DK166883B1 - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 6-aminoalkylpenicillansyre-1,1-dioxider samt derivater eller salte deraf - Google Patents

Description

i DK 166883 B1

Den foreliggende opfindelse angår en analogifrem-gangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 6-amino-alkylpenicillansyre-1,1-dioxider som angivet i kravets indledning. De omhandlede forbindelser er med andre ord 5 6a~ og 6β-(aminomethyl og 1-aminomethylJpencillansyre- 1,1-dioxider, farmaceutisk acceptable salte deraf og konventionelle estere deraf, der in vivo er hydrolyserbare, bis-methandiolestere deraf eller blandede methandiolestere med β-lactamasehæmmere og sulbactam 10 (penicillansyre-l,l-dioxid), hvilke methandiolestere også er hydrolyserbare in vivo. Skønt nogle af disse forbindelser i sig selv har antibakteriel virkning, er deres væsentlige værdi som β-lactamasehæmmere. De er således anvendelige i kombination med konventionelle 15 β-lactamantibiotika (penicilliner og cephalosporiner) mod mikroorganismer, der er resistente eller delvis resistente overfor β-lactamantibiotika gennem produktion af β-lactamaseenzymer.

Beslægtede forbindelser, dvs. penicillansyre-1,1-20 dioxid og estere deraf er let hydrolyserbare in vivo (Barth, US-patentskrift nr. 4.234.579), bis-methandiol-esteren af sulbactam (Bigham, US-patentskrift nr.

4.309.347), forskellige 6(3- (hydroxymethyl)penicillansy-re-l,l-dioxider og estere deraf (Kellogg, US-patent-25 skrift nr. 4.287.181) og 6β-(aminomethyl)penicillansyre (McCombie, US-patentskrift nr. 4.237.051) er tidligere blevet beskrevet som β-lactamasehæmmere, der er anvendelige i kombination med β-lactamantibiotika til behandling af bakterielle infektioner. Antibakterielle 30 bis-estere af methandiol med penicilliner og penicil-lansyre-l,l-dioxid (Bigham, US-patentskrift nr.

4.244.951; Godtfredsen et al., US-patentskrift nr.

4.342.772) er også blevet beskrevet.

UK-Patentansøgning nr. 2.053.220, offentlig-35 gjort den 4. februar 1981, beskriver bredt β-lactamase-hæmmende forbindelser med formlen DK 166883 B1 2 0 0 ?h \ / ^_S^h3

0/ N O,C00R

cL

5

Definitionerne for Ra, og· Rc angiver bogstavelig talt et uendeligt antal forbindelser. Disse definitioner kan ved passende udvælgelse af R r R^ og Rc muligvis definere de enkle 6a- og 6β-(aminoalkyl)penicillan-10 syre-1,1-dioxider ifølge opfindelsen. Der er ikke i den nævnte UK-patentansøgning angivet nogen specifik fremgangsmåde til fremstilling af disse forbindelser, og der er ingen antydning eller angivelse af, at blandt den uendelighed af foreslåede forbindelser er de om-15 handlede aminomethyl- og 1-aminoethylforbindelser foretrukne forbindelser, der besidder den særligt yderst kraftige β -1 ac tama s ehaanmende virkning, som nu er blevet konstateret.

De omhandlede forbindelser har formlerne 1 (S>-N-W1 25 og \ . /n r \ R O O \ • H2N“''.( ,X/H3 11

\ I f"H PM

30 \ S' ® '"coc/r1 / n hvori R er hydrogen eller methyl, og n er 2 og R1 er -CH0-, eller 35 n er 1 og R er hydrogen, en radikalgruppe der danner en ester, der er hydrolyserbar under fysiologiske betingelser, DK 166883 B1 3

1,1-dioxopenicillanoyloxymethyl, eller H

5 NH2 I_ Η I ^ 3 (T " *i cooch2- hvori Y er hydrogen, hydroxy, 10 (C2-C^)-alkanoyloxy, (C2“C^)-alkoxycarbonyloxy, benzoyloxy, eller benzoyloxy monosubstitueret med (C^-C^)-alkyl, (C^-C4)-alkoxy eller halogen, 15 eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf eller, såfremt er hydrogen, farmaceutisk acceptable kationiske salte deraf.

For fagmænd er det klart, at såfremt R er methyl, angiver hver af formlerne I og II to forskel-20 lige diastereoisomere (epimere). Afhængigt af den absolutte stereokemi betegnes sidekæderne i disse epimere par lR-aminoethyl og lS-aminoethyl. I hvert tilfælde har en epimer sidekædekonfiguration R og den anden S. Det samme gælder med hensyn til formlerne III 25 og IV, V og VI og VII og VIII nedenfor. Disse isomere par er i almindelighed adskillige ved søjlechromato-grafi på et antal trin i de totale processer, der er angivet nærmere nedenfor.

Farmaceutisk acceptable syreadditionssalte 30 inkluderer, men er ikke begrænset til salte med saltsyre, svovlsyre, salpetersyre, phosphorsyre, citronsyre, maleinsyre, succinsyre, benzensulfonsyre, p-toluen-sulfonsyre, 2-naphthalensulfonsyre og methansulfonsyre. Farmaceutisk acceptable kationiske salte inkluderer, 35 men er ikke begrænset til saltene af natrium, kalium, calcium, Ν,Ν'-dibenzylethylendiamin, N-methylgluccamin (meglumin) og diethanolamin.

DK 166883 B1 4

Henvisningen til estere, der er hydrolyserbare under fysiologiske betingelser henviser til de estere, der ofte benævnes "pro-drugs". Sådanne estere er nu lige så velkendte og almindelige indenfor penicillinteknikken 5 som farmaceutisk acceptable salte. Sådanne estere anvendes i almindelighed til at forøge den orale absorption, men hydrolyseres under alle omstændigheder let in vivo til udgangssyren. Foretrukne estere har ingen tendens til hydrogenolyse under de betingelser, 10 der fortrinsvis anvendes til deres fremstilling (se nedenfor). De mere foretrukne esterdannende radikaler er: Y-butyrolacton-4-yl, -CHR2OCOR3, og 15 -CHR2OCOOR3, 2 3 hvori R er hydrogen eller methyl, og R er (Ci~Cg)alkyl. De mest foretrukne grupper er pivaloyl-oxymethyl og 1-ethoxycarbonyloxyethyl.

Såfremt n er 1, og er 1,1-dioxopenicillanoyl-20 oxymethyl, O O \ / "Ή >CH3 N v'c-o-ch - n ^

25 O

er forbindelserne med formlerne I og II diestere af methandiol. Sådanne estere er også hydrolyserbare under fysiologiske betingelser, idet de giver udgangssyren 30 med formlen I eller II, hvori n er 1, og R3- er H samt penicillansyre-l,l-dioxid. Den sidstnævnte forbindelse har også β-lactamasehæmmende virkning. Såfremt n er 2, og R1 er -CH2~, hydrolyseres bis-esteren ligeledes under fysiologiske betingelser, idet der nu produceres 35 to molekyler af udgangs syren fra hvert molekyle af bisesteren.

Både 6β-forbindelserne (I) og 6a-forbindelserne (II) er uafhængigt af sidekædestereokemien, når R er methyl, kraftige β-lactamasehæmmere. Til oral anvendel- DK 166883 B1 5 se foretrækkes det, at R"*" er forskellig fra hydrogen. Såfremt er en gruppe, der danner en ester, der er hydrolyserbar in vivo, er de foretrukne grupper defineret ovenfor. På grund af, at det let fremstilles i en 5 yderst ren krystallinsk tilstand (direkte anvendelig hos pattedyr som et farmaceutisk acceptabelt salt) er pivaloyloxymethyl-6a-(aminomethyl)penicillanat-l,l-dioxid-p-toluensulfonatsaltet en særlig værdifuld forbindelse i denne række. 6a-(Aminomethyl)derivaterne 10 Hf hvori n er 1, og R^ er 1,1-dioxopenicillanoylmethyl eller n er 2, og R1 er -CH2-, fremstilles også let og har særlig værdi til oral anvendelse.

Både ββ-forbindelserne I og 6a-forbindelserne II er uafhængigt af sidekædestereokemien, når R er 15 methyl, kraftige β-lactamasehasnmere.

Forbindelserne med formlerne I og II er anvendelige som hæmmere for β-lactamaseenzymer. Ved denne mekanisme forøger disse forbindelser virkningen af β-lactamantibiotika (penicilliner og cephalosporiner) 20 især overfor de mikroorganismer, der er resistente eller delvis resistente overfor 3-lactamantibiotikum:et gennem produktionen af enzymer (β-lactamaser), der ellers ville ødelægge eller delvis ødelægge β-lactam-antibiotikumet. På denne måde forøges β-lactamanti-25 biotikumets virkningsspektrum.

β-Lactamantibiotikaene er en af de mest velkendte og mest udbredt anvendte klasser af antibakte-rielle midler. Disse forbindelser er karakteristiske ved en kerne bestående af en 2-azetidinon (β-lactanOring, 30 der er kondenseret med enten en thiazolidin- eller en dihydro-l,3-thiazinring. Når kernen indeholder en thiazolidinring benævnes forbindelserne i almindelighed generisk som penicilliner, hvorimod forbindelserne, når kernen indeholder en dihydrothiazinring, benævnes 35 cephalosporiner. Mens de omhandlede forbindelser er effektive til at forøge virkningen af β-lactamantibiotika i almindelighed, ligger deres foretrukne anvendelse i kombination med en penicillin eller cephalosporin DK 166883 B1 6 med etableret klinisk anvendelighed, nemlig amoxicillin, ampicillin, azlocillin, bacampicillin, carbenicillin, carbeniciliinindanyl, carbenicillinphenyl, cefaclor, cefadroxil, cefaloram, cefamandol, cefamandolnafat, 5 cefaparol, cefatrizin, cefazolin, cefonicid, cefmenoxim, cefodizim, cefoperazon, cefoanid, cefotaxim, cefoxitin, cefsulodin, ceftazidim, ceftizoxim, ceftriaxon, cefur-oxim, cephacetril, cephalexin, cephaloglycin, cephalori-din, cephalothin, cephapirin, cephradin, cyclacillin, 10 epicillin, hetacillin, levopropylcillin, mecillinam, mezlocillin, penicillin G, penicillin V, phenethicillin, piperacillin, pirbenicillin, pivampicillin, sarmoxi-cillin, sarpicillin, suncillin, talampicillin og ticar-cillin,inklusive de farmaceutisk acceptable salte deraf.

15 De navne, der anvendes for disse β-lactamer, er i almindelighed USAN, dvs. United States Adopted Names. Foretrukne kombinationer er med ampicillin eller et ampicillinderivat, med amoxicillin eller et amoxicillin-derivat eller bedst med cefoperazon.

20 Skønt forbindelserne fremstillet ifølge opfindelsen kan administreres separat fra β-lactamantibiotikumet, foretrækkes kombinationsdosisformer. Den farmaceutiske komposition, hvadenten den er til oral eller parenteral anvendelse,indeholder i et forhold på 1:3 til 3:1 efter 25 vægt en β-lactamasehæmmer med formlen I eller II og et β-lactamantibiotikum i totale mængder, der er tilstrækkelige *til med held at behandle en bakterieinfektion hos et menneske eller pattedyr i en enkelt eller mere almindeligt et antal doser.

30 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del anførte.

Ved den omhandlede opfindelse anvendes udgangsforbindelser med de stereokemiske formler

(/ OR O O

' * i \ / \ C^Hj-CH^O CNHCH4 ^ CH3\

Lluu ** '''/COQfe5 DK 166883 Bl 7 og / OR O O , / » ' \ / \ /C6H5CH20CNHC^_ CH3|

5 1 Γη Γ CH3 IV

6^ N S cooå5 \ z hvori 10 R er hydrogen eller methyl, og n er 2 og R^ er -CH--, eller 5 2 n er 1 og R er benzyl, en radikalgruppe der danner en ester, der er hydrolyserbar under fysiologiske 15 betingelser, 1,1-dioxopenicillanoyloxymethyl, eller

H

'T-f*\-C-COMU JL CH3 20 \=/i y—]CYch3 o' N //C0CH2- hvori Y" er hydrogen, benzyloxycarbonyloxy, 25 (C2~C7)-alkanoyloxy, (C2-C7)-alkoxycarbonyloxy, benzoyloxy, eller benzoyloxy monosubstitueret med (C^-C^)-alkyl·, ) -alkoxy eller halogen, 30 og Z er azido, eller benzyloxycarbonylamino.

Udgangsforbindelserne med formlerne III og IV fremstilles i almindelighed ud fra benzyl-6,6-dibrom-penicillanat eller ud fra benzyl-6a-iodpenicillanat, og under denne fremstilling indgår der forbindelser med 35 følgende formler.

DK 166883 B1 8

O R

C^CH-OCNHCH* A . CH, O D Δ + _ j

J Γ'Η fCH3 ' V

cr N ''' cooch2c6h5

5 OR

C6H5CH2°JnHK Λ/CH3 6u;ch3 cy N '' COOCH2CgH5 in 0 O 0 0 \ / = ▼ hvori A er Sf S, S eller S, og R er hydrogen eller methyl;

R

15 Y'iH4—^VCH3

Bf j Y' H CH3 VII

(T N '** COOCH-C^H-

Δ Ό D

og 20

R

Y'CE, S CH3 B^j pH PCH3 VI11 θ' " ''' COOCH_C^H_ 2 6 5 25 hvori Y' er benzyloxycarbonyland.no, amino, azido eller trifluormethansulfonyloxy, og 30 R er hydrogen eller methyl.

En foretrukken reaktionsvej, især til 6β-(amino-methyl)rækken, involverer som et første trin omdannelse af dibromforbindelsen til en epimer blanding af mono-Grignard-reagenser. Dette gøres bekvemt ved en udskift-35 ningsreaktion under anvendelse af i det væsentlige en molær ækvivalent methylmagnesiumbromid i et etheropløs-ningsmiddel (ether, tetrahydrofuran, dimethoxyethan) ved lav temperatur (-50 til -100°C) bekvemt ved -78°C, DK 166883 B1 9 temperaturen for et acetone-tørisbad. Efter en kort reaktionstid (5 til 30 minutter) ved en sådan nedsat temperatur, bringes mono-Grignard-reagenserne i kontakt med i det væsentlige 0,5 molære ækvivalenter benzyloxy-5 carboxamidomethylacetat (i almindelighed fortyndet med det samme etheropløsningsmiddel og sat til det kolde Grignard-reagens med en sådan hastighed, at reaktionsblandingens lave temperatur opretholdes). Reaktionstiden er ikke kritisk; 0,5 til 2 timer ved -50 til -100°C er 10 i almindelighed tilstrækkeligt til at opnå fuldstændig omsætning. Blandede epimere med de ovennævnte formler VHog VIII hvori Y* er behzyoxycarbonylamino udvindes let ved eddikesyreneddæmpning, koncentrering og chro-matografi. Epimerblandingen kan anvendes direkte i det 15 næste trin eller kan,om det ønskes, separeres ved yderligere søjlechromatografi på silicagel.

Det næste trin i rækkefølgen er reduktiv fjernelse af bromatomet, hvilket bekvemt udføres ved behandling med overskud af tri-n-butyltinhydrid, eventuelt i nær-20 værelse af små mængder (mindre end 0,1 molære ækvivalenter) fri radikalinitiator såsom 2,2'-azobisisobutyro-nitril (AIBN). Her og senere er "reaktionsinert opløsningsmiddel" defineret som et opløsningsmiddel, der ikke reagerer med udgangsmaterialer, reagenser, mellem- DK 166883 B1 10 produkter eller produkter på en måde, der klart reducerer udbyttet af det ønskede produkt. I det omhandlede tilfælde er carbonhydridopløsningsmidler såsom benzen eller toluen velegnede. Temperaturen bør være hasvet 5 (60 til 100°C), således at omsætningen foregår på et rimeligt tidsrum, men ikke så høj, så den forårsager utilsigtet termisk nedbrydning. Når dette trin udføres på de blandede epimerprecursorer udvindes ββ-epimeren (V), hvori A er S, i almindelighed ved krystallisation, 10 om ønsket udvindes 6a-epimeren (VI, A = S) fra modervæsken ved inddampning og chromatografi.

En anden foretrukken reaktionsvej isasr til 6a-(aminomethyl)rækken er at omsætte en kold etheropløs-ning af Grignard-reagenset fra benzyl-6a-iodpenicillanat 15 med et benzyloxycarboxamidomethylacetat under betingelser som beskrevet ovenfor. Den resulterende blanding af forbindelser V og VI, hvori A er S, kan adskilles ved søjlechromatografi, men oxideres fortrinsvis til 1,1-dioxider og udsættes derefter for C-6 epimeriserings-20 betingelser til opnåelse af den rene α-epimer (VI, A = SO2) som beskrevet nærmere nedenfor.

Til dannelse af la- og Ιβ-oxider med formlerne V og VI/ hvori A er S«»»»0 eller S^O, oxideres de ovennævnte sulfider med formlerne V og VI, hvori A er 25 S med i det væsentlige 1 molær ækvivalent persyre, bekvemt m-chlorperbenzoesyre i et reaktionsinert opløsningsmiddel såsom ethylacetat ved 0-50°C. Såfremt benzyl-δβ- (benzyloxycarbonylaminomethyl) penicillanat (V, R = H, A = S) oxideres, isoleres det resulterende 30 α-oxid (V, R = H, A = S^O) ved krystallisation, mens β-oxidet (V, R = H, A = S ^ O) isoleres fra modervæsken ved inddampning. Om ønsket kan der anvendes andre standard sulfoxiddannende reagenser.

Om Ønsket omdannes benzyl-ββ-(benzyloxycarbonyl-35 aminomethyl)penicillanat-^-oxid (V, A = S^O) til den tilsvarende 6a epimer (VI, A = S ^ O) ved at bringe den førstnævnte i kontakt med en askvi valent 1,5-diaza-bicyclo[4.3.0]non-5-en (DBN) ved 0-50°C bekvemt ved 25°C, DK 166883 B1 11 hvor omsætningen er færdig på meget kort tid (3-15 minutter) . På tilsvarende vis omdannes et 6{3-dioxid (V, A = SO2) til dets 6a epimer (VI, A = SC^).

Oxidation af sulfiderne V og VI, hvori A er S 5 eller yderligere oxidation af de ovennævnte sulfoxider med overskud af persyre (men ellers under betingelser som beskrevet i almindelighed ovenfor for monooxiddan-nelse) giver de tilsvarende sulfoner (1,1-dioxider) med formlerne V og VI, hvori A er SC^- Om ønsket kan 10 der anvendes andre sulfondannende reagenser såsom KMn04·

Hydrogenolyse af de resulterende benzyl-6-(a eller (5) (benzyloxycarbonylaminoalkyl)penicillanat-l,l-dioxider (V og VI, A = S02) frembringer de tilsvarende 15 6-(cc eller β) (aminomethyl eller l-aminoethyl)penicillan-syrer (I og II, Q = = H). Hydrogenolyse udføres ved fremgangsmåder, der er velkendte indenfor penicillinteknikken. Substratet bringes i et reaktionsinert opløsningsmiddel i kontakt med hydrogen i nærværelse af 20 en ædelmetalkatalysator såsom palladium, platin eller rhodium eventuelt i form af dets oxid eller et salt eller på et bæremiddel såsom carbon, et jordalkali-carbonat eller aluminiumoxid. Temperaturen er ikke kritisk (f.eks. 0 til 50°C), men er fortrinsvis 25°C 25 eller mindre for at minimisere termisk nedbrydning.

Trykket kan varieres over et bredt område (subatmosfærisk til 100 atmosfærer), men vil for bekvemmelighedens skyld i almindelighed ligge i området fra 1 til 7 atmosfærer. Det reaktionsinerte opløsningsmiddel er fortrins-30 vis relativt lavtkogende, så det let kan fjernes ved koncentrering i vakuum. Vandig tetrahydrofuran er et opløsningsmiddel, der er særligt velegnet til det omhandlede formål. Den foretrukne katalysator er palladium understøttet på carbon.

35 For at fremstille en in vivo hydrolyserbar ester [dvs. en forbindelse med formlerne I eller II, hvori Q er hydrogen, og er en gruppe, der danner en ester, der er hydrolyserbar under fysiologiske DK 166883 B1 12 betingelser] beskyttes aminogruppen i 6-(aminoalkyl)pe-nicillansyre-1,1-dioxidet først med en benzyloxycarbonyl-gruppe under anvendelse af metoder, der er velkendte indenfor teknikken. F.eks. tilsættes benzylchlorfornat 5 langsomt til aminen i et reaktions inert opløsningsmiddel såsom vandig acetone eller vandig tetrahydrofuran, mens pH holdes ved 8,0 ved en temperatur på 0-35°C, fortrinsvis 0-20°C. På denne måde dannes forbindelser med formlerne IX og X, hvori R1 er H. Alternativt 10 dannes sådanne forbindelser ved delvis hydrogenering af forbindelser med formlen V og VI, hvori A er S02-Bortset fra at begrænse hydrogenoptagelsen anvendes betingelser som beskrevet ovenfor.

OR O O

15 RI \ / -py

CfiH^CH2OCNHCH ^ CH^ IX

1 f'E Γ CH3 N ''' COOR1 og 20

OR 0 0 X

c6b5ch2ocnhch ^ CH3

I [Ή I

é-N ""C00R1 25

De sidstnævnte mellemprodukter omdannes derefter til de ønskede estere med formlerne IX og X, hvori R^ nu er en in vivo hydrolyserbar ester,efter kendte metoder, der let erkendes af fagmænd indenfor penicillinteknik-30 ken (se f.eks. US-patentskrifterne nr. 4.234.579 og 4.287.181 og europæisk patentpublikation nr. 40.494) . Foretrukne esterbetegnelser for R^ er defineret ovenfor; foretrukne metoder til fremstilling af sådanne estere er anført i særlige eksempler nedenfor og i europæisk 35 patentpublikation nr. 40.494.

De beskyttede estere IX og X omdannes til de ønskede estere med formlen I eller II, hvori Q er hydrogen, idet bevares som esterfunktionen,ved hydrogene- DK 166883 B1 13 ring fortrinsvis i nærværelse af en svagt sur puffer indeholdende ækvimolære mængder svagt basisk amin såsom pyridin og en stærk syre såsom en mineralsyre (f.eks.

HC1, HNO^, I^SO^) eller fortrinsvis en sulfonsyre (så-5 som methansulfonsyre, benzensulfonsyre eller p-toluen-sulfonsyre) i Øvrigt efter de metoder, der er beskrevet ovenfor, idet der omhyggeligt sørges for at minimisere udsættelsen for betingelser (f.eks. vand, lavere alkoholer, stor aciditet eller basicitet), der vil frem-10 bringe hydrolyse af den følsomme ester eller β-lactam-grupper. Det foretrækkes at isolere esteren direkte fra reaktionsblandingen i form af syreadditionssaltet, hvor syren er den, der anvendes i pufferen. En særligt foretrukken puffer er pyridinium-p-toluensulfonat i 15 hvilket tilfælde produktet i almindelighed isoleres som dets p-toluensulfonatsalt.

Forbindelserne med formlerne I og II i det første alternativ (dvs. hvori n er 1, R er hydrogen, og Q er forskellig fra hydrogen) fremstilles let ved reduk-20 tiv alkylering af de enkle 6-(aminomethyl)forbindelser med de ovennævnte formler I og II, hvori R og Q begge er hydrogen,i nærværelse af en ækvimolær mængde af det tilsvarende aldehyd under anvendelse af natriumcyano-borhydrid som reduktionsmiddel. En molær ækvivalent 25 af aldehydet er fuldt ud tilfredsstillende, der anvendes i almindelighed et overskud af natriumcyanobor-hydrid, f.eks. ca. 2/3 mol pr. mol substrat. Temperaturen er ikke kritisk og kan ligge i området 0-50°C; bekvemt anvendes omgivelsernes temperatur.

30 De ovenfor definerede farmaceutisk acceptable syreadditionssalte ifølge opfindelsen fremstilles let efter standardmetoder. F.eks. kombineres en ækvivalent af syren med forbindelsens frie aminform i et organisk eller vandigt organisk opløsningsmiddel. Saltet isole-35 res ved koncentrering og/eller tilsætning af et ikke-opløsningsmiddel. I nogle tilfælde isoleres saltet direkte fra en reaktionsblanding uden isolering af den frie amin.

DK 166883 B1 14

De ovenfor definerede farmaceutisk acceptable kationiske salte af forbindelser ifølge opfindelsen med en fri carboxylsyregruppe fremstilles også let efter standardmetoder. F.eks. kombineres en ækvivalent 5 af det tilsvarende kationiske hydroxid, carbonat eller hydrogencarbonat eller en amin med carboxylsyren i et organisk eller vandigt opløsningsmiddel, fortrinsvis ved nedsat temperatur (f.eks. 0-5°C) under kraftig omrøring og langsom tilsætning af basen. Saltet isoleres 10 ved koncentrering og/eller tilsætning af et ikke-opløs-ningsmiddel. I nogle tilfælde isoleres saltet direkte fra en reaktionsblanding uden isolering af den frie syreform.

Bis-methandiolesterene III og IV såvel som de 15 med formlerne I og II, hvori n er 1, og er 1,1-dioxo-penicillanoyloxymethyl,eller n er 2, og R^ er -CE^-r fremstilles også ud fra de aminobeskyttede penicillan-syrer IX og X, hvor R1 er H. Ved ét alternativ omdannes de sidstnævnte forindelser først til de tilsvarende 20 chlormethylestere. Den foretrukne metode er at omdanne syren til dens tetrabutylammoniumsalt, der derefter omsættes med et overskud af chlormethyliodid ved 0-50°c, fortrinsvis ved 25°C eller mindre.

Skønt en chlormethylester kan anvendes direkte 25 i det næste trin, foretrækkes det først at omdanne chlormethylesteren til den tilsvarende iodmethylester. Kontakt mellem chlormethylesteren og natriumiodid i acetone ved 0-50°C, indtil omsætningen i det væsentlige er afsluttet, udgør betingelser, der er særligt vel-30 egnede til dette formål.

Iodmethylesteren omsættes derefter i et reaktionsinert opløsningsmiddel ved 0-50°C med et salt af penicillansyre-l,l-dioxid; et salt af den samme aminobeskyttede penicillansyre IX eller X, hvori R^ er Hf 35 et salt af azidocillin [6-(D-2-phenyl-2-azidoacetamido)-penicillansyre] eller et salt af et ampicillin- eller amoxicillinderivat med formlen DK 166883 B1 15

H

yn// 'V-C—CONH. A . CH-

\=/ A ^-(Qfc H

NH Η I 3 i yy-n- '/

5 CO or 'COOH

o ®2C6a5 hvori Y" er H, benzyloxycarbonyloxy,)alkoxycarbo-10 nyloxy, benzoyloxy eller benzoyloxy monosubstitueret med (C^-C^)alkyl, (C^-C4)alkoxy eller halogen (F, Cl eller Br) . Det foretrukne salt er tetrabutylammonium-saltet, eftersom det reagerer meget hurtigt med iod-methylesteren og derved minimiserer nedbrydning.

15 Ved et andet alternativ fremstilles bis-methan- diolestrene III og IV såvel som estrene med formlen I eller II, hvori n er 1, og er 1,1-dioxopenicillanoyl-oxymethyl, ved omsætning af det ovennævnte salt af en aminobeskyttet penicillansyre IX eller X, hvori R1 er 20 H,med en halogenmethylester (fortrinsvis en iodmethyl-ester) af penicillansyre-l,l-dioxid,af azidocillin eller af et ampicillin- eller amoxicillinderivat med formlen XI ovenfor.

Ved begge alternativer omdannes den resulteren-25 de beskyttede methandioldiester derefter til det ønskede slutprodukt med formlen I, II [hvor n er 1, og Γ er 1,1-dioxopenicillanoyloxymethyl, eller n er 2, og er -CH2-], III eller IV ved hydrogenering urider anvendelse af metoder, der er angivet ovenfor, idet udsættelsen 30 for betingelser, der spalter de følsomme methandiol-esterbindinger igen minimiseres. De farmaceutisk acceptable mono- eller disyreadditionssalte af disse methan-dioldiestere fremstilles under anvendelse af en eller to ækvivalenter af den passende syre efter de metoder, der 35 er beskrevet ovenfor.

En anden foretrukken reaktionsvej til mellemprodukterne med formlerne VII og VIII, hvori Y' er benzyloxycarbonylamino,især når R er methyl, er at DK 166883 B1 16 fremstille dem ud fra det tilsvarende kendte benzyl-6a-(hydroxymethyl eller 1-hydroxyethyl)-63“brompenicillanat og benzyl-6β-(hydroxymethyl eller 1-hydroxyethyl)-6α-brompenicillanat (også fremstillet ud fra benzyl-6,6-5 dibrompenicillanat)· I det første trin omdannes de ovennævnte hydroxymethyl- eller 1-hydroxyethylforbindelser til de tilsvarende trifluormethansulfonatestere (VII og VIII, Y1 = trifluormethansulfonyloxy). Denne omsætning udføres 10 bekvemt ved stuetemperatur under anvendelse af trifluor-methansulfonsyreanhydrid som reagens i et reaktionsinert opløsningsmiddel såsom methylenchlorid i nærværelse af i det mindste en ækvivalent tert-amin såsom pyri-din eller diisopropylethylamin.

15 I det andet trin erstattes sulfonatgruppen med azid, idet azidomethylforbindelserne med formlerne VII og VIII, hvori Y1 er azido, dannes. Et fremragende reagens til dette formål er tetramethylguanidiniumazid i moderat overskud. Omsætningen udføres ved 0-25°C, 20 fortrinsvis ca. 10°c i et reaktionsinert opløsningsmiddel såsom chloroform eller methylenchlorid.

I det tredie trin reduceres azidogruppen til en aminogruppe, hvilket giver forbindelser med formlerne VII og VIII, hvori Y' er amino. Et bekvemt reagens 25 til dette formål er hydrogensulfid i nærværelse af en tertiær amin såsom triethylamin i et reaktionsinert opløsningsmiddel såsom chloroform. Gasformig hydrogensulfid bobles gennem reaktionsblandingen ved 0-50°C, indtil reduktionen i det væsentlige er afsluttet (i al-30 mindelighed ca. 3-4 timer ved 25°).

Endelig beskyttes aminogruppen med en benzyl-oxycarbonylgruppe under standardbetingelser. F.eks. benzylchlorformat som reagens i nærværelse af en tertiær amin såsom pyridin eller Ν,Ν-diisopropylethylamin i et 35 reaktionsinert opløsningsmiddel såsom methylenchlorid ved 0-50°C, fortrinsvis ved nedsat temperatur (0-10°C).

De resulterende forbindelser med formlerne VII og VIII, hvori Y' er benzyloxycarbonylamino forarbejdes derefter DK 166883 B1 17 yderligere efter de metoder, der er anført ovenfor.

Som angivet ovenfor har nogle af forbindelserne med formlerne I og II, i almindelighed de, hvori R^" er hydrogen,in vitro antibakteriel virkning. Sådan virkning 5 vises ved at måle de minimale hæmmende koncentrationer (MIC) i yg/ml overfor et antal mikroorganismer. Den procedure, der følges er den, der anbefales af "International Collaborative Study on Antibiotic Sensitivity Testing” (Ericcson og Sherris, Acta. Pathologica et 10 Microbiologia Scandinav. Supp. 217, section B: 64-68 [1971]) og anvender hjerne-hjerteinfusionsagar (BHI) og indpodningsgentagelsesapparatet. Glas, der er dyrket natten over, fortyndes 100 gange til brug som standardindpodningskultur (20.000 til 10.000 celler 15 i omtrent 0,002 ml anbringes på agaroverfladen; 20 ml BHI agar/plade). Tolv dobbelte fortyndinger af prøveforbindelsen anvendes, idet prøvemidlets begyndelseskoncentration er 200 yg/ml. Der ses bort fra enkeltkolonier ved aflæsning af pladerne efter 18 timer 20 ved 37°C. Prøveorganismens følsomhed (MIC) accepteres som den laveste koncentration af forbindelse, der er i stand til at frembringe fuldstændig væksthæmning bedømt med det blotte øje.

De forbindelser med formlerne I og II, der har 25 den nævnte in vitro antibakterielle virkning er således anvendelige som industrielle antimikrobielle midler, f.eks. ved vandbehandling, slimkontrol, malingskonservering og trækonservering samt til topisk anvendelse som desinfektionsmiddel. I det tilfælde, hvor disse 30 forbindelser anvendes til topisk anvendelse, er det ofte bekvemt at blande den aktive ingrediens med et ikke toxisk bæremiddel såsom en vegetabilsk eller mineralsk olie eller en blødgørende creme. Tilsvarende kan den opløses eller dispergeres i flydende fortyndings-35 midler eller opløsningsmidler såsom vand, alkanoler, glycoler eller blandinger deraf. I de fleste tilfælde er det passende at anvende koncentrationer af den aktive ingrediens på fra ca. 0,1 til ca. 10 vægt% på DK 166883 B1 18 basis af den totale komposition.

Som også angivet ovenfor er forbindelserne med formlerne I og II af mere særlig værdi som kraftige hæmmere for mikrobielle β-lactamaser. Ved denne mekanis-5 me forøger de den antibakterielle effektivitet af β-lac-tamantibiotika (penicilliner og cephalosporiner) overfor mange mikroorganismer især de, der producerer en β-lactamase. Denne evne ved de nævnte forbindelser med formlen I eller II til at forøge effektiviteten af 10 et β-lactamantibiotikum kan bedømmes under henvisning til eksperimenter, hvori MIC-værdierne for antibiotikumet alene og en forbindelse med formlen I eller II 1 (med R^· som hydrogen) alene bestemmes. Disse MlC-vær- dier sammenlignes derefter med de MIC-værdier, der 15 opnås med en kombination af det givne antibiotikum og forbindelsen med formlen I eller II, hvori R1 er hydrogen. Såfremt den antibakterielle virkning af kombinationen er betydeligt større end hvad der ville være forudsagt ud fra virkningerne af de individuelle for-20 bindeiser,anses dette for at angive en forøgelse af virkningen. MIC-Værdierne for kombinationer måles under anvendelse af den metode, der er beskrevet af Barry og Sabath i "Manual of Clinical Microbiology", redigeret af Lenette, Spaulding og Truant, 2. udgave, 25 1974, American Society for Microbiology. Den omhandlede β-lactamasehæmmende virkning er for to repræsentative forbindelser blandt de omhandlede dokumenteret i nedenstående tabel.

DK 166883 B1 19 i—i >1 -C P d)

E

O co oo Π I Γ" r-

•H gi * ·, ID

Bu O O CM

M 7 ...

<u 15-, + + +

C CQ CO

0 (tf -H CD CO ID

t4_i Η X Γ- Γ" CM

H H O ·» *

3 -Η -H O O

to + o *d

1 -Η I

E fa CH

«3 M O) - C U Qh-) (1) . O.

S' , O ^ >1

Em $ W o

^ E

Η 0 σ> σι η) E ro ro ro g \ -H i *- - in

g E E Q) ' o o CM

gro ro u tf ^ >s + + + 1. tji S tt .

m O C Ό σ> CT> ID

Q, Sh <β -H ro ro cm frt O Η X * ·»

lp -H ri O O O

QJ E *H *H

^ u w + o »d

Η -Η I

W u-< U Em £ί Ή rtj ιϋ H fxj <1) **

Eh SU DmH

Sm QJ C 0 •H

ti i ro ro c td *d iH -H VD in o

g Η X CM CM O

C -H O ·» ·> H

ro o -H 10 10 Λ χ -η »d ' ro i + + + 7. ω «η

Di »· ID LD O

rM CM CM O

d-4 + i. * *“ H

Ϊ „S - 10 * S' 8 ί Η

C

Αί H 1 -Η m > S ο ο ο CM '3 Ο ID Ο

Η Η π CM CM

ο uro λ •Η Μ 0) μ ro! ro -Η DJ οι

J2 rH

•Η ο ρ ϋ ΛΙ Λ| ro ω <d| ** · Η) Η

Ml ΜΙ ΜΙ DK 166883 B1 20

Forbindelserne med formlerne I og IX forøger den antibakterielle effektivitet af β-lactamantibiotika in vivo. Det vil sige,de nedsætter den mængde af antibiotikumet, der er nødvendig for at beskytte mus mod 5 en ellers dødelig indpodning af visse β-lactamaseprodu-cerende bakterier. Ved bestemmelsen af en sådan virkning produceres akutte eksperimentelle infektioner hos mus ved intraperitoneal indpodning på musen med en standardkultur af prøveorganismen suspenderet i 5% svinemave-10 mucin. Infektionens alvorlighed standardiseres således, at musene modtager en letal dosis af organismen (den letale dosis er den minimale indpodning af organismen, der kræves til konsistent at dræbe 100% af de inficerede ikke behandlede kontrolmus). Prøveforbindelsen i 15 kombination med antibiotikumet gives i fprskellige dosisniveauer p.o. eller i.p. til grupper af inficerede mus. Ved prøvens afslutning bedømmes blandingens virkning ved at tælle antallet af overlevende blandt behandlede dyr ved en given dosis. Virkningen udtryk-20 kes som den procentdel af dyrene, der overlever ved en given dosis eller beregnes som PD,^ (den dosis, der beskytter 50% af dyrene mod infektion).

Den evne ved forbindelserne med formlerne I og II, at de forøger effektiviteten af et β-lactamanti-25 biotikum overfor β-lactamaseproducerende bakterier, gør dem værdifulde til co-administrering med β-lactam-antibiotika ved behandlingen af bakterielle infektioner hos pattedyr især mennesker. Ved behandlingen af en bakterieinfektion kan forbindelsen med formlen I eller 30 II sammenblandes med β-lac tamantibiotikumet, og de to midler kan derved indgives samtidigt. Alternativt kan forbindelsen med formlen I eller II indgives som et separat middel under forløbet af behandlingen med et β-lactamantibiotikum. I nogle tilfælde vil det være 35 fordelagtigt at fordosere patienten med forbindelsen med formlen I eller II inden behandlingen med β-lactam-antibiotikumet startes.

DK 166883 B1 21

Ved anvendelse af en forbindelse med formlen I eller II til at forøge effektiviteten af 8-lactamantibioti-kum indgives en blanding af I eller II med β-lactam-antibiotikumet,fortrinsvis i formulering med standard-5 farmaceutiske bæremidler eller fortyndingsmidler- En farmaceutisk komposition omfattende en farmaceutisk acceptabel bærer, et β-lactamantibiotikum og en forbindelse med formlen I eller II vil normalt indeholde fra ca. 5 til ca. 80 vægt% af den farmaceutisk accep-10 table bærer.

Ved anvendelse af forbindelserne med formlen I eller II i kombination med et andet β-lactamantibiotikum kan forbindelserne indgives oralt eller parenteralt, dvs. intramuskulært, subkutant eller intraperitonealt.

15 Skønt den ordinerende læge i sidste ende vil bestemme den dosis, der skal anvendes hos en menneskelig patient, vil forholdet mellem de daglige dosis af forbindelserne med formlen I eller II og β-lactamantibiotikumet normalt ligge i området fra ca. 1:3 til 3:1 efter 20 vægt. Yderligere vil den daglige orale dosis af hver komponent normalt ligge i området fra ca. 10 til ca. 200 mg pr. kg legemsvægt, og den daglige parenterale dosis af hver komponent vil normalt være ca. 10 til ca. 40 mg pr. kg legemsvægt, når forbindelserne med formlen I 25 eller II anvendes i kombination med et andet β-lactamantibiotikum. Disse daglige dosis vil i almindelighed være opdelte. I nogle tilfælde vil den ordinerende læge beslutte, at dosis udenfor disse grænser er nødvendige .

30 Som det vil være kendt for fagmænd,er nogle β-lactamforbindelser effektive, når de administreres oralt eller parenteralt, mens andre kun er effektive, når de indgives ad parenteral vej. Når en forbindelse med formlen I eller II skal anvendes samtidigt (dvs.

35 sammenblandet) med et β-lactamantibiotikum, der kun er effektiv ved parenteral indgift, vil det være nødvendigt med en kombinationsformulering, der er egnet til parenteral anvendelse. Når en forbindelse med form DK 166883 B1 22 len I eller II skal anvendes samtidigt (sammenblandet) med en β-lactamantibiotikum, der er effektivt oralt eller parenteralt kan der fremstilles kombinationer, der er egnede til enten oral eller parenteral indgift.

5 Det er yderligere muligt at indgive præparater af forbindelserne med formlerne I oralt,mens der samtidig indgives et yderligere β-lactamantibiotikum parenteralt, og det er også muligt at indgive præparater af forbindelserne med formlen I parenteralt, mens det yderligere 10 β-lactamantibiotikum på samme tid indgives oralt.

Den omhandlede opfindelse belyses af de følgende eksempler. Med mindre andet er anført er protonkerne-magnetisk resonansspektrene ved 60 MHz.

15 Eksempel 1

Benzyl-6a-brom-^- (benzyloxycarbonylaminomethyl) peni- cillanat og bei^l-63-brcm-6a-(benzyloxycarbonylaminomethyl)peni-cillanat.

Til en opløsning af benzyl-6,6-dibrompenicilla-20 nat (108,73 g, 0,242 mol) i 600 ml tør tetrahydrofuran (THF) afkølet til -78°C sattes en etheropløsning af methylmagnesiumbromid (83,5 ml 2,9 M). Efter omrøring i 15 minutter ved -78° tilsattes en opløsning af ben- 23 DK 166883 Bl zyloxycarboxamidomethylacetat (27 g, 0,121 mol) i 200 ml tør THF over 10 minutter. Efter omrøring i 1 time ved -78° dæmpedes reaktionen ved tilsætning af 14,52 ml eddikesyre. Blandingen opvarmedes til stuetemperatur, 5 og flygtige stoffer fjernedes in vacuo ved mindre end 35°C. Ethylacetat tilsattes for at opløse resten, og opløsningen vaskedes med vand (100 ml), vandig NaHCO^ (100 ml) og 2 x 100 ml vand, tørredes derefter over Na2S04 og koncentreredes in vacuo til 113 g olieagtigt produkt. Olien søjlechromatograferedes 10 på 1,2 kg silicagel, idet der først elueredes med 6 liter 1:1 hexan: chloroform og derefter med chloroform. De første seks liter eluat bortkastedes. Yderligere eluat opsamledes 1 25 ml1s fraktioner. Fraktionnumrene 181-190 koncentreredes. PNMR-spektret af resten i CDCl^ viste benzyl- 15 6a-brom-6p-(benzyloxycarbonylaminomethyl)penicillanat: 6/TMS 1,37 (3H, s), 1,57 (3H, s), 3,86 (2H, d, J = 6Hz), 4,42 (IH, s), 5,06 (2H, s), 5,12 (2H, s), 5,52 (IH, s), 7,25 (10H, s). Fraktionnumrene 201-249 koncentreredes og PNMR-spektret af denne rest i CDCl^ viste benzyl-20 6f3-brom-6a- (benzyloxycarbonylaminomethyl)penicillanat: δ/TMS 1,36 (3H, s), 1,60 (3H, s), 3,90 (2H, d, J =6,2Hz), 4,47 (IH, s), 5,07 (2H, s), 5,14 (2H, s), 5,40 (IH, t, J = 6,2Hz, 5,47 (IH, s), 7,28 (5H, s), 7,30 (5H, s). Produktet fra fråktionnumrene 171-240 kombineredes og 25 koncentreredes til 22 g skum og anvendtes i forsøget i eksempel 2.

Eksempel 2

Benzyl-63- (benzyloxycarbonylaminomethyl) penicillanat.

Til en opløsning af titelprodukter (epimer 30 blanding) fra det foranstående eksempel (22 g, 0,0413 mol) i 100 ml benzen sattes tri-n-butyltinhydrid (32,7 ml, 0,124 mol). Blandingen tilbagesvaledes under N2 i 2 timer, koncentreredes in vacuo til en olie, og olien tritureredes med 4 x 100 ml hexan. Den resterende visko- 35 se olie blev taget op i 70 ml ether, hvorfra titelproduktet krystalliserede over 1 time. [8,1 g i to portioner] PNMR/CDCl3/6/g?MS: 1,37 (3H, s), 1,57 (3H, s), DK 166883 B1 24 3,58 (3H, m), 4,34 (IH, s), 5,04 (2H, s), 5,12 (2H, s), 5,33 (IH, d, J = 4Hz), 7,32 (10H, s).

Eksempel 3

Benzyl-6β- (benzyloxycarbonylaminomethyl)penicillanat-5 la-oxid og benzyl-δβ-(benzyloxycarbonylaminomethyl) -penic illanat-ip-oxid.

Til en opløsning af titelprodukt fra det foranstående eksempel (4,54 g, 0,01 mol) i 70 ml ethylace-tat sattes m-chlorperbenzoesyre (2,02 g, 0,01 mol) 10 i 30 ml ethylacetat. Blandingen omrørtes i 30 minutter ved stuetemperatur, vaskedes med 1 x 50 ml mættet NaHCOg og 2 x 50 ml H20, tørredes over Na2S04 og koncentreredes in vacuo til en viskos olie. Olien opløstes i 50 ml ether og 10 ml CHCl^ og krystallisation af 15 titel-a-oxidet fremkaldtes ved skrabning [2,2 g, smp. 123-124°C, PNMR/CDCl3/6/TMS 1,22 (3H, s), 1,51 (3H, s), 3,7 (3H, m), 4,34 (IH, s), 4,63 (IH, d, J = 4Hz), 5,13 (2H, s), 5,22 (2H, s), 5,50 (IH, m), 7,34 (5H, s), 7,40 (5H, s)]. Koncentrering af modervæsken til tørhed 20 in vacuo gav titel-p-oxidet som en viskos olie [2,5 g? PNMR/CDCl4/6/TMS 1,05 (3H, s), 1,60 (3H, s), 3,8 (3H, m), 4,63 (IH, s), 4,73 (IH, d, J = 4 Hz), 5,13 (2H, s), 5,23 (2H, q), 5,70 (IH, m), 7,35 (5H, s), 7,39 (5H, s)].

Eksempel 4 25 Benzyl-6a-(benzyloxycarbonylaminomethyl)penicillanat-ΐβ-oxid.

Til titel-p-oxidet fra det foranstående eksempel (2,3 g, 4,9 mmol) i 100 ml CHCl^ sattes 1,5-diaza-bicyclo[4.3.0]non-5-en (DBN, 0,607 g, 4,9 mmol). Blan-30 dingen omrørtes ved stuetemperatur i 15 minutter, fortyndedes med 50 ml 1 N HC1, og lagene adskiltes. Det organiske lag vaskedes med 2 x 50 ml H20, tørredes over Na2S04 og koncentreredes in vacuo til en olie (2,3 g).

Olien søjlechromatograferedes på 100 g silicagel, idet 35 der elueredes med 4:1 CHCl^:ethylacetat i 20 ml's fraktioner. Fraktionerne 41-70 samledes og koncentreredes DK 166883 B1 25 in vacuo til opnåelse af titelproduktet som en viskos olie [0,9 g; PNMR/CDC13/TMS 1,03 (3H, s), 1,60 (3H, s), 3,67 (3H, m), 4,46 (IH, s), 4,88 (IH, m), 5,08 (2H, s), 5,17 (2H, q), 5,39 (IH, m), 7,32 (5H, s), 7,37 (5H, s)].

5 Eksempel 5

Benzyl-6£-(benzyloxycarbonylaminomethyl)penicillanat- 1.1- dioxid.

Til en opløsning af titelprodukt fra eksempel 2 (8,0 g, 0,0176 mol) i 200 ml ethylacetat afkølet til 10 0 til 5°C sattes m-chlorperbenzoesyre (10,68 g, 0,0528 mol). Blandingen opvarmedes til stuetemperatur, omrørtes i 6 timer, genafkøledes til 0-5°C og fortyndedes med 50 ml mættet NaHSO^. Det organiske lag separeredes, vaskedes med 2 x 50 ml mættet NaHCO^ og 2 x 50 ml H^O,

15 tørredes over Na2S04 og koncentreredes in vacuo til en viskos olie (8,6 g). Olien chromatograferedes på 250 g silicagel, idet der elueredes med 19:1 CHC13:ethylacetat i 25 ml fraktioner. Fraktionerne 44-150 samledes og koncentredes in vacuo til opnåelse af titelprodukt 20 som et hvidt gummiagtigt skum [7,6 g; PNMR/CDCl3/6/TMS

1,25 (3H, s), 1,49 (3H, s), 3,98 (3H, m), 4,45 (IH, s), 4,59 (IH, d, J = 4Hz), 5,09 (2H, s), 5,19 (2H, q), 5,36 (IH, br), 7,36 (10H, s)].

Eksempel 6 25 Benzyl-6a-(benzyloxycarbonylaminomethyl)penicillanat- 1.1- dioxid.

Efter proceduren fra eksempel 4 omdannedes titel-1,1-oxidet fra det foranstående eksempel (3,3 g, 6,79 mmol) til det nærværende titelprodukt (3,1 g råt) 30 og rensedes ved søjlechromatografi på 150 g silicagel, idet der elueredes med 1:9 ethylacetat :CHC1<3 i 20 ml fraktioner. Fraktionerne 26-37 samledes og koncentreredes in vacuo til opnåelse af renset titelprodukt som en viskos olie, der krystalliserede ved henstand [1,9 g? smp.

35 112-113°C? PNMR/CDCl3/6/TMS 1,20 (3H, s), 1,49 (3H, s), 3,65 (3H, m), 4,32 (lH, s), 4,59 (IH, m), 5,07 (2H, s), DK 166883 B1 26 5,14 (2H, q), 5,30 (IH, br), 7,32 (10H, s)].

Det nærværende titelprodukt opnåedes også ved yderligere oxidation af titelproduktet fra eksempel 4 med overskud af m-chlorperbenzoesyre efter fremgangs-5 måden i eksempel 5.

Eksempel 7 6β-(Aminomethyl)penicillansyre-l,l-dioxid.

Titelproduktet fra eksempel 5 (1,9 g), THF (40 ml) ^0 (40 ml) og 10% Pd/C (1,9 g) samledes og 10 hydrogeneredes ved 50 psig i 1 time. Katalysatoren genudvandtes ved filtrering, og THF fjernedes fra. filtratet in vacuo. Det vandige lag vaskedes med 30 ml ethylacetat, frysetørredes til et hvidt pulver,og en første krystallinsk portion (0,26 g) opnåedes ved 15 triturering af pulveret med 5 ml vand. En anden portion (0,14 g) krystalliseredes ved tilsætning af 10 ml acetone til modervæsken, og en tredie portion (0,35 g) ved inddampning af den anden modervæske til 2 ml og tilsætning af 50 ml acetone. Totalt udbytte af titel-20 produkt var 0,75 g [PNMR/250 MHz/D20/6/DSS 1,47 (3H, s), 1,59 (3H, s), 3,74 (2H, m), 4,36 (IH, td, J = 4; 5,5Hz), 4,45 (IH, s), 5,17 (IH, d, J=4Hz)].

Eksempel 8 6a-(Aminomethyl)penicillansyre-1,1-dioxid.

25 Efter fremgangsmåden fra det foranstående ek sempel omdannedes titelprodukt fra eksempel 6 (1,7 g) til det nærværende titelprodukt, bortset fra at det krystallinske produkt opnåedes direkte ved koncentration in vacuo efter ethylacetatekstraktionen [0,7 g; 30 PNMR/250 MHz/D20/DSS 1,44 (3H, s), 1,59 (3H, s), 3,63 (2H, d, J = 5,5Hz), 4,07 (IH, td, J = 2; 5,5Hz), 4,31 (IH, s), 5,06 (IH, d, J = 2Hz)].

DK 166883 Bl 27

Eksempel 9

Benzyl-63-brom-6a-trifluormethansulfonyloxymethylpeni- cillanat.

Til en opløsning af trifluormethansulfonsyre-5 anhydrid (3,15 ml) i methylenchlorid (20 ml) ved stuetemperatur sattes en opløsning af benzyl-63-brom-6a-(hydroxymethyl)penicillanat (6,232 g, 15,6 mmol) og pyridin (1,89 ml) i methylenchlorid (20 ml), og blandingen omrørtes og afkøledes i et isbad i 45 minutter.

10 Methylenchloridet afdampedes under reduceret tryk, og resten opdeltes mellem ethylacetat og vand. Ethylacetat-fasen fjernedes, og den vandige fase ekstraheredes med yderligere ethylacetat. De samlede ethylacetatopløsninger vaskedes først med natriumhydrogencarbonatopløsning 15 ved pH 8,3 og derefter med saltopløsning. Efter tørring på vandfri natriumsulfat inddampedes opløsningen under reduceret tryk til opnåelse af titelproduktet som et orange fast stof [8,296 g; PNMR/CDCl-j/δ/TMS 1,41 (s, 3H), 1,63 (s, 3H), 4,51 (s, IH), 4,87 (s, 2H) , 5,14 (s, 2H), 20 5,44 (s, IH), 7,30 (s, 5H) ] .

Eksempel 10

Benzyl-6a-azidomethyl-63-brompenicillanat,

Tetramethylguanidiniumazid (2,96 g, 18,7 mmol) sattes til en opløsning af benzyl-6j3-brom-6a-trifluor-25 methylsulfonyloxymethylpenicillanat (8,296 g, 15,6 mmol) i chloroform (50 ml) ved 10°C. Reaktionsblandingen omrørtes i 1 time og reduceredes derefter til en tredie-del af rumfanget og filtreredes gennem et silicagellag.

Laget elueredes med 10% ethylacetat/chloroform (100 ml) , 30 og eluatet inddampedes til opnåelse af en ravfarvet Olie [6,744 g} PNMR/CDCl3/6/TMS 1,38 (s, 3H), 1,61 (s, 3H) , 3,96 (s, 2H), 4,53 (s, IH), 5,17 (s, 2H), 5,40 (s, IH), 7,34 (s, 5H)].

DK 166883 B1 28

Eksempel 11

Benzyl-6a-brom-6f3-trifluormethansulfonyloxymethylpeni- cillanat.

Efter proceduren i eksempel 9 omsattes benzyl-5 6a-brom-6|3-hydroxymethylpenicillanat (0,548 g, 1,4 mmol) i methylenchlorid (4 ml) indeholdende pyridin (0,17 ml) med en opløsning af trifluormethansulfonsyreanhydrid (0,42 ml) i methylenchlorid (3 ml) til opnåelse af titelproduktet i form af en ravfarvet olie [641 mg; 10 PNMR/CDCl3/6/TMS 1,43 (s, 3H), 1,62 (s, 3H), 4,52 (s, IH), 4,88 (q, 2H), 5,19 (s, 2H), 5,62 (s, IH), 7,35 (s, 5H)].

Eksempel 12

Benzyl-6a-brom-6 β-az idomethylpenic illanat.

15 Til en opløsning af benzyl-6a-brom-6f}-trifluor- methansulfonyloxymethylpenicillanat (641 mg, 1,2 mmol) i chloroform (10 ml) sattes tetramethylguanidiniumazid (229 mg, 1,2 mmol) ved 10°C. Reaktionsblandingen omrør-tes i 1 time og inddampedes derefter under reduceret 20 tryk. Den olieagtige rest filtreredes gennem et silica-gellag og elueredes derfra med 10% ethylacetat/chloro-form. Inddampning af eluatet gav titelproduktet i form af en ravfarvet olie [420 mg; PNMR/CDCl^/S/TMS 1,43 (s, 3H), 1,61 (s, 3H), 3,91 (s, 2H), 4,48 (s, IH), 25 5,15 (s, 2H), 5,57 (s, IH), 7,37 (s, 5H)].

Eksempel 13

Benzyl-6a- (aminomethyl) -6f3-brompenicillanat.

Hydrogensulfid bobledes ind i en hurtigt om-30 rørt opløsning af benzyl-6a-azidomethyl-6{3-brompenicillanat (541 mg, 1>3 mmol) og triethylamin (0,71 ml, 4 ækvivalenter) i chloroform (10 ml) il time. Reaktions-blandingen inddampedes derpå in vacuo til en rød olie.

NMR-data viste, at resten omfattede det ønskede produkt 35 forurenet med triethylamin [PNMR/CDC1^/6/TMS 1,39 (s, 3H), 1,64 (s, 3H), 3,35 (s, 2H) , 4,51 (s, IH) , 5,16 (s, 2H), 5,35 (s, IH), 7,33 (s, 5H)].

DK 166883 B1 29

Eksempel 14

Benzyl-6-3-brom-6-<x-(benzyloxycarbonylaminomethyl) penicil-lanat.

En opløsning af pyridin (0,14 ml) og benzyl 6-α-5 aminomethyl-6-3-brompenicillanat (239 mg, 0,6 mmol) i methylenchlorid (5 ml) sattes med en sprøjte over et 5 minutters tidsrum til en opløsning af benzylchlorformat i methylenchlorid (5 ml),og reaktionsblandingen omrørtes i et isbad under nitrogenatmosfære i 75 minutter. Reak-10 tionsblandingen inddampedes in vacuo, og resten optoges i ethylacetat/vand. pH justeredes til 2,9 med fortyndet saltsyre, ethylacetatfasen fjernedes og ekstraheredes med fortyndet natriumhydrogencarbonatopløsning (pH 8,1), vaskedes med saltopløsning og tørredes på vandfri natri-15 umsulfat. Inddampning under reduceret tryk gav 312 mg, der optoges i chloroform og chromatograferedes på sili-cagel (15 g, 14 x 20 cm søjle) og elueredes derfra med 5% ethylacetat/chloroform. Fraktioner på hver 4 ml opsamledes. Fraktionerne 14-27 samledes og inddampedes un-20 der reduceret tryk til opnåelse af titelproduktet [168 mg, PNMR/CDCl^/6/TMS.konsistent med titelproduktet og identisk med spektret for den samme forbindelse, fremstillet i eksempel 1].

25 Eksempel 15

Benzyl-6-β-(benzyloxycarbonylaminomethyl)penicillanat En opløsning af tri(n-butyl)tinhydrid (0,25 ml) og benzyl-6-3-brom-6-a-(benzyloxycarbonylaminomethyl)penicillanat (168 mg, 0,31 mmol) i benzen (4 ml) tilbage-30 svaledes i 2 timer. Benzenet afdampedes derefter in vacuo og resten tritureredes med hexan (3 x 2 ml). Den resterende rest optoges derefter i ethylacetat/vand, ethylacetatfasen fjernedes, vaskedes med saltopløsning og tørredes på vandfri natriumsulfat. Afdampning in vacuo 35 gav 101 mg olie, der chromatograferedes på silicagel (4 g, 1 x 11 cm kolonne), opstillet med chloroform og elueret med 5% ethylacetat/chloroform. Der opsamledes fraktioner med et rumfang på 4 ml. Fraktionerne 3-5 sam- DK 166883 B1 30 ledes og inddampedes til opnåelse af titelproduktet (66 mg, identificeret ved PNMR som identisk med produktet fra eksempel 2),

Eksempel 16 5 6β-(Benzylaminomethyl)-penicillansyre-1,1-dioxid

Til en tåget opløsning af (3-aminomethyltitel-produktet fra eksempel 7 (0,3 g, 1,145 mmol) i 30 ml methanol sattes benzaldehyd (0,117 ml, 1,145 mmol) efterfulgt af natriumcyanoborhydrid 147,6 mg, 0,758 10 mmol). Blandingen orarørtes under N2 i 30 minutter ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen klaredes ved filtrering og koncentreredes til et skum in vacuo. Skummet opløstes i 30 ml H20, ekstraheredes med 2 x 20 ml ethylacetat og frysetørredes til titelproduktet som 15 en hvid glas (130 mg, PNMR/D20/6/DSS 1,57 (3H, s), 1.69 (3H, s), 3,7-4,4 (5H, m), 4,38 (IH, s), 5,21 (IH, d, J =4Hz), 7,56 (5H, s) .

Eksempel 17 6(3- (2-Phenylethylaminomethyl) penicillansyre-1,1-dioxid.

20 Titel-|3-aminomethylproduktet fra eksempel 7 (0,1 g) omsattes med phenylacetaldehyd (0,098 ml) efter metoden fra det foranstående eksempel. Reaktionsblandingen koncentreredes in vacuo,og fast stof udvandtes ved triturering med 20 ml ethylacetat. Det faste stof 25 opløstes i vand, opløsningen samledes med et vandekstrakt fra ethylacetatfasen og frysetørredes til opnåelse af titelproduktet [40 mg, PNMR/D20/6/DSS 1,56 (3H, s) , 1.70 (3H, s), 3,0-4,0 (6H, m) , 4,28 (IH, m), 4,41 (IH, s), 5,24 (IH, d, J = 4Hz) ,7,48 (5H, s)].

30 Eksempel 18 6β- (4-Picolylaminomethyl) penicillansyre-1,1-dioxid.

Titei-β-aminomethylproduktet fra eksempel 7 (0,1 g, 0,38 mmol) opslemmedes i 4 ml vand. 4-Pyridin-carbaldehyd (0,040 ml, 0,42 mmol) og derefter natrium-35 cyanoborhydrid (15,8 mg, 0,25 mmol) tilsattes,og bian- DK 166883 B1 31 dingen omrørtes under nitrogen i 30 minutter ved stuetemperatur. Den tågede opløsning klaredes, koncentreredes in vacuo, resten optoges i 5 ml H^O, ekstraheredes med 10 ml ethylacetat og frysetørredes til opnåelse 5 af titelproduktet i form af en hvid glas [0,1 g, PNMR/ D20/6/DSS 1,53 (3H, s), 1,64 (3H, s), 3,3-4,1 (5H, m), 4,35 (IH, s), 5,14 (IH, d, J = 4Hz), 8,1 (4H, m)].

Eksempel 19 6β-(3-Picolylaminomethyl)panicillansyre-1,1-dioxid.

10 Proceduren fra det foranstående eksempel gav ved at anvende 3-pyridincarbaldehyd (0,039 ml) i stedet for 4-pyridincarbaldehyd det nærværende titelprodukt [70 mg, PNMR/D20/6/DSS 1,59 (3H, s), 1,71 (3H, s), 3,7- 4,5 (5H, m), 4,45 (IH, s), 5,23 (IH, d, J = 4Hz), 8,1 15 (4H, m)].

Eksempel 20 6a-(Benzylaminomethyl)penicillansyre-1,1-dioxid.

Titel-a-aminomethylforbindelsen fra eksempel 8 (0,5 g, 1,91 mmol) omsattes med benzaldehyd (0,194 ml, 20 1,91 mmol) og natriumcyanoborhydrid (79,4 mg, 1,259 mmol) i ialt 26 ml methanol efter metoden fra eksempel 16. Efter den 30 minutters omrøringsperiode klaredes reaktionsblandingen ved filtrering og koncentreredes in vacuo til en skumagtig rest. Resten opløstes i 25 50 ml ethylacetat og råprodukt (0,45 g) udfældedes ved tilsætning af hexan. Råproduktet (0,35 g) opløstes i 30 ml vand, ekstraheredes med 2 x 30 ml ethylacetat og koncentreredes in vacuo til opnåelse af titelproduktet som en glas [0,28 g, PNMR/D20/6/DSS 1,54 (3H, s), 1,67 30 (3H, s), 3,47 (2H, m), 4,03 (3H, m), 4,33 (IH, s), 4,98 (IH, d, J = 2Hz) ,7,53 (5H, s)].

Eksempel 21 6a- (2-Phenylethylaminomethyl) penicillansyre-1,1-dioxid Proceduren fra det foranstående eksempel gav 35 ved anvendelse af phenylacetaldehyd (0,446 ml) i stedet DK 166883 B1 32 for benzaldehyd titelproduktet. Isoleringen modificeredes ved,at råproduktet først udfældedes som en gummi, da hexanet sattes til ethylacetatet. Gummien isoleredes ved dekantering og opdeltes mellem 20 ml ethylacetat 5 og 20 ml H20, og uopløseligt materiale (100 mg) fjernedes ved filtrering. Det vandige lag frysetørredes til opnåelse af renset titelprodukt som et gult fast stof [0,18 g, PNMR/D20/6/DSS 1,55 (3H, s), 1,70 (3H, s), 2,9-4,0 (7H, m), 4,34 (IH, s), 5,10 (IH, d), 7,43 (5H, 10 s)] .

Eksempel 22 6a- (4-Picolylaminomethyl) penicillansyre-1,1-dioxid.

Proceduren fra eksempel 20 gav ved anvendelse af 4-pyridincarbaldehyd (0,182 ml) i stedet for benz-15 aldehyd titelproduktet. Isoleringen modificeredes ved, at filtratet efter filtrering af reaktionsblandingen koncentreredes in vacuo til et gult skum, der triture-redes med ethylacetat, optoges i 10 ml H20 og vaskedes med 20 ml frisk ethylacetat. Det vandige lag genkoncen-20 treredes in vacuo til opnåelse af titelproduktet som et andet gult skum (0,38 g, PNMR/D20/6/DSS 1,57 (3H, s), 1,70 (3H, s), 3,39 (2H, m) , 4,0 (3H, m), 4,32 (IH, s), 5.01 (IH, d, J = 2Hz) ,8,1 (4H, m) ] .

Eksempel 23 25 6a- (3-Picolylaminomethyl)penicillansyre-1,1-dioxid.

Proceduren fra det foranstående eksempel gav ved at anvende 3-pyridincarbaldehyd (0,182 ml) i stedet for 4-pyridincarbaldehyd titelproduktet. Isoleringen modificeredes ved,at det oprindeligt isolerede gule skum op-30 toges i 10 ml H20, ekstraheredes med 2 x 10 ml ethylacetat, og det vandige lag frysetørredes til opnåelse af titelproduktet som et andet gult skum [0,39 g, PNMR/D20/6/DSS 1,57 (3H, s), 1,70 (3H, s), 3,43 (2H, m) , 4.1 (3H, m), 4,30 (IH, s), 5,00 (IH, d, J =2Hz),8,l (4H, 35 m) .

DK 166883 Bl 33

Eksempel 24 6a-(4-Hydroxybenzylaminomethyl)penicillansyre-1,1-dioxid.

Efter proceduren fra det foranstående eksempel omsattes titelprodukt fra eksempel 8 (0,1 g, 0,38 mmol) 5 med 4-hydroxybenzaldehyd (46,6 mg, 0,38 mmol) og na-triumcyanoborhydrid (15,8 mg, 0,25 mmol) i 5 ml methanol til fremstilling af frysetørret titelprodukt i form af et hvidt fast stof [0,1 g, PNMR/D20/6/DSS 1,53 (3H, s), 1,68 (3H, s), 3,52 (2H, m), 4,1 (3H, m), 4,33 (IH, 10 s), 5,00 (IH, d, J = 2Hz), 7,1 (4H, m) .

Eksempel 25

Benzyl-6a- (benzyloxycarbonylaminomethyl) penicillanat og benzyl-63- (benzyloxycarbonylaminomethyl) penicillanat.

Det fornødne Grignard-middel fremstilledes i det 15 væsentlige efter DiNinno et al., J. Org. Chem. 42, side 2960-2965 (1977). Således opløstes benzyl-6α-iodpeni-cillanat i 75 ml tør tetrahydrofuran og afkøledes til -78°C under tør N2· Methylmagnesiumbromid (5,6 ml 3 M i ether) tilsattes dråbevis. Efter omrøring i yderlige-20 re 15 minutter tilsattes en opløsning af benzyloxycarb-onylaminomethylacetat (1,87 g) i 25 ml tør tetrahydrofuran i én portion. Efter yderligere 15 minutters omrøring ved -78°C tilsattes eddikesyre (2 ml), blandingen opvarmedes til 0°C og inddampedes in vacuo. Resten for-25 deltes mellem 250 ml ethylacetat og 50 ml vand. Det organiske lag fjernedes, vaskedes med 1 x 100 ml mættet NaHCO^ og 2 x 100 ml saltopløsning, tørredes på Na^O^ og inddampedes in vacuo til en olie (7,3 σ). Olien chromatograferedes på 250 g silicagel, idet der elue-30 redes med 1:10 ethylacetat:chloroform i 20 ml's fraktioner. Fraktionerne 20-24 indeholdt 1,3 g biprodukt (olie), fraktionerne 25-34 indeholdt 0,62 g 3:2 β:α-blanding af titelprodukter efter PNMR assay. Fraktionerne 35-60 indeholdt 2,2 g 3:1 a:3-blanding af titelpro-35 dukterne.

DK 166883 B1 34

Eksempel 26

Benzyl-6a-brom-6{3- (lR-trifluormethansulfonyloxyethyl) pe-nicillanat.

Benzyl-6a-brom-63-(lR-hydroxyethyl)penicillanat 5 (DiNinno et al., J. Org. Chem. 42, side 2960-2965, 1977; 20,28 g, 0,0489 mol) opløstes i 400 ml CS^Clj og afkøledes med et acetone-isbad. Pyridin (7,91 ml, 2 ækvivalenter) tilsattes og derefter dråbevis trifluormethansul-fonsyreanhydrid (11,58 ml, 1,4 ækvivalenter), mens 10 temperaturen holdtes ved -5°C. Blandingen omrørtes ved 0° i 30 minutter, fortyndedes med CK~C12, vaskedes i rækkefølge med mættet NaHCO^,-li^O og mættet NaCl, inddampedes invacuo og fortyndedes med 1:1 hexan, hvorved titelproduktet udkrystalliseredes, 18,71 g:, PNMR/CDCl^/ 15 δ/TMS: 1,42 (3H, s), 1,55 (3H, d, J = 6Hz),l,66 (3H, s), 4,58 (IH, s), 5,20 (2H, s), 5,34 (IH, q, J = 6Hz), 5,56 (IH, s), 7,38 (5H, s).

Eksempel 27

Benzyl-6a-brom-63“ (lS-azidoethyl) penicillanat.

20 Titelprodukt fra det foranstående eksempel (34,4 g, 0,0628 mol) opløstes i 400 ml C^C^. Tetra-butylammoniumazid (25,0 g, 1,4 ækvivalenter) i 100 ml tilsattes dråbevis, og blandingen omrørtes i 1 time ved 25°C. strippedes in vacuo, og den re- 25 sterende olie filtr'eredes gennem 500 g silicagel i en sintret glastragt, idet der elueredes med 2 liter CH2CI2. Inddampning gav titelproduktet som en bleggul olie , 27 g; PNMR/CDCl3/6/TMS: 1,40 (3H, s), 1,53 (3H, d, J = 6,3Hz), 1,57 (3H, s), 4,10 (IH, q, J = 6,3Hz), 30 4,47 (IH, s), 5,19 (2H, s), 5,61 (IH, s), 7,34 (5H, s).

Eksempel 28

Benzyl-63- (lS-aminoethyl) -6a-brompenicillanat.

Titelproduktet fra det foranstående eksempel (27,0 g, 0,0613 mol) opløstes i 300 ml CHCl^. Triethyl-35 amin (35 ml, 4 ækvivalenter) tilsattes, og derefter bobledes H2S gennem reaktionsblandingen i 3,5 time.

DK 166883 B1 35

Reaktionsblandingen skylledes derefter med N2 i 0,5 time og strippedes for CHCl^ in vacuo. Den resulterende olie fordeltes mellem ether og 1 N HC1 (200 ml). Ether-laget ekstraheredes med 3 x 200 ml frisk 1 N HC1. De 5 samlede vandige lag fortyndedes med ethylacetat,og pH i tofasesystemet justeredes til 8,5. Det organiske lag fjernedes og inddampedes til opnåelse af titelproduktet i form af en olie (6,34 g). Det oprindelige etherlag fortyndedes med vand, og pH justeredes til 10 8,5. Etherlaget fjernedes og inddampedes til opnåelse af yderligere titelproduktet,6,0 g; PNMR/CDCl^/S/TMS.

1,28 (3H, d, J = 6,3Hz), 1,40 (3H, s), 1,58 (3H, s), 3,34 (IH, q, J = 6,3Hz), 4,45 (IH, s), 5,16 (2H, s), 5,54 (IH, s), 7,33 (5H, s).

15 Eksempel 29

Benzyl-63- (lS-benzyloxycarbonylaminoethyl) -6a-brom-penicillanat.

Benzylchlorformat (5,10 ml, 1,2 ækvivalenter) opløstes i 20 ml CH2C12, afkøledes i et acetone-isbad.

20 En opløsning af titelprodukt fra det foranstående eksempel (12,34 g, 0,02980 mol) i 50 ml CH2C12 indeholdende diisopropylethylamin (7,78 ml, 1,5 ækvivalenter) tilsattes dråbevis, idet temperaturen opretholdes på 0-5°C med et isvandbad. Reaktionsblandingen omrørtes 25 i 20 minutter, strippedes for CH2C12 in vacuo, fortyndedes med ethylacetat og vand (pH noteredes at være 8,2) og justeredes til pH 2,0 med fortyndet HC1. Det organiske lag fjernedes, vaskedes med H20 og derefter mættet NaCl og inddampedes til opnåelse af titelpro-30 dukt som en bleggul olie, 17 gj PNMR/CDCl^/S/TMS: 1,35 (3H, s), 1,38 (3H, d), 1,55 (3H, s), 4,26 (IH, m), 4,45 (IH, s), 4,97 (IH, d), 5,08 (2H, s), 5,14 (2H, s), 5,53 (IH, s), 7,33 (10H, s).

Eksempel 30 35 Benzyl-ββ- (lS-benzyloxycarbonylaminoethyl) penicillanat.

Titelprodukt fra det foranstående eksempel 36 DK 166883 B1 (16,33 g, 0,0298 mol) opløstes i 200 ml benzen. Tri-n-butyltinhydrid (23,5 ml, 3 ækvivalenter) tilsattes, og blandingen tilbagesvaledes i 3 timer. Benzen fjernedes in vacuo, og titelprodukt udkrystalliserede fra 5 resten ved tilsætning af hexan, 9,26 g, PNMR/CDCl^/S/TMS: 1,39 (3H, d, J = 6Hz), 1,40 (3H, s), 1,63 (3H, s), 3,62 (IH, dd, J = 4; 11Hz), 4,12 (IH, m), 4,39 (IH, s), 4,81 (IH, d, J = 8Hz), 5,08 (2H, s), 5,17 (2H, s), 5.32 (IH, d, J = 4Hz), 7,32 (5H, s), 7,36 (5H, s).

10 Eksempel 31

Benzyl-δβ-(lS-benzyloxycarbonylaminoethyl)penicillanat- 1,1-dioxid.

Efter proceduren fra eksempel 5 omdannedes titelprodukt fra det foranstående eksempel (4,0 g, 0,0085 15 mol) til det nærværende titelprodukt isoleret som et hvidt skum, 4,25 g; PNMR/CDCl3/6/TMS: 1,21 (3H, s), 1.33 (3H, d, J = 6Hz), 1,48 (3H, s), 4,20 (IH, m), 4,35 (IH, m), 4,40 (IH, s), 4,53 (IH, d, J = 4,5Hz), 5,08 (2H, s), 5,17 (2H, q), 5,45 (IH, d, J = 7Hz), 20 7,30 (5H, s), 7,35 (5H, s).

Eksempel 32 6{3- (lS-Aminoethyl) penicillansyre-1,1-dioxid.

Ved anvendelse af 180 mg 5% Pd/C som katalysator omdannedes titelprodukt fra det foranstående eksempel 25 (175 mg) til det nærværende titelprodukt efter proceduren i eksempel 7. Efter genudvinding af katalysatoren strippedes den samlede modervæske og tetrahydrofuran/H20 vaskevæsker for det førstnævnte in vacuo,og titelprodukt udvandtes ved frysetørring af den vandige rest natten 30 over, IR (KBr): 1765 cm-1; PNMR/D20/6/DDS: 1,47 (3H, s), 1,53 (3H, d), 1,60 (3H, s), 4,35 (2H, m), 4,37 (IH, s), 5,12 (IH, d, J = 4Hz).

DK 166883 B1 37

Eksempel 33

Benzyl-6a-(lS-benzyloxycarbonylaminoethyl)penicillanat- 1,1-dioxid.

Titelprodukt fra eksempel 31 (4,25 g, 0,0085 mol) 5 opløstes i 100 ml CH2C12. DBN (0,96 ml, 1 ækvivalent) tilsattes dråbevis, og blandingen omrørtes i 3 minutter ved 25°, derefter afdæmpedes reaktionen ved tilsætning af 1 ml (2 ækvivalenter) iseddike. Den afdæmpede reaktionsblanding fortyndedes med CH2C12, vaskedes 10 i rækkefølge med fortyndet HC1 (pH 2,5), vand og mættet NaCl og inddampedes in vacuo til opnåelse af råt titelprodukt i form af et hvidt skum 4,5 g. Søjlechromato-grafi på siligacel ved anvendelse af 9:1 CH2C12:ethyl-acetat som elueringsmiddel gav renset titelprodukt.

15 hvidt skum, 2,83 g, PNMR/CDCl3/6/TMS: 1,21 (3H, s), 1,35 (3H, d, J = 7Hz), 1,51 (3H, s), 3,78 (IH, dd, J = 2;4Hz), 4,27 (IH, m), 4,36 (IH, s), 4,56 (IH, d, J = 2Hz), 5,09 (2H, s), 5,16 (2H, g), 7,3 (10H, s).

Eksempel 34 20 6a-(lS-Aminoethyl)penicillansyre-l,l-dioxid.

5% Pd/C (4,5 g) opslemmedes i 50 ml H20 og for-hydrogeneredes i 1,5 time ved 25°/50 psig. Titelprodukt fra det foranstående eksempel (2,83 g) opløstes i 50 ml ethylacetat, sattes til den forhydrogenerede vandige 25 katalysatoropslemning og hydrogeneredes ved 25°/50 psig i 0,5 time. Katalysatoren genudvandtes ved filtrering.

Det vandige lag fjernedes. Titelproduktet krystalliseredes i treportioner (1,1 g totalvægt) efterhånden som det vandige lag koncentreredes; PNMR/D20/6/DDS: 1,47 30 (3H, s), 1,52 (3H, d), 1,62 (3H, s), 4,05 (2H, m), 4,28 (IH, s), 5,10 (IH, d); IR (KBr) 1787 cm"1.

Eksempel 35

Benzyl-6|3-brom-6a- (1-trifluormethylsulfonyloxyethyl) -penicillanat.

35 Efter proceduren i eksempel 26 omdannedes benzyl- 6fi-brom-6a- (1-hydroxymethyl) penicillanat (en blanding DK 166883 B1 38 af sidekædeepimere ; DiNinno et al., loc cit.; 8,90 g, 0,0214 mol) til de nærværende titelprodukter. Ved tilsætning af 1:1 hexan:ether udkrystalliserede en første portion fast stof (4,70 g), der i det væsentlige var 5 IR sidekædeepimeren. (Om ønsket føres denne epimer gennem procedurerne fra eksemplerne 25-30 til opnåelse af titelproduktet fra eksempel 32). Den anden portion fast stof (2,40 g) og den tredie portion (en olie 1,60 g) var blandede sidekædeepimere af titelproduktet, 10 i det væsentlige IS sidekædeepimeren; PNMR/CDCl^/δ/TMS: 1,41 (3H, s), 1,65 (3H, s), 1,78 (3H, d, J = 6,5Hz), 4,56 (IH, s), 5,22 (2H, s), 5,37 (IH, q, J = 6,5Hz), 5,48 (IH, s), 7,4 (5H, s).

Eksempel 36 15 Benzyl-6a-(1-azidoethyl)-63-brompenicillanat.

Den anden og tredie portion (i det væsentlige IS sidekædeepimer) titelprodukt fra det foranstående eksempel (4,0 g, 0,0073 mol) omdannedes til det nærværende titelprodukt (i det væsentlige IR sidekædeepi-20 mer) ved proceduren fra eksempel 27. Dette produkt isoleredes som en bleggul olie, 2,91 g; PNMR/CDCl3/6/ TMS: 1,40, 3H, s), 1,56 (3H, d, J = 6,5Hz), 4,00 (IH, q, J = 6,5Hz), 4,48 (IH, s), 5,16 (2H, s), 5,34 (IH, s), 7,32 (5H, s).

25 Eksempel 37

Benzyl-6a-(lR-aminoethyl)-68-brompenicillanat og benzyl-6a- (lS-aminoethyl) -63-brompenicillanat.

Titelprodukt fra det foranstående eksempel (i det væsentlige IR sidekædeepimeren, 2,91 g, 0,0066 30 mol) omdannedes til de nærværende titelprodukter efter proceduren fra eksempel 28. Efter fjernelse af CHC13, der anvendtes som reaktionsopløsningsmiddel, fordeltes resten mellem ether og 1 B HC1 (200 ml) . Etherlaget fjernedes og ekstraheredes med 1 x 200 ml 1 NHC1. De 35 samlede vandige lag lagdes i lag med ethylacetat og pH justeredes til 8,5. Det vandige lag fjernedes og DK 166883 B1 39 ekstraheredes med frisk ethylacetat. Ethylacetatlagene samledes og inddampedes til opnåelse af en blanding af titelprodukter (i det væsentlige IR isomeren) i form af en olie, 1,53 g. Isomerene adskiltes ved søjlechroma-5 tografi på 200 g silicagel, idet der elueredes med 1:1 CI^C^:ethylacetat overvåget med TLC (3:2 ethylacetat). Rene hurtigere bevægede fraktioner (Rf 0,52) samledes og inddampedes til opnåelse af titel IS isomeren (0,172 g), der om ønsket efter procedurer-10 ne fra eksemplerne 29-32 omdannes til titelproduktet i eksempel 34. Midtpunktsudsnit gav en blanding af titelprodukter (0,45 g), der om ønsket genchromatograferes til opnåelse af yderligere rene produkter. Rene langsommere bevægede fraktioner (Rf 0,47) samledes til opnåel-15 se af titel IR sidekædeepimeren, 0,674 g; PNMR/CDCl^/S/ TMS: 1,29 (3H, d, J = 6Hz), 1,38 (3H, s), 1,64 (3H, s), 3,29 (IH, q, J = 6Hz), 4,51 (IH, s), 5,17 (2H, s), 5,38 (IH, s), 7,33 (5H, s).

Eksempel 38 20 Benzyl-6(3-bf.om-6a- (lR-benzyloxycarbonylaminoethyl) peni-cillanat.

Efter proceduren fra eksempel 29 omdannedes IR sidekædetitelproduktet fra det foranstående eksempel (0,674 g, 0,0016 mol) til det nærværende titelprodukt, 25 0,877 g, Rf 0,85 (1:1 OE^C^:ethylacetat) .

Eksempel 39

Benzyl-63-(lR-benzyloxycarbonylaminoethyl)penicillanat.

Efter proceduren fra eksempel 30 omdannedes titelprodukt fra det foranstående eksempel (0,877 g, 30 0,0016 mol) til det nærværende titelprodukt. Efter stripping af benzenet, der anvendtes som opløsningsmiddel, tritureredes resten med 4 x 50 ml hexan til opnåelse af råprodukt i form af en olie (627 mg) . Olien chromatograferedes på silicagel ved eluering med 35 19:1 chloroform:ethylacetat til opnåelse af renset titelprodukt, 569 mg; PNMR/CDCl^/δ/TMS: 1,10 (3H, d, DK 166883 Bl 40 J = 6,5Hz), 1,36 (3H, s), 1,60 (3H, s), 3,41 (IH, dd, J « 4; 11Hz), 4,16 (IH, m) , 4,43 (IH, s), 5,08 (2H, s), 5,13 (2H, s), 5,32 (IH, d, J = 4Hz), 7,29 (5H, s), 7.33 (5H, s).

5 Eksempel 40

Benzyl-63-(IR-benzyloxycarbonylaminoethyl)penicillanat- 1,1-dioxid.

Efter proceduren fra eksempel 5 omdannedes titelprodukt fra det foranstående eksempel (0,569 g, 0,0012 10 mol) til det nærværende titelprodukt, 0,681 g; PNMR/ CDCl3/6/TMS: 1,22 (3H, s), 1,27 (3H, d) , 1,47 (3H, s), 3,94 (IH, dd, J = 4; 12Hz), 4,42 (IH, s), 4,48 (2H, m) , 5,04 (2H, s), 5,13 (2H, q), 5,40 (IH, d. J = 8) , 7,27 (5H, s), 7,32 (5H, s).

15 Eksempel 41 6β-(lR-Aminoethyl)penicillansyre-1,1-dioxid.

Ved anvendelse af 400 mg 5% Pd/C omdannedes titelprodukt fra det foranstående eksempel (202 mg) til det nærværende titelprodukt, 50 mg; IR (KBr) 1788 cm 20 PNMR/D20/6/DDS: 1,45 (3H, s), 1,51 (3H, d), 1,57 (3H, s), 4,27 (IH, m), 4,33 (IH, s), 4,85 (IH, m), 5,15 (IH, d, J = 4Hz).

Eksempel 42

Benzyl-6a- (IR-benzyloxycarbonylaminoethyl) penicillanat-25 1,1-dioxid.

Efter proceduren fra eksempel 33 omdannedes titelprodukt fra eksempel 40 (368 mg) ved anvendelse af 19:1 CHCl^:ethylacetat som elueringsmiddel ved chromatografe-ringen til det nærværende titelprodukt, 285 mg; PNMR/ 30 CDCl3/6/TMS: 1,23 (3H, s), 1,33 (3H, d, J = 6,5Hz), 1,50 (3H, s), 3,61 (IH, dd, J = 2; 9Hz), 4,28 (IH, m), 4.34 (IH, s), 4,67 (IH, d, J = 2Hz), 4,98 (IH, d), 5,07 (2H, s), 5,18 (2H, q), 7,30 (5H, s), 7,35 (5H, s).

DK 166883 B1 41

Eksempel 43 6 a-(lR-Aminoethyl)penicillansyre-1,1-dioxid.

Efter proceduren fra eksempel 41 omdannedes titelprodukt fra det foranstående eksempel (285 mg) til 5 det nærværende titelprodukt (132 mg; IR (KBr) 1768 cm 1; PNMR/D20/6/DDS: 1,47 (3H, s), 1,54 (3H, d), 1,61 (3H, s), 4,03 (2H, m), 4,44 (IH, s), 5,10 (IH, d, J = 2Hz).

Eksempel 44 6a-(Benzyloxycarbonylaminomethyl)penicillansyre-l,l-dio-10 xid.

Metode. A

Titelprodukt fra eksempel 6 (11,2 g) i THF (70 ml) og H20 (50 ml) hydrogeneredes delvis i nærværelse af 6 g 10% Pd/C ved 50 psig i 30 minutter. Katalysatoren 15 fjernedes ved filtrering på et lag diatoméjord, THF afdestilleredes fra filtratet in vacuo, og den vandige rest ekstraheredes med 100 ml ethylacetat. Det organiske lag fjernedes, tørredes (Na2S04) og inddampedes til opnåelse af titelprodukt i form af et skum, 3,0 g; 20 PNMR/CDCl3/6AMS:l/40 (3H, s), 1,55 (3H, s), 3,70 (3H, m), 4,31 (IH, s), 4,58 (IH, m), 5,04 (2H, s), 7,24 (5H, s) .

Det vandige lag koncentreredes til opnåelse af krystallinsk 6a-(aminomethyl)penicillansyre-1,1-dioxid, 25 3,1 g med PNMR fuldstændig identisk med det samme fuldstændigt hydrogenerede produkt fra eksempel 8.

Metode B.

Titelprodukt fra eksempel 8 (3,0 g, 11,45 mmol) opløstes i 100 ml 1:1 H20:methanol. pH justeredes og 30 holdtes ved 8,3 til 8,7, mens benzylchlorformat (1,79 g, 12,59 mmol) tilsattes dråbevis på adskillige minutter.

Efter et kort tidsrum med omrøring justeredes pH til 6,0 med 1 N HC1, og THF fjernedes ved destillation in vacuo. Den vandige rest ekstraheredes med 30 ml ethyl-35 acetat,og ekstrakten bortkastedes. Frisk ethylacetat (50 ml) tilsattes, og pH justeredes til 1,8 med 1 N HC1. Det vandige lag ekstraheredes med 50 ml frisk ethyl- DK 166883 B1 42 acetat. De samlede organiske lag og ekstrakten vaskedes med 1 x 50 ml mættet NaCl, tørredes CNa^O^) og inddampedes in vacuo til opnåelse af titelprodukt i form af skum, 3,7 g med PNMR identisk med PNMR for titel-5 produktet, der opnåedes ved metode A umiddelbart ovenfor.

Eksempel 45

Pivaloyloxymethyl-βα- (benzyloxycarbonylaminomethyl) pe-nicillanat-1, 1-dioxid.

10 Titelproduktet fra det foranstående eksempel (6,75 g, 17 mmol) og Ν,Ν-diisopropylethylamin (3,34 ml, 18,7 mmol) opløstes i dimethylformamid (50 ml), chlor-methylpivalat (2,72 ml, 18,7 mmol) tilsattes, og blandingen henstilledes til omrøring ved omgivelsernes 15 temperatur i 20 timer. Reaktionsblandingen fortyndedes med ethylether (300 ml), vaskedes med vand (2 x 100 ml), tørredes (Na2SO^) og inddampedes in vacuo til en olie.

Olien opløstes i 100 ml ether, vaskedes med 3 x 50 ml H20, tørredes (Na2S04) og koncentreredes in vacuo til 20 opnåelse af renset titelprodukt i form af en viskos olie, 4,4 g; PNMR/CDC13/TMS: 1,20 (9H, s), 1,34 (3H, s), 1,51 (3H, s), 3,64 (3H, m), 4,31 (IH, s), 4,60 (IH, d), 5,04 (2H, s), 5,71 (2H, q), 7,24 (5H, s).

Eksempel 46 25 p-Toluensulfonatsalt af pivaloyloxymethyl-6a-(amino-methyl)penicillanat-1,1-dioxid.

Titelprodukt fra det foranstående eksempel (1,8 g, 3,53 mmol) hydrogeneredes i en blanding af THF (40 ml) og H20 (20 ml) på 1,8 g 10% Pd/C i nærværel-30 se af pyridinium-p-toluensulfonat (1,77 g, 7,06 mmol) ved 50 psig i 1,5 time. Katalysatoren genudvandtes ved filtrering på diatoméjord, og filtratet strippedes for THF in vacuo, hvorunder titelproduktet udkrystalliserede, 1,2 g, smp. 214-215°C (sønderdeling)? PNMR/DMSO-dg/ 35 TMS: 1,16 (9H, s), 1,32 (3H, s), 1,48 (3H, s), 2,28 (3Hf s) 3,34 (2H, m) , 3,82 (IH, m) , 4,60 (IH, s), 5,14 DK 166883 B1 43 IH, d, J = 2Hz), 5,75 (2H, ABq), 7,23 (4H, ABq).

Analyse beregnet for ci5H24°7N2^.CgH^SO^H: C, 48,16; H, 5,88; N,5,ll fundet: C, 48,31; H, 6,11; N, 5,08 5 Eksempel 47

Chlormethyl-6- [D- (2-azido-2-phenylacetamido) ]penicilla-nat.

En opløsning af 12,0 g (0,03 mol) 6-[D-(2-azido- 2-phenylacetamido)penicillansyrenatriumsalt i 25 ml 10 vand kombineredes med 100 ml methylenchlorid og 10,17 g (0,03 mol) tetrabutylammoniumhydrogensulfat. Blandingen (pH 3,0) justeredes til pH 7,5 med natriumhydrogencarbo-nat, det organiske lag fjernedes, og det vandige lag ekstraheredes med 2 x 100 ml methylenchlorid. De samle-15 de organiske lag tørredes (Na2SO^), og opløsningsmidlet afdampedes til opnåelse af en fast rest. Resten tritureredes med ethylacetat (300 ml), filtreredes, kagen vaskedes med ethylacetat efterfulgt af ethylether og tørredes under nitrogen til opnåelse af 16,5 g (89%) 20 tetrabutylammoniumsalt.

En blanding af 12,32 g (0,02 mol) af det ovennævnte salt kombineredes med 70 ml chloriodmethan,og blandingen omrørtes natten over ved omgivelsernes temperatur. Reaktionsblandingen koncentreredes til tørhed, 25 og resten rensedes ved chromatografi på 600 g silicagel ved eluering med 1:1 ethylacetat/hexan efter rumfang til opnåelse af 8,1 g (95%) af den ønskede chlormethyl-ester i form af en bleggul viskos olie; PNMR/CDCl^: 1,58 (s, 3H), 1,68 (s, 3H), 4,45 (s, IH), 5,1 (s, IH), 30 5,5-5,9 (dd, m, 4H) , 7,2 (d, IH), 7,4 (s, 5H) ppm.

Eksempel 48

Iodmethyl-6- [D- (2-azido-2-phenylacetamido)penicillanat.

Titelproduktet fra det foranstående eksempel (1,45 g, 0,00342 mol) i 30 ml acetone gennembobledes 35 i 3 minutter med N2· Nal (2,55 g, 0,01714 mol) tilsat- DK 166883 B1 44 tes, og den resulterende opløsning omrørtes i 16 timer ved omgivelsernes temperatur. Reaktionsblandingen klare-des ved filtrering, filtratet koncentreredes in vacuo, og resten optoges i 75 ml CHClg og filtreredes. CHCl^-5 filtratet vaskedes med 2 x 30 ml mættet NaCl, tørredes (Na2S0^) og koncentreredes til opnåelse af titelproduktet i form af et skum, 1,23 g; PNMR/CDCl^/TMS/S (ppm): 1,53 (3H, s), 1,64 (3H, s), 4,37 (IH, s), 5,05 (IH, s), 5,56 (2H, m, J = 4; 11Hz), 5,87 (2H, ABq), 7,31 (5H, s).

10 Eksempel 49 6a- (Benzyloxycarbonylaminomethyl) -1,1-dioxopenicilla-noyloxymethyl-6-[D-(2-azido-2-phenylacetamido]penicilla-nat.

Titelproduktet fra eksempel 16 (0,56 g, 1,43 mmol) 15 opløstes i 50 ml CH2C12. H20 (20 ml) tilsattes, og pH justeredes til 8,6 med 1 N NaOH. NaHCO^ (0,121 g, 1,43 mmol) tilsattes efterfulgt af tetrabutylammoniumhydro-gensulfat (0,488 g, 1,43 mmol) i portioner, mens pH holdtes ved 8,0-8,3 med 1 N NaOH, indtil tæt ved til-20 sætningens afslutning, da pH tillodes at falde til 7,0. Efter omrøring af blandingen i 15 minutter, adskiltes lagene. Det vandige lag ekstraheredes med 1 x 30 ml frisk CH2C12. Det samlede organiske lag og ekstrakten tørredes (Na2SO^) og koncentreredes in vacuo til opnåelse 25 af tetrabutylammonium-6a-(benzyloxycarbonylaminomethyl) -penicillanat-l,l-dioxid i form af et skum. Det sidstnævnte opløstes i 20 ml acetone og sattes til en opløsning af titelproduktet fra det foranstående eksempel (0,714 g, 1,43 mmol) i 15 ml acetone, og blandingen 30 omrørtes i 1 time ved omgivelsernes temperatur, koncentreredes in vacuo,og resten opslemmedes i 30 ml ethylacetat til opnåelse af krystallinsk tetrabutyl-ammoniumiodid (0,42 g). Filtratet inddampedes til et skum (1,2 g), der chromatograferedes på 100 g silicagel 35 med eluering med 20% ethylacetat/CHCl3 i fraktioner på 20 ml. Rene produktfraktioner (Rf 0,22 på TLC med det samme elueringsmiddel) samledes og koncentreredes in DK 166883 B1 45 vacuo til opnåelse af renset titelprodukt i form af et skum, 0,61 g, PNMR/CDCl3/6 (ppm): 1,33 (3H, s), 1,48 (3H, s), 1,52 (3H, s), 1,59 (3H, s), 3,65 (3H, m) , 4,33 (IH, s), 4,42 (IH, s), 4,61 (IH, s [br]), 5,05 5 (3H, s), 5,58 (5H, m) , 7,24 (5H, s), 7,32 (5H, s).

Eksempel 50

Di(p-toluensulfonat)salt af 6a-(aminomethyl)-1,1-dioxo-penicillanoyloxymethyl-6-[D-2-amino-2-phenylacetamido]-penicillanat.

10 Pd/C (10%, 2g) forhydrogeneredes i 20 ml vand.

En opløsning af titelprodukt fra det foranstående eksempel (0,96 g, 1,226 mmol) i 30 ml THF og derefter pyridinium-p-toluensulfonat (0,615 g, 2,452 mmol) tilsattes, og blandingen hydrogeneredes i 1,5 time ved 15 50 psig. Katalysatoren genudvandtes ved filtrering på diatoméjord med THF og ^0 vask. THF fjernedes fra det samlede filtrat og vaskevæske ved koncentrering in vacuo. Den vandige rest ekstraheredes med 3 x 30 ml ethylacetat og frysetørredes til opnåelse af titelpro-20 dukt, 0,66 g forurenet med ikke reduceret benzyloxy-carbonylforbindelse. Frisk 10% Pd/C (1,0 g) forhydrogeneredes i 20 ml vand. Det forurenede titelprodukt (0,5 g) opløstes i 30 ml THF og sattes derefter til den forreducerede katalysatoropslemning. Endelig til-25 sattes frisk pyridinium-p-toluensulfonat (0,315 g), og blandingen hydrogeneredes ved 50 psig i 1,5 time. Katalysatoren genudvandtes,og renset titelprodukt udvandtes som ovenfor, 0,5 g, PNMR/DMSO-dg/TMS/6 (250 MHz): 1,35 (6H, br. s), 1,47 (6H, s)., 2,30 (6H, s), 30 3,38 (2H, m) , 3,94 (IH, m) , 4,45 (IH, s), 4,72 (IH, s), 5,08 (IH, br. s), 5,31 (IH, br. s), 5,45 (IH, d, J = 4Hz), 5,60 (IH, m) , 5,93 (2H, m), 7,32 (8H, ABq), 7,48 (5H, m) .

Eksempel 51 1,l-Dioxopenicillanoyloxymethyl-6a-(benzyloxycarbonyl-35 aminomethyl)penicillanat-l,l-dioxid.

Titelprodukt fra eksempel 16 (0,5 g, 1,26 mmol) DK 166883 B1 46 opløstes i 50 ml CE^Cl^· H20 (10 ml) tilsattes, og pH j.usteredes til 8,6 med 1 N NaOH. NaHCOg (0,106 g, 1,26 mmol) og derefter tetrabutylammoniumhydrogensulfat (0,428 g, 1,26 mmol) tilsattes. pH, der faldt til 5,0, 5 justeredes til 7,5 med 1 N NaOH. Efter omrøring i 30 minutter ved omgivelsernes temperatur, fjernedes det organiske lag, tørredes (Na^O^) og koncentreredes in vacuo til opnåelse af tetrabutylammonium-6a-(benzyloxy-carbonylaminomethyl)penicillanat-l,l-dioxid i form af 10 et skum. Det sidstnævnte opløstes i 20 ml acetone. Iod-methylpenicillanat-l,l-dioxid (fremstillet f.eks. efter Godtfredsen et al., US-patentskrift nr. 4.342.772; 0,47 g) i 15 ml acetone tilsattes, og blandingen omrørtes i 5 minutter og koncentreredes derefter in vacuo. Resten 15 opslemmedes i 30 ml ethylacetat, og krystallinsk tetra-butylammoniumiodid (0,33 g) udvandtes ved filtrering. Filtratet koncentreredes in vacuo. Resten omsleramedes i 30 ml ethylacetat,og krystallinsk tetrabutylammonium-iodid (0,33 g) udvandtes ved filtrering. Filtratet kon-20 centreredes in vacuo til opnåelse af titelprodukt i form af et skum, 0,82 g, PNMR/CDCl3/TMS/6 {ppm) : 1,40 (3H, s), 1,42 (3H, s), 1,58 (6H, s), 3,41 (2H, m) , 3,69 (3H, m) , 4,40 (2H, s), 4,58 (2H, m), 5,08 (2H, s), 5,59 (IH, m) , 5,86 (2H, s), 7,29 (5H, s).

25 Eksempel 52 p-Toluensulfonatsalt af 1,1-dioxopenicillanoyloxymethyl-6a-(aminomethyl)penicillanat-1,1-dioxid.

Pd/C (10%, 1,2 g) forhydrogeneredes i 10 ml H20. Pyridiniumtosylat (0,482 g, 1,92 mmol) og derefter en 30 opløsning af titelprodukt fra det foranstående eksempel i 30 ml THF tilsattes, og blandingen hydrogeneredes ved 50 psig i 1 time. Katalysatoren genudvandtes ved filtrering på diatoméjord med THF/H20 vask, THF fjernedes fra det samlede filtrat og vaskevand ved koncentre-35 ring in vacuo. Den vandige rest ekstraheredes med 1 x 30 ml ethylacetat. Det organiske lag tørredes (Na2SO^) og koncentreredes til opnåelse af 60 mg fast stof. Det DK 166883 B1 47 vandige lag koncentreredes til 10 ml. Krystallinsk titelprodukt udvandtes ved filtrering, 100 mg; smp.

228-229°C (sønderdeling); PNMR/DMSO-dg/6 (250 MHz): 1,35 (3H, s), 1,37 (3H, s), 1,49 (3H, s), 1,50 (3H, s), 5 2,29 (3H, s), 3,29 (IH, dd, J = 1,7; 16,6 Hz), 3,39 (2H, m), 3,72 (IH, dd, J = 4,6; 16,6 Hz), 3,92 (IH, m), 4,60 (IH, s), 4,77 (IH, s), 5,21 (2H, m), 5,96 (2H, s), 7,31 (4H, ABq).

Analyse beregnet for C^gH2^N20^pS2.CH^CgH^SO^H: 10 C, 44,17; H, 4,89; N, 6,18 fundet: C, 45,53; H, 4,76; N, 6,10.

Den vandige modervæske frysetørredes til opnåelse af 160 mg fast stof. Dette opslemmedes i en lille mængde vand, filtreredes, vaskedes med en lille mængde ethyl-15 acetat og tørredes til opnåelse af yderligere 70 mg renset titelprodukt med identisk smp. og PNMR.

Eksempel 53

Chlormethyl-6a-(benzyloxycarbonylaminomethyl)-penicilla-nat-1,1-dioxid.

20 Efter fremgangsmåden fra eksempel 49 omdannedes titelprodukt fra eksempel 16 (0,396 g, 1,0 mmol) til dets tetrabutylammoniumsalt. Det sidstnævnte opløstes i 30 ml bromchlormethan, omrørtes ved omgivelsernes temperatur i 18 timer, koncentreredes in vacuo til 25 et skum og chromatograferedes på 50 g silicagel med 20% ethylacetat/CHClg som elueringsmiddel i fraktioner på 20 ml. Fraktionerne 6-10 samledes og koncentreredes in vacuo til et skum, 0,25 g, Rf 0,7 på TLC med det samme elueringsmiddel; PNMR/CDClg/TMS/δ (ppm): 1,37 (3H, s), 30 1,54 (3H, s), 3,70 (3H, m) , 4,38 (IH, s), 4,67 (IH, br. s) , 5,07 (2H, s), 5,66 (IH, d, J = 9Hz), 5,70 (2H, ABq) , 7,33 (5H, s) .

Eksempel 54

Iodmethyl-6a- (benzyloxycarbonylaminomethyl) penicillanat-35 1,1-dioxid.

Titelprodukt fra det foranstående eksempel (0,25 g, DK 166883 B1 48 0,563 mmol) opløstes i 15 ml acetone og gennembobiedes med N2· Nal (0,42 g, 2,8 mmol) tilsattes, og den resulterende opløsning omrørtes i 17 timer og koncentreredes derefter in vacuo . Det faste stof tritureredes med 5 CHCl^,uopløseligt stof fjernedes ved filtrering, og titelprodukt udvandtes fra filtratet ved koncentrering in vacuo til et skum, 0,23 g, PNMR/CDCl3/TMS/6 (ppm): 1.39 (3H, s), 1,55 (3H, s), 3,64 (3H, m), 4,28 (IH, s), 4,59 (IH, br. s), 5,04 (2H, s), 5,48 (IH, m), 5,83 (2H, 10 ABq), 5,23 (5H, s).

Eksempel 55

Methylen-bis-[6a-(benzyloxycarbonylaminomethyl)-1,1-dio-xopenicillanat].

Titelprodukt fra eksempel 16 (0,17 g, 0,429 mmol) 15 omdannedes til dets tetrabutylammoniumsalt (0,27 g) efter proceduren fra eksempel 49. Det sidstnævnte opløstes i 10 ml acetone og sattes til en opløsning af titelprodukt fra det foranstående eksempel (0,23 g, 0,429 mmol) i 10 ml acetone. Blandingen omrørtes i 15 20 minutter, koncentreredes til et skum in vacuo, og skummet opslemmedes i 20 ml ethylacetat. Opslemningen filtreredes til opnåelse af tetrabutylammoniumiodid (110 mg), og filtratet koncentreredes in vacuo til opnåelse af titelprodukt i form af et skum, 0,28 g, PNMR/CDC13/ 25 TMS/δ (ppm): 1,36 (6H, s), 1,52 (6H, s), 3,73 (6H, m) , 4.40 (2H, s), 4,69 (2H, br. s), 5,08 (4H, s), 5,77 (4H, m) , 7,28 (10H, s).

Eksempel 56

Bis-(p-toluénsulfonat) salt af methylen-bis-[6a-(amino-30 methyl)-1,1-dioxopenicillanat].

Efter proceduren fra eksempel 52 hydrogeneredes titelprodukt fra det foranstående eksempel. Efter genudvinding af katalysatoren og fjernelse af THF ekstra-heredes den vandige rest med 3 x 20 ml ethylacetat og 35 frysetørredes til opnåelse af titelprodukt, 0,19 g, PNMR/DMSO—dg/TMS/6 (250 MHz): 1,37 (6H, s), 1,50 (6H,

Claims (3)

1. 5 PATENTKRAV Analogifremgangsmåde til fremstilling af 6-amino-alkylpenicillansyre-1,1-dioxider med den stereokemiske formel / R O O / » \ / \ 10 /H2HCH·. ^ CH3\ j. / f "H Ih CH3 I </ " ''-.COOR1 ' n 15 eller R O O . /h2NCH / CH3' / Ί ίΉ P CH3 11 20 ^ -cooj1 hvori R er hydrogen eller methyl, og 25. er 2 og R1 er -CH0-, eller 1 Δ n er 1 og R er hydrogen, en radikalgruppe der danner en ester, der er hydrolyserbar under fysiologiske betingelser, 30 1,1-dioxopenicillanoyloxymethyl, eller H IOr“y-<Y? » NH2 I_ Η I 3 3 5 σ' ** *'f COOCH2- DK 166883 B1 50 hvori Y er hydrogen, hydroxy, (C^-C^)-alkanoyloxy, (C2-C7)-alkoxycarbonyloxy, 5 benzoyloxy, eller benzoyloxy monosubstitueret med (C1“C4) -alkyl, (C^^)-alkoxy eller halogen, eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf eller, såfremt er hydrogen, farmaceutisk acceptable 10 kationiske salte deraf, kendetegnet ved, at en forbindelse med formlen (/ OR O O ^ " 1 \ / \ C JEL-CH-O CNHCH^ ,SL / CH_\ ... é-“-"-.cook5 eller on /OR OO « 20 / Π I \ / \ /CgH5CH2OCNHC%_CHj [ T'H TCH3 W
2. 1 N '·' coofe5 ' /n 25 hvori R er hydrogen eller methyl, og 5 n er 2 og R er -CH0-, eller 5 1 n er 1 og R er bensyl, 30 en radikalgruppe der danner en ester, der er hydrolyserbar under fysiologiske betingelser, 1,1-dioxopenicillanoyloxymethy1, eller
3. 35 H y«^~~^5_coni*4 ^ch3 \=J * [ p/H r^CH3 B <y 'nc och2- DK 166883 B1 51 hvori Y" er hydrogen, benzyloxycarbonyloxy, (C2~C7)-alkanoyloxy, (C2~C7)-alkoxycarbonyloxy, 5 benzoyloxy, eller benzoyloxy monosubstitueret med (C1~C4)-alkyl, )-alkoxy eller halogen, og Z er azido, eller benzyloxycarbonylamino, hydrogenolyseres i et reaktions inert opløsningsmiddel over en 10 ædelmetalka.talysator, og at forbindelsen med formlen I eller II om ønsket omdannes til et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt eller, når er hydrogen, til et farmaceutisk acceptabelt kationisk salt.