DE1617899A1 - Lydimycin und Verfahren zu seiner Gewinnung - Google Patents
Lydimycin und Verfahren zu seiner GewinnungInfo
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Description
DR. JUR. DIPL-CHEM. WALTER BEIL -
ALFREDHOEPFENER
DR. JUR. DiPL-CHEM. H.-J. WOLFP : -,
CiR. IUR.-HAM'S Cr\S. BEIL '
ADEtONS)UnSSE 58
Unsere Dir. 12 552
The Upjohn Company Kalamazo ο (Mich.-, V. S t ,A.)
Lydimycin und "Verfahren zu seiner Gewinnung -
Gegenstand der Erfindung ist das neue Antibiotikum Lydimycin und ein Verfahren zu seiner Gewinnung.
Dieses Verfahren besteht darin, daß man den bekannten,
den Actinomyceten angehörenden Mikroorganismus Streptomyces
lydicus BURL 2433 in einem wässrigen, assimilierbare Kohlehydrate und assimilierbaren Stickstoff enthalten Nährmediüm
unter aeroben Bedingungen züchtet, das Kulturmedium vom Mycel befreit, das gebildete Lydimycin auf einem oberflächenaktiven
Mittel adsorbiert, es eluiert, es gegebenenfalls weiter reinigt und es gegebenenfalls in Alkalimetall-,
Erdalkalimetall-, Ammoniumsalze oder Salze mit
Aminen überführt.
Der Streptomyces lydicus HRRL 2433 ist in der US-Patentschrift
3 160 560 im Zusammenhang mit der Herstellung des Antibiotikums Streptolydigin beschrieben.
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Lydimyein hemmt das Wachstum von Nocardia asteroides,
Blastomyces dermatitidis, Geotrichum sp.y Phialophora yerrucosa,
Oryptoooccus neoformans, Histoplasma capsulatum
und Trichophyton mentagrophytes. Es kann daher allein oder
zusammen mit anderen fungiziden Mitteln oder Antibiotika zur Verhinderung oder Beeinträchtigung des Wachstums darauf
ansprechender Mikroorganismen verwendet werden, mit denen Pflanzen, Tiere, einschließlich Säugetieren, Vögeln, Fischen,
Reptilien)und auch Menschen befallen sein.können, Lydimycin
eignet sich ferner für sanitäre Waschlösungen, z.B. zum Händewaschen und Reinigen von G-eräten, Böden oder Möbeln
infizierter Räume oder ideologischer Laboratorien. Es ist
ferner als fungizides Mittel in industriellen Konservierungsmitteln, z.B. als fungizides Spülmittel für gewaschene
Kleidung oder Wäsche und zum Imprägnieren von Papier und
Geweben sowie aur Unterdrückung des Pilzwachstums darauf ansprechender Mikroorganismen in Plattenkulturen und anderen
biologischen Medien brauchbar, Von anderen Antibiotika unterscheidet es sich durch sein charakteristisches
IR-Spektrum, s. Fig. 1,sein charakteristisches Papierchromatogramm,
s:. Fig. 2, sein Molekulargewicht, .seine Elementaranalyse,
optische Drehung, Löslichkeit und sein antibiotisches Spektrum. . ·
Die Herstellung des Lydimyeins erfolg-t wie erwähnt durch ■-Züchtung
des Streptomyces lydicus MRRL 2433 in einem wäss-:
rigen Hährmediumunter aeroben Bedingungen, wobei für die
Herstellung begrenzter Mengen auch Oberflächenkulturen, in Kolben verwendet werden können. Das Nährmedium enthält
eine Kohlenstoffquelle, z.B* ein assimilierbares Kohlehydrat,
und eine Stickstoffquelle, ζ,B. eine assimilierbare
Stickstoffverbindung oder ein proteinhaltiges Material»
Bevorzugte. Kohlenstoffquellen sind u.a. Glucose, brauner Zucker,
Saccharose j G-lycerin, Stärke, Maisstärke , Lactose ,
Dextrin, Melasse und ähnliche Kohlehydratquellen. Bevor-
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zugte Stickstoffquellen sind z.B. Baumwollsaatmehl, Hefe,
autolysierte Brauereihefe mit Milchfeststoffen, pankreatischee
Kaseinhydrolysat, lösliche Destillatrückstände aus
der Alkoholdestillation, tierische Peptonflüssigkeiten,
Fleisch- und Knochenresteund ähnliche stickstoffhaltige Quellen.
Es können auch Kombinationen dieser Kohlenstoff-
und Stickstoffquellen angewendet werden. Spurenmetalle,
z.B. Zink, Magnesium, Mangan, Kobalt, Eisen und dgl. brauchen dem Nährmedium nicht zugesetzt zu werden, da als Komponenten
des Nährmediums Leitungswasser und ungereinigte
Bestandteile verwendet werden.
Das erfindungsgemäße Verfahren kann bei jeder beliebigen
Temperatur, die ein zufriedenstellendes Wachstum des Mikrooganismue
ermöglicht, z.B. zwischen etwa 18 und 40° C, vorzugsweise zwischen etwa 26 und 35° C, durchgeführt werden. Gewöhnlich wird eine optimale Bildung der Verbindung
in etwa 2 bis 10 Tagen erreicht. Während der Fermentation
bleibt das Medium normalerweise nahezu neutral oder sauer.
Der endgültige pH-Wert hängt z.T* von den vorhandenen Puffersubstanzen und z.T. vom Anfangs-pH-Wert des Kulturmediums
ab, das vor der Sterilisierung vorteilhaft auf einen pH-Wert
von etwa 6 bis 8 eingestellt wird*
Wenn die Fermentation in großen Behältern durchgeführt wird,
beimpft man vorzugsweise mit der vegetativen Form und nicht
mit Sporen des Mikroorganismus, um eine Verzögerung bei
der Bildung des Antibiotikums und damit eine unwirtschaftliche Ausnutzung der Anlage zu vermeiden. Zweckmäßig stellt
man ein vegetatives Impfmaterial her, indem man ein geeignetes
Nährmedium mit einer Boden- oder Schrägnährbodenkultur impft» Wenn man auf diese Weise einen Jungen aktiven
vegetativen Impfstoff hergestellt hat, wird "er aseptisch
in die großen Behälter übergeführt. Das für die Herstel-
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lung des vegetativen Impfstoffs verwendete Nährmedium kann das gleiche Nährmedium sein, wie es für die Herstellung
des Antibiotikums verwendet wird. Es kann auch von ihm verschieden sein, solange es so beschaffen ist, däß es
ein gutes Wachstum des Mikroorganismus ermöglicht.
Das erfindungsgemäß erhältliche neue Antibiotikum Lydimycin stellt eine saure Substanz dar, aus deren Elementaranalyse
sich die empirische Formel C-.QH^ .NpO^S ergibt. Lydimycin
ist etwas löslich in Chloroform, Methylenchlorid und ähnlichen halogenieren Kohlenwasserstoffen, Methanol, Äthanol
und ähnlichen Alkoholen, Äthylacetat, Amylacetat, Butylacetat
und ähnlichen aliphatischen Estern, und Aceton, Methyläthylketon, Isopropyl-butyl-keton und ähnlichen niederen
Alkanonen. In Wasser löst es sich in einer Menge von etwa 1 mg/cm . In Wasser vom o pH-Wert etwa 6,0
oder darüber löst es sich wesentlich besser.
Für die Isolierung und Reinigung von Lydimycin können zahlreiche Verfahren angewendet werden, z.B. Lösungsmitbelextraktionen,
Flüssigkeits-Flüsslgkeits-Verteilung in einer Craig-Vorrichtung,
die Verwendung von Adsorptionsmitteln und die Kristallisation aus Lösungsmitteln. Vorzugsweise verwendet
man für die Gewinnung von Lydimycin oberflächenaktive
Adsorptionsmittel, z.B. Entfärbungskohle oder Entfärbungsharze und eluiert das adsorbierte Antibiotikum mit einem
Lösungsmittel. Hierfür kann jedes der vorstehend erwähnten Lösungsmittel verwendet werden. Ein geeignetes Entfärbungeharz
ist Permutit DR (US-Patent 2 702 263). Zweckmäßig entfernt man zunächst das Mycel in üblicher Weise, z.B.
durch Filtrieren oder Zentrifugieren des Kulturmediums. Die geklärte Flüssigkeit wird dann durch eine Säule aus
Aktivkohle geführt und die Säule mit einem Lösungsmittelsystem
aus Wasser und verschiedenen Mengen eines niederen Alkanons (Aceton wirddfcei bevorzugt) eluiert. Das Eluat
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wird zu einer wässrigen lösung eingeengt und dann gefriergetrocknet.
Das auf diese Weise erhaltene trockene lydimycin
kann für Verwendungszwecke, für die keine hochgradige Reinheit
des fungiziden Mittels erforderlich ist, mit anderen
Antibiotika vermischt werden. ■ '
Für die Gewinnung des Lydimycins aus dem Kulturmedium kann
auch ein stark basisches; Anionenaustauscherharz verwendet
werden. Geeignete Anionenaustauscherharze werden erhalten,
wenn man nach dem von Kunin in "Ion Exchange Resins",
2. Auflage (1958), John Wiley and Sons, Inc., auf den Seiten
88 und 97 beschriebenen Verfahren gegebenenfalls mit Divinylbenzol vernetztes Polystyrol chlormethyliert, und
anschließend mit Trimethylamin oder Dirnethyläthanolamin
quaternisiert. Anionenaustauscherharze, dieses Typs werden
unter den Handelsbezeichnungen Dowex-1, Döwex-2, Dowex—5,
Amberlite IR-400, Duolite A-102 und Permutlt S-1 vertrieben. Das -adsorbierte Antibiotikum kann dann auf die vorstehend
beschriebene Weise eluiert und das Bluat wie oben
eingeengt und gefriergetrocknet werden.
Wenn ein Lydimycin höherer Reinheit erwünscht ist, kann
das gefriergetrocknete Präparat einer weiteren Behandlung unterworfen werden, vorteilhaft einer VerteilungsChromatographie
und Lösungsmittelextraktion. Nach einem bevorzugten Reinigungsverfahren wird das gefriergetrocknete wässrige
Lydimycin in einem geeigneten Lösungsmittelsystem aus den oben angegebenen Lösungsmitteln gelöst und durch
eine chromatographische Verteilungskolonne geführt:. Die
aus der Kolonne austretenden Fraktionen werden auf Lydimycin untersucht* Die stark wirksamen Fraktionen werden vereinigt
und zu einer wässrigen Lösung eingeengt,- aus der Kristalle auszufallen beginnen. Die Lydimycinkristalle können
abfiltriert und getrocknet werden. Diejenigen Fraktionen,
aus denen keine Kristalle ausfallen, können zur weiteren
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Reinigung und Bildung von Lydimycinkristallen in einer
Craig-Verteilungsvorrichtung unter Verwendung der oben angegebenen
lösungsmittel verteilt werden. Die auf d;Le vorstehende
Weise erhaltenen Lydimycinkristalle können aus
Methanol umkristallisiert werden und ergeben dann sehr asLnes kristallines lydimycin.
Die Salze des Lydimycins können aus der freien Säure und
einer anorganischen oder organischen Base hergestellt werden, z.B. indem man die freie Säure in Wasser löst, eine
verdünnte Base zusetzt, bis der pH-Wert der Lösung etwa
7 bis 8 beträgt, und die Lösung gefriertrocknet, so daß man einen trockenen Rückstand erhält, der aus dem Lydimycinsalz
besteht. Auf diese Weise lassen sich das Ammonium-, Natrium-, Kalium- und Calciumsalz des Lydimycins herstellen.
Andere Lydimycinsalze, einschließlich solcher mit
organischen Basen wie primären, sekundären und tertiären Monoaminen sowie mit Polyaminen können auf die gleiche
oder in anderer üblicher Weise hergestellt werden. Wertvolle Salze werden ferner mit therapeutisch wirksamen Basen
erhalten, die den Salzen zusätzliche therapeutische Eigenschaften verleihen. Solche Basen sind z.B. die Purinbasen,
wie Theophyllin., Theobromin, Kaffein oder deren Derivate; Antihistaminbasen, die mit schwachen Säuren Salze
zu bilden vermögen; Pyridinverbindungen, wie Nikotinsäureamid,
Isonikotinsäurehydrazid und dgl.j Phenylalkylamine,
wie Adrenalin, Ephedrin und dgl.} .Cholin u.a. Die Lydimycinsalze
können für die' gleichen biologischen Zwecke verwendet werden wie die freie Säure.
Lydimycin hat die in Tabelle I dargestellte fungizide Wirkung. Das fungizide Spektrum wurde durch einen ■Verdünnungstest mit Agarplatten ermittelt.
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Teetorganlsmus Kleinste hemmende Konzen
tration in S/ecm
Nocardia asteroidee 100
Blaetomyces dermatltidie 1000
Coccidioidee immi-fcis . 1000
öeotriohum sp. 100
Phialophora verrucoaa 100
CryptococcuB neoiormane TOOO
Histoplasma capsulatum iOOO
Sporotrlchuia echenckii Ϊ000
Monoeporitun apiospermum ■ 1000
Trichophyton rubrum 1000
Candida albicans JLBBOTO? 100
Trichophyton violaceum TOOO
Trichophyton asteroideβ 100
Trichophyton mentagrophytea TOO
Dae in Tabelle II gezeigte antibakterielle Spektrum des
Lydimyeine v/urd& mit dem Agarplatten-DiffuBionstest unter
Verwendung von Platten mit einem Durchmeseer von 13 mm
ermittelt.
Tabdle II
Antibakterielle Wirkung von Lydimycin
TestorganiBmuB Zonengröße (mm)
TestorganiBmuB Zonengröße (mm)
σ BacilluB subtilie 16 (Schleier)
^ Sarcina lutea 24 (Schleier)
m Staphylococcus aureus 40
cn Streptococcus faecalis 22
2^v Hycobacterium phlei 28
^ Salmonellagallinarum 21
-α Rhodopaeudomonas apherOldes 33
Chromobacteriuitt violaceum 25 (Schleier)
lydimycin ist auch wirksam gegen die fadenförmigen Fungi
Grlomerella sp. und Penicilllum oxalicum und die Hefepilze
Sacoharomyces cerevisiae, Saccharomyces pastorianus und
Trigonopsis variabilis.
Lydimycin kann daher zur Bekämpfung der fadenförmigen Fungi
Glomorella sp. verwendet werden, die bekanntlich die Bitterfäule
"bei Äpfeln (Malus), das Welken der Zweigspitzen
und die Fleckenbildung bei den Früchten der Apfelsine (Citrus) und die Anthracnose bei Mango (Mangifera) und Avocado
(Persea) bewirken. Lydimycin kann auch zur Pilzbekämpfung
in den im US-Patent 3 130 505 beschriebenen Schuhoberledern
verwendet werden, ferner zur Bekämpfung von S. gallinarum bei Nutzvieh und Geflügel und von S. aureus bei gewaschenem
und gestapeltem Geschirr usw.
Das folgende Beispiel erläutert das erfindungsgemäße Verfahren. Sofern nichts anderes angegeben ist, beziehen sieh
die Prozentsätze auf das Gewicht und die Lösungsmittelmengen
auf das Volumen«
A Fermentation
Eine Bodenkultur von Streptomyces lydicue. NRRL 2453, wurde
zum Beimpfen einer Reihe von 500 cnr Erlenmeyerkolben verwendet, die 100 g eines Nährmediums aus den folgenden Bestandteilen enthielten:
Glucosemonohydrat 25 g
Pharmamedia* 25 g
Pharmamedia* 25 g
Leitungswasser 11
* Pharmamedia ist Baumwollsaatmehl technischer Reinheit, das von der Trades Oil Mill Co., Fort Worth,
Texas, hergestellt wird.
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Der Impfstoff wurde 2."läge..bei 28° 0 auf einem Gump Dreh-Schüttler
kultiviert, der mit 250 Umdrehungen Je Minute
betrieben wurde.
5 cnr des vorstehend beschriebenen Impfstoffes wurden zur
■ 5 " '""■"■ Beimpfung eines 500 cnr Erlenmeyer-Kolbens verwendet, der
■x · ■■■'■'
100 cm des folgenden sterilen Fährmediums enthielt:
Clucosemonohydrat | 10 g |
Dextrin | 20 g |
Pabsthefe* | 10 g |
Baumwollsaatmehl | 10 g |
Speeköl | 1 cm5 |
ieitungwwass er | 11 |
* Brauereihefe, die von der Pabst Brewing Co. bezogen
wurde.
-.. ■ ■ ■ ■ * -
Die Fermentation im Kolben wurde 144 Stunden bei 520O.
auf einem Gump Dreh-Schüttler durchgeführt, der mit 250 Umdrehungen
je Minute betrieben wurde. Fach Beendigung der !Fermentation zeigte die Gärflüssigkeit gegen Sv pastorianus
eine Vfirksamkeit von 19,2 Bioeinheiten/cm^. "■-'...
Eine Bioeinheit ist vorliegend diejenige Menge eines Antibiotikums, die gelöst in 0,88 ecmder Testlösung bei Anwendung
auf eine 12,;7 mm"Scheibe unter den Standardbedingungen
des Plattenversuchs eine Hemmzone von 20 cnr ergibt.
B Gewinnung ■
Die Gärflüssigkeit von einer Reihe von Gärkolben (920 cm5,
mit einer Wirksamkeit von 9,4 Biοeinheiten Lydimycin/em
gegen S. pastorianus) wurde mit Schwefelsäure auf einen
pH-Wert von 4,0 eingestellt und mit Hilfe yon Diatomeenerde
filtriert. Der Filterkuchen wurde mit dem 0,1-fachen
Plüssigkeitsvolumen an Wasser gewaschen und verworfen.
:. 0Ö9S1S/1907
- ίο -
Die filtrierte Gärlösung wurde; dann mit einer Geschwindigkeit
von etwa 3,5 cnr/Minute durch eine Kolonne geführt,
die 27,1 g (3 # Gew./Vol.) granulierte aktivierte Holzkohle
(Pittsburgh Coke and Chemical Company, Pittsburgh, Pa.) enthielt. Die Kohle wurde mit 60 cm entionisiertem Wasser
gewaschen und die austretende Flüssigkeit verworfen. Die Kohlekolonne wurde mit einem abgestuft gemischten Lösungsmittelsystem
aus 400 g 50 ^igern wässrigen Aceton und
400 g Aceton eluiert. Hierbei wurde das 50 #ige wässrige
Aceton zuerst mit dem Kohlenstoff in Berührung gebracht. Die Fließgeschwindigkeit während der Elution betrug 4 cnr/
Minute. Bs wurden Fraktionen von 20 cnr aufgefangen. Die
Fraktionen 64 bis 100 wurden vereinigt, durch Vakuumdestillation zu einer wässrigen Lösung eingeengt und gefriergetrocknet.
Man erhielt 490 mg Lydimycin mit einer Wirksamkeit von 12,0 Bioeinheiten/mg gegen S. pastorjanus.
C Verteilungschromatographie des Lydimycinpräparats
Das für die chromatographische Verteilung verwendete Lösungsmittelsystem bestand aus Äthylacetat : Cyclohexan :
Mcllvaine's Puffer vom pH-Wert 3,0 (16x4x1)· Für die Füllung der Kolonne wurden 1000 g mit Schwefelsäure gewaschene
Diatomeenerde in der oberen Phase aufgeschlämmt und mit 400 cnr der unteren Phase homogenisiert. Die Mischung wurde
in eine chromatographische Glassäule mit einem Innendurchmesser von 76,2 mm gegossen und unter Anwendung eines Überdruckes
von 0,14 bis 0,21 kg/cm bis zu einer konstanten Höhe von 762 mm gepakt. 130 g des oben hergestellten Lydimycins
wurden in 100 cm der unteren Phase gelöst. Die Lösung
wurde mit konzentrierter Salzsäure auf einen pH-Werij von 3,0 eingestellt und mit 200 g Diatomeenerde und einer
zur Bildung einer fließenden Mischung ausreichenden Menge der oberen Phase homogenisiert. Diese Mischung wurde auf
das obere Ende der Kolonne gegeben. Frische obere Phase
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s- 11 - ■· ■"---■ ' : : ■
des Lösungsmittelsystems wurde züge se tat und dief Kolonne
mit eine* Fließgeschwindigkeit von etwa 200-400 öm-/Minute
entwickelt. Es wurden Fraktionen von jeweils 1 .1 aufgefangen undihre Wirksamkeit·gegen S, pastorjanus mntersuclit*
Diejenigen Fraktionen mit einer Wirksamkeit von über 50 Bioeinheiten
Lydimycin/mg wurden vereinigt»zu. einer wässrigen lösung von 50 cnr (pH-Wert 2*5-3,01 eingeengt,und einen
Tag bei 4»4° C aufbewahrt. Die Irydimycinsäurekristalle
wurden abfiltriert und im Vakuum getrocknet. Die Ausbeute
betrug 160 mg mit einer Wirksamkeit von 1617 Biöeinheiten/mg
gegen S. pastorianus. Die Kristalle wurden umkristallisiert,
indem man 15t mg Kristalle in 90 cm' siedendem Methanol
löste» die Lösung filtrierte und dann auf ein Volumen von
20 cm einkochte. Das Konzentrat wurde zwei Stunden auf
0° C gekühlt! die iydimycinkristalle wurden abfiltriert
und getrocknetι Ausbeute 125 mg mit einer Wirksamkeit von
1917 Bioeinheiten/mg gegen S. pastorjanus.
Nicht kristalline, auf die vorstehend beschriebene Weise
aus der chromatographischen Verteilungssäule erhaltene Lydimvcinpräparate können durch Verteilung in einer Craig
Gegenstrom-Verteilungsvorrichtung unter Verwendung eines Lösungsmittelsystems aus 1-Butanol : Methylethylketon : Wasser (1:T:2) in kristalliner Form erhalten werden. Der Inhalt
derjenigen Rohre, welche die Hauptmenge an Lydimycin enthalten, wird vereinigt und im Vakuum bei unter 50° G
zu einer wässrigen Lösung eingeengt. Der pH-Wert der wässrigen Lösung wird auf 3,0 eingestellt und die Lösung bei
Raumtemperatur 2 Stunden stehen gelassen. Die Lydimycinkristalle
werden abfiltriert und bis izur Erreichung eines
konstanten Gewichts im Vakuum bei 4OÖ G getrocknet.
18,85 mg freie Lydimyclnsäure wurden in 5 cm Wasser gelöst« Der Lösung wurde konzentriertes Ammoniumhydrpxid
OtiSÖtS/1907
1617893
bis zur Erreichung eines pH-Wertes von 8,0 zugesetzt. Die
lösung wurde dann gefriergetrocknet und ergab 13,9 mg Ammoniumsalz
des Lydimycins, das gegen S. pastorianus eine
Wirksamkeil; von 1612 Bioeinheiten/mg hatte.
iyi?stal lines Lydimycin hat die folgenden physikalischen
und chemischen Eigenschaften:
Farbe:
Elementaranalyse!
empirische Formel; optische Drehung:
Molekulargev/icht:
Titration;
Äquivalenzgewicht: Ultraviolettspektrumj
Äquivalenzgewicht: Ultraviolettspektrumj
Infrarotspektrum:
weiß C= 49,68| H = 6,04} 0 = 20,01; If = 11,38j & = 12,84
ψ = 92° (c = 0,70 in 0,1 m
PO4, pH 7,0 Puffer)
242, ermittelt durch Massenspektroskopie
pKa1 = 4,32
244, ermittelt durch Titration
Lydimycin zeigt zwischen 220 und 400 mil keine Absorptionsmaxima in
saurer, neutraler oder basischer wässriger Lösung
Das Infrarotabsorptionsspektrum von Lydimycin in Mineralöl ist in Fig. 1 wiedergegeben. Lydimycin
zeigt Ballen bei den folgenden Wellenlängen in cm~ :
0098 15/190
1817899
3320 | (M | - mittel) | 1444 | (M) | 1060 | (B) |
3290 | (S | - schwach) | 1430 | (M) | 1035 | (B) |
2950 | (M) | (Öl) | 1413 | (M) | 1010 | (M) |
2920 | (S) | (öl) | 1378 | (B) (öl) | 982 | (M) |
2850 | (M) | (Öl) | 1335 | (M) | 949 | (B) |
2640 | (B | - breit) | 1515 | (S) | 910 | (B) |
2500 | (B) | 1308 | (M) | 890 | (B) | |
2400 | (B) | 1294 | (M) | 867 | (B) | |
2510 | (B) | - | 1283 | (S) | 852 | (B) |
1910 | (B) | 1273 | (S) | 841 | (M) | |
17.11 | (S) | 1238 | (B) . | 810 | (B) | |
1695 | (S) | 1203 | (B) | 760 | (B) | |
1654 | (M) | 1165 | (B) | 743 | (M) | |
1645 | (S) | 1142 | (B) | 690 | (M) | |
1590 | (M) | 11 1:8. | (B) | 683 | (M) | |
1479 | (M) | TC>93 | (B) | 655 | (M) | |
1465 | (H) | 1077 | (B) |
X)ie Bandenintensitäten sind mit tlS!% l!Mlr bzw« '8B" angegeben und stellen hinsichtlich der Bandeniritensität Näherungswerte
dar. Die "S"-Banden sind Banden' schwacher Intensität.,
die "M'*-Banden sind Banden mittlerer Intensität und
die ttB"~Banden sind Banden breiter Intensität-
Lydimycin-weist ein charakteristisches,Papierchramatograami
auf, das in Mg, II dargestellt ist und bei Terwendung
der folgenden Lösungsmittelsysteme erhalten wurdes -.
I* 1-Üutanolj, Wasser (86516) 16 Stunden
II» l-Aitano!, Wasser (.84:16) plus 0,25 ^p-Toluolsulf011-■-,
säure, 16 Stunden ;
III« .!«.Butanol 9 Essigsäure., Wasser (2ι1ϊ1), 16 Stunden
00 98 15/1907
IV. 2 $, Piperidin (Vol./Vol.) in 1-Butanol, Wasser
(84:16), 16 Stunden
V. 1-Butanol, Wasser (4:96), 5 Stunden
VI. 1-Butanol, Wasser (4:96), plus 0,25 i» p-Toluolsulfonsäure,
5 Stunden
Oil y Ö 1 ;i ·■ 1 ■! !J ;
Claims (4)
1. Lydimycin, das im wesentlichen frei von Streptolydigin
und
a) in niederen Alkoholen, Aceton, Äthylacetat und chlorierten
Kohlenwasserstoffen schwerlöslich ist§
b) in Form der im' wesentlichen reinen? freien Säure
di® Slementaranalyae G = 49,68§ H - 65ö4l 0 = 20,01|
N « 11,38| S - 12,84?
c) die empirische Formel C10H14I2O^Si
d) die optische Drehung [oQ^5 = 92° ( c * OJO In 0,1 u
2PO45 pH 7
e) den pKa8-Wert 4,32;
f) ein durch Massenspektroskorie e?iaitteltes Molekulargewicht
von 242 und
g) zwischen 220 und 400 πμι keine Ultraviolett-Absorptionsmaxiea
aufweist.
2. Lydimycin in im wesentlichen reiner kristalliner Form.
3. Alkalimetall-,- Erdalkalimetall- und Ammoniumsalze des Lydimycins sowie Salze des Lydimycins mit Aminen.
4. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch 1-3, dadurch gekennzeichnet, daß man S. lydicus
IiRRL 2433 in einem wässrigen, assimilierbare Kohlehydrate und assimilierbaren Stickstoff enthaltenden Nährmedium
unter aeroben Bedingungen züchtet, das Kulturmedium vom
0098 15/1907 * BAD GKiSSNAL
Mycel befreit, das gebildete Lydimycin auf einem oberflächenaktiven
Mittel adsorbiert, es eluiert, es gegebenenfalls weiter reinigt und es gegebenenfalls in Alke:
lime tall-, Erdalkalimetall-, Ammoniumsalze oder talse
jiiit Aoinen überführt.
Für
The Upjohn Company . Kalamazoo (Hich., V.St.A.)
^u.
Rechtsanwalt
BAD CRiGiNAL 09815/1907
-/IV Leerseite
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