DE3853671T2

DE3853671T2 - Reagens und Verfahren zur Messung von Leukozyten und Hämoglobin im Blut.

Info

Publication number: DE3853671T2
Application number: DE3853671T
Authority: DE
Inventors: Yukio Hamaguchi; Yukio Tsujino
Original assignee: Sysmex Corp
Current assignee: Sysmex Corp
Priority date: 1988-01-27
Filing date: 1988-11-04
Publication date: 1995-10-19
Anticipated expiration: 2008-11-05
Also published as: EP0325710A2; EP0325710B1; US5116539A; JP2619900B2; DE3853671D1; JPH01191057A; EP0325710A3

Description

Die Erfindung betrifft ein Reagenz zur Messung von Leukocyten und Hämoglobin in Blutproben.
Messungen von Leukocyten und Hämoglobin in Blutproben sind von äußerster Wichtigkeit für die klinische Diagnose von solchen Krankheiten wie Leukämie und Anämie. Messungen von Eosinophilen, die zur Klasse der Leukocyten gehören, sind wichtig für die Diagnose allergischer Erkrankungen.
Ein Standardverfahren zur Leukocytenmessung ist das manuelle Auszählverfahren, welches auf der Beobachtung unter einem Mikroskop beruht. Dieses visuelle Auszählverfahren ist jedoch zeitaufwendig und erfordert mühsame Prozeduren, besonders wenn man Eosinophile zählen will, da es die Verdünnung einer Blutprobe mit Hinkelman's Lösung, Randolph's Lösung und anderen Verdünnungslösungen, die saure Farbstoffe enthalten, welche die Erythrocyten lysieren, während sie selektiv Eosinophil-Granula färben, und anschließendes Zählen der individuellen Eosinophilen auf einer Glasplatte umfaßt.
Automatische Blutanalysatoren werden ebenfalls üblicherweise zum Zählen von Leukocyten in Blutproben eingesetzt. Leukocytenzählung mit einem automatischen Blutanalysator beginnt mit der Lyse von Erythrocyten in einer Blutprobe durch Zugabe eines erythrolytischen Mittels, um so eine Probe herzustellen, die nur intakte Leukocyten enthält. Man läßt diese Probe durch einen kleinen Kanal oder eine feine Öffnung in die Nachweisvorrichtung des Analysators treten. Die Anzahl von Leukocyten wird durch Messen des elektrischen oder optischen Signals gezählt, das als Reaktion des Durchtritts der einzelnen Leukocyten erzeugt wird.
Es wurde jüngst eine kompliziertere Apparatur entwickelt, die verschiedene Arten von Leukocyten, einschließlich Granulocyten, Monocyten und Lymphocyten, durch Klassifikation über den Unterschied in der Intensität der erhaltenen Signale zählt. Eine Apparatur ist ebenfalls handelsüblich erhältlich, die Granulocyten, klassifiziert in Neutrophile, Eosinophile und Basophile, zählt. Diese Apparatur ermöglicht viel leichter die Zählung von Eosinophilen als das visuelle Zählverfahren.
EP-A-0 316 453, ein Dokument gemäß Artikel 54 (3) EPÜ, beschreibt ein Verfahren zur Klassifizierung von Leukocyten. Dieses Verfahren beschreibt jedoch nicht die gleichzeitige Messung von Hämoglobin.
Hämoglobinmessungen, durchgeführt durch Umwandlung von Hämoglobin in alkalisches Hämatin D-575 als ersten Schritt, sind beschrieben (EP-A-0 003 340) . WO-A-8403771 beschreibt ein Hämoglobinmessverfahren, bei dem alkalisches Metallcyanid als Chromagen-bildendes Mittel verwendet wird und quaternäre Ammoniumsalze als Reagens für die Erythrocytenlyse eingesetzt werden.
Hämoglobinmessungen werden üblicherweise durchgeführt, indem zunächst Bluthämoglobin in Cyanmethämoglobin (HiCN) durch Reaktion eines Lysemittels, das Kaliumeisen-(III)- cyanid und Cyan enthält, umgewandelt und anschließender Messung einer Absorption bei einer spezifischen Wellenlänge. Dieses Verfahren, das im allgemeinen als Cyanmethämoglobinverfahren bezeichnet wird, oder eine Modifikation davon, kann auch zur automatischen Blutanalyse angewendet werden, da die Probe für Leukocytenmessungen, die oben beschrieben ist, direkt als Probe für die Hämoglobinmessung verwendbar ist.
Ein Problem beim Cyanmethämoglobinverfahren besteht darin, daß die Handhabung des Reagens Sicherheitsrisiken in sich brigt, da das Reagens toxisches Cyan enthält. Zusätzlich muß die Abfallflüssigkeit aus den Messungen nach Zersetzung des darin vorkommenden Cyans mit einer geeigneten Chemikalie, wie Natriumhypochlorid, entsorgt werden. Hinsichtlich der Eliminierung dieser Nachteile wurde ein Verfahren vorgeschlagen, bei dem Bluthämoglobin in Oxyhämoglobin (HbO&sub2;) umgewandelt wird, und seine Absorption bei einer spezifischen Wellenlänge gemessen wird. Dieses Verfahren, im allgemeinen als Oxyhämoglobinverfahren bezeichnet, verwendet kein Cyan und birgt daher keine Sicherheitsrisiken bei der Handhabung des Reagens. Ferner kann der erhaltene flüssige Abfall auf eine sehr einfache Weise entsorgt werden.
Das konventionelle Oxyhämoglobinverfahren hat jedoch dahingehend einen Nachteil, daß das lytische Reagens nicht nur Erythrocyten lysiert, sondern auch die Größe der Leukocyten sehr stark verkleinert. Dieses ist gut für die Absorptionsmessungen, da es die Streuung von Licht durch Leukocyten minimiert, andererseits wird es unmöglich, Leukocyten mit dem lytischen Reagens zu messen.
Um dieses Problem zu vermeiden, werden Blutanalysen mit automatischen Analysatoren nach dem Oxyhämoglobinverfahren durchgeführt, indem man separat hergestellte Proben für Hämoglobin und Leukocyten durch zwei Nachweisbereiche durchtreten läßt, einen für die Hämoglobinmessung und den anderen für die Leukocytenmessung. Jedoch zeigt dieses Verfahren Nachteile hinsichtlich des Erfordernisses einer komplizierten Ausrüstung und bei der Verursachung hoher Kosten, da nicht nur zwei getrennte Nachweisbereiche notwendig sind, sondern auch zwei Flüssigkeitsleitungen zur Herstellung für die Meßproben erforderlich sind.
Falls mit einem automatischen Blutanalysator, der mit einem Nachweisbereich für Eosinophilmessungen ausgerüstet ist, Hämoglobin in diesem Nachweisbereich durch das Oxyhämoglobinverfahren gemessen werden kann, besteht kein Bedürfnis mehr, einen getrennten Nachweisbereich für die Hämoglobinmessung bereitzustellen, was zu einer Vereinfachung des Gesamtaufbaues des Geräts führt. Leukocytenzählung kann im Nachweisbereich für die Leukocytenmessung wie im Stand der Technik durchgeführt werden.
Aber auch ein automatischer Blutanalysator, der mit einem Nachweisbereich für die Klassifizierung von Leukocyten in Eosinophile und andere Typen ausgerüstet ist, ist nicht in der Lage, Hämoglobin unter Verwendung einer Probe für die Leukocytenklassifizierung (oder einer Probe für die Eosinophilmessung) zu messen. Es besteht daher das Bedürfnis für die Entwicklung eines Verfahrens, das gleichzeitiges Messen von Leukocyten oder auch Eosinophilen in einer Probe, die für die Durchführung des Oxyhämoglobinverfahrens präpariert wurde, erlaubt. Ein weiterer Vorteil würde durch ein solches Verfahren gegeben, falls seine Verwendung das Zählen von Leukocyten klassifiziert in andere Typen, einschließlich Granulocyten, Monocyten und Lymphocyten, erlaubt.
Die Erfindung erfüllt die oben erwähnten Bedürfnisse, indem ein Verfahren zur Messung von sowohl Leukocyten und Hämoglobin zur gleichen Zeit zur Verfügung gestellt wird, umfassend:
(1) Zugeben eines wasserlöslichen Reagens, bestehend im wesentlichen aus einer wäßrigen Lösung von:
(a) einem nichtionischen oberflächenaktiven Mittel auf Polyoxyethylenbasis, dargestellt durch die Formel:
R&sub1;-R&sub2;- (CH&sub2;CH&sub2;O)n-H
worin R&sub1; eine Alkyl-, Alkenyl- oder Alkynylgruppe mit 10 bis 20 Kohlenstoffatomen ist, R&sub2; ist -O-,
oder -COO-, und n ist eine ganze Zahl von 10 bis 30, und
(b) einem Puffer zur Einstellung des pH-Wertes der Lösung innerhalb des Bereichs von 3 bis 11, zu einer Blutprobe, und anschließend
(2) Zählen der so behandelten Blutprobe in einem automatischen Blutanalysator.
Falls dieses Verfahren für den speziellen Zweck der Eosinophilmessung verwendet wird, ist das Pufferagens eines, das zur Einstellung des ph in einer wäßrigen Lösung innerhalb des Bereichs des Bereichs von 5 bis 11 in der Lage ist.
Fig. 1 ist ein zweidimensionales Verteilungsdiagramm, welches die Ergebnisse der Klassifizierung von Leukocyten in Beispiel 1 zeigt;
Fig. 2 zeigt eine Hämoglobinabsorptionskurve, erhalten in den Beispielen 1 und 2;
Fig. 3 ist ein Verteilungsdiagramm, das die Ergebnisse der Eosinophilmessung, durchgeführt in Beispiel 2, zeigt; und
Fig. 4 ist eine graphische Darstellung, die die Korrelation zwischen den Ergebnissen der in Beispiel 2 durchgeführten Eosinophilmessung und denjenigen der Messung, durchgeführt nach üblichen manuellen Zählverfahren, zeigt.
Falls das Verfahren zur Unterscheidung von Lymphocyten und anderen Typen von Leukocyten oder zur Unterscheidung zwischen Lymphocyten, Granulocyten und anderen Typen von Leukocyten verwendet wird, ist n in der allgemeinen Formel des nicht ionischen oberflächenaktiven Mittels auf der Grundlage eines Polyoxyethylens eine ganze Zahl von 10 bis 30, und R&sub1; ist eine Alkyl-, Alkenyl- oder Alkynylgruppe mit 10 bis 20 Kohlenstoffatomen.
Wenn das im erfindungsgemäßen Verfahren verwendete Reagens zum Blut zugesetzt wird, werden die Erythrocyten im Blut sofort lysiert, und das Hämoglobin wird sogleich in Oxyhämoglobin umgewandelt, was die Messung von Hämoglobin ermöglicht. Die Erythrocytgeisterzellen, die nach der Erythrolyse übrigbleiben, wie auch die Blutplättchen, werden in ihrer Größe in einem solchen Ausmaß verkleinert, daß sie deutlich von Leukocyten in einem automatischen Blutanalysator unterschieden werden können.
Leukocyten im Blut verkleinern sich allmählich nach Zugabe des im Verfahren verwendeten Reagens, sie behalten jedoch eine ausreichende Größe für einen gewissen Zeitraum, um deutlich durch den automatischen Analysator nachgewiesen zu werden. Daher kann die Anzahl der Leukocyten durch Durchführung einer Messung innerhalb eines bestimmten Zeitraums gezählt werden. Nach Verstreichen dieses Zeitraums werden die Kerne aller anderen Leukocyten als Eosinophile nackt, während diejenigen von Eosinophilen intakt bleiben, wodurch die Eosinophile selektiv durch den automatischen Analysator gezählt werden können.
Falls das erfindungsgemäß verwendete Reagens ein solches ist, daß n in der allgemeinen Formel eine ganze Zahl von 10 bis 30 und R&sub1; eine Alkyl-, Alkenyl- oder Alkynylgruppe mit 10 bis 20 Kohlenstoffatomen ist, ermöglicht die Analyse mit einem automatischen Blutanalysator einen ausreichenden Zeitraum, währenddessen Leukocyten konsistent als Lymphocyten und andere Typen oder Lymphocyten, Monocyten und andere Typen je nach Unterschied in der Intensität der detektierten Signale klassifiziert werden können. Die Klassifizierung und die Zählung der Leukocyten kann erfolgreich durchgeführt werden, falls die Messungen innerhalb dieses Zeitraumes abeschlossen werden.
Falls eine Probe, die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellt wird, einen pH im Bereich von 3 bis 11 hat, kann nicht nur die Messung von Leukocyten im Blut durchgeführt werden, sondern es ist auch die Zählung der klassifizierten Leukocyten, und zusätzlich sind Hämoglobinmessungen ebenfalls möglich. Die Probe hat vorzugsweise einen pH von 4 bis 9, damit man die Leukocyten klassifizieren und auf eine effizientere Weise zählen kann. Für Eosinophilmessungen ist der pH-Bereich von 5 bis 11 bevorzugt.
Die folgenden Beispiele dienen dazu, um exemplarische Anwendungen des erfindungsgemäßen Verfahrens, wie auch Messungen, die solche Verfahren verwenden, zu zeigen.

Beispiel 1

Zusammensetzung des Reagens

Nichtionisches, oberflächenaktives Mittel auf Polyethylen-Basis
C&sub1;&sub8;H&sub3;&sub5;-O-(CH&sub2;CH&sub2;O)&sub1;&sub2;-H 0,4 g
Pufferagens
Na&sub2;HPO&sub4;x12H&sub2;O 0,28 g
KH&sub2;PO&sub4; 0,02 g
Agens (NaCl) zur Einstellung des osmotischen Drucks 0,37 g
Konservierungsmittel (Natriumsalz- von 2-Pyridylthio-1-oxid) 0,02 g
Wasser 100 ml
Eine mit dem im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reagens mit der oben spezifizierten Zusammensetzung verdünnte Blutprobe wurde einer Leukocytenmessung für 6 Sekunden bei einem pH von 7,5 und einem osmotischen Druck von 160 mOsm unterzogen, wobei die Temperatur der Probenlösung auf 26ºC gehalten wurde. Die Messung begann 13 Sekunden nach Zugabe des im Verfahren verwendeten Reagens. Die Ergebnisse sind in Fig. 1 gezeigt. Auf der x-Achse des zweidimensionalen Verteilungsdiagramms, in Fig. 1, ist die Intensität der relativen Signale, erhalten, wenn die Messung nach dem DC-Verfahren durchgeführt wurde, und auf der y-Achse ist die Intensität der relativen Signale, erhalten, wenn die Messung nach dem RF-Verfahren durchgeführt wurde, aufgetragen.
Das DC-Verfahren weist jede Veränderung nach, die im elektrischen Strom aufgrund des Unterschieds in der Leitfähigkeit zwischen den Partikeln und dem fluiden Medium, in dem sie suspendiert sind, wenn man eine aus der Suspension geformte Probe durch einen engen Fluidkanal durchtreten läßt, auftritt. In diesem DC-Verfahren ist die Intensität des selektierten Signals im wesentlichen proportional zum Volumen der Partikel. Beim RF-Verfahren läßt man eine Probe, hergestellt durch Suspendieren der Partikel in einem Fluidmedium mit einer verschiedenen dielektrischen Konstante, durch einen Fluidkanal mit einer Vorrichtung, die sehr nahe an zwei benachbarte Elektroden angeordnet ist, treten, und die Veränderung, die in der elektrischen Impedanz zwischen den Elektroden aufgrund des Unterschieds der Dielektrizitätskonstante zwischen den Teilchen und dem fluiden Medium auftritt, wird detektiert. In diesem RF-Verfahren spiegelt die Intensität des detektierten Signals nicht nur die Information hinsichtlich der Größe der Teilchen wieder, sondern gibt auch Informationen hinsichtlich ihrer Struktur und der Natur des Materials, aus dem sie bestehen.
Die Punkte in Fig. 1 bedeuten die Zellen, die DC- und RF- Signale lieferten, von denen die Intensitäten mit den DC- und RF-Verfahren einhergehen. Wie in Fig. 1 gezeigt, werden Leukocyten in drei Populationen&sub1; a, b und c, eingeteilt, die den Granulocyten, Monocyten und Lymphocyten entsprechen. Die Identität einer jeden Population wurde durch Analysieren von Proben, die individuell getrennte Leukocytspezies enthielt, und durch Testen der Korrelation der nach dem visuellen Zählverfahren, festgelegt. Eine Population von Erythrocyten-Geisterzellen ist durch d in Fig. 1 angegeben. Die Summe der Anzahl der Zellen, einschließlich innerhalb der Populationen der Granulocyten, Monocyten und Lymphocyten, stimmte mit der Anzahl der nach dem konventionellen visuellen Verfahren gezählten Leukocyten überein.
Die obgen Ergebnisse zeigen, daß das erfindungsgemäße Verfahren nicht nur das Zählen von Leukocyten im Blut, sondern auch solcher, die bereits in Granulocyten, Monocyten und Lymphocyten klassifiziert sind, ermöglicht. In Beispiel 1 wurden zwei elektrische Nachweisverfahren, als DC- und RF-Verfahren bezeichnet, eingesetzt. Es ist allerdings festzuhalten, daß ein optisches Detektionsverfahren ebenfalls verwendet werden kann. Falls die Anzahl von Lymphocyten die einzige zu ermittelndes Information ist, muß man nur die Leukocyten in Lymphocyten und andere Typen klassifizieren.
Es wurde eine Absorptionskurve für eine Probe erhalten, die dieselbe war, wie diejenige, die in der obigen Leukocytenmessung unter Verwendung des erfindungsgemäß eingesetzten Verfahrens, das ebenfalls oben gezeigt ist, unterzogen wurde. Die Kurve ist in Fig. 2 gezeigt, in der auf der x-Achse die Wellenlänge und auf der y-Achse die Absorption aufgetragen ist. Die Wellenlängenmaxima (541 nm und 576 nm) und -minima (510 nm und 560 nm) auf der Absorptionskurve stimmten überein mit den Absorptionswellenlängen für Oxyhämoglobin, die in Referenzdokumenten, wie dem "Ketsueki Kensa (Blood Testing)", herausgegeben von S. Miwa, Band 3 von "Rinsho Kensa Gijutsu Zensho (Encyklopedia of Clinical Testing Techniques)", Seiten 46 bis 52, 1976, aufgeführt sind. Es wurde daher bestätigt, daß die Zugabe des im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reagens die Umwandlung von Bluthämoglobin in Oxyhämoglobin bewirkte.
In Beispiel 1 begann die Leukocytenmessung 13 Sekunden nach der Zugabe des im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reagens. Es ist jedoch festzuhalten, daß eine Hämoglobinmessung direkt nach der Zugabe dieses im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reagens durchgeführt werden kann. Daher ermöglicht die Erfindung den Abschluß der notwendigen Messung innerhalb eines sehr kurzen Zeitraumes im Vergleich zum Cyanmethämoglobinverfahren, das 3 bis 5 Minuten für die Umwandlung von Hämoglobin in Cyanmethämoglobin erfordert. Wenn keine Notwendigkeit zur Klassifizierung von Leukocyten besteht, und man nur die Leukocytenzählung benötigt, ist es möglich, die Messung mehrerer Sekunden nach der Zugabe des im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reagens zu beginnen, vorausgesetzt, daß die Bedingungen, wie Temperatur der Probenlösung, geeignet ausgewählt sind.

Beispiel 2

Zusammensetzung des Reagens

Nichtionisches, oberflächenaktives Mittel auf Polyoxyethylenbasis
C&sub1;&sub6;H&sub3;&sub3;-O-(CH&sub2;CH&sub2;O)&sub1;&sub4;-H 1,3 g
C&sub1;&sub8;H&sub3;&sub5;-O-(CH&sub2;CH&sub2;O)&sub1;&sub3;-H 0,17 g
Pufferagens
Na&sub2;HPO&sub4;x12H&sub2;O 4,0 g
Agens (NaCl) zur Einstellung des osmotischen Drucks 0,4 g
Konservierungsmittel (Natriumsalz- von 2-Pyridylthio-1-oxid) 0,02 g
Wasser 100 ml
Eine mit einem im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reagens mit der obigen Zusammensetzung verdünnte Blutprobe wurde einer Eosinophilmessung 6 Sekunden bei einem pH von 7,5 und einem osmotischen Druck von 160 mOsm unterzogen, wobei die Temperatur der Probenlösung auf 40ºC gehalten wurde. Die Messung begann 50 Sekunden nach Zugabe des im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reagens. Die Ergebnisse sind in Fig. 3 gezeigt. Auf der x-Achse der in Fig. 3 gezeigten Graphik ist die Intensität der relativen Signale, erhalten, wenn die Messung nach dem DC-Verfahren durchgeführt wurde, und auf der y-Achse die Frequenz der Zellen mit einer bestimmten Intensität der DC-Signale aufgetragen.
Die gepunktete Linie A in Fig. 3 bedeutet die Schwellenstufe, bei der Eosinophile von anderen Zellen abgetrennt werden. Die Population auf der rechten Seite der Linie A ist diejenige der Eosinophile, und ihre Anzahl kann durch Zählen der Anzahl der Zellen, die in dieser Population vorkommen, bestimmt werden. Die Population auf der linken Seite der Linie A umfaßt Erythrocyten- Geisterzellen und die nackten Kerne von anderen Leukocyten als Eosinophilen.
Fig. 4 zeigt die Korrelation der so bestimmten Anzahl von Eosinophilen und derjenigen von Eosinophilen, wie nach üblichen manuellen Zelltechniken bestimmt. Auf der x-Achse der in Fig. 4 gezeigten Graphik ist der Prozentsatz von 500 Zellen in einer Probe aufgetragen, die als Eosinophile durch das visuelle Verfahren identifiziert wurden. Auf der y-Achse ist der Prozentsatz von Leukocyten aufgetragen, die als Eosinophile mit einem automatischen Blutanalysator unter Verwendung des im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reagens gezählt wurden, wobei die Leukocytenzählung mit demselben Analysator nach einem bekannten Verfahren erhalten wurde. Die Anzahl an analysierten Proben war 105. Der Korrelationskoeffizient war 0,9453 und die Regressionslinie war Y = 0,9149 x 1,0651, die als gerade Linie in Fig. 4 gezogen ist. Die gute Korrelation mit dem Verfahren unter Verwendung des erfindungsgemäßen Reagens und dem konventionellen Verfahren bestätigt die Verläßlichkeit der Messung von Eosinophilen unter Verwendung des im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reagenses.
Im Beispiel 2 wurde ein elektrisches Verfahren zum Nachweis, DC-Verfahren genannt, eingesetzt. Es ist jedoch festzuhalten, daß auch andere elektrische Nachweisverfahren, wie auch ein optisches Verfahren angewandt werden können.
Es wurde eine Absorptionskurve für eine Probe erhalten, die dieselbe war, die der obigen Eosiophilmessung unter Verwendung des im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reagens, wie ebenfalls oben gezeigt, unterzogen wurde. Die Kurve war dieselbe wie In Fig. 2 gezeigt.
In Beispiel 2 begann die Eosinophilmessung 50 Sekunden nach der Zugabe des im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reagens. Es ist jedoch festzuhalten, daß eine Hämoglobinmessung unmittelbar nach Zugabe des im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reagenses durchgeführt werden kann. Die Erfindung ermöglicht daher den Abschluß der notwendigen Messung innerhalb eines sehr kurzen Zeitraumes im Vergleich zum Cyanmethämoglobinverfahren, das 3 bis 5 Minuten für die Umwandlung von Hämoglobin in Cyanmethämoglobin erfordert. Je höher der pH-Wert der zu analysierenden Probe ist, umso rascher werden die Kerne von anderen Leukocyten als Eosinophile nackt, wobei die Zeit, bevor die Eosinophilmessung beginnen kann, weiter verkürzt wird. Es ist festzuhalten, daß die Zeit, innerhalb der eine Eosinophilmessung begonnen werden kann, ebenfalls mit der Temperatur einer Probenlösung variiert.
Das erfindungsgemäße Verfahren bietet die folgenden Vorteile. Zuerst ermöglicht es die Messung von Leukocyten und Hämoglobin im zu messenden Blut gleichzeitig unter Verwendung der gleichen Probe. Da Hämoglobin nach dem Oxyhämoglobinverfahren gemessen wird, kann das im erfindungsgemäßen Verfahren verwendete Reagens ohne Sicherheitsrisiko gehandhabt werden, und die Abfallflüssigkeit aus der Messung kann auf eine sehr einfache Weise entsorgt werden. Zweitens ermöglicht das erfindungsgemäße Verfahren die klassifizierte Zählung von Leukocyten im Blut gleichzeitig mit einer Hämoglobinmessung nach dem Oxyhämoglobinverfahren unter Verwendung derselben Probe. Drittens kann eine Hämoglobinmessung unmittelbar nach Zugabe des im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reagenses begonnen werden, wogegen eine Leukocytenmessung nicht begonnen werden kann, nachdem ein Zeitraum von mehreren Sekunden bis ungefähr 10 Sekunden nach Zugabe des erfindungsgemäß verwendeten Reagenses verstrichen. Daher trägt dieses Verfahren zu schnelleren Messungen mit einem automatischen Blutanalysator bei.

Claims

1. Verfahren zur gleichzeitigen Messung von sowohl Leukocyten als auch Hämoglobin, umfassend:

(1) Zugabe eines wasserlöslichen Reagenses, im wesentlichen bestehend aus einer wäßrigen Lösung von:

(a) einem nichtionischen oberflächenaktiven Mittel auf Polyoxyethylenbasis, dargestellt durch die Formel:

R&sub1;-R&sub2;-(CH&sub2;CH&sub2;O)n-H

worin R&sub1; eine Alkyl-, Alkenyl- oder Alkynylgruppe mit 10 bis 20 Kohlenstoffatomen ist, R&sub2; ist -O-,

oder -COO-, und n ist eine ganze Zahl von 10 bis 30, und

(b) einem Puffer zur Einstellung des pH-Wertes der Lösung innerhalb des Bereichs von 3 bis 11, zu einer Blutprobe, und anschließendem

(2) Zählen der so behandelten Blutprobe in einem automatischen Blutanalysator.

2. Verfahren nach Anspruch 1, bei dem das Hämoglobin und die reagensbehandelte Blutprobe unmittelbar nach In-Kontakt-Bringen des Reagenses und Umwandeln des Hämoglobins in Oxyhämoglobin gemessen wird.

3. Verfahren nach Anspruch 1, bei dem Blutleukocyten gezählt und klassifiziert werden.

4. Verfahren zum Messen der Eosinophilen in einer Blutproben, umfassend:

(1) Zugeben eines wasserlöslichen Reagenses, im wesentlichen bestehend aus einer wäßrigen Lösung von

(a) einem nicht ionischen oberflächenaktiven Mittel auf Polyoxyethylenbasis, dargestellt durch die Formel:

R&sub1;-R&sub2;-(CH&sub2;CH&sub2;O)n-H

oder -COO-, und n ist eine ganze Zahl von 10 bis 30, zu einer Blutprobe, und

(b) einem Puffer zur Einstellung des pH-Wertes der Lösung innerhalb des Bereichs von 5 bis 11.

(2) Ermöglichen, daß das Reagens die anderen Leukocyten außer die Eosinophile lysiert, und anschließend

(3) Zählen der intakten Eosinophile.