DE60119968T2

DE60119968T2 - Hepatitis c tripeptid inhibitoren

Info

Publication number: DE60119968T2
Application number: DE60119968T
Authority: DE
Inventors: Allen Jeffrey Cheshire CAMPBELL; Andrew Wallingford GOOD
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2000-11-20
Filing date: 2001-11-20
Publication date: 2007-01-18
Anticipated expiration: 2021-11-21
Also published as: AU2002248147B2; ATE327246T1; MXPA03004299A; US6872805B2; WO2002060926A3; CN100391967C; DE60119968D1; BR0115447A; CA2429359A1; US20020111313A1; JP3889708B2; HUP0500456A2; ES2263687T3; EP1337550A2; CN1531547A; EP1337550B1; PE20020707A1; WO2002060926A2; JP2004538251A; HUP0500456A3

Description

Hintergrund der Erfindung
Der Hepatitis C-Virus (HCV) ist der hauptursächliche Erreger bei 90% der Krankheitsfälle von nicht-A/nicht-B-Hepatitis (Choo et al., 1989; Kuo et al., 1989). Das Auftreten von HCV-Infektionen, wobei weltweit 2–15% aller Personen infiziert sind, wird in Bezug auf die Volksgesundheit mit zunehmender Schwere besorgniserregend. Während die Erstinfektion mit HCV oft asymptomatisch verläuft, entwickeln sich die meisten HCV-Infektionen zu einem chronischen Zustand, der über Jahrzehnte anhalten kann. Es wird angenommen, dass von den Personen mit chronischen HCV-Infektionen etwa 20–50% letztlich eine chronische Lebererkrankung (beispielsweise Zirrhose) entwickeln, und dass 20–30% dieser Fälle zu Leberversagen oder Leberkrebs führen. Da die gegenwärtig mit HCV infizierte Bevölkerungsgruppe altert, wird angenommen, dass sich die mit HCV verbundene Erkrankungsrate und Sterblichkeitsrate verdreifachen wird.
Bei einer anerkannten Behandlung von HCV-Infektionen wird Interferon (IFN), das eine HCV-Infektion durch Anregung der antiviralen Antwort des Wirts indirekt beeinflusst, verwendet. Die IFN-Behandlung ist jedoch weitgehend unwirksam, da nur bei weniger als 30% der behandelten Patienten eine anhaltende antivirale Antwort bewirkt wird. Außerdem verursacht die IFN-Behandlung bei mehr als 90% der Patienten eine Anzahl von Nebenwirkungen mit verschiedener Schwere (beispielsweise akute Pankreatitis, Depression, Retinopathie, Thyroiditis). Die Therapie mit einer Kombination von IFN und Ribavirin stellt eine geringfügig erhöhte, anhaltende Höhe Antwort bereit, die verringert jedoch nicht die von IFN verursachten Nebenwirkungen.
Eine allgemeine Strategie bei der Entwicklung von antiviralen Mitteln ist das Inaktivieren von viral codierten Enzymen, die für die virale Replikation notwendig sind. Bei HCV würde ein Inhibitor, der selektiv auf die HCV-Serinprotease NS3 zielt, durch Hemmen der HCV-Replikation vermutlich eine vorteilhafte Therapie zur Behandlung von HCV-Infektionen bei Patienten bereitstellen.
Zu den Verbindungen, von denen bei der Hemmung der HCV-Replikation eine Wirkung als selektive HCV-NS3-Serinprotease-Inhibitoren gezeigt wurde, gehören die in der internationalen Anmeldung Nr. PCT/CA99/00736, Veröffentlichung Nr. WO 00/09543 unter dem Titel „Hepatitis C Inhibitor Tri-Peptides" offenbarten Tripeptid-Verbindungen. Diese Verbindungen hemmen die HCV-Serinprotease jedoch nicht ausreichend oder sie weisen keine ausreichende Wirkungsstärke auf, weshalb sie keine optimale Behandlung von HCV-infizierten Patienten bereitstellen können.
Es besteht Bedarf an Verbindungen, die durch selektives Hemmen der HCV-NS3-Serinprotease bei der Behandlung von HCV-infizierten Patienten von Nutzen sind, wobei diese Verbindungen eine geeignete Zelldurchlässigkeit aufweisen, um die HCV-Replikation im Körper des Patienten ausreichend zu hemmen.
Zusammenfassung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft Verbindungen der Formel I oder pharmazeutisch verträgliche Salze, Solvate oder Prodrugs davon,
wobei:

(a) R₁ C_1-8-Alkyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl) ist, die alle gegebenenfalls ein bis drei Mal mit Halogen, Cyano, Nitro, C_1-6-Alkoxy, Amido, Amino oder Phenyl substituiert sind, oder R₁ C₆- oder C₁₀-Aryl ist, das gegebenenfalls ein bis drei Mal mit Halogen, Cyano, Nitro, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, Amido, Amino oder Phenyl substituiert ist;
(b) m 1 oder 2 ist;
(c) n 1 oder 2 ist;
(d) R₂ C_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl oder C_3-7-Cycloalkyl ist, jeweils gegebenenfalls ein bis drei Mal mit Halogen substituiert, oder R₂ H ist;
(e) R₃ C_1-8-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit Phenyl, C_3-12-Alkenyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl) ist, wobei der Cycloalkylrest oder Alkylcycloalkylrest gegebenenfalls mit Hydroxy, C_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl oder C_1-6-Alkoxy substituiert sind; oder R₃, zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das es gebunden ist, einen C_3-7-Cycloalkylrest, gegebenenfalls substituiert mit C_2-6-Alkenyl, bildet;
(f) Y H, Phenyl, substituiert mit Nitro, Pyridyl, substituiert mit Nitro, oder C_1-6-Alkyl ist, wobei der Alkylrest gegebenenfalls mit Cyano, OH oder C_3-7-Cycloalkyl substituiert ist;
(g) B H, C_1-6-Alkyl, R₄-(C=O)-, R₄O(C=O)-, R₄-N(R₅)-C(=O)-, R₄-N(R₅)-C(=S)-, R₄SO₂- oder R₄-N(R₅)-SO₂- ist;
(h) R₄ (i) C_1-10-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit Phenyl, Carboxyl, C_1-6-Alkanoyl, 1 bis 3 Halogenatomen, Hydroxy, -OC(O)C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; oder -O-Phenyl, gegebenenfalls substituiert mit Halogen oder C_1-6-Alkoxy; (ii) C_3-7-Cycloalkyl, C_3-7-Cycloalkoxy oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl), alle gegebenenfalls substituiert mit Hydroxy, Carboxyl, (C_1-6-Alkoxy)carbonyl, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; (iii) Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; Amido oder (Niederalkyl)amido; (iv) C₆- oder C₁₀-Aryl oder C_7-16-Aralkyl, alle gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Halogen, Nitro, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; oder (v) Het oder (Niederalkyl)-Het, beide gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; (vi) Bicyclo(1.1.1)pentan; (vii) -C(O)OC_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl, C_2-6-Alkinyl ist; und
(i) R₅ H oder C_1-6-Alkyl ist, wobei der C_1-6-Alkylrest gegebenenfalls mit 1 bis 3 Halogenatomen substituiert ist;

Die vorliegende Erfindung betrifft auch eine pharmazeutische Zusammensetzung, die zum Hemmen der HCV-NS3-Protease oder zur Behandlung von Patienten, die mit dem Hepatitis C-Virus infiziert sind, von Nutzen ist, umfassend eine therapeutisch wirksame Menge einer Verbindung der vorliegenden Erfindung, oder ein Salz, Solvat oder Prodrug davon, und einen pharmazeutisch verträglichen Träger.
Die vorliegende Erfindung betrifft ferner die Verwendung einer Verbindung der vorliegenden Erfindung oder eines Salzes, Solvats oder Prodrugs davon bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Säugern, die mit dem Hepatitis C-Virus infiziert sind.
Außerdem betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung einer Verbindung der vorliegenden Erfindung oder eines pharmazeutischen Salzes, Solvats oder Prodrugs davon bei der Herstellung eines Medikaments zum Hemmen der HCV-NS3-Protease.
Ausführliche Beschreibung der Erfindung
Hier gelten folgende Definitionen, wenn nicht anders angemerkt. Bei den Fällen, bei denen (R) oder (S) zum Kennzeichnen der Konfiguration eines Substituenten verwendet wird, steht dies im Zusammenhang der gesamten Verbindung und nicht im Zusammenhang des Substituenten allein.
Der Begriff „Halogen", wie er hier verwendet wird, bezeichnet einen Halogensubstituenten, der aus Brom, Chlor, Fluor oder Iod ausgewählt ist.
Der Begriff „C_1-6-Alkyl", wie er hier verwendet wird, bezeichnet nicht-cyclische, geradkettige oder verzweigte Alkylsubstituenten mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, und schließt beispielsweise Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl, tert-Butyl, Hexyl, 1-Methylethyl, 1-Methylpropyl, 2-Methylpropyl, 1,1-Dimethylethyl ein.
Der Begriff „C_2-10-Alkenyl", wie er hier verwendet wird, bezeichnet sowohl allein als auch in Kombination mit einem anderen Rest einen wie vorstehend definierten Alkylrest mit 2 bis 10 Kohlenstoffatomen, der ferner wenigstens eine Doppelbindung enthält. Alkenyl schließt beispielsweise Allyl und Ethenyl ein.
„Halogenalkyl" bezeichnet einen Alkylrest, der mit einem oder mehreren Halogenresten substituiert ist, wie z. B. Trifluormethyl.
Der Begriff „C_1-6-Alkoxy", wie er hier verwendet wird, bezeichnet den Rest -O(C_1-6-Alkyl), wobei Alkyl wie vorstehend definiert ist und bis zu sechs Kohlenstoffatome enthält. Alkoxy schließt beispielsweise Methoxy, Ethoxy, Propoxy, 1-Methylethoxy, Butoxy und 1,1-Dimethylethoxy ein. Der letztgenannte Rest ist allgemein als tert-Butoxy bekannt.
Der Begriff „C_1-6-Halogenalkoxy", wie er hier verwendet wird, bezeichnet den Rest -O(C_1-6-Halogenalkyl), wobei Halogenalkyl wie vorstehend definiert ist.
Der Begriff „C_1-6-Alkanoyl", wie er hier verwendet wird, bezeichnet geradkettige oder verzweigte 1-Oxoalkylreste mit einem bis sechs Kohlenstoffatomen, und schließt beispielsweise Formyl, Acetyl, 1-Oxopropyl (Propionyl), 2-Methyl-1-oxopropyl, 1-Oxohexyl und dergleichen ein.
Der Begriff „C_3-7-Cycloalkyl", wie er hier verwendet wird, bezeichnet einen Cycloalkylsubstituenten mit drei bis sieben Kohlenstoffatomen, und schließt beispielsweise Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl und Cycloheptyl ein. Dieser Begriff schließt auch „spiro"-cyclische Reste, wie z. B. Spirocyclopropyl und Spirocyclobutyl ein:
Der Begriff „ungesättigtes Cycloalkyl" schließt beispielsweise Cyclohexenyl ein.
Der Begriff „C_4-10-Alkylcycloalkyl", wie er hier verwendet wird, bezeichnet einen Cycloalkylrest mit drei bis sieben Kohlenstoffatomen, der an einen Alkylrest gebunden ist, wobei die miteinander verbundenen Reste bis zu zehn Kohlenstoffatome enthalten, wie z. B. Cyclopropylmethyl, Cyclopentylethyl, Cyclohexylmethyl, Cyclohexylethyl oder Cycloheptylethyl.
Der Begriff „C_3-7-Cycloalkoxy", wie er hier verwendet wird, bezeichnet einen C_3-7-Cycloalkylrest, der an ein Sauerstoffatom gebunden ist, wie z. B. Butyloxy oder Cyclopropyloxy.
Der Begriff „C₆- oder C₁₀-Aryl", wie er hier verwendet wird, bezeichnet entweder einen aromatischen, monocyclischen Rest mit 6 Kohlenstoffatomen oder einen aromatischen, bicyclischen Rest mit 10 Kohlenstoffatomen; Aryl schließt beispielsweise Phenyl, 1-Naphthyl und 2-Naphthyl ein.
Der Begriff „C_7-16-Aralkyl", wie er hier verwendet wird, bezeichnet ein wie vorstehend definiertes C₆- oder C₁₀-Aryl, das an einen Alkylrest gebunden ist, und schließt beispielsweise Benzyl, Butylphenyl und 1-Naphthylmethyl ein.
Der Begriff „Aminoaralkyl", wie er hier verwendet wird, bezeichnet eine Aminogruppe, die mit einem C_7-16-Aralkylrest substituiert ist, wie z. B. die folgende Aminoaralkylgruppe.
Der Begriff „(C_1-6-Alkyl)amid", wie er hier verwendet wird, bezeichnet ein Amid, das mit einem C_1-6-Alkyl mono-substituiert ist, wie z. B.
Der Begriff „Carboxy(C_1-6-alkyl)", wie er hier verwendet wird, bezeichnet eine Carboxylgruppe (COOH), die durch einen wie vorstehend definierten C_1-6-Alkylrest gebunden ist, und schließt beispielsweise Buttersäure ein.
Der Begriff „Heterocyclus", wie er hier verwendet wird, bezeichnet einen einwertigen Rest, der durch Entfernen eines Wasserstoffatoms aus einem fünf-, sechs- oder siebengliedrigen gesättigten oder ungesättigten (einschließlich aromatischen) Heterocyclus, der ein bis vier Heteroatome, ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel, enthält, abgeleitet ist. Ferner schließt der Begriff „Heterocyclus" wie vorstehend definierte Heterocyclen, die mit einer oder mehreren anderen Ringstrukturen kondensiert sind, ein. Beispiele von geeigneten Heterocyclen schließen ein, sind aber nicht beschränkt auf, Pyrrolidin, Tetrahydrofuran, Thiazolidin, Pyrrol, Thiophen, Diazepin, 1H-Imidazol, Isoxazol, Thiazol, Tetrazol, Piperidin, 1,4-Dioxan, 4-Morpholin, Pyridin, Pyrimidin, Thiazolo[4,5-b]pyridin, Chinolin und Indol, oder die folgenden Heterocyclen:
Der Begriff „C_1-6-Alkyl-Heterocyclus", wie er hier verwendet wird, bezeichnet einen wie vorstehend definierten heterocyclischen Rest, der durch einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest gebunden ist, wobei der Alkylrest wie vorstehend definiert ist und 1 bis 6 Kohlenstoffatome enthält. Beispiele von C_1-6-Alkyl-Het schließen ein:
Wenn bei der Benennung von Verbindungen der vorliegenden Erfindung verwendet, bezeichnen die Kennzeichen „P1', P1, P2, P3 und P4", wie sie hier verwendet werden, die relativen Positionen der Aminosäurereste einer Proteaseinhibitor-Bindung bezogen auf die Bindung des natürlichen Peptidspaltungs-Substrats. Bei dem natürlichen Substrat findet die Spaltung zwischen P1 und P1' statt, wobei die Positionen ohne Strich Aminosäuren vom C-terminalen Ende der natürlichen Spaltungsstelle des Peptids aus in Richtung des N-Terminus gezählt bezeichnen; während die Positionen mit Strich vom N-terminalen Ende der Spaltungsstelle ausgehen und sich in Richtung des C-Terminus erstrecken. Beispielsweise bezeichnet P1' die erste Position neben dem rechten Ende des C-Terminus der Spaltungsstelle (d. h. die erste N-terminale Position); während mit P1 die Zählung am linken Ende des C-Terminus der Spaltungsstelle beginnt, P2: zweite Position vom C-Terminus ausgehend, usw. [siehe Berger A. & Schechter I., Transactions of the Royal Society London series (1970), B257, 249–264].
Für die Verbindungen der Formel I sind die Abschnitte „P1' bis P4" des Moleküls demgemäß wie nachstehend gezeigt:
Wie hier verwendet, bezeichnet der Begriff „1-Aminocyclopropylcarbonsäure" (Acca) eine Verbindung der Formel:
Wie hier verwendet, bezeichnet der Begriff „tert-Butylglycin" eine Verbindung der Formel:
Der Begriff „Rest" mit Bezug auf eine Aminosäure oder ein Aminosäurederivat bezeichnet einen Rest, der von der entsprechenden α-Aminosäure durch Entfernen der Hydroxygruppe der Carboxylgruppe und eines Wasserstoffatoms der α-Aminosäuregruppe abgeleitet ist. Beispielsweise stehen die Begriffe Gln, Ala, Gly, Ile, Arg, Asp, Phe, Ser, Leu, Cys, Asn, Sar und Tyr für die „Reste" von L-Glutamin, L-Alanin, Glycin, L-Isoleucin, L-Arginin, L-Asparaginsäure, L-Phenylalanin, L-Serin, L-Leucin, L-Cystein, L-Asparagin, Sarcosin bzw. L-Tyrosin.
Der Begriff „Seitenkette" mit Bezug auf eine Aminosäure oder einen Aminosäurerest bezeichnet einen Rest, der an das α-Kohlenstoffatom der α-Aminosäure gebunden ist. Beispielsweise ist die R-Gruppen-Seitenkette von Glycin ein Wasserstoffatom, bei Alanin ist sie eine Methylgruppe, bei Valin ist sie eine Isopropylgruppe. Mit Bezug auf die speziellen R-Gruppen oder Seitenketten der α-Aminosäuren wird auf den Text von A. L. Lehninger in Biochemistry (siehe Kapitel 4) verwiesen.
Bei Verbindungen der vorliegenden Erfindung ist bevorzugt, dass m gleich 2 ist. Es ist auch bevorzugt, dass n gleich 1 ist. Außerdem ist bevorzugt, dass R₂ Ethyl oder Ethenyl ist. Ferner ist bevorzugt, dass R₁ Cyclopropyl, Cyclobutyl oder gegebenenfalls substituiertes Phenyl ist.
Außerdem ist bevorzugt, dass R₁ Cyclopentyl ist.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform weisen die Verbindungen der vorliegenden Erfindung die Struktur der Formel II auf,
Formel II wobei R₃, B und Y wie in Formel I definiert sind, während R₁₁ C_1-8-Alkyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl), Naphthyl oder Phenyl ist, wobei der Phenylrest gegebenenfalls ein bis drei Mal mit Halogen, Cyano, Nitro, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, Amido oder Phenyl substituiert ist. Ferner ist R₁₂ C_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl oder H. Die vorliegende Erfindung umfasst ferner Salze, Solvate und Prodrugs von Verbindungen der Formel II, ebenso wie pharmazeutische Zusammensetzungen, die Verbindungen der Formel II oder Salze, Solvate oder Prodrugs davon umfassen.
Bei einer weiteren bevorzugten Ausführungsform weisen die Verbindungen der vorliegenden Erfindung die Struktur der Formel III auf,
Formel III wobei R₃, B und Y wie in Formel I definiert sind und R₁₁ wie in Formel II definiert ist. Vorzugsweise ist bei Verbindungen der Formel III R₁₁ aus Cyclopropyl, Cyclobutyl und gegebenenfalls substituiertem Phenyl ausgewählt. Die vorliegende Erfindung umfasst ferner Salze, Solvate und Prodrugs von Verbindungen der Formel III, ebenso wie pharmazeutische Zusammensetzungen, die Verbindungen der Formel III oder Salze, Solvate oder Prodrugs davon umfassen.
Bei einer weiteren bevorzugten Ausführungsform weisen die Verbindungen der vorliegenden Erfindung die Struktur der Formel IV auf,
Formel IV wobei R₃, B und Y wie in Formel I definiert sind und R₁₁ wie in Formel II definiert ist. Vorzugsweise ist bei Verbindungen der Formel IV R₁₁ aus Cyclopropyl, Cyclobutyl und gegebenenfalls substituiertem Phenyl ausgewählt. Die vorliegende Erfindung umfasst ferner Salze, Solvate und Prodrugs von Verbindungen der Formel IV, ebenso wie pharmazeutische Zusammensetzungen, die Verbindungen der Formel IV oder Salze, Solvate oder Prodrugs davon umfassen.
Eine weitere bevorzugte Ausführungsform sind die Verbindungen der Formel V,
Formel V wobei R₃, n, B und Y wie in Formel I definiert sind, R₁₁ wie in Formel II definiert ist und p 1 bis 5 ist.
Vorzugsweise ist bei Verbindungen der Formel V R₁₁ aus Cyclopropyl, Cyclobutyl und gegebenenfalls substituiertem Phenyl ausgewählt. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung schließen Diastereomere der spiralen Funktionalität der Verbindungen der Formel V ein, wobei die Diastereomere entweder in einem Gemisch oder als ein einzelnes Diastereomer, das einzeln hergestellt worden ist oder aus einem Diastereomerengemisch isoliert worden ist, vorliegen können.
Die vorliegende Erfindung umfasst ferner Salze, Solvate und Prodrugs von Verbindungen der Formel V, ebenso wie pharmazeutische Zusammensetzungen, die Verbindungen der Formel V oder Salze, Solvate oder Prodrugs davon umfassen.
Bei einer weiteren bevorzugten Ausführungsform weisen die Verbindungen der vorliegenden Erfindung die folgende Strukturformel auf,
Formel VI wobei:

(a) R₃₁ C_1-8-Alkyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl) ist, alle gegebenenfalls substituiert mit Hydroxy, Halogen, C_1-6-Alkoxy, C_1-6-Thioalkyl, Amido, Amino, (C_1-6-Alkyl)amido, C₆- oder C₁₀-Aryl, C_7-16-Aralkyl, Het oder (C_1-6-Alkyl)-Het, wobei der Arylrest, Arylalkylrest oder Het-Rest gegebenenfalls mit Halogen, Alkyl oder Niederalkyl-Het substituiert ist;
(b) n 1 oder 2 ist;
(c) R₃₂ H, C_1-6-Alkyl, C_1-3-Alkoxy, C_3-7-Cycloalkyl, C_2-6-Alkenyl oder C_2-6-Alkinyl ist, alle gegebenenfalls substituiert mit Halogen;
(d) R₃₃ C_1-8-Alkyl, C_3-12-Alkenyl, C_3-7-Cycloalkyl, C_4-13-Cycloalkenyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl) ist, alle gegebenenfalls substituiert mit Hydroxy, C_1-6-Alkoxy, C_1-6-Thioalkyl, Amino, Amido, (Niederalkyl)amido, C₆- oder C₁₀-Aryl oder C_7-16-Aralkyl;
(e) Y₂ H oder C₁-C₆-Alkyl ist;
(f) B₂ H, R₁₄-(C=O)-; R₁₄O(C=O)-, R₁₄-N(R₁₅)-C(=O)-; R₁₄-N(R₁₅)-C(=S)-; R₁₄SO₂- oder R₁₄-N(R₁₅)-SO₂- ist;
(g) R₁₄ (i) C_1-10-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit Carboxyl, C_1-6-Alkanoyl, Hydroxy, C_1-6-Alkoxy, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; (ii) C_3-7-Cycloalkyl, C_3-7-Cycloalkoxy oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl), alle gegebenenfalls substituiert mit Hydroxy, Carboxyl, (C_1-6-Alkoxy)carbonyl, Amino, gegebenenfalls monosubstituiert oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; (iii) Amino, gegebenenfalls monosubstituiert oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; Amido; oder (Niederalkyl)amido; (iv) C₆- oder C₁₀-Aryl oder C_7-16-Aralkyl, alle gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls monosubstituiert oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; oder (v) Het oder (Niederalkyl)-Het, beide gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls monosubstituiert oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, ist; und
(h) R₁₅ H oder C_1-6-Alkyl ist.

Die vorliegende Erfindung umfasst ferner Salze, Solvate und Prodrugs von Verbindungen der Formel VI, ebenso wie pharmazeutische Zusammensetzungen, die Verbindungen der Formel VI oder Salze, Solvate oder Prodrugs davon umfassen.
Aufgrund ihrer basischen Einheit können Verbindungen der vorliegenden Erfindung durch Addition einer pharmazeutisch verträglichen Säure Salze bilden. Die Säureadditionssalze werden aus einer Verbindung der Formel I und einer pharmazeutisch verträglichen anorganischen Säure, einschließlich, aber nicht beschränkt auf, Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Iodwasserstoffsäure, Schwefelsäure und Phosphorsäure, oder einer organischen Säure, wie z. B. p-Toluolsulfonsäure, Methansulfonsäure, Essigsäure, Benzoesäure, Citronensäure, Malonsäure, Fumarsäure, Maleinsäure, Oxalsäure, Bernsteinsäure, Sulfaminsäure und Weinsäure, gebildet. Beispiele solcher pharmazeutisch verträglichen Salze schließen daher Chlorid, Bromid, Iodid, Sulfat, Phosphat, Methansulfonat, Citrat, Acetat, Malonat, Fumarat, Sulfamat und Tartrat ein.
Salze einer Amingruppe können auch quaternäre Ammoniumsalze, bei denen der Amino-Stickstoff einen geeigneten organischen Rest, wie z. B. eine Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl- oder Aralkyleinheit, trägt, umfassen.
Verbindungen der vorliegenden Erfindung, die mit einem basischen Rest substituiert sind, können als durch Basenaddition gebildete Salze vorliegen. Solche Basenadditionssalze schließen solche ein, die von anorganischen Basen abgeleitet sind, und schließen beispielsweise Alkalimetallsalze (beispielsweise Natrium und Kalium), Erdalkalimetallsalze (beispielsweise Calcium und Magnesium), Aluminiumsalze und Ammoniumsalze ein. Außerdem schließen geeignete Basenadditionssalze Salze von physiologisch verträglichen organischen Basen ein, wie z. B. Trimethylamin, Triethylamin, Morpholin, Pyridin, Piperidin, Picolin, Dicyclohexylamin, N,N'-Dibenzylethylendiamin, 2-Hydroxyethylamin, Bis-(2-hydroxyethyl)amin, Tri-(2- hydroxyethyl)amin, Procain, Dibenzylpiperidin, N-Benzyl-β-phenethylamin, Dehydroabietylamin, N,N'-Bishydroabietylamin, Glucamin, N-Methylglucamin, Collidin, Chinin, Chinolin, Ethylendiamin, Ornithin, Cholin, N,N'-Benzylphenethylamin, Chlorprocain, Diethanolamin, Diethylamin, Piperazin, Tris(hydroxymethyl)aminomethan und Tetramethylammoniumhydroxid, und basische Aminosäuren, wie z. B. Lysin, Arginin und N-Methylglutamin. Diese Salze können durch Verfahren, die dem Fachmann bekannt sind, hergestellt werden.
Bestimmte Verbindungen der vorliegende Erfindung und ihre Salze können auch in der Form von Solvaten mit Wasser, beispielsweise als Hydrate, oder mit organischen Lösungsmitteln, wie z. B. Methanol, Ethanol oder Acetonitril, um ein Methanolat, Ethanolat bzw. Acetonitrilat zu bilden, vorliegen. Die vorliegende Erfindung schließt jedes Solvat und jedes Gemisch davon ein.
Die vorliegende Erfindung umfasst auch pharmazeutisch verträgliche Prodrugs der Verbindungen der vorliegenden Erfindung. Prodrugs sind Derivate der Verbindungen der Erfindung, die chemisch oder metabolisch spaltbare Reste aufweisen und durch Solvolyse oder unter physiologischen Bedingungen zu den in vivo pharmazeutisch wirksamen Verbindungen der Erfindung werden. Ein Prodrug einer Verbindung der Formeln I–VI kann auf herkömmliche Weise mit einer funktionellen Gruppe der Verbindungen, wie z. B. mit einer Amino-, Hydroxy- oder Carboxylgruppe, gebildet werden. Die Prodrug-Derivatform bietet oft Vorteile bezüglich der Löslichkeit, der Gewebeverträglichkeit oder der verzögerten Freisetzung in einem Säugerorganismus (siehe Bundgard, H., Design of Prodrugs, Seiten 7–9, 21–24, Elsevier, Amsterdam 1985). Prodrugs schließen Säurederivate, die dem Fachmann bekannt sind, wie z. B. Ester, die durch Umsetzen der Ausgangs-Säureverbindung mit einem geeigneten Alkohol hergestellt sind, oder Amide, die durch Umsetzen der Ausgangs-Säureverbindung mit einem geeigneten Amin hergestellt sind, ein. Bei einfachen aliphatischen oder aromatischen Estern, die von, falls vorhanden, sauren, an den Verbindungen der vorliegenden Erfindung anhängenden Gruppen abgeleitet sind, handelt es sich um bevorzugte Prodrugs. In manchen Fällen ist es wünschenswert, Prodrugs vom Doppelester-Typ, wie z. B. (Acyloxy)alkylester oder (Alkoxycarbonyl)oxy)alkylester, herzustellen.
Außerdem können Verbindungen der vorliegenden Erfindung, oder ein Salz, Solvat oder Prodrug davon, Polymorphie aufweisen. Die vorliegende Erfindung umfasst jede solche polymorphe Form.
Ferner enthalten Verbindungen der vorliegenden Erfindung (Formeln I–IV und VI) zwei oder mehrere chirale Zentren. Beispielsweise können Verbindungen der Formeln I–IV und VI die P1-Cyclopropyleinheit der Formel
beinhalten, wobei C₁ und C₂ jeweils ein asymmetrisches Kohlenstoffatom an den Positionen 1 und 2 des Cyclopropylrings darstellen. Ungeachtet anderer möglicher asymmetrischer Zentren in anderen Abschnitten der Verbindungen der Formeln I–IV und VI bedeutet das Vorhandensein dieser beiden asymmetrischen Zentren, dass die Verbindungen der Formeln I–IV und VI als racemische Gemische von Diastereomeren vorliegen können, wie z. B. den Diastereomeren von Verbindungen der Formeln I–IV und VI, wobei, wie nachstehend gezeigt, Q entweder syn bezüglich des Amids oder syn bezüglich des Carbonyls angeordnet sein kann.
Die vorliegende Erfindung schließt beide Enantiomere und Gemische von Enantiomeren, wie z. B. racemische Gemische ein.
Wie in den nachstehenden Beispielen veranschaulicht ist, können die racemischen Gemische hergestellt und anschließend in einzelne optische Isomere getrennt werden, oder diese optischen Isomere können durch chirale Synthese hergestellt werden.
Die Enantiomere können durch Verfahren, die dem Fachmann bekannt sind, getrennt werden, beispielsweise durch Bilden von diastereoisomeren Salzen, die durch Kristallisation getrennt werden können, durch Gas/Flüssigkeits- oder Flüssigkeitschromatographie, durch selektive Umsetzung eines Enantiomers mit einem Enantiomeren-spezifischen Reagens. Wenn das gewünschte Enantiomer durch ein Trennverfahren in eine andere chemische Einheit umgewandelt wird, ist selbstverständlich ein zusätzlicher Schritt zum Bilden der gewünschten enantiomeren Form nötig. Bei einer anderen Ausführungsform können spezielle Enantiomere durch asymmetrische Synthese unter Verwendung von optisch aktiven Reagenzien, Substraten, Katalysatoren oder Lösungsmitteln, oder durch Umwandlung eines Enantiomers in das andere durch asymmetrische Transformation synthetisiert werden.
Bestimmte Verbindungen der vorliegenden Erfindung können auch in verschiedenen stabilen Konformationsformen, die getrennt werden können, vorliegen. Eine Torsions-Asymmetrie durch eine beschränkte Rotation um eine asymmetrische Einfachbindung, die beispielsweise von einer sterischen Behinderung oder einer Ringspannung verursacht ist, kann die Trennung von verschiedenen Konformeren ermöglichen. Die vorliegende Erfindung schließt jedes Konformationsisomer dieser Verbindungen und Gemische davon ein.
Bestimmte Verbindungen der vorliegenden Erfindung können in zwitterionischer Form vorliegen, und die vorliegende Erfindung schließt jede zwitterionische Form dieser Verbindungen und Gemische davon ein.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind zum Hemmen der HCV-NS3-Protease von Nutzen, ebenso wie bei der Verhinderung oder Behandlung von Infektionen durch das Hepatitis C-Virus und die Behandlung von dadurch verursachten pathologischen Zuständen. Die Behandlung umfasst das Verabreichen einer Verbindung der vorliegenden Erfindung oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes, Solvats oder Prodrugs davon, oder einer pharmazeutischen Zusammensetzung, die einen pharmazeutischen Träger und eine therapeutisch wirksame Menge einer Verbindung der vorliegenden Erfindung oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes, Solvats oder Prodrugs davon umfasst, an einen Patienten mit Bedarf.
Dem Fachmann ist es selbstverständlich, dass sich hier eine Bezugnahme auf eine Behandlung sowohl auf die Prophylaxe als auch auf die Behandlung von vorliegenden Infektionen oder Symptomen erstreckt. Dies schließt das Beginnen einer Behandlung vor oder nach der Exposition an das Virus ein. Außerdem kann die vorliegende Erfindung in Verbindung mit Immunomodulatoren, wie z. B. α-, β- oder γ-Interferonen; anderen antiviralen Wirkstoffen, wie z. B. Ribavirin, Amantadin; anderen Inhibitoren der HCV-NS3-Protease; Inhibitoren von anderen Zielen im HCV-Lebenszyklus, einschließlich, aber nicht beschränkt auf, Helicase, Polymerase, Metalloprotease oder die interne Ribosomenbindungsstelle (IRES; engl.: Internal Ribosomal Entry Site); oder Kombinationen davon, verabreicht werden. Die zusätzlichen Wirkstoffe können mit den Verbindungen der vorliegenden Erfindung so kombiniert werden, dass eine einzelne Dosierungsform entsteht. Bei einer anderen Ausführungsform können die zusätzlichen Wirkstoffe als Teil einer mehrfachen Dosierungsform getrennt an einen Säuger verabreicht werden.
Diese Verfahren sind zum Absenken der Aktivität der HCV-NS3-Protease in einem Säuger von Nutzen. Die Verfahren sind zum Hemmen der viralen Replikation in einem Säuger von Nutzen. Wenn die pharmazeutische Zusammensetzung nur eine Verbindung der vorliegenden Erfindung als Wirkstoff umfasst, können solche Verfahren zusätzlich einen Schritt des Verabreichens eines Wirkstoffs, ausgewählt aus einem Immunomodulator, einem antiviralen Mittel, einem HCV-Protease-Inhibitor und einem Inhibitor von anderen Zielen im HCV-Lebenszyklus, wie z. B. Helicase, Polymerase, Metalloprotease oder IRES, an den Säuger umfassen. Solche zusätzlichen Wirkstoffe können an den Säuger vor, gleichzeitig mit oder nach der Verabreichung der Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung verabreicht werden.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind auch bei der Herstellung und Durchführung von Screening- und Replikationstests für antivirale Verbindungen von Nutzen. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind ferner zum Ermitteln oder Bestimmen der Bindungsstelle von anderen antiviralen Verbindungen an die HCV-NS3-Protease, beispielsweise durch Konkurrenzhemmung, von Nutzen.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können oral, parenteral (einschließlich subkutaner Injektion, intravenöser, intramuskulärer, intrasternaler Injektions- oder Infusionsverfahren), durch Inhalationssprays oder rektal in Einheitsdosis-Formulierungen, die herkömmliche nicht-toxische pharmazeutisch verträgliche Träger, Hilfsstoffe und Schleppersubstanzen enthalten, verabreicht werden.
Die vorliegende Erfindung stellt auch eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung bei dem vorstehend beschriebenen therapeutischen Verfahren bereit. Eine pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung umfasst eine wirksame Menge einer Verbindung der Formeln I–VI in Verbindung mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger, Exzipienten oder Verdünnungsmittel.
In solchen Formulierungen umfasst der Wirkstoff 0,1 Gew.-% bis 99,9 Gew.-% der Formulierung. Mit „pharmazeutisch verträglich" ist gemeint, dass der Träger, das Verdünnungsmittel oder der Exzipient mit den anderen Bestandteilen der Formulierung vereinbar sein muss und für den Empfänger davon nicht schädlich sein darf.
Die vorliegenden pharmazeutischen Zusammensetzungen werden mit bekannten Verfahren unter Verwendung von gut bekannten und leicht verfügbaren Bestandteilen hergestellt. Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können unter Verwendung von Verfahren, die im Stand der Technik gut bekannt sind, so formuliert werden, dass sie nach der Verabreichung an den Patienten eine schnelle, eine Depot- oder eine verzögerte Freisetzung des Wirkstoffs liefern. Bei der Herstellung der Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung wird der Wirkstoff üblicherweise mit einem Träger gemischt oder mit einem Träger verdünnt, oder in einen Träger, der in der Form einer Kapsel, eines Briefchens, von Papier oder eines anderen Behälters vorliegen kann, eingeschlossen werden. Wenn der Träger als Verdünnungsmittel dient, kann er es sich dabei um ein festes, ein halbfestes oder ein flüssiges Material handeln, das als Schleppersubstanz, Exzipient oder Medium für den Wirkstoff dient. Die Zusammensetzungen können daher in der Form von Tabletten, Pillen, Pulvern, Kügelchen, Pastillen, Briefchen, Elixieren, Suspensionen, Emulsionen, Lösungen, Sirupen, Aerosolen (als Feststoff oder in einem flüssigen Medium), Weich- und Hartgelatinekapseln, Zäpfchen, sterilen injizierbaren Lösungen, sterilen abgepackten Pulvern und dergleichen vorliegen.
Die Verbindungen können auf verschiedenen Wegen, einschließlich oralem, intranasalem, rektalem, transdermalem, subkutanem, intravenösem, intramuskulärem und intranasalem Weg, verabreicht werden.
Zur oralen Verabreichung werden diese Zusammensetzungen gemäß Verfahren, die im Stand der Technik der pharmazeutischen Formulierungen gut bekannt sind, hergestellt. Zur oralen Verabreichung wird die Verbindung typischerweise mit Exzipienten wie Bindemitteln, Füllstoffen, Gleitmitteln, Streckmitteln, Verdünnungsmitteln, Sprengmitteln und dergleichen, wie im Stand der Technik bekannt, formuliert.
Zur parenteralen Verabreichung wird die Verbindung in pharmazeutisch verträglichen, nicht-toxischen, parenteral verträglichen Verdünnungsmitteln oder Lösungsmitteln, wie z. B. Mannitol, 1,3-Butandiol, Wasser, 5%-iger Dextrose, Ringers Lösung oder isotonischer Kochsalzlösung, oder geeigneten Dispersions- oder Netz- und Suspensionsmitteln, wie z. B. sterilen, sanften, fixierten Ölen, einschließlich synthetischer Mono- oder Diglyceride, und Fettsäuren, einschließlich Oleinsäure, formuliert.
Eine Verbindung der vorliegenden Erfindung oder ein Salz oder Solvat davon kann in Einheitsdosis-Formulierungen, umfassend eine Dosis zwischen etwa 0,1 mg und etwa 1000 mg oder mehr, gemäß der bestimmten, damit einhergehenden Behandlung formuliert werden. Ein Beispiel einer Einheitsdosis-Formulierung umfasst 5 mg einer Verbindung der vorliegenden Erfindung in einer sterilen 10 ml-Glasampulle. Ein weiteres Beispiel einer Einheitsdosis-Formulierung umfasst etwa 10 mg einer Verbindung der vorliegenden Erfindung als ein pharmazeutisch verträgliches Salz in 20 ml isotonischer Kochsalzlösung, die in einer sterilen Ampulle enthalten ist.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können an Menschen auch in einem Dosierungsbereich von 1 bis 100 mg/kg Körpergewicht in aufgeteilten Dosen verabreicht werden. Ein bevorzugter Dosierungsbereich beträgt 1 bis 20 mg/kg Körpergewicht oral in aufgeteilten Dosen. Für einen bestimmten Patienten kann jedoch das spezielle Dosisniveau und die Häufigkeit der Dosierung selbstverständlich variiert werden, und wird von einer Vielzahl von Faktoren, einschließlich der Wirksamkeit der bestimmten Verbindung, die verwendet wird, der metabolischen Stabilität und der Wirkungsdauer dieser Verbindung, dem Verabreichungsweg, Alter, Körpergewicht, dem gesundheitlichen Allgemeinzustand, Geschlecht, der Ernährung, der Art und Zeit der Verabreichung, der Geschwindigkeit der Ausscheidung, der Wirkstoffkombination, der Schwere des bestimmten Zustands und dem Wirt, der die Therapie erfährt, abhängen.
Nachstehend wird ein allgemeines Verfahren gezeigt, das für die Synthese von Verbindungen, die von der vorliegenden Erfindung umfasst werden, von Nutzen ist. Die nachstehend gezeigten Herstellungen werden zum Zweck der Veranschaulichung offenbart und sind nicht zur Interpretation als beschränkend für die Verfahren zum Herstellen der Verbindungen durch andere Verfahren gedacht.
Dem Fachmann ist es selbstverständlich, dass zum Herstellen der Verbindungen der vorliegenden Erfindung eine Anzahl von Verfahren zur Verfügung steht. Diese Verbindungen können durch Verfahren, die im Fachgebiet der Chemie für die Herstellung von strukturell analogen Verbindungen bekannte Verfahren einschließen, oder durch ein hier beschriebenes neues Verfahren hergestellt werden. Ein Verfahren zum Herstellen dieser Verbindungen (oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon) und neue Intermediate zum Herstellen dieser Verbindungen stellen weitere Merkmale der vorliegenden Erfindung dar, und werden durch die nachstehend beschriebenen Verfahren, bei denen die Bedeutungen der generischen Reste, wenn nicht anders angegeben, wie vorstehend definiert sind, veranschaulicht. Selbstverständlich kann es bevorzugt oder notwendig sein, eine solche Verbindung herzustellen, bei der eine funktionelle Gruppe unter Verwendung einer herkömmlichen Schutzgruppe geschützt ist, und die Schutzgruppe anschließend zu entfernen, um die Verbindung der vorliegenden Erfindung zu ergeben.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können gemäß einem allgemeinen Verfahren wie in Schema I gezeigt (wobei CPG eine Carboxy-schützende Gruppe ist und APG eine Amino-schützende Gruppe ist) synthetisiert werden:
Schema 1
Kurz gesagt, können P1, P2 und P3 durch gut bekannte Peptidkupplungs-Verfahren miteinander verbunden werden. Die Reste P1, P2 und P3 können in jeder Reihenfolge miteinander verbunden werden, vorausgesetzt, dass die Endverbindung Peptiden der Formeln I–VI entspricht. Beispielsweise kann P3 an P2-P1 gebunden werden; oder es kann P1 an P3-P2 gebunden werden.
Im Allgemeinen werden Peptide durch Schutzgruppenentfernung an der α-Aminogruppe des N-terminalen Restes und Kuppeln der ungeschützten Carboxylgruppe der nächsten, auf geeignete Weise N-geschützten Aminosäure durch eine Peptidbindung unter Verwendung der beschriebenen Verfahren verlängert. Dieses Verfahren der Schutzgruppenentfernung und des Kuppelns wird wiederholt, bis die gewünschte Sequenz erhalten ist. Das Kuppeln kann mit den konstituierenden Aminosäuren schrittweise durchgeführt werden, wie es in Schema I dargestellt ist. Das Kuppeln zwischen zwei Aminosäuren, einer Aminosäure und einem Peptid, oder zwei Peptidfragmenten kann unter Verwendung von Standard-Kupplungsverfahren, wie z. B. dem Azidverfahren, dem gemischten Kohlensäure/Carbonsäureanhydrid (Isobutylchlorformiat)-Verfahren, dem Carbodiimid (Dicyclohexylcarbodiimid, Diisopropylcarbodiimid oder wasserlösliches Carbodiimid)-Verfahren, dem aktiven Ester(ρ-Nitrophenylester, N-Hydroxysuccinimidoester)-Verfahren, dem Woodward-Reagens K-Verfahren, dem Carbonyldiimidazol-Verfahren, Phosphorreagenzien- oder Oxidations/Reduktions-Verfahren durchgeführt werden. Einige dieser Verfahren (insbesondere das Carbodiimid-Verfahren) können durch Zusetzen von 1-Hydroxybenzotriazol oder 4-DMAP verstärkt werden. Diese Kupplungsreaktionen können sowohl in Lösung (flüssige Phase) als auch in der festen Phase durchgeführt werden.
Insbesondere umfasst der Kupplungsschritt das dehydrierende Kupplen einer freien Carboxylgruppe eines Reaktanden mit der freien Aminogruppe des anderen Reaktanden in Gegenwart eines Kupplungsmittels, um eine verbrückende Amidbindung zu bilden. Beschreibungen solcher Kupplungsmittel sind in allgemeinen Textbüchern über Peptidchemie, beispielsweise M. Bodanszky, „Peptide Chemistry", 2. überarbeitete Auflage, Springer-Verlag, Berlin, Deutschland (1993), zu finden. Beispiele von geeigneten Kupplungsmitteln sind N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid, 1-Hydroxybenzotriazol in Gegenwart von N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid oder N-Ethyl-N'-[(3-dimethylamino)propyl]carbodiimid. Ein zweckmäßiges und nützliches Kupplungsmittel ist das im Handel erhältliche (Benzotriazol-1-yloxy)-tris(dimethylamino)phosphoniumhexafluorophosphat, entweder für sich allein oder in Gegenwart von 1-Hydroxybenzotriazol oder 4-DMAP. Ein weiteres zweckmäßiges und nützliches Kupplungsmittel ist das im Handel erhältliche 2-(1H-Benzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluroniumtetrafluorborat. Noch ein weiteres zweckmäßiges und nützliches Kupplungsmittel ist das im Handel erhältliche O-(7-Azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluroniumhexafluorophosphat.
Die Kupplungsreaktion wird in einem inerten Lösungsmittel, wie z. B. Dichlormethan, Acetonitril oder Dimethylformamid, durchgeführt. Ein Überschuss eines tertiären Amins, wie z. B. Diisopropylethylamin, N-Methylmorpholin, N-Methylpyrrolidin oder 4-DMAP wird zugesetzt, um einen pH-Wert des Reaktionsgemischs von etwa 8 aufrecht zu erhalten. Die Reaktionstemperatur liegt üblicherweise im Bereich von 0°C und 50°C, die Reaktionszeit liegt üblicherweise im Bereich von 15 min und 24 h.
Die funktionellen Gruppen der konstituierenden Aminosäuren müssen im Allgemeinen während der Kupplungsreaktion geschützt werden, um die Bildung von unerwünschten Bindungen zu vermeiden. Die Schutzgruppen, die verwendet werden können, sind in Greene, „Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley & Sons, New York (1981) und „The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", Band 3, Academic Press, New York (1981), deren Beschreibungen hier durch Bezugnahme aufgenommen sind, aufgeführt.
Die α-Aminogruppe jeder Aminosäure, die an die wachsende Peptidkette gekuppelt werden soll, muss geschützt sein (APG). Jede im Stand der Technik bekannte Schutzgruppe kann verwendet werden. Beispiele solcher Gruppen schließen ein: 1) Acylreste, wie z. B. Formyl, Trifluoracetyl, Phthalyl und ρ-Toluolsulfonyl; 2) aromatische Carbamatreste, wie z. B. Benzyloxycarbonyl (Cbz oder Z) und substituierte Benzyloxycarbonyle, und 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc); 3) aliphatische Carbamatreste, wie z. B. tert-Butyloxycarbonyl (Boc), Ethoxycarbonyl, Diisopropylmethoxycarbonyl und Allyloxycarbonyl; 4) cyclische Alkylcarbamatreste, wie z. B. Cyclopentyloxycarbonyl und Adamantyloxycarbonyl; 5) Alkylreste, wie z. B. Triphenylmethyl und Benzyl; 6) Trialkylsilyl, wie z. B. Trimethylsilyl; und 7) Thiol-enthaltende Reste, wie z. B. Phenylthiocarbonyl und Dithiasuccinoyl.
Die bevorzugte α-Amino-schützende Gruppe ist entweder Boc oder Fmoc. Im Handel sind viele Aminosäurederivate, die für die Peptidsynthese geeignet geschützt sind, erhältlich.
Die α-Amino-schützende Gruppe des neu angefügten Aminosäurerests wird vor dem Kuppeln der nächsten Aminosäure abgespalten. Wird die Boc-Gruppe verwendet, so sind die Verfahren der Wahl die Verwendung von Trifluoressigsäure, rein oder in Dichlormethan, oder HCl in Dioxan oder in Ethylacetat. Das so erhaltene Ammoniumsalz wird anschließend vor dem Kuppeln oder in situ mit basischen Lösungen, wie z. B. wässrigen Puffern, oder tertiären Aminen in Dichlormethan oder Acetonitril oder Dimethylformamid, neutralisiert. Wird die Fmoc-Gruppe verwendet, so sind die Reagenzien der Wahl Piperidin oder substituiertes Piperidin in Dimethylformamid, es kann jedoch jedes sekundäre Amin verwendet werden. Die Schutzgruppenentfernung wird bei einer Temperatur zwischen 0°C und Raumtemperatur (RT), üblicherweise bei 20–22°C, durchgeführt.
Jede der Aminosäuren mit Seitenkettenfunktionalitäten muss bei der Herstellung des Peptids unter Verwendung einer der vorstehend beschriebenen Gruppen geschützt werden. Dem Fachmann ist bekannt, dass die Auswahl und die Verwendung von geeigneten Schutzgruppen für diese Seitenkettenfunktionalitäten von der Aminosäure und dem Vorhandensein von anderen Schutzgruppen in dem Peptid abhängen. Die Auswahl solcher Schutzgruppen ist dahingehend wichtig, dass die Gruppe bei der Schutzgruppenentfernung und dem Kuppeln der α-Aminogruppe nicht entfernt werden darf.
Wird beispielsweise Boc als die α-Amino-schützende Gruppe verwendet, sind folgende Schutzgruppen für die Seitenketten geeignet: p-Toluolsulfonyl(Tosyl)-Einheiten können zum Schützen der Amino-Seitenkette von Aminosäuren wie Lys und Arg verwendet werden; Acetamidomethyl-, Benzyl-(Bn) oder tert-Butylsulfonyleinheiten können zum Schützen der Sulfid-enthaltenden Seitenkette von Cystein verwendet werden; Benzyl(Bn)-Ether können zum Schützen der Hydroxy-enthaltenden Seitenketten von Serin, Threonin oder Hydroxyprolin verwendet werden; und Benzylester können zum Schützen der Carboxy-enthaltenden Seitenketten von Asparaginsäure und Glutaminsäure verwendet werden.
Wird Fmoc zum Schützen des α-Amins gewählt, so sind üblicherweise Schutzgruppen auf tert-Butylbasis geeignet. Beispielsweise kann Boc für Lysin und Arginin verwendet werden, tert-Butylether für Serin, Threonin und Hydroxyprolin, und tert-Butylester für Asparaginsäure und Glutaminsäure. Die Triphenylmethyl(Trityl)-Einheit kann zum Schützen der Sulfid-enthaltenden Seitenkette von Cystein verwendet werden.
Wenn das Verlängern des Peptids abgeschlossen ist, werden alle Schutzgruppen entfernt. Wird eine Flüssigphasensynthese verwendet, so werden die Schutzgruppen auf eine beliebige Weise entfernt, die von der Wahl der Schutzgruppen bestimmt ist. Diese Verfahren sind dem Fachmann gut bekannt.
Ferner kann beim Herstellen der Verbindungen der vorliegenden Erfindung der folgenden Leitlinie gefolgt werden. Beispielsweise wird zum Herstellen einer Verbindung mit R₄-C(O)- oder R₄-S(O)₂ ein geschütztes P3 oder das gesamte Peptid oder ein Peptidabschnitt an ein geeignetes Acylchlorid bzw. Sulfonylchlorid, das entweder im Handel erhältlich ist oder für das die Synthese im Stand der Technik bekannt ist, gekuppelt.
Zum Herstellen einer Verbindung mit R₄O-C(O)- wird ein geschütztes P3 oder das gesamte Peptid oder ein Peptidabschnitt an ein geeignetes Chlorformiat, das entweder im Handel erhältlich ist oder für das die Synthese im Stand der Technik bekannt ist, gekuppelt. Für Boc-Derivate wird (Boc)₂O verwendet.
Beispielsweise:

a) Cyclopentanol wird mit Phosgen behandelt, um das entsprechende Chlorformiat herzustellen.
b) Das Chlorformiat wird mit dem gewünschten NH₂-Tripeptid in Gegenwart einer Base, wie z. B. Triethylamin, behandelt, um das Cyclopentylcarbamat zu erhalten. Zum Herstellen einer Verbindung mit R₄-N(R₅)-C(O)- oder R₄-NH-C(S)- wird ein geschütztes P3 oder das gesamte Peptid oder ein Peptidabschnitt mit Phosgen behandelt, gefolgt von Amin, wie in SynLett. Feb. 1995; (2); 142–144 beschrieben, oder mit dem im Handel erhältlichen Isocyanat und einer geeigneten Base, wie z. B. Triethylamin, umgesetzt.

Zum Herstellen einer Verbindung mit R₄-N(R₅)-S(O₂) wird ein geschütztes P3 oder das gesamte Peptid oder ein Peptidabschnitt entweder mit einem frisch hergestellten oder einem im Handel erhältlichen Sulfamylchlorid behandelt, gefolgt von einem Amin, wie in der deutschen Patentanmeldung DE 198 02 350 (1998), 84 Seiten, oder in WO 98/32748 beschrieben.
Die α-Carboxylgruppe des C-terminalen Rests wird üblicherweise als Ester (CPG) geschützt, der gespalten werden kann, um die Carbonsäure zu ergeben. Schutzgruppen, die verwendet werden können, schließen ein: 1) Alkylester, wie z. B. Methyl, Trimethylsilylethyl und tert-Butyl, 2) Aralkylester, wie z. B. Benzyl und substituiertes Benzyl, und 3) Ester, die durch milde Behandlung mit Basen oder durch milde Reduktionsmittel gespalten werden können, wie z. B. Trichlorethyl- und Phenacylester.
Die so erhaltene α-Carbonsäure (erhalten durch die Spaltung mit einer milden Säure, milde Behandlung mit einer Base oder milde Reduktionsmittel) wird mit einem Rest R₀SO₂NH₂ [quantitativ hergestellt durch Behandlung von R₀SO₂Cl in einer gesättigten Lösung von Ammoniak in Tetrahydrofuran] in Gegenwart eines Peptidkupplungsmittels, wie z. B. CDI oder EDAC, in Gegenwart einer Base, wie z. B. 4-Dimethylaminopyridin (4-DMAP) und/oder 1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en (DBU) gekuppelt, um die P1'-Einheit einzuverleiben und so das Tripeptid P1'-P1-P2-P3-APG wirksam zusammenzufügen.
Wird mit den vorstehend beschriebenen Verfahren die P3-schützende Gruppe APG entfernt und durch oben beschriebene Verfahren durch eine Einheit B ersetzt und die so erhaltene α-Carbonsäure, die durch Spaltung erhalten wird (erhalten durch die Spaltung mit einer milden Säure, milde Behandlung mit einer Base oder milde Reduktionsmittel), mit einem Rest R₀SO₂NH₂ [hergestellt durch Behandlung von R₀SO₂Cl in einer gesättigten Lösung von Ammoniak in Tetrahydrofuran] in Gegenwart eines Peptidkupplungsmittels, wie z. B. CDI oder EDAC, in Gegenwart einer Base, wie z. B. 4-Dimethylaminopyridin (4-DMAP) und/oder 1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en (DBU) gekuppelt, um die P1'-Einheit einzuverleiben, so wird ferner das Tripeptid P1'-P1-P2-P3-B hergestellt.
Verbindungen der vorliegenden Erfindung können durch viele Verfahren hergestellt werden, einschließlich derjenigen, die in den nachstehenden Beispielen und in der vorläufigen U.S.-Patentanmeldung Nr. 60/249,968 mit dem Titel „Hepatitis C Tripeptide Inhibitors" von Campbell and Good, eingereicht am 20. November 2000, beschrieben sind.
Erläuterung durch Beispiele
Die folgenden speziellen Beispiele veranschaulichen die Synthese der Verbindungen der vorliegenden Erfindung, und dürfen nicht als die Erfindung in ihrem Bereich oder Umfang beschränkend ausgelegt werden. Die Verfahren können an Variationen angepasst werden, um Verbindungen, die von der vorliegenden Erfindung umfasst, aber nicht ausdrücklich offenbart sind, herzustellen. Ferner werden dem Fachmann auch Variationen der Verfahren offensichtlich ist, um die gleichen Verbindungen auf eine etwas andere Weise herzustellen.
Prozentwerte in Lösung bedeuten ein Verhältnis von Gewicht zu Volumen, und Lösungsverhältnisse bedeuten ein Verhältnis von Volumen zu Volumen, wenn nicht anders angegeben. Kernmagnetresonanz(NMR)-Spektren wurden entweder auf einem Bruker 300, 400 oder 500 MHz-Spektrometer aufgezeichnet; die chemischen Verschiebungen (δ) werden in Millionstelteilen (parts per million) angegeben. Die Flashchromatographie wurde auf Silicagel (SiO₂) gemäß dem Flashchromatographieverfahren von Still (W. C. Still et al., J. Org. Chem., (1978), 43, 2923) durchgeführt.
Alle Flüssigkeitschromatographie(LC)-Daten wurden auf einem Shimadzu LC-10AS Flüssigkeitschromatographen unter Verwendung eines SPD-10AV UV-Vis-Detektors aufgezeichnet, und die Massenspektrometrie(MS)-Daten wurden unter Verwendung einer Micromass Platform für LC im Electrospray-Modus (ES+) durchgeführt.
Wenn nicht anders angegeben, wurde jede Verbindung durch LC/MS analysiert, wobei eines von sieben Verfahren mit den folgenden Bedingungen verwendet wurde.
Säulen: (Verfahren A) – YMC ODS S7 C18 3,0 × 50 mm
(Verfahren B) – YMC ODS-A S7 C18 3,0 × 50 mm
(Verfahren C) – YMC S7 C18 3,0 × 50 mm
(Verfahren D) – YMC Xterra ODS S7 3,0 × 50 mm
(Verfahren E) – YMC Xterra ODS S7 3,0 × 50 mm
(Verfahren F) – YMC ODS-A S7 C18 3,0 × 50 mm
(Verfahren G) – YMC C18 S5 4,6 × 50 mm
Gradient: 100% Lösungsmittel A/0% Lösungsmittel B bis 0% Lösungsmittel A/100% Lösungsmittel B
Gradientenzeit: 2 min (A, B, D, F, G); 8 min (C, E)
Haltezeit: 1 min (A, B, D, F, G); 2 min (C, E)
Fließgeschwindigkeit: 5 ml/min
Detektorwellenlänge: 220 nm
Lösungsmittel A: 10% MeOH/90% H₂O/0,1% TFA
Lösungsmittel B: 10% H₂O/90% MeOH/0,1% TFA.
Die in den folgenden Beispielen beschriebenen Verbindungen und chemischen Intermediate der vorliegenden Erfindung wurden gemäß den folgenden Verfahren hergestellt.
Beispiel 1
Boc-(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 1a–c beschrieben hergestellt.
Schritt 1a: Herstellung von 4-Hydroxy-2-phenyl-7-methoxychinolin, das nachstehend gezeigt ist.
Zu einer Lösung von m-Anisidin (300 g, 2,44 mol) und Ethylbenzoylacetat (234,2 g, 1,22 mol) in Toluol (2,0 l) wurde HCl (4,0 N in Dioxan, 12,2 ml, 48,8 mmol) zugesetzt. Die so erhaltene Lösung wurde unter Verwendung eines Dean-Stark-Geräts 6,5 h refluxiert (dabei wurden etwa 56 ml wässrige Lösung gesammelt). Das Gemisch wurde auf RT abgekühlt und mehrmals mit wässriger HCl (10%, 3 × 500 ml), wässrigem NaOH (1,0 N, 2 × 200 ml) und Wasser (3 × 200 ml) aufgetrennt, anschließend wurde die organische Schicht getrocknet (MgSO₄) und in vacuo konzentriert, um einen öligen Rückstand zu ergeben (329,5 g). Das Rohprodukt wurde unter Verwendung eines Dean-Stark-Geräts (wobei etwa 85 ml Flüssigkeit gesammelt wurden) 80 min in einem Ölbad (280°C) gewärmt. Das Reaktionsgemisch wurde auf RT abgekühlt, der feste Rückstand mit CH₂Cl₂ (400 ml) behandelt und die so erhaltene Suspension filtriert, anschließend wurde der Filterkuchen mit weiterem CH₂Cl₂ (2 × 150 ml) gewaschen. Der so erhaltene Feststoff wurde in vacuo (50°C.; 1 Torr; 1 Tag) getrocknet, um analytisch reines 4-Hydroxy-7-methoxy-2-phenylchinolin als einen hellbraunen Feststoff (60,7 g, 20% Gesamtausbeute) zu ergeben. ¹H-NMR (DMSO) δ: 3,86 (s, 3H), 6,26 (s, 1H), 6,94 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,55–7,62 (m, 3H), 7,80–7,84 (m, 2H), 8,00 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 11,54 (s, 1H); ¹³C-NMR (DMSO-d₆) δ: 55,38, 99,69, 107,07, 113,18, 119,22, 126,52, 127,17, 128,97, 130,34, 134,17, 142,27, 149,53, 161,92, 176,48. LC-MS (Retentionszeit: 1,26, Verfahren D), MS m/z 252 (M⁺ + 1).
Schritt 1b: Herstellung von 4-Chlor-7-methoxy-2-phenylchinolin, das nachstehend gezeigt ist.
Das Produkt von Schritt 1a (21,7 g, 86,4 mmol) wurde in POCl₃ (240 ml) suspendiert. Die Suspension wurde 2 Stunden refluxiert. Nach Entfernen des POCl₃ in vacuo wurde der Rückstand zwischen EtOAc (1 l) und kaltem wässrigen NaOH (hergestellt aus 200 ml 1,0 N NaOH und 20 ml 10,0 N NaOH) aufgetrennt und 15 min gerührt. Die organische Schicht wurde mit Wasser (2 × 200 ml) und Kochsalzlösung (200 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und in vacuo konzentriert, um 4-Chlor-2-phenyl-7-methoxychinolin (21,0 g, 90%) als hellbraunen Feststoff zu ergeben. ¹H-NMR (DMSO-d₆) δ: 3,97 (s, 3H), 7,36 (dd, J = 9,2, 2,6 Hz, 1H), 7,49–7,59 (m, 4H), 8,08 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,26–8,30 (m, 2H); ¹³C-NMR (DMSO-d₆) δ: 55,72, 108,00, 116,51, 119,52, 120,48, 124,74, 127,26, 128,81, 130,00, 137,58, 141,98, 150,20, 156,65, 161,30. LC-MS (Retentionszeit: 1,547, Verfahren D), MS m/z 270 (M⁺ + 1).
Schritt 1c: Herstellung von Boc-(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin, das nachstehend gezeigt ist.
Zu einer Suspension von Boc-4R-Hydroxyprolin (16,44 g, 71,1 mmol) in DMSO (250 ml) wurde tert-BuOK (19,93 g, 177,6 mmol) bei 0°C zugesetzt. Das so hergestellte Gemisch wurde 1,5 Stunden gerührt, dann wurde das Produkt von Schritt 1b (21,02 g, 77,9 mmol) in drei Portionen innerhalb von 1 h zugesetzt. Die Umsetzung wurde einen Tag gerührt, dann wurde das Reaktionsgemisch in kaltes Wasser (1,5 l) gegossen und mit Et₂O (4 × 200 ml) gewaschen. Die wässrige Lösung wurde auf einen pH-Wert von 4,6 angesäuert, filtriert, um einen weißen Feststoff zu ergeben, und in vacuo getrocknet, um das Produkt Boc-(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)prolin (32,5 g, 98%) zu ergeben. ¹H-NMR (DMSO) δ 1,32, 1,35 (zwei s (Rotamere), 9H), 2,30–2,42 (m, 1H), 2,62–2,73 (m, 1H), 3,76 (m, 2H), 3,91 (s, 3H), 4,33–4,40 (m, 1H), 5,55 (m, 1H), 7,15 (dd, J = 9,2, 2,6 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 7,42–7,56 (m, 4H), 7,94–7,99 (m, 1H), 8,25, 8,28 (2s, 2H), 12,53 (brs, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,40, Verfahren D), MS m/z 465 (M⁺ + 1).
Beispiel 2
1-{[1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3-methylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}-2-ethylcyclopropancarbonsäure, die nachstehend gezeigt ist, wurde wie nachfolgend in den Schritten 2a–2h beschrieben hergestellt.
Schritt 2a: Herstellung von 2-Ethylcyclopropan-1,1-dicarbonsäuredi-tert-butylester, der nachstehend gezeigt ist.
Zu einer Suspension von Benzyltriethylammoniumchlorid (21,0 g, 92,2 mmol) in einer 50%igen wässrigen NaOH-Lösung (92,4 g in 185 ml H₂O) wurden 1,2-Dibrombutan (30,0 g, 138,9 mmol) und Di-tert-butylmalonat (20,0 g, 92,5 mmol) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde bei RT 18 h stark gerührt, anschließend wurde ein Gemisch von Eis und Wasser zugesetzt. Das Rohprodukt wurde mit CH₂Cl₂ (3×) extrahiert und nacheinander mit Wasser (3×) und Kochsalzlösung gewaschen, anschließend wurden die organischen Extrakte kombiniert. Die organische Schicht wurde getrocknet (MgSO₄), filtriert und in vacuo konzentriert. Der so erhaltene Rückstand wurde einer Flashchromatographie unterzogen (100 g SiO₂, 3% Et₂O in Hexan), um das Titelprodukt (18,3 g, 67,8 mmol, 73% Ausbeute) zu ergeben, das in der nächsten Umsetzung direkt verwendet wurde.
Schritt 2b: Herstellung von racemischem 2-Ethylcyclopropan-1,1-dicarbonsäure-tert-butylester, der nachstehend gezeigt ist.
Das Produkt von Schritt 2a (18,3 g, 67,8 mmol) wurde zu einer Suspension von Kalium-tert-butoxid (33,55 g, 299,0 mmol) in trockenem Ether (500 ml) bei 0°C zugesetzt, gefolgt von H₂O (1,35 ml, 75,0 mmol), anschließend wurde über Nacht bei RT stark gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in ein Gemisch von Eis und Wasser gegossen und mit Ether (3×) gewaschen. Die wässrige Schicht wurde mit einer 10%-igen wässrigen Citronensäurelösung bei 0°C angesäuert und mit EtOAc (3×) extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurden mit Wasser (2×) und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und in vacuo konzentriert, um das Titelprodukt als ein hellgelbes Öl (10 g, 46,8 mmol, 69% Ausbeute) zu ergeben.
Schritt 2c: Herstellung von (1R,2R)/(1S,2S)-2-Ethyl-1-(2-trimethylsilanylethoxycarbonylamino)cyclopropancarbonsäure-tert-butylester, der nachstehend gezeigt ist.
Zu einer Suspension des Produkts von Schritt 2b (10 g, 46,8 mmol) und 3 g frisch aktivierten 4A-Molekularsieben in trockenem Benzol (160 ml) wurden Et₃N (7,50 ml, 53,8 mmol) und DPPA (11 ml, 10,21 mmol) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 3,5 h refluxiert, anschließend wurde 2-Trimethylsilylethanol (13,5 ml, 94,2 mmol) zugesetzt und das Reaktionsgemisch über Nacht refluxiert. Das Reaktionsgemisch wurde filtriert, mit Et₂O verdünnt, mit einer 10%-igen wässrigen Citronensäurelösung, Wasser, gesättigtem wässrigen NaHCO₃, Wasser (2×) und Kochsalzlösung (2×) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde mit 10 g Polyisocyanat-Radikalfängerharz (Aldrich) in 120 ml CH₂Cl₂ suspendiert, über Nacht bei RT gerührt und filtriert, um das Titelprodukt (8 g, 24,3 mmol; 52%) als ein hellgelbes Öl zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 0,03 (s, 9H), 0,97 (m, 5H), 1,20 (bm, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,40–1,70 (m, 4H), 4,16 (m, 2H), 5,30 (bs, 1H).
Schritt 2d: Herstellung von (1R,2R)/(1S,2S)-1-Amino-2-ethylcyclopropancarbonsäure-tert-butylester, der nachstehend gezeigt ist.
Ethyl syn bezüglich Carboxy
Zu dem Produkt von Schritt 2c (3 g, 9 mmol) wurde eine 1,0 M-Lösung von TBAF in THF (9,3 ml, 9,3 mmol) zugesetzt; das Gemisch wurde 1,5 h unter Rückfluss gewärmt, auf RT abgekühlt und anschließend mit 500 ml EtOAc verdünnt. Die Lösung wurde nacheinander mit Wasser (2 × 100 ml) und Kochsalzlösung (2 × 100 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und in vacuo konzentriert.
Schritt 2e: Herstellung der (1R,2R)- und (1S,2S)-P1-Isomere von 2-Ethyl-1-{[4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}cyclopropancarbonsäuremethylester, die nachstehend gezeigt sind.
Eine Lösung des Rohprodukts von Schritt 2d (als 9 mmol angenommen) in 10 ml CH₂Cl₂ wurde einem Gemisch von 3,5 g (7,53 mmol, 0,84 Äquivalente) Boc-(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin von Schritt 1c, 4,1 g (10,8 mmol, 1,2 Äquivalente) HATU und 3 ml NMM in 32 ml CH₂Cl₂ tropfenweise zugesetzt. Die Lösung wurde einen Tag bei RT gerührt, mit 100 ml CH₂Cl₂ verdünnt und dann mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (4 × 50 ml) gewaschen. Die organische Schicht wurde mit gesättigtem wässrigen NaHCO₃ (100 ml) gewaschen, die wässrige Waschlösung mit Ethylacetat (150 ml) extrahiert und die organische Schicht erneut mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (50 ml) und gesättigtem wässrigen NaHCO₃ (50 ml) gewaschen. Die kombinierte organische Lösung wurde getrocknet (MgSO₄), konzentriert und zwei Mal unter Verwendung einer Isco 110 g-Säule (Elution mit 20% bis 50% EtOAc/Hexan) gereinigt, um 1,38 g (32%) des (1R,2R) P1-Isomers und 1,60 g (37%) des (1S,2S) P1-Isomers zu ergeben.
Daten für das (1R,2R)-P1-Isomer: ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 0,95-1,05 (m, 3H), 1,11 (dd, J = 9,5 Hz, 1H), 1,38, 1,42, 1,44 (3s, 18H), 1,35–1,69 (m, 4H), 2,35–2,52 (m, 1H), 2,64–2,80 (m, 1H), 3,87–3,97 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,37–4,45 (m, 1H), 5,47 (m, 1H), 7,15 (dd, J = 9, 2,4 Hz, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,40 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,48–7,55 (m, 3H), 8,01–8,04 (m, 3H).
Daten für das (1S,2S)-P1-Isomer: ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 0,98 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,12–1,26 (m, 1H), 1,39, 1,41 (zwei s (Rotamere), 9H), 1,44 (s, 9H), 1,39–1,69 (m, 4H), 2,35–2,52 (m, 1H), 2,67–2,80 (m, 1H), 3,93 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,36–4,46 (m, 1H), 5,48 (m, 1H), 7,14–7,17 (m, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,41 (m, 1H), 7,47–7,57 (m, 3H), 8,02–8,05 (m, 3H).
Schritt 2f: Herstellung des (1R,2R)-P1-Isomers von 2-Ethyl-1-{[4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}cyclopropancarbonsäuremethylester, das nachstehend gezeigt ist.
Eine Lösung des (1R,2R)-P1-Isomers von 2-(1-tert-Butoxycarbonyl-2-ethylcyclopropyl-1-carbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonsäure-tert-butylester (830 mg, 1,3 mmol) von Schritt 2e wurde 1 Tag mit 100 ml 4 N HCl/Dioxan behandelt und anschließend in vacuo konzentriert. Der so erhaltene Feststoff wurde mit 100 ml Ether behandelt, um 670 mg (95%) 2-Ethyl-1-{[4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}cyclopropancarbonsäure zu ergeben, die sofort in 100 ml 60% MeOH/CH₂Cl₂ gelöst wurde. Das Reaktionsgemisch wurde auf 0°C abgekühlt und 3,1 ml 2 M TMSCHN₂ wurden zugesetzt, anschließend wurde es innerhalb von 10 min auf RT erwärmt. Die Umsetzung war nur zu 50% abgeschlossen; sie wurde durch tropfenweises Zusetzen von 4 N HCl/Dioxan gestoppt und anschließend erneut den Reaktionsbedingungen unterworfen, wodurch die Umsetzung abschlossen wurde, die dann mit einem Überschuss von 4 N HCl/Dioxan gestoppt wurde. Die Lösung wurde konzentriert, um 700 mg 2-Ethyl-1-{[4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}cyclopropancarbonsäuremethylester-Dihydrochlorid zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 0,99 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,24–1,29 (m, 1H), 1,50–1,68 (m, 4H), 2,55–2,65 (m, 1H), 2,96 (dd, J = 14,7, 7,5 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,96 (bs, 2H), 4,07 (s, 3H), 4,66 (dd, J = 10,3, 7,5 Hz, 1H), 5,97 (s, 1H), 7,48 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,70–7,75 (m, 3H), 8,07–8,09 (m, 2H), 8,42 (d, J = 9,1 Hz, 1H).
Dieses Dihydrochloridsalz wurde wahlweise durch Umsetzen mit Et₃N/(BOC)₂O in MeOH zu dem N-BOC-Analogon umgewandelt, wobei das (1R,2R)-P1-Isomer von 2-(1-tert-Butoxycarbonyl-2-ethylcyclopropyl-1-carbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonsäuremethylester gebildet wurde. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 0,99 (t, J = 7 Hz, 3H), 1,15–1,29 (m, 1H), 1,40, 1,44 (zwei s (Rotamere), 9H), 1,40–1,62 (m, 4H), 2,39–2,46 (m, 1H), 2,65–2,76 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,89–3,98 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,40–4,45 (m, 1H), 5,48 (m, 1H), 7,16 (dd, J = 9,2 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,41 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,48–7,56 (m, 3H), 8,02–8,05 (m, 3H).
Schritt 2g: Herstellung des (1R,2R)-P1-Isomers von 1-{[1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3-methylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}-2-ethylcyclopropancarbonsäuremethylester, das nachstehend gezeigt ist.
Zu einer Suspension des Produkts von Schritt 2f (120 mg, 0,21 mmol), N-BOC-L-Valin (51 mg, 0,23 mmol) und NMM (0,10 ml, 0,84 mmol) in DMF (2,5 ml) wurde HATU (89 mg, 0,23 mmol) bei 0°C zugesetzt. Nach 2 Tagen Rühren wurde das Reaktionsgemisch mit EtOAc (80 ml) verdünnt, mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (2 × 30 ml), gesättigtem wässrigen NaHCO₃ (30 ml) und Kochsalzlösung (30 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und mit einer Isco 10 g-Säule (Elution mit 15% bis 60% EtOAc in Hexan) gereinigt, um das Titelprodukt als ein undurchsichtiges Glas (132 mg, 0,19 mmol, 91%) zu ergeben. ¹H-NMR δ 0,97–1,01 (m, 6H), 1,13 (m, 1H), 1,23 (dd, J = 9, 5 Hz, 1H), 1,27 (s, 9H), 1,44 (dd, J = 8, 5 Hz, 1H), 1,52–1,66 (m, 3H), 1,98–2,05 (m, 1H), 2,41–2,47 (m, 1H), 2,71–2,76 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,98 (s, 3H), 4,05–4,12 (m, 2H), 4,59–4,69 (m, 2H), 5,58 (m, 1H), 7,12 (dd, J = 9,2, 2 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,42 (d, J = 2 Hz, 1H), 8,07, 8,08 (2s, 2H), 8,12 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,54, Verfahren D), MS m/z 689 (M⁺ + 1).
Schritt 2h: Herstellung des (1R,2R)-P1-Isomers von 1-{[1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3-methylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}-2-ethylcyclopropancarbonsäure, das nachstehend gezeigt ist.
Zu einer Suspension des Produkts von Schritt 2g (124 mg, 0,18 mmol) in THF (7,9 ml), CH₃OH (0,8 ml) und H₂O (4,2 ml) wurde LiOH (62 mg, 1,1 mmol) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde zwei Tage gerührt, auf einen neutralen pH-Wert angesäuert und in vacuo konzentriert, bis nur die wässrige Schicht zurückgeblieben war. Der so erhaltene wässrige Rückstand wurde durch Zusetzen von 1,0 N wässriger HCl auf einen pH-Wert von 3,0 angesäuert und mit EtOAc (4 × 80 ml) extrahiert. Das kombinierte organische Lösungsmittel wurde mit Kochsalzlösung (20 ml) gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄), filtriert und in vacuo konzentriert, um das Titelprodukt als ein undurchsichtiges Glas (100 mg, 0,148 mmol, 82%) zu ergeben. ¹H-NMR δ 0,88–1,03 (m, 9H), 1,11 (m, 1H), 1,23 (s, 9H), 1,19–1,70 (m, 5H), 1,96–2,01 (m, 1H), 2,43–2,52 (m, 1H), 2,70–2,77 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 4,00–4,10 (m, 2H), 4,57–4,65 (m, 2H), 5,59 (s, 1H), 7,11–7,15 (m, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,41 (m, 1H), 7,53–7,60 (m, 3H), 8,04–8,07 (m, 2H), 8,12 (d, J = 9 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,50, Verfahren D), MS m/z 675 (M⁺ + 1).
Beispiel 3
Verbindung 1, das (1R,2R)-P1-Isomer von {1-[2-(2-Ethyl-1-methansulfonylaminocarbonylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2-methylpropyl}carbaminsäureisopropylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Zu einer Lösung von EDAC (21 mg, 0,11 mmol) in CH₂Cl₂ (1 ml) wurde eine Lösung des Produkts von Schritt 2h (40 mg, 0,06 mmol) in CH₂Cl₂ (2 × 0,5 ml Portionen) zugesetzt, gefolgt von 4-DMAP (14,5 mg, 0,11 mmol) und im Handel erhältlichem Methansulfonamid (Aldrich) (11,3 mg, 0,11 mmol). Die so erhaltene Lösung wurde 8 Tage gerührt, anschließend wurde DBU (16,7 mg, 0,11 mmol) zugesetzt. Die Umsetzung wurde weitere zwei Tage gerührt und anschließend mit EtOAc (80 ml) verdünnt und mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (3 × 30 ml), wässrigem NaHCO₃ (2 × 30 ml) und Kochsalzlösung (30 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und mit einer Isco 10 g-Säule (Elution mit 15% bis 100% EtOAc in Hexan) gereinigt, um Verbindung 1 als ein undurchsichtiges Glas (23,4 mg, 50%) zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 0,93–0,97 (m, 9H), 1,13–1,17 (m, 1H), 1,22 (s, 9H), 1,43–1,65 (m, 4H), 2,06–2,15 (m, 1H), 2,31–2,40 (m, 1H), 2,62 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 3,20 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 4,02–4,11 (m, 2H), 4,52–4,64 (m, 2H), 5,56 (m, 1H), 7,09 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,38 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,47–7,57 (m, 3H), 8,03–8,09 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,45, Verfahren D), MS m/z 752 (M⁺ + 1).
Das hier in Beispiel 3 beschriebene Kupplungsverfahren kann zum Herstellen von N-Acylsulfonamidderivaten von Tripeptid-Säuren, die entweder ein Vinyl-Acca, wie z. B. im Produkt von Schritt 11e enthalten, oder ein Ethyl-Acca, wie z. B im Produkt von Schritt 2h enthalten, enthalten, herzustellen.
Beispiel 4
Verbindung 2, das (1R,2R) P1-Isomer von {1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-ethylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 4a–d beschrieben hergestellt.
Schritt 4a: Herstellung des (1R,2R)-P1-Isomers von (2-(1-Carboxy-2-ethylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonsäure-tert-butylester), das nachstehend gezeigt ist:
Zu einer Suspension von 1,55 g (2,83 mmol) des Dihydrochloridsalzes des Produkts von Schritt 2f in 60 ml CH₃CN wurden 1,60 ml (12 mmol) TMSCN zugesetzt, anschließend wurde das Gemisch 30 min unter Argon unter Rückfluss gewärmt. Zu der so erhaltenen Lösung wurden 0,93 g (4,26 mmol) (BOC)₂O zugesetzt, das Gemisch wurde 5 h unter Rückfluss erwärmt und dann auf RT abgekühlt. Etwa 10 ml MeOH wurden zugesetzt, anschließend wurde die Umsetzung 10 min gerührt und in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde auf einer Biotage 25 M Säule (Elution mit 0% bis 5% MeOH/CH₂Cl₂) chromatographiert, um 1,550 g (95%) des Titelprodukts als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (CD₃OD) δ 1,03 (m, 3H), 1,11–1,56 (m, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,66 (m, 2H), 2,47 (m, 1H), 2,65–2,78 (m, 1H), 3,95 (s, 5H), 4,41–4,46 (m, 1H), 5,50 (m, 1H), 7,21 (dd, J = 9,0, 2,0 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,39 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,56–7,58 (m, 3H), 7,98–8,08 (m, 3H); ¹³C-NMR (CD₃OD, Rotamere, 2 C=O bei δ 175 mit schwacher Intensität) δ 13,85, 21,69, 23,08, 28,66, 33,90, 37,88, 49,64, 49,93, 53,35, 56,39, 60,53, 78,28, 82,24, 100,82, 105,23, 116,26, 120,29, 124,63, 129,30, 130,20, 131,79, 138,45, 149,26, 156,19, 160,16, 164,16, 164,36. LC-MS (Retentionszeit: 1,54, Verfahren D), MS m/z 575 (M⁺ + 1). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₃₂H₃₈N₃O₇: 576,2710; gefunden: 576,2716.
Schritt 4b: Herstellung des (1R,2R)-Isomers von 2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-ethylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonsäure-tert-butylester, das nachstehend gezeigt ist.
Eine Lösung des Produkts von Schritt 4a (1,55 g, 2,70 mmol) und CDI (0,568 g, 3,50 mmol) in THF (22 ml), DMF (3 ml) und CH₂Cl₂ (25 ml) wurde 60 min refluxiert, 2 Tropfen Et₃N wurden zugesetzt, das Gemisch wurde weitere 30 min refluxiert und anschließend auf RT abgekühlt. Cyclopropylsulfonamid (0,424 g, 3,50 mmol) wurde in einer Portion zugesetzt, bevor eine Lösung von DBU (523 μl, 0,291 mmol) zugesetzt wurde. Die Umsetzung wurde 14 h gerührt, 150 μl (1 mmol) DBU und 100 mg (0,83 mmol) Cyclopropylsulfonamid wurden zugesetzt, anschließend wurde das Gemisch weitere 11 Stunden gerührt. Das Gemisch wurde mit EtOAc (100 ml) verdünnt und mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (3 × 30 ml), Wasser (20 ml) und Kochsalzlösung (20 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und durch eine Biotage 65 M Säule (Elution mit 0% bis 5% MeOH in CH₂Cl₂) gereinigt, um das Titelprodukt als einen Schaum zu ergeben (1,52, 83%). ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 0,94–1,65 (m, 12H), 1,44 (s, 9H), 2,27–2,36 (m, 1H), 2,53–2,59 (m, 1H), 2,93–3,01 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,87–3,97 (m, 2H), 4,22–4,36 (m, 1H), 5,47 (m, 1H), 7,14 (dd, J = 9,0, 2,0 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,38 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,48–7,56 (m, 3H), 7,97–8,04 (m, 3H); ¹³C-NMR (CD₃OD, Rotamere) δ 6,00, 6,30, 6,73, 13,95, 20,83, 23,90, 28,75, 31,72, 32,07, 33,09, 35,41, 36,47, 37,00, 40,56, 56,11, 60,42, 78,07, 82,68, 100,16, 107,54, 116,46, 119,52, 124,01, 129,01, 129,91, 130,76, 141,08, 156,38, 161,20, 162,13, 163,33, 164,91, 171,84, 175,85. LC-MS (Retentionszeit: 1,67, Verfahren B), MS m/z 679 (M⁺ + 1). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₃₅H₄₃N₄SO₈: 679,2802; gefunden: 679,2805.
Schritt 4c: Herstellung des (1R,2R)-P1-Isomers von (4-(7-Methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonsäure-(1-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-ethylcyclopropyl)amid-Dihydrochlorid, das nachstehend gezeigt ist.
bis-HCl-Salz
Eine Lösung von 1,50 g (2,20 mmol) des Produkts von Schritt 4b in 125 ml 4 N HCl in Dioxan wurde 2,5 h gerührt. Das Gemisch wurde in vacuo auf etwa 2 ml konzentriert, anschließend wurden 30 ml Et₂O zugesetzt. Das so erhaltene Präzipitat wurde filtriert und der weiße Feststoff unter Hochvakuum (40°C, 1 Torr) über Nacht getrocknet, um 1,424 g (99%) des Titelprodukts zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 0,97–1,75 (m, 13H), 2,27–2,36 (m, 1H), 2,53–2,61 (m, 1H), 2,92–3,01 (m, 1H), 4,07 (s, 3H), 3,87–4,30 (m, 2H), 6,01 (m, 1H), 7,48 (dm, J = 8,0 Hz, 1H), 7,62–7,79 (m, 5H), 8,13 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 8,57 (d, J = 9,1 Hz, 1H); ¹³C-NMR (CD₃OD, Rotamere) δ 6,02, 6,48, 6,56, 13,89, 21,22, 22,69, 32,00, 33,11, 33,86, 37,10, 41,63, 52,86, 57,14, 60,46, 81,18, 100,68, 102,44, 116,11, 122,13, 126,93, 130,22, 130,85, 133,27, 134,01, 143,82, 158,35, 162,72, 167,31, 170,26, 171,15. LC-MS (Retentionszeit: 1,23, Verfahren B), MS m/z 579 (M⁺ + 1). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₃₀H₃₅SN₄O₆: 579,2277; gefunden: 579,2250.
Schritt 4d: Herstellung von Verbindung 2. Zu einer Lösung des Produkts von Schritt 4c (100 mg, 0,154 mmol) in 2 ml CH₂Cl₂ wurden 53,2 mg (0,23 mmol) BOC-L-tert-Leucin, 31,3 mg (0,23 mmol) HOAT, 87,5 mg (0,23 mmol) HATU und 161 μl (0,92 mmol) DIPEA zugesetzt. Das Gemisch wurde 1 Tag gerührt und anschließend zwischen 100 ml EtOAc und 50 ml eines Puffers mit einem pH-Wert von 4,0 aufgetrennt. Die EtOAc-Schicht wurde mit Kochsalzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde über zwei 1000 μ-PTLC-Platten (beide mit 20 × 40 cm, Elution mit 2% MeOH in CH₂Cl₂) von Analtech chromatographiert, um 115 mg (94%) von Verbindung 2 als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR Methanol-d₄) δ 0,90–1,08 (m, 2H), 0,96 (t, J = 7 Hz, 3H), 1,03 (s, 9H), 1,12–1,33 (m, 2H), 1,26 (s, 9H), 1,43–1,66 (m, 5H), 2,29–2,40 (m, 1H), 2,64 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 2,85–3,02 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,07–4,12 (m, 1H), 4,24–4,27 (m, 1H), 4,50–4,56 (m, 2H), 5,53 (m, 1H), 6,67 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 7,06 (dd, J = 9,2, 2,2 Hz, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,37 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,46–7,56 (m, 3H), 8,03–8,07 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,52, Verfahren A), MS m/z 792 (M⁺ + 1). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₄₁H₅₄N₅O₉S: 792,3642; gefunden: 792,3654.
Beispiel 5
Verbindung 3, das (1R,2R)-P1-Isomer von {1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-ethylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2-methylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Zu einer Lösung des Produkts von Schritt 4c (700 mg, 1,074 mmol) in 14 ml CH₂Cl₂ wurden 350 mg (1,61 mmol) N-BOC-L-Valin, 219,3 mg (1,61 mmol) HOAT, 613 mg (1,61 mmol) HATU und 1,12 ml (6,45 mmol) DIPEA zugesetzt. Das Gemisch wurde 1 Tag gerührt und anschließend zwischen 700 ml EtOAc und 350 ml eines Puffers mit einem pH-Wert von 4,0 aufgetrennt. Die EtOAc-Schicht wurde mit Kochsalzlösung (350 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde über einer Biotage 40+ M Säule (Elution mit 0% bis 10% MeOH in CH₂Cl₂) chromatographiert, um 800 mg eines leicht verunreinigten Rohrückstandes zu ergeben. Dieses Material wurde über fünf 1000 μ-PTLC-Platten (alle mit 20 × 40 cm, Elution mit 2% MeOH in CH₂Cl₂) von Analtech chromatographiert, um 650 mg (78%) von Verbindung 3 als einen weißen Feststoff zu ergeben. LC/MS rt-min (MH⁺): 1,45 (778) (Verfahren A). HRMS m/z: (M + H) berechnet für C₄₀H₅₂N₅SO₉: 778,3486; gefunden: 778,3509. ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 0,66–1,37 (m, 5H), 0,82 (d, J = 7 Hz, 3H), 0,88 (t, J = 7, 3H), 1,05 (m, 12H), 1,61–1,81 (m, 3H), 2,07–2,43 (m, 3H), 2,55–2,67 (m, 1H), 2,79–3,10 (m, 1H), 3,82–3,87 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 4,03 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,12–4,17 (m, 1H), 4,49–4,55 (m, 1H), 5,28 (m, 1H), 6,82–6,94 (m, 2H), 7,38–7,50 (m, 4H), 7,68–7,81 (m, 1H), 7,92–7,96 (m, 2H).
Beispiel 6
Verbindung 4, das (1R,2R) P1-Isomer von (1-(2-Amino-3-methylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonsäure-(1-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-ethylcyclopropyl)amid-Dihydrochlorid, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Eine Gesamtmenge von 600 mg von Verbindung 3 wurde in 60 ml 4 N HCl/Dioxan gelöst und 2,5 h gerührt. Der Schlamm wurde konzentriert, bis etwa 1 ml des Lösungsmittels zurückgeblieben waren, dann wurden 60 ml Et₂O zugesetzt, das Gemisch wurde filtriert und der so erhaltene Feststoff über Nacht in vacuo (50°C, 25 Torr) getrocknet, um 500 mg (86%) von Verbindung 4 als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 0,99 (t, J = 7 Hz, 3H), 1,03–1,20 (m, 9H), 1,22–1,29 (m, 2H), 1,46–1,70 (m, 4H), 2,27–2,37 (m, 1H), 2,42–2,51 (m, 1H), 2,78–2,83 (m, 1H), 2,93–3,03 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,15–4,26 (m, 2H), 4,48 (d, J = 13 Hz, 1H), 4,71–4,76 (m, 1H), 5,92 (m, 1H), 7,45–7,48 (m, 1H), 7,59 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,70–7,77 (m, 3H), 8,10, 8,10 (2s, 2H), 8,41 (d, J = 9 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,10, Verfahren A), MS m/z 677 (M⁺ + 1).
Beispiel 7
Verbindung 5, das (1R,2R)-P1-Isomer von 1-[2-(2-Cyclopropylacetylamino)-3-methylbutyryl]-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonsäure-(1-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-ethylcyclopropyl]amid, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Zu einer Lösung von 85 mg (0,113 mmol) von Verbindung 4, 119 μl (0,68 mmol) DIPEA, 23,1 mg (0,17 mmol) HOAT und 17 mg (0,17 mmol) Cyclopropylessigsäure in 2 ml CH₂Cl₂ wurden 64,6 mg (0,17 mol) HATU zugesetzt. Das Gemisch wurde 18 h gerührt und zwischen 100 ml EtOAc und 35 ml eines Puffers mit einem pH-Wert von 4,0 aufgetrennt. Die EtOAc-Schicht wurde mit Kochsalzlösung (35 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde über einer 20 × 40 cm 1000 μ-PTLC-Platte (Elution mit 2% MeOH in CH₂Cl₂) von Analtech chromatographiert, um 63 mg (73%) von Verbindung 5 als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 0,07–0,10 (m, 2H), 0,37–0,44 (m, 2H), 0,80–0,86 (m, 1H), 0,94–0,97 (m, 6H), 1,00 (d, J = 7 Hz, 3H), 1,05–1,10 (m, 2H), 1,16–1,21 (m, 2H), 1,25–1,30 (m, 1H), 1,50–1,57 (m, 2H), 1,60–1,65 (m, 2H), 1,93–2,01 (m, 2H), 2,15–2,22 (m, 1H), 2,33–2,38 (m, 1H), 2,61 (dd, J = 14, 6,6 Hz, 1H), 2,93–2,98 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,13 (dd, J = 12, 3,5 Hz, 1H), 4,44 (t, J = 9 Hz, 1H), 4,49–4,56 (m, 2H), 5,60 (m, 1H), 7,12 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,38 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,50–7,55 (m, 3H), 7,91 (d, J = 9 Hz, 1H), 8,04–8,05 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,51, Verfahren A), MS m/z 786 (M⁺ + 1). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₄₀H₅₀N₅O₈S: 760,3380; gefunden: 760,3398.
Beispiel 8
Verbindung 6, das (1R,2R)-P1-Isomer von 1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-ethylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2-methylpropyl}carbaminsäurecyclopentylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Zu einer Lösung von 85 mg (0,113 mmol) von Verbindung 4 und 119 μl (0,68 mmol) DIPEA in 2 ml CH₂Cl₂ wurden 400 μl (0,27 mol) reines Cyclopentylchlorformiat in THF (auf analoge Weise wie das in Beispiel 21, Schritt 21a verwendete Chlorformiat hergestellt) zugesetzt. Das Gemisch wurde 18 h gerührt und anschließend zwischen 100 ml EtOAc und 35 ml eines Puffers mit einem pH-Wert von 4,0 aufgetrennt. Die EtOAc-Schicht wurde mit Kochsalzlösung (35 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde über einer 20 × 40 cm 1000 μ-PTLC-Platte (Elution mit 2% MeOH in CH₂Cl₂) von Analtech chromatographiert, um 71 mg (79%) P4(Cyclopentyl-O(C=O))N-P3(L-Val)-P2[(4R)-(2-phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)prolin]-P1(1R,2R-ethyl-Acca)-CONHSO₂-cyclopropan, {1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-ethylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2-methylpropyl}carbaminsäurecyclopentylester als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄, Rotamere ca. 1/1) δ (Methanol d₄, Rotamere ca. 1/1) δ 0,80–1,80 (m, 26H), 2,04–2,22 (m, 1H), 2,24–2,39 (m, 1H), 2,61–2,69 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,04–4,12 (m, 2H), 4,53–4,65 (m, 3H), 5,51–5,57 (m, 1H), 7,11 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,21–7,25 (m, 1H), 7,39–7,40 (m, 1H), 7,49–7,56 (m, 3H), 8,03–8,09 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,69, Verfahren D), MS m/z 816 (M⁺ + 1). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₄₁H₅₂N₅O₉S: 790,3486; gefunden: 790,3479.
Beispiel 9
Verbindung 7, das (1R,2R)-P1-Isomer von 1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-ethylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2-methylpropyl}carbaminsäureethylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Zu einer Lösung von 85 mg (0,113 mmol) von Verbindung 4 und 119 μl (0,68 mmol) DIPEA in 2 ml CH₂Cl₂ wurden 27 μl (0,27 mol) reines Ethylchlorformiat (Aldrich) zugesetzt. Das Gemisch wurde 18 h gerührt und anschließend zwischen 100 ml EtOAc und 35 ml eines Puffers mit einem pH-Wert von 4,0 aufgetrennt. Die EtOAc-Schicht wurde mit Kochsalzlösung (35 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde über einer 20 × 40 cm 1000 μ-PTLC-Platte (Elution mit 2% MeOH in CH₂Cl₂) von Analtech chromatographiert, um 66 mg (78%) von Verbindung 7 als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H-NMR Methanol-d₄) δ 0,70 (t, J = 7 Hz, 3H), 0,88–1,34 (m, 15H), 1,46–1,80 (m, 4H), 2,07–2,38 (m, 2H), 2,46 (m, 1H), 2,58–2,62 (m, 1H), 3,66–3,81 (m, 2H), 3,88 (s, 3H), 4,05–4,13 (m, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,54 (dd, J = 11, 6 Hz, 1H), 4,60 (dd, J = 11,6 Hz, 1H), 5,49, 5,52 (m, 1H), 6,57 (d, J = 8 Hz, NH), 7,20 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,47–7,55 (m, 4H), 7,74 (d, J = 9 Hz, 1H), 8,02–8,05 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,39; Verfahren A), MS m/z 750 (M⁺ + 1). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₃₈H₄₈N₅O₉S: 750,3173; gefunden: 750,3172.
Beispiel 10
Verbindung 8, das (1R,2R)-P1-Isomer von 4-(7-Methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)-1-[3-methyl-2-(3-propylureido)butyryl]pyrrolidin-2-carbonsäure-(1-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-ethylcyclopropyl)amid, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Zu einer Lösung von 85 mg (0,113 mmol) von Verbindung 4 und 119 μl (0,68 mmol) DIPEA in 2 ml CH₂Cl₂ wurden 27 μl (0,27 mol) reines n-Propylisocyanat (Aldrich) zugesetzt. Das Gemisch wurde 18 h gerührt und anschließend zwischen 100 ml EtOAc und 35 ml eines Puffers mit einem pH-Wert von 4,0 aufgetrennt. Die EtOAc-Schicht wurde mit Kochsalzlösung (35 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde über einer 20 × 40 cm 1000 μ-PTLC-Platte (Elution mit 2% MeOH in CH₂Cl₂) von Analtech chromatographiert, um 74 mg (85%) von Verbindung 8 als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (MeOD) δ 0,81 (t, J = 7 Hz, 3H), 0,88–1,68 (m, 20H), 2,05–2,14 (m, 1H), 2,32–2,38 (m, 1H), 2,58–2,62 (m, 1H), 2,87–2,99 (m, 3H), 3,93 (s, 3H), 4,09–4,12 (m, 1H), 4,24–4,27 (m, 1H), 4,50–4,54 (m, 2H), 5,55 (m, 1H), 6,01 (d, J = 9 Hz, NH), 7,09 (dd, J = 9,1, 2,1 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,47–7,52 (m, 3H), 8,02–8,04 (m, 2H), 8,06 (d, J = 9,1 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,38, Verfahren A), MS m/z 763 (M⁺ + 1). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₃₉H₅₁N₆O₈S: 763,3489; gefunden: 763,3477.
Beispiel 11
Verbindung 9, das (1R,2R) P1-Isomer von 1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-ethylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2-methylpropyl}carbaminsäure-2-fluorethylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Zu einer Lösung von 85 mg (0,113 mmol) von Verbindung 4 und 119 μl (0,68 mmol) DIPEA in 2 ml CH₂Cl₂ wurden 32 μl (0,27 mol) reines Fluorethylchlorformiat (Aldrich) zugesetzt. Das Gemisch wurde 18 h gerührt und anschließend zwischen 100 ml EtOAc und 35 ml eines Puffers mit einem pH-Wert von 4,0 aufgetrennt. Die EtOAc-Schicht wurde mit Kochsalzlösung (35 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde über einer 20 × 40 cm 1000 μ-PTLC-Platte (Elution mit 2% MeOH in CH₂Cl₂) von Analtech chromatographiert, um 63 mg (72%) von Verbindung 9 als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H-NMR Methanol-d₄) δ 0,75–1,23 (m, 14H), 1,26–1,33 (m, 1H), 1,55–1,83 (m, 4H), 2,10–2,36 (m, 3H), 2,48 (m, 1H), 2,54–2,64 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,78–4,64 (m, 8H), 5,49 (m, 1H), 6,64 (m, NH), 7,18 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,46–7,54 (m, 4H), 7,74 (d, J = 9 Hz, 1H), 8,04–8,05 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,33, Verfahren A), MS m/z 768 (M⁺ + 1). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₃₈H₄₇FN₅O₉S: 768,3079; gefunden: 768,3091.
Beispiel 12
Das (1R,2S)-P1-Isomer von 1-{[1-2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}-2-vinylcyclopropancarbonsäure, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 12a–e beschrieben hergestellt.
Schritt 12a: Herstellung von (1R,2S)/(1S,2R)-1-Amino-2-vinylcyclopropancarbonsäureethylesterhydrochlorid, das nachstehend gezeigt ist.
Die genannte Verbindung wurde durch jedes der folgenden Verfahren A und B hergestellt.
Verfahren A A.1) Herstellung des N-Benzylimins von Glycinethylester, das nachstehend gezeigt ist.
Glycinethylesterhydrochlorid (303,8 g, 2,16 mol) wurde in tert-Butylmethylether (1,6 l) suspendiert. Benzaldehyd (231 g, 2,16 mol) und wasserfreies Natriumsulfat (154,6 g, 1,09 mol) wurden zugesetzt, dann wurde das Gemisch unter Verwendung eines Eiswasserbads auf 0°C abgekühlt. Triethylamin (455 ml, 3,26 mol) wurde innerhalb von 30 min tropfenweise zugesetzt, dann wurde das Gemisch 48 h bei RT gerührt. Anschließend wurde die Umsetzung durch Zusetzen von Eis-kaltem Wasser (1 l) gestoppt und die organische Schicht abgetrennt. Die wässrige Phase wurde mit tert-Butylmethylether (0,5 l) extrahiert und die kombinierten organischen Phasen mit einem Gemisch von gesättigtem wässrigen NaHCO₃ (1 l) und Kochsalzlösung (1 l) gewaschen. Die Lösung wurde über MgSO₄ getrocknet und in vacuo konzentriert, um 392,4 g des N-Benzyliminprodukts als ein dickes, gelbes Öl, das im nächsten Schritt direkt verwendet wurde, zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 1,32 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 4,24 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,41 (d, J = 1,1 Hz, 2H), 7,39–7,47 (m, 3H), 7,78–7,81 (m, 2H), 8,31 (s, 1H).
A.2) Herstellung von racemischem N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-Amino-2-vinylcyclopropancarbonsäureethylester.
Zu einer Suspension von Lithium-tert-butoxid (84,06 g, 1,05 mol) in trockenem Toluol (1,2 l) wurde ein Gemisch des N-Benzylimins von Glycinethylester (100,4 g, 0,526 mol) und trans-1,4-Dibrom-2-buten (107,0 g, 0,500 mol) in trockenem Toluol (0,6 l) innerhalb von 60 min tropfenweise zugesetzt. Nach dem Ende des Zusetzens wurde das tiefrote Gemisch durch Zusetzen von Wasser (1 l) und tert-Butylmethylether (TBME, 1 l) abgeschreckt. Die wässrige Phase wurde abgetrennt und ein zweites Mal mit TBME (1 l) extrahiert. Die organischen Phasen wurden kombiniert, 1 N HCl (1 l) wurde zugesetzt und das Gemisch 2 h bei Raumtemperatur gerührt. Die organische Phase wurde abgetrennt und mit Wasser (0,8 l) extrahiert. Anschließend wurden die wässrigen Phasen kombiniert, mit Salz (700 g) gesättigt, TBME (1 l) wurde zugesetzt und das Gemisch auf 0°C abgekühlt. Das gerührte Gemisch wurde durch tropfenweises Zusetzen von 10 N NaOH auf einen pH-Wert von 14 basisch eingestellt, die organische Schicht wurde abgetrennt und die wässrige Phase mit TBME (2 × 500 ml) extrahiert. Die kombinierten organischen Extrakte wurden getrocknet (MgSO₄) und auf ein Volumen von 1 l konzentriert. Zu dieser Lösung des freien Amins wurde Di-tert-butyldicarbonat (131,0 g, 0,6 mol) zugesetzt und das Gemisch 4 Tage bei RT gerührt. Der Umsetzung wurde zusätzliches Di-tert-butyldicarbonat (50 g, 0,23 mol) zugesetzt, das Gemisch wurde 3 h refluxiert und anschließend über Nacht auf Raumtemperatur abgekühlt. Das Reaktionsgemisch wurde über MgSO₄ getrocknet und in vacuo konzentriert, um 80 g Rohmaterial zu ergeben. Dieser Rückstand wurde durch Flashchromatographie (2,5 kg SiO₂, Elution mit 1% bis 2% MeOH/CH₂Cl₂) gereinigt, um 57 g (53%) racemisches N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-Amino-2- vinylcyclopropancarbonsäureethylester als ein gelbes Öl, das sich bei der Aufbewahrung in einem Kühlschrank verfestigte, zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 1,26 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,43–1,49 (m, 1H), 1,76–1,82 (br m, 1H), 2,14 (q, J = 8,6 Hz, 1H), 4,18 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 5,12 (dd, J = 10,3, 1,7 Hz, 1H), 5,25 (br s, 1H), 5,29 (dd, J = 17,6, 1,7 Hz, 1H), 5,77 (ddd, J = 17,6, 10,3, 8,9 Hz, 1H); MS m/z 254,16 (M⁺ – 1).
A.3) Herstellung von racemischem (1R,2S)/(1S,2R)-1-Amino-2-vinylcyclopropancarbonsäureethylesterhydrochlorid.
N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-Amino-2-vinylcyclopropancarbonsäureethylester (9,39 g, 36,8 mmol) wurde in 4 N HCl/Dioxan (90 ml, 360 mmol) gelöst und 2 h bei RT gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde konzentriert, um (1R,2S)/(1S,2R)-1-Amino-2-vinylcyclopropancarbonsäureethylesterhydrochlorid in quantitativer Ausbeute (7 g, 100%) zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ: 1,32 (t, J = 7,1, 3H), 1,72 (dd, J = 10,2, 6,6 Hz, 1H), 1,81 (dd, J = 8,3, 6,6 Hz, 1H), 2,38 (q, J = 8,3 Hz, 1H), 4,26–4,34 (m, 2H), 5,24 (dd, 10,3, 1,3 Hz, 1H), 5,40 (d, J = 17,2, 1H), 5,69–5,81 (m, 1H).
Verfahren B
Zu einer Lösung von Kalium-tert-butoxid (11,55 g, 102,9 mmol) in THF (450 ml) bei –78°C wurde im Handel erhältliches N,N-Dibenzylimin von Glycinethylester (25,0 g, 93,53 mmol) in THF (112 ml) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf 0°C erwärmt, 40 min gerührt und dann wieder auf –78°C abgekühlt. Zu dieser Lösung wurde trans-1,4-Dibrom-2-buten (20,0 g, 93,50 mmol) zugesetzt, das Gemisch wurde 1 h bei 0°C gerührt und dann wieder auf –78°C abgekühlt. Kalium-tert-butoxid (11,55 g, 102,9 mmol) wurde zugesetzt, das Gemisch wurde sofort auf 0°C erwärmt und eine weitere Stunde gerührt, bevor es in vacuo konzentriert wurde. Das Rohprodukt wurde in Et₂O (530 ml) aufgenommen, 1 N wässrige HCl-Lösung (106 ml, 106 mmol) wurde zugesetzt und das so erhaltene zweiphasige Gemisch 3,5 h bei RT gerührt. Die Schichten wurden getrennt und die wässrige Schicht mit Et₂O (2×) gewaschen und mit einer gesätttigten, wässrigen NaHCO₃-Lösung basisch eingestellt. Das gewünschte Amin wurde mit Et₂O (3×) extrahiert, anschließend wurden die kombinierten organischen Extrakte mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und in vacuo konzentriert, um das freie Amin zu ergeben. Dieses Material wurde mit einer 4 N HCl-Lösung in Dioxan (100 ml, 400 mmol) behandelt und konzentriert, um (1R,2S)/(1S,2R)-1-Amino-2-vinylcyclopropancarbonsäureethylesterhydrochlorid als einen braunen, halbfesten Stoff zu ergeben (5,3 g, 34% Ausbeute), der mit dem durch Verfahren A erhaltenen Material identisch war, mit der Ausnahme des Vorhandenseins einer kleinen, nicht identifizierten aromatischen Verunreinigung (8%).
Schritt 12b: Herstellung des (1R,2S)-P1-Isomers von 2-(1-Ethoxycarbonyl-2-vinylcyclopropylcarbamyl-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonsäure-tert-butylester, das nachstehend gezeigt ist.
Zu einer Lösung von Boc-4(R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)prolin von Schritt 1c (11,0 g, 23,7 mmol), dem HCl-Salz eines racemischen Gemischs von (1R,2S)- und (1S,2R)-P1-abgeleiteten Diastereomeren von Schritt 11b, wobei die Carboxylgruppe bezüglich der Vinyleinheit syn angeordnet ist (5,40 g, 28,2 mmol), und NMM (20,8 ml, 18,9 mmol) in 500 ml von 50% CH₂Cl₂/THF wurde das Kupplungsmittel PyBrop bzw. Bromtrispyrrolidinophosphoniumhexafluorophosphat (16,0 g, 34,3 mmol) bei 0°C innerhalb von 10 min in drei Portionen zugesetzt. Die Lösung wurde einen Tag bei RT gerührt und dann mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (4 × 50 ml) gewaschen. Die organische Schicht wurde mit gesättigtem wässrigen NaHCO₃ (100 ml) gewaschen, die wässrige Waschlösung mit Ethylacetat (150 ml) extrahiert und die organische Schicht erneut mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (50 ml) und mit gesättigtem wässrigen NaHCO₃ (50 ml) gewaschen. Die organische Lösung wurde getrocknet (MgSO₄), konzentriert und unter Verwendung einer Biotage 65 M Säule (Elution mit 50% EtOAc/Hexan) gereinigt, um über 7,5 g eines 1:1- Gemischs der (1R,2S) und (1S,2R) P1-Isomere von 2-(1-Ethoxycarbonyl-2-vinylcyclopropylcarbamyl-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonsäure-tert-butylester (50% Gesamtausbeute) zu ergeben, oder, bei einer anderen Ausführungsform, bei Elution auf einer Biotage 65 M Säule unter Verwendung eines langsamen 15% bis 60% EtOAc in Hexan-Gradienten, 3,54 g (25%) des bei hohem Rf-Wert eluierten (1R,2S)-P1-Isomers und 3,54 g (25%) des bei niedrigem Rf-Wert eluierten (1S,2R)-P1-Isomers zu ergeben.
Daten für das (1R,2S)-P1-Isomer: ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,21 (t, J = 7 Hz, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,47–1,57 (m, 1H), 1,88 (m, 1H), 2,05–2,19 (m, 1H), 2,39 (m, 1H), 2,88 (m, 1H), 3,71–3,98 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 4,04–4,24 (m, 2H), 4,55 (m, 1H), 5,13 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,22–5,40 (m, 1H), 5,29 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,69–5,81 (m, 1H), 7,02 (brs, 1H), 7,09 (dd, J = 9,2 Hz, 1H), 7,41–7,52 (m, 4H), 7,95 (d, J = 9 Hz, 1H), 8,03, 8,05 (2s, 2H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ: 14,22; 22,83, 28,25, 33,14, 33,58, 39,92, 51,84, 55,47, 58,32, 61,30, 75,86, 81,27, 98,14, 107,42, 115,00, 117,84, 118,27, 122,63, 123,03, 127,50, 128,72, 129,26, 133,39, 140,06, 151,23, 159,16, 160,34, 161,35, 169,78, 171,68. LC-MS (Retentionszeit: 1,62, Verfahren D), MS m/z 602 (M⁺ + 1).
Daten für das (1S,2R)-P1-Isomer: ¹H-NMR δ 1,25 (t, J = 7 Hz, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,46–1,52 (m, 1H), 1,84 (m, 1H), 2,12–2,21 (m, 1H), 2,39 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,82 (m, 2H), 3,97 (s, 3H), 4,05–4,17 (m, 2H), 4,58 (m, 1H), 5,15 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,30–5,43 (m, 1H), 5,72–5,85 (m, 1H), 7,05 (s, 1H), 7,13 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,46–7,60 (m, 4H), 7,98 (d, J = 9, 1H), 8,06–8,10 (m, 2H). LC-MS (Retentionszeit: 1,66, Verfahren D), MS m/z 602 (M⁺ + 1).
Schritt 12c: Herstellung des (1R,2S)-P1-Diastereomers von 1-{[4-(7-Methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]-1-amino}-2-vinylcyclopropancarbonsäureethylester-Dihydrochlorid, das nachstehend gezeigt ist.
Das Produkt von Schritt 12b (5,88 g, 9,77 mmol) wurde in HCl/Dioxan (4,0 M; 200 ml) gelöst und 2,5 h bei RT gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde konzentriert, um das Titelprodukt zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 1,24 (t, J = 7 Hz, 3H), 1,50 (dd, J = 10, 5 Hz, 1H), 1,78 (dd, J = 8,4, 5,5 Hz, 1H), 2,24–2,33 (m, 1H), 2,56–2,66 (m, 1H), 3,05 (dd, J = 14,6, 7,3 Hz, 1H), 3,98 (s, 2H), 4,06 (s, 3H), 4,15 (q, J = 7 Hz, 2H), 4,76 (dd, J = 10,6, 7,3 Hz, 1H), 5,13 (dd, J = 10,2, 1,8 Hz), 5,32 (dd, J = 17, 2 Hz), 5,70–5,83 (m, 1H), 6,05 (m, 1H), 7,48 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,65–7,79 (m, 5H), 8,12–8,15 (m, 2H), 8,54 (d, J = 9,5 Hz, 1H); ¹³C-NMR (Methanol-d₄) δ: 14,77, 23,23, 34,86, 37,25, 41,19, 43,90, 52,66, 60,35, 62,32, 62,83, 68,27, 72,58, 73,70, 81,21, 100,70, 102,44, 116,13, 118,67, 122,25, 126,93, 130,27, 130,94, 133,19, 134,14, 134,89, 143,79, 158,39, 166,84, 167,44, 169,57, 171,33. LC-MS (Retentionszeit: 1,55, Verfahren D), MS m/z 502 (M⁺ + 1).
Schritt 12d: Herstellung des (1R,2S)-P1-Isomers von 1-{[1-2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)p-pyrrolidin-2-carbonyl]amino}-2-vinylcyclopropancarbonsäureethylester, das nachstehend gezeigt ist.
Zu einer Suspension des Produkts von Schritt 12c (1,95 g; 3,4 mmol), N-BOC-L-tert-Leucin (0,94 g, 4,08 mmol) und NMM (1,87 ml, 17 mmol) in DMF (15 ml) wurde HATU (1,55 g, 4,08 mmol) bei 0°C zugesetzt. Nach 2 Tagen Rühren wurde das Reaktionsgemisch mit EtOAc (200 ml) verdünnt, mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (2 × 30 ml), gesättigtem wässrigen NaHCO₃ (30 ml) und Kochsalzlösung (30 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), und durch eine Biotage 40 M Säule (Elution mit 15% bis 60% EtOAc in Hexan) gereinigt, um das Titelprodukt als einen weißen Feststoff (2,21 g, 90%) zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,05 (s, 9H), 1,20 (t, J = 7 Hz, 3H), 1,38–1,43 (m, 1H), 1,41 (s, 9H), 1,80–1,85 (m, 1H), 2,08–2,16 (m, 1H), 2,39–2,47 (m, 1H), 2,90–2,99 (m, 1H), 3,90–4,01 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,12 (q, J = 7 Hz, 2H), 4,36 (d, J = 10 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,75–4,85 (m, 1H), 5,09–5,13 (m, 1H), 5,21–5,34 (m, 2H), 5,69–5,81 (m, 1H), 7,00–7,09 (m, 2H), 7,42–7,54 (m, 5H), 8,01–8,05 (m, 3H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 14,30, 22,85, 26,40, 28,25, 32,20, 34,09, 35,39, 39,97, 53,86, 55,47, 58,28, 58,96, 61,29, 75,94, 79,86, 97,98, 107,43, 115,06, 117,98, 118,38, 123,03, 127,52, 128,76, 129,24, 133,40, 140,26, 151,44, 155,74, 159,16, 160,09, 161,32, 169,55, 170,64, 172,63. LC-MS (Retentionszeit: 1,85, Verfahren D), MS m/z 715 (M⁺ + 1).
Schritt 12e: Herstellung des Titelprodukts, nämlich des (1R,2S)-P1-Isomers von 1-{[1-2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}-2-vinylcyclopropancarbonsäure.
Zu einer Suspension des Produkts von Schritt 12d (2,63 g, 3,68 mmol) in THF (150 ml), CH₃OH (80 ml) und H₂O (20 ml) wurde LiOH (1,32 g, 55,2 mmol) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde zwei Tage gerührt, auf einen neutralen pH-Wert angesäuert und in vacuo konzentriert, bis nur die wässrige Schicht zurückgeblieben war. Der so erhaltene wässrige Rückstand wurde durch Zusetzen von 1,0 N wässriger HCl auf einen pH-Wert von 3,0 angesäuert und mit EtOAc (4 × 200 ml) extrahiert. Das kombinierte organische Lösungsmittel wurde mit Kochsalzlösung (20 ml) gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄), filtriert und in vacuo konzentriert, um das Titelprodukt als einen weißen Feststoff (2,41 g, 96%) zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃/Methanol-d₄) δ 0,98, 1,01 (zwei s (Rotamere), 9H), 1,40, 1,42 (zwei s (Rotamere), 9H), 1,35–1,47 (m, 1H), 1,89–1,93 (m, 1H), 2,03–2,14 (m, 1H), 2,45–2,52 (m, 1H), 2,64–2,78 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,96–4,12 (m, 1H), 4,34 (d, J = 10 Hz, 1H), 4,52 (d, J = 11 Hz, 1H), 4,58–4,64 (m, 1H), 5,10 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,24 (d, J = 16 Hz, 1H), 5,34 (m, 1H), 5,68–5,86 (m, 2H), 7,02–7,05 (m, 1H), 7,32 (m, 1H), 7,40–7,54 (m, 4H), 7,97–8,03 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,64, Verfahren D), MS m/z 687 (M⁺ + 1).
Das hier in Schritt 12e offenbarte Hydrolyseverfahren kann für alle N-BOC-Tripeptide, die Vinyl-Acca enthalten, wie z. B. das Produkt von Schritt 12d, verwendet werden.
Beispiel 13
Verbindung 10, BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclopropan, bzw. in einer anderen Bezeichnung das (1R,2S)-P1-Diastereomer von {1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-vinylcyclo propylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 13a–b beschrieben hergestellt.
Schritt 13a: Herstellung von Cyclopropylsulfonamid.
Einer auf 0°C gekühlten Lösung von 100 ml THF wurde gasförmiger Ammoniak bis zur Sättigung zugeperlt. Zu dieser Lösung wurde eine Lösung von 5 g (28,45 mmol) Cyclopropylsulfonylchlorid (von Array Biopharma erworben) in 50 ml THF zugesetzt, die Lösung wurde über Nacht auf RT erwärmt und einen weiteren Tag gerührt. Das Gemisch wurde konzentriert, bis 1–2 ml des Lösungsmittels zurückgeblieben waren, und auf ein 30 g-Kissen SiO₂ (Elution mit 30% bis 60% EtOAc/Hexan) aufgebracht, um 3,45 g (100%) Cyclopropylsulfonamid als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 0,94–1,07 (m, 4H), 2,52–2,60 (m, 1H); ¹³C-NMR (Methanol-d₄) δ 5,92, 33,01.
Schritt 13b: Herstellung von Verbindung 10. Zu einer Lösung von CDI (0,238 g, 1,47 mmol) in THF (3 ml) wurde eine Lösung des Produkts von Schritt 12e (0,837 g, 1,22 mmol) in THF (20 ml) innerhalb von 10 min unter Argon tropfenweise zugesetzt. Die so erhaltene Lösung wurde 30 min gerührt, 30 min refluxiert und anschließend auf RT abgekühlt. Cyclopropylsulfonamid (0,591 g, 4,88 mmol) wurde in einer Portion zugesetzt, bevor eine Lösung von DBU (0,36 ml, 2,44 mmol) in THF (2 ml) zugesetzt wurde. Die Umsetzung wurde 18 h gerührt, mit EtOAc (200 ml) verdünnt, mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (3 × 30 ml), Wasser (2 × 30 ml) und Kochsalzlösung (30 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und durch eine Biotage 40 M Säule (Elution mit 0% bis 5% MeOH in CH₂Cl₂) gereinigt, um Verbindung 10 als ein undurchsichtiges Glas (0,48 g, 50%) zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 0,80–1,10 (m, 2H), 1,03 (s, 9H), 1,17 (s, 2H), 1,27 (s, 9H), 1,38–1,41 (m, 1H), 1,83–1,85 (m, 1H), 2,15–2,20 (m, 1H), 2,35–2,40 (m, 1H), 2,60–2,70 (m, 1H), 2,84 (bs, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,08–4,10 (m, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,50–4,55 (m, 2H), 5,07 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,53 (m, 1H), 5,77–5,84 (m, 1H), 7,05–7,07 (m, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,37 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,47–7,55 (m, 3H), 8,04–8,07 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,55, Verfahren A), MS m/z 790 (M⁺ + 1). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₄₁H₅₂N₅SO₉: 790,3486; gefunden: 790,3505.
Dieses Kupplungsverfahren kann zum Herstellen von N-Acylsulfonamiden von Tripeptidsäuren, die eine Vinyl-Acca- oder eine Ethyl-Acca-P1-Einheit enthalten, verwendet werden.
Beispiel 14
Verbindung 11, BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclobutan, bzw. in einer anderen Bezeichnung das (1R,2S)-P1-Diastereomer von {1-[2-(1-Cyclobutansulfonylaminocarbonyl-2-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 14a–b beschrieben hergestellt.
Schritt 14a: Herstellung von Cyclobutylsulfonamid.
Zu einer auf –78°C gekühlten Lösung von 5,0 g (37,0 mmol) Cyclobutylbromid in 30 ml wasserfreiem Diethylether (Et₂O) wurden 44 ml (74,8 mmol) 1,7 M tert-Butyllithium in Pentan zugesetzt, anschließend wurde die Lösung innerhalb von 1,5 h langsam auf –35°C erwärmt. Dieses Gemisch wurde mit einer Kanüle langsam in eine auf –40°C gekühlte Lösung von 5,0 g (37,0 mmol) von frisch destilliertem Sulfurylchlorid in 100 ml Hexan eingeführt, anschließend wurde dieses innerhalb von 1 h auf 0°C erwärmt und vorsichtig in vacuo konzentriert. Das Gemisch wurde wieder in Et₂O gelöst, ein Mal mit etwas Eis-kaltem Wasser gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und vorsichtig konzentriert. Dieses Gemisch wurde in 20 ml THF gelöst, tropfenweise zu 500 ml gesättigtem NH₃ in THF zugesetzt und über Nacht gerührt. Das Gemisch wurde in vacuo zu einem rohen, gelben Feststoff konzentriert und aus der kleinstmöglichen Menge CH₂Cl₂ in Hexan mit 1–2 Tropfen MeOH rekristallisiert, um 1,90 g (38%) Cyclobutylsulfonamid als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,95–2,06 (m, 2H), 2,30–2,54 (m, 4H), 3,86 (p, J = 8 Hz, 1H), 4,75 (brs, 2H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 16,43, 23,93, 56,29. HRMS m/z (M – H)^– berechnet für C₄H₈NSO₂: 134,0276; gefunden: 134,0282.
Schritt 14b: Herstellung von Verbindung 11. Gemäß dem Verfahren von Schritt 13b wurden 100 mg (0,146 mmol) des Produkts von Schritt 12e mit 33,1 mg (0,20 mmol) CDI, 27,6 mg (0,20 mmol) Cyclobutylsulfonamid und 31 μl (0,20 mmol) DBU umgesetzt, um 84,1 mg (72%) von Verbindung 11 als einen Schaum zu ergeben. LC/MS rt-min (MH⁺): 1,62 (804) (Verfahren D). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,03, 1,04 (2s, 9H), 1,27, 1,30 (2s, 9H), 1,33–1,43 (m, 1H), 1,80–2,50 (m, 11H), 2,66–2,80 (m, 1H), 3,71–3,88 (m, 1H), 3,92, 3,94 (2s, 3H), 4,00–4,13 (m, 2H), 4,51–4,59 (m, 2H), 4,97–5,04 (m, 1H), 5,54 (m, 1H), 5,74–5,92 (m, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,36–7,38 (m, 1H), 7,45–7,55 (m, 3H), 8,04–8,11 (m, 3H).
Beispiel 15
Verbindung 12, BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclopentan, bzw. in einer anderen Bezeichnung das (1R,2S)-P1-Diastereomer von {1-[2-(1-Cyclopentansulfonylaminocarbonyl-2- vinylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 15a–b beschrieben hergestellt.
Schritt 15a: Herstellung von Cyclopentylsulfonamid.
Eine Lösung von 18,5 ml (37,0 mmol) 2 M Cyclopentylmagnesiumchlorid in Ether wurde zu einer auf –78°C gekühlten Lösung von 3,0 ml (37,0 mmol) von frisch destilliertem Sulfurylchlorid (von Aldrich erworben) in 100 ml Hexan tropfenweise zugesetzt. Das Gemisch wurde innerhalb von 1 h auf 0°C erwärmt und dann vorsichtig in vacuo konzentriert. Das Gemisch wurde wieder in Et₂O (200 ml) gelöst, ein Mal mit etwas Eis-kaltem Wasser (200 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und vorsichtig konzentriert. Dieses Gemisch wurde in 35 ml THF gelöst, tropfenweise zu 500 ml gesättigtem NH₃ in THF zugesetzt und über Nacht gerührt. Das Gemisch wurde in vacuo zu einem rohen, gelben Feststoff konzentriert, der Rückstand wurde unter Verwendung von 70% EtOAc/Hexan als Eluens durch 50 g Silicagel filtriert, anschließend wurde die Lösung konzentriert. Der Rückstand wurde aus der kleinstmöglichen Menge CH₂Cl₂ in Hexan mit 1–2 Tropfen MeOH rekristallisiert, um 2,49 g (41%) Cyclopentylsulfonamid als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,58–1,72 (m, 2H), 1,74–1,88 (m, 2H), 1,94–2,14 (m, 4H), 3,48–3,59 (m, 1H), 4,80 (bs, 2H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 25,90, 28,33, 63,54; MS m/e 148 (M – H)^–.
Schritt 15b: Herstellung von Verbindung 12. Gemäß dem Verfahren von Schritt 13b wurden 60 mg (0,087 mmol) des Produkts von Schritt 12e mit 19,8 mg (0,122 mmol) CDI, 18 mg (0,122 mmol) Cyclopentylsulfonamid und 18 μl (0,122 mmol) DBU umgesetzt, um 45,1 mg (63%) von Verbindung 12 als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR: (Methanol-d₄) δ 1,03 (s, 9H), 1,29 (s, 9H), 1,37–1,43 (m, 1H), 1,55–2,09 (m, 9H), 2,15–2,22 (m, 1H), 2,29–2,39 (m, 1H), 2,63–2,70 (m, 1H), 3,43–3,53 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,04–4,15 (m, 1H), 4,23–4,30 (m, 1H), 4,47–4,57 (m, 2H), 5,08 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 5,52 (m, 1H), 5,70–5,80 (m, 1H), 6,54 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,05 (dd, J = 9,2, 2,2 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,45–7,55 (m, 3H), 8,00–8,06 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,66, Verfahren A). MS m/z 818 (M + 1)⁺; 816 (M – 1)^–.
Beispiel 16
Verbindung 13, BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclohexan, bzw. in einer anderen Bezeichnung das (1R,2S)-P1-Diastereomer von {1-[2-(1-Cyclohexansulfonylaminocarbonyl-2-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 16a–b beschrieben hergestellt.
Schritt 16a: Herstellung von Cyclohexylsulfonamid.
Eine Lösung von 18,5 ml (37,0 mmol) 2 M Cyclohexylmagnesiumchlorid (TCI Americas) in Ether wurde zu einer auf –78°C gekühlten Lösung von 3,0 ml (37,0 mmol) von frisch destilliertem Sulfurylchlorid in 100 ml Hexan tropfenweise zugesetzt. Das Gemisch wurde innerhalb von 1 h auf 0°C erwärmt und dann vorsichtig in vacuo konzentriert. Das Gemisch wurde wieder in Et₂O (200 ml) gelöst, ein Mal mit etwas Eis-kaltem Wasser (200 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und vorsichtig konzentriert. Dieses Gemisch wurde in 35 ml THF gelöst, tropfenweise zu 500 ml gesättigtem NH₃ in THF zugesetzt und über Nacht gerührt. Das Gemisch wurde in vacuo zu einem rohen, gelben Feststoff konzentriert, der Rückstand wurde unter Verwendung von 70% EtOAc/Hexan als Eluens durch 50 g Silicagel filtriert und anschließend konzentriert. Der Rückstand wurde aus der kleinstmöglichen Menge CH₂Cl₂ in Hexan mit 1–2 Tropfen MeOH rekristallisiert, um 1,66 g (30%) Cyclohexylsulfonamid als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,11–1,37 (m, 3H), 1,43–1,56 (m, 2H), 1,67–1,76 (m, 1H), 1,86–1,96 (m, 2H), 2,18–2,28 (m, 2H), 2,91 (tt, J = 12, 3,5 Hz, 1H), 4,70 (bs, 2H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 25,04, 25,04, 26,56, 62,74; MS m/e 162 (M – 1)^–.
Schritt 16b: Herstellung von Verbindung 13. Gemäß dem Verfahren von Schritt 13b wurden 60 mg (0,087 mmol) des Produkts von Schritt 12e mit 19,8 mg (0,122 mmol) CDI, 20 mg (0,122 mmol) Cyclohexylsulfonamid und 18 μl (0,122 mmol) DBU umgesetzt, um 33,2 mg (46%) von Verbindung 13 als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR: (Methanol-d₄) δ 1,03 (s, 9H), 1,14–1,55 (m, 6H), 1,29 (s, 9H), 1,59–1,73 (m, 1H), 1,73–1,92 (m, 3H), 2,04–2,23 (m, 3H), 2,30–2,49 (m, 1H), 2,63–2,69 (m, 1H), 3,41 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,04–4,13 (m, 1H), 4,24–4,28 (m, 1H), 4,47–4,56 (m, 2H), 5,05–5,09 (m, 1H), 5,21–5,28 (m, 1H), 5,51 (m, 1H), 5,69–5,84 (m, 1H), 7,05 (dd, J = 9,2 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,37 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,47–7,55 (m, 3H), 7,99–8,07 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,72, Verfahren A), 832 (M⁺ + H). MS m/z 832 (M + 1)⁺; 830 (M – 1)^–.
Beispiel 17
Verbindung 14, BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-(neopentan), bzw. in einer anderen Bezeichnung das (1R,2S)-P1-Diastereomer von {1-[2-[1-(2,2-Dimethylpropan-1-sulfonylaminocarbonyl)-2-vinylcyclopropylcarbamoyl]-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 17a–b beschrieben hergestellt.
Schritt 17a: Herstellung von Neopentylsulfonamid.
Gemäß dem Verfahren von Schritt 16a wurden 49 ml (37 mmol) 0,75 M Neopentylmagnesiumchlorid (Alfa) in Ether zu 1,52 g (27%) Neopentylsulfonamid als einem weißen Feststoff umgewandelt. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,17 (s, 9H), 3,12 (s, 2H), 4,74 (brs, 2H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 29,46, 31,51, 67,38; MS m/e 150 (M – 1)^–.
Schritt 17b: Herstellung von Verbindung 14. Gemäß dem Verfahren von Schritt 13b wurden 60 mg (0,087 mmol) des Produkts von Schritt 12e mit 19,8 mg (0,122 mmol) CDI, 13,2 mg (0,096 mmol) Neopentylsulfonamid und 18 μl (0,122 mmol) DBU umgesetzt, um 39,1 mg (55%) von Verbindung 14 als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄, ca. 1/2 Rotamere) δ 1,04 (s, 9H), 1,13, 1,15 (zwei s (Rotamere), 9H), 1,29 (s, 9H), 1,37–1,44 (m, 1H), 1,79, 1,88 (zwei dd (Rotamere), J = 8, 5 Hz, 1H), 2,15–2,25 (m, 1H), 2,28–2,41 (m, 1H), 2,61–2,72 (m, 1H), 3,14 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 3,52 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,06–4,15 (m, 1H), 4,24–4,29 (m, 1H), 4,47–4,53 (m, 2H), 5,10 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 5,25, 5,29 (zwei d (Rotamere), J = 17 Hz, 1H), 5,53 (m, 1H), 5,70–5,86 (m, 1H), 6,54, 6,64 (zwei d (Rotamere), J = 9 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,37 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,45–7,55 (m, 3H), 8,00–8,06 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,73, Verfahren A), 820 (M⁺ + H). MS m/z 820 (M + 1)⁺; 818 (M – 1)^–.
Beispiel 18
Verbindung 15, BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-(CH₂-cyclobutan), bzw. in einer anderen Bezeichnung das (1R,2S)-P1-Diastereomer von {1-[2-(1-Cyclobutylmethansulfonylaminocarbonyl-2-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 18a–b beschrieben hergestellt.
Schritt 18a: Herstellung von Cyclobutylcarbinylsulfonamid.
Eine Lösung von 12,3 g (83 mmol) Cyclobutylcarbinylbromid (Aldrich) und 13,7 g (91 mmol) Natriumiodid in 150 ml Aceton wurde über Nacht refluxiert und anschließend auf RT abgekühlt. Die anorganischen Feststoffe wurden abfiltriert, dann wurden das Aceton und das Cyclopropylcarbinyliodid (8,41 g, 46%) bei Umgebungsbedingungen bzw. bei 150 Torr und 80°C abdestilliert.
Eine Lösung von 4,0 g (21,98 mmol) Cyclobutylcarbinyliodid in 30 ml wasserfreiem, auf –78°C gekühltem Diethylether (Et₂O) wurde mit einer Kanüle in eine Lösung von 17 ml (21,98 mmol) 1,3 M sec-Butyllithium in Cyclohexan eingebracht, dann wurde die Lösung 5 min gerührt. In dieses Gemisch wurde mit einer Kanüle eine auf –78°C gekühlte Lösung von 3,0 g (21,98 mmol) frisch destilliertes Sulfurylchlorid in 110 ml Hexan eingebracht, das Gemisch wurde innerhalb von 1 h auf RT erwärmt und dann vorsichtig in vacuo konzentriert. Das Gemisch wurde wieder in Et₂O gelöst, ein Mal mit etwas Eis-kaltem Wasser gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und vorsichtig konzentriert. Dieses Gemisch wurde in 30 ml THF gelöst, tropfenweise zu 500 ml gesättigtem NH₃ in THF zugesetzt und über Nacht gerührt. Das Gemisch wurde in vacuo zu einem rohen, gelben Feststoff konzentriert und aus der kleinstmöglichen Menge CH₂Cl₂ in Hexan mit 1–2 Tropfen MeOH rekristallisiert, um 1,39 g (42%) Cyclobutylcarbinylsulfonamid als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,81–2,03 (m, 4H), 2,14–2,28 (m, 2H), 2,81–2,92 (m, 1H), 3,22 (d, J = 7 Hz, 2H), 4,74 (brs, 2H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 19,10, 28,21, 30,64, 60,93; MS m/e 148 (M – 1)^–.
Schritt 18b: Herstellung von Verbindung 15. Gemäß dem Verfahren von Schritt 13b wurden 100 mg (0,146 mmol) des Produkts von Schritt 12e mit 33,1 mg (0,204 mmol) CDI, 30 mg (0,204 mmol) Cyclobutylcarbinylsulfonamid und 31 μl (0,204 mmol) DBU umgesetzt, um 33 mg (28%) von Verbindung 15 als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄, Rotamere ca. 2/3) δ 1,04, 1,05 (zwei s (Rotamere), 9H), 1,27, 1,30 (zwei s (Rotamere), 9H), 1,37–1,40 (m, 1H), 1,73–1,97 (m, 5H), 2,06–2,24 (m, 3H), 2,35–2,49 (m, 1H), 2,65–2,89 (m, 2H), 3,17–3,45 (m, 2H), 3,92, 3,93 (zwei s (Rotamere), 3H), 4,04, 4,10 (zwei d (Rotamere), J = 12 Hz, 1H), 4,23–4,28 (m, 1H), 4,49–4,57 (m, 2H), 5,03–5,08 (m, 1H), 5,20–5,27 (m, 1H), 5,53 (m, 1H), 5,77–5,88 (m, 1H), 6,54, 6,62 (zwei d (Rotamere), J = 8 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,45–7,54 (m, 3H), 8,03–8,09 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,73, Verfahren B), 818 (M⁺ + H).
Beispiel 19
Verbindung 16, BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-(CH₂-cyclopropan), bzw. in einer anderen Bezeichnung das (1R,2S)-P1-Diastereomer von {1-[2-(1-Cyclopropylmethansulfonylaminocarbonyl-2-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 19a–b beschrieben hergestellt.
Schritt 19a: Herstellung von Cyclopropylcarbinylsulfonamid.
Unter Verwendung des Verfahrens von Schritt 18a wurde Cyclopropylcarbinylsulfonamid aus Cyclopropylcarbinylbromid (Aldrich) hergestellt (siehe auch JACS 1981, Seiten 442–445). ¹H-NMR (CDCl₃) δ 0,39–0,44 (m, 2H), 0,67–0,76 (m, 2H), 1,13–1,27 (m, 1H), 3,03 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 4,74 (brs, 2H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 4,33, 5,61, 59,93; MS m/e 134 (M – 1)^–.
Schritt 19b: Herstellung von Verbindung 16. Gemäß dem Verfahren von Schritt 13b wurden 108 mg (0,159 mmol) des Produkts von Schritt 12e mit 36 mg (0,222 mmol) CDI, 30 mg (0,222 mmol) Cyclopropylcarbinylsulfonamid und 33 μl (0,222 mmol) DBU umgesetzt, um 42 mg (33%) von Verbindung 16 als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄, Rotamere ca. 2/3) δ 0,32–0,39 (m, 2H), 0,54–0,68 (m, 2H), 1,03 (s, 9H), 1,27, 1,29 (zwei s (Rotamere), 9H), 1,08–1,41 (m, 1H), 1,55–1,86 (m, 2H), 2,10–2,25 (m, 1H), 2,35–2,51 (m, 1H), 2,62–2,80 (m, 1H), 3,07–3,15 (m, 1H), 3,37–3,44 (m, 1H), 3,94, 3,94 (zwei s (Rotamere), 3H), 4,03–4,15 (m, 1H), 4,22–4,28 (m, 1H), 4,51–4,60 (m, 2H), 4,99–5,08 (m, 1H), 5,18–5,28 (m, 1H), 5,55 (m, 1H), 5,77–5,94 (m, 1H), 7,06 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,46–7,56 (m, 3H), 8,03–8,12 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,68, Verfahren D), 804 (M⁺ + H). MS m/e 804 (M + 1)⁺; 802 (M – 1)^–.
Beispiel 20
Verbindung 17, BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-(4-brombenzolsulfonamid), bzw. in einer anderen Bezeichnung das (1R,2S)-P1-Diastereomer von {1-[2-[1-(4-Brombenzolsulfonylaminocarbonyl-2-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Zu einer Lösung des Produkts von Schritt 12e (0,035 g, 0,05 mmol) in THF (2 ml) wurde CDI (0,0165 g, 0,13 mmol) zugesetzt, anschließend wurde die so erhaltene Lösung 30 min refluxiert und dann auf RT abgekühlt. Zu dieser Lösung wurde 4-Bromphenylsulfonamid (0,0482 g, 0,20 mmol), das durch Behandlung von im Handel erhältlichem 4-Bromsulfonylchlorid mit gesättigtem Ammoniak in THF hergestellt war, in einer Portion zugesetzt, bevor eine Lösung von DBU (0,0194 ml, 0,13 mmol) zugesetzt wurde. Die Umsetzung wurde 18 h gerührt, mit EtOAc (100 ml) verdünnt, mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (10 ml), Wasser (10 ml) und Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und mit einer Isco 10 g-Säule (Elution mit 0% bis 15% MeOH in CH₂Cl₂) gereinigt, um das Produkt, das einer weiteren Reinigung bedurfte, zu ergeben. Der Rückstand wurde unter Verwendung einer 20 × 40 cm 1000 μ-PTLC Platte von Analtech gereinigt, um Verbindung 17 als einen Schaum (0,0357 g, 79%) zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 1,03 (s, 9H), 1,26, 1,30 (zwei s (Rotamere), 9H), 1,43 (m, 1H), 1,74 (dd, J = 8, 5 Hz, 1H), 2,02–2,21 (m, 1H), 2,32–2,47 (m, 1H), 2,58–2,66 (m, 1H), 3,92, 3,93 (zwei s (Rotamere), 3H), 4,03–4,10 (m, 1H), 4,24 (m, 1H), 4,46–4,58 (m, 2H), 4,87–4,91 (m, 1H), 5,13 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,39–5,46 (m, 1H), 5,56–5,88 (m, 1H), 7,04 (dd, J = 9,2, 2,2 Hz, 1H), 7,20–7,18 (m, 1H), 7,35–7,37 (m, 1H), 7,44–7,58 (m, 5H), 7,68–7,79 (m, 2H), 8,00–8,10 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,77, Verfahren A). HRMS m/z (M⁺ + H) berechnet für C₄₄H₅₁SBrN₅O₉: 904,2591; gefunden: 904,2580.
Dieses Verfahren kann auch als allgemeines Verfahren zum Herstellen von Aryl-N-acylsulfonamiden verwendet werden.
Beispiel 21
Verbindung 18, das (1R,2S)-P1-Diastereomer von {1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäuretetrahydrofuran-3(S)-ylester, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 21a–b beschrieben hergestellt.
Schritt 21a: Herstellung von Chlorformiaten.
Dieses Verfahren wurde zum Herstellen von Chlorformiaten, die nicht im Handel erhältlich sind, verwendet. Zu einer auf 0°C gekühlten Lösung von 5,96 g (67,6 mmol) der im Handel erhältlichen Reagenzien (S)-3-Hydroxytetrahydrofuran und Pyridin (5,8 ml; 72 mmol) in THF (150 ml) wurde eine 1,93 M Lösung von Phosgen in Toluol (48 ml, 92,6 mmol) innerhalb von 10 min unter Argon zugesetzt. Die so erhaltene Lösung wurde innerhalb von 2 h auf RT erwärmt, der so erhaltene Feststoff wurde filtriert und die Mutterlösung vorsichtig bei Raumtemperatur in vacuo konzentriert, bis die theoretische Masse erreicht war. Der so erhaltene Rückstand wurde in 100 ml THF gelöst, um eine 0,68 M Vorratslösung von 3(S)-Oxotetrahydrofuranchlorformiat herzustellen, die bis zur Verwendung in einem Tiefkühlschrank gelagert werden konnte. Auf analoge Weise konnten andere im Handel erhältliche Alkohole in 0,68 M Vorratslösungen der entsprechenden Chlorformiate umgewandelt werden.
Schritt 21b: Herstellung von Verbindung 18. Eine Lösung von 3,5 g (4,90 mmol) des Produkts von Schritt 12e, dem (1R,2S)-P1-Diastereomer von (1-{[1-2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}-2-vinylcyclopropancarbonsäureethylester), wurde 2 h mit 170 ml (680 mmol) 4 N HCl in Dioxan behandelt und anschließend in vacuo konzentriert, um ca. 3,37 g (ca. 100%) zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 1,18 (s, 9H), 1,25 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 1,44 (dd, J = 9,1, 5,1 Hz, 1H), 1,72 (dd, J = 8,1, 5,5 Hz, 1H), 2,18–2,26 (m, 1H), 2,46–2,53 (m, 1H), 2,84 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,09–4,27 (m, 4H), 4,53 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,76–4,81 (m, 1H), 5,10 (dd, J = 10, 1,5 Hz, 1H), 5,27 (dd, J = 17,2, 1,5 Hz, 1H), 5,72–5,84 (m, 1H), 5,89 (m, 1H), 7,46 (dd, J = 9,2, 2 Hz, 1H), 7,64 (m, 2H), 7,68–7,79 (m, 3H), 8,08–8,16 (m, 2H), 8,42 (d, J = 9 Hz, 1H); ¹³C-NMR (Methanol-d₄) δ 14,62, 23,22, 26,70, 35,15, 35,89, 36,16, 40,90; 55,30, 57,06, 60,44, 60,86, 62,46, 81,47, 100,56, 102,42, 116,03, 118,04, 121,92, 126,60, 130,14, 130,77, 133,24, 133,89, 135,18, 143,58, 158,19, 166,57, 167,87, 168,59, 171,52, 173,87. LC-MS (Retentionszeit: 1,41, Verfahren D), MS m/z 615 (M⁺ + 1). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₃₅H₄₃N₄O₆: 615,3183; gefunden: 615,3185.
Zu einer Aufschlämmung von 200 mg (0,29 mmol) dieses HCl-Salzes und 220 μl (0,93 mmol) Et₃N in 4 ml THF wurden 0,93 ml (0,63 mmol) einer 0,68 M Lösung von 3(S)-Oxotetrahydrofuranchlorformiat zugesetzt, anschließend wurde das Gemisch über Nacht gerührt. Das Gemisch wurde in vacuo konzentriert und der Rückstand über zwei 1000 μ-PTLC Platten von Analtech (jeweils 20 × 40 cm, Elution mit 70% EtOAc/Hexan) chromatographiert, um 115 mg (56%) des gewünschten P4-Carbamats [Tetrahydrofuran-3(S)-yl-O(C=O)]N-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CO₂Et zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,02 (s, 9H), 1,22 (t, J = 7 Hz, 3H), 1,38–1,43 (m, 1H), 1,50–2,25 (m, 4H), 2,33–2,45 (m, 1H), 2,65 (dd, J = 13, 7 Hz, 1H), 3,47–4,25 (m, 8H), 4,34–4,49 (m, 1H), 4,62 (m, 1H), 4,72 (m, 1H), 5,08 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,45 (m, 1H), 5,71–5,83 (m, 1H), 6,97–7,09 (m, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,45–7,55 (m, 3H), 7,89–8,05 (m, 3H); ¹³C-NMR (CDCl₃) δ 14,64, 23,27, 26,92, 33,72, 35,01, 35,97, 36,09, 36,22, 40,87, 54,99, 55,98, 60,32, 61,03, 62,380, 67,77, 73,90, 76,68, 77,99, 100,03, 107,52, 116,48, 118,01, 119,15, 124,23, 129,07, 128,96, 129,75, 130,52, 135,18, 141,29, 152,18, 158,08, 161,10, 161,80, 163,00, 171,51, 172,84, 174,55. LC-MS (Retentionszeit: 1,35, Verfahren B), MS m/z 729,3 (M⁺ + 1).
Zu einer Lösung von 115 mg (0,164 mmol) in 7,1 ml 80% THF-MeOH wurde eine Lösung von 40 mg (1,0 mmol) LiOH·H₂O in 2,8 ml H₂O zugesetzt. Das Gemisch wurde 1 Tag gerührt, auf einen pH-Wert von 7 angesäuert (unter Verwendung von 2 N HCl) und in vacuo konzentriert, bis nur die wässrige Schicht zurückgeblieben war. Die Lösung wurde auf einen pH-Wert von 4 angesäuert (unter Verwendung von 2 N HCl) und mehrmals mit EtOAc (3 × 50 ml) aufgetrennt. Die kombinierten EtOAc-Schichten (150 ml) wurden getrocknet (MgSO₄) und konzentriert, um 112 mg (ca. 100%) der gewünschten Carbonsäure, [Tetrahydrofuran-3(S)-yl-O(C=O)]N-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CO₂H, als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 1,02, 1,03 (zwei s (Rotamere), 9H), 1,42–1,45 (m, 1H), 1,58–1,65 (m, 1H), 1,67–1,70 (m, 1H), 1,82–1,90 (m, 1H), 2,15–2,21 (m, 1H), 2,46–2,51 (m, 1H), 2,70–2,74 (m, 1H), 3,59–3,90 (m, 4H), 3,95 (s, 3H), 4,05 (dd, J = 12, 3 Hz, 1H), 4,23–4,26 (m, 1H), 4,52 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,62–4,77 (m, 2H), 5,07–5,10 (m, 1H), 5,23–5,27 (m, 1H), 5,57 (m, 1H), 5,80–5,88 (m, 1H), 7,09–7,15 (m, 1H), 7,27 (m, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,49–7,56 (m, 3H), 8,04–8,09 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,48, Verfahren D); MS m/e 701 (M⁺ + 1).
Eine Lösung von [Tetrahydrofuran-3(S)-yl-O(C=O)]N-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CO₂H (0,156 g, 0,223 mmol) und CDI (0,0471 g, 0,291 mmol) in THF (5,8 ml) wurde 40 min refluxiert und auf RT abgekühlt. Cyclopropylsulfonamid (0,0533 g, 0,447 mmol) wurde in einer Portion zugesetzt, bevor eine Lösung von DBU (0,0422 mg, 0,291 mmol) zugesetzt wurde. Die Umsetzung wurde 18 h gerührt, mit EtOAc (100 ml) verdünnt, mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (3 × 30 ml), Wasser (20 ml) und Kochsalzlösung (20 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und mit einer Biotage 40 M Säule (Elution mit 0% bis 4% MeOH in CH₂Cl₂) gereinigt, um das gewünschte Produkt, [Tetrahydrofuran-3(S)-yl-O(C=O)]N-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclopropan, bzw. in einer anderen Bezeichnung Verbindung 18, das (1R,2S)-P1-Diastereomer von {1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäuretetrahydrofuran-3(S)-ylester als einen Schaum (0,117 g, 65%) zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 1,02– 1,07 (m, 11H), 1,22–1,28 (m, 2H), 1,42–1,45 (m, 1H), 1,57–1,64 (m, 1H), 1,80–1,92 (m, 2H), 2,19–2,27 (m, 1H), 2,31–2,41 (m, 1H), 2,68 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 2,90–2,96 (m, 1H), 3,61–3,81 (m, 4H), 3,95 (s, 3H), 4,07–4,11 (m, 1H), 4,25–4,29 (m, 1H), 4,49–4,60 (m, 2H), 4,72–4,76 (m, 1H), 5,10–5,13 (m, 1H), 5,27–5,33 (m, 1H), 5,59 (m, 1H), 5,72–5,80 (m, 1H), 7,10–7,14 (m, 1H), 7,28 (m, 1H), 7,41 (m, 1H), 7,49–7,58 (m, 3H), 8,05–8,08 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,37, Verfahren D), MS m/z 804 (M⁺ + 1).
Das Verfahren von Beispiel 21 kann allgemein zum Herstellen von Carbamat-N-acylsulfonamiden der vorliegenden Erfindung verwendet werden.
Beispiel 22
Verbindung 19, [tert-Butyl-NH(C=O)]NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclopropan, bzw. in einer anderen Bezeichnung das (1R,2S)-P1-Diastereomer von 1-[2-(3-tert-Butylureido)-3,3-dimethylbutyryl]-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonsäure-(1-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-vinylcyclopropyl)amid, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 22a–c beschrieben hergestellt.
Schritt 22a: Herstellung von [tert-Butyl-NH(C=O)]HN-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CO₂Et. Zu einem Schlamm von 175 mg (0,245 mmol) NH₂-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CO₂-Et-Dihydrochloridsalz und 139 μl (1,0 mmol) Et₃N in 3 ml THF wurden 57 μl (0,50 mmol) im Handel erhältliches tert-Butylisocyanat zugesetzt. Das Gemisch wurde über Nacht gerührt, mit 20 ml eines Puffers mit einem pH-Wert von 4,0 verdünnt und mit 4 × 50 ml Portionen EtOAc aufgetrennt. Die kombinierten organischen Schichten wurden in vacuo konzentriert und der Rückstand über einer Biotage 25 M Säule (Elution mit 15% bis 100% EtOAc/Hexan) chromatographiert, um 152 mg (86%) des Titelprodukts zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,03 (s, 9H), 1,17 (s, 9H), 1,34–1,45 (m, 1H), 1,61–1,74 (m, 1H), 2,15–2,24 (m, 1H), 2,32–2,51 (m, 1H), 2,61–2,75 (m, 1H), 3,92 (m, 3H), 4,01–4,17 (m, 3H), 4,32 (m, 1H), 4,51–4,60 (m, 2H), 5,07 (d, J = 11 Hz, 1H), 5,24 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,53 (m, 1H), 5,69–5,81 (m, 1H), 7,00–7,11 (m, 1H), 7,21 (m, 1H), 7,36 (m, 1H), 7,44–7,58 (m, 3H), 8,02–8,13 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 2,36, Verfahren A), MS m/z 714 (M⁺ + 1).
Schritt 22b: Herstellung von [tert-Butyl-NH(C=O)]HN-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CO₂H. Zu einer Lösung von 152 mg (0,21 mmol) des Produkts von Schritt 22a in 9,4 ml 80% THF-MeOH wurde eine Lösung von 52 mg (1,3 mmol) LiOH·H₂O in 3,9 ml H₂O zugesetzt. Das Gemisch wurde 1 Tag gerührt, auf einen pH-Wert von 7 angesäuert (unter Verwendung von 2 N HCl) und in vacuo konzentriert, bis nur die wässrige Schicht zurückgeblieben war. Die Lösung wurde auf einen pH-Wert von 4 angesäuert (unter Verwendung von 2 N HCl) und mehrmals mit EtOAc (3 × 50 ml) aufgetrennt. Die kombinierten EtOAc-Schichten (150 ml) wurden getrocknet (MgSO₄) und konzentriert, um 122 mg (85%) des Titelprodukts als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 1,01 (s, 9H), 1,30 (s, 9H), 1,38–1,42 (m, 1H), 1,81–2,28 (m, 2H), 2,22–2,64 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,12 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H), 4,34–4,41 (m, 1H), 4,51 (d, J = 10 Hz, 1H), 4,69 (d, J = 11 Hz, 1H), 4,79 (m, 1H), 5,08 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,21 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,33 (m, 1H), 5,57–5,72 (m, 1H), 6,95 (s, 1H), 7,05 (dd, J = 9,2, 2,6 Hz, 1H), 7,40–7,53 (m, 4H), 8,01–8,03 (m, 2H), 8,09 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,37, Verfahren B) m/z 686 (M⁺ + 1).
Schritt 22c: Herstellung von Verbindung 19. Eine Lösung des Produkts von Schritt 22b (0,120 g, 0,175 mmol) und CDI (0,0368 g, 0,277 mmol) in THF (5,8 ml) wurde 40 min refluxiert und auf RT abgekühlt. Cyclopropylsulfonamid (0,0416 g, 0,349 mmol) wurde in einer Portion zugesetzt, bevor eine Lösung von DBU (0,0345 mg, 0,227 mmol) zugesetzt wurde. Die Umsetzung wurde 18 h gerührt, mit EtOAc (100 ml) verdünnt, mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (3 × 30 ml), Wasser (20 ml) und Kochsalzlösung (20 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und mit einer Biotage 40 M Säule (Elution mit 0% bis 4% MeOH in CH₂Cl₂) gereinigt, um die Verbindung 19 als einen Schaum (0,0872 g, 63%) zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 1,04 (s, 9H), 1,17 (s, 9H), 1,15–1,31 (m, 4H), 1,40 (dd, J = 9,5, 5,2 Hz, 1H), 1,86 (dd, J = 8, 5 Hz, 1H), 2,16–2,22 (m, 1H), 2,30–2,37 (m, 1H), 2,65 (dd, J = 14, 7, 1H), 2,90–2,95 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,11 (dd, J = 11,7, 3,7 Hz, 1H), 4,35 (s, 1H), 4,50 (dd, J = 10,4, 7 Hz, 1H), 4,57 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,09 (dd, J = 10, 2 Hz, 1H), 5,26 (dd, J = 17, 2 Hz, 1H), 5,56 (m, 1H), 5,70–5,77 (m, 1H), 7,07 (dd, J = 9,2, 2 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,38 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,48–7,55 (m, 3H), 8,04–8,06 (m, 2H), 8,10 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,51, Verfahren D). MS m/e 789 (M⁺ + 1).
Beispiel 23
Verbindung 20, das (1R,2S)-P1-Diastereomer von 1-{2-[3-Cyclopropylmethyl-3-(3,3,3-trifluorpropyl)ureido]-3,3-dimethylbutyryl}-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonsäure-(1-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2-vinylcyclopropyl)amid, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 23a–b beschrieben hergestellt.
Schritt 23a: Herstellung von Cyclopropylmethyl-3,3,3-trifluorpropylaminhydrochlorid.
Eine gerührte Lösung von 3,3,3-Trifluoressigsäure (9,7 ml, 110 mmol) und N-Hydroxysuccinimid (13,92 g, 1,1 Äquiv.) in CH₂Cl₂ (100 ml) wurde bei 0°C mit EDAC (21,08 g, 1 Äquiv.) behandelt. Das Gemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmt. Nach Rühren über Nacht wurde das Lösungsmittel abgedampft und der Rückstand zwischen EtOAc und Wasser aufgetrennt. Die organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und eingedampft, um den rohen aktiven Ester (22,78 g, 92%) zu ergeben, der ohne weitere Reinigung verwendet wurde. ¹H-NMR δ (CDCl₃) 2,86 (s, 4H), 3,51 (m, 2H).
Eine gerührte Lösung des aktiven 3,3,3-Trifluoressigsäure-N-hydroxysuccinimidesters (12,98 g, 57,65 mmol) in CH₂Cl₂ (80 ml) bei 0°C wurde mit Cyclopropylmethylamin (5,0 ml, 1 Äquiv.) behandelt. Das Gemisch wurde 14 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und anschließend eingedampft. Der Rückstand wurde zwischen EtOAc und Wasser aufgetrennt. Die organische Phase wurde mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und eingedampft, um das rohe Amid zu ergeben. Dieses wurde mehrere Stunden unter Hochvakuum getrocknet, anschließend wurde es bei 0°C unter einer Stickstoffatmosphäre vorsichtig mit einer 1 M Lösung von Boran in Tetrahydrofuran (173 ml, 3 Äquiv., 173 mmol) behandelt. Das Gemisch wurde 14 Stunden unter Rückfluss gewärmt und dann wieder auf 0°C abgekühlt. MeOH (50 ml) wurde sehr vorsichtig, um übermäßiges Schäumen zu vermeiden, zugesetzt, und das Gemisch wurde 5 Stunden unter Rückfluss gewärmt. Nach dem erneuten Abkühlen auf 0°C wurde eine Lösung von tert-Butylpyrocarbonat (17,62 g, 1,4 Äquiv.) in CH₂Cl₂ (25 ml) zugesetzt. Das so erhaltene Gemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und dann eingedampft. Der Rückstand wurde zwischen EtOAc und Wasser aufgetrennt. Die organische Phase wurde mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und eingedampft, um das rohe Boc-geschützte Amin zu ergeben. Dieses wurde in CH₂Cl₂ (25 ml) gelöst und mit 4 M HCl in Dioxan (36 ml, 2,5 Äquiv., 144 mmol) behandelt. Das Gemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und dann eingedampft. Der so erhaltene weiße Feststoff wurde mit Ether behandelt, das Produkt wurde durch Filtration gesammelt, mit Ether gewaschen und in vacuo getrocknet (10,10 g, 86%). ¹H-NMR (D₂O) δ 0,36 (m, 2H), 0,67 (m, 2H), 1,07 (m, 1H), 2,72 (m, 2H), 2,99 (m, 2H), 3,89 (m, 2H).
Die Schritte dieses Verfahrens können verwendet werden, um Tripeptide mit P4-N-terminalen Dialkylharnstoffen aus Dialkylaminhydrochloriden und Tripeptiden mit N-terminalen Isocyanaten zur nachfolgenden Verwendung bei der Herstellung von Verbindungen der vorliegenden. Erfindung herzustellen. Das Tripeptidisocyanat wurde analog zu jenem, das in SynLett., Februar 1995; (2); 142–144 beschrieben ist, hergestellt, wobei eine Aminkomponente, eine tertiär gehinderte Base, wie z. B. DIPEA oder Et₃N, und Phosgen verwendet wurden.
Schritt 23b: Herstellung von Verbindung 20. Zu einem auf 0°C gekühlten Schlamm von 110 mg (0,16 mmol) dieses HCl-Salzes und 400 μl (2,30 mmol) DIPEA in 8 ml CH₂Cl₂ wurden 62 mg (0,21 mmol) im Handel erhältliches Triphosgen zugesetzt. Das Gemisch wurde 3 h gerührt, dann wurden 73,4 mg (0,36 mmol) Cyclopropylmethyl-3,3,3-trifluorpropylaminhydrochlorid zugesetzt und das Reaktionsgefäß über Nacht auf RT aufgewärmt. Das Gemisch wurde mit 20 ml eines Puffers mit einem pH-Wert von 4,0 verdünnt und mit 4 × 50 ml Portionen EtOAc aufgetrennt. Die kombinierten organischen Schichten wurden ein Mal mit gesättigtem wässrigen NaHCO₃ gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und in vacuo konzentriert, anschließend wurde der Rückstand über einer Biotage 40+ M Säule (Elution mit 30% bis 50% EtOAc/Hexan) chromatographiert, um 68 mg (48%) des gewünschten P4-Dialkylharnstoffs [N,N-Cyclopropylmethyl-3,3,3-trifluorpropyl]-(C=O)]HN-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CO₂Et zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃/Methanol-d₄) δ 0,19–0,22 (m, 2H), 0,49–0,53 (m, 2H), 0,77–0,92 (m, 1H), 1,05 (s, 9H), 1,24 (t, J = 7 Hz, 3H), 1,42 (dd, J = 9, 5 Hz, 1H), 1,72 (dd, J = 8, 5 Hz, 1H), 2,17–2,22 (m, 1H), 2,27–2,35 (m, 2H), 2,40–2,45 (m, 1H), 2,68–2,73 (m, 1H), 3,01 (dd, J = 15, 6 Hz, 1H), 3,08 (dd, J = 15, 6 Hz, 1H), 3,30–3,46 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,05–4,20 (m, 3H), 4,46–4,51 (m, 2H), 4,62–4,66 (m, 1H), 5,09 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,26 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,57 (m, 1H), 5,74–5,81 (m, 1H), 7,09 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,39 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,51–7,56 (m, 3H), 8,04–8,06 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,79, Verfahren B). MS m/z 808 (M⁺ + 1).
Zu einer Lösung von 65 mg (0,081 mmol) des P4-Dialkylharnstoffs [N,N-Cyclopropylmethyl-3,3,3-trifluorpropyl]-(C=O)]HN-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CO₂Et in einer Lösung von 4 ml THF und 2,5 ml MeOH wurde eine Lösung von 12 mg (0,48 mmol) LiOH in 2 ml H₂O zugesetzt. Das Gemisch wurde über Nacht gerührt, dann wurde eine weitere Portion von 6 mg (0,24 mmol) LiOH zugesetzt und das Gemisch 12 h gerührt. Das Gemisch wurde auf einen pH-Wert von 5 angesäuert (unter Verwendung von 2 N HCl) und in vacuo konzentriert, bis nur die wässrige Schicht zurückgeblieben war. Die Lösung wurde mehrmals mit EtOAc (5 × 15 ml) aufgetrennt. Die kombinierten EtOAc-Schichten (75 ml) wurden getrocknet (MgSO₄) und konzentriert, um 58 mg (92%) der gewünschten Carbonsäure, [N,N-Cyclopropylmethyl-3,3,3-trifluorpropyl]-(C=O)]HN-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CO₂H, als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃/Methanol-d₄) δ 0,25–0,28 (m, 2H), 0,56–0,62 (m, 2H), 0,85–0,98 (m, 1H), 1,09 (s, 9H), 1,46–1,49 (m, 1H), 1,77 (dd, J = 8, 5 Hz, 1H), 2,18–2,23 (m, 1H), 2,33–2,43 (m, 2H), 2,56–2,61 (m, 1H), 2,69 (dd, J = 14, 8 Hz, 1H), 3,08 (dd, J = 15, 6 Hz, 1H), 3,16 (dd, J = 15, 6 Hz, 1H), 3,43–3,53 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 4,13 (dd, J = 12, 4 Hz, H), 4,50–4,53 (m, 2H), 4,69 (t, J = 8 Hz, 1H), 5,11–5,13 (m, 1H), 5,28–5,32 (m, 1H), 5,54 (m, 1H), 5,82–5,90 (m, 1H), 7,11 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,43 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,51–7,58 (m, 3H), 7,99–8,05 (m, 2H), 8,08 (d, J = 9 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,63, Verfahren A), MS m/z 780 (M⁺ + 1).
Eine Lösung von [N,N-Cyclopropylmethyl-3,3,3-trifluorpropyl]-(C=O)]HN-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CO₂H (58 mg, 0,74 mmol) und CDI (17 mg, 0,104 mmol) in THF (2 ml) wurde 60 min refluxiert und dann auf RT abgekühlt. Cyclopropylsulfonamid (13 mg, 0,104 mmol) wurde in einer Portion zugesetzt, bevor eine Lösung von DBU (16 l, 0,104 mmol) zugesetzt wurde. Die Umsetzung wurde 72 h gerührt und dann mit EtOAc (100 ml) verdünnt. Die Lösung wurde mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (2 × 20 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), konzentriert und über einer 1000 μ-PTLC Platte (20 × 40 cm, Elution mit 2% MeOH in CH₂Cl₂) von Analtech chromatographiert, um 18 mg (27%) von Verbindung 20 als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃/Methanol-d₄) δ 0,22–0,27 (m, 2H), 0,50–0,56 (m, 2H), 0,86–0,94 (m, 1H), 1,00–1,11 (m, 2H), 1,09 (s, 9H), 1,18–1,25 (m, 2H), 1,46–1,48 (m, 1H), 1,90 (dd, J = 8, 5 Hz, 1H), 2,18–2,24 (m, 1H), 2,30–2,46 (m, 3H), 2,70 (dd, J = 14, 8 Hz, 1H), 2,80 (m, 1H), 3,07 (dd, J = 15, 7 Hz, 1H), 3,13 (dd, J = 15, 7 Hz, 1H), 3,43–3,49 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 4,16 (dd, J = 12, 3 Hz, 1H), 4,50–4,54 (m, 2H), 4,57–4,61 (m, 1H), 5,12 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,63 (m, 1H), 5,75 (d, J = 9 Hz, 1H), 5,83–5,90 (m, 1H), 7,13 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,43 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,52–7,59 (m, 3H), 8,08–8,10 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,65, Verfahren A), MS m/z 883 (M⁺ + 1). MS m/e 883,2 (M + 1)⁺, 881 (M – 1)^–.
Beispiel 24
Verbindung 21, N-BOC-P3(L-Val)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)prolin)]-P1(1-aminocyclopropan-1)-CONHSO₂-cyclopropan, wurde wie in den folgenden Schritten 24a–d beschrieben hergestellt.
In Schritt 24a wurde das Produkt, P2HN-[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolinmethylesterdihydrochlorid], aus N-BOC-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin, (N-Boc-(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin, 4-(7-Methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1,2-dicarbonsäure-1-tert-butylester) hergestellt.
Dabei wurde einer auf –78°C gekühlten Lösung von 10 g (21,5 mmol) N-Boc-(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin, 4-(7-Methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1,2-dicarbonsäure-1-tert-butylester in 500 ml MeOH gasförmiges HCl 10 min zugeperlt. Das Gemisch wurde auf RT erwärmt, über Nacht gerührt und in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde mehrmals mit Toluol und Dioxan azeotropiert, um 9,71 g (100%) des Titelprodukts als einen weißlichen Feststoff zu ergeben. ¹H-NMR (DMSO-d₆) δ 2,56–2,66 (m, 1H), 2,73–2,80 (m, 1H), 3,67–3,86 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,97 (s, 3H), 4,76–4,82 (m, 1H), 5,95 (m, 1H), 7,42 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,65–7,72 (m, 4H), 8,23–8,27 (m, 2H), 8,51 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 9,68 (bs, 1H), 11,4 (bs, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 0,94, Verfahren D), MS m/e 379 (M⁺ + 1).
In Schritt 24b wurde das Produkt 1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3-methylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonsäure, das nachstehend gezeigt ist und auch als P3-N-BOC-(L-Val)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)prolin)]-CO₂H bezeichnet werden kann, hergestellt.
Dabei wurde zu einer Suspension von 1,95 g (4,32 mmol) [HN-(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)methylesterbishydrochlorid], 122 g (5,62 mmol), N-BOC-L-Valin, 1,89 ml (17,28 mmol) NMM in DMF (20 ml) bei 0°C 1,81 g (4,76 mmol) HATU zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht langsam auf RT erwärmt, es wurde 2 Tage gerührt, mit EtOAc (100 ml) verdünnt, mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (2 × 50 ml), gesättigtem wässrigen NaHCO₃ (50 ml) und Kochsalzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und durch eine Biotage 40 M Säule (Elution mit 15% bis 100% EtOAc in Hexan) gereinigt, um 2,39 g (96%) 1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3-methylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonsäuremethylester (auch als P3-N-BOC-(L-Val)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)prolin)]-CO₂Me bezeichnet) als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 0,98 (d, J = 7 Hz, 3H), 1,05 (d, J = 7 Hz, 3H), 1,34 (s, 9H), 2,00–2,11 (m, 1H), 2,31–2,40 (m, 1H), 2,79 (dd, J = 14, 8 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 4,04–4,14 (m, 1H), 4,21–4,26 (m, 1H), 4,49 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,75 (t, J = 8 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 8 Hz, 1H), 5,35 (m, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,09 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,41–7,55 (m, 4H), 7,99–8,04 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,40, Verfahren A), MS m/e 578 (M⁺ + 1).
Zu einer Lösung von 1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3-methylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonsäuremethylester (2,865 g, 4,96 mmol) in THF (223 ml), CH₃OH (30 ml) und H₂O (119 ml) wurde LiOH (952 mg, 39,7 mmol) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde einen Tag gerührt, auf einen neutralen pH-Wert angesäuert und in vacuo konzentriert, bis nur die wässrige Schicht zurückgeblieben war. Der so erhaltene wässrige Rückstand wurde durch Zusetzen von 1,0 N wässriger HCl auf einen pH-Wert von 4,0 angesäuert und anschließend mit festem NaCl gesättigt. Dieses wässrige Gemisch wurde mehrmals mit EtOAc (5 × 200 ml) extrahiert, das kombinierte organische Lösungsmittel wurde getrocknet (Mg₂SO₄), filtriert und in vacuo konzentriert, um 2,77 g (99%) des Titelprodukts als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 0,97 (d, J = 7 Hz, 3H), 1,03 (d, J = 7 Hz, 3H), 1,19 (s, 9H), 1,94–2,06 (m, 1H), 2,37–2,47 (m, 1H), 2,83 (dd, J = 14, 8 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,02–4,09 (m, 2H), 4,63–4,69 (m, 2H), 5,58 (m, 1H), 6,74 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,15 (dd, J = 9 Hz, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,40 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,51–7,61 (m, 3H), 8,03–8,06 (2H), 8,15 (d, J = 9 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,36, Verfahren A), MS m/z 564 (M⁺ + 1).
In Schritt 24c wurde das Produkt 1-{[1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3-methylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}cyclopropancarbonsäure, das nachstehend gezeigt ist und auch als BOC-P3(L-Val)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)]-P1(1-aminocyclopropancarbonsäure) bezeichnet werden kann, hergestellt.
Dabei wurde einer auf –78°C gekühlten Lösung von 3,0 g (14,9 mmol) von im Handel erhältlichem 1-tert-Butoxycarbonylaminocyclopropancarbonsäure in 60 ml MeOH gasförmiges HCl 10 min zugeperlt. Das Gemisch wurde auf RT erwärmt, über Nacht gerührt und in vacuo konzentriert, um 2,26 g (100%) 1-Aminocyclopropancarbonsäuremethylesterhydrochlorid als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 1,36–1,39 (m, 2H), 1,55–1,58 (m, 2H), 3,80 (s, 3H).
Anschließend wurden zu einer Suspension von 400 mg (0,71 mmol) des Produkts von Schritt 24b, 155 mg (0,92 mmol) 1-Aminocyclopropancarbonsäuremethylesterdihydrochlorid und 0,40 ml (3,55 mmol) NMM in 50% CH₂Cl₂/THF (15 ml) bei 0°C 0,43 g (0,92 mmol) PyBrop zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht langsam auf RT erwärmt, anschließend wurde es mit EtOAc (500 ml) verdünnt, mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (2 × 50 ml), gesättigtem wässrigen NaHCO₃ (50 ml) und Kochsalzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet (Mg₂SO₄) und durch eine Biotage 40 M Säule (Elution mit 0% bis 1% MeOH in EtOAc) gereinigt, um 308 mg (66%) 1-{[1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3-methylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}cyclopropancarbonsäuremethylester (auch als BOC-P3(L-Val)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)]-P1(1-aminocyclopropancarbonsäuremethylester) bezeichnet) als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 0,95 (d, J = 7 Hz, 3H), 0,98 (d, J = 7 Hz, 3H), 1,24 (s, 9H), 1,39–1,56 (m, 4H), 1,89–2,05 (m, 1H), 2,41–2,48 (m, 1H), 2,70 (dd, J = 14, 8 Hz, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 4,02–4,05 (m, 2H), 4,52–4,63 (m, 2H), 5,47 (m, 1H), 7,04 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,18 (m, 1H), 7,34 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,45–7,55 (m, 3H), 8,03–8,06 (m, 3H); ¹³C-NMR (Methanol-d₄) δ 17,36, 18,03, 18,98, 19,64, 28,54, 31,66, 34,36, 35,89, 52,92, 54,38, 55,97, 59,68, 60,42, 77,96, 80,41, 99,96, 107,55, 116,43, 119,16, 124,27, 128,96, 129,72, 130,47, 141,31, 152,22, 157,86, 161,22, 161,85, 163,03, 173,91, 174,28, 174,83. LC-MS (Retentionszeit: 1,39, Verfahren A). MS m/e 661 (M⁺ + 1).
Anschließend wurde zu einer Lösung von 1-{[1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3-methylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}cyclopropancarbonsäuremethylester (308 mg, 0,47 mmol) in THF (21 ml) CH₃OH (3 ml) und H₂O (11 ml) LiOH (56 mg, 2,33 mmol) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde einen Tag gerührt, auf einen neutralen pH-Wert angesäuert und in vacuo konzentriert, bis nur die wässrige Schicht zurückgeblieben war. Der so erhaltene wässrige Rückstand wurde durch Zusetzen von 1,0 N wässriger HCl auf einen pH-Wert von 4,0 angesäuert und mehrmals mit EtOAc (3 × 50 ml) extrahiert, anschließend wurde das kombinierte organische Lösungsmittel getrocknet (Mg₂SO₄), filtriert und in vacuo konzentriert, um 292 mg (95%) des Titelprodukts als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 0,96 (d, J = 7 Hz, 3H), 0,99 (d, J = 7 Hz, 3H), 1,17 (s, 9H); 1,09–1,47 (m, 4H), 1,51–1,60 (m, 1H), 1,90–2,00 (m, 1H), 2,50–2,59 (m, 1H), 2,80 (dd, J = 14, 8 Hz, 1H), 3,99 (s, 3H), 4,02–4,12 (m, 1H), 4,62 (m, 2H), 5,69 (m, 1H), 7,24 (dd, J = 9, 2,4 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,60–7,66 (m, 3H), 8,02–8,08 (m, 2H), 8,23 (d, J = 9 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,50, Verfahren D). MS m/z 647 (M⁺ + 1).
In Schritt 24d wurde die Verbindung 21 durch Zusetzen von CDI (81,2 mg, 0,50 mmol) zu einer Lösung des Produkts von Schritt 24c (0,270 g, 0,42 mmol) in THF (3 ml) und anschließend 60 min Refluxieren hergestellt. Die Lösung wurde auf RT abgekühlt. Anschließend wurde Cyclopropylsulfonamid (0,0607 g, 0,50 mmol) in einer Portion zugesetzt, bevor eine reine Lösung von DBU (0,075 ml, 0,50 mmol) zugesetzt wurde. Die Umsetzung wurde 18 h gerührt, mit EtOAc (200 ml) verdünnt, mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (3 × 30 ml), Wasser (2 × 30 ml) und Kochsalzlösung (30 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter Verwendung einer 20 × 40 cm 1000 μ-PTLC Platte von Analtech (Elution mit 2% MeOH in CH₂Cl₂) gereinigt, um Verbindung 21 als einen Schaum (0,113 g, 40%) zu ergeben. LC/MS rt-min (MH⁺): 1,49 (750) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 0,88–1,18 (m, 10H), 1,23 (s, 9H), 1,37–1,79 (m, 4H), 2,00–2,09 (m, 1H), 2,43–2,53 (m, 1H), 2,63–2,76 (m, 1H), 2,76–2,89 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,02–4,11 (m, 2H), 4,54–4,62 (m, 2H), 5,57 (m, 1H), 7,09 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,38 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,49–7,57 (m, 3H), 8,03–8,11 (m, 3H).
Beispiel 25
Verbindung 22, 1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonylcyclobutylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, die nachstehend gezeigt ist und auch als BOC-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)]-P1(1-aminocyclobutan-1)-CONHSO₂-cyclopropan bezeichnet wird, wurde wie in den folgenden Schritten 25a–d beschrieben hergestellt.
In Schritt 25a wurde das Produkt 1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonsäure, das nachstehend gezeigt ist und auch als P3-N-BOC-(L-tBuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)]-CO₂H bezeichnet wird, unter Verwendung der Abfolge von zwei Schritten hergestellt.
Dabei wurde zu einer Suspension von 3,90 g (8,60 mmol) [HN-(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)methylesterbishydrochlorid], 2,65 g (11,47 mmol) N-BOC-L-tert-Leucin (L-tBuGly) und 3,48 g (34,40 mmol) NMM in DMF (20 ml) bei 0°C 3,62 g (9,52 mmol) HATU zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht langsam auf RT erwärmt, anschließend wurde es 4 Tage gerührt, mit EtOAc (200 ml) verdünnt, mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4,0 (3 × 40 ml) und gesättigtem wässrigen NaHCO₃ (40 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und durch eine Biotage 40 M Säule (Elution mit 15% bis 70% EtOAc in Hexan) gereinigt, um 4,16 g (81%) 1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonsäuremethylester, der auch als P3-N-BOC-(L-tBuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)]-CO₂Me bezeichnet wird, als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,07 (s, 9H), 1,37 (s, 9H), 2,29–2,39 (m, 1H), 2,78 (dd, J = 14, 8 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,06–4,11 (m, 1H), 4,31 (d, J = 10 Hz, 1H), 4,54 (d, J = 11 Hz, 1H), 4,72–4,77 (m, 1H), 5,23 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,34 (m, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,07 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,44–7,52 (m, 3H), 7,99–8,03 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,43, Verfahren A). MS m/e 592 (M⁺ + 1).
Anschließend wurde zu einer Lösung 1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonsäuremethylester (4,179 g, 7,06 mmol) in THF (318 ml), CH₃OH (42 ml) und H₂O (170 ml) LiOH (1,356 g, 56,5 mmol) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde einen Tag gerührt, auf einen neutralen pH-Wert angesäuert und in vacuo konzentriert, bis nur die wässrige Schicht zurückgeblieben war. Der so erhaltene wässrige Rückstand wurde durch Zusetzen von 1,0 N wässriger HCl auf einen pH-Wert von 4,0 angesäuert und dann mit festem NaCl gesättigt. Dieses wässrige Gemisch wurde mehrmals mit 80% EtOAc/THF (4 × 300 ml) extrahiert, anschließend wurde das kombinierte organische Lösungsmittel getrocknet (Mg₂SO₄), filtriert und in vacuo konzentriert, um 3,69 g (91%) des Titelprodukts als einen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,03 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 2,36–2,43 (m, 1H), 2,78–2,83 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,05 (d, J = 10 Hz, 1H), 4,24 (d, J = 9 Hz, 1H), 4,54 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,63–4,67 (m, 1H), 5,52 (m, 1H), 7,09 (dd, J = 9 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,51–7,55 (m, 3H), 7,99–8,00 (m, 3H), 8,09 (d, J = 9 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,44, Verfahren A), MS m/z 578 (M⁺ + 1).
In Schritt 25b wurde 1-Aminocyclobutancarbonsäuremethylesterhydrochlorid, das nachstehend gezeigt ist, hergestellt.
Dabei wurde 1-Aminocyclobutancarbonsäure (100 mg, 0,869 mmol) (Tocris) in 10 ml MeOH gelöst und 2 h mit HCl-Gas durchperlt. Das Reaktionsgemisch wurde 18 h gerührt und anschließend in vacuo konzentriert, um 144 mg eines gelben Öls zu ergeben. Behandeln mit 10 ml Ether ergab 100 mg des Titelprodukts als einen weißen Feststoff. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 2,10–2,25 (m, 1H), 2,28–2,42 (m, 1H), 2,64–2,82 (m, 4H), 3,87 (s, 3H), 9,21 (br s, 3H).
In Schritt 25c wurde das Produkt 1-{[1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}cyclobutancarbonsäure, das nachstehend gezeigt ist und auch als BOC-P3(L-tBuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin)]-P1-(1-aminocyclobutan-1)-CO₂Me bezeichnet werden kann, unter Verwendung der Abfolge von zwei Schritten hergestellt.
Zu einem Gemisch von 1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonsäure (100 mg, 0,173 mmol) in 2 ml Methylenchlorid wurde DIPEA (112 mg, 0,865 mmol) zugesetzt, gefolgt von HBTU (78,4 mg, 0,207), HOBT·H₂O (32 mg, 0,207 mmol) und schließlich 1-Aminocyclobutancarbonsäuremethylesterhydrochlorid (30 mg, 0,182 mmol). Das Gemisch wurde 24 h bei RT gerührt, mit EtOAc (50 ml) verdünnt, mit gesättigtem wässrigen NaHCO₃ (25 ml) und Kochsalzlösung (25 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und in vacuo konzentriert, um 134 mg des Rohprodukts als ein gelbes Öl zu ergeben. Flashchromatographie, wobei mit 1:1 Ethylacetat/Hexan eluiert wurde, ergab 93 mg (78%) 1-{[1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}cyclobutancarbonsäuremethylester, der auch als BOC-P3(L-tBuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)prolin)]-P1(1-aminocyclobutan-1)-CO₂Me bezeichnet wird, als ein farbloses Öl. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,06 (s, 9H), 1,43 (s, 9H), 1,98–2,09 (m, 2H), 2,23–2,32 (m, 2H), 2,42–2,50 (m, 1H), 2,61–2,71 (m, 2H), 2,93–3,02 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 4,37 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 9 Hz, 1H), 4,87 (t, J = 7 Hz, 1H), 5,23–5,26 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 5,36 (brs, 1H), 7,04–7,08 (m, 2H), 7,45–7,54 (m, 5H), 8,05–8,08 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,67 Minuten, Verfahren D), MS m/z 689 (M⁺ + 1). HPLC Retentionszeit: 13,42 min.
Zu einem Gemisch von 1-{[1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}cyclobutancarbonsäuremethylester (2) (93 mg, 0,135 mmol) in THF (3 ml), Methanol (1,5 ml) und Wasser (0,4 ml) wurden 30 mg LiOH (65 mg, 2,7 mmol) zugesetzt. Das Gemisch wurde 3 Tage bei RT gerührt, in vacuo konzentriert und anschließend zwischen Ether (50 ml) und Wasser (25 ml) aufgetrennt. Die wässrige Schicht wurde unter Verwendung von 1 N HCl auf einen pH-Wert von 4,0 angesäuert und dann mit Ether (3 × 50 ml) extrahiert. Die kombinierten Etherschichten wurden getrocknet (MgSO₄), filtriert und in vacuo konzentriert, um 81 mg (89%) des Titelprodukts als einen weißen Schaum zu ergeben. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 1,04 (s, 9H), 1,41 (s, 9H), 1,98–2,09 (m, 2H), 2,20–2,30 (m, 2H), 2,50–2,58 (m, 1H), 2,66–2,80 (m, 2H), 2,84–2,93 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 4,31 (d, J = 9 Hz, 1H), 4,54 (d, J = 10 Hz, 1H), 4,83 (t, J = 7 Hz, 1H), 5,28 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,39 (br s, 1H), 7,03 (s, 1H), 7,08 (dd, J = 3,9 Hz, 1H), 7,47–7,55 (m, 4H), 7,64 (br s, 1H), 8,06–8,08 (m, 3H). LC-MS (Retentionszeit: 1,66, Verfahren D), MS m/z 675 (M⁺ + 1). HPLC Retentionszeit: 11,06 min.
In Schritt 25d wurde Verbindung 22 aus einem Gemisch von 64 mg (0,095 mmol) des Produkts von Schritt 25c und CDI (19,9 mg, 0,123 mmol) in THF (3 ml), das 1 h unter Rückfluss gewärmt wurde, hergestellt. Nach Abkühlen des Reaktionsgemischs auf RT wurde Cyclopropylsulfonamid (14,9 mg, 0,123 mmol) zugesetzt, gefolgt von DBU (18,7 mg, 0,123 mmol). Nach 24 h Rühren bei RT wurde die Umsetzung zwischen EtOAc (50 ml) und einem Puffer mit einem pH-Wert von 4 (25 ml) aufgetrennt. Die organische Phase wurde mit gesättigtem wässrigen NaHCO₃ (25 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄), filtriert und in vacuo konzentriert. Das Rohprodukt wurde auf einer 1000 μ 20 × 40 cm PTLC-Platte von Analtech (Elution zwei Mal mit 2,5% Methanol in Methylenchlorid) gereinigt, um 30 mg (41%) von Verbindung 22 als einen weißen Feststoff zu ergeben. LC-MS (Retentionszeit: 1,67, Verfahren D), MS m/z 778 (M⁺ + 1). HPLC Retentionszeit: 12,03 min.
Beispiel 26
Die folgenden Verbindungen der vorliegenden Erfindung wurden ebenfalls durch die in den vorhergehenden Beispielen 1–25 beschriebenen Verfahren hergestellt. Verbindung 23
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,86 (806) (Verfahren D). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 0,89 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 1,04 (s, 9H), 1,26–1,44 (m, 12H), 1,67–1,73 (m, 2H), 1,78–1,80 (m, 1H), 2,01–2,09 (m, 1H), 2,53 (m, 1H), 2,68–2,72 (m, 1H), 3,06–3,17 (m, 2H), 3,92, 3,94 (2s, 3H), 4,15–4,18 (m, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,49–4,55 (m, 2H), 5,00 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,18 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,53 (m, 1H), 5,82–5,90 (m, 1H), 7,06 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,36–7,38 (m, 1H), 7,46–7,554 (m, 3H), 8,04–8,09 (m, 3H). Verbindung 24
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,79 (790) (Verfahren D). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 0,74 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 1,08 (s, 9H), 0,79–1,29 (m, 10H), 1,34–1,42 (m, 1H), 2,00–2,15 (m, 2H), 2,28–2,35 (m, 1H), 2,39–2,44 (m, 1H), 2,65 (dd, J = 14, 6 Hz, 1H), 3,99 (s, 3H), 4,13 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,22 (d, J = 11 Hz, 1H), 4,28 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H), 4,57–4,61 (m, 1H), 5,00 (d, J = 11 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,51 (m, 1H), 5,92–5,99 (m, 1H), 6,73 (d, J = 9 Hz, NH), 7,20 (s, 1H), 7,42 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,48–7,56 (m, 4H), 7,82 (d, J = 9 Hz, 1H), 8,03–8,04 (m, 3H). Verbindung 25
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,84 (778) (Verfahren D). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,03 (s, 9H), 1,24–1,38 (m, 3H), 1,26 (s, 9H), 1,83 (m, 1H), 2,09–2,18 (m, 1H), 2,41 (m, 1H), 2,66–2,77 (m, 1H), 3,03–3,30 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 4,02–4,14 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,51–4,57 (m, 2H), 5,05 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,23 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,53 (m, 1H), 5,75–5,89 (m, 1H), 7,06 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,47–7,54 (m, 3H), 8,03–8,10 (m, 3H). Verbindung 26
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,85 (792) (Verfahren D). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,04 (s, 9H), 1,26–1,30 (m, 12H), 1,34 (m, 1H), 1,56–1,66 (m, 1H), 1,69–1,83 (m, 2H), 2,00–2,11 (m, 1H), 2,46–2,55 (m, 1H), 2,64–2,73 (m, 1H), 3,13–3,19 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 4,12–4,18 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,50–4,58 (m, 2H), 5,01 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,19 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,54 (m, 1H), 5,80–5,92 (m, 1H), 7,06 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,37 (m, 1H), 7,47–7,55 (m, 3H), 8,04–8,12 (m, 3H). Verbindung 27
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,80 (792) (Verfahren D). Verbindung 28
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,57 (690) (Verfahren D). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,04–1,33 (m, 4H), 1,17 (s, 9H), 1,42 (m, 1H), 1,89 (m, 1H), 2,33 (m, 1H), 2,43 (m, 1H), 2,84 (m, 1H), 2,95 (s, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,19 (m, 2H), 4,56 (m, 1H), 4,76 (m, 1H), 5,13 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,32 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,65–5,76 (m, 1H), 5,90 (m, 1H), 7,47 (m, 1H), 7,63 (s, 2H), 7,74 (m, 3H), 8,15 (m, 2H), 8,48 (m, 1H). Verbindung 29
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,57 (802) (Verfahren D). ¹H-NMR: (CDCl₃, 500 MHz) δ 0,94–1,78 (m, 13H), 1,07 (s, 9H), 1,87–2,03 (m, 2H), 2,16–2,19 (m, 1H), 2,32–2,45 (m, 2H), 2,64–2,68 (m, 1H), 3,91–3,96 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,06 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,20 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H), 4,56–4,60 (m, 1H), 4,98–5,01 (m, 1H), 5,13–5,16 (m, 1H), 5,29 (m, 1H), 6,01–6,08 (m, 1H), 6,88 (s, 1H), 6,92 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,42–7,51 (m, 4H), 7,86 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,99–8,03 (m, 2H). Verbindung 30
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,90 (804) (Verfahren D). ¹H-NMR: (CDCl₃, 500 MHz) δ 1,20–1,34 (m, 10H), 1,30 (s, 9H), 1,39–1,42 (m, 1H), 1,44–1,55 (m, 2H), 1,55–1,64 (m, 2H), 1,64–1,75 (m, 2H), 1,92 (dd, J = 8, 6 Hz, 1H), 2,25–2,30 (m, 1H), 2,39–2,44 (m, 1H), 2,58–2,62 (m, 1H), 3,76–3,82 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,03 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H), 4,19 (t, J = 9 Hz, 1H), 4,49 (dd, J = 9, 7 Hz, 1H), 4,64 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 11 Hz, 1H), 5,20 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,32 (m, 1H), 5,54 (d, J = 8 Hz, 1H), 5,73–5,80 (m, 1H), 6,94 (s, 1H), 7,01 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,41–7,50 (m, 4H), 7,98–8,00 (m, 3H). Verbindung 31
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,80 (776) (Verfahren D). Verbindung 32
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,85 (778) (Verfahren D). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 0,87 (d, J = 7 Hz, 1H), 1,06–1,08 (m, 9H), 1,29–1,37 (m, 10H), 1,96–2,06 (m, 1H), 2,04–2,12 (m, 1H), 2,27–2,40 (m, 1H), 2,64–2,68 (m, 1H), 2,94–2,99 (m, 1H), 3,76 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,94, 3,96 (2s, 3H), 4,07 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,18 (dd, J = 11,6, 4,6 Hz, 1H), 4,63 (dd, J = 10,7, 6,4 Hz, 1H), 4,99 (dd, J = 10,4, 1,6 Hz, 1H), 5,31 (m, 1H), 6,01–6,09 (m, 1H), 6,94 (dd, J = 9, 2,4 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,46–7,54 (m, 4H), 7,89 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,98–8,03 (m, 2H). Verbindung 33
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,87 (790) (Verfahren D). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 0,84 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,14–1,19 (m, 2H), 0,89–0,94 (m, 6H), 1,28 (s, 9H), 1,51 (m, 1H), 1,61–1,75 (m, 2H), 2,01–2,07 (m, 2H), 2,32–2,36 (m, 1H), 2,49 (m, 1H), 2,68 (dd, J = 13,9, 6,3 Hz, 1H), 3,90, 4,01 (2s, 3H), 4,11 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 4,20 (dd, J = 11,9, 3,4 Hz, 1H), 4,54–4,60 (m, 2H), 4,99 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 17,4 Hz, 1H), 5,53, 5,57 (m, 1H), 5,87–5,97 (m, 1H), 6,87 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,43 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,47–7,55 (m, 4H), 7,86 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 8,02–8,07 (m, 3H). Verbindung 34
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,93 (792) (Verfahren D). Verbindung 35
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,65 (877) (Verfahren B). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,06 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 1,29–1,33 (m, 1H), 1,70–1,73 (m, 1H), 2,06–2,12 (m, 1H), 2,36 (m, 1H), 2,60–2,71 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,08–4,12 (m, 1H), 4,25–4,28 (m, 1H), 4,52–4,57 (m, 2H), 4,91 (d, J = 11 Hz, 1H), 5,14 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,53 (m, 2H), 6,97–7,08 (m, 4H), 7,24 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,47–7,55 (m, 3H), 7,81–7,88 (m, 4H), 8,04–8,09 (m, 3H). Verbindung 36
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,73 (841) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,06 (s, 9H), 1,28 (s, 9H), 1,32–1,35 (m, 1H), 1,69 (dd, J = 8, 5,5 Hz, 1H), 2,11–2,18 (m, 1H), 2,31–2,37 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,62 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,08–4,13 (m, 1H), 4,25–4,29 (m, 1H), 4,52–4,57 (m, 2H), 4,92 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,16 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,37–5,46 (m, 1H), 5,58 (m, 1H), 7,10 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,27 (2s, 1H), 7,38–7,42 (m, 2H), 7,44–7,47 (m, 1H), 7,49–7,58 (m, 3H), 7,77 (m, 2H), 8,04, 8,06 (2s, 2H), 8,10 (d, J = 9 Hz, 1H). Verbindung 37
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,59 (841) (Verfahren B). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,04 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,21–1,43 (m, 1H), 1,72 (dd, J = 7, 5 Hz, 1H), 2,06–2,21 (m, 1H), 2,34 (m, 4H), 2,56–2,72 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,05–4,11 (m, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,48–4,55 (m, 2H), 4,90 (d, J = 11 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,40–5,87 (m, 2H), 7,06 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,18–7,25 (m, 3H), 7,37 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,46–7,53 (m, 3H), 7,80 (d, J = 8,2, 2H), 8,03–8,10 (m, 3H). Verbindung 38
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,66 (826) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,06 (s, 9H), 1,28 (s, 9H), 1,31–1,34 (m, 1H), 1,71 (dd, J = 8, 5,5 Hz, 1H), 2,11–2,16 (m, 1H), 2,30–2,39 (m, 1H), 2,64–2,72 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,11 (dd, J = 12, 2,6 Hz, 1H), 4,25–4,29 (m, 1H), 4,52–4,57 (m, 2H), 4,91 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,15 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,37–5,46 (m, 1H), 5,57 (m, 1H), 7,10 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,40 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,49–7,58 (m, 5H), 7,61–7,65 (m, 1H), 7,96–7,97 (m, 2H), 8,04, 8,05 (2s, 2H), 8,10 (d, J = 9 Hz, 1H). Verbindung 39
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,73 (895) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,03 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,32 (m, 1H), 1,69–1,73 (m, 1H), 2,00–2,06 (m, 1H), 2,43–2,50 (m, 1H), 2,56–2,60 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,04–4,17 (m, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,45 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,52 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 4,84 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,46 (m, 1H), 5,70 (m, 1H), 7,04–7,25 (m, 4H), 7,33–7,40 (m, 2H), 7,47–7,57 (m, 3H), 8,02–8,11 (m, 3H). Verbindung 40
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,66 (851) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,02 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,31 (m, 1H), 1,74 (dd, J = 7, 5 Hz, 1H), 2,05–2,11 (m, 1H), 2,46 (m, 1H), 2,61–2,73 (m, 1H), 3,91, 3,94 (2s, 3H), 4,06–4,11 (m, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,48 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,56 (t, J = 9 Hz, 1H), 4,90–4,95 (m, 1H), 5,14 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,48 (m, 1H), 5,69–5,76 (m, 1H), 7,02–7,08 (m, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,35–7,39 (m, 1H), 7,47–7,59 (m, 3H), 7,76–7,79 (m, H), 8,01–0,22 (m, 5H). Verbindung 41
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,65 (851) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,02 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,21–1,30 (m, 1H), 1,73 (dd, J = 7, 5 Hz, 1H), 2,03–2,09 (m, 1H), 2,41–2,50 (m, 1H), 2,62–2,69 (m, 1H), 3,92, 3,94 (2s, 3H), 4,07–4,11 (m, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,48 (d, J = 12 Hz, 2H), 4,52–4,59 (m, 1H), 5,13 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,48 (m, 1H), 5,72–5,80 (m, 1H), 7,04 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,35–7,39 (m, 1H), 7,46–7,54 (m, 3H), 7,73 (m, 2H), 7,89–8,10 (m, 5H). Verbindung 42
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,70 (860) (Verfahren B). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,04 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 1,31–1,35 (m, 1H), 1,71 (dd, J = 8, 5 Hz, 1H), 2,11–2,17 (m, 1H), 2,37–2,44 (m, 1H), 2,67 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,12 (dd, J = 11,9, 3,1 Hz, 1H), 4,24–4,27 (m, 1H), 4,53–4,60 (m, 2H), 4,81–4,84 (m, 1H), 5,12 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 5,19–5,28 (m, 1H), 5,58 (s, 1H), 7,10 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,30 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,42–7,47 (m, 1H), 7,50–7,59 (m, 5H), 8,04–8,13 (m, 4H). Verbindung 43
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,63 (860) (Verfahren B). Verbindung 44
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,78 (860) (Verfahren B). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,06 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 1,30–1,34 (m, 1H), 1,72 (dd, J = 8, 5,5 Hz, 1H), 2,11–2,16 (m, 1H), 2,32–2,43 (m, 1H), 2,68 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,07–4,12 (m, 1H), 4,24–4,27 (m, 1H), 4,53–4,57 (m, 2H), 4,92 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,15 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,37–5,45 (m, 1H), 5,58 (m, 1H), 7,11 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,52–7,57 (m, 5H), 7,91–7,94 (m, 2H), 8,04, 8,05 (2s, 2H), 8,10–8,13 (m, 1H). Verbindung 45
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,82 (879) (Verfahren B). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,06 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,33 (dd, J = 9, 5 Hz, 1H), 1,73 (dd, J = 8, 5 Hz, 1H), 2,11–2,17 (m, 1H), 2,36–2,43 (m, 1H), 2,71 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,13 (dd, J = 12, 3 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,53–4,58 (m, 2H), 4,94 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,46–5,53 (m, 1H), 5,60 (m, 1H), 7,13 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,37–7,42 (m, 2H), 7,53–7,58 (m, 3H), 7,92–7,95 (m, 1H), 8,04–8,06 (m, 3H), 8,13 (d, J = 9,5 Hz, 1H). Verbindung 46
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,76 (858) (Verfahren B). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,03 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 1,33 (dd, J = 9,5, 5 Hz, 1H), 1,72 (dd, J = 8, 6 Hz, 1H), 2,12–2,18 (m, 1H), 2,36–2,43 (m, 1H), 2,58 (s, 3H), 2,70 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,12 (dd, J = 12, 3 Hz, 1H), 4,22–4,26 (m, 1H), 4,54–4,59 (m, 2H), 5,15 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,28–5,35 (m, 1H), 5,59 (m, 1H), 7,11 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,20–7,27 (m, 3H), 7,40 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,51–7,57 (m, 3H), 7,72 (dd, J = 9, 3 Hz, 1H), 8,04, 8,05 (2s, 2H), 8,12 (d, J = 9 Hz, 1H). Verbindung 47
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,79 (894) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,05 (s, 9H), 1,26, 1,28 (2s, 9H), 1,31–1,34 (m, 1H), 1,72 (m, 1H), 2,08–2,16 (m, 1H), 2,37–2,42 (m, 1H), 2,68 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,13 (dd, J = 12 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,53–4,57 (m, 2H), 5,13 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,42–5,49 (m, 1H), 5,59 (m, 1H), 7,12 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,54–7,57 (m, 3H), 7,70–7,74 (m, 1H), 7,93 (d, J = 7 Hz, 1H), 8,04, 8,05 (2s, 2H), 8,12–8,22 (m, 3H). Verbindung 48
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,74 (894) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,01 (s, 9H), 1,26, 1,28 (2s, 9H), 1,30–1,33 (m, 1H), 1,72 (dd, J = 8, 5 Hz, 1H), 2,21–2,26 (m, 1H), 2,38–2,44 (m, 1H), 2,69 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,12–4,15 (m, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,54–4,59 (m, 2H), 4,82 (dd, J = 10, 2 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,23–5,30 (m, 1H), 5,60 (m, 1H), 7,12 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,40 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,51–7,58 (m, 3H), 7,74–7,81 (m, 2H), 7,87–7,91 (m, 1H), 8,04, 8,05 (2s, 2H), 8,12 (d, J = 9 Hz, 1H), 8,32 (d, J = 7 Hz, 1H). Verbindung 49
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,67 (844) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,04 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,43 (m, 1H), 1,68–1,70 (m, 1H), 1,92–2,00 (m, 1H), 2,57–2,65 (m, 1H), 2,74 (dd, J = 14, 8 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,18–4,27 (m, 2H), 4,49–4,59 (m, 2H), 4,89–4,93 (m, 1H), 5,11 (dd, J = 17, 2 Hz, 1H), 5,56 (m, 1H), 5,62–5,72 (m, 1H), 7,04–7,14 (m, 3H), 7,28 (s, 1H), 7,39–7,41 (m, 1H), 7,48–7,55 (m, 3H), 7,87–7,93 (m, 2H), 8,06–8,13 (m, 3H). Verbindung 50
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,55 (851) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 0,76 (s, 9H), 1,35 (s, 9H), 1,49 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 2,03–2,05 (m, 1H), 2,31–2,43 (m, 2H), 2,71 (dd, J = 13, 6 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,04–4,13 (m, 1H), 4,48–4,64 (m, 2H), 5,07–5,16 (m, 1H), 5,23–5,34 (m, 1H), 5,55–5,76 (m, 2H), 7,05–7,10 (m, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,40 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,47–7,58 (m, 4H), 7,78–7,89 (m, 1H), 7,92–7,99 (m, 1H), 8,03, 8,05 (2s, 2H), 8,09–8,17 (m, 1H), 8,39 (d, J = 7,3 Hz, 1H). Verbindung 51
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,66 (871) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,06 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,43 (m, 1H), 1,69–1,72 (m, 1H), 2,09–2,15 (m, 1H), 2,42–2,48 (m, 1H), 2,71 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,13–4,16 (m, 1H), 4,22–4,26 (m, 1H), 4,55–4,58 (m, 2H), 4,89 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,14 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,47–5,54 (m, 1H), 5,62 (m, 1H), 6,63 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,13–7,15 (m, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,54–7,61 (m, 3H), 8,04, 8,06 (2s, 2H), 8,15 (d, J = 9 Hz, 1H), 8,31 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,44 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,72 (d, J = 9 Hz, 1H). Verbindung 52
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,70 (871) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 1,05 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,27–1,31 (m, 1H), 1,70 (dd, J = 8, 5 Hz, 1H), 2,10–2,16 (m, 1H), 2,42–2,50 (m, 1H), 2,71 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,12–4,14 (m, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,54–4,60 (m, 2H), 4,91 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,15 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,51–5,59 (m, 2H), 7,13 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,38 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,53–7,56 (m, 3H), 7,99–8,04 (m, 2H), 8,09–8,31 (m, 3H), 8,27 (d, J = 9 Hz, 1H). Verbindung 53
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,70 (871) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,02 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,42 (m, 1H), 1,66–1,72 (m, 1H), 1,90–1,98 (m, 1H), 2,56–2,66 (m, 1H), 2,70–2,80 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,16–4,26 (m, 2H), 4,47–4,59 (m, 2H), 5,09 (dd, J = 17, 1,5 Hz, 1H), 5,54 (m, 1H), 5,60–5,78 (m, 1H), 6,60 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,06 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,37–7,40 (m, 1H), 7,48–7,65 (m, 4H), 8,04–8,10 (m, 3H), 8,18–8,29 (m, 2H), 8,67 (s, 1H). Verbindung 54
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,79 (844) (Verfahren B). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,02 (s, 9H), 1,25 (s, 9H), 1,43 (m, 1H), 1,77 (dd, J = 8, 5 Hz, 1H), 2,00–2,19 (m, 1H), 2,38–2,69 (m, 2H), 3,91 (s, 3H), 4,03–4,14 (m, 1H), 4,20–4,33 (m, 1H), 4,45 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,55 (t, J = 9 Hz, 1H), 5,12 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,44 (m, 1H), 5,67–5,88 (m, 1H), 7,01–7,18 (m, 4H), 7,34 (s, 1H), 7,40–7,57 (m, 3H), 7,82–7,92 (m, 1H), 8,01–8,10 (m, 3H). Verbindung 55
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,75 (905 in dem MS) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,02 (s, 9H), 1,25 (s, 9H), 1,42 (m, 1H), 1,75 (dd, J = 8, 5 Hz, 1H), 2,00–2,12 (m, 1H), 2,38–2,46 (m, 1H), 2,57–2,69 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 4,03–4,10 (m, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,47 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,54 (t, J = 9 Hz, 2H), 4,93 (d, J = 11 Hz, 1H), 5,14 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,44 (m, 1H), 5,62–5,84 (m, 1H), 7,04 (dd, J = 9, 2,6 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,29–7,37 (m, 2H), 7,45–7,61 (m, 4H), 7,77–7,88 (m, 1H), 7,98–8,11 (m, 4H). Verbindung 56
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,72 (952 in dem MS) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,02 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,32 (m, 1H), 1,84 (dd, J = 7,5, 5 Hz, 1H), 2,06–2,13 (m, 1H), 2,43–2,52 (m, 1H), 2,63 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,03–4,10 (m, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,45 (d, J = 11 Hz, 2H), 4,53–4,58 (m, 2H), 4,89 (m, 1H), 5,08–5,20 (m, 1H), 5,36, 5,42 (m, 1H), 5,71–5,99 (m, 1H), 7,02–7,08 (m, 2H), 7,16 (s, 1H), 7,31–7,38 (m, 2H), 7,44–7,53 (m, 3H), 7,90–8,13 (m, 5H). HRMS berechnet für C₄₄H₅₁IN₅O₉S: 952,2452; gefunden: 952,2476. Verbindung 57
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,64 (884) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,04 (s, 9H), 1,23 (s, 9H), 1,28–1,37 (m, 1H), 1,72 (dd, J = 7,9, 5,7 Hz, 1H), 2,11–2,20 (m, 1H), 2,45–2,54 (m, 1H), 2,78 (dd, J = 13,4, 6,8 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,03 (s, 3H), 4,10–4,19 (m, 1H), 4,25–4,35 (m, 1H), 4,64–4,73 (m, 2H), 5,04 (d, J = 17,9 Hz, 1H), 5,16–5,28 (m, 1H), 5,80 (m, 1H), 7,30 (dd, J = 9,2, 1,8 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,60 (m, 6H), 8,06–8,08 (m, 2H), 8,15 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 8,30 (d, J = 9,2 Hz, 1H). Verbindung 58
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,57 (884) (Verfahren B). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,03 (s, 9H), 1,24, 1,29 (2s, 10H), 1,43 (s, 1H), 1,55–1,86 (m, 2H), 2,00 (m, 1H), 2,09 (s, 3H), 2,36–2,45 (m, 1H), 2,59–2,66 (m, 1H), 3,92, 3,94 (2s, 3H), 4,10 (m, 1H), 4,23–4,26 (m, 1H), 4,45–4,58 (m, 2H), 4,91 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 5,12 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 5,44 (s, 1H), 5,64–5,76 (m, 1H), 7,05 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,36 (d, J = 2,4 Hz, 2H), 7,47–7,55 (m, 3H), 7,59–7,64 (m, 2H), 7,79–7,84 (m, 2H), 8,02–8,08 (m, 3H). Verbindung 59
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,74 (857) (Verfahren B). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,05 (s, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,43 (m, 1H), 1,70–1,79, (m, 1H), 2,10 (q, J = 8,8 Hz, 1H), 2,32–2,41 (m, 1H), 2,62 (dd, J = 13, 7 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 4,06–4,11 (m, 1H), 4,24–4,33 (m, 1H), 4,48–4,57 (m, 2H), 5,00 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 5,14 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,48 (m, 1H), 5,64–5,66 (m, 1H), 6,91–6,96 (m, 1H), 7,01–7,07 (m, 1H), 7,18–7,41 (m, 3H), 7,47–7,55 (m, 3H), 7,80–7,78 (m, 2H), 8,02–8,08 (m, 3H). Verbindung 60
¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,04 (s, 9H), 1,24–1,44 (m, 19H), 1,76 (dd, J = 8, 5 Hz, 1H), 2,03–2,21 (m, 1H), 2,40–2,50 (m, 1H), 2,58–2,65 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,08–4,14 (m, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,45–4,58 (m, 2H), 4,92 (dd, J = 10,4, 2 Hz, 1H), 5,15 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,47 (m, 1H), 5,71 (m, 1H), 7,05 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,34–7,68 (m, 6H), 7,77–7,83 (m, 2H), 7,95–8,07 (m, 3H). Verbindung 61
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,58 (790) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,05 (s, 9H), 1,26, 1,27 (2s, 18H), 1,33–1,44 (m, 1H), 1,81–1,85 (m, 1H), 2,18–2,35 (m, 2H), 2,67–2,74 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,01–4,10 (m, 1H), 4,19–4,25 (m, 1H), 4,57–4,62 (m, 2H), 5,10 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,24 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,53–5,65 (m, 2H), 6,51 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,07 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,40 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,47–7,57 (m, 3H), 8,03–8,06 (m, 2H), 8,10 (d, J = 9 Hz, 1H); HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₄₂H₅₆N₅SO₈: 790,3850; gefunden: 790,3834. Verbindung 62
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,61 (790) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,03 (s, 9H), 1,21–1,37 (m, 1H), 1,23 (s, 9H), 1,29 (s, 9H), 1,79–1,86 (m, 1H), 2,00–2,39 (m, 1H), 2,68–2,72 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,04–4,13 (m, 1H), 4,24–4,33 (m, 1H), 4,54–4,69 (m, 2H), 5,09 (d, J = 10 Hz, 1H), 5,28 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,48–5,67 (m, 2H), 7,05–7,09 (m, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,49–7,62 (m, 3H), 8,04–8,11 (m, 3H); HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₄₂H₅₆N₅SO₈: 790,3850; gefunden: 790,3827. Verbindung 63
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,78 (841) (Verfahren D). Verbindung 64
LC/MS rt-min (MH⁺): 2,04 (953 in dem MS) (Verfahren B). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,06, 1,08 (2s, 9H), 1,20–1,29 (m, 28H), 1,43 (m, 1H), 1,73 (dd, J = 7,9, 5,7 Hz, 1H), 2,03–2,14 (m, 1H), 2,38 (m, 1H), 2,68 (dd, J = 13,9, 6,2 Hz, 1H), 2,85–2,94 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,14 (dd, J = 11,9, 2,7 Hz, 1H), 4,24–4,36 (m, 3H), 4,48–4,61 (m, 2H), 4,78 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,58 (m, 1H), 7,07–7,11 (m, 1H), 7,18 (s, 2H), 7,27 (s, 1H), 7,40 (d, J = 1,8, 1H), 7,47–7,57 (m, 3H), 8,04–8,11 (m, 3H). HRMS berechnet für C₅₃H₇₀N₅O₉S: 952,4894; gefunden: 952,4898. Verbindung 65
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,77 (902) (Verfahren B). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,04 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 1,43 (m, 1H), 1,74 (m, 1H), 2,06 (m, 1H), 2,33–2,71 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,09 (m, 1H), 4,24 (m, 1H), 4,42–4,58 (m, 2H), 4,91–4,94 (m, 1H), 5,15 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 5,47 (m, 1H), 5,74 (m, 1H), 7,04–7,07 (m, 1H), 7,34–7,68 (m, 12H), 7,94–8,07 (m, 5H). HRMS berechnet für C₅₀H₅₆N₅O₉S: 902,3799; gefunden: 902,3790. Verbindung 66
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,86 (909) (Verfahren B). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,03 (s, 9H), 1,25, 1,30 (2s, 9H), 1,43 (m, 1H), 1,72–1,76 (m, 1H), 2,02–2,11 (m, 1H), 2,42–2,51 (m, 1H), 2,61–2,71 (m, 1H), 3,93, 3,94 (2s, 3H), 4,08–4,13 (m, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,47–4,58 (m, 2H), 5,12 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,50 (m, 1H), 5,64–5,78 (m, 1H), 7,06 (dd, J = 9,2, 2,6 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,28–7,32 (m, 2H), 7,37–7,39 (m, 1H), 7,47–7,55 (m, 3H), 7,89–8,12 (m, 5H). HRMS berechnet für C₄₅H₅₁F₃N₅O₁₀S: 910,3309; gefunden: 910,3298. Verbindung 67
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,43 (764) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,03 (S, 9H), 1,26 (s, 9H), 1,44–1,52 (m, 1H), 1,52–1,65 (m, 11H), 2,27–2,37 (m, 1H), 2,65 (dd, J = 13,7, 6,8 Hz, 1H), 2,92–3,01 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,07–4,13 (m, 1H), 4,26 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,48–4,53 (m, 1H), 5,56 (s, 1H), 6,67 (d, J = 9,5 Hz, NH), 7,24 (s, 1H), 7,36–7,38 (m, 1H), 7,38 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,47–7,57 (m, 3H), 8,03–8,07 (m, 3H). Verbindung 68
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,49 (764) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 0,86–1,16 (m, 6H), 1,19 (s, 9H), 1,43–1,91 (m, 3H), 2,33–2,42 (m, 1H), 2,51–2,68 (m, 2H), 2,92–3,03 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,05–4,12 (m, 2H), 4,54 (dd, J = 10,6, 6,2 Hz, 1H), 4,67 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 5,58 (s, 1H), 6,78 (d, J = 9,5 Hz, NH), 7,09 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,38 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,47–7,57 (m, 3H), 8,03–8,10 (m, 3H). Verbindung 69 Isomer mit hohem Rf-Wert (MeOH/CH₂Cl₂)
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,49 (788) (Verfahren B). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 0,85–1,75 (m, 13H), 1,47 (s, 9H), 1,75–1,80 (m, 1H), 1,95–2,04 (m, 1H), 2,47–3,03 (m, 3H), 3,93 (s, 3H), 4,0 (m, 2H), 4,51–4,69 (m, 2H), 4,93–5,02 (m, 1H), 5,31–5,40 (m, 1H), 5,46, 5,55 (2s, 1H), 5,80–5,94 (m, 1H), 7,12 (dd, J = 9,2, 2,2 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,37 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,46–7,57 (m, 3H), 7,95 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 8,04–8,11 (m, 2H); HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₄₁H₅₀N₅SO₉: 788,3329; gefunden: 788,3322. Verbindung 70 Isomer mit niedrigem Rf-Wert (MeOH/CH₂Cl₂)
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,55 (788) (Verfahren B). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 0,98 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 1,09 (s, 9H), 1,26–1,93 (m, 10H), 2,12–2,21 (m, 1H), 2,32–2,40 (m, 1H), 2,53–2,65 (m, 1H), 2,80 (brs, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,09–4,18 (m, 1H), 4,37 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,54–4,59 (m, 2H), 5,19 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 5,46–5,60 (m, 2H), 7,11–7,15 (m, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,43 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,48–7,58 (m, 3H), 8,01–8,07 (m, 3H). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₄₁H₅₀N₅SO₉: 788,3329; gefunden: 788,3330. Verbindung 71
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,53 (790) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 0,94 (d, J = 6,2 Hz, 6H), 1,08 (s, 9H), 1,28–1,33 (m, 1H), 1,70–2,74 (m, 10H), 3,68 (m, 1H), 3,93, 3,98 (2s, 3H), 4,04–4,33 (m, 2H), 4,45–4,60 (m, 2H), 5,14 (d, J = 17,6 Hz, 1H), 5,53 (s, 1H), 5,78–5,90 (m, 1H), 7,20, 7,25 (2s, 1H), 7,37–7,42 (m, 1H), 7,49–7,56 (m, 4H), 8,03–8,06 (m, 3H). Verbindung 72
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,62 (816). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 300 MHz) δ 1,24 (s, 9H), 1,39–1,58 (m, 2H), 1,50–2,53 (m, 17H), 2,72–2,80 (m, 1H), 3,75–3,89 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,02–4,13 (m, 2H), 4,54–4,67 (m, 2H), 5,03 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 5,24 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,54 (s, 1H), 5,78–5,93 (m, 1H), 7,08 (dd, J = 9,2, 2 Hz, 1H), 7,25, 7,27 (2s, 1H), 7,39 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,46–7,57 (m, 3H), 8,04–8,06 (m, 2H), 8,13 (d, J = 9,2 Hz, 1H). Verbindung 73
LC/MS rt-min (MH⁺): 1,65 (883) (Verfahren A). ¹H-NMR: (Methanol-d₄, 500 MHz) δ 0,22–0,27 (m, 2H), 0,50–0,56 (m, 2H), 0,86–1,36 (m, 1H), 1,09 (s, 9H), 1,46–1,48 (m, 1H), 1,90 (dd, J = 8, 5 Hz, 1H), 2,18–2,24 (m, 1H), 2,30–2,46 (m, 1H), 2,70 (dd, J = 14, 7 Hz, 1H), 3,07 (dd, J = 15, 7 Hz, 1H), 3,13 (dd, J = 15, 7 Hz, 1H), 3,43–3,49 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 4,16 (dd, J = 12, 3 Hz, 1H), 4,50–4,54 (m, 2H), 4,57–4,61 (m, 1H), 5,12 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,63 (m, 1H), 5,75 (d, J = 9 Hz, NH), 5,83–5,90 (m, 1H), 7,13 (dd, J = 9, 2 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,43 (d, J = 2 Hz, 1H), 7,52–7,59 (m, 3H), 8,08–8,10 (m, 3H). Verbindungen 74 und 75
Verbindung 74 – (1S,2S)-Isomer: LC/MS rt-min (MH⁺): 1,71 (806).
Verbindung 75 – (1R,2R)-Isomer: LC/MS rt-min (MH⁺): 1,69 (806). Verbindung 76
(1R,2S/1S,2R 1:1-Gemisch): LC/MS rt-min (MH⁺): 1,69 (804). Verbindungen 77 und 78
Verbindung 77 – (1S,2S)-Isomer: LC/MS rt-min (MH⁺): 2,10 (832).
Verbindung 78 – (1R,2R)-Isomer: LC/MS rt-min (MH⁺): 1,73 (832). Verbindung 79
(1R,2S/1S,2R 1:1-Gemisch): LC/MS rt-min (MH⁺): 1,72 (830). Verbindung 80
(1R,2R)-Isomer: LC/MS rt-min (MH⁺): 1,87 (861). Verbindungen 81–83
Verbindung 81 – (1R,2S/1S,2R 1:1-Gemisch): LC/MS rt-min (MH⁺): 1,86 (858).
Verbindung 82 – (1S,2R)-Isomer: LC/MS rt-min (MH⁺): 1,87 (858).
Verbindung 83 – (1R,2S)-Isomer: LC/MS rt-min (MH⁺): 1,87 (858). Verbindung 84
(1R,2S)-Isomer: LC/MS rt-min (MH⁺): 1,66 (818). Verbindung 85
(1R,2S)-Isomer: LC/MS rt-min (MH⁺): 1,57 (804). Verbindungen 86–88
Verbindung 86 – (1R,2S/1S,2R 1:1-Gemisch): LC/MS rt-min (MH⁺): 1,51 (764).
Verbindung 87 – (1R,2S)-Isomer: LC/MS rt-min (MH⁺): 1,50 (764).
Verbindung 88 – (1S,2R)-Isomer: LC/MS rt-min (MH⁺): 1,52 (764). Verbindung 89
(1R,2S/1S,2R 1:1-Gemisch): LC/MS rt-min (MH⁺): 1,44 (750). Verbindung 90
(1R,2S/1S,2R 1:1-Gemisch): LC/MS rt-min (MH⁺): 1,54 (764). Verbindung 91
(1R,2S/1S,2R 1:1-Gemisch): LC/MS rt-min (MH⁺): 1,52 (790). Verbindung 92
(1R,2S/1S,2R 1:1-Gemisch): LC/MS rt-min (MH⁺): 1,45 (776). Verbindung 93
(1R,2S/1S,2R 1:1-Gemisch): LC/MS rt-min (MH⁺): 1,55 (790). Verbindung 94
(1R,2S/1S,2R 1:1-Gemisch): LC/MS rt-min (MH⁺): 1,65 (818).
Beispiel 27
Verbindung 95, 1-{2-[Bis-(2-hydroxyethyl)amino]acetyl}-4(R)-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2(S)-carbonsäure-(1(R)-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2(S)-vinylcyclopropyl)amid, die nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den folgenden Schritten 27a–e beschrieben hergestellt.
Schritt 27a: Herstellung von 2(S)-(1(R)-Ethoxycarbonyl-2(S)-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4(R)-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonsäure-tert-butylester, der nachstehend gezeigt ist.
Das Produkt von Schritt 12a (7,5 g, 39,1 mmol) wurde mit Diisopropylethylamin (32,5 ml, 186 mmol) in Dichlormethan (150 ml) kombiniert. Zu dem so erhaltenen Gemisch wurden HOBT-Hydrat (6,85 g, 44,7 mmol) und das Produkt von Schritt 1c (17,3 g, 37,3 mmol) zugesetzt, gefolgt vom Zusetzen von HBTU (16,96 g, 44,7 mmol). Es trat sofort eine leichte Exothermie auf, anschließend wurde das Gemisch über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde das Gemisch in vacuo konzentriert und erneut in Ethylacetat (600 ml) gelöst. Die Lösung wurde nacheinander mit Wasser (2 × 200 ml), 10%-igem wässrigen Natriumbicarbonat (2 × 200 ml), erneut Wasser (150 ml) und schließlich Kochsalzlösung (150 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und filtriert, anschließend wurde das Filtrat in vacuo zu einem beigefarbenen glasförmigen Feststoff konzentriert. Es wurde eine Reinigung in mehreren Portionen (jeweils 7 g) durch Flashchromatographie auf einer Biotage Flash 75 M Kartusche (66% Hexan/Ethylacetat) durchgeführt, um das (1R,2S)-Vinyl-Acca P1-Isomer von BOC-NH-P2-P1-COOEt als das zuerst eluierte Isomer (Gesamtmenge 9,86 g, 44,0% Ausbeute) zu ergeben, gefolgt von der Elution des (1S,2R) Vinyl-Acca P1-Isomers von BOC-NH-P2-P1-COOEt als das zweite eluierte Isomer (Gesamtmenge 10,43 g, 46,5% Ausbeute). Es wurde eine Gesamtmenge von 1,97 g an gemischten Fraktionen gewonnen, so dass die Gesamtumwandlung der beiden Diastereomere 99,3% betrug.
(1R,2S)-Isomer – ¹H-NMR: (Methanol-d₄) δ 1,23 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,4 (s, 4H), 1,45 (s, 6H), 1,73 (dd, J = 7,9, 1,5 Hz, 0,4H), 1,79 (dd, J = 7,8, 2,4 Hz, 0,6H), 2,21 (q, J = 8,2 Hz, 1H), 2,44–2,49 (m, 1H), 2,66–2,72 (m, 0,4H), 2,73–2,78 (m, 0,6H), 3,93–3,95 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,10–4,17 (m, 2H), 4,44 (q, J = 7,8 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 5,31 (d, J = 17,7 Hz, 0,4H), 5,32 (d, J = 17,4 Hz, 0,6H), 5,49 (bs, 1H), 5,66–5,82 (m, 1H), 7,16 (dd, J = 9,2, 2,5 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,42 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,48–7,55 (m, 3H), 8,02–8,05 (m, 3H). LC-MS (HPLC-Bedingungen „B", Retentionszeit: 1,55), MS m/z 602 (M⁺ + 1).
Schritt 27b: Herstellung von 2(S)-(1(R)-Carboxy-2(S)-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4(R)-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonsäure-tert-butylester, der nachstehend gezeigt ist.
Das (1R,2S)-Isomer von Schritt 27a (9,86 g, 16,4 mmol) wurde 12 Stunden mit 1 N NaOH (50 ml, 50 mmol) in einem Gemisch von THF (150 ml) und Methanol (80 ml) behandelt. Das Gemisch wurde in vacuo konzentriert, bis nur die wässrige Phase zurückgeblieben war. Wasser (100 ml) wurde zugesetzt, und anschließend wurde 1 N HCl langsam zugesetzt, bis ein pH-Wert von 3 erreicht war. Anschließend wurde das Gemisch mit Ethylacetat (3 × 200 ml) extrahiert, die kombinierten organischen Extrakte wurden mit Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Das Filtrat wurde in vacuo konzentriert, um die Titelverbindung als ein weißes Pulver (9,2 g, 98% Ausbeute) zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 1,41 (s, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,77 (dd, J = 7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,16–2,21 (m, 1H), 2,44–2,51 (m, 1H), 2,74–2,79 (m, 1H), 3,93–3,96 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 4,44 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 5,11 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,52 (s, 1H), 5,79–5,86 (m, 1H), 7,22 (dd, J = 9,16, 2,14 Hz, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,43 (d, J = 2,14 Hz, 1H), 7,54–7,60 (m, 3H), 8,04 (dd, J = 7,8, 1,4 Hz, 2H), 8,08 (d, J = 9,1 Hz, 1H). LC-MS (HPLC-Bedingungen „B", Retentionszeit: 1,46), MS m/z 574 (M⁺ + 1).
Schritt 27c: Herstellung von 2(S)-(1(R)-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2(S)-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4(R)-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonsäure-tert-butylester, der nachstehend gezeigt ist.
Das Produkt von Schritt 27b (7,54 g, 13,14 mmol) wurde mit CDI (3,19 g, 19,7 mmol) und DMAP (2,41 g, 19,7 mmol) in wasserfreiem THF kombiniert, anschließend wurde das so erhaltene Gemisch 45 min unter Rückfluss gewärmt. Das leicht undurchsichtige Gemisch wurde auf Raumtemperatur abgekühlt, anschließend wurde Cyclopropylsulfonamid (1,91 g, 15,8 g) zugesetzt. Nach dem Zusetzen von DBU (5,9 ml, 39,4 mmol) wurde das Gemisch völlig klar. Die braune Lösung wurde über Nacht gerührt. Anschließend wurde das Gemisch in vacuo zu einem Öl konzentriert und erneut in Ethylacetat (500 ml) gelöst. Die Lösung wurde mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4 (3 × 200 ml) gewaschen, die kombinierten Waschpuffer wurden erneut mit Ethylacetat (200 ml) extrahiert. Die kombinierten organischen Phasen wurden mit Kochsalzlösung (150 ml) gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Konzentrieren des Filtrats in vacuo ergab einen beigefarbenen Feststoff. Das Rohprodukt wurde durch Flashchromatographie auf einer Biotage Flash 75 M Kartusche (25% Hexan/Ethylacetat) gereinigt, um das Titelprodukt (5,85 g, 66% Ausbeute) zu ergeben. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 1,03–1,09 (m, 2H), 1,15–1,28 (m, 2H), 1,40–1,44 (m, 2H), 1,74 (s, 9H), 1,87 (dd, J = 8,1, 5,6 Hz, 1H), 2,21–2,27 (m, 1H), 2,36–2,42 (m, 1H), 2,65 (dd, J = 13,7, 6,7 Hz, 1H), 2,93–2,97 (m, 1H), 3,90–3,96 (m, 2H), 4,00 (s, 3H), 4,40 (dd, J = 9,5, 7,0 Hz, 1H), 5,12 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,31 (d, J = 17,4 Hz, 1H), 5,64 (s, 1H), 5,73–5,80 (m, 1H), 7,30 (dd, J = 9,2, 2,1 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,61–7,63 (m, 3H), 8,04–8,05 (m, 2H), 8,15 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (HPLC-Bedingungen „B", Retentionszeit: 1,48), MS m/z 677 (M⁺ + 1).
Schritt 27d: Herstellung von 4(R)-(7-Methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2(S)-carbonsäure-(1(R)-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2(S)-vinylcyclopropyl)amid, das nachstehend gezeigt ist.
Das Produkt von Schritt 27c (5,78 g, 8,54 mmol) wurde über Nacht mit 4,0 M HCl in 1,4-Dioxan (50 ml, 200 mmol) behandelt. Das Reaktionsgemisch wurde in vacuo konzentriert und mehrere Tage in einen Vakuumofen bei 50°C gebracht. Das Bishydrochloridsalz der Titelverbindung (5,85 g, quantitative Ausbeute) wurde so als ein beigefarbenes Pulver erhalten. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 1,03–1,18 (m, 3H), 1,26–1,30 (m, 1H), 1,36–1,40 (m, 2H), 1,95 (dd, J = 8,2, 5,8 Hz, 1H), 2,37 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 2,51–2,57 (m, 1H), 2,94–2,98 (m, 1H), 3,09 (dd, J = 14,6, 7,3 Hz, 1H), 3,98 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 3,99 (s, 1H), 4,08 (s, 3H), 4,80 (dd, J = 10,7, 7,6 Hz, 1H), 5,15 (dd, J = 10,2, 1,4 Hz, 1H), 5,32 (dd, J = 17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,61–5,69 (m, 1H), 5,99 (t, J = 3,7 Hz, 1H), 7,51 (dd, J = 9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,72–7,79 (m, 3H), 8,09 (dd, J = 7,0, 1,5 Hz, 2H), 8,53 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (HPLC-Bedingungen „B", Retentionszeit: 1,01), MS m/z 577 (M⁺ + 1).
Schritt 27e: Herstellung der Verbindung 95.
Zu einem Reaktionsgefäß mit PS-DIEA-Harz (Argonaut Technologies, 0,047 g, 0,175 mmol) wurde eine Lösung von Bicin (0,044 mmol) in DMF (0,25 ml) zugesetzt, gefolgt vom Zusetzen einer Lösung von Verbindung 6 (0,020 g, 0,029 mmol) in DMF (0,50 ml), gefolgt vom Zusetzen einer Lösung von HATU (0,017 g, 0,044 mmol) in DMF (0,25 ml). Das Gemisch wurde 3 Tage bei Raumtemperatur geschüttelt. Zu der Umsetzung wurde PS-Trisamine-Harz (Argonaut Technologies, 0,025 g, 0,086 mmol) zugesetzt, anschließend wurde das Gemisch 18 h bei Raumtemperatur geschüttelt. Das Reaktionsgemisch wurde in vacuo konzentriert und in einem 10:1-Gemisch von 1,2-Dichlorethan und Methanol (1 ml) gelöst. MP-Carbonate-Harz (Argonaut Technologies, 0,056 g, 0,175 mmol) wurde zugesetzt und das Gemisch 5 Tage bei Raumtemperatur geschüttelt. Das Reaktionsgemisch wurde filtriert, durch 0,25 g Silicagel passiert und mit 1,5 ml 10:1 1,2-Dichlorethan/Methanol eluiert. Das Lösungsmittel wurde in vacuo entfernt, um ein Rohprodukt zu ergeben, das durch präparative HPLC (präparatives HPLC-Verfahren „A") gereinigt und als das Bistrifluoressigsäuresalz isoliert wurde. LC-MS (HPLC-Bedingungen „G", Retentionszeit: 1,16), MS m/z 722 (M⁺ + 1).
Beispiel 28
Die Verbindung 96, 1-(2-Acetylaminopent-4-inoyl)-4(R)-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2(S)-carbonsäure-(1(R)-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2(S)-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Diese Verbindung wurde gemäß dem Verfahren von Beispiel 27 hergestellt und anschließend durch präparative HPLC (präparatives HPLC-Verfahren „A") gereinigt und als das Monotrifluoressigsäuresalz isoliert. LC-MS (HPLC-Bedingungen „G", Retentionszeit: 1,28), MS m/z 714 (M⁺ + 1).
Beispiel 29
Verbindung 97, {1S-[2S-(1R-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2-vinylcyclopropyl}carbaminsäure-tert-butylester, die nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 29a–b beschrieben hergestellt.
Schritt 29a: Herstellung von 4R-(7-Methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, das nachstehend gezeigt ist.
Das Produkt von Schritt 27c (505,0 mg, 0,746 mmol) wurde mit 50% TFA (10 ml) langsam, um ein starkes Sprudeln von CO₂-Gas zu verhindern, behandelt. Nach 0,5 h Rühren bei RT wurde das Lösungsmittel konzentriert, anschließend wurde das so erhaltene viskose, braune Öl über Nacht in vacuo getrocknet, um einen braunen Feststoff in quantitativer Ausbeute zu ergeben. Das Produkt wurde ohne weitere Reinigung verwendet. ¹H-NMR (Methanol-d₄) δ 1,03–1,06 (m, 1H), 1,07–1,13 (m, 1H), 1,14–1,19 (m, 1H), 1,25–1,30 (m, 1H), 1,37 (dd, J = 9,6, 5,6 Hz, 1H), 1,96 (dd, J = 7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,31 (q, J = 8,5 Hz, 1H), 2,52–2,58 (m, 1H), 2,93–3,01 (m, 2H), 3,94 (dd, J = 13,3, 4,0 Hz, 1H), 4,02 (dd, J = 13,3, 1,4 Hz, 1H), 4,07 (s, 3H), 4,76 (dd, J = 10,4, 7,6 Hz, 1H), 5,15 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 17,3, 1,4 Hz, 1H), 5,61–5,69 (m, 1H), 5,96–5,98 (m, 1H), 7,46 (dd, J = 9,2, 1,4 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,71–7,79 (m, 3H), 8,05–8,07 (dd, J = 8,5, 1,5 Hz, 2H), 8,40 (d, J = 9,4 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,10), MS m/z 577 (M⁺ + 1).
Schritt 29b: Herstellung von Verbindung 97.
Zu einer Lösung des Produkts von Schritt 29a (70,0 mg, 0,087 mmol) in DCM (3 ml) wurden DIEA (76 μl, 0,43 mmol), HBTU (40 mg, 0,104 mmol), HOBt (16 mg, 0,104 mmol) und Amino-2-vinylcyclopropancarbonsäure (0,104 mmol) zugesetzt. Nach 14 h Rühren bei RT wurde das Lösungsmittel konzentriert und das so erhaltene Material abgetrennt und durch Flash-Säulenchromatographie (SiO₂, Elution mit 5% MeOH in DCM) gereinigt, um 41% eines Isomers mit höherem Rf-Wert (IC₅₀ = 250 nM, die NMR-Analyse war verschmutzt und ist daher hier nicht aufgenommen) und 50% eines Isomers mit niedrigerem Rf-Wert (IC₅₀ = 24 nM) zu ergeben. ¹H-NMR (Isomer mit niedrigerem Rf-Wert) (MeOH) δ 0,85–0,92 (m, 1H), 0,97–1,03 (m, 3H), 1,06–1,10 (m, 1H), 1,15–1,21 (m, 2H), 1,26–1,33 (m, 2H), 1,38 (dd, J = 9,2, 4,6 Hz, 1H), 1,46 (s, 9H), 1,58–1,66 (m, 1H), 1,80 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 1,86 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 2,01 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 2,40 (q, J = 7,9 Hz, 1H), 2,46–2,49 (m, 1H), 2,72 (dd, J = 13,7, 7,0 Hz, 1H), 2,84–2,94 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,10 (s, 2H), 4,63–4,70 (m, 2H), 4,94–4,99 (m, 1H), 5,07 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 5,54 (bs, 1H), 5,82–5,87 (m, 1H), 7,14 (dd, J = 9,2, 2,1 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,50–7,56 (m, 3H), 7,98 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 8,06 (d, J = 6,7 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,51), MS m/z 786 (M⁺ + 1).
Beispiel 30
Verbindung 98, 1-(2S-Acetylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den folgenden Schritten 30a–c beschrieben hergestellt.
Schritt 30a: Herstellung von {1S-[2S-(1R-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, der nachstehend gezeigt ist.
Zu einer Lösung des Produkts von Schritt 29a (0,671 mmol) in DCM (10 ml) wurden DIEA (542 μl, 3,36 mmol), HATU (354 mg, 1,01 mmol), HOAt (127 mg, 1,01 mmol) und Boc-Tle-OH (173 mg, 0,805 mmol) zugesetzt. Nach 16 h Rühren bei RT wurde das Lösungsmittel konzentriert und das so erhaltene viskose Öl durch Flash-Säulenchromatographie (SiO₂, Elution mit 95% MeOH in DCM) gereinigt, um einen leicht gelblichen, schaumigen Feststoff (527 mg, 99% Ausbeute) zu ergeben. LC-MS (Retentionszeit: 1,57), MS m/z 790 (M⁺ + 1).
Schritt 30b: Herstellung von 1S-(2-Amino-3,3-dimethylbutyryl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, das nachstehend gezeigt ist.
Das Produkt von Schritt 30a (950 mg, 1,20 mmol) wurde mit 25%-igem TFA (25 ml) langsam, um ein starkes Sprudeln von CO₂-Gas zu verhindern, behandelt. Nach 1,5 h Rühren bei RT wurde das Lösungsmittel konzentriert, um eine Aufschlämmung einer hellbraunen Lösung zu ergeben, anschließend wurde Et₂O zugesetzt, um eine Präzipitation zu bewirken. Das durch Vakuumfiltration gewonnene hellbraune Produkt (1,10 g, 99%) wurde ohne weitere Reinigung verwendet. LC-MS (Retentionszeit: 1,13), MS m/z 690 (M⁺ + 1).
Schritt 30c: Herstellung von Verbindung 98. Zu einer Lösung des Produkts von Schritt 30b (11,1 mg, 0,0121 mmol) in DCM (1 ml) wurden Polyvinylpyridin (6,4 mg, 0,0605 mmol) und Essigsäureanhydrid (30 μl) zugesetzt. Das Reaktionsfläschchen wurde 14 h rotiert, anschließend wurde der Inhalt filtriert und mit DCM gewaschen. Das Lösungsmittel wurde konzentriert und der Rückstand durch präparative Umkehrphasen-HPLC gereinigt, um ein TFA-Salz als einen weißen, glasartigen Feststoff (4,0 mg, 45% Ausbeute) zu ergeben. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,06 (s, 9H), 1,08–1,10 (m, 2H), 1,23–1,26 (m, 2H), 1,45 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,81 (s, 3H), 1,90 (dd, J = 7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 2,24–2,46 (m, 1H), 2,75 (dd, J = 14,2, 6,9 Hz, 1H), 2,93–2,98 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,17 (dd, J = 12,4, 3,2 Hz, 1H), 4,50 (t, J = 4,3 Hz, 1H), 4,57–4,61 (m, 2H), 5,14 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 17,2, 1,4 Hz, 1H), 5,71–5,78 (m, 1H), 5,86 (d, J = 3,1, 1H), 4,45 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,71–7,79 (m, 3H), 8,08 (dd, J = 8,2, 1,5 Hz, 3H), 8,30 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,35), MS m/z 732 (M⁺ + 1).
Beispiel 32
Die folgenden Verbindungen wurden gemäß dem Verfahren von Beispiel 30 hergestellt.
Verbindung 99
Verbindung 99, 1-[3,3-Dimethyl-2S-(2,2,2-trifluoracetylamino)butyryl]-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 99 wurde unter Verwendung von Fluoressigsäureanhydrid hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 0,99–1,03 (m, 4H), 1,09 (s, 9H), 1,23–1,26 (m, 3H), 1,46 (dd, J = 9,5, 5,2 Hz, 1H), 1,91 (dd, J = 8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J = 9,0 Hz, 1H), 2,41–2,47 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,16 (dd, J = 12,5, 3,1 Hz, 1H), 4,59–4,63 (m, 3H), 5,14 (dd, J = 10,2, 1,7 Hz, 1H), 5,30 (dd, J = 17,3, 1,1 Hz, 1H), 5,72–5,79 (m, 1H), 5,87 (d, J = 4,0, 1H), 7,40 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,73–7,79 (m, 4H), 8,08 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 8,29 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,50), MS m/z 786 (M⁺ + 1).
Verbindung 100
Verbindung 100, N-{1S-[2S-(1R-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl)succinamidsäure, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 100 wurde unter Verwendung von Bernsteinsäureanhydrid hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,04–1,09 (m, 2H), 1,10 (s, 9H), 1,23–1,25 (m, 2H), 1,44 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,90 (dd, J = 8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,20–2,29 (m, 4H), 2,39–2,50 (m, 2H), 2,76 (d, J = 6,71 Hz, 1H), 2,93–2,98 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,12 (dd, J = 12,7, 3,2 Hz, 1H), 4,49 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,59 (dd, J = 10,2, 6,9 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 5,14 (dd, J = 10,6, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,71–5,78 (m, 1H), 5,85 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 7,47 (dd, J = 9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,71–7,79 (m, 3H), 8,08 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 8,31 (dd, J = 11,6, 2,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,31), MS m/z 790 (M⁺ + 1).
Verbindung 101
Verbindung 101, 1-[2S-(2,2-Dimethylpropionylamino)-3,3-dimethylbutyryl]-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 101 wurde unter Verwendung von Trimethylacetylchlorid hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,01 (bs, 9H), 1,02–1,04 (m, 4H), 1,05 (bs, 9H), 1,23–1,29 (m, 5H), 1,49 (dd, J = 9,6, 6,5 Hz, 1H), 1,90 (dd, J = 8,1, 5,7 Hz, 1H), 2,40–2,47 (m, 1H), 2,72–2,79 (m, 1H), 2,92–2,96 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,20 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,54–4,60 (m, 3H), 5,14 (dd, J = 10,5, 1,7 Hz, 1H), 5,32 (dd, J = 17,4, 1,0 Hz, 1H), 5,75–5,82 (m, 1H), 6,92 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,40–7,43 (m, 1H), 7,54 (t, J = 2,3 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 7,72–7,78 (m, 4H), 8,07–8,10 (m, 2H), 8,31 (dd, J = 9,2, 2,7 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,54), MS m/z 774 (M⁺ + 1).
Beispiel 33
Verbindung 102
Verbindung 102, 1-[2S-(2-Hydroxyacetylamino)-3,3-dimethylbutyryl]-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Zu einer Lösung des Produkts von Schritt 30b (11,1 mg, 0,0121 mmol) in DCM (1 ml) wurden DIEA (11 μl, 0,0605 mmol), HATU (6,9 mg, 0,0182 mmol), HOAt (2,5 mg, 0,01812 mmol) und Glycolsäure (1,4 mg, 0,0182 mmol) zugesetzt. Nach 16 h Rühren bei RT wurde das Lösungsmittel und überschüssiges DIEA konzentriert und der so erhaltene Rückstand durch präparative Umkehrphasen-HPLC gereinigt, um ein TFA-Salz als einen weißen Feststoff (3,5 mg, 39% Ausbeute) zu ergeben. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,06–1,07 (m, 2H), 1,07 (s, 9H), 1,22–1,25 (m, 2H), 1,45 (dd, J = 9,6, 5,3 Hz, 1H), 1,90 (dd, J = 8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 2,42–2,47 (m, 1H), 2,76 (dd, J = 7,3 Hz, 1H), 2,92–2,98 (m, 1H), 3,74 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 4,60 (s, 3H), 4,19 (dd, J = 12,5, 3,4 Hz, 1H), 4,56–4,61 (m, 3H), 5,14 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,72–5,79 (m, 1H), 5,86 (bs, 1H), 7,45 (dd, J = 9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,72–7,79 (m, 4H), 8,08 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 8,28 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,30), MS m/z 748 (M⁺ + 1).
Beispiel 34
Die folgenden Verbindungen wurden gemäß dem Verfahren von Beispiel 33 hergestellt.
Verbindung 103
Verbindung 103, 1-[2S-(3,3-Dimethylbutyrylamino)-3,3-dimethylbutyryl]-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 103 wurde unter Verwendung von tert-Butylessigsäure hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 0,78 (s, 9H), 0,90–0,98 (m, 2H), 1,04 (s, 9H), 1,23–1,29 (m, 5H), 1,45 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,86–1,91 (m, 2H), 1,97 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 2,24 (d, 8,9 Hz, 1H), 2,39–2,45 (m, 1H), 2,76 (dd, J = 13,6, 6,0 Hz, 1H), 2,93–2,97 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,16 (dd, J = 12,4, 2,9 Hz, 1H), 4,52 (t, J = 4,4 Hz, 1H), 4,60 (dd, J = 10,5, 6,9 Hz, 1H), 4,65 (dd, J = 13,3, 1,1 Hz, 1H), 5,14 (dd, J = 10,5, 1,4 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 17,2, 1,1 Hz, 1H), 5,72–5,79 (m, 1H), 5,85 (bs, 1H), 7,42 (dd, J = 9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,72–7,79 (m, 4H), 8,08 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 8,30 (d, J = 9,2 Hz, 2H). LC-MS (Retentionszeit: 1,58), MS m/z 788 (M⁺ + 1).
Verbindung 104
Verbindung 104, 1-[2S-(2-Cyclopropylacetylamino)-3,3-dimethylbutyryl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 104 wurde mit Cyclopropylessigsäure hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 0,07–0,10 (m, 2H), 0,39–0,34 (m, 2H), 0,77–0,82 (m, 1H), 1,00–1,07 (m, 4H), 1,08 (s, 9H), 1,21–1,26 (m, 3H), 1,46 (dd, J = 9,6, 5,3 Hz, 1H), 1,90 (dd, J = 8,2, 5,5 Hz, 1H), 1,96–2,02 (m, 2H), 2,25 (dd, J = 17,7, 8,6 Hz, 1H), 2,43–2,46 (m, 1H), 2,78 (dd, J = 13,9, 6,6 Hz, 1H), 2,92–2,98 (m, 1H), 4,07 (s, 3H), 4,19 (dd, J = 12,5, 3,4 Hz, 1H), 4,55 (s, 1H), 4,60 (dd, J = 10,7, 7,7 Hz, 2H), 5,15 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 17,2, 1,4 Hz, 1H), 5,72–5,87 (m, 1H), 5,87 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 7,42 (dd, J = 9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,72–7,79 (m, 4H), 8,09 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 8,30 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,49), MS m/z 772 (M⁺ + 1).
Verbindung 105
Verbindung 105, 1-{2S-[(Bicyclo[1.1.1]pentan-2-carbonyl)amino]-3,3-dimethylbutyryl}-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 105 wurde mit Bicyclo[1.1.1]pentan-2-carbonsäure hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,05 (s, 9H), 1,06–1,10 (m, 4H), 1,23–1,26 (m, 2H), 1,44–1,48 (m, 1H), 1,60–1,62 (m, 1H), 1,68 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 1,91 (dd, J = 7,7, 4,7 Hz, 1H), 2,01 (dd, J = 9,8, 3,1 Hz, 1H), 2,22–2,27 (m, 1H), 2,40–2,46 (m, 1H), 2,55–2,60 (m, 2H), 2,75–2,81 (m, 1H), 2,92–2,98 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,16 (dd, J = 12,7, 3,2 Hz, 1H), 4,57–4,64 (m, 3H), 5,15 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,32 (dd, J = 17,4, 1,5 Hz, 1H), 5,74–5,80 (m, 1H), 5,87 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,39–7,42 (m, 1H), 7,53 (t, J = 2,3 Hz, 1H), 7,72–7,78 (m, 4H), 8,06–8,10 (m, 2H), 8,30 (dd, J = 9,2, 3,8 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,52), MS m/z 784 (M⁺ + 1).
Beispiel 35
Verbindung 106
Verbindung 106, Essigsäure-{1S-[2S-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropylcarbamoyl}methylester, ist nachstehend gezeigt.
Zu einer Lösung des Produkts von Schritt 30b (35,0 mg, 0,0381 mmol) in DCM (2 ml) wurden DIEA (40 μl, 0,0191 mmol), HATU (29 mg, 0,0762 mmol) und Acetylessigsäure (6,7 mg, 0,0572 mmol) zugesetzt. Nach 16 h Rotieren bei RT wurde das Lösungsmittel konzentriert und der so erhaltene Rückstand durch eine Flashsäule (SiO₂, Elution mit 5% MeOH in DCM) gereinigt, um einen gelben Feststoff (30 mg, 99% Ausbeute) zu ergeben. ¹H-NMR (MeOH) δ 0,87–0,93 (m, 1H), 0,96–1,02 (m, 1H), 1,06 (s, 11H), 1,20–1,26 (m, 2H), 1,27–1,29 (M, 1H), 1,45 (dd, J = 9,5, 5,2 Hz, 1H), 1,87 (dd, J = 7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,08 (s, 3H), 2,22 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 2,33–2,36 (m, 1H), 2,66 (dd, J = 13,1, 6,9 Hz, 1H), 2,92–2,96 (m, 1H), 3,22 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 3,69–3,76 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 4,16 (dd, J = 12,1, 3,5 Hz, 1H), 4,40 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 4,48 (s, 2H), 4,52 (dd, J = 10,1, 6,7 Hz, 1H), 4,67 (s, 1H), 5,11 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,59 (bs, 1H), 5,73–5,80 (m, 1H), 7,17 (dd, J = 9,0, 2,3 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,40 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,49–7,56 (m, 3H), 8,04 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 8,06 (d, J = 6,7 Hz, 2H). LC-MS (Retentionszeit: 1,33), MS m/z 790 (M⁺ + 1).
Beispiel 36
Die folgenden Verbindungen wurden gemäß dem Verfahren von Beispiel 35 hergestellt.
Verbindung 107
Verbindung 107, 1-[2S-(2-Methoxyacetylamino)-3,3-dimethylbutyryl]-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 107 wurde mit Methoxyessigsäure hergestellt und durch präparative Umkehrphasen-HPLC gereinigt, um ein TFA-Salz als einen weißen Feststoff (18,8 mg, 56% Ausbeute) zu ergeben. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,04–1,12 (m, 2H), 1,06 (s, 9H), 1,24–1,26 (m, 2H), 1,37 (dd, J = 6,4, 4,0 Hz, 1H), 1,46 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,90 (dd, J = 8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 2,39–2,45 (m, 1H), 2,74 (dd, J = 13,3, 7,2 Hz, 1H), 2,93–2,96 (m, 1H), 3,34 (s, 3H), 3,73 (dd, J = 74,2, 15,2 Hz, 2H), 4,05 (s, 3H), 4,18 (dd, J = 12,5, 3,1 Hz, 1H), 4,56–4,60 (m, 3H), 5,14 (dd, J = 10,2, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 16,8, 1,2 Hz, 1H), 5,73–5,80 (m, 1H), 5,82 (bs, 1H), 7,39 (dd, J = 9,2, 2,1 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,61 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,69–7,72 (m, 3H), 8,08 (dd, J = 7,9, 1,5 Hz, 1H), 8,24 (dd, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,35), MS m/z 762 (M⁺ + 1).
Verbindung 108
Verbindung 108, 1-{2S-[2-(4-Methoxyphenoxy)acetylamino]-3,3-dimethylbutyryl}-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 108 wurde mit 4-Methoxyphenoxyessigsäure hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,04 (s, 9H), 1,08–1,10 (m, 2H), 1,23–1,27 (m, 2H), 1,47 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,91 (dd, J = 8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 2,41–2,47 (m, 1H), 2,76 (dd, J = 13,7, 7,0 Hz, 1H), 2,93–2,98 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 4,02 (s, 3H), 4,18 (dd, J = 12,4, 3,2 Hz, 1H), 4,23 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 4,37 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 4,58–4,62 (m, 3H), 5,14 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,31 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 5,73–5,81 (m, 1H), 5,86 (bs, 1H), 6,85 (d, J = 5,5 Hz, 4H), 7,33 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,71–7,78 (m, 3H), 7,82 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,25 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,54), MS m/z 854 (M⁺ + 1).
Verbindung 109
Verbindung 109, 1-{2S-[2-(4-Fluorphenoxy)acetylamino]-3,3-dimethylbutyryl}-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 109 wurde mit 4-Fluorphenoxyessigsäure hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,04 (s, 3,6H), 1,05 (s, 5,4H), 1,07–0,10 (m, 2H), 1,22–1,27 (m, 2H), 1,44–1,48 (m, 1H), 1,88–1,92 (m, 1H), 2,21–2,26 (m, 1H), 2,41–2,47 (m, 1H), 2,76 (dd, J = 13,4, 6,7 Hz, 1H), 2,93–2,97 (m, 1H), 4,01 (s, 1,2H), 4,02 (s, 1,8H), 4,16–4,20 (m, 1H), 4,28 (d, J = 5,2 Hz, 0,4H), 4,31 (d, J = 0,2 Hz, 1H), 4,40 (d, J = 5,2 Hz, 0,6H), 4,41 (d, J = 5,2 Hz, 0,4H), 4,58–4,62 (m, 3H), 5,12–5,15 (m, 1H), 5,30 (dd, J = 17,1, 0,91 Hz, 0,4H), 5,31 (dd, J = 17,1, 1,2 Hz, 0,6H), 5,73–5,81 (m, 1H), 5,86 (bs, 1H), 6,88–6,92 (m, 2H), 6,97–7,02 (m, 2H), 7,31–7,35 (m, 1H), 7,49 (d, J = 2,4 Hz, 0,4H), 7,50 (d, J = 2,4 Hz, 0,6H), 7,63 (s, 0,4H), 7,64 (s, 0,6H), 7,70–7,77 (m, 3H), 7,86–7,89 (m, 1H), 8,05–8,08 (m, 2H), 8,4 (d, J = 9,5 Hz, 0,4H), 8,5 (d, J = 9,2 Hz, 0,6H). LC-MS (Retentionszeit: 1,56), MS m/z 842 (M⁺ + 1).
Verbindung 110
Verbindung 110, 1-{2S-[(Furan-2-carbonyl)amino]-3,3-dimethylbutyryl}-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 110 wurde mit Furoesäure hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,09 (s, 3,6H), 1,10 (s, 5,4H), 1,11–1,15 (m, 2H), 1,25–1,28 (m, 2H), 1,47 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 1,91 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 2,42–2,47 (m, 1H), 2,79 (dd, J = 14,7, 7,5 Hz, 1H), 2,95–2,99 (m, 1H), 4,04 (s, 1,2H), 4,05 (s, 1,8H), 4,14–4,19 (m, 1H), 4,61–4,66 (m, 1H), 4,73 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,15 (dd, J = 10,1, 0,9 Hz, 1H), 5,32 (d, J = 17,4 Hz, 0,6H), 5,33 (d, J = 16,5 Hz, 0,4H), 5,74–5,81 (m, 1H), 5,87 (bs, 1H), 6,52–6,53 (m, 1H), 6,85 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 7,28 (dd, J = 9,2, 2,5 Hz, 1H), 7,48 (dd, J = 8,6, 2,4 Hz, 1H), 7,60–7,66 (m, 2H), 7,73–7,78 (m, 3H), 7,85 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,42), MS m/z 784 (M⁺ + 1).
Verbindung 111
Verbindung 111, 1-{2S-[(1-Hydroxycyclopropancarbonyl)amino]-3,3-dimethylbutyryl}-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 111 wurde mit 1-Hydroxy-1-cyclopropancarbonsäure hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 0,64–0,68 (m, 1H), 0,79–0,84 (m, 1H), 0,89–0,93 (m, 1H), 0,99–1,04 (m, 1H), 1,04–1,08 (m, 2H), 1,09 (s, 9H), 1,23–1,26 (m, 2H), 1,45 (dd, J = 9,5, 5,2 Hz, 1H), 1,91 (dd, J = 8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 2,41–2,47 (m, 1H), 2,76 (dd, J = 14,2, 6,9 Hz, 1H), 2,93–2,97 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,17 (dd, J = 12,4, 3,2 Hz, 1H), 4,52 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,59–4,62 (m, 2H), 5,14 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,72–5,79 (m, 1H), 5,85 (bs, 1H), 7,41 (dd, J = 9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,71–7,78 (m, 4H), 8,07 (dd, J = 6,7, 1,5 Hz, 1H), 8,27 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,33), MS m/z 774 (M⁺ + 1).
Verbindung 112
Verbindung 112, 1-[2S-(2-Fluoracetylamino)-3,3-dimethylbutyryl]-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 112 wurde dem Natriumsalz von Fluoressigsäure hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,08 (s, 9H), 1,03–1,12 (m, 3H), 1,22–1,26 (m, 2H), 1,45 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 1,90 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 2,41–2,27 (m, 1H), 2,27 (dd, J = 14,0, 6,7 Hz, 1H), 2,92–2,97 (m, 1H), 3,97 (s, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,19 (dd, J = 12,5, 3,1 Hz, 1H), 4,58–4,62 (m, 3H), 4,64 (q, J = 14,0 Hz, 1H), 4,73 (q, J = 14,0 Hz, 1H), 5,14 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,71–5,77 (m, 1H), 5,87 (bs, 1H), 7,44, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,71–7,79 (m, 3H), 8,08 (dd, J = 8,5, 1,5 Hz, 2H), 8,31 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,42), MS m/z 750 (M⁺ + 1).
Beispiel 37
Verbindung 113
Verbindung 113, {1S-[2S-(1R-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäuremethylester, ist nachstehend gezeigt.
Zu einer Lösung des Produkts von Schritt 30b (35 mg, 0,0381 mmol) in DCM (2 ml) wurden 1,3-Dimethylperhydro-1,2,3-diazaphosphin auf Polystyrol (100 mg, 2,3 mmol/g, 0,229 mmol) und Methylchlorformiat (9 μl, 0,114 mmol) zugesetzt. Das Reaktionsfläschchen wurde 16 h rotiert, filtriert und mit DCM gewaschen. Das Lösungsmittel wurde konzentriert und der Rückstand mit präparativer Umkehrphasen-HPLC gereinigt, um ein TFA-Salz als ein weißes, festes Produkt (14,7 mg, 35% Ausbeute) zu ergeben. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,05 (s, 9H), 1,07–1,11 (m, 2H), 1,22–1,26 (m, 2H), 1,44 (q, J = 5,2 Hz, 1H), 1,90 (q, J = 5,7 Hz, 1H), 2,24 (q, J = 8,7 Hz, 1H), 2,40–2,46 (m, 1H), 2,77 (dd, J = 13,9, 6,9 Hz, 1H), 2,92–2,97 (m, 1H), 3,38 (s, 3H), 4,06 (s, 3H), 4,14 (dd, J = 12,2, 3,1 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,58–4,64 (m, 2H), 5,13 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,30 (dd, J = 17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,70–5,77 (m, 1H), 5,86 (bs, 1H), 7,43 (dd, J = 9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,72–7,79 (m, 3H), 8,09 (dd, J = 6,9, 1,7 Hz, 1H), 8,36 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,47), MS m/z 748 (M⁺ + 1).
Beispiel 38
Die folgenden Verbindungen wurden gemäß dem Verfahren von Beispiel 37 hergestellt.
Verbindung 114
Verbindung 114, {1S-[2S-(1R-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäurebenzylester, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 114 wurde mit Benzylchlorformiat hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,05 (s, 9H), 1,06–1,09 (m, 2H), 1,23–1,24 (m, 2H), 1,45 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 1,90 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J = 8,7 Hz, 1H), 2,40–2,46 (m, 1H), 2,77 (dd, J = 13,4, 7,0 Hz, 1H), 2,92–2,97 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 4,12 (dd, J = 12,2, 2,4 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,59–4,73 (m, 4H), 5,14 (dd, J = 10,2, 1,4 Hz, 1H), 5,31 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,71–5,67 (m, 1H), 5,86 (bs, 1H), 7,15 (dd, J = 7,3, 1,8 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 9,3, 2,0 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,72–7,79 (m, 3H), 8,07 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 8,31 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,67), MS m/z 824 (M⁺ + 1).
Verbindung 115
Verbindung 115, {1S-[2S-(1R-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäureethylester, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 115 wurde mit Ethylchlorformiat hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,04 (s, 9H), 1,06–1,11 (m, 4H), 1,23–1,28 (m, 2H), 1,44 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 1,90 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J = 8,7 Hz, 1H), 2,39–2,45 (m, 1H), 2,76 (dd, J = 14,5, 6,9 Hz, 1H), 2,92–2,97 (m, 1H), 4,05 (s, 3H), 4,13 (dd, J = 12,2, 2,8 Hz, 1H), 4,58–4,63 (m, 2H), 5,14 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,71–5,78 (m, 1H), 5,84 (bs, 1H), 7,39 (dd, J = 9,3, 2,0 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,70–7,75 (m, 3H), 8,08 (dd, J = 7,9, 1,5 Hz, 1H), 8,32 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,53), MS m/z 762 (M⁺ + 1).
Verbindung 116
Verbindung 116, {1S-[2S-(1R-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäurephenylester, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 116 wurde mit Phenylchlorformiat hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,01–1,10 (m, 5H), 1,13 (s, 7H), 1,23–1,26 (m, 2H), 1,42–1,47 (m, 1H), 1,90 (dd, J = 7,8, 6,0 Hz, 1H), 2,25 (q, J = 8,7 Hz, 1H), 2,39–2,45 (m, 1H), 2,76 (dd, J = 13,9, 6,9 Hz, 1H), 2,93–2,97 (m, 1H), 4,03 (s, 2H), 4,06 (s, 1H), 4,11 (dd, J = 12,4, 2,9 Hz, 0,7H), 4,16 (dd, J = 12,7, 2,9 Hz, 0,3H), 4,62 (q, J = 7,8 Hz, 1H), 4,69 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 5,14 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,31 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,69–5,77 (m, 1H), 5,81 (bs, 0,7H), 5,87 (bs, 0,3H), 6,92 (d, J = 7,93 Hz, 1H), 7,04 (dd, J = 9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,21 (t, J = 7,3 Hz, 0,70H), 7,30 (t, J = 7,8 Hz, 1,4H), 7,41 (d, J = 2,4 Hz, 0,7H), 7,55 (d, J = 2,1 Hz, 0,3H), 7,57 (s, 0,7H), 7,65 (s, 0,3H), 7,69–7,77 (m, 3H), 8,01 (d, J = 7,3 Hz, 1,4H), 8,08 (d, J = 7,0 Hz, 0,6H), 8,28 (t, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,62), MS m/z 810 (M⁺ + 1).
Verbindung 117
Verbindung 117, 1-(2S-Methansulfonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 117 wurde mit Methansulfonylchlorid hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,09–1,12 (m, 2H), 1,08 (s, 9H), 1,23–1,26 (m, 2H), 1,45 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,90 (dd, J = 7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,23 (q, J = 8,7 Hz, 1H), 2,40–2,47 (m, 1H), 2,74 (s, 3H), 2,78 (dd, J = 14,0, 7,0 Hz, 1H), 2,93–2,96 (m, 1H), 4,01 (s, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,10 (dd, J = 12,5, 3,1 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 14,4 Hz, 1H), 4,61 (dd, J = 10,4, 6,7 Hz, 1H), 5,15 (dd, J = 10,5, 1,4 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 17,0, 1,2 Hz, 1H), 5,71–5,78 (m, 1H), 7,45 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,71–7,79 (m, 3H), 8,06 (dd, J = 6,9, 1,7 Hz, 1H), 8,37 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,38), MS m/z 768 (M⁺ + 1).
Verbindung 118
Verbindung 118, 1-(2S-Cyclopropansulfonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 118 wurde mit Cyclopropansulfonylchlorid hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 0,73–0,78 (m, 2H), 0,83–0,91 (m, 2H), 1,06–1,10 (m, 2H), 1,08 (s, 9H), 1,22–1,26 (m, 2H), 1,45 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,90 (dd, J = 7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 2,32–2,36 (m, 1H), 2,41–2,47 (m, 1H), 2,79 (dd, J = 13,9, 6,7 Hz, 1H), 2,92–2,96 (m, 1H), 3,95 (s, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,13 (dd, J = 12,4, 2,9 Hz, 1H), 4,52 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,61 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 5,14 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 17,2, 1,4 Hz, 1H), 5,71–5,76 (m, 1H), 5,81 (bs, 1H), 7,43 (dd, J = 9,5, 2,5 Hz, 1H), 7,54 (dd, J = 2,4 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,71–7,79 (m, 3H), 8,07 (dd, J = 7,0, 1,5 Hz, 1H), 8,36 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,44), MS m/z 794 (M⁺ + 1).
Verbindung 119
Verbindung 119, 1-[2S-(4-Fluorbenzolsulfonylamino)-3,3-dimethylbutyryl]-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 119 wurde mit 4-Fluorbenzolsulfonylchlorid hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 0,93 (s, 3,6H), 1,01 (s, 2H), 1,08 (s, 5,4H), 1,22–1,26 (m, 2H), 1,41–1,47 (m, 1H), 1,85–1,91 (m, 1H), 2,22–2,27 (m, 1H), 2,40–2,46 (m, 1H), 2,75 (dd, J = 14,0, 7,3 Hz, 0,4H), 2,79 (dd, J = 14,7, 7,6 Hz, 0,6H), 2,91 (m, 1H), 4,0 (s, 1H), 4,05 (s, 3H), 4,15 (t, J = 3,5 Hz, 0,4H), 4,17 (t, J = 3,7 Hz, 0,6H), 4,44 (d, J = 12,5 Hz, 10,4H), 4,47–4,51 (m, 1H), 4,58 (d, J = 12,5 Hz, 0,6H), 4,60–4,64 (m, 1H), 5,13 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (d, J = 17,1, 12,1 Hz, 1H), 5,68–5,78 (m, 1H), 5,83 (bs, 0,6H), 5,87 (bs, 0,4H), 7,07–7,12 (m, 1H), 7,40 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 0,4H), 7,44 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 0,6H), 7,55 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,71–7,81 (m, 4H), 7,93 (d, J = 8,5 Hz, 0,6H), 8,07–8,11 (m, 2H), 8,18 (d, J = 9,2 Hz, 0,4H), 8,28 (d, J = 9,5 Hz, 0,6H), 8,41 (d, J = 9,5 Hz, 0,4H). LC-MS (Retentionszeit: 1,35), MS m/z 732 (M⁺ + 1).
Verbindung 120
Verbindung 120, 1-[2S-(2-Chloracetylamino)-3,3-dimethylbutyryl]-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 120 wurde mit Chloressigsäureanhydrid hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,04–1,11 (m, 3H), 1,08 (s, 9H), 1,22–1,25 (m, 2H), 1,44 (q, J = 5,2 Hz, 1H), 1,90 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J = 8,8 Hz, 1H), 2,40–2,46 (m, 1H), 2,77 (dd, J = 14,2, 6,6 Hz, 1H), 2,92–2,97 (m, 1H), 3,91 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 3,99 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,16 (dd, J = 12,4, 3,2 Hz, 1H), 4,52 (t, J = 4,3 Hz, 1H), 4,59 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,64 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 5,13 (dd, J = 10,2, 1,7 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 17,1, 1,5 Hz, 1H), 5,70–5,78 (m, 1H), 5,86 (bs, 1H), 7,43 (dd, J = 9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,71–7,79 (m, 3H), 8,08 (dd, J = 8,2, 1,5 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,47), MS m/z 767 (M⁺ + 1).
Verbindung 121
Verbindung 121, N-{1S-[2S-(1R-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}oxalamidsäuremethylester, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 121 wurde mit Methyloxalylchlorid hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,02–1,12 (m, 3H), 1,07 (s, 9H), 1,23–1,26 (m, 2H), 1,45 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 1,90 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 2,25 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 2,41–2,47 (m, 1H), 2,77 (dd, J = 13,9, 6,6 Hz, 1H), 2,92–2,97 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 4,07 (s, 3H), 4,16 (dd, J = 12,7, 2,9 Hz, 1H), 4,57–4,62 (m, 2H), 5,14 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,72–5,77 (m, 1H), 5,86 (bs, 1H), 7,41 (dd, J = 9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,64 (s, H), 7,71–7,79 (m, 3H), 8,08 (dd, J = 8,2, 1,5 Hz, 1H), 8,27 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,43), MS m/z 776 (M⁺ + 1).
Verbindung 122
Verbindung 122, {1S-[2S-(1R-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-2-fluorethylester, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 122 wurde mit 2-Fluorethylchlorformiat hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,01–1,09 (m, 3H), 1,05 (s, 9H), 1,23–1,25 (m, 2H), 1,44 (q, J = 5,3 Hz, 1H), 1,89 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 2,40–2,46 (m, 1H), 2,77 (dd, J = 13,9, 6,9 Hz, 1H), 2,92–2,97 (m, 1H), 3,92 (dd, J = 5,7, 2,9 Hz, 0,5H), 3,95 (dd, J = 5,5, 2,8 Hz, 0,5H), 3,97 (dd, J = 5,5, 2,8 Hz, 0,5H), 4,01 (dd, J = 5,0, 2,6 Hz, 0,5H), 4,05 (s, 3H), 4,14 (dd, J = 12,2, 2,8 Hz, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,36–4,38 (m, 1H), 4,45–4,48 (m, 1H), 4,59–4,64 (m, 2H), 5,14 (dd, J = 10,4, 1,2 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,70–5,77 (m, 1H), 5,86 (bs, 1H), 7,42 (dd, J = 9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,71–7,78 (m, 3H), 8,09 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 8,33 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,46), MS m/z 780 (M⁺ + 1).
Verbindung 123
Verbindung 123, {1S-[2S-(1R-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäurevinylester, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 123 wurde mit Vinylchlorformiat hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,05 (m, 9H), 1,01–1,13 (m, 3H), 1,24 (d, J = 2,4 Hz, 2H), 1,29 (bs, 1H), 1,44 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,90 (dd, J = 8,1, 5,7 Hz, 1H), 2,24 (q, J = 8,6 Hz, 1H), 2,40–2,45 (m, 1H), 2,78 (dd, J = 13,6, 7,2 Hz, 1H), 2,92–2,97 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,11 (dd, J = 12,2, 2,8 Hz, 1H), 4,24 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 4,32 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 4,60–4,66 (m, 3H), 5,14 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 5,31 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,70–5,77 (m, 1H), 5,86 (bs, 1H), 6,68 (dd, J = 14,2, 6,3 Hz, 1H), 7,40 (dd, J = 9,5, 2,1 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,72–7,79 (m, 3H), 8,08 (d, J = 7,02 Hz, 1H), 8,30 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,56), MS m/z 760 (M⁺ + 1).
Verbindung 124
Verbindung 124, {1S-[2S-(1R-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäureprop-2-inylester, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 124 wurde mit Propargylchlorformiat hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,01–1,09 (m, 3H), 1,05 (s, 9H), 1,21–1,26 (m, 2H), 1,44 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,90 (dd, J = 7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 2,40–2,46 (m, 1H), 2,77 (dd, J = 14,2, 6,9 Hz, 1H), 2,83 (t, J = 2,1 Hz, 1H), 2,93–2,97 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,12 (dd, J = 12,2, 2,9 Hz, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,33 (d, J = 2,4 Hz, 2H), 4,59–4,66 (m, 2H), 5,14 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 17,4 Hz, 1H), 5,70–5,77 (m, 1H), 5,86 (bs, 1H), 7,46 (dd, J = 9,2, 2,1 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,71–7,79 (m, 3H), 8,08 (dd, J = 7,0, 1,5 Hz, 2H), 8,37 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,49), MS m/z 772 (M⁺ + 1).
Verbindung 125
Verbindung 125, {1S-[2S-(1R-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-2,2-dimethylpropylester, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 125 wurde mit Neopentylchlorformiat hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 0,81 (s, 9H), 1,04 (s, 9H), 1,06–1,12 (m, 3H), 1,23–1,25 (m, 2H), 1,29 (s, 1H), 1,45 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,91 (dd, J = 8,1, 5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J = 8,8, 1H), 2,40–2,46 (m, 1H), 2,77 (dd, J = 14,4, 7,5 Hz, 1H), 2,93–2,98 (m, 1H), 3,17 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,41 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,05 (s, 3H), 4,11 (dd, J = 12,4, 2,3 Hz, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,61–4,66 (m, 2H), 5,14 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 17,2, 1,1 Hz, 1H), 5,71–5,79 (m, 1H), 5,85 (bs, 1H), 7,40 (dd, J = 9,3, 2,0 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 2,1, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,71–7,79 (m, 3H), 8,08 (dd, J = 8,2, 1,5 Hz, 2H), 8,32 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,74), MS m/z 804 (M⁺ + 1).
Verbindung 126
Verbindung 126, {1S-[2S-(1R-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäureallylester, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 126 wurde mit Allylchlorformiat hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,05 (s, 9H), 1,06–1,09 (m, 4H), 1,22–1,25 (m, 2H), 1,44 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 1,90 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J = 8,9 Hz, 1H), 2,40–2,46 (m, 1H), 2,78 (q, J = 14,0, 7 Hz, 1H), 2,92–2,97 (m, 1H), 4,05 (s, 3H), 4,10–4,15 (m, 1H), 4,21 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,60–4,66 (m, 2H), 5,08 (dd, J = 10,5, 1,1 Hz, 1H), 5,14 (dd, J = 10,4, 1,2 Hz, 1H), 5,17 (dd, J = 17,1, 1,5 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 17,1, 1,2 Hz, 1H), 7,42 (dd, J = 9,5, 2,1 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,71–7,79 (m, 3H), 8,08 (dd, J = 6,9, 1,7 Hz, 2H), 8,33 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,56), MS m/z 774 (M⁺ + 1).
Verbindung 127
Verbindung 127, {1S-[2S-(1R-Cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropylcarbamoyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäurebutylester, ist nachstehend gezeigt.
Verbindung 127 wurde mit n-Butylchlorformiat hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 0,87 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 1,04 (s, 9H), 1,07–1,11 (m, 2H), 1,23–1,31 (m, 4H), 1,40–1,46 (m, 3H), 1,90 (q, J = 5,5 Hz, 1H), 2,25 (q, J = 8,7 Hz, 1H), 2,40–2,46 (m, 1H), 2,77 (dd, J = 14,2, 6,9 Hz, 1H), 2,92–2,97 (m, 1H), 3,55–3,60 (m, 1H), 3,71–3,76 (m, 1H), 3,97 (s, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,13 (dd, J = 12,2, 2,4 Hz, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,60–4,66 (m, 2H), 5,13 (dd, J = 10,4, 2 Hz, 1H), 5,31 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,70–5,78 (m, 1H), 5,86 (bs, 1H), 7,41 (dd, J = 9,3, 2,0 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,72–7,79 (m, 3H), 8,07 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,68), MS m/z 790 (M⁺ + 1).
Beispiel 39
Verbindung 128
Verbindung 128, 1-[3,3-Dimethyl-2S-(2-nitrophenylamino)butyryl]-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, die nachstehend gezeigt ist, wurde durch das Verfahren der folgenden Schritte 39a–b hergestellt.
Schritt 39a: Herstellung von 3,3-Dimethyl-2S-(2-nitrophenylamino)buttersäure, die nachstehend gezeigt ist.
Zu einer Aufschlämmung von L-tert-Leucin (1,0 g, 7,7 mmol) in EtOH (absolut, 25 ml) in einem mittleren Druckkolben wurden 1-Fluor-2-nitrobenzol (812 μl, 7,7 mmol) und K₂CO₃ (2,3 g, 15,4 mmol) zugesetzt. Nach 2 h Wärmen bei 105°C wurde das so erhaltene rote Reaktionsgemisch filtriert, um überschüssiges K₂CO₃ zu entfernen, und mit DCM gewaschen. Das Lösungsmittel wurde konzentriert und die rote Paste erneut in DCM gelöst und mit 1 N HCl neutralisiert. Die wässrige Schicht wurde mit DCM extrahiert. Die kombinierte DCM-Schicht wurde über MgSO₄ getrocknet und konzentriert. Der rote Feststoff wurde in MeOH erneut gelöst und zu einem Schlamm konzentriert, anschließend wurde Et₂O zugesetzt, um die Präzipitation zu bewirken. Das rote Produkt wurde durch Vakuumfiltration erhalten (1,6 g, 82% Ausbeute). ¹H-NMR (MeOH) δ 1,09 (s, 1H), 1,14 (s, 9H), 3,80 (s, 3H), 6,60 (ddd, J = 8,6, 7,0, 1,2 Hz, 1H), 6,97 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,41 (ddd, J = 8,9, 7,0, 1,8 Hz, 1H), 8,11 (dd, J = 8,6, 1,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,60), MS m/z 253 (M⁺ + 1).
Schritt 39b: Herstellung von Verbindung 128. Zu einer Lösung des Produkts von Schritt 27d (48,4 mg, 0,0745 mmol) in DMF (2 ml) wurden DIEA (65 μl, 0,372 mmol), HATU (57 mg, 0,149 mmol) und das Produkt von Schritt 39a (38,0 mg, 0,149 mmol) zugesetzt. Nach 16 h Rühren bei RT wurde das Lösungsmittel konzentriert und der Rückstand durch präparative Umkehrphasen-HPLC gereinigt, um ein TFA-Salz als orangefarbenen Feststoff (22,1 mg, 32% Ausbeute) zu ergeben. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,07–1,10 (m, 2H), 1,13 (s, 9H), 1,21–1,30 (m, 2H), 1,42 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,91 (dd, J = 8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,24 (q, J = 8,7 Hz, 1H), 2,40–2,46 (m, 1H), 2,75 (dd, J = 13,9, 7,2 Hz, 1H), 2,94–2,99 (m, 1H), 4,08 (s, 3H), 4,12 (dd, J = 12,5, 2,4 Hz, 1H), 4,48 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,67 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,14 (dd, J = 10,7, 1,5 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,68 (m, 1H), 5,89 (br s, 1H), 6,49 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,91 (dd, J = 7,0, 1,5 Hz, 1H), 7,28 (dd, J = 9,3, 2,3 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,73–7,79 (m, 3H), 7,96 (t, J = 9,5 Hz, 2H), 8,08 (d, J = 8,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,67), MS m/z 811 (M⁺ + 1).
Beispiel 40
Verbindung 129
Verbindung 129, 1-[3,3-Dimethyl-2S-(3-nitropyridin-4-ylamino)butyryl]-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, die nachstehend gezeigt ist, wurde gemäß dem Verfahren der folgenden Schritte 40a–b hergestellt.
Schritt 40a: Herstellung des Kaliumsalzes von 3,3-Dimethyl-2S-(3-nitropyridin-4-ylamino)buttersäure, das nachstehend gezeigt ist.
Zu einer Aufschlämmung von L-tert-Leucin (3,0 g, 21,93 mmol) in EtOH (absolut, 75 ml) in einem mittleren Druckkolben wurden 4-Methoxy-3-nitropyridin (3,38 g, 21,93 mmol) und K₂CO₃ (6,7 g, 48,25 mmol) zugesetzt. Nach 14 h Erwärmen bei 105°C wurde das so erhaltene gelbe Reaktionsgemisch filtriert, um überschüssiges K₂CO₃ zu entfernen, und mit DCM gewaschen. Das Lösungsmittel wurde konzentriert und die so erhaltene gelbe Paste mit MeOH behandelt, anschließend wurde weiteres K₂CO₃ durch Filtration entfernt. Das Produkt wurde in heißem MeOH gelöst und zu einer Aufschlämmung konzentriert, anschließend wurde Et₂O zugesetzt, um die Präzipitation eines gelbgrünen Feststoffs (4,95 g, 77% Ausbeute) zu bewirken. ¹H-NMR MeOH) δ 0,97 (s, 1H), 1,13 (s, 9H), 3,88 (s, 1H), 6,92 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 9,07 (s, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 0,81), MS m/z 254 (M⁺ + 1).
Schritt 40a: Herstellung von Verbindung 129. Verbindung 129 wurde gemäß dem Verfahren von Schritt 39b hergestellt. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,07–1,11 (m, 2H), 1,16 (s, 9H), 1,21–1,31 (m, 2H), 1,46 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,91 (dd, J = 8,1, 5,6 Hz, 1H), 2,27 (q, J = 8,7 Hz, 1H), 2,45–2,50 (m, 1H), 2,79 (dd, J = 14,4, 7,0 Hz, 1H), 2,94–2,99 (m, 1H), 4,04 (s, 3H), 4,25 (dd, J = 12,7, 3,2 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,71 (dd, J = 10,4, 7,3 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 5,14 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,31 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,71–5,78 (m, 1H), 5,95 (bs, 1H), 7,31 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 9,5, 2,1 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,71–7,79 (m, 3H), 7,99 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 9,22 (s, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,36), MS m/z 812 (M⁺ + 1).
Beispiel 41
Verbindungen 130 und 131
Die Verbindungen 130 und 131, nämlich die P3-Isomere von 1-{3,3-Dimethyl-2S-[methyl-(2-nitrobenzolsulfonyl)amino]butyryl}-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopopyl)amid, wurden wie in den folgenden Schritten 41a–d beschrieben hergestellt.
Schritt 41a: Herstellung von 3,3-Dimethyl-2S-(2-nitrobenzolsulfonylamino)buttersäuremethylester, der nachstehend gezeigt ist.
Zu einer Lösung von L-(+)-Methyl-tert-leucinathydrochlorid (2,5 g, 13,8 mmol) in DCM (50 ml) wurden DIEA (7,2 ml, 41,4 mmol) und 2-Nitrobenzolsulfonylchlorid (3,5 g, 15,2 mmol) zugesetzt. Nach 24 h Rühren bei RT wurde da Reaktionsgemisch mit 1 N HCl (20 ml) gewaschen und mit DCM (25 ml) extrahiert. Die kombinierte DCM-Schicht wurde mit H₂O (10 ml) gewaschen und mit 1 N NaOH neutralisiert. Anschließend wurde sie über MgSO₄ getrocknet und zu einem Schlamm konzentriert, dann wurde Et₂O zugesetzt, um die Präzipitation eines gelben, festen Produkts (3,05 g, 67% Ausbeute) zu bewirken. ¹H-NMR (MeOH) δ 0,98 (s, 9H), 3,38 (s, 3H), 3,79 (s, 1H), 7,77–7,83 (m, 2H), 7,84–7,86 (m, 1H), 8,04–8,05 (m, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,39), MS m/z 353 (M⁺ + 1 + Na).
Schritt 41b: Herstellung von 3,3-Dimethyl-2S-[methyl-(2-nitrobenzolsulfonyl)amino]buttersäuremethylester.
Zu einer Lösung von 3,3-Dimethyl-2S-[(2-nitrobenzolsulfonyl)amino]buttersäuremethylester (505 mg, 1,53 mmol) in DMF (10 ml) wurde K₂CO₃ (423 mg, 3,06 mmol) zugesetzt. Nach 20 min Rühren bei RT wurde Iodmethan (476 μl, 7,65 mmol) tropfenweise zugesetzt, wobei das Rühren bei RT fortgesetzt wurde. Nach 2 h wurde das überschüssige K₂CO₃ durch Vakuumfiltration entfernt und mit MeOH gewaschen. Das Lösungsmittel wurde konzentriert und die so erhaltene Paste erneut in DCM (30 ml) gelöst und mit H₂O (3 ml) gewaschen. Die wässrige Schicht wurde mit 2 × 25 ml DCM extrahiert. Das kombinierte DCM wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und konzentriert, um einen gelben Feststoff (484 mg, 92% Ausbeute) zu ergeben. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,11 (s, 9H), 3,10 (s, 3H), 3,49 (s, 3H), 4,44 (s, 1H), 7,73 (dd, J = 7,6, 1,8 Hz, 1H), 7,77–7,83 (m, 2H), 8,02 (dd, J = 7,3, 1,8 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,49), MS m/z 345 (M⁺ + 1).
Schritt 41c: Herstellung von 3,3-Dimethyl-2S-[methyl-(2-nitrobenzolsulfonyl)amino]buttersäure, die nachstehend gezeigt ist.
Zu einer Lösung des Produkts von Schritt 41b (250 mg, 0,73 mmol) in 1:1 THF/MeOH (4 ml) wurde eine Lösung von LiOH (122 mg, 2,90 mmol) in H₂O (2 ml) zugesetzt. Nach 24 h Rühren bei RT wurde das Lösungsmittel konzentriert, mit H₂O (5 ml) verdünnt und mit 2 × 20 ml DCM extrahiert. Die DCM-Schicht wurde über MgSO₄ getrocknet und konzentriert, um ein braunes, viskoses Ausgangsmaterial (72 mg) zu ergeben. Die wässrige Schicht wurde mit konzentrierter HCl (pH-Wert ca. 3) angesäuert und mit 3 × 20 ml DCM extrahiert. Die kombinierte DCM-Schicht wurde über MgSO₄ getrocknet und konzentriert, um ein hellgelbes, festes Produkt (140 mg, 82% Ausbeute auf der Grundlage des gewonnenen Ausgangsmaterials (72 mg, 29%)) zu ergeben. ¹H-NMR (MeOH) δ 1,14 (s, 9H), 3,12 (s, 3H), 4,43 (s, 1H), 7,71 (dd, J = 7,63, 1,52 Hz, 1H), 7,74–7,78 (m, 2H), 8,03 (dd, J = 7,32, 1,83 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,33), MS m/z 331 (M⁺ + 1).
Schritt 41d: Herstellung der Verbindungen 130 und 131, die nachstehend gezeigt sind.
Zu einer Lösung des Produkts von Schritt 41 c (44,1 mg, 0,133 mmol) in DCM (2 ml) wurden Oxalylchlorid (59 μl, 0,67 mmol) und DMF (1 μl) zugesetzt. Nach 0,5 h Rühren bei RT wurde das Lösungsmittel konzentriert, anschließend wurde der so erhaltene Säurechloridrückstand 0,5 h in vacuo getrocknet und als Rohmaterial für die nächste Umsetzung verwendet. Das rohe Säurechlorid wurde mit einer Lösung des Produkts von Schritt 29a (107 mg, 0,133 mmol) und Phosphazenbase P1-tert-Butyl-tris(tetramethylen) (249 μl, 1,33 mmol, Fluka) in DMF (1 ml) behandelt. Nach 14 h Rühren bei RT wurde das Reaktionsgemisch mit DCM (20 ml) verdünnt und mit 1 N HCl (3 ml) gewaschen. Die wässrige Schicht wurde mit DCM (20 ml) extrahiert. Die kombinierte organische Schicht wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und konzentriert. Der so erhaltene Rückstand wurde durch Umkehrphasen-HPLC gereinigt, um ein erstes Isomer (16,2 mg, 12% Ausbeute) und ein zweites Isomer (11,4 mg, 9% Ausbeute) zu ergeben.
Für das erste Isomer, das nachstehend gezeigt ist und bei dem es sich um Verbindung 130 handelt, waren die Analysedaten wie folgt:
¹H-NMR (MeOH) δ 0,97–1,01 (m, 3H), 1,03 (s, 9H), 1,04 (s, 2H), 1,13–1,16 (m, 2H), 1,44 (dd, J = 9,5, 5,2 Hz, 1H), 1,93 (dd, J = 7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,27 (q, J = 8,7 Hz, 1H), 2,45–2,51 (m, 1H), 2,80 (dd, J = 14,3, 7,3 Hz, 1H), 2,83–2,88 (m, 1H), 3,16 (s, 3H), 3,97 (s, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,21 (dd, J = 12,5, 3,7 Hz, 1H), 4,38 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,60 (dd, J = 9,3, 7,5 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 5,13 (dd, J = 10,7, 1,8 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,70–5,78 (m, 1H), 5,89 (bs, 1H), 7,46 (dd, J = 9,5, 2,4 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,70–7,81 (m, 6H), 7,89 (dd, J = 8,6, 0,9 Hz, 1H), 7,92–7,95 (m, 1H), 8,07 (dd, J = 8,2–1,2 Hz, 2H), 8,19 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,39), MS m/z 890 (M⁺ + 1).
Für das zweite Isomer, das nachstehend gezeigt ist und bei dem es sich um Verbindung 131 handelt, waren die Analysedaten wie folgt:
¹H-NMR: (MeOH) δ 1,01 (s, 9H), 1,03–1,08 (m, 2H), 1,19–1,24 (m, 2H), 1,54 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,81–1,86 (m, 2H), 1,92 (dd, J = 7,8, 5,6 Hz, 1H), 2,24–2,31 (m, 1H), 2,41–2,50 (m, 1H), 2,80 (dd, J = 13,9, 6,9 Hz, 1H), 2,90–2,95 (m, 1H), 3,08–3,17 (m, 2H), 3,11 (s, 3H), 3,97 (s, 1H), 4,04 (s, 3H), 4,06 (s, 1H), 4,12 (dd, J = 12,2, 2,8 Hz, 1H), 4,40 (s, 1H), 4,48 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 4,72 (dd, J = 10,5, 6,9 Hz, 1H), 5,14 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,34 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,79–5,84 (m, 1H), 5,87 (bs, 1H), 7,39 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,45–7,48 (m, 1H), 7,51 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,65–7,69 (m, 3H), 7,70–7,80 (m, 6H), 8,06 (dd, J = 8,2, 1,2 Hz, 1H), 8,11 (dd, J = 8,2, 1,5 Hz, 2H), 8,24 (d, J = 9,5 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,65), MS m/z 890 (M⁺ + 1).
Beispiel 42
Verbindungen 132 und 133
Die Verbindungen 132 und 133, bei denen es sich um die 2S- und 2R-P3-Isomere von (3,3-Dimethyl-2-methylaminobutyryl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid handelt, wurden wie nachstehend beschrieben hergestellt.
Die Herstellung von Verbindung 132 ist vorstehend gezeigt. Dabei wurden zu einer Lösung von Verbindung 130 (13,9 mg, 0,016 mmol) in DMF (1 ml) 2-Mercaptoethanol (3 Tropfen) und DBU (5 Tropfen) zugesetzt und über Nacht bei RT gerührt. Nach 24 h wurde das Lösungsmittel konzentriert und der Rückstand durch Umkehrphasen-HPLC gereinigt, um ein bis-TFA-Salz als ein weißes, festes Produkt (7,2 mg, 48% Ausbeute) zu ergeben. ¹H-NMR (MeOH) δ 0,86–0,91 (m, 1H), 1,07–1,14 (m, 3H), 1,16 (s, 9H), 1,19–1,22 (m, 1H), 1,25–1,33 (m, 4H), 1,42 (dd, J = 9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,92 (dd, J = 8,1, 5,7 Hz, 1H), 2,27 (q, J = 8,7 Hz, 1H), 2,41–2,47 (m, 1H), 2,54 (s, 3H), 2,79–2,84 (m, 1H), 2,93–2,97 (m, 1H), 4,03 (s, 3H), 4,13 (dd, J = 12,2, 3,1 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 4,76 (dd, J = 9,3, 7,5 Hz, 1H), 5,15 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,30 (dd, J = 17,4 Hz, 1H), 5,68–5,75 (m, 1H), 5,86 (bs, 1H), 7,37 (dd, J = 9,2, 2,1 Hz, 1H), 7,52 (bs, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,65–7,70 (m, 3H), 8,05–8,09 (m, 2H), 8,13 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,18), MS m/z 704 (M⁺ + 1).
Verbindung 133, die nachstehend gezeigt ist, wurde unter Verwendung von Verbindung 131 durch das Verfahren zum Herstellen von Verbindung 132 hergestellt.
¹H-NMR (MeOH) δ 0,86–0,93 (m, 1H), 1,09 (s, 9H), 1,15–1,23 (m, 4H), 1,27–1,33 (m, 3H), 1,37–1,45 (m, 3H), 1,92 (dd, J = 7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,32 (q, J = 8,7 Hz, 1H), 2,49–2,57 (m, 1H), 2,75 (s, 3H), 2,86 (dd, J = 14,0, 7,6 Hz, 1H), 2,95–3,00 (m, 1H), 3,38–3,49 (m, 1H), 4,04 (s, 3H), 4,15 (s, 1H), 4,29 (dd, J = 12,5, 3,1 Hz, 1H), 4,39 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 4,75 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 5,16 (dd, J = 10,4, 1,2 Hz, 1H), 5,34 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,70–5,77 (m, 1H), 5,97 (bs, 1H), 7,44 (dd, J = 9,5, 2,4 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,69–7,76 (m, 3H), 8,09 (dd, J = 7,0, 0,9 Hz, 1H), 8,14 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,21), MS m/z 704 (M⁺ + 1).
Beispiel 43
Verbindung 134
Verbindung 134, 1-(2R-Dimethylamino-3-phenylpropionyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Zu einer Lösung von 4R-(7-Methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amiddihydrochlorid (49,5 mg, 0,061 mmol) in DCM (2 ml) wurden DIEA (64 μl, 0,37 mmol), HATU (28,0 mg, 0,074 mmol) und N,N-Dimethyl-L-phenylalanin (14,0 mg, 0,061 mmol) zugesetzt. Nach 0,5 h Rühren bei RT wurden das Lösungsmittel und überschüssiges DIEA konzentriert und der so erhaltene Rückstand durch präparative Umkehrphasen-HPLC gereinigt, um die Verbindung als ein bis-TFA-Salz als einen weißen Feststoff (14,0 mg, 23% Ausbeute) von Verbindung 134 als ein bis-TFA-Salz als einen gelben Feststoff (6,1 mg, 10% Ausbeute) von Verbindung 135 zu ergeben. ¹H-NMR (MeOH von Verbindung 134) δ 1,12–1,16 (m, 2H), 1,20–1,25 (m, 1H), 1,28–1,33 (m, 1H), 1,42 (dd, J = 9,5, 5,2 Hz, 1H), 1,98 (dd, J = 7,9, 5,2 Hz, 1H), 2,26–2,31 (m, 2H), 2,64 (dd, J = 12,8, 8,1 Hz, 1H), 3,01 (bs, 6H), 3,05–3,09 (m, 2H), 3,42 (dd, J = 13,4, 3,7 Hz, 1H), 4,03 (s, 3H), 4,08 (s, 1H), 4,48 (dd, J = 10,1, 4,0 Hz, 1H), 4,58 (dd, J = 9,8, 7,0 Hz, 1H), 5,17 (dd, J = 10,4, 1,5 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 17,4 Hz, 1H), 5,60 (bs, 1H), 5,76–5,81 (m, 1H), 7,32–7,35 (m, 2H), 7,36–7,40 (m, 4H), 7,42 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,67–7,71 (m, 4H), 8,02–8,04 (m, 2H), 8,13 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,37), MS m/z 752 (M⁺ + 1).
Beispiel 44
Verbindung 135
Verbindung 135, 1-(2S-Dimethylamino-3-phenylpropionyl)-4R-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2S-carbonsäure-(1R-cyclopropansulfonylaminocarbonyl-2S-vinylcyclopropyl)amid, die nachstehend gezeigt ist, wurde durch das Verfahren von Beispiel 43 hergestellt.
¹H-NMR MeOH) δ 1,10–1,22 (m, 2H), 1,21–1,28 (m, 1H), 1,29–1,35 (m, 1H), 1,42 (dd, J = 9,5, 5,2 Hz, 1H), 1,97 (dd, J = 8,2, 5,2 Hz, 1H), 2,28–2,36 (m, 2H), 2,58–2,36 (m, 2H), 3,03 (s, 6H), 3,06–3,08 (m, 3H), 3,39 (dd, J = 12,5, 4,0 Hz, 1H), 4,04 (s, 3H), 4,08 (s, 1H), 4,11 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 4,51 (dd, J = 10,7, 4,0 Hz, 1H), 4,62 (dd, J = 9,8, 7,0 Hz, 1H), 5,16 (dd, J = 10,2, 1,7 Hz, 1H), 5,34 (dd, J = 16,8, 1,5 Hz, 1H), 5,63 (bs, 1H), 5,75–5,83 (m, 1H), 7,33 (dd, J = 6,1, 2,4 Hz, 1H), 7,38–7,42 (m, 5H), 7,47 (s, 1H), 7,54 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,69–7,76 (m, 4H), 8,02–8,02 (m, 2H), 8,18 (d, J = 9,2 Hz, 1H). LC-MS (Retentionszeit: 1,30), MS m/z 752 (M⁺ + 1).
Beispiel 45
Das 1-Aminospiro[2.3]hexan-1-carbonsäuremethylesterhydrochloridsalz, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie nachstehend in den Schritten 45a–45c beschrieben hergestellt.
Schritt 45a: Herstellung von [2,3]Hexan-1,1-dicarbonsäuredimethylester, der nachstehend
Zu einem Methylen/Cyclobutan-Gemisch (1,5 g, 22 mmol) und Rh₂(OAC)₄ (125 mg, 0,27 mmol) in wasserfreiem CH₂Cl₂ (15 ml) wurden 3,2 g (20 mmol) Dimethyldiazomalonat (hergestellt gemäß J. Lee et al. Synth. Comm., 1995, 25, 1511–1515) bei 0°C innerhalb von 6 h zugesetzt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch auf RT erwärmt und weitere 2 h gerührt. Das Gemisch wurde konzentriert und durch Flashchromatographie (Elution mit 10:1 Hexan/Et₂O bis 5:1 Hexan/Et₂O) gereinigt, um 3,2 g (72%) [2,3]Hexan-1,1-dicarbonsäuredimethylester als ein gelbes Öl zu ergeben. ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3,78 (s, 6H), 2,36 (m, 2H), 2,09 (m, 3H), 1,90 (m, 1H), 1,67 (s, 2H). LC-MS: MS m/z 199 (M⁺ + 1) (Verfahren D).
Schritt 45b: Herstellung von Spiro[2.3]hexan-1,1-dicarbonsäuremethylester, der nachstehend gezeigt ist.
Zu dem Gemisch von Spiro[2.3]hexan-1,1-dicarbonsäuredimethylester 1 (200 mg, 1,0 mmol) in 2 ml MeOH und 0,5 ml Wasser wurde KOH (78 mg, 1,4 mmol) zugesetzt. Diese Lösung wurde 2 Tage bei RT gerührt. Anschließend wurde sie mit verdünnter HCl angesäuert und zwei Mal mit Ether extrahiert. Die kombinierten organischen Phasen wurden getrocknet (MgSO₄) und konzentriert, um 135 mg (73%) von 2 als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3,78 (s, 3H), 2,36–1,90 (m, 8H). LC-MS: MS m/z 185 (M⁺ + 1) (Verfahren D).
Schritt 45c: Herstellung des Titelprodukts, dem 1-Aminospiro[2.3]hexan-1-carbonsäuremethylesterhydrochloridsalz. Zu einem Gemisch von Spiro[2.3]hexan-1,1-dicarbonsäuremethylester 2 (660 mg, 3,58 mmol) in 3 ml wasserfreiem tert-BuOH wurden 1,08 g (3,92 mmol) DPPA und 440 mg (4,35 mmol) Et₃N zugesetzt. Das Gemisch wurde 21 h unter Rückfluss gewärmt und anschließend zwischen H₂O und Ether aufgetrennt. Die Etherphase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und in vacuo konzentriert, um ein Öl zu ergeben. Zu diesem Öl wurden 3 ml einer 4 M HCl/Dioxan-Lösung zugesetzt. Diese saure Lösung wurde 2 h bei RT gerührt und anschließend in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde mit Ether pulverisiert, um 400 mg (58%) von 3 als einen weißen Feststoff zu ergeben. ¹H-NMR (300 MHz, d₆-DMSO) δ 8,96 (br s, 3H), 3,71 (s, 3H), 2,41 (m, 1H), 2,12 (m, 4H), 1,93 (m, 1H), 1,56 (q, 2H, J = 8 Hz). LC-MS des freien Amins: MS m/z 156 (M⁺ + 1) (Verfahren D).
Beispiel 46
Verbindung 136
Verbindung 136, {1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonylspiro[2.3]hex-1-ylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, die nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 46a–c beschrieben hergestellt.
Schritt 46a: Herstellung von 1-{[1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}spiro[2.3]hexan-1-carbonsäuremethylester, der nachstehend gezeigt ist.
Zu einem Gemisch von 1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonsäure (50 mg, 0,087 mmol) in CH₂Cl₂ wurden iPr₂EtN (56 mg, 0,43 mmol) und anschließend HBTU (40 mg, 0,10 mmol), HOBT·H₂O (16 mg, 0,10 mmol) und 1-Aminospiro[2.3]carbonsäuremethylesterhydrochloridsalz (18 mg, 0,094 mmol) zugesetzt. Dies wurde über Nacht bei RT gerührt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch mit EtOAc verdünnt, mit gesättigtem, wässrigen NaHCO₃ und Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und in vacuo konzentriert. Der Rückstand wurde durch Flashchromatographie gereinigt, wobei mit 1:1 Hexan/EtOAc eluiert wurde, um das Titelprodukt, als einen weißen Feststoff (60 mg, 96%) zu ergeben. LC-MS: (Retentionszeit 1,74 min), MS m/z 715 (M⁺ + 1) (Verfahren D).
Schritt 46b: Herstellung 1-{[1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}spiro[2.3]hexan-1-carbonsäure, die nachstehend gezeigt ist.
Zu einem Gemisch von 1-{[1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}spiro[2.3]hexan-1-carbonsäuremethylester (60 mg, 0,084 mmol) in 3 ml THF, 1,5 ml MeOH und 0,4 ml H₂O wurde LiOH (30 mg, 1,5 mmol) zugesetzt. Das Gemisch wurde 3 Tage bei RT gerührt. Anschließend wurde es konzentriert und zwischen gesättigtem, wässrigen NaHCO₃ und Ether aufgetrennt. Die wässrige Schicht wurde mit verdünnter HCl auf einen pH-Wert von 4 angesäuert und drei Mal mit EtOAc extrahiert. Die kombinierten EtOAc-Extrakte wurden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und konzentriert, um 55 mg 1-{[1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}spiro[2.3]hexan-1-carbonsäure als einen weißen Feststoff (93%) zu ergeben. LC-MS: (Retentionszeit 1,71 min), MS m/z 701 (M⁺ + 1) (Verfahren D).
Schritt 46c: Herstellung von Verbindung 136. Zu einem Gemisch von CDI (17 mg, 0,10 mmol) in THF (3 ml) wurde 1-{[1-(2-tert-Butoxycarbonylamino-3,3-dimethylbutyryl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-2-carbonyl]amino}spiro[2.3]hexan-1-carbonsäure (55 mg, 0,078 mmol) zugesetzt. Das Gemisch wurde 1 h unter Rückfluss gewärmt und dann auf RT abgekühlt. Anschließend wurde Cyclopropylsulfonamid (13 mg, 0,10 mmol) zugesetzt, gefolgt von DBU (16 mg, 0,10 mmol). Das Gemisch wurde 24 h bei RT gerührt und dann mit EtOAc verdünnt. Die Lösung wurde mit einem Puffer mit einem pH-Wert von 4, gesättigtem, wässrigen NaHCO₃ und Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und konzentriert. Der Rückstand wurde unter Verwendung von präparativer TLC gereinigt, wobei drei Mal mit 2,5% MeOH in CH₂Cl₂ eluiert wurde, um 13 mg der Verbindung 148, {1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonylspiro[2.3]hex-1-ylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert- butylester, als einen weißen Feststoff (20%) zu ergeben. LC-MS: (Retentionszeit 1,63 min), MS m/z 804 (Verfahren D).
Beispiel 47
Die folgenden Verbindungen wurden ebenfalls unter Verwendung des Produkts von Schritt 45c gemäß dem Verfahren von Beispiel 46 hergestellt. Verbindung 137
LC-MS: (Retentionszeit 1,62 min), MS m/z 804 (Verfahren D). Verbindung 138
LC-MS: (Retentionszeit 1,56 min), MS m/z 790 (Verfahren D).
Beispiel 48
Verbindung 139
Verbindung 139, {1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonylspiro[2.4]hept-1-ylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, die nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 48a–d beschrieben hergestellt.
Schritt 48a: Spiro[2.4]heptan-1,1-dicarbonsäuredimethylester, der nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Unter Verwendung des Verfahrens von Schritt 45a wurden 1,14 g (13,9 mmol) Methylencyclopentan mit 2,0 g (12,6 mmol) Dimethyldiazomalonat umgesetzt, um 1,8 g (67%) des Dimethylesters zu ergeben. ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3,73 (s, 6H), 1,80 (m, 2H), 1,70 (m, 4H), 1,60 (m, 4H). LC-MS: MS m/z 213 (M^– + 1) (Verfahren D).
Schritt 48b: Spiro[2.4]heptan-1,1-dicarbonsäuremethylester, der nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Unter Verwendung des Verfahrens von Schritt 45b ergaben 1,7 g (8,0 mmol) des Produkts von Schritt 48a und 493 mg (8,8 mmol) KOH 1,5 g (94%) Spiro[2.4]heptan-1,1-dicarbonsäuremethylester. ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3,80 (s, 3H), 2,06 (d, 1H, J = 5 Hz), 1,99 (d, 1H, J = 5 Hz), 1,80–1,66 (m, 8H). LC-MS: MS m/z 199 (M⁺ + 1) (Verfahren D).
Schritt 48c: 1-Aminospiro[2.4]heptan-1-carbonsäuremethylesterhydrochloridsalz, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Unter Verwendung des Verfahrens von Schritt 45c ergaben 500 mg (2,5 mmol) des Produkts von Schritt 48b, 705 mg (2,5 mmol) DPPA und 255 mg (2,5 mmol) Et₃N 180 mg (35%) dieses Hydrochloridsalzes. ¹H-NMR (300 MHz, d₆-DMSO) δ 8,90 (br s, 3H), 3,74 (s, 3H), 1,84 (m, 1H), 1,69 (m, 4H), 1,58 (m, 4H), 1,46 (d, 1H, J = 6 Hz). LC-MS des freien Amins: MS m/z 170 (M⁺ + 1) (Verfahren D).
Schritt 48d: Verbindung 139 wurde unter Verwendung des Produkts von Schritt 48c gemäß dem Verfahren von Beispiel 46 hergestellt. Retentionszeit (min.) 1,69. MS-Daten (M + 1) m/z 818 (Verfahren D).
Beispiel 49
Verbindung 140
Verbindung 140, {1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonylspiro[2.2]pentan-1-ylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, die nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 49a–d beschrieben hergestellt.
Schritt 49a: Spiro[2.2]pentan-1,1-dicarbonsäuredimethylester, der nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Zu einem Gemisch von Methylencyclopropan (1,0 g, 18,5 mmol) (hergestellt gemäß dem U.S.-Patent Nr. 5,723,714 von P. Binger) und Rh₂(OAc)₄ (82 mg, 0,185 mmol) in wasserfreiem CH₂Cl₂ (10 ml) wurde Dimethyldiazomalonat (2,9 g, 18,3 mmol) bei 0°C zugesetzt. Am oberen Ende des Kolbens war ein Kühlfinger angebracht, dessen Temperatur bei –10°C gehalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde auf RT erwärmt und weitere 2 h gerührt. Das Gemisch wurde in vacuo konzentriert und durch Flashchromatographie (Elution mit 10:1 Hexan/Et₂O bis 5:1 Hexan/Et₂O) gereinigt, um 0,85 g (25%) des Dimethylesters als ein gelbes Öl zu ergeben. ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3,73 (s, 6H), 1,92 (s, 2H), 1,04 (d, 4H, J = 3 Hz).
Schritt 49b: Spiro[2.2]pentan-1,1-dicarbonsäuremethylester, der nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Unter Verwendung des Verfahrens von Schritt 45b ergaben 800 mg (4,3 mmol) des Produkts von Schritt 49a und 240 mg (4,3 mmol) KOH 600 mg (82%) Spiro[2.2]pentan-1,1-dicarbonsäuremethylester. ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3,82 (s, 6H), 2,35 (d, 1H, J = 3 Hz), 2,26 (d, 1H, J = 3 Hz), 1,20 (m, 1H), 1,15 (m, 1H), 1,11 (m, 1H), 1,05 (m, 1H). LRMS: MS m/z 169 (M⁺ – 1) (Verfahren D).
Schritt 49c: 1-Aminospiro[2.2]pentan-1-carbonsäuremethylesterhydrochloridsalz, das nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Unter Verwendung des Verfahrens von Schritt 45c ergaben 400 mg (2,3 mmol) des Produkts von Schritt 49b, 700 mg (2,5 mmol) DPPA und 278 mg (2,7 mmol) Et₃N 82 mg (20%) des Hydrochloridsalzes. ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 9,19 (br s, 3H), 3,81 (s, 3H), 2,16, (d, J = 5,5 Hz, 1H), 2,01 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 1,49 (m, 1H), 1,24, (m, 1H), 1,12 (m, 2H). LRMS des freien Amins: MS m/z 142 (M⁺ + 1) (Verfahren D).
Schritt 49d: Verbindung 140 wurde unter Verwendung des Produkts von Schritt 49c gemäß dem Verfahren von Beispiel 46 hergestellt. Retentionszeit (min.) 1,59. MS-Daten (M + 1) m/z 790 (Verfahren D).
Beispiel 50
Verbindung 141
Verbindung 141, {1-[2-(1-Cyclopropansulfonylaminocarbonylspiro[2.2]pentan-1-ylcarbamoyl)-4-(7-methoxy-2-phenylchinolin-4-yloxy)pyrrolidin-1-carbonyl]-2,2-dimethylpropyl}carbaminsäure-tert-butylester, die nachstehend gezeigt ist, wurde wie in den Schritten 50a–d beschrieben hergestellt.
Schritt 50a: 5-Aminospiro[2.3]hexan-5-carbonsäureethylester, der nachstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Spiro[2.3]hexan-4-on 13 (500 mg, 5 mmol), das gemäß A. Meijere et al. J. Org. Chem. 1988, 53, 152–161 aus Bicyclopropyliden (A. Meijere et al. Org. Syn. 2000, 78, 142–151) hergestellt war, wurde mit Ammoniumcarbamat (1,17 g, 15 mmol) und Kaliumcyanid (812 mg, 12,5 mmol) in 50 ml EtOH und 50 ml Wasser kombiniert. Das Gemisch wurde 2 Tage bei 55°C erwärmt. Anschließend wurde NaOH (7 g, 175 mmol) zugesetzt und die Lösung über Nacht unter Rückfluss gewärmt. Anschließend wurde das Gemisch auf 0°C abgekühlt, mit konzentrierter HCl auf einen pH-Wert von 1 angesäuert und in vacuo konzentriert. Zu dem rohen Aminosäuregemisch wurde EtOH zugesetzt, anschließend wurde es zur Trockne konzentriert (5×), um Restwasser zu entfernen. Der in 100 ml EtOH gelöste Rückstand wurde auf 0°C abgekühlt. Anschließend wurde er mit 1 ml SOCl₂ behandelt und 3 Tage refluxiert. Der Feststoff wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat in vacuo konzentriert, um das Rohprodukt zu ergeben. Das Rohprodukt wurde zwischen 3 N NaOH, NaCl und EtOAc aufgetrennt. Die organische Phase wurde über Kaliumcarbonat getrocknet und konzentriert. Der Rückstand wurde unter Verwendung von Säulenchromatographie auf C18 Silicagel (Elution mit MeOH/H₂O) gereinigt, um 180 mg (21%) von 15 als ein Öl zu ergeben. ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8,20 (br s, 2H), 4,27 (s, 2H), 2,80 (s, 1H), 2,54 (s, 1H), 2,34 (m, 2H), 1,31 (s, 3H), 1,02 (s, 1H), 0,66 (m, 3H). ¹³C-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 170,2 (s), 63,0 (s), 62,8 (s), 26,1 (s), 26,0 (s), 24,9 (s), 13,9 (s), 11,4 (s), 10,9 (s). LC-MS: MS m/z 170 (M⁺ + 1) (Verfahren D).
Schritt 50d: Verbindung 141 wurde unter Verwendung des Produkts von Schritt 50c gemäß dem Verfahren von Beispiel 46 hergestellt. Retentionszeit (min.) 1,87. MS-Daten (M + 1) m/z 804 (Verfahren D). Beispiel 51 Herstellung von Salzen
X = CH₃SO₃ ^–
Das Salz BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclopropanmethansulfonat, das vorstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Zu einer auf –78°C gekühlten Lösung von 100 mg (00,124 mmol) BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclopropan in 5 ml CH₂Cl₂ wurden 8,4 μl (0,13 mmol) Methansulfonsäure zugesetzt, anschließend wurde das Gemisch innerhalb von 10 min auf RT erwärmt. Das Gemisch wurde in vacuo konzentriert, aus der kleinstmöglichen Menge von CH₂Cl₂ in Et₂O präzipitiert, filtriert und konzentriert, um 98 mg BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclopropanmethansulfonatsalz als einen weißen Feststoff zu ergeben. LC-MS (Retentionszeit: 1,63, Verfahren A), MS m/z 790 (M⁺ + 1). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₄₁H₅₂N₅SO₉: 790,3486; gefunden: 790,3505.
X = CH₃CO₂ ^–
Das Salz BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclopropantrifluoracet, das vorstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Zu einer auf –78°C gekühlten Lösung von 100 mg (0,124 mmol) BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclopropan in 5 ml CH₂Cl₂ wurden 10,7 μl (0,14 mmol) TFA zugesetzt, anschließend wurde das Gemisch innerhalb von 10 min auf RT erwärmt. Das Gemisch wurde in vacuo konzentriert, aus der kleinstmöglichen Menge von CH₂Cl₂ in Et₂O präzipitiert, filtriert und konzentriert, um 98,4 mg BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclopropantrifluoracetatsalz als einen weißen Feststoff zu ergeben. LC-MS (Retentionszeit: 1,61, Verfahren A), MS m/z 790 (M⁺ + 1). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₄₁H₅₂N₅SO₉: 790,3486; gefunden: 790,3505.
X = Cl^–
Das Salzsäuresalz von BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclopropan, das vorstehend gezeigt ist, wurde wie folgt hergestellt.
Zu einer auf –78°C gekühlten Lösung von 100 mg (0,124 mmol) BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclopropan in 5 ml CH₂Cl₂ wurden 47 μl (0,19 mmol) 4 N HCl in Dioxan zugesetzt, anschließend wurde das Gemisch innerhalb von 10 min auf RT erwärmt und dann in vacuo konzentriert. Dieser Vorgang wurde mit zusätzlichen 20 μl (0,08 mmol) wiederholt. Das Gemisch wurde aus der kleinstmöglichen Menge von CH₂Cl₂ in Et₂O präzipitiert, filtriert und konzentriert, um 94 mg des Salzsäuresalzes von BOCNH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-Phenyl-7-methoxychinolin-4-oxo)-S-prolin]-P1(1R,2S-vinyl-Acca)-CONHSO₂-cyclopropan als einen weißen Feststoff zu ergeben. LC-MS (Retentionszeit: 1,66, Verfahren A), MS m/z 790 (M⁺ + 1). HRMS m/z (M + H)⁺ berechnet für C₄₁H₅₂N₅SO₉: 790,3486; gefunden: 790,3495.
Beispiel 52
Biologische Untersuchungen
Rekombinanter HCV-NS3/4A-Proteasekomplex FRET Peptid-Test
Der Zweck dieses in vitro-Tests bestand im Messen der Hemmung des HCV-NS3-Proteasekomplexes, der wie nachstehend beschrieben von den BMS-, H77C- oder J416S-Stämmen abgeleitet war, durch Verbindungen der vorliegenden Erfindung. Dieser Test liefert einen Anhaltspunkt dafür, wie wirksam die Verbindungen der vorliegenden Erfindung beim Hemmen der sichtbaren proteolytischen Aktivität von HCV wären.
Serum von einem HCV-infizierten Patienten wurde von Dr. T. Wright, San Francisco Hospital, erhalten. Ein gentechnisch erzeugtes cDNA-Templat des HCV-Genoms (BMS-Stamm) in voller Länge wurde aus DNA-Fragmenten, die durch Reverse Transkriptase-PCR (RT-PCR) von Serum-RNA und Verwendung von Primern, die auf der Grundlage der Homologie zwischen anderen Genotyp 1a-Stämmen ausgewählt waren, hergestellt waren, konstruiert. Aus der Bestimmung der gesamten Genomsequenz wurde dem HCV-Isolat gemäß der Klassifikation von Simmonds et al. (siehe P. Simmonds, K. A. Rose, S. Graham, S. W. Chan, F. McOmish, B. C. Dow, E. A. Follett, P. L. Yap und H. Marsden, J. Clin. Microbiol., 31(6), 1493–1503 (1993)) ein Genotyp 1a zugeordnet. Von der Aminosäuresequenz des nichtstrukturellen Bereichs, NS2-5B, wurde eine Identität von > 97% mit dem HCV-Genotyp 1a (H77C) und eine Identität von 87% mit dem Genotype 1b (J4L6S) gezeigt. Die infektiösen Klone H77C (1a Genotyp) und J4L6S (1b Genotyp) wurden von R. Purcell (NIH) erhalten, wobei die Sequenzen in der Gendatenbank veröffentlicht worden sind (AAB67036, siehe Yanagi, M., Purcell, R. H., Emerson, S. U. und Bukh, J., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94(16), 8738–8743 (1997); AF054247, siehe Yanagi, M., St. Claire, M., Shapiro, M., Emerson, S. U., Purcell, R. H. und Bukh, J., Virology 244 (1), 161–172 (1998)).
Für die Herstellung von rekombinanten NS3/4A-Proteasekomplexen wurden die BMS-, H77C- und J4L6S-Stämme verwendet. DNA, die den rekombinanten NS3/4A-Proteasekomplex (Aminosäuren 1027 bis 1711) für diese Stämme codiert, wurde wie von P. Gallinari et al. (siehe Gallinari P., Paolini C., Brennan D., Nardi C., Steinkuhler C., De Francesco R., Biochemistry, 38(17): 5620–32, (1999)) beschrieben manipuliert. Kurz gesagt, wurde ein solubilisierender Endabschnitt aus drei Lysineinheiten an das 3'-Ende des NS4A-codierenden Bereichs angefügt. Das Cystein an der P1-Position der NS4A-NS4B-Spaltungsstelle (Aminosäure 1711) wurde zu einem Glycin geändert, um die proteolytische Spaltung der Lysinmarkierung zu verhindern. Ferner wurde an der Aminosäureposition 1454 durch PCR eine Cystein-zu-Serin-Mutation eingeführt, um die autolytische Spaltung in der NS3-Helikase-Domäne zu verhindern. Das veränderte DNA-Fragment wurde in den bakteriellen pET21b Expressionsvektor kloniert und der NS3/4A-Komplex gemäß dem von P. Gallinari et al. (siehe Gallinari P., Brennan D., Nardi C., Brunetti M., Tomei L., Steinkuhler C., De Francesco R., J. Virol. 72(8): 6758–69 (1998)) beschriebenen Protokoll mit Abänderungen in E. coli BL21 (DE3) exprimiert. Kurz gesagt, wurde die NS3/4A-Expression mit 0,5 mM IPTG über einen Zeitraum von 22 h bei 20°C ausgelöst. Eine typische Fermentation (10 l) lieferte etwa 80 g an nasser Zellpaste. Die Zellen wurden in einem Lysepuffer (10 ml/g), der aus 25 mM HEPES, pH-Wert 7,5, 20% Glycerol, 500 mM NaCl, 0,5% Triton-X100, 1 μg/ml Lysozym, 5 mM MgCl₂, 1 μg/ml DNaseI, 5 mM β-Mercaptoethanol (βME) und Proteaseinhibitor/EDTA-frei bestand, resuspendiert, homogenisiert und 20 min bei 4°C inkubiert. Das Homogenisat wurde mit Ultraschall behandelt und durch 1 h Ultrazentifugation bei 235000 g bei 4°C für 1 h geklärt. Zu dem Überstand wurde Imidazol bis zu einer Endkonzentration von 15 mM zugesetzt, der pH-Wert wurde auf 8,0 eingestellt. Der rohe Proteinextrakt wurde auf eine Ni-NTA-Säule, die mit Puffer B (25 mM HEPES, pH-Wert 8,0, 20% Glycerol, 500 mM NaCl, 0,5% Triton-X100, 15 mM Imidazol, 5 mM βME) voräquilibriert war, aufgebracht. Die Probe wurde mit einer Fließgeschwindigkeit von 1 ml/min aufgebracht. Die Säule wurde mit 15 Säulenvolumen Puffer C (gleich wie Puffer B, jedoch mit 0,2% Triton-X100) gewaschen. Das Protein wurde mit 5 Säulenvolumen 200 mM Imidazol in Puffer eluiert.
Fraktionen, die den NS3/4A-Proteasekomplex enthielten, wurden vereinigt und auf eine Entsalzungssäule Superdex-S200, die mit Puffer D (25 mM HEPES, pH-Wert 7,5, 20% Glycerol, 300 mM NaCl, 0,2% Triton-X100, 10 mM βME) voräquilibriert war, aufgebracht. Die Probe wurde mit einer Fließgeschwindigkeit von 1 ml/min aufgebracht. Fraktionen, die den NS3/4A-Proteasekomplex enthielten, wurden vereinigt und auf etwa 0,5 mg/ml aufkonzentriert. Die Reinheit der von den BMS-, H77C- und J4L6S-Stämmen abgeleiteten NS3/4A-Proteasekomplexe wurde durch SDS-PAGE- und Massenspektrometrieanalysen als größer als 90% bestimmt.
Das Enzym wurde bei –80°C aufbewahrt, auf Eis aufgetaut und vor der Verwendung in einem Testpuffer verdünnt. Das bei dem NS3/4A-Proteasetest verwendete Substrat, das von Taliani et al. in Anal. Biochem. 240(2): 60–67 (1996) beschrieben worden ist, wurde von dem Enzym an der Esterbrücke gespalten. Die Sequenz steht grob auf der Grundlage der natürlichen NS4A/NS4B-Spaltungsstelle. Das Peptidsubstrat wurde mit einem der drei rekombinanten NS3/4A-Komplexe bei Abwesenheit oder Vorhandensein einer Verbindung der vorliegenden Erfindung inkubiert und die Umsetzung in Echtzeit unter Verwendung eines Cytofluor Series 4000-Geräts verfolgt.
Die Reagenzien waren folgende: HEPES und Glycerol (Ultrapure) wurden von GIBCO-BRL erhalten. DMSO wurde von Sigma erhalten. β-Mercaptoethanol wurde von Bio Rad erhalten. Testpuffer: 50 mM HEPES, pH-Wert 7,5; 0,15 M NaCl; 0,1% Triton; 15% Glycerol; 10 mM βME. Substrat: 2 μM Endkonzentration (von einer bei –20°C aufbewahrten 2 mM Vorratslösung in DMSO). HCV-NS3/4A Typ 1a (1b), 2–3 nM Endkonzentration (von einer 5 μM Vorratslösung in 25 mM HEPES, pH-Wert 7,5, 20% Glycerol, 300 mM NaCl, 0,2% Triton-X100, 10 mM βME).
Der Test wurde in einer Polystyrolplatte mit 96 Vertiefungen von Falcon durchgeführt. Jede Vertiefung enthielt 25 μl NS3/4A-Proteasekomplex in Testpuffer, 50 μl einer Verbindung der vorliegenden Erfindung in 10% DMSO/Testpuffer und 25 μl Substrat in Testpuffer. Eine Kontrolle (keine Verbindung) wurde auf der gleichen Testplatte bereitgestellt. Der Enzymkomplex wurde mit der Lösung der Verbindung oder der Kontrolle gemischt, 1 min bevor die Enzymreaktion durch das Zusetzen des Substrats ausgelöst wurde. Die Testplatte wurde sofort unter Verwendung des Cytofluor Series 4000-Geräts (Perspective Biosystems) ausgelesen. Das Gerät wurde auf das Auslesen einer Emission von 340 nm und eine Anregung von 490 nm bei 25°C eingestellt. Die Umsetzungen wurden durchwegs etwa 15 Minuten verfolgt.
Die prozentuelle Hemmung wurde anhand folgender Gleichung berechnet: 100 – [(δFInhibitor/δFKontrolle) × 100],wobei δF die Änderung der Fluoreszenz über den linearen Bereich der Kurve darstellt. Auf die Hemmungs/Konzentrations-Daten wurde eine nichtlineare Kurvenanpassung angewendet; die 50%-effektive Konzentration (IC₅₀) wurde unter Verwendung der Excel Xl-Fit Software berechnet.
Bei allen getesteten Verbindungen wurden IC₅₀-Werte von 9 μM oder weniger gefunden. Bevorzugte Verbindungen wiesen IC₅₀-Werte von 0,021 μM, wie bei Verbindung 58 gefunden, oder weniger auf. Ferner wurde gefunden, dass Verbindungen der vorliegenden Erfindung, die gegen mehr als einen Typ des NS3/4A-Komplexes getestet wurden, ähnliche Inhibitoreigenschaften aufwiesen, obwohl die Verbindungen durchwegs eine höhere Wirksamkeit gegen die 1b-Stämme im Vergleich zu den 1a-Stämmen zeigten.
Spezifitätstests
Die Spezifitätstests wurden durchgeführt, um die Selektivität der Verbindungen der vorliegenden Erfindung beim Hemmen der HCV-NS3/4A-Protease im Vergleich zu anderen Serin- oder Cysteinproteasen zu zeigen.
Die Spezifitäten der Verbindungen der vorliegenden Erfindung wurden gegenüber verschiedenen Serinproteasen, nämlich Elastase aus humanen Leukozyten, Elastase aus Schweinepankreas und α-Chymotrypsin aus Rinderpankreas, und einer Cysteinprotease, nämlich Cathepsin B aus humaner Leber, bestimmt. In allen Fällen wurde ein Protokoll unter Verwendung einer Platte mit 96 Vertiefungen und einem colorimetrischen p-Nitroanilin-(pNA)-Substrat, das für das betreffende Enzym spezifisch war, wie bereits früher beschrieben (Patent Nr. WO 00/09543) mit einigen Veränderungen verwendet.
Jeder Test umfasste eine Enzym/Inhibitor-Vorinkubation von 1 h bei RT, gefolgt von Zusetzen des Substrats und Hydrolyse auf ca. 30% Konversion, wie mit einem Spectramax Pro Mikroplatten-Auslesegerät gemessen wurde. Die Konzentrationen der Verbindungen variierten von 100 bis 0,4 μM in Anhängigkeit ihrer Wirkungsstärke.
Die Endbedingungen und das Protokoll für jeden Test waren wie bereits früher berichtet (Patent Nr. WO 00/09543), wobei ein zusätzlicher Test aufgenommen wurde:

• 50 mM Tris-HCl, pH-Wert 8, 0,5 M Na₂SO₄, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 3% DMSO, 0,01% Tween-20 mit 133 μM succ-AAA-pNA und 20 nM Elastase.

Die prozentuelle Hemmung wurde anhand folgender Gleichung berechnet: [1 – ((UVInhibitor – UVleer)/(UVKontrolle – UVleer))] × 100
Auf die Hemmungs/Konzentrations-Daten wurde eine nichtlineare Kurvenanpassung angewendet; die 50%-effektive Konzentration (IC₅₀) wurde unter Verwendung der Excel Xl-Fit Software berechnet.
HCV-Replicon-Test auf Zellgrundlage
Ein HCV-Replicon-Gesamtzellsystem wurde wie von Lohmann V., Korner F., Koch J., Herian U., Theilmann L., Bartenschlager R., Science 285 (5424): 110–3 (1999) beschrieben erstellt. Dieses System ermöglichte uns das Auswerten der Wirkungen unserer HCV-Protease-Verbindungen auf die HCV-RNA-Replikation. Kurz gesagt, wurde unter Verwendung der in der Veröffentlichung von Lohmann beschriebenen Sequenz des HCV-Stammes 1B (Hinterlegungsnummer AJ238799) eine HCV-cDNA erzeugt, welche die 5'-interne Ribosomeneintrittsstelle (IRES), das Neo-Gen, die EMCV-IRES und die HCV nichtstrukturellen Proteine, NS3-NS5B und 3'NTR codiert. In vitro-Transkripte der cDNA wurden in Huh7-Zellen transfektiert, und die Selektion von Zellen, die das HCV-Replicon konstituierend exprimieren, wurde in Gegenwart des wählbaren Markers Neomycin (G418) erzielt. Die so erhaltenen Zellinien wurden entsprechend der Produktion von positiver und negativer RNA und Protein über die Zeit charakterisiert.
Huh7-Zellen, die das HCV-Replicon konstituierend exprimieren, wurden in DMEM mit 10% FCS (fetales Kälberserum) und 1 mg/ml G418 (Gibco-BRL) gezogen. Die Zellen waren in der vorhergehenden Nacht in sterilen Zellkulturplatten mit 96 Vertiefungen ausgesät worden (1,5 × 10⁴ Zellen/Vertiefung). Die Verbindungen wurden in DMEM mit 4% FCS, 1:100 Penicillin/Streptomycin, 1:100 L-Glutamin und 0,5% DMSO zubereitet. Den Zellen wurden Verbindungs/DMSO-Gemische zugesetzt und 4 Tage bei 37°C inkubiert. Nach 4 Tagen wurden die Zellen entweder unter Verwendung des Rneasy-Kits (Qiagen) lysiert, um RNA für eine EC₅₀-Bestimmung zu isolieren und zu reinigen, oder unter Verwendung von Alamar-Blue (Trek Diagnotstic Systems) durch eine CC₅₀-Auslesung auf ihre Zytotoxizität ausgewertet. Für eine Bestimmung des EC₅₀-Werts wurde gereinigte Gesamt-RNA unter Verwendung von RiboGreen (Jones L. J., Yue S. T., Cheung C. Y., Singer V. L., Anal. Chem., 265(2): 368–74 (1998)) normalisiert und die relative Quantifizierung der HCV-RNA-Expression unter Verwendung des Verfahrens von Taqmann (Kolykhalov A. A., Mihalik K., Feinstone S. M., Rice C. M., Journal of Virology 74, 2046–2051 (2000)) ausgewertet. Kurz gesagt, wurde auf ein Volumen von 5 μl (≤ 1 ng) zubereitete RNA zu einem 20 μl Ready-Mix, der folgendes enthielt: 5X EZ rTth-Puffer, 3 mM MnOAc₂, 3 mM dNTPs, 200 nM Forward-Primer, 600 nM Reverse-Primer, 100 nM Probe und rTth-Ppolymerase, zugesetzt. Proben mit bekannten Konzentrationen des HCV-RNA-Transkripts wurden als Standards verwendet. Die HCV-RNA-Expression wurde unter Verwendung des folgenden Cyclusprotokolls (95°C, 1 min; 60°C, 0,5 min; 95°C, 2 min; 40 Cyclen mit 94°C, 0,5 min, 60°C; 1 min; und abschließend 60°C, 10 min) wie im Perkin Elmer-Handbuch beschrieben quantifiziert. Die Toxizität der Verbindung (CC₅₀) wurde durch Zusetzen von 1/10-tel Volumen Alamar-Blue zu dem Inkubationsmedium der Zellen bestimmt. Nach 4 h wurde das Fluoreszenzsignal aus jeder Vertiefung ausgelesen, wobei eine Anregungswellenlänge von 530 nm und eine Emissionswellenlänge von 580 nm unter Verwendung des Cytofluor Series 4000-Geräts (Perspective Biosystems) verwendet wurde.
in vivo PK-Untersuchungen bei Ratten
Alle Tierexperimente wurden gemäß den USDA-Richtlinien des Animal Welfare Act durchgeführt. Um die systemische Exposition und die Leberexposition zu ermitteln, wurden repräsentative Verbindungen oral (Magenintubation) oder intravenös (Bolus oder Infusion) an männliche Sprague Dawley-Ratten, die Dauerkanülen in den Halsvenen trugen, verabreicht. Nach vorbestimmten Zeiten nach der Dosierung wurden durch die implantierten Kanülen serielle Blutproben entnommen. Das Plasma wurde durch Zentrifugieren von EDTA-behandeltem Blut getrennt und bis zur Analyse bei –20°C aufbewahrt. Nach Kohlendioxid-Erstickung wurde den Ratten die Leber entnommen, mit Kochsalzlösung gespült und trocken getupft. Zur Analyse wurde ein Abschnitt mit 2 g des äußeren Teils eines Lappens zerhackt und mit 4 ml 80% Acetonitril/HBSS-Puffer homogenisiert. Nach dem Zentrifugieren wurde der Überstand bis zur Analyse bei –20°C aufbewahrt. Die Quantifizierung der repräsentativen Verbindungen im Plasma und in homogenisierten Proben der Leber wurden durch ein spezifisches LC/MS/MS-Verfahren, das für jede Verbindung optimiert war, durchgeführt.
Biologische Beispiele
In der nachstehenden Tabelle 1 sind repräsentative Verbindungen I der Erfindung, die gemäß dem vorstehend beschriebenen Verfahren in vitro getestet wurden, aufgeführt.
Aktivität in Zellen und Spezifität:
Repräsentative Verbindungen der Erfindung wurden durch den HCV-Replikon-Zelltest und einen oder mehreren der beschriebenen Spezifitätstests untersucht. Beispielsweise wurde für Verbindung 58 gefunden, dass sie bei dem Enzymtest einen IC₅₀-Wert von 17 nM gegen den NS3/4A-Stamm aufweist. Ähnliche Werte der Wirkungsstärke wurden mit den veröffentlichten H77C-(IC₅₀-Wert von 10 nM) und J4L6S-(IC₅₀-Wert von 8 nM)-Stämmen erhalten. Der EC₅₀-Wert in dem Replikon-Test betrug 250 nM. Von dieser Verbindung wurde auch gezeigt, dass sie über ein Potential für eine in vivo-Wirksamkeit verfügt, da bei einer oralen oder intravenösen Dosierung der Verbindung eine virale Zielexposition erreicht wurde.
Bei den Spezifitätstests wurde von der gleichen Verbindung gefunden, dass sie folgende Aktivität aufweist: HLE = 35 μM; PPE > 100 μM; Chymotrypsin > 100 μM; Cathepsin B > 100 μM. Diese Ergebnisse zeigen, dass diese Familie von Verbindungen hochspezifisch für die NS3-Protease ist, und dass viele ihrer Mitglieder die Replikation des HCV-Replicon hemmen können.
Von den untersuchten Verbindungen wurde gefunden, dass sie Aktivitäten in folgenden Bereichen aufweisen:
IC₅₀ Aktivitätsbereiche: A < 50 μM; B < 5 μM; C < 0,5 μM; D < 0,05 μM.
EC₅₀ Aktivitätsbereiche: A < 50 μM; B < 5 μM; C < 0,5 μM; D < 0,05 μM.

Claims

Verbindung der Formel
wobei: (a) R₁ C_1-8-Alkyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl) ist, welche alle gegebenenfalls ein bis drei Mal mit Halogen, Cyano, Nitro, C_1-6-Alkoxy, Amido, Amino oder Phenyl substituiert sind, oder R₁ C₆- oder C₁₀-Aryl ist, welches gegebenenfalls ein bis drei Mal mit Halogen, Cyano, Nitro, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, Amido, Amino oder Phenyl substituiert ist; (b) m 1 oder 2 ist; (c) n 1 oder 2 ist; (d) R₂ C_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl oder C_3-7-Cycloalkyl ist, jeweils gegebenenfalls ein bis drei Mal mit Halogen substituiert, oder R₂ H ist; (e) R₃ C_1-8-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit Phenyl, C_3-12-Alkenyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl), wobei der Cycloalkylrest oder Alkylcycloalkylrest gegebenenfalls mit Hydroxy, C_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl substituiert ist; oder C_1-6-Alkoxy ist, oder R₃, zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das es gebunden ist, einen C_3-7-Cycloalkylrest, gegebenenfalls substituiert mit C_2-6-Alkenyl, bildet; (f) Y H, Phenyl, substituiert mit Nitro, Pyridyl, substituiert mit Nitro, oder C_1-6-Alkyl ist, wobei der Alkylrest gegebenenfalls mit Cyano, OH oder C_3-7-Cycloalkyl substituiert ist; (g) B H, C_1-6-Alkyl, R₄-(C=O)-, R₄O(C=O)-, R₄-N(R₅)-C(=O)-, R₄-N(R₅)-C(=S)-, R₄SO₂- oder R₄-N(R₅)-SO₅- ist; (h) R₄ (i) C_1-10-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit Phenyl, Carboxyl, C_1-6-Alkanoyl, 1 bis 3 Halogenatomen, Hydroxy, -OC(O)C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; oder -O-Phenyl, gegebenenfalls substituiert mit Halogen oder C_1-6-Alkoxy; (ii) C_3-7-Cycloalkyl, C_3-7-Cycloalkoxy oder C_4-10-Alkylcycloalkyl, alle gegebenenfalls substituiert mit Hydroxy, Carboxyl, (C_1-6-Alkoxy)carbonyl, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; (iii) Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; Amido oder (Niederalkyl)amido; (iv) C₆- oder C₁₀-Aryl oder C_7-16-Aralkyl, alle gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Halogen, Nitro, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; oder (v) Het oder (Niederalkyl)-Het, beide gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; (vi) Bicyclo(1.1.1)pentan; (vii) -C(O)OC_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl, C_2-6-Alkinyl ist; und (i) R₅ H oder C_1-6-Alkyl ist, wobei der C_1-6-Alkylrest gegebenenfalls mit 1 bis 3 Halogenatomen substituiert ist; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz, Solvat oder Prodrug davon.
Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei m 2 ist.
Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei n 1 ist.
Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei R₂ Ethyl oder Vinyl ist.
Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei R₃ C_1-6-Alkyl ist.
Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei m 2, n 1 und R₂ Ethyl ist.
Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei m 2, n 1 und R₂ Vinyl ist.
Verbindung gemäß Anspruch 1, 6 oder 7, wobei R₁ Cyclopropyl ist.
Verbindung gemäß Anspruch 1, 6 oder 7, wobei R₁ Cyclobutyl ist.
Verbindung gemäß Anspruch 1, 6 oder 7, wobei R₁ ein gegebenenfalls substituierter Phenylrest ist.
Verbindung gemäß Anspruch 1 der Formel
wobei: (a) R₁₁ C_1-8-Alkyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl), Naphthyl oder Phenyl ist, wobei der Phenylrest gegebenenfalls ein bis drei Mal mit Halogen, Cyano, Nitro, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, Amido oder Phenyl substituiert ist; (b) R₁₂ C_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl oder H ist; (c) R₃ C_1-8-Alkyl, C_3-12-Alkenyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl) ist, wobei der Cycloalkylrest oder Alkylcycloalkylrest gegebenenfalls mit Hydroxy, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkenyl oder C_1-6-Alkoxy substituiert ist; (d) Y H oder C_1-6-Alkyl ist, wobei der Alkylrest gegebenenfalls mit Cyano oder C_3-7-Cycloalkyl substituiert ist; (e) B H, R₄-(C=O)-, R₄O(C=O)-, R₄-N(R₅)-C(=O)-, R₄-N(R₅)-C(=S)-, R₄SO₂- oder R₄-N(R₅)-SO₂- ist; (f) R₄ (i) C_1-10-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit Carboxyl, C_1-6-Alkanoyl, Hydroxy, C_1-6-Alkoxy, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; (ii) C_3-7-Cycloalkyl, C_3-7-Cycloalkoxy oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl), alle gegebenenfalls substituiert mit Hydroxy, Carboxyl, (C_1-6-Alkoxy)carbonyl, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; (iii) Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; Amido; oder (Niederalkyl)amido; (iv) C₆- oder C₁₀-Aryl oder C_7-16-Aralkyl, alle gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; oder (v) Het oder (Niederalkyl)-Het, beide gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, ist; und (g) R₅ H oder C_1-6-Alkyl ist; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz, Solvat oder Prodrug davon.
Verbindung nach Anspruch 1 der Formel
wobei: (a) R₁₁ C_1-8-Alkyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl), Naphthyl oder Phenyl ist, wobei der Phenylrest gegebenenfalls ein bis drei Mal mit Halogen, Cyano, Nitro, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, Amido oder Phenyl substituiert ist; (b) R₃ C_1-8-Alkyl, C_3-12-Alkenyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl) ist, wobei der Cycloalkylrest oder Alkylcycloalkylrest gegebenenfalls mit Hydroxy, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkenyl oder C_1-6-Alkoxy substituiert ist; (c) Y H oder C_1-6-Alkyl ist, wobei der Alkylrest gegebenenfalls mit Cyano oder C_3-7-Cycloalkyl substituiert ist; (d) B H, R₄-(C=O)-, R₄O(C=O)-, R₄-N(R₅)-C(=O)-, R₄-N(R₅)-C(=S)-, R₄SO₂- oder R₄-N(R₅)-SO₂- ist; (e) R₄ (i) C_1-10-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit Carboxyl, C_1-6-Alkanoyl, Hydroxy, C_1-6-Alkoxy, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; (ii) C_3-7-Cycloalkyl, C_3-7-Cycloalkoxy oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl), alle gegebenenfalls substituiert mit Hydroxy, Carboxyl, (C_1-6-Alkoxy)carbonyl, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; (iii) Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; Amido; oder (Niederalkyl)amido; (iv) C₆- oder C₁₀-Aryl oder C_7-16-Aralkyl, alle gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; oder (v) Het oder (Niederalkyl)-Het, beide gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, ist; und (f) R₅ H oder C_1-6-Alkyl ist; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz, Solvat oder Prodrug davon.
Verbindung nach Anspruch 1 der Formel
wobei: (a) R₁₁ C_1-8-Alkyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl), Naphthyl oder Phenyl ist, wobei der Phenylrest gegebenenfalls ein bis drei Mal mit Halogen, Cyano, Nitro, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, Amido oder Phenyl substituiert ist; (b) R₃ C_1-8-Alkyl, C_3-12-Alkenyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl) ist, wobei der Cycloalkylrest oder Alkylcycloalkylrest gegebenenfalls mit Hydroxy, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkenyl oder C_1-6-Alkoxy substituiert ist; (c) Y H oder C_1-6-Alkyl ist, wobei der Alkylrest gegebenenfalls mit Cyano oder C_3-7-Cycloalkyl substituiert ist; (d) B H, R₄-(C=O)-, R₄O(C=O)-, R₄-N(R₅)-C(=O)-, R₄-N(R₅)-C(=S)-, R₄SO₂- oder R₄-N(R₅)-SO₂- ist; (e) R₄ (i) C_1-10-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit Carboxyl, C_1-6-Alkanoyl, Hydroxy, C_1-6-Alkoxy, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; (ii) C_3-7-Cycloalkyl, C_3-7-Cycloalkoxy oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl), alle gegebenenfalls substituiert mit Hydroxy, Carboxyl, (C_1-6-Alkoxy)carbonyl, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; (iii) Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; Amido; oder (Niederalkyl)amido; (iv) C₆- oder C₁₀-Aryl oder C_7-16-Aralkyl, alle gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amido; (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; oder (v) Het oder (Niederalkyl)-Het, beide gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, ist; und (f) R₅ H oder C_1-6-Alkyl ist; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz, Solvat oder Prodrug davon.
Verbindung der Formel
wobei: (a) R₁₁ C_1-8-Alkyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl), Naphthyl oder Phenyl ist, wobei der Phenylrest gegebenenfalls ein bis drei Mal mit Halogen, Cyano, Nitro, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkoxy, Amido oder Phenyl substituiert ist; (b) R₃ C_1-8-Alkyl, C_3-12-Alkenyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl) ist, wobei der Cycloalkylrest oder Alkylcycloalkylrest gegebenenfalls mit Hydroxy, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkenyl oder C_1-6-Alkoxy substituiert ist; (c) Y H oder C_1-6-Alkyl ist, wobei der Alkylrest gegebenenfalls mit Cyano oder C_3-7-Cycloalkyl substituiert ist; (d) B H, R₄-(C=O)-, R₄O(C=O)-, R₄-N(R₅)-C(=O)-, R₄-N(R₅)-C(=S)-, R₄SO₂- oder R₄-N(R₅)-SO₂- ist; (e) R₄ (i) C_1-10-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit Carboxyl, C_1-6-Alkanoyl, Hydroxy, C_1-6-Alkoxy, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; (ii) C_3-7-Cycloalkyl, C_3-7-Cycloalkoxy oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl), alle gegebenenfalls substituiert mit Hydroxy, Carboxyl, (C_1-6-Alkoxy)carbonyl, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; (iii) Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; Amido; oder (Niederalkyl)amido; (iv) C₆- oder C₁₀-Aryl oder C_7-16-Aralkyl, alle gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; oder (v) Het oder (Niederalkyl)-Het, beide gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, ist; (f) R₅ H oder C_1-6-Alkyl ist; (g) n 1 oder 2 ist; und (h) p 1, 2, 3, 4 oder 5 ist; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz, Solvat oder Prodrug davon.
Verbindung nach Anspruch 11, 12, 13 oder 14, wobei R₁₁ ausgewählt ist aus Cyclopropyl, Cyclobutyl oder gegebenenfalls substituiertem Phenyl.
Verbindung der Formel
wobei: (a) R₃₁ C_1-8-Alkyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl) ist, alle gegebenenfalls substituiert mit Hydroxy, Halogen, C_1-6-Alkoxy, C_1-6-Thioalkyl, Amido, Amino, (C_1-6-Alkyl)amido, C₆- oder C₁₀-Aryl, C_7-16-Aralkyl, Het oder (C_1-6-Alkyl)-Het, wobei der Arylrest, Arylalkylrest oder Het-Rest gegebenenfalls mit Halogen, Alkyl oder Niederalkyl-Het substituiert ist; (b) n 1 oder 2 ist; (c) R₃₂ H, C_1-6-Alkyl, C_1-3-Alkoxy, C_3-7-Cycloalkyl, C_2-6-Alkenyl oder C_2-6-Alkinyl ist, alle gegebenenfalls substituiert mit Halogen; (d) R₁₃ C_1-8-Alkyl, C_3-12-Alkenyl, C_3-7-Cycloalkyl, C_4-13-Cycloalkenyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl) ist, alle gegebenenfalls substituiert mit Hydroxy, C_1-6-Alkoxy, C_1-6-Thioalkyl, Amino, Amido, (Niederalkyl)amido, C₆- oder C₁₀-Aryl oder C_7-16-Aralkyl; (e) Y₂ H oder C₁-C₆-Alkyl ist; (f) B₂ H, R₁₄-(C=O)-; R₁₄O(C=O)-, R₁₄-N(R₁₅)-C(=O)-; R₁₄-N(R₁₅)-C(=S)-; R₁₄SO₂- oder R₁₄-N(R₁₅)-SO₂- ist; (g) R₁₄ (i) C_1-10-Alkyl, gegebenenfalls substituiert mit Carboxyl, C_1-6-Alkanoyl, Hydroxy, C_1-6-Alkoxy, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; (ii) C_3-7-Cycloalkyl, C_3-7-Cycloalkoxy oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl), alle gegebenenfalls substituiert mit Hydroxy, Carboxyl, (C_1-6-Alkoxy)carbonyl, Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, Amido oder (Niederalkyl)amido; (iii) Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; Amido; oder (Niederalkyl)amido; (iv) C₆- oder C₁₀-Aryl oder C_7-16-Aralkyl, alle gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl; oder (v) Het oder (Niederalkyl)-Het, beide gegebenenfalls substituiert mit C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amido, (Niederalkyl)amido oder Amino, gegebenenfalls mono- oder disubstituiert mit C_1-6-Alkyl, ist; und (h) R₁₅ H oder C_1-6-Alkyl ist.
Salz, Solvat oder Prodrug einer Verbindung gemäß Anspruch 16.
Verbindung gemäß Anspruch 16, wobei R₃₁ C_3-6-Cycloalkyl, C_4-10-(Alkylcycloalkyl), C_1-8-Alkyl, CF₃ oder CCl₃ ist.
Verbindung gemäß Anspruch 16, wobei B₂ ein Acylderivat der Formel R₁₄-O-(C=O)- oder ein Carboxyl der Formel R₁₄-O-(C=O)- ist.
Verbindung gemäß Anspruch 16, wobei R₂ H, C_1-3-Alkyl, C_3-5-Cycloalkyl oder C_2-4-Alkenyl ist, alle gegebenenfalls substituiert mit Halogen.
Verbindung gemäß Anspruch 16, wobei R₃₁ C_1-8-Alkyl, C_3-7-Cycloalkyl oder C_4-10-(Alkylcycloalkyl), alle gegebenenfalls substituiert mit Hydroxy, C_1-6-Alkoxy, C_1-6-Thioalkyl, Acetamido oder C₆- oder C₁₀-Aryl, ist.
Verbindung gemäß Anspruch 16, wobei B(CH₃)₃-O-CO- ist; Y H ist; n 1 ist; R₃₁ Methyl, Cyclopropyl oder -CF₃ ist; R₃₂ Ethyl oder Vinyl ist; und R₁₃ t-Butyl, i-Propyl, s-Butyl, i-Butyl oder Cyclohexylmethyl ist.
Arzneimittel, umfassend (a) eine Verbindung gemäß den Ansprüchen 1 bis 22 oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz, Solvat oder Prodrug davon; und (b) einen pharmazeutisch verträglichen Träger.
Verwendung einer Verbindung gemäß den Ansprüchen 1 bis 22 oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes, Solvats oder Prodrugs davon bei der Herstellung eines Medikaments zur Hemmung der HCV-NS3-Protease
Verwendung einer Verbindung gemäß den Ansprüchen 1 bis 22 oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes, Solvats oder Prodrugs davon bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer HCV-Infektion in einem Säuger.