DE2338254B2 - Verfahren zur Messung des Plasminogengehaltes - Google Patents

Verfahren zur Messung des Plasminogengehaltes

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Description

3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch ge- 48 Stunden dauern. Bei nahezu allen Verfahren wird kennzeichnet, daß die Bildung des Fibrins durch zur Plasminogenbestimmung die Auflösung des Fidie Bestimmung des Zeitpunktes seiner Verfesti- bringerinnsels gemessen, was aber einer Messung nur gung gemessen und die Verminderung des Pias- 20 schwer zugänglich ist. U. a. beruht daher die Länge minogengehaltes durch Vergleich des normalen der vorbekannten Verfahren auf der Schwierigkeit, Verfestigungszeitpunktes mit dem Verfestigungs- die Antipiasmine vom Plasminogen zu trennen, was Zeitpunkt bei beschleunigter Gerinnung gemessen bisher nur unvollständig gelungen ist.
wird. Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein
4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch ge- 25 Verfahren zur Messung des Plasminogengehaltes zu kennzeichnet, daß der Gerinnungsverlauf be- schaffen, das erheblich schneller zu den gewünschten stimmt wird. Meßergebnissen führt und sich daher für die routine-
5. Verfahren nach den Ansprüchen 1 bis 4, mäßige Plaminogenbestimmung eignet.
dadurch gekennzeichnet, daß Plasminogen vor Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch ge-
der Fibrinbildung mittels eines Aktivators in 30 löst, daß der Plasminogengehalt durch Bestimmung Plasmin umgewandelt wird. der Bildung von Fibrin in einer Probe gemessen
6. Verfahren nach Anspruch 1 und wenig- wird.
stens einem der vorausgehenden Ansprüche, da- Insbesondere wird erfindungsgemäß die Bildung
durch gekennzeichnet, daß die Antipiasmine des Fibrins in einer Lösung von Fibrinogen und anti-
durch Iso-amyl-alkohol zur Herstellung des Test- 35 plasminfreiem, plasminaktiviertem Probenplasma
plasmas ausgewaschen werden. unter Beifügung von Thrombin verzögert und der
7. Verfahren nach Anspruch 1 und einem oder Plasminogengehalt durch die Bestimmung der Vermehreren der vorausgehenden Ansprüche, da- zögerung des Gerinnungszeitpunktes festgelegt,
durch gekennzeichnet, daß die Gerinnungsge- Bei der Erfindung aktiviert man antiplasminfreies schwindigkeit von Plasmaproben Gesunder als 40 Plasminogen, z.B. von einem Patienten vor Ein-Vergleichsgröße verwendet wird. setzen einer konstant gewählten Fibrinbildung zu
Plasmin, so daß die plasm inbedingte Fibrinspaltung mit der Fibrinbildung einsetzt. Die Gerinnung bei der Fibrinbildung wird durch die Piasminwirkung
45 verzögert, und die Verzögerung der Gerinnung liefert das Maß für das Plasminogen.
Insbesondere wird erfindungsgemäß die Bildung des Fibrins durch die Bestimmung des Zeitpunktes
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Messung seiner Verfestigung gemessen und die Verminderung
des Plasminogengehaltes. 50 des Plasminogengehaltes durch Vergleich des nor-
Die Erfindung bezieht sich insbesondere auf die malen Verfestigungszeitpunktes mit dem Verfesti-
Bestimmung von Plasminogen im Patientenblut. Sie gungszeitpunki bei beschleunigter Gerinnung gemesist erforderlich, um eine fibrinolytische oder anti- sen.
fibrinolytische Therapie bei thromboembolisch Er- Statt die Zeitpunkte zu bestimmen, kann man
krankten oder bei Patienten mit globaler Gerinnungs- 55 auch den Gerinnungsverlauf festlegen,
störung dosieren und ihren Verlauf kontrollieren zu Die Fibrinbildung kann konstant vorgegeben wer-
können. den, indem eine konstante Menge Fibrinogen durch
Bekanntlich wird bei der Blutgerinnung durch eine konstante Dosis Thrombin zum Gerinnen ge-Thrombin das lösliche Fibrinogen in das unlösliche brach! wird. Die Messung der Fibrinverfestigung Fibrin umgewandelt. Plasmin, welches im Blut als 60 stellt kein Problem dar, weil hierfür Mechaniken in Plasminogen (Vorstufe) vorliegt und durch Anti- Form der sogenannten Koagulometer (z. B. nach plasmine blockiert ist, spaltet das Fibringerinnsel wie- Schnittger-Gross) zur Verfügung stehen,
der auf. Durch Waschen von Citratplasma mit 3 Teilen
In den letzten Jahren ist es auf dieser Grundlage Iso-amyl-alkohol wird die gesamte Antiplasminaktibeispielsweise gelungen, durch den Plasminaktivator 65 vität eliminiert (The Significance of Plasma Inhibi-Streptokinase mit Hilfe des körpereigenen Plasmins tor [s] in the Control of Fibrinolytic [Plasmin] Acti-Blutgerinnsel wieder aufzulösen. Mit dieser Therapie vity in Blood, Monkhouse, F. C. et al., Thrombos. wurden sowohl Thrombosen als auch Herzinfarkte Diathes. haemorrh. 1572, 28, S. 367 bis 375).
3 ' 4
In der Regel wird die Messung so ausgelegt, daß trifugiert Der Überstand wird abgehebert und vei-
die Bildungsgeschwindigkeit des Fibrins mäßig worfen. Darauf ist eine erneute Zentrifugation für
schneller verläuft als die Abbaugeschwindigkeit, etwa 30 Minuten bei etwa 4° C erforderlich. Danach
Das erfindungsgemäße Verfahren wird an Hand wird der Restüberstand verworfen,
der Graphik näher erläutert: S Die eigentliche Messung geschieht wie folgt:
Auf der Abszisse ist die Zeit aufgetragen, während Vorgegeben wird eine definierte Menge Fibrinogen
die Ordinate die Verfestigung bzw. Gerinnung wie- (z. B. 0,1 ml Humannbrinogen-plasminogenfrei der
dergibt Die Parallele zur Abszisse, die mit α bezeich- Firma Behringwerke in einer Konzentration von
net ist, bedeutet den Endpunkt der Messung im 200 mg°/o). Eine Probe antiplasminfreies Patienten-
Koagulometer. io plasma wird hinzugefügt (z. B. 0,1 ml). Hierauf gibt
Die mit 1 bezeichnete Kurve zeigt den Verlauf der man einen Plasminaktivator hinzu (z. B. 1 E Uro-
Fibrinbildung bei einer Probe, die aus Fibrinogen, kinaseinO,l ml).
Urokinase und Thrombin besteht (ohne Plasmin). Nach einer konstanten Aktivierungszeit (z. B.
Bei dem Ausführungsbeispiel ist die Messung so 30 see. bei 37° C) wird Thrombin zugefügt (z. B.
ausgelegt, daß die Bildungsgeschwindigkeit des Fi- 15 Test-Thrombin der Firma Behringwerke, 0,3 E in
brins mäßig schneller verläuft als die Abbaugeschwin- 0,1 ml) und das automatische Zählwerk des Koagu-
digkeit. Bei normalem Plasminogengehalt (100 °/o) lators wird in Gang gesetzt.
ergibt sich die Kurve 3, welche die Fibrinbildung bei Auf der zuvor ermittelten Eichkurve wird das zur
einer Probe aus Fibrinogen, PJasmin (100 "In), Uro- Meßzeil zugehörige Plasminogen in Prozent abge-
kinase und Thrombin wiedergibt. 20 lesen.
Die Kurve 2 zeigt die Bildung von Fibrin in einer Die durch das ernndungsgemäße Verfahren erziel-
Probe aus Fibrinogen, Urokinase und Thrombin, so- baren Verteile bestehen vor allem darin, daß die in
wie Plasmin in 5O°/oiger Verdünnung. den meisten Kliniken vorhandenen üblichen Koagu-
Die Graphik zeigt, daß die Verminderung des lometer zur Durchführung des erfindungsgemäßen
Plasminogens durch die Bestimmung einer für die 25 Verfahrens benutzt werden können. Der Test ist auch
Meßgenauigkeit ausreichenden Verkürzung der Fi- sehr einfach in der Handhabung, so daß er in den
brinbildungszeit erreicht wird. Labors von medizinisch technischen Assistentinnen
Eine Eichkurve erhält man, wenn man die Meß- durchgeführt werden kann.
zeiten, die durch Verdünnung von Plasminogenpro- Die Verkürzung der Meßzeit gegenüber den einben gesunder Versuchspersonen gewonnen werden, in 30 gangs als bekannt vorausgesetzten Verfahren macht ein doppelt logarithmisches Millimeterpapier gegen das erfir.dungsgemäße Verfahren für Routinezwecke die prozentuale Verdünnung aufträgt. Die Punkte er- geeignet. Das erfindungsgemäße Verfahren ist außergeben dann annäherungsweise eine Gerade. dem nennenswert billiger.
Nachfolgend wird ein praktisches Beispiel für das Durch das erfindungsgemäße Verfahren wird es
erfindungsgemäße Meßverfahren beschrieben: 35 möglich, die T ests in der klinischen Diagnostik z. B.
Zunächst erfolgt die Zubereitung von antiplasmin- in Form käuflicher Testsets einzuführen, um z. B.
freiem Plasma. Dazu wird Citratplasma etwa 1 Minute durch Dosierung von Streptokinase nach der Höhe
mit 3 Teilen Iso-amy-alkohol geschüttelt und an- des aktuellen Plasminogenspiegels diese Therapie zu
schließend bei 3000 U/min für etwa 30 Minuten zen- verbessern und Komplikationen zu verringern.
Hierzu 1 Blatt Zeichnungen

Claims (2)

; C/ erfolgreich behandelt. Die Streptokinasebehandlung ' Patentansprüche: konnte jedoch keine breite Anwendung finden, da k bislang die Mortalitätsrate zu hoch war. Das beruht
1. Verfahren zur Messung des Plasminogen- darauf, daß bisher die routinemäßige Plasmipopengehaltes, dadurchgekennzelehnet, daß 5 bestimmung nicht möglich ist, aber bei zunehmender der Plasminogengehalt durch Bestimmung der Piasminaktivierung die Verblutungsgeianr ansicht.
Bildung von Fibrin in einer Probe gemessen Es sind zwar verschiedene Verfahren zur Meswird. sung des Plasminogengehaltes bereits bekannt, z.B.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch ge- der Clot lysis time Recorder, Fa. Medicon Ltd., kennzeichnet, daß die Bildung des Fibrins in io Glasgow, Scotland, der Enzo-Diffusion Fibrin-Plateiner Lösung von Fibrinogen und antiplasmin- ten-Test der Fa. Hyland, Travenol International freiem, plasminaktiviertem Probenplasma unter GmbH, München, und der Plasminogen-Platten-Test Beifügung von Thrombin verzögert und der Pias- der Fa. Behringwerke, Marburg, Lahn. Diese Verminogengehalt durch die Bestimmung der Ver- fahren sind für Routinezwecke ungeeignet, weil sie zögerung des Gerinnungszeitpunktes festgelegt 15 einerseits zu aufwendig sind und andererseits zu viel wird. Zeit erfordern, d.h. in der Regel zwischen 6 und
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