DE2431342A1 - Verfahren zur messung des plasminogengehaltes durch bestimmung der bildung von fibrin in einer probe - Google Patents

Verfahren zur messung des plasminogengehaltes durch bestimmung der bildung von fibrin in einer probe

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Description

8000 MünOi-.n AO.
4egOHerne, Λ|θ1 -|PO R H B £ h Γ ε«,™*«. - ··
P05t!ach 1Λ0 Dipl.-Phys. Eduard Betzier f,,,.^=^ . ■■
Pat.-Anw. Hsrrmann-Trentepohl - - J —
Fernsprecher 51013 Dipl.-Ing. W. Ksirrmann-Trentepohf ' '·'
5 10 14 r Telegrarr.rr.j-i: ·
TelegiammansclmK: ! PATENTANWÄLTE Baüetzpai Munc-.«.·.
Bahrpatente Hs"ie ' Telex 52UJ-0 Telex 08 229 853
2^31342
Γ" t H O I 04 4, Bayerrs-re Vereinsban« >,·.---.= · i-.2?.z.
Dresdner Bank AG herr.e T '.'J--Wi PostschecKkonto Oortrijnj 5Sr ε? ~5"
L , J
RBf A 26 216 X/\:ä.
in der An'wort bit'e anv-^«"
Zuschr.ft bitte nach
; 28. Juni 1974
Dr. med. E. Jacobi , 4006 E r k r a t h , Schinkelstraße 30c
"Verfahren zur Kessung des Plasminogengehaltes durch Bestimmung der Bildung von Fibrin in einer Probe"
1. Zusatz zu Patent (Patentanmeldung P 23 38 254.9-52)
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Messen des Plasminogengehaltes durch die Bestimmung der Bildung von Fibrin in einer Probe, bei dem antiplasminfreies bzw. bis auf die Unwirksamkeit des Antiplasmins verdünntes Plasma einer vorgegebenen Menge Fibrinogenlösung zugesetzt und dieser einen Plasminaktivator enthaltenden Lösung Thrombin zugefügt v/ird, worauf die durch das Plasmin verzögerte Bildung von Fibrin durch die Bestimmung des Zeitpunktes seiner Verfestigung gemessen und durch Vergleich mit dem normalen Verfestigungszeitpunkt der Plasminogengehalt bestimmt wird, nach Patent (Patentanmeldung P 23 38 ^
Das Verfahren nach dem Hauptpatent ermöglicht die Bestimmung des Plasminogengehaltes im Patientenblut durch die Bestimmung der Verzögerung der Fibrinbildung, die durch den Plasminzusatz eintritt und hat datier gegenüber dem vorbekannten
509882/0634
Meßverfahren den Vorteil, daß es infolge verkürzter Meßzeit und durch Verwendung der üblichen Koagulometer in der Klinik für Routinezwecke einsetzbar wird. Das ist die Voraussetzung für eine Therapie von Thrombosen und Herzinfarkten, bei der durch den Plasiainaktivator Streptokinase mit Hilfe des körpereigenen Plasmins Blutgerinnsel wieder aufgelöst werden.
Nach dem Hauptpatent wird der Lösung, die einerseits aus einer vorgegebenen Menge Fibrinogenlösung und andererseits aus dem Plasma besteht, zunächst Piasminaktivator, nämlich Urokinase zugesetzt. Hierauf wird eine Aktivierungszeit unter konstanten Bedingungen eingehalten. Erst dann kann der Thrombinzusatz erfolgen und der Koagulator in Gang gesetzt werden.
Durch Zusatz von Streptokinase wird das Plasminogen aktiviert. Durch Streptokinase kann in einer Verstärkerreaktion durch Piasminbildung in einer für Streptokinase unempfindlichen Fibrinogenlösung, z.B. nicht menschliches Fibrinogen, welches auch nicht menschliches Plasminogen enthält, die Gerinnungszeit verzögert werden. Das Verfahren, das Plasminogen der Probe durch einen Überschuß an Streptokinase in den Aktivator (PP-SK-Komplex) umzuwandeln, den gebildeten Aktivator in einem für den Streptokinaseüberschuß insensitiven System über die Plasminbildung (Verstärkerreaktion) einzusetzen und somit die Auflösungszeit des Gerinnsels zu messen, ist in der Literatur bekannt (z.B. modifizierte Clot - Lysis Methode nach Christensen). Für Routineinessungen ist dieses Verfahren zu aufwendig.
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Setzt man Streptokinase anstelle der im Hauptpatent "beispielsweise genannten Urokinase als Plasrr.inaktivator ein, so erhält man zwar auch eine für die klinische Routine ausreichend "brauchbare Methode. Diese weist aber eine Reihe von schwerwiegenden Nachteilen auf.
Streptokinase muß gelöst und der verdünnten Probe zugesetzt werden. Eine konstante Aktivierungszeit nuß eingehalten und danach die Probe sofort weiterverarbeitet werden. Abweichungen bedingen einen größeren Meßfehler. Von der verdünnten Probe kann nur wenig weiterverarbeitet v/erden. Daher geht viel Streptokinase, die sehr teuer ist, verloren.
Nach Zugabe des so gebildeten Aktivators in die Fibrinogenlösung muß eine zweite Reaktionszeit genau gestoppt werden, bevor das Thrombin die G-erinnungsreaktion in Gang setzt.
Die vorliegende Erfindung löst die Aufgabe, die nach dem Hauptpatent einzuhaltende Aktivierungszeit und die bei Einsatz von Streptokinase einzuhaltende zweite Reaktionszeit auf nur eine Reaktionszeit zu verringern, um somit schneller und genauer zum gewünschten Meßergebnis zu kommen; gleichzeitig soll die Streptokinasemenge verringert werden, um dadurch Kosten zu sparen.
Diese Aufgabe wird beim Gegenstand des Hauptpatentes dadunch gelöst, daß als Plasminaktivator Streptokinase verwendet wird und in der Fibrinogenlösung enthalten ist, bevor dieser Plasma zugesetzt wird.
Gemäß der Erfindung befindet sich also eine konstante Dosis nicht-humaner Streptokinase bereits in der Fibrinogenlösung. Dieses Ver-
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fahren wird nachfolgend anhand eines Beispieles näher erläutert?
Die Zubereitung von ausreichend antiplasminfreiem ^robenplasma erfolgt (nach Christensen) durch eine Verdünnung von 1 : 20. Eine Probe, z.B. 0,2 ml dieser Verdünnung wird in z.B. 0,4 ml einer Stammlösung, bestehend aus z.B. Rinderfibrinogen (z.B. 400 mg%) + Rinderplasminogen + Streptokinase (z.B. 1000 E/ml) hinzugefügt.
Nach einer konstanten Aktivierungszeit wird Thrombin zugefügt und die Gerinnungszeit gemessen.
Dadurch können die Reaktionen Piasminaktivierung und Spaltung von Fibrinogen in einem Arbeitsgang fertig festgelegt werden. Bei einer Verdünnung des Probenplasma von 1 : 20 und anschließender Weiterverarbeitung von 1/20 des Volumens kann somit die benötigte Streptokinasedosis auf 1/20 reduziert werden. Die Meßgenauigkeit durch die eine Meßzeit wird damit verbessert.
Vorzugsweise werden gemäß der Erfindung die Streptokinase als Trockensubstanz und der noch nicht gelöste Fibrinogensatz in einem Gefäß aufbewahrt,und Streptokinase und Fibrinogen werden in einem Arbeitsgang durch Zufügen eines Lösungsmittels in Lösung gebracht.
Patentansprüche
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Claims (2)

  1. Patentansprüche
    Verfahren zum Messen des Plasminogengehaltes durch die Bestimmung der Bildung von Fibrin in einer Probe, bei dem äntiplasminfreies bzw. bis auf die Unwirksamkeit des Antiplasmins verdünntes Plasma einer vorgegebenen Menge Fibrinogenlösung zugesetzt und jsLrx dieser, einen Plasminaktivator enthaltenden Lösung Thrombin zugefügt wird, worauf die durch das Plasmin verzögerte Bildung von Fibrin durch die Bestimmung des Zeitpunktes seiner Verfestigung gemessen und durch Vergleich des normalen Verfestigungszeitpunktes der Plasminogengehalt bestimmt wird, nach Patent . ... ... (Patentanmeldung P 23 3S 254.9-52) ,dadurch ge kennzeichnet , daß als Plasminaktivator Streptokinase verwendet wird und in der Fibrinogenlösung enthalten ist, bevor dieser Plasma zugesetzt wird.
  2. 2. Verfahren nach Anspruch 1,dadurch gekennzeichnet , daß die Streptokinase als Trockensubstanz und der noch nicht gelöste Fibrinogensatz in einem Gefäß aufbewahrt und durch Zufügen eines Lösungsmittels in Lösung gebracht werden.
    509882/0634
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