células cancerosas, debido a que carecen del control del punto de punto verificación en la fase G_{1}, son particularmente vulnerables a la anulación de la última barrera que les queda para protegerlas de los efectos asesinos cancerosos provocados por los agentes que dañan al DNA: el punto de verificación G_{2}. El punto de verificación G_{2} está regulado por un sistema de control que se ha conservado desde la levadura a los seres humanos. En este sistema conservado es importante una quinasa, la CHK-1, que transduce las señales desde el complejo sensible al daño por DNA para inhibir la activación de la ciclina B/CDC2-quinasa, que promueve la entrada mitótica (el comienzo de la mitosis). Véase, por ejemplo, Peng et al., Science, 277, 1501-1505 (1997); Sánchez et al., Science, 277, 1497-1501 (1997). Se ha demostrado que la inactivación de CHK-1 anula tanto la detención de G_{2} inducida por daño del DNA inflingido por cualesquiera agentes anticáncer o daño del DNA endógeno, dando también como resultado la eliminación preferencial de las células defectuosas del punto de verificación resultante. Véase, por ejemplo, Suganuma et al., Cancer Res., 59, 5887-5891 (1999); Nurse, Cell, 91, 865-867 (1997); Weinert, Science, 277, 1450-1451 (1997); Walworth et al., Nature, 363, 368-371 (1993); y Al-Khodairy et al., Malec. Biol. Cell, 5, 147-160 (1994).

La manipulación selectiva del control del punto de verificación en células cancerosas podría proporcionar una amplia utilización en los regímenes quimioterapéuticos y radioterapéutico del cáncer, además de, ofrecer un excelente marcador de la "inestabilidad genómica" del cáncer humano que ha de ser explotado como la base selectiva para la destrucción de las células cancerosas. Cierto número de factores sitúan a la CBK-1 como diana principal en el control del punto de verificación del daño del DNA. La elucidación de los inhibidores de esta quinasa y otras funcionalmente relacionadas, tales como CDS1/CHK-2, una quinasa recientemente descubierta que coopera con la CHK-1 en la regulación de la progresión de la fase S (véase Zeng et al., Nature, 395, 507-510 (1998); Matsuoka, Science, 282, 1893-1897 (1998); Carr, Science, 287, 1765-1766 (2000); y Hirao et al., Science, 287, 1824-1827 (2000)), podría proporcionar nuevas entidades terapéuticas para el tratamiento del cáncer.

Las tirosina-quinasas pueden ser el tipo de receptor (que tiene transmembrana extracelular y dominios intracelulares) o el tipo no receptor (que es rotamente intracelular). Se cree que al menos una de las proteínas tirosina-quinasas de tipo no receptor, concretamente, la LCK, media la transducción en las células T de una señal desde la interacción de una proteína de la superficie de la célula (Cd4) con un anticuerpo reticulado anti-Cd4. Un análisis más detallado de las tirosina-quinasas que son del tipo no receptor se encuentra en Bolen, Oncogene, 8, 2025-2031 (1993), que se incorpora en la presente memoria como referencia.

Además de su papel en el control del ciclo celular, las proteína-quinasas también desempeñan un papel crucial en la angiogénesis, que es el mecanismo por el cual se forman nuevos capilares a partir de los vasos existentes. Cuando se requiere, el sistema vascular tiene el potencial de generar nuevos retículos capilares para mantener el funcionamiento adecuado de tejidos y órganos. En los adultos, sin embargo, la angiogénesis esta bastante limitada, ocurriendo solamente en el proceso de curación de heridas y neovascularización del endometrio durante la menstruación. Véase Merenmies et al., Cell Growth & Differentiation, 8, 3-10 (1997). Por otra parte, la angiogénesis no deseada es una marca distintiva de diversas enfermedades, tales como retinopatías, psoriasis, artritis reumatoide, degeneración macular relacionada con la edad, y cáncer (tumores sólidos). Véase Folkman, Nature Med., 1, 27-31 (1995). Las proteína-quinasas que han demostrado estar implicadas en el proceso angiogénico incluyen tres miembros de la familia de las tirosina-quinasas que son receptores del factor de crecimiento: La VEGF-R2 (receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular, también conocida como KDR (receptor del dominio de inserción de quinasa) y como FLK-1); la FGF-R (receptor del factor de crecimiento de fibroblastos); y la TEK (también conocida como Tie-2).

La VEGF-R2, que se expresa solamente ene células endoteliales, se une al potente factor de crecimiento angiogénico VEGF y media la transducción de señal subsiguiente a través de la activación de su actividad quinasa intracelular. Por tanto, se espera que la inhibición directa de la actividad quinasa de la VEGF-R2 dará como resultado la reducción de la angiogénesis incluso en presencia de VEGF exógena (véase Strawn et al., Cancer Research, 56, 3540-3545 (1996)), como se ha demostrado con mutantes de VEGF-R2 que fallan en mediar la transducción de señales. Millauer et al., Cancer Research, 56, 1615-1620 (1996). Además, la VEGF-R2 parece no tener función en el adulto más allá de mediar la actividad angiogénica de la VEGF. Por lo tanto, se esperaría que un inhibidor selectivo de la actividad quinasa del VEGF-R2 presentara poca toxicidad.

Similarmente, el FGF-R se une a los factores de crecimiento angiogénicos aFGF y bFGF y media la transducción de señal intracelular subsiguiente. Recientemente, se ha sugerido que los factores de crecimiento, tales como bFGF pueden desempeñar un papel crítico en inducir angiogénesis en tumores sólidos que han alcanzado un cierto tamaño. Véase Yoshiji et al., Cancer Research, 57, 3924-3928 (1997). A diferencia de la VEGF-R2, sin embargo, el FGF-R se expresa en un número de diferentes tipos de células a través del cuerpo y puede o no puede desempeñar funciones importantes en otros procesos fisiológicos normales en el adulto. No obstante, se ha descrito que la administración sistémica de un pequeño inhibidor molecular de la actividad de quinasa del FGF-R bloquea la angiogénesis inducida por bFGF en ratones sin aparente toxicidad. Véase, por ejemplo, Mohammadi et al., EMBO Journal, 17, 5896-5904 (1998).

La TEK (también conocida como Tie-2) es otra tirosina-quinasa receptor expresada solamente en las células endoteliales que han demostrado desempeñar un papel en la angiogénesis. La unión del factor angiopoyetina-1 da como resultado la autofosforilación del dominio quinasa de la TEK y produce a su vez un proceso de transducción de señal que parece mediar la interacción de las células endoteliales con las células de soporte periendoteliales, facilitando con ello la maduración de los vasos sanguíneos nuevamente formados. El factor angiopoyetina-2, por otro lado, parece antagonizar la acción de la angiopoyetina-1 sobre la TEK e interrumpe la angiogénesis. Véase Maisonpierre et al., Science, 277, 55-60 (1997).

Como resultado de los desarrollos antes descritos, se ha propuesto tratar la angiogénesis por el uso de compuestos que inhiben la actividad quinasa de VEGF-R2, FGF-R, y/o TEK. Por ejemplo, la Publicación de patente internacional WIPO Nº WO 97/34876 describe ciertos derivados de cinolina que son inhibidores de VEGF-R2, que se pueden usar para el tratamiento de estados morbosos asociados con angiogénesis anormal y/o aumento de la permeabilidad vascular, tales como cáncer, diabetos, psoriasis, artritis reumatoide, sarcoma de Kaposi, hemangioma, nefropatías agudas y crónicas, ateroma, restenosis arterial, enfermedades autoinmunes, inflamación aguda y enfermedades de los ojos con proliferación de vasos retinales.

Además de las proteína-quinasas identificadas anteriormente, se han considerado dianas terapéuticas numerosas otras proteína-quinasas, y numerosas publicaciones describen inhibidores de la actividad quinasa, como se ha revisado en las siguientes publicaciones: McMahon et al., Oncologist, 5, 3-10 (2000); García-Echeverría et al., Med Res. Rev., 20, 28-57 (2000); Holash et al., Oncogene, 18, 5356-5362 (1999); Stover et al., Curr. Opin. Drug Disc. Dev., 2, 274-285 (1999); Toledo et al., Curr Med. Chem., 6, 775-805 (1999); Thomas et al., J. Biol. Chem., 274, 36684-36692 (1992); Cohen, Curr. Op. Chem. Biol., 10, 544-549 (1999); Adams et al., Curr. Opin. Drug Disc. Dev., 2, 96-109 (1999); McMahon et al., Curr. Opin. Drug Disc. Dev., 1, 131-146 (1998); y Strawn et al., Exp. Opin. Invest. Drugs, 7, 553-573 (1998).

Sin embargo, sigue existiendo la necesidad de inhibidores eficaces de proteína-quinasas. Además, como entenderán los expertos en la técnica, es deseable que los inhibidores de quinasas posean tanto alta afinidad para la quinasa diana como alta selectividad frente a otras proteína-quinasas.

Sumario de la invención

Por consiguiente, un objetivo de la invención es descubrir potentes inhibidores de proteína-quinasas. Otro objetivo de la invención es descubrir inhibidores de quinasas eficaces que tengan una intensa y selectiva afinidad para una quinasa particular.

Este y otros objetivos de la invención, que serán evidentes de la siguiente descripción, se han conseguido por el descubrimiento de compuestos de núcleos de hidroxiimino-fluoreno heterocíclicos, sus solvatos y sus sales farmacéuticamente aceptables (dichos compuestos, solvatos y sales se denominan colectivamente "agentes") descritos más adelante, los cuales modulan y/o inhiben la actividad de las proteína-quinasas. Las composiciones farmacéuticas que contienen dichos agentes son útiles en tratar enfermedades mediadas por actividad quinasa, tales como cáncer, así como otros estados morbosos asociados con angiogénesis y/o proliferación celular no deseadas, tales como retinopatías diabéticas, glaucoma, artritis reumatoide, restenosis, y psoriasis. Además, los agentes tienen propiedades ventajosas en relación con la modulación y/o inhibición de la actividad quinasa asociada con los complejos CDK, CHK-1, CDS1, LCK, VEGF-R, y/o FGF-R.

En un aspecto general, la invención se refiere a compuestos de la fórmula I:

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en donde:

R^{5} y R^{6} son cada uno independientemente hidrógeno, halo, o un grupo alquilo C_{1}-C_{8}, alcoxi C_{1}-C_{8}, arilo, heteroarilo, acilo, tio-alquilo C_{1}-C_{12}, sulfonilo o sulfoxilo, sustituidos o no sustituidos; y

X es C-Y ó N, donde Y es hidrógeno, halo, NH_{2}, NO_{2}, o un grupo alquilo C_{1}-C_{12}, cicloalquilo C_{3}-C_{12}, heterocicloalquilo, alcoxi C_{1}-C_{12}, alquenilo C_{2}-C_{12}, arilo, heteroarilo, ariloxi, alquil C_{1}-C_{12}-amino, dialquil C_{1}-C_{12}-amino, tio-alquilo C_{1}-C_{12}, acilo, sulfonilo, sulfóxido o tioarilo, sustituidos o no sustituidos.

La invención también está dirigida a solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula I. También se describen métodos ventajosos de preparar los compuestos de fórmula I.

En una realización preferida general, la invención se refiere a compuestos que tienen la fórmula I, en donde: R^{5} y R^{6} son cada uno independientemente hidrógeno, halo, o un grupo alquilo C_{1}-C_{8} sustituido o no sustituido; y X es C-Y o N, donde Y es hidrógeno, halo, NH_{2}, NO_{2}, o un grupo alquilo o arilo sustituidos o no sustituidos. En otra realización preferida, la invención se refiere a compuestos que tienen la fórmula I, en donde: R^{5} y R^{6} son cada uno independientemente hidrógeno o halo; X es C-Y o N, donde Y es hidrógeno, NH_{2} o NO_{2}.

En otro aspecto general, la invención se refiere a compuestos de la fórmula II

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en donde:

R^{5} y R^{6} son cada uno independientemente hidrógeno, halo, o un grupo alquilo C_{1}-C_{8}, alcoxi C_{1}-C_{8}, arilo, heteroarilo, acilo, tioalquilo sulfonilo o sulfoxilo, sustituidos o no sustituidos; y

W es O ó S.

La invención también está dirigida a solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula II. También se describen métodos ventajosos de preparar los compuestos de fórmula II.

En una realización preferida general, la invención se refiere a compuestos que tienen la fórmula II, en donde: R^{5} y R^{6} son cada uno independientemente hidrógeno, halo, o un grupo alquilo C_{1}-C_{8} sustituido o no sustituido: y W es O ó S. en otra realización preferida, la invención se refiere a compuestos que tienen la fórmula II, en donde: R^{5} y R^{6} son cada uno independientemente hidrógeno o halo; y W es O ó S.

La invención también se refiere a un método de modular y/o inhibir la actividad quinasa de un complejo CDK, VEGF-R, FGF-R, MK-1, CDS1, y/o LCK administrando un compuesto de fórmula I ó II o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto. Preferiblemente, los compuestos de la presente invención tienen actividad selectiva para las quinasas, es decir, poseen actividad significativa frente a una quinasa específica, mientras que poseen menos o mínima actividad frente a una quinasa diferente.

La invención también se refiere a composiciones farmacéuticas, comprendiendo cada una de ellas una cantidad eficaz de un agente seleccionado de dichos compuestos de fórmulas I y II y sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos, y un portador o vehículo farmacéuticamente aceptable para dicho agente. La invención proporciona además métodos de tratar cáncer, así como otros estados morbosos asociados con la angiogénesis y/o proliferación celular no deseadas, que comprende administrar cantidades eficaces de uno o más de dichos agentes a un paciente que necesite dicho tratamiento.

Descripción detallada de la invención y realizaciones preferidas

Los compuestos de la invención de fórmulas I y II son útiles para modular la actividad de proteína-quinasas. Más particularmente, los compuestos son útiles como agentes antiangiogénesis y como agentes para modular y/o inhibir la actividad de proteína-quinasas, proporcionando de ese modo tratamientos para cáncer u otras enfermedades asociadas con la proliferación celular mediada por proteína-quinasas.

Las expresiones "que comprenden" e "que incluyen" se usan en la presente memoria en su sentido amplio no limitativo.

El término "alquilo" usado en la presente memoria se refiere a grupos alquilo de cadena lineal o ramificada que tienen uno a doce átomos de carbono. Grupos alquilo ilustrativos incluyen metilo (Me), etilo, n-propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo (t-Bu), pentilo, isopentilo, terc-pentilo, hexilo, isohexilo, y similares. La expresión "alquilo inferior" designa un alquilo que tiene de 1 a 8 átomos de carbono (un alquilo C_{1-8}). Alquilos sustituidos ilustrativos incluyen fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, 2-fluoroetilo, 3-fluoropropilo, hidroximetilo, 2-hidroxietilo, 3-hidroxipropilo, y similares.

La expresión "alquenilo" se refiere a grupos alquenilo de cadena lineal o ramificado que tienen de dos a doce átomos de carbono. Grupos alquenilo ilustrativos incluyen prop-2-enilo, but-2-enilo, but-3-enilo, 2-metilprop-2-enilo, hex-2-enilo, y similares.

El término "cicloalquilo" se refiere a carbociclos saturados que tienen de tres a doce átomos de carbono, incluyendo estructuras de cicloalquilo bicíclicas y tricíclicas. Cicloalquilos ilustrativos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, y similares.

Un grupo "heterocicloalquilo" se refiere a un radical monocíclico que contiene átomos de carbono, preferiblemente 4 ó 5 átomos de carbono en anillo, y al menos un heteroátomo seleccionado de nitrógeno, oxígeno y azufre, y que no tienen insaturación.

Los términos "arilo" (Ar) y "heteroarilo" se refieren a estructuras de anillo monocíclicas y policíclicas insaturadas o aromáticas, refiriéndose "arilo" a los que son carbociclos y refiriéndose "heteroarilo" a los que son heterociclos. Ejemplos de estructuras de anillos aromáticos incluyen fenilo, naftilo, 1,2,3,4-tetrahidronaftilo, furilo, tienilo, pirrolilo, piridilo, piridinilo, pirazolilo, imidazolilo, pirazinilo, piridazinilo, 1,2,3-triazinilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, 1-H-tetrazol-5-ilo, indolilo, quinolinilo, benzofuranilo, benzotiofenilo (tianaftenilo), y similares. Tales restos pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes adecuados, por ejemplo, un sustituyente seleccionado de un halógeno (F, Cl, Br ó I); alquilo inferior; OH; NO_{2}; CN; CO_{2}H; O- alquilo inferior; arilo; aril-alquilo inferior; CO_{2}CH_{3}; CONH_{2}; OCH_{2}CONH_{2}; NH_{2;} SO_{2}NH_{2}; OCHF_{2}; CF_{3}; OCF_{3}; y similares. Dichos restos también estar opcionalmente sustituidos con una estructura de anillo o puente condensado, por ejemplo OCH_{2}-O.

El término "alcoxi" se refiere al radical -O-alquilo. Ejemplos ilustrativos incluyen metoxi, etoxi, propoxi, y similares.

El término "ariloxi" representa -O-arilo, en donde arilo está definido antes.

El término "halógeno" representa cloro, flúor, bromo o yodo. La expresión "halo" representa cloro, flúor, bromo o yodo.

El término "alquilamino" representa -NHR donde R es un grupo alquilo como se ha definido antes.

El término "dialquilamino" representa -NHR, R_{b} donde R_{a}R_{b} son cada uno independientemente un grupo alquilo como se ha definido antes.

El término "tioalquilo " se refiere al radical -SR donde R es un grupo alquilo como se ha definido antes.

El término "acilo" representa -C(O)H, -C(O)OH, -C(O)R, -C(O)OR, -C(O)NH_{2}. -C(O)NHR, y -C(O)NHR_{a}R_{b}, donde R y R_{a}R_{b} son como se han definido antes.

El término "tioarilo" se refiere al radical -SAr donde Ar es un grupo arilo como se ha definido antes.

El término "sulfonilo" representa el radical -SO_{2}R ó -SO_{2}Ar, donde R es un grupo alquilo y Ar es un grupo arilo como se ha definido antes.

El término "sulfoxilo" representa el radical -SOR o -SOAr, donde R es un grupo alquilo y Ar es un grupo arilo como se ha definido antes.

Como se ha indicado, los diversos restos o grupos funcionales para los símbolos de significados variables en las fórmulas pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes adecuados. Sustituyentes ilustrativos incluyen un halógeno (F, Cl, Br, ó I), alquilo inferior, -OH, -NO_{2}, -CN, -CO_{2}H, -O-alquilo inferior, -arilo, -aril-alquilo inferior -CO_{2}CH_{3}, -CONH_{2}, -OCH_{2}CONH, -NH_{2}, -SO_{2}NH_{2}, haloalquilo (por ejemplo, -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}), -O-haloalquilo (por ejemplo, - OCF_{3}, -OCHF_{2}), y similares.

Los compuestos de la invención pueden presentar el fenómeno de la tautomería. Aunque las fórmulas I y II pueden no representar expresamente todas la posibles formas tautómeras, ha de entenderse que las fórmulas I y II están destinadas a representar cualquier forma tautómera del compuesto específico representado y no han de estar limitadas simplemente a un compuesto representado por los dibujos de la fórmula. Por ejemplo, la fórmula I puede tautomerizarse a la siguiente estructura:

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También ha de entenderse que un compuesto de fórmula I ó II puede existir como un isómero de configuración "E" o "Z", o una mezcla de isómeros E y Z. Por ejemplo, existe un isómero E cuando el sustituyente hidroxi (-OH) de la oxima está en el lado opuesto de la porción heterocíclica de un compuesto representado en la fórmula I, en donde existe un isómero Z cuando el sustituyente hidroxi (-OH) está en el mismo lado que porción heterocíclica de un compuesto, como se representa expresamente en la fórmula I. Una mezcla de isómeros E y Z está indicada por un enlace ondulado entre el átomo de nitrógeno y el sustituyente hidroxi, como se representa expresamente en los Ejemplos A-F. Por tanto, ha de entenderse que las fórmulas I y II están destinadas a representar cualquier forma configuracional del compuesto representado y no han de estar limitadas simplemente a la forma del compuesto representada en los dibujos de la fórmula.

Algunos de los compuestos pueden existir como estereoisómeros individuales (es decir, esencialmente libre de otros estereoisómeros), racematos, y/o mezclas de enantiómeros y/o diastereoisómeros. Todos los estereoisómeros, racematos y sus mezclas se pretende que estén dentro del alcance de la invención. Preferiblemente, los compuestos de la invención que son ópticamente activos se usan en forma ópticamente pura.

Como se entiende generalmente por los expertos en la técnica, un compuesto ópticamente puro que tiene un centro quiral (es decir, un átomo de carbono asimétrico) es uno que consiste esencialmente en uno de los dos posibles enantiómeros (es decir, es enantioméricamente puro), y un compuesto ópticamente puro que tiene más de un centro quiral es uno que es tanto diastereoisoméricamente puro como enantioméricamente puro. Preferiblemente, los compuestos de la presente invención se usan en una forma que es al menos 90% ópticamente puro, es decir, una forma que contiene al menos 90% de un isómero individual (exceso enantiomérico 80% ( "e.e.") o exceso diastereisomérico ("d.e.")), más preferiblemente al menos 95% (90% e.e. ó d.e.), incluso más preferiblemente al menos 97,5% (95% e.e. ó d.e.), y más preferiblemente al menos 99% (98% e.e. ó d.e.).

Adicionalmente, se pretende que las fórmulas cubran las formas tanto solvatadas como las no solvatadas de las estructuras identificadas. Por ejemplo, la fórmula I incluye compuestos de la estructura indicada tanto en la forma hidratada como en la no hidratada. Otros ejemplos de solvatos incluyen las estructuras en combinación con isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etilo, ácido acético, o etanolamina.

Además de los compuestos de fórmulas I y II, la invención incluye los solvatos y las sales farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos.

La expresión "una sal farmacéuticamente aceptable" está destinada a significar una sal que retiene la eficacia biológica de los ácidos y bases libres del compuesto especificado y que no es biológicamente o de otra forma indeseable. Un compuesto de la invención puede proveer grupos suficientemente ácidos, suficientemente básicos, o ambos grupos funcionales, y consiguientemente reaccionan con cualquiera de cierto número de bases inorgánicas u orgánicas, y ácidos inorgánicos y orgánicos, para formar una sal farmacéuticamente aceptable. Sales farmacéuticamente aceptables ilustrativas incluyen las sales preparadas por reacción de los compuestos de la presente invención con un ácido inorgánico u orgánico o una base inorgánica, tales sales incluyen sulfatos, pirosulfatos, bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, fosfatos, monohidrógenofosfatos, dihidrógenofosfatos, metafosfatos, pirofosfatos, cloruros, bromuros, yoduros, acetatos, propionatos, decanoatos, caprilatos, acrilatos, formiatos, isobutiratos, caproatos, heptanoatos, propionatos, oxalatos, malonatos, succinatos, suberatos, sebacatos, fumaratos, maleatos, butin-1,4-dioatos, hexin-1,6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos, metilbenzoatos, dinitrobenzoatos, hidroxibenzoatos, metoxibenzoatos, ftalatos, sulfonatos, xilensulfonatos, fenilacetatos, fenilpropionatos, fenilbutiratos, citratos, lactatos, \gamma-hidroxibutiratos, glicolatos, tartratos, metano-sulfonatos, propano-sulfonatos, naftalen-1-sulfonatos, naftalen-2-sulfonatos, y mandelatos.

Si el compuesto de la invención es una base, la sal farmacéuticamente aceptable puede prepararse por cualquier método disponible en la técnica, por ejemplo, tratamiento de la base con un ácido inorgánico, tales como ácido clorhídrico, ácido, bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares, o con un ácido orgánico, tales como ácido acético, ácido, ácido maleico, ácido succínico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido malónico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, un ácido de piranosidilo, tales como ácido glucurónico o ácido galactourónico, un alfa-hidroxi-ácido, tales como ácido cítrico o ácido tartárico, un aminoácido, tales como ácido aspártico o ácido glutámico, un ácido aromático, tales como ácido benzoico o ácido cinámico, un ácido sulfónico, tales como ácido p-toluensulfónico o ácido etanosulfónico, o similares.

Si el compuesto de la invención es un ácido, la sal farmacéuticamente aceptable deseada puede prepararse por cualquier método adecuado, por ejemplo, tratamiento del ácido libre con una base inorgánica u orgánica, tales como una amina (primaria, secundaria o terciaria), un hidróxido de metal alcalino o un hidróxido de metal alcalino-térreo, o similares. Ejemplos ilustrativos de sales adecuadas incluyen sales orgánicas derivadas de aminoácidos, tales como glicina y arginina, amoniaco, aminas primarias, secundarias, y terciarias, y aminas cíclicas, tales como piperidina, morfolina y piperazina, y sales inorgánica derivadas de sodio, calcio, potasio, magnesio, manganeso, hierro, cobre, zinc, aluminio y litio.

En el caso de los agentes que son sólidos, se entiende por los expertos en la técnica que los compuestos de la invención y sus sales pueden existir en diferentes formas cristalinas o polimórficas, todas las cuales se pretende que estén dentro del alcance de la presente invención y de las fórmulas especificadas.

Cantidades terapéuticamente eficaces de los agentes de la invención pueden emplearse para tratar enfermedades mediadas por modulación o regulación de proteína-quinasas. Una "cantidad eficaz" pretende significar que la cantidad de un agente que, cuando se administra a un mamífero que necesite dicho tratamiento, es suficiente para efectuar el tratamiento de una enfermedad mediada por la actividad de una o más proteína-quinasas, tales como tirosina-quinasas. Así, por ejemplo, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula I o una de sus sales es una cantidad suficiente para modular, regular, o inhibir la actividad de una o más proteína-quinasas, tal como un estado morboso que está mediado por esa actividad la cual es reducida o aliviada.

La cantidad de un agente dado que corresponderá a dicha cantidad variará dependiendo de factores, tales como el compuesto, estado morboso y su gravedad particular, la identidad (por ejemplo, peso) del mamífero que necesite tratamiento, pero sin embargo puede ser determinada rutinariamente por un experto en la técnica. "Tratamiento" pretende significar al menos la mitigación de un estado morboso en un mamífero, tal como un ser humano, que está afectado, al menos en parte, por la actividad de una o más proteína-quinasas, tales como tirosina-quinasas, e incluyen: prevenir que se produzca el estado morboso en un mamífero, particularmente cuando se da el caso de que el mamífero este predispuesto a tener el estado morboso, pero todavía no se ha diagnosticado que lo tiene; modular y/o inhibir el estado morboso; y/o aliviar el estado morboso.

La afinidad de los compuestos de la invención para un receptor puede aumentarse proporcionando múltiple copias del ligando que se encuentra en proximidad inmediata, preferiblemente usando un armazón proporcionado por un resto portador. Se ha demostrado que la creación de dichos compuestos de valencia múltiple con espaciamiento óptimo entre los restos mejora acusadamente la unión a un receptor. Véase, por ejemplo, Lee et al., Biochemistry, 23, 4255 (1984). La multivalencia y el espaciamiento pueden controlarse por selección de un resto portador o unidades de enlazador adecuados. Dichos restos incluyen soportes moleculares que contienen una multiplicidad de grupos funcionales que pueden hacerse reaccionar con grupos funcionales asociados con los compuestos de la invención. Naturalmente, puede usarse una variedad de vehículos, incluyendo proteínas tales como seroalbúmina (abreviadamente BSA por la expresión inglesa bovine serum albumin) o seroalbúmina humana (abreviadamente HSA por la expresión inglesa human serum albumin), diversos péptidos incluyendo, por ejemplo, pentapéptidos, decapéptidos, y pentadecapéptidos, y similares. Los péptidos o proteínas pueden contener el número deseado de residuos de aminoácidos que tienen grupos amino libres en sus cadenas laterales; sin embargo, también pueden usarse para obtener enlaces estables otros grupos funcionales, tales como grupos sulfhidrilo o grupos hidroxilo,

Se prefieren los agentes que regulan, modulan, o inhiben potentemente la actividad proteína-quinasa asociada con los complejos de los receptores CDK, VEGF, FGF, CHK-1, CDS1, y LCK, entre otros, y que inhiben la angiogénesis y/o profileración celular. La presente invención se dirige además a métodos de modular o inhibir la actividad proteína-quinasa, por ejemplo en tejidos de mamíferos, por administración de un agente de la invención. La actividad de los agentes de la invención como moduladores de la actividad proteína-quinasa, tal como la actividad de quinasas, puede medirse por cualquiera de los métodos disponibles para los expertos en la técnica, incluyendo ensayos en vivo y/o en vitro. Ejemplos de ensayos adecuados para las medidas de la actividad incluyen los descritos en la publicación de patente internacional WIPO Nº WO 99/21845; Parast et al., Biochemistry, 37, 16788-16801 (1998); Jeffrey et al., Nature, 376, 313-320 (1995); publicación de patente internacional WIPO Nº WO 97/34876; y publicación de patente internacional WIPO Nº WO 96/14843. Estas propiedades pueden determinarse, por ejemplo, usando uno o más de los métodos de ensayos biológicos que se describen en los ejemplos más adelante.

Los agentes activos de la invención pueden formularse en composiciones farmacéuticas como se describe más adelante. Las composiciones farmacéuticas de esta invención comprenden una cantidad moduladora, reguladora, o inhibidora eficaz de un compuesto de fórmula I ó fórmula II y vehículo o diluyente, farmacéuticamente aceptable. En una realización de las composiciones farmacéuticas, se proporcionan niveles eficaces de los agentes de la invención de modo que se aporten los beneficios terapéuticos que implican la modulación de proteína-quinasas. Por "niveles eficaces" se quiere significar concentraciones en las que los efectos de las proteína-quinasas son, como mínimo, regulados. Estas composiciones se preparan en forma de monodosis apropiadas para el modo de administración, por ejemplo, administración parenteral u oral.

Un agente de la invención puede administrarse en una forma farmacéutica preparada combinando una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente (por ejemplo, un compuesto de fórmula 1) como ingrediente activo con vehículos o diluyentes farmacéuticos apropiados de acuerdo con los métodos convencionales. Estos métodos pueden implicar mezclamiento, granulación y compresión o disolución de los ingredientes, según sea apropiado para la preparación deseada.

El vehículo farmacéutico empleado puede ser un sólido o un líquido. Son ilustrativos de los vehículos sólidos lactosa, sacarosa, talco, gelatina, agar-agar, pectina, goma acacia, estearato de magnesio, ácido esteárico y similares. Son ilustrativos de vehículos líquidos jarabe, aceite de cacahuete, aceite de oliva, agua y similares. Análogamente, el vehículo o diluyente puede incluir material de retraso de tiempo o de retraso de liberación conocido en la técnica, tales como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solo o con una cera, etil-celulosa, hidroxipropilmetil-celulosa, metacrilato de metilo y similares.

Puede emplearse una variedad de formas farmacéuticas. Así, si se usa un vehículo sólido, la preparación puede ser transformada en comprimidos, colocada en cápsulas de gelatina dura en forma de polvo o pelet o en forma de pastilla o pastilla para chupar. La cantidad de vehículo sólido puede variar, pero generalmente será desde aproximadamente 25 mg a aproximadamente 1 g. Si se usa un vehículo líquido, la preparación estará en forma de jarabe, emulsión, cápsulas de gelatina blanda, solución o suspensión inyectable estéril en una ampolla o vial o una suspensión líquida no acuosa.

Para obtener una forma farmacéutica soluble en agua y estable, se disuelve una sal farmacéuticamente aceptable de un agente de la invención en una solución acuosa de un ácido orgánico o inorgánico, tal como solución 0,3 M de ácido succínico o ácido cítrico. Si no está disponible una forma de sal soluble, el agente puede disolverse en un codisolvente o combinaciones de codisolventes adecuados. Ejemplos de codisolventes adecuados incluyen, pero en limitación: alcohol, propilenglicol, polietilenglicol 300, polisorbato 80, glicerina y similares en concentraciones que varían desde 0-60% del volumen total. En una realización ilustrativa, un compuesto de fórmula I se disuelve en DMSO y se diluye con agua. La composición también puede estar en forma de una solución de una forma de sal del ingrediente activo en un vehículo acuoso apropiado, tal como agua o disolución salina o solución de dextrosa.

Se apreciará que las dosificaciones reales de los agentes usados en las composiciones de esta invención variarán de acuerdo con el complejo particular que se use, la composición particular formulada, el modo de administración y el sitio particular, hospedante y la enfermedad que se trate. Las dosis óptimas para un conjunto de condiciones dadas pueden determinarse por los expertos en la técnica usando ensayos convencionales de determinación de dosis a la vista de los datos experimentales para un agente. Para administración oral, una dosis diaria ilustrativa generalmente empleada es desde aproximadamente 0,001 a aproximadamente 1000 mg/kg de peso corporal, con cursos de tratamiento repetidos a intervalos apropiados.

Las composiciones de la invención puede prepararse de modos generalmente conocidos para preparar composiciones farmacéuticas, por ejemplo, usando técnicas convencionales, tales como mezclamiento, disolución, granulación, fabricación de grageas, levigación, emulsificación, encapsulamiento, atrapamiento o liofilización. Las composiciones farmacéuticas pueden formularse de un modo convencional usando uno o más vehículos fisiológicamente aceptables, que pueden seleccionarse de excipientes y agentes auxiliares que facilitan la transformación de los compuestos activos en las preparaciones que pueden usarse farmacéuticamente.

La formulación apropiada es dependiente de la ruta de administración elegida. Para inyección, los agentes de la invención pueden formularse en soluciones acuosas, preferiblemente en tampones fisiológicamente compatibles, tales como solución de Hanks, solución de Ringer, o tampón de solución salina fisiológica. Para administración transmucosal, se usan en la formulación agentes penetrantes apropiados para la barrera que se ha de atravesar. Dichos agentes penetrantes son generalmente conocidos en la técnica.

Para administración oral, los compuestos pueden formularse fácilmente combinando los compuestos activos con vehículos farmacéuticamente aceptables conocidos en la técnica. Tales vehículos permiten que los compuestos de la invención sean formulados como comprimidos, píldoras, grageas, cápsulas, geles líquidos, geles, jarabes, suspensiones y similares, para ingestión oral por un paciente que ha de ser tratado. Las preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden obtenerse usando un excipiente sólido mezclado con el ingrediente (agente) activo, opcionalmente moliendo la mezcla resultante, y tratando la mezcla de gránulos después de añadir agentes auxiliares adecuados, si se desea, para obtener comprimidos o núcleos de grageas. Excipientes adecuados incluyen: cargas tal como azúcares, incluyendo lactosa, sacarosa, manitol, o sorbitol; y preparaciones de celulosa, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, gomas, metil-celulosa, hidroxipropilmetil-celulosa, carboximetilcelulosa de sodio, o polivinilpirrolidona (PVP). Si se desea, pueden añadirse agentes disgregantes, tales como polivinil-pirrolidona reticulada, agar-agar, o ácido algínico o una de sus sales, tal como alginato de sodio.

A los núcleos de grageas se les proporciona revestimientos adecuados. Para fin se pueden usar soluciones concentradas de azúcares, que pueden contener opcionalmente goma arábiga, polivinil-pirrolidona, gel de Carbopol, polietilenglicol, y/o dióxido de titanio, soluciones de lacas, y disolventes o mezclas de disolventes orgánicos adecuados. A los revestimientos de comprimidos o grageas pueden añadirse colorantes o pigmentos para identificación o para caracterizar diferentes combinaciones de agentes activos.

Las preparaciones farmacéuticas que pueden usarse por vía oral incluyen cápsulas de ajuste suave hechas de gelatina, así como blandas, cápsulas hechas de gelatina y un plastificante, tales como glicerol o sorbitol. Las cápsulas de ajuste suave pueden contener los ingredientes activos mezclados con cargas, tal como lactosa, aglutinantes, tales como almidones, y/o lubricantes tales como talco o estearato de magnesio, y, opcionalmente, estabilizadores. En las cápsulas blandas, los agentes activos pueden disolverse o suspenderse en líquidos adecuados, tales como aceites grasos, parafinas líquidas, o polietilenglicoles líquidos. Además, pueden añadirse estabilizadores. Todas las formulaciones para administración oral deben estar en dosis adecuadas para dicha administración. Para administración bucal, las composiciones pueden tener la forma de comprimidos o pastillas de chupar formuladas del modo convencional.

Para administración intranasalmente o por inhalación, los compuestos para uso de acuerdo con la presente invención se administran convenientemente en forma de una presentación de pulverización en aerosol desde envases presurizados o un nebulizador, con el uso de un agente propulsor adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado la unidad de dosificación de un aerosol presurizado puede determinarse proporcionando una válvula para suministrar una cantidad medida previamente establecidas. Las cápsulas y cartuchos de gelatina para uso en un inhalador o insuflador y similares pueden formularse de modo que contengan una mezcla de polvos del compuesto y una base de polvo adecuada, tales como lactosa o almidón.

Los compuestos pueden formularse para administración parenteral por inyección, por ejemplo, por inyección de bolo o infusión continua. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en forma de monodosis, por ejemplo, en ampollas en envases multidosis con un conservante añadido. Las composiciones pueden tener formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos acuosos u oleosos, y pueden contener agentes de formulación, tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes.

Las formulaciones farmacéuticas para administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua. Adicionalmente, las suspensiones de los agentes activos pueden prepararse en forma de suspensiones oleosas apropiadas para inyección. Los disolventes o vehículos lipófilos adecuados o incluyen aceites grasos, tales como aceite de sésamo, o ésteres de ácidos grasos sintéticos, tales como oleato de etilo o triglicéridos, o liposomas. Las suspensiones acuosas para inyección pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión, tales como carboximetil-celulosa de sodio, sorbitol, o dextrano. Opcionalmente, la suspensión también puede contener estabilizadores o agentes adecuados que aumentan la solubilidad de los compuestos para permitir la preparación de soluciones altamente concentradas.

Para administración a los ojos, un compuesto de fórmula I o fórmula II se incorpora en un vehículo oftálmico farmacéuticamente aceptable, de tal modo que el compuesto se mantenga en contacto con la superficie ocular durante un periodo de tiempo suficiente para permitir que el compuesto penetre en las regiones córnea e interna del ojo, incluyendo, por ejemplo, la cámara anterior, la cámara posterior, el cuerpo vítreo, el humor acuoso, el humor vítreo, la córnea, el iris/el aparato ciliar, el cristalino, la coroides/retina y la escelera. El vehículo oftálmico farmacéuticamente aceptable puede ser una pomada, aceite vegetal o un material encapsulante. Un compuesto de la invención también puede inyectarse directamente en los humores vítreos y acuosos.

Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para reconstitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril exenta de pirógenos, antes de su uso. Los compuestos también pueden formularse en composiciones rectales, tales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, supositorios convencionales que contienen bases, tales como manteca de cacao u otros glicéridos.

Además de las formulaciones descritas anteriormente, los compuestos también pueden formularse como una preparación de liberación prolongada. Dichas formulaciones de acción prolongada pueden administrarse por implantación (por ejemplo, subcutáneamente o intramuscularmente) o por inyección intramuscular. Así, por ejemplo, los compuestos pueden formularse con materiales polímeros o hidrófobos adecuados (por ejemplo, en forma de una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados escasamente solubles, por ejemplo, en forma de una sal escasamente soluble.

Un vehículo farmacéutico ilustrativo para los compuestos hidrófobos es un sistema codisolvente que comprende alcohol bencílico, un tensioactivo no polar, un polímero orgánico miscible con el agua, y una fase acuosa. El sistema codisolvente puede ser un sistema codisolvente VPD. VPD es una solución de 3% p/v de alcohol bencílico, 8% p/v del tensioactivo no polar polisorbato 80, y 65% p/v de polietilenglicol 300, completado hasta el volumen final con etanol absoluto. El sistema codisolventes VPD (VPD:5W) contiene VPD diluido 1:1 con una solución al 5% de dextrosa en agua. Este sistema codisolvente disuelve bien compuestos hidrófobos, y por si mismo produce baja toxicidad por administración sistémica. Naturalmente, las proporciones de un sistema codisolvente pueden ser variadas considerablemente sin destruir sus características de solubilidad y toxicidad. Además, la identidad de los componentes de codisolvente pueden ser variadas: por ejemplo, en lugar de polisorbato 80 se pueden emplear otros tensioactivos no polares; el tamaño de la fracción del polietilenglicol puede ser variado; otros polímeros biocompatibles pueden reemplazar al polietilenglicol, por ejemplo, polivinil-pirrolidona; y otros azúcares o polisacáridos pueden reemplazar a la dextrosa.

Alternativamente, pueden emplearse otros sistemas de administración para los compuestos farmacéuticos hidrófobos. Los liposomas y las emulsiones son ejemplos conocidos de portadores o vehículos de administración para fármacos hidrófobos. También se pueden emplear ciertos disolventes orgánicos, tal como dimetilsulfóxido, aunque usualmente con el coste de una mayor toxicidad. Adicionalmente, los compuestos pueden administrarse empleando un sistema de liberación prolongada, tales como matrices semipermeables de polímeros sólidos hidrófobos que contienen el agente terapéutico. Se han establecido y se conocen y por los expertos en la técnica diversos materiales de liberación prolongada. Las cápsulas de liberación prolongada pueden, dependiendo de su naturaleza química, liberar los compuestos durante unas cuantas semanas hasta más de 100 días. Dependiendo de la naturaleza química y la estabilidad biológica del reactivo terapéutico, pueden emplearse estrategias adicionales para la estabilización de proteínas.

Las composiciones farmacéuticas también pueden comprender vehículos o excipientes adecuados en fase de sólido o gel. Ejemplos de dichos vehículos o excipientes incluyen carbonato de calcio, fosfato de calcio, azúcares, almidones, derivados de celulosa, gelatina, y polímeros, tales como polietilenglicoles.

Algunos de los compuestos de la invención pueden proporcionarse en forma de sales con contraiones farmacéuticamente compatibles. Las sales farmacéuticamente compatibles pueden formarse con muchos ácidos, que incluyen clorhídrico, sulfúrico, acético, láctico, tartárico, málico, succínico, etc. Las sales tienden a ser más soluble en disolventes acuosos u otros disolventes protónicos que lo son las formas de bases libres correspondientes.

Los agentes de la invención pueden prepararse empleando las rutas de reacción y esquemas de síntesis que se describen más adelante, empleando los métodos generales conocidos en la técnica empleando materiales que son fácilmente asequibles. La preparación de los compuestos preferidos de la presente invención se describe con detalle en los siguientes ejemplos, pero el experto reconocerá que las reacciones químicas descritas se pueden adaptar fácilmente para preparar numerosos inhibidores de proteína-quinasas de la invención. Por ejemplo, la síntesis de compuestos de acuerdo con la invención no ilustrados en ejemplos puede realizarse satisfactoriamente por modificaciones evidentes para los expertos en la técnica, por ejemplo, por grupos interferentes apropiadamente protectores, por cambio a otros reaccionantes adecuados conocidos en la técnica, o por realización de modificaciones usuales de las condiciones de reacción. Alternativamente, se reconocerá que otras reacciones descritas en la presente memoria o generalmente conocidas en la técnica tienen aplicabilidad para preparar otros compuestos de la invención.

Ejemplos

\text{***} En los ejemplos descritos a continuación, a no ser que se indique otra cosa todas las temperaturas se expresan en grados Celsius y todas las partes y porcentajes son en peso. Los reactivos se adquirieron a proveedores comerciales, tales como Aldrich Chemical Company o Lancaster Synthesis Ltd. y se usaron sin más purificación a no ser que se indique otra cosa. El tetrahidrofurano (THF) y la N,N-dimetilformamida (DMF) se adquirieron a Aldrich en frascos de cierre seguro y se usaron tal como se recibieron. Todos los disolventes se purificaron empleando métodos estándares conocidos por los expertos en la técnica, a no ser que se indique otra cosa.

Las reacciones que se exponen a continuación se llevaron a cabo generalmente bajo una presión positiva de argón a una temperatura ambiente (a no ser que se indique otra cosa) en disolventes anhidros, y los matraces de reacción estaban provistos de tabiques de caucho para la introducción de sustratos y reactivos mediante una jeringa. El material de vidrio se secó en horno y/o se secó con calor. La cromatografía de capa delgada (TLC) analítica se realizó en placas de gel de sílice 60 F 254 sobre soporte de vidrio procedentes de Analtech (0,25 mm), se eluyó con relaciones (v/v) de disolventes apropiados, y se indica donde sea apropiado. Las mezclas de reacción se analizaron por TLC y las reacciones se consideraron terminadas cuando se juzgó así por el consumo del material de partida.

La visualización de las placas de TLC se realizó con vapor de yodo, iluminación ultravioleta, Ce(NH_{4})_{4}(SO_{4})_{4} al 2% en ácido sulfúrico acuoso al 20%, o el reactivo p-anisaldehído pulverizado, y activadas con calor cuando era apropiado. Los tratamientos se realizaron típicamente duplicando el volumen de reacción con el disolvente de reacción o extracción y lavando luego con las soluciones acuosas indicadas usando 25% en volumen del volumen de extracción a no ser que se indique otra cosa. Las soluciones de producto se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y/o Mg_{2}SO_{4} anhidros antes de la filtración y evaporación de los disolventes bajo presión reducida en un evaporador rotatorio e indicados como disolventes separados bajo vacío. La cromatografía en columna de desarrollo rápido (Still et al., J. Org. Chem., 43, 2923 (1978)) se realizó empleando gel de sílice Merck (47-61 \mum) con una relación de material bruto a gel de sílice de aproximadamente 20:1 a 50:1, a no ser que se indique otra cosa. La hidrogenolisis se realizó a la presión indicada en los ejemplos o a la presión ambiente.

Los espectros de ^{1}H-NMR se registraron en un instrumento Broker o Varían que funcionaba a 300 HMz y los espectros ^{13}C-NMR se registraron trabajando a 75 HMz. Los espectros de NMR se obtuvieron de soluciones en CDCl_{3} (expresados en ppm), usando cloroformo como patrón de referencia (7,27 ppm y 77,00 ppm) o CD_{3}OD (3,4 y 4,8 ppm y 49,3 ppm), o con tetrametilsilano como patrón interno (0,00 ppm) cuando era apropiado. Se usaron otros disolventes para NMR según era necesario. Cuando se describen multiplicidades de pico, se usan las siguientes abreviaturas: s (singlete), d (doblete), t (triplete), q (cuartete), m (multiplete), br (pico ancho), dd (doblete de dobletes), dt (doblete de tripletes). Las constantes de acoplamiento, cuando se dan, se expresan en Hertzios (Hz).

Los espectros infrarrojos (IR) se registraron en un espectrómetro Perkin-Elmer FT-1R como aceites sin disolventes, como pelets de KBr, o como soluciones de CDCl_{3}, y cuando se dan se expresan números de ondas (cm^{-1}). Los espectros de masas se obtuvieron usando LSIMS, FAB, o electropulverización. Todos los puntos de fusión (p.f.) están sin corregir.

Ejemplo A 9(E/Z)-Hidroxiimino-3H-fluoren[2,3-d]imidazol

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(1) Primeramente se preparó como sigue la 2,3-diamino-fluoren-9-ona que tiene la fórmula estructural:

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A una solución de SnCl_{2} \cdot 2H_{2}O (749 mg, 3,32 mmol) en una mezcla de HCl concentrado (1,2 mL) y ácido acético glacial (2 mL) se añadió 2-amino-3-nitro-fluoren-9-ona (200 mg, 0,83 mmol, obtenido de Aldrich). La suspensión resultante se llevó a reflujo durante 3 h y se dejó enfriar a temperatura ambiente. El sólido se separó por filtración y se lavó con HCl concentrado y H_{2}O hasta que el filtrado se puso violeta. El filtrado se alcalinizó a pH 9 con NaOH 1N. El precipitado se separó por filtración, se lavó con H_{2}O, y se secó bajo vacío para proporcionar un polvo pardo, 140 mg (rendimiento 80%), el cual igualaba al previamente descrito por Eckert et al., Journal für Praktische Chemie, 118, 263-281 (1928), y se usó sin más purificación. FTIR (KBr) 3419, 3331, 1735, 1672, 1619, 1584, 1448, 1390 cm^{-1}; ^{1}H NMR (CD_{3}OD) \delta 7,26 - 7,39 (m, 4H), 7,12 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 6,92 (s, 2H), 6,79 (s, 2H).

(2) Para preparar 2,3-diamino-9(E/Z)-hidroxiimino-fluoreno, que tiene la fórmula estructural.

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se siguió un método de Pan et al., Chem. & Ind., 240-241 (1969). A una solución de 2,3-diamino-fluoren-9-ona (procedente de A(1); 200 mg, 0,95 mmol) en DMSO (1,5 mL) se añadió a solución de hidrocloruro de hidroxilamina (72 mg, 1,0 mmol) en H_{2}O (250 \muL). La solución resultante se calentó a 70ºC durante media hora, se dejó enfriar a temperatura ambiente, y se diluyó con H_{2}O (5 mL). El sólido resultante se separó por filtración, se lavó con H_{2}O y benceno, y se secó bajo vacío para proporcionar un polvo pardo, 190 mg (rendimiento 89%), p.f. 145-147ºC. FTIR (KBr) 3201, 3036, 2848, 1619, 1596, 1449, 1372, 1313 cm^{-1}; ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 8,24 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,82 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 7,45 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 6,94-7,44 (m, 8H); MS (FAB) [M+Na^{+}]: 248; HRMS (FAB) [MH^{+}] Calculado 226,0980, Encontrado, 226,0987; Análisis: Calculado para C_{13}H_{11}N_{3}O \cdot 0,63 DMSO: C, 62,40; H, 5,43; N, 15,31. Encontrado: C, 62,15; H, 5,04; N, 15,52.

(3) Para preparar el compuesto del epígrafe, una suspensión de 2,3-diamino-9(E/Z)-hidroxiimino-fluoreno (procedente de A(2); 100 mg, 0,44 mmol) en una mezcla de ortoformiato de trietilo (0,5 mL) y ácido acético glacial (0,5 mL), se llevó a reflujo durante 3 h, se dejó enfriar a temperatura ambiente, y se filtró. El filtrado se alcalinizó a pH 8 con NaOH 1N, y el sólido resultante se separó por filtración, se lavó con H_{2}O, se secó bajo vacío, y se recristalizó en EtOH/CHCl_{3} para proporcionar un polvo pardo, 85 mg (rendimiento 82%), p.f 262ºC. FTIR (KBr) 3375, 3065, 2974, 2256, 1694, 1595, 1450, 1225 cm^{-1} ^{1}H NMR (CD_{3}OD) \delta 8,18 (d, 1H, J = 13,1 Hz), 7,94 (s, 1H), 7,88 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 7,65-7,81 (m, 2H), 7,20-7,48 (m, 3H); HRMS (FAB). Calculado para C_{14}H_{10}N_{3}O (MH^{+}): 236,0824. Encontrado: 236,0834; Análisis: Calculado para C_{14}H_{9}N_{3}O \cdot 0,3 CHCl3 \cdot 0,5 EtOH: C, 62,49; H, 4,22; N, 14,29. Encontrado: C, 62,26; H, 4,17; N, 14,21.

Ejemplo B 2-Amino-9(E/Z)-hidroxiimino-3H-fluoren[2,3-d]imidazol

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A una suspensión de 2,3-diamino-9(E/Z)-hidroxiimino-fluoreno (del Ejemplo A(2); 100 mg, 0,44 mmol) en H_{2}O (1,5 mL) se añadió BrCN (47 mg, 0,44 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 24 h y se filtró. El filtrado se alcalinizó a pH 8 con NaOH 1N. El sólido resultante se separó por filtración, se lavó con H_{2}O y CH_{2}Cl_{2} frío y se secó bajo vacío para proporcionar un polvo pardo, 100 mg (rendimiento 91%), p.f. 240-242ºC. FTIR (KBr) 3470, 3344, 1588, 1497, 1385, 1319, 1248 cm^{-1}; ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 8,12 (d, 1H, J = 7,2 Hz), 8,10 (s, 1H), 7,10-7,70 (m, 6H), 6,38 (s, 1H), 6,25 (s, 1H); HRMS (FAB) Calculado para C_{14}H_{11}N_{4}O [MH^{+}]: 251,0933. Encontrado: 251,0945; Análisis: Calculado para C_{14}H_{10}N_{4}O \cdot 0,12 CH_{2}Cl_{2}: C, 65,45; H, 3,97; N, 21,65. Encontrado: C, 65,35; H, 4,23; N, 21,25.

Ejemplo C 9(E/Z)-Hidroxiimino-3H-fluoren[2,3-d]-1,2,3-triazol

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A una suspensión de 2,3-diamino-9(E/Z)-hidroxiimino-fluoreno (del Ejemplo A(2); 100 mg, 0,44 mmol) en 11,0 (1,4 mL) a 0ºC se añadió ácido acético glacial (51 \muL, 0,88 mmol) y una solución de NaNO_{2} (33 mg, 0,48 mmol) en H_{2}O (0.6 mL). La mezcla resultante se calentó a 70ºC durante media hora, se dejó enfriar a temperatura ambiente, y se filtró. El filtrado se alcalinizó a pH 9 con NH_{4}OH acuoso al 58%. El precipitado se separó por filtración, se lavó con H_{2}O y CHCl3 frío, y se secó bajo vacío para proporcionar un polvo pardo, 100 mg (rendimiento 96%), p.f. 222-224ºC. FTIR (KBr) 3193, 3062, 2870, 1626, 1443, 1381, 1194 cm^{-1}; ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 8,38 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 8,22 (s, 1H), 7,98-8,18 (m, 2H), 7,70 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,30-7,58 (m, 3H); HRMS (FAB) Calculado para C_{13}H_{9}N_{4}O [MH^{+}]: 237,0776. Encontrado: 237,0772; Análisis: Calculado para C_{13}H_{8}N_{4}O \cdot 0.24 CHCl_{3}: C, 60,14; H, 3,14; N, 21,15. Encontrado: C, 60,14; H, 3,49; N, 20,84.

Ejemplo D 9(E/Z)-Hidroxiimino-7-yodo-3H-fluoren[2,3-d]-1,2,3-triazol

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(1) Se preparó primeramente 2-amino-7-yodo-9H-fluoreno, que tiene la fórmula estructural

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de una manera análoga a la 2,3-diamino-fluoren-9-ona para el ejemplo A(1), excepto que se usó 7-yodo-2-nitrofluoreno (véase Marhevka et al, J. Med. Chem., 28, 18-24 (1985); también obtenido de Aldrich) en lugar de 2-amino-3-nitro-fluoren-9-ona para proporcionar un polvo blanco con 91% de rendimiento, que se usó sin más purificación. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 7,94 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 7,72 (dd, 2H, J = 10,3, 8,1 Hz), 7,45 (s, 1H), 7,62 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 3,98 (s, 2H).

(2) A continuación se preparó 2-acetamido-7-yodo-9H-fluoreno, que tiene la fórmula estructural

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Una suspensión de 2-amino-7-yodo-9H-fluoreno (1,50 g, 4,88 mmol) en ácido acético glacial a 80ºC se trató con anhídrido acético (3,23 mL, 34,2 mmol) gota a gota durante 5 min. La mezcla resultante se calentó a 90ºC durante 2 h y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. El sólido resultante se recogió por filtración, se lavó con H_{2}O, y se secó bajo vacío para proporcionar a blanco polvo, 1,3 g (rendimiento 76%), que se usó sin más purificación. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 10,02 (s, 1H), 7,88 (s, 2H), 7,78 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,68 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,60 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,48 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 3,82 (s, 2H), 2,02 (s, 3H).

(3) A continuación se preparó 2-acetamido-7-yodo-3-nitro-9H-fluoreno, que tiene la fórmula estructural

13

A una suspensión de 2-acetamido-7-yodo-9H-fluoreno (2,37 g, 6,79 mmol) en ácido acético glacial (245 mL) a 95ºC se añadió gota a gota durante 3 minutos una solución de HNO_{3} concentrado (730 \muL, 11,5 mmol) en ácido acético glacial (5 mL). La mezcla resultante se calentó a 100ºC durante 30 min, se dejó enfriar a temperatura ambiente, y se vertió en hielo triturado. El sólido resultante se separó por filtración, se lavó con H_{2}O, y se secó bajo vacío para proporcionar un sólido amarillo, 1,8 g (rendimiento 67%), que se usó sin más purificación. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 8,58 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,84 (t, 2H, J = 8,1 Hz), 7,75 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 4,02 (s, 2H), 2,02 (s, 3H); Análisis: Calculado para C_{15}H_{9}N_{2}O_{4}\cdot 0,2 H_{2}O: C, 43,76; H, 2,30; N, 680. Encontrado: C, 43,41; H, 2,30; N, 6,56.

(4) A continuación se preparó 2-acetamido-7-yodo-3-nitro-fluoren-9-ona, que tiene la fórmula estructural

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A una suspensión de 2-acetamido-7-yodo-3-nitro-9H-fluoreno (1,5 g, 3,81 mmol) en ácido acético glacial (150 mL) se añadió dicromato de potasio (1,68 g, 5,71 mmol). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 3 h. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y se vertió sobre H_{2}O. El sólido resultante se separó por filtración, se lavó con H_{2}O, y se recristalizó en THF a ebullición para proporcionar a polvo rosa, 850 mg (rendimiento 55%), que se usó sin más purificación. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 10,42 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 8,04 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,92 (s, 1H), 7,78 (dd, 2H, J = 7,8, 7,2 Hz), 2,02 (s, 3H).

(5) A continuación se preparó 2-amino-7-yodo-3-nitro-fluoren-9-ona, que tiene la fórmula estructural

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A una suspensión de N-(7-yodo-3-nitro-9-oxo-9H-fluoren-2-il)-acetamida (450 mg, 1,10 mmol) en una mezcla de n-butanol y etanol (40 ml, 1:1) se añadió H_{2}SO_{4} al 50% (5 ml). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 3 h. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y se diluyó con H_{2}O. El sólido resultante se separó por filtración, se lavó con H_{2}O, y se secó bajo vacío para proporcionar un sólido pardo, 400 mg (rendimiento 99%), que se usó sin más purificación. ^{1}H NMR (DMSO.-d_{6}) \delta 8,38 (s, 1H), 8,08 (s, 2H), 7,96 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,88 (s, 1H), 7,72 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,36 (s, 1H); MS (ESI) [M+H^{+}]: 367.

(6) Se preparó 2,3-diamino-7-yodo-fluoren-9-ona, que tiene la fórmula estructural

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De una manera análoga a 2,3-diamino-fluoren-9-ona para el ejemplo A(1), excepto que se usó 2-amino-7-yodo-3-nitro-fluoren-9-ona en lugar de 2-amino-3-nitro-fluoren-9-ona, para proporcionar un polvo pardo con 75% de rendimiento, que se usó sin más purificación. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 7,92 (dd, 1H, J = 7,8, 1,6 Hz), 7,76 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 7,48 (s, 1H), 7,44 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,09 (s, 1H); MS (ESI) [MH^{+}]: 337; Análisis: Calculado para C_{15}H_{9}N_{2}O_{4} \cdot 1 HCl: C, 41,91; H, 2,71; N, 7,52, Encontrado: C, 42,09; H, 2,67; N, 7,34.

(7) Se preparó 7-yodo-9-oxo-fluoren[2,3-d]-1,2,3-triazol, que tiene la fórmula estructural

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de una manera análoga al 7-yodo-9-oxo-3H-fluoreno[2,3-d]-1,2,3-triazol en el Ejemplo C, excepto que se usó 2,3-diamino-7-yodo-fluoren-9-ona en lugar de 2,3-diamino-9(E/Z)-hidroxiimino-fluoreno, para proporcionar un polvo amarillo parduzco con 93% rendimiento, que se usó sin más purificación. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta 8,22 (bs, 1H), 8,03 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,90 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,83 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 7,76 (s, 1H), 7,64 (dd, 1H, J = 7,8, 6,5 Hz); MS (ESI) [MH^{+}]: 348; Análisis: Calculado para C_{13}H_{6}N_{3}O \cdot 0,6 H_{2}O: C, 43,62; H, 2,03; N, 11,74, Encontrado: C, 43,90; H, 2,05;N, 11,36.

(8) El compuesto del epígrafe se preparó de un modo similar al descrito para el ejemplo A(2) excepto que se usó 7-yodo-9-oxo-3H-fluoren[2,3-d]-1,2,3-triazol en lugar de 2,3-diamino-fluoren-9-ona, para proporcionar un polvo pardo con 65% de rendimiento, p.f. 275-277ºC; FTIR (KBr) 3194, 3061, 2912, 1626, 1588, 1439, 1377, 1194 cm^{-1}; ^{1}H NMR (CD_{3}OD) \delta 8,80 (bs, 1H), 8,17 (bs, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,86 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,62-7,78 (m, 21-1); HRMS (FAB) Calculado para C_{13}H_{8}IN_{4}O [MH^{+}]: 362,9743, Encontrado: 362,9755; Análisis: Calculado para C_{13}H_{7}IN_{4}O \cdot 0,5 CHCl_{3}: C, 39,35; H, 2,08; N, 13,02, Encontrado: C, 39,61; H, 2,48; N, 12,72.

Ejemplo E 7-Yodo-2-oxa-9(E/Z)-oximino-1,3-diaza-ciclopenta[b]fluoreno

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(1) Se preparó primeramente 7-yodo-2-oxa-1,3-diaza-ciclopenta[b]fluoren-9-ona, que tiene la fórmula estructural:

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a partir de 2-amino-7-yodo-3-nitro-fluoren-9-ona (Ejemplo D(5)) de acuerdo con el método de varias etapas de Perera et al., J. Chem. Soc. (C) 1348 -1354 (1971). El tratamiento con nitrito de sodio y ácido clorhídrico acuoso genera un derivado de diazonio, que es desplazado por azida de sodio y descompuesto en ácido acético caliente para obtener el heterociclo del epígrafe.

El compuesto del epígrafe se prepara de un modo similar al descrito para el ejemplo A(1) a partir de 7-yodo-2-oxa-1,3-diaza-ciclopenta[b]fluoren-9-ona.

Ejemplo F 7-Yodo-9(E/Z)-oximino-1,3-diaza-2-tia-ciclopenta[b]fluoreno

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(1) Se preparó 7-yodo-1,3-diaza-2-tia-ciclopenta[b]fluoren-9-ona, que tiene la fórmula estructural

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a partir de 2,3-diamino-7-yodo-fluoren-9-ona (Ejemplo D(6)) de acuerdo con un método descrito por Matsumoto et al., Chem. Pharm. Bull., 47, 971-979 (1999) (que da como referencia Khaletski et al., Doklady Akad. Nauk S.S.S.R., 106, 88-91, Chem. Abstr., 50, 13885c (1956)). La reacción con cloruro de tionilo y trietilamina en benceno a reflujo proporciona el heterociclo del epígrafe.

El compuesto del epígrafe se prepara de un modo similar al descrito para el ejemplo A(1) a partir de 7-yodo-1,3-diaza-2-tia-ciclopenta[b]fluoren-9-ona.

Ensayos biológicos y ensayos enzimáticos

La estimulación de la proliferación celular por factores de crecimiento, tales como VEGF y otros es dependiente de su inducción de autofosforilación de cada una de sus respectivas tirosina-quinasas del receptor. Por consiguiente, la capacidad de un inhibidor de proteína quinasa de bloquear la proliferación celular inducida por estos factores de crecimiento está directamente correlacionada con su capacidad de bloquear la autofosforilación del receptor. Para medir la actividad de inhibición de proteína-quinasas de los compuestos, se idearon las siguientes construc-
ciones.

Construcción VEGF-R2 para ensayo: Una construcción (VEGF-R2\Delta50) del dominio citosólico del receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular humano (VEGF-R2) que carece de los 50 residuos centrales de los 68 residuos del dominio de inserción de quinasa se expresó en un sistema celular baculovirus/insecto. De los 1356 residuos de VEGF-R2 de longitud completa, la construcción VEGF-R2\Delta50 contiene los residuos 806-939 y 990-1171, y también una mutación puntual (E990V) dentro del dominio de inserción de quinasa con respecto al VEGF-R2 de tipo silvestre. Véase McTigue et al., Structure, 7, 319-330 (1999); Solicitud de patente de EE.UU. Nº 09/390326, presentada el 7 de septiembre de 1999. La autofosforilación de la construcción purificada se realizó por incubación de la enzima a una concentración de 4 \muM en presencia de ATP 3 mM y MgCl_{2} 40 mM en Hepes 100 mM, pH 7,5, que contenía 5% de glicerol y DTT 5 mM, a 4ºC durante 2 h. Después de la autofosforilación, esta construcción ha demostrado poseer actividad catalítica esencialmente equivalente a la construcción del dominio de quinasa autofosforilada de tipo salvaje. Véase Parast et al., Biochemistry, 37, 16788-16801 (1998).

Construcciones CHK-1 para ensayo: La construcción CHK-1 (FL-CHK-1) humana de longitud completa altamente marcada con una cola de His en el C-terminal se expresó usando el sistema celular baculovirus/insecto. Contiene 6 residuos de histidina (6 x cola His) en el extremo C terminal de la CHK-1 humana de 476 aminoácidos. La proteína se purificó por técnicas cromatográficas convencionales.

La KH289 de CHK-1 contiene los residuos 1-289 de la CHK-1 humana incluyendo el dominio de quinasa. Contiene 6 residuos de histidina (6 x etiqueta His) en el C terminal del residuo 289. La proteína se expresó en un sistema celular baculovirus/insecto y se purificó por técnicas cromatográficas convencionales.

Construcción CDK2/Ciclina A para ensayo: Se purificó CDK2 empleando usando metodología publicada (Rosenblatt et al., J. Mol. Biol., 230, 1317-1319 (1993)) a partir de células de insectos que habían sido infestadas con un vector de expresión de baculovirus. La ciclina A se purificó a partir de células de E. coli ciclina A recombinante de longitud completa, y se generó una construcción de ciclina A truncada para proteolisis limitada y se purificó como se ha descrito previamente (Jeffrey et al., Nature, 376, 313-320 (1995)).

Construcción CDK4/Ciclina D para ensayo: Se purificó un complejo de CDK4 humana y ciclina D3, un complejo de ciclina D1 y una proteína de fusión de CDK4 humana y glutatión-S-transferasa (GST-CDK4), empleando técnicas cromatográficas convencionales a partir de células de insectos que habían sido co-infectadas con los correspondientes vectores de expresión de baculovirus.

Construcción CDS 1 para ensayo: CDS1 CE4 contiene los residuos 209-502 que incluyen el dominio de quinasa de CDS1/CHK-2 humana (GenBank número de acceso. AFQ86904, Matsuoka et al., Science, 282, 1893-97 (1998)). Contiene la secuencia de aminoácidos: MGSSHHHHHHSSGLVPRSHM en el N-terminal del residuo 209. (El primer M no está presente en la proteína expresada debido al procesamiento post-translacional del N-terminal) La proteína se expresó en E. coli y se purificó por técnicas cromatográficas convencionales.

Ensayo con VEGF-R2 Ensayo espectrofotométrico de (FLVK-P) acoplado

La producción de ADP a partir de ATP que acompaña la transferencia de fosforilo se acopló a oxidación de NADH usando fosfoenolpiruvato (PEP) y un sistema que tiene piruvato-quinasa (PK) y deshidrogenasa láctica (LDH). La oxidación de NADH se monitorizó para seguir la disminución de la absorbancia a 340 nm (e_{340} = 6,22 cm^{-1} mM^{-1}) usando un espectrofotómetro Beckman DU 650. Las condiciones de ensayo para la VEGF-R2\Delta50 fosforilada (se indican como FLVK-P en las tablas siguientes) fueron las siguientes: PEP 1 mM; NADH 250 \muM; 50 unidades de LDH/mL; 20 unidades de PK/mL; DTT 5 mM; poli(E_{4}Y_{1}) 5,1 mM; ATP1 mM; y MgCl_{2} 25 mM en Hepes 200 mM, pH 7,5. Las condiciones de ensayo para VEGF-R2\Delta50 no fosforilada (indicada como FLVK en las tablas) fueron las siguientes: PEP 1 mM; NADH 250 \muM; 50 unidades de LDH/mL; 20 unidades de PK/mL; DTT 5 mM; poli(E_{4}Y_{1}) 20 mM; ATP 3 mM; y MgCl_{2} 60 mM y MnCl_{2} 2 mM en Hepes 200 mM, pH 7,5. Los ensayos se iniciaron con 5 a 40 nM de enzima. Los valores K_{i} se determinaron por medida de la actividad enzimática en presencia de concentraciones variables de los compuestos de ensayo. Los datos se analizaron empleando cinética enzimática y el programa de ordenador Kaleidagraf.

Ensayo ELISA

La formación de fosfogastrina se monitorizó usando como sustrato el péptido gastrina (1-17) biotinilado. La fosfogastrina biotinilada se inmovilizó usando placas de microtitulación de 96 pocillos revestidos con estreptavidina seguido por detección empleando anticuerpo anti-fosfotirosina conjugado con peroxidasa de rábano silvestre. La actividad de peroxidasa de rábano silvestre se monitorizó usando sal de diamonio de 2,2'-azinobis-[3-etilbenztiazolina-sulfonato] (ABTS). Las soluciones de ensayo típicas contenían: el péptido gastrina biotinilado 2 \muM; DTT 5 mM; ATP 20 \muM; MgCl_{2} 26 mM; y MnCl_{2} 2 mM en Hepes 200 mM, pH 7,5. El ensayo se inició con 0,8 nM de VEGF-R2\Delta50 fosforilada. La actividad de peroxidasa de rábano silvestre se ensayó usando ABTS, 10 mM. La reacción de peroxidasa de rábano silvestre se detuvo por adición de ácido (H_{2}SO_{4}), seguido por lectura de la absorbancia a 405 nm. Los valores K_{i} se determinaron por medida de la actividad enzimática en presencia de concentraciones variables de los compuestos de ensayo. Los datos se analizaron empleando cinética enzimática y el programa de ordenador Kaleidagraf.

Ensayo con CHK-1

La producción de ADP a partir de ATP que acompaña la transferencia de fosforilo al péptido sintético Syntide-2, (PLARTLSVAGLPGKK), que actúa como sustrato, se acopló a oxidación de NADH usando fosfoenolpiruvato (PEP) a través de las acciones de piruvato-quinasa (PK) y deshidrogenasa láctica (LDH). La oxidación de NADH se monitorizó para seguimiento de la absorbancia a 340 nm (\varepsilon_{340} = 6,22 cm^{-1} mM^{-1}) usando un espectrofotómetro HP8452. Las soluciones de reacción típicas contenían: PEP 4mM; NADH 0,15 mM; 28 unidades de LDH/ml; 16 unidades de PK/ml; DTT 3 mM; Syntide2\Sigma mM 0,125; ATP 0,15 mM; MgCl_{2} 25 mM en TRIS50 mM, pH 7,5; y NaCl 400 mM. Los ensayos se iniciaron con 10 nM de KH289 de CHK-1. Los valores K_{i} se determinaron por medida de la actividad enzimática en presencia de concentraciones variables de los compuestos de ensayo. Los datos se analizaron empleando cinética enzimática y el programa de ordenador Kaleidagraf.

Ensayo con CDS1

El ensayo con CDS1 se preparó condiciones idénticas a las del ensayo con CHK-1, excepto por el uso de 10 nM de CDS1.

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Ensayos con CDK2/Ciclina A y CDK4/Ciclina D

La actividad quinasa dependiente de ciclina se midió cuantificando la incorporación dependiente del tiempo, catalizada por la enzima, de fosfato radioactivo a partir de [^{32}P]ATP en un fragmento recombinante de la proteína retinoblastoma. A no ser que se indique otra cosa los ensayos se realizaron en placas de 96 pocillos a un volumen total de 50 \muL, en presencia de HEPES 10 mM (ácido N-[2-hidroxietil]piperazin-N'-[2-etanosulfónico]) (pH 7,4), MgCl_{2} 10 mM, adenosin-trifosfato (ATP) 25 \muM, 1 mg/mL de ovalbúmina, 5 \mug/mL leupeptina, ditiotreitol1 mM, 3-glicerofosfato 10 mM, vanadato de sodio 0,1 mM, fluoruro de sodio 1 mM, etilenglicol-ácido bis(\beta-aminoetil-éter)-N,N,N'N'-tetraacético (EGTA) 2,5 mM, dimetilsulfóxido al 2% (v/v), y 0,03 - 0.2 \muCi de [^{32}P]ATP. El sustrato (0,3-0,5 \mug) era el fragmento de la proteína de retinoblastoma recombinante (Rb) (residuos 386-928 de la proteína retinoblastoma natural; 62,3 kDa, que contenía la mayoría de los sitios de fosforilación encontrados en la proteína natural de 106 kDa, así como una cola de seis residuos de histidina para facilidad de purificación). Las reacciones se iniciaron con CDK2 (complejo CDK2 150 nM/Ciclina A) o CDK4 (complejo CDK4 50 nM/Ciclina D3), incubado a 30ºC, y terminadas después de 20 minutos por adición de ácido etilendiamintetraacético (EDTA) a 250 mM. El sustrato fosforilado se capturó luego sobre una membrana de nitrocelulosa empleando un distribuidor de filtración de 96 pocillos, y la radiactividad no incorporada se eliminó por lavados repetidos con ácido fosfórico al 0,85%. La radioactividad se cuantificó por exposición de las membranas de nitrocelulosa secas a un dispositivo de fosforescencia de imagen. Los valores de K_{i} aparente se determinaron por medida de la actividad enzimática en presencia de diferentes concentraciones de los compuestos de ensayo y sustrayendo la radiactividad de fondo en ausencia de la enzima. Los parámetros cinéticos (kcat, Km para ATP) se midieron para cada enzima en las condiciones usuales de ensayo determinando la dependencia de las velocidades iniciales sobre la concentración de ATP. Los datos se ajustaron a una ecuación de inhibición competitiva empleando el programa Kaleidagraf (de la firma Synergy Software), o se ajustaron a una ecuación de inhibición competitiva de fuerte fijación usando el programa de ordenador KineTic (BioKin, Ltd.). La actividad específica de CDK4 era la misma tanto complejada con la ciclina D3 de longitud completa como con la construcción de la ciclina D3 truncada; ambos complejos también proporcionaron valores de K_{i} muy similares para inhibidores
seleccionados.

Inhibición del crecimiento celular: Determinación de anti-proliferación con las líneas celulares cancerosas U2-OS, SAOS2, HCT116

La inhibición del crecimiento celular se midió usando el ensayo con sal de tetrazolio, que está basado en la capacidad de las células viables de reducir el bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-[2H]-difeniltetrazolio (MTT) a formazano (Mossman, J. Immunological Methods, 65, 55-58 (1983)). El producto formazano, de color púrpura, insoluble en agua se detectó espectrofotométricamente. Las líneas celulares HCT 116, U2-OS, y SAOS 2 se hicieron crecer cada una en placas de 96 pocillos, respectivamente. Las células se cultivaron en placa en un medio apropiado a un volumen de 135 \muL/pocillo en medio de McCoy 5A. Las placas se incubaron durante 4 h antes de la adición de los compuestos inhibidores.

Se añadieron diferentes concentraciones de compuestos inhibidores en dimetilsulfóxido al 0,5% (v/v) (\muL/pocillo), y las células se incubaron a 37ºC (5% de CO_{2}) durante cuatro a seis días (dependiendo del tipo de células). Al final de la incubación, se añadió MTT hasta una concentración final de 0,2 mg/mL, y las células se incubaron durante 4 h más a 37ºC. Después de centrifugación de las placas y retirada del medio, se midió la absorbancia del formazano (solubilizado en dimetilsulfóxido) a 540 nm. La concentración de compuesto inhibidor que causaba 50% de inhibición del crecimiento se determinó a partir de la porción lineal de la representación semi-logarítmica de la concentración de inhibidor frente al porcentaje de inhibición. Todos los resultados se compararon con las células testigos tratadas solamente con dimetilsulfóxido al 0,5% (v/v).

Los resultados de ensayos de los compuestos usando diversos ensayos se recogen resumidos en la tabla siguiente, donde una notación de "% @" indica el porcentaje de inhibición a la concentración establecida.

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Los compuestos descritos anteriormente pueden formularse en composiciones farmacéuticas de acuerdo con los generales ejemplos siguientes:

Ejemplo 1 Composición para vía parenteral

Para preparar una composición farmacéutica parenteral adecuada para administración por inyección, 100 mg de una sal soluble en agua de un compuesto de la fórmula I o la fórmula II se disuelven en DMSO y luego se mezclan con 10 mL de solución salina estéril al 0,9%. La mezcla se incorpora en una forma de dosificación unitaria adecuada para administración por inyección.

Ejemplo 2 Composición para vía oral

Para preparar una composición farmacéutica para administración oral, se mezclan 100 mg de un compuesto de fórmula I o fórmula II con 750 mg de lactosa. La mezcla, se incorpora en una unidad de dosificación oral, tal como una cápsula de gelatina dura, que es adecuada para administración oral.

Ejemplo 3 Composición para vía intraocular

Para preparar una composición farmacéutica de liberación prolongada para administración intraocular, se pone en suspensión un compuesto de fórmula I o fórmula II en una solución neutra e isotónica de ácido hialurónico (concentración 1,5%) en tampón de fosfato (pH 7,4) para formar una suspensión al 1%.

Claims (14)

1. Un compuesto de la fórmula I:

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en donde:

R^{5} y R^{6} son cada uno independientemente hidrógeno, halo, o un grupo alquilo C_{1}-C_{8}, alcoxi C_{1}-C_{8}, arilo, heteroarilo, acilo, tio-alquilo C_{1}-C_{12}, sulfonilo, o sulfoxilo sustituidos o no sustituidos; y

X es C-Y ó N, donde Y es hidrógeno, halo, NH_{2}, NO_{2}, o un grupo alquilo C_{1}-C_{12}, cicloalquilo C_{3}-C_{12}, heterocicloalquilo, alcoxi C_{1}-C_{12}, alquenilo C_{2}-C_{12}, arilo, heteroarilo, ariloxi, alquil C_{1}-C_{12}-amino, dialquil C_{1}-C_{12}-amino, tio-alquilo C_{1}-C_{12}, acilo, sulfonilo, sulfóxido, o tioarilo, sustituidos o no sustituidos.

o un solvato de dicho compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto.

2. Un compuesto, solvato o sal de acuerdo con la reivindicación 1, en donde:

R^{5} y R^{6} son cada uno independientemente hidrógeno, halo, o un grupo alquilo C_{1}-C_{8} sustituido o no sustituido; y X es C-Y o N, donde Y es hidrógeno, halo, NH_{2}, NO_{2}, un grupo alquilo C_{1}-C_{12} o arilo, sustituidos o no sustituidos.

3. Un compuesto, solvato o sal de acuerdo con la reivindicación 1, en donde:

R^{5} y R^{6} son cada uno independientemente hidrógeno o halo; y

X es C-Y o N, donde Y es hidrógeno, NH_{2}, ó NO_{2}.

4. Un compuesto de la fórmula II:

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en donde:

R^{5} y R^{6} son cada uno independientemente hidrógeno, halo, o un grupo alquilo C_{1}-C_{8}, alcoxi C_{1}-C_{8}, arilo, heteroarilo, acilo, tioalquil(C_{1}-C_{12})-sulfonilo, o sulfoxilo sustituidos o no sustituidos; y

W es O ó S;

o un solvato de dicho compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto.

5. Un compuesto, solvato o sal de acuerdo con la reivindicación 4, en donde:

R^{5} y R^{6} son cada uno independientemente hidrógeno, halo, o un grupo alquilo C_{1}-C_{8} sustituido o no sustituido; y

W es O ó S.

6. Un compuesto, solvato o sal de acuerdo con la reivindicación 4, en donde:

R^{5} y R^{6} son cada uno independientemente hidrógeno o halo; y W es O ó S.

7. El uso de un compuesto, solvato o sal farmacéuticamente aceptable como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un estado morboso en mamíferos, mediado por actividad de proteína-quinasa.

8. Un uso de acuerdo con la reivindicación 7, en donde el estado morboso está asociado con crecimiento tumoral, proliferación celular, o angiogénesis.

9. El uso de un compuesto, solvato o sal farmacéuticamente aceptable como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la fabricación de un medicamento para modular o inhibir la actividad de un receptor de proteína-quinasa.

10. Un uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el receptor de la proteína-quinasa es un complejo CDK, VEGF-R, FGF-1, CHK-1, CDS1, o LCK.

11. El uso de un compuesto, solvato o sal farmacéuticamente aceptable como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un estado morboso en un mamífero mediado por actividad de proteína-quinasa.

12. Un uso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el estado morboso está asociado con crecimiento tumoral, proliferación celular, o angiogénesis.

13. El uso de un compuesto, solvato o sal farmacéuticamente aceptable como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, para la fabricación de un medicamento para modular o inhibir la actividad de un receptor de proteína-quinasa.

14. Un uso de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el receptor de la proteína-quinasa es un complejo CDK, VEGF-R, FGF-1, CHK-1, CDS1, o LCK.