DE1545760A1

DE1545760A1 - Verfahren zur Herstellung von desacylierten vielkernigen Indolverbindungen sowie deren Estern

Info

Publication number: DE1545760A1
Application number: DE1965E0028828
Authority: DE
Inventors: Hargrove William Walter
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1964-03-09
Filing date: 1965-03-08
Publication date: 1969-11-27
Also published as: SE330700B; DE1795763A1; DE1795823B2; DE1795763B2; DE1795763C3; DE1545760B2; FR6668M; DE1545760C3; GB1095833A; US3392173A; CH507970A; BE660843A; FR1449628A; NL6502977A; DE1795823A1; DE1795823C3; ES310240A1

Description

i'i/ Sc C; 4 'H'L·' I ί ν I *». Γ 4- -Κ.

üli Lilly and Company, liidian-apolis, Indiana, Y.3t.A.

Verfallreu zur ner3teilung vo-n desacylierten. vielkernigen Indolverbindungen sowie deren Estern

Die Erfindung "betrifft, bestinmte neuartige desacylierte vielkernige Indolverbindungen sowie ein neuartiges Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen sowie ihrer

Die neuartigen ^ster dieser aesacylierten vielkernigen Indolverbindungen der nirfiridung können durch die folgende allgemeine tforael wiedergegeben werden :-

Neue Unterlagen

90984 8/1238 ^BAD original

OH

-C^-Alkyl-CO- oder cyan-

Da"bei bedeutet R eine arylsulDstituierte C.-C₁--.alkyl-CO-, Aryl-CO-, halogens üb ati;bui er te

substituierte C-j-Cc-Alkyl-CO- -Gruppe und R¹ eine Alkyl-, H-CO- oder C₁-G₅-AIlCyI-GO- -Gruppe.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen v/erden nach einer. Verfahren hergestellt, das sur Herstellung der Verbindungen der obigen Jonnel I so7/ie bestimmter anderer, v/eiter unten beschriebener Verbindungen geeignet ist. Las erfindungsgemäße Verfahren iann. formelmäßig wie folgt wiedergegeben werden;

BAD ORIGINAL

909343/1233

τ 332

OH

OCOCHj

COOCH=; OH

II

H CHjOOC

CHjO

III

R' COOCH₃ OH

(R»C0)₂0

\V

Gemisch von mono- \mä diacylierten 'Produkten _BAD OBiGVNM- 9 0 9-84 8/123

Kieselsäure cj&(

OH

CHjO

COOCHj

IV

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Dabei'hat R' die obengenaunte Bedeutung und R" bedeutet eins ii-OO-, Cj-Uc-Alkyl-CO-, arylaubstituierte Ü..-C,--Alk-1-Cü-, iuryl-CO-, halü_oencubütituierte G₁-C^-Alkyl-GO- oder cyansubstituierbe C, -Cpr-Alkyl-CO-Gruppe.

Wenn in der obigen i'Ormel II R¹ eine etaylgruppc bedeutet, handelt es ,.-.ic Ja um Vincaleukoblactin. we na R¹ in der obigen ii'ormel II eine JJOruylgruppo bedeutet, hantelt es sie; um -ueurocri&tin. Ausgaü^aniatejrii-/Lien der cLurcü.. die ü'ormel II ^ieder_&egebe.. ei- struktur, bei den K' einen anderen tuvst als eine „ethyIgruppe oder sine i'Ori.rylgruppe bedeutet, erhLlt man aurü_:: Alkylierung Ό·δή. .Lcylierung von Des-iijiethylvincyleukoblastin i..it de^ erit^pr eckend er: Alkyl ie runge-

iiaoii der obigen K-et-ict ions gleichung wiru Vincal^ukoblastin odur jjeuroc.L^;istin odere.xue Verbindung der-Formel II, bei

der R' eine andere .Bedeutung als ^ethyl- oder iPonnjl- hat, in -die entsprechende Desacetylverbindung III umgewandelt, v/aa in bequemer vielte durch eine iiy.irol.yse, gegebenenfalls

ι ■

Liit anschließenden rteiniguri^atufeu, erfolgt. Auf die ydrolyse folgt eine Acylierung, vorzugsweise unter Verwendung : eines üäureami_c. uridü, wobei ein Gejiisch von mono- und diacylicrten J-roduKteri ent&te- t. Schließlich -.:ird eine

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-G-

seLektive Hydrolyse vorgenommen, v/odurch das aus dem Monoestei* und dem Jüiester bestehende tieuisch. in ein i^JroduKt umge./ai.delt wir·:·., das pruktitjeh. aiii ~e-_ i~onoester IV besxent.

' 1,'enri it¹ oder d" in üex' obigen jj^lor:..el IY eine C₁-C₁--Alkyl-CO- -Gruppe bedeuten, älui es sich. z.±>. \.u eine Acetal-, i-ropiori/1-,. Eutyryl-, iBobLttyryl-, Valeryl-, Isovaleryl-, Capro^l-, L-ootiprj/l-, 2-i.^e bhylvaxer/l-, 5-- etnylvaltr^l- oder 2,2-Di-Xth.;, Ibutjfrylgruppe uiia d^l. headeln.

In der obigen Formel kann ü¹ aucn eins C₁-CjT gru^pe, wie z»i3. eine x. ethyl-, Äthyl-, Bropyl-, 1-methyläthyl-, η-Butyl-, Isobutyl-, sek._Butyl-, tert.-Butyl-, 1-Pentyl-, 2-Metnyl-1-butyl-, Isopentyl-, 1,1-Diinetliylj propyl-, 2-Pentyl- oder 3-Pent^lgruppe und dgl. bedeuten.

Wenn B. und ß" in den obigen Formeln I bzw. IV eine Aryl-CO- *-G-ruppe wiedergeben, s chlieiit der Begriff "Aryl-" sowohl monocyclische als auch bicyclische Arylreste ein, wie z.B. Phenyl-, iDhienyl-, Furyl-, Pyridyl-, Pyrimidyl-, Pyridazinyl-, Pyrazinyl-, Waphthyl-, oder Naphpyridylreste und dgl.. Im allgemeinen umfaßt der

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-γBegriff "Aryl-" sämtliche mo no cyclischen oder bicyclisciien i:este, die die üb.'.iciieii Kriterien für e' neu aroma tischen Charakter erfüllei:, εο ie -..'β it erb in 3£^r:.itlich diener Arylreste, v.erm sie mit irgtndrelchen der üblichen aromatischen Substituei-tea, wie z.B. nieoerei: niederen Alko^/:-. -^txi.-lcr.dioxy-, _Citro-, iia tuierteu niederen Alk„l- ('.vie z.B. ^^if^VOV^ethjl-) oder Αθ5^ΐ3'αο8ίΐΐαβ.-ΐ6ίχ uu.c a_tl., substituiert sind. I^ all^e— meinen steile^ die;-a aucstituiertc &ro..£xtijci.en Äc^te für die zwecke der voi'lieteuden ^rfind^u^ ^leic^ ux'ti^e üquivaxcnte α or ui-._ubotituierten Ranta oar.

Wie oben a^s^ofl'iut, k^unen H und ri" v.'eit^rhin G₁-Cc-Aliiyl-GO-(jrupx;cii beueuteu, aie aurcl. einen Arylrest, ein Halo^uaa^toi;. oder eine Gyangruppe substituiert siiiu. unter deti Aryir ö'je.., aie in den; Alkanoyireüt vorliegen kÖ.ihe>._t befinden sich sämtliche der obeiigenai.nter. Ar-I-res-fce, (.leichg.'.l-tie, ob substituierte oder unsubatituiert.

Unter den .ialoteiiatö&en, die in einer durch die oymbole-R und R° wiedergegebenen C.-Gc-AIk^l-CO-. -Gruppe vorliei-eii können, befi.ndeu ticii sämtliche Atone der T.uauptgruppe det ^e ri ο Clinchen .3/a .eiaa, insbesondere Fluor, Chlor und jBroiu.

BAD ORIGINAL

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Zur weiteren ürläuterung sei ausgeführt, daß R und R" in der obigen Formel beispielsweise Ct -Napthylacetyl-, ß-laphthylacetyl-, 2-(p-Qhlorphenyl)-propionyl-, Fluoracetyl-, 3-Cyanbutyryl-, 2-Chlor-2-Πlethyl-1-butyryl-, Jodacetyl-, 5-(2-Pyridyl)-valeryl-, 5-(2-Pyrimidyl)-caproyl-, p-Trifluormethylphenylacetyl-, CL-Brompropionyl- oder m-Nitropheuylacetylrest und dgl. bedeuten können.

Die folgenden Ausführungen dienen der ausführlicheren Erläuterung des erfindungsgemäßen Verfahrens. Die erste ■ Stufe des Verfahrens besteht in der Hydrolyse einer Monoacetatverbindung (II). Die Hydrolyse kann entweder unter

sauren oder unter basischen Bedingungen durchgeführt werden. Als Hydrolysierungsmittel haben sich z.B. Chlorwasserstoff in Methanol, 85 J&igee Hydrazinhydrat in Äthylenglykol oder Äthanol, überechüssiges Kaliumcarbonat in Methanol oder 1 Äquivalent Kaliumhydroxyd in waeeerfrei em Methanpl als erfolgreich 'enviesen. 3)urck $iese Reagenfiea wird Vinealeukotolastim. glatt zn 3)esacÄtylvincaleufcoblaatin hydrolysiert, ohne daß eine übermäßige Hydrolyet and#J?€3P Üetergruben dee liölektils eintritt. Leuyoörietin jedoch und andere Vtrfetndungen, in denen Ή.¹ eiöea 4oyl«#et bedeutet^ rerliejree Ml· E'^-Gruppe

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der Hydrolyse und liefern JJesformyldesacetylleurocriatin (bzw. Desiaethyldesacetylvirmleukoblastin). Die ursprüngliche ß'-Gruppe läßt sich dann .leicht durch ein geregelten Acylierungsverfahren, unter Bildung einor Verbindung der Formel III, ersetzen.

In der zweiten Stufe des Verfahrens, die Acylierungsstufe, in der vorzugsweise ein Säureanhydrid als Acylierungsmittel verwendet wird, wird nicht nur die Hydroxylgruppe acyliert, von der die Acetylgruppe vorher in der oben beschriebenen Hydrolyse,stufe entfernt .Orden war, sondern bis zu einem gewissen Grade auch eine aer anderen freien Hydroxylgruppen des Moleküls, und zwar gewöhnlich die Hydroxylgruppe, die sich an dem Kohlenstoffatom befindet, das Ct-ständig zu dem Kohlenstoffatom steht, das ursprünglich den Acetoxyrest trug. Die !Trennung der in der Acylierungsstufe gebildeten Di- und Monoester läßt sich nach den meisten Standardverfahren nur schwierig erreichen, doch wurde gefunden, daß durch eine Behandlung des Gemiache§rmit einer Suspension von Kieselsäuregel in feuchtem Methanol sämtlicher vorhandener Diester glatt in den gewünschten Monoester (IV) umgewandelt • wird.

' Die erfindungsgemäßen Verbindungen verlängern die Lebensdauer von Mäusen, die mit dem P-1534 -Stamm der Mäuseleukämie

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beimpft worden sind. In der folgerfden Tabelle sind die Ergebnisse von Prüfversuchen wiedergegeben, die in diesem Zusammenhang durchgeführt wurden. In der Tabelle I ist in der ersten Spalte der R-Substituent der formel I, in der zweiten Spalte der R'-Substituent, in der dritten Spalte der Dosisspiegel und in Spalte 4 die prozentuale Verlängerung der Lebensdauer der behandelten mause im Vergleich zu einer Kontrollgruppe von Mäusen angegeben, die lediglich mit dem für die Injektionen des aktiven Arzneimittel verwendeten jeweiligen pharmazeutischen Träger injiziert worden waren.

Tabelle I

R'-Substi-R-Substituent tuent

C₆H₅CH₂OO-C₆H₅CO-ClCH₂CO-Cl₂CHCO-NCCH₂CO-

Dosisspiegel Prozentuale Verlange-! in mg/kg rung der Lebensdauer j

25 32 127 37 31

CH₃-	2
CH₃	0,75
CH₃-	0,35
CH₃-	0,3
CH₃-	0,33

Das erfindungsgemäße Verfahren ist nicht nur zur Herstellung der neuartigen onoolytischen (krebsbekämpfenden)

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_BA0

fc- Mittel der Erfindung brauchbar, sondern auch zur Herstellung von Vinoaleukoblastin- und Leuroeristinpräparaten, die in der Aeetylseitenkette mit radioaktivem Kohlenstoff markiert sind.

können bestimmte der nach dem erfindungs gemäß en Verfahren erhältlichen Verbindungen, insbesondere das Deeaeetylvincaleukoblastinchloracetat und das Desacetylleuro.cristinahloracetat, mit Ammoniak oder Aminen zu DesaoetylTlnoaleukoblastinglycinat, Desacetylvinealeukoblastin-ϊ,ϊ-dimethylglycinat, Desacetylleurocristinglycinat und dgl. umgesetzt werden. Die letzteren Verbindungen zeigten bei Frtifung alt Hilfe von üblichen laboratoriumsversuchstieren ebenfalls oneolytiache Wirksamkeit.

Sas erfindungsgemäfle Verfahren wird durch die folgenden Beispiele weiter erläutert.

Beispiel 1 DeBacetylTinoaleukoblastin

8 g der freien Base Vinoaleukoblastin wurden in mit gasförmigem Chlorwasserstoff gesättigtem methanol bei 0 Ö gelöst. Das erhaltene Äeaktionsgemisch wurde bei ilaumtempe-.ratur etwa 72 Stunden stehengelassen. J3ie flüchtigen Bestand-

BAD ORJGINAt

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teile werden durch Mndanipfen im Vakuum entfernt, und der erhaltene Hückdtand wur^e in "wasser gelöst, uie saure wäßrige Lösung ..urde durcn Zugabe eines Überschusses an 14 η A. iuoniuiiiiiydroxyd basisch gemacht. L'ie alkalische Phase wurde ruit ...f th^le^aicLlorid extraniert, aie . cthylendichloridphase abgetrennt und das ..cthylendichlorid durch Abdampfen, im VakuuM entfernt, her erhaltene Rückstand, der Deaacetylvincaleukoblastin enthielt, v.'uroe in ..(-.thanol gelöst. Die ^rittaj-line freit .ate Desacetylvincaleukoblastin v.'urae durcii Lugabe von wasser £u ai;r· \;ariuen :..etr:anoxischen jjösung bis zuu frübuugüpurikt und an...cl:.lieliendes Abkühlen der Lösung erhalten.
Ausbeute 5,26 g.

Beispiel 2

Alternativverfahreri zur herstellung von liesacetylvincaleukoblas tin

50 g Vincaleukobiastinsulf t v/uraen-mit eine-i "überschuL· an v;ä^ri_tei:. A..:..oniaic Le^iandelt, '..odurcL. die freie Base Vincaleukoblastin erhalte... r.urde. Die freie Base wurde in :..ethylendichlorid e^tra. ie^t, aie II:..th-letiäicLloricKhase abgetrennt und des ^ethylendich^oric durch Abdampfen im Vakuum entfernt. D^r Rückstand wurde aurc:: Zugabe von Benzol und Abdestil-

lieren des azeotrope:. a'asser-hei-zol-Geiaisches aus dem j

BAD

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eriialtenen ü-ei.dscl. getrocknet.. Der erhaltene ^Rückstand ^j

wurde zu 3 Litern mit gasförmigen Ghlorwasaerütofx' ges&ttig-

O !

teiu -.-.ethai-ol bei 0 G gegeben. Uieseu Geiaiocii wurae "bis zur I Auflösung, ger'hrt und sodann über iJacht bei Raumtemperatur : belassen. Die !DünnscLichtchro ^atographie eines aliquoten 'ieils des L:eaktionsge.:;isches zeigte eine nahezu vollständige umwandlung . es Ymcaleukoblasins in das gewünschte Desacetyl- i viücaleukoblastin. Die Lösungsmittel wurden aus aem ßeak- ; tionsgemiach durch Abdampfen im Vakuum enti'erut. Der Rückstand wurde in Wasser gelöst und die erhaltene b.;.ure wäßrige Lösung mit 14 η A-Jiiouiuuuiydroxyd basisch gemacht. Die organisciie Base wurde durch Extraktion mit uethylendiclilorid abgetrennt. Der kethylendichloridextrakt v^urde 1-mal mit eine.u gleichen Volumen gesättigter ITatriumchioridlosung gewaschen und sodann abgetrennt. Das Methylendichlorid v.'ir de durch Abdampfen im Vakuum entfernt unu der ßückstand durch Zugabe von Benzol und Äthanol und Abdestillieren des azeotropen Benzol-Wasser-JithaLOl-Gekiisches von dem erhaltenen Gemisch getrocknet. Der getrocknete Rückstand v/urde dann in einer minimalen iuenge heilem Äthanol gelöst, und die Kristallisation durch Animpfen eingeleitet. Auf diese Weise wurden 2U g kristallines Desacetylvincaleukoblastin erhalten.

BAD ORIGINAL

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Beispiel 3

AlterriativverfahreO. zur iierstellung von i,e; acetylviucaleuko- :

blastin

20 ecm 85 7<>ige& Η,/drazinhyarat, 5 g Vincaleukoblastinsulfat, ; 50 ecu Athylenglykol und etwa 200 cc π. 95 piges Äthanol wurden zusai:.men^egebeu. iias Reaktionsgeuisch. wurde zur Auflösung des Yinoaleukoblastinsulfats erwärmt und sodarm etwa 16 Stunden bei Raumtemperatur aufbewahrt. Das ethanol ; wurde aus dem pLeaktiorisge^isch durch Abda;..pfu. iu /akuum entferat. Das neaktionsgemisch v/uräe dann 6-πιε.Ι mit je etwa 250 ecm Methylendichlorid extrahiert. Die a-iethylendichlorid- extrakte wurden kombiniei-t, und das Lüoungsi.ittel wurde -durch Abdampfen iu Vakuum entferat. nie Dünnschicntchromato- ' graphie eines aliquoten Teils des erhaltenen Eücicstc.ndes j zeigte, daß er zur Hauptsache aus jJesace-tryLvincaleukoblastin ; bestand und nur eine geringe LIenge Yincaleucoblastin zugegen ; war. Die Umkristallisation des ßückstandes aus einem ι Äthanol-Y/asser-Geaisch lieferte 3 g Desacetylvincaleukoblastin»

Das obige Verfahren wurde mit der Abänderung wiederholt, daß das Athylenglykol aus dem Reaktionsgeiriscn fortgelassen wurde. Es wurde eine 80 ?oige Ausbeute an Desacetylvincaleukoblastin erhalten.

BAD ORlGiNAi

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Beispiel 4

Alternativverfahren aur ^-.-rstelluug von Decacetylvincaleuko-.

3 g VirxCaleukoblcötiiibL..lfat v.ur^.ea in .,a.o.r ^cIl v.urde ein LberbcLu«. an 14 ^. ii::.i-oniuLJiy.-.roxjd nugegeb* wodurch die fi*tic -aae Vincaleukoblastin vjr.-^ltei. rurde, die in der alkalischen Lösung unlöslich ibt. Die freie raae wurde abgetrennt und er Ht tt ;iit uilfe von .. - tli^ lenohlorid extrahiei't. Lie . .c. &!.„ !.-i-üiü^loridpha^e ,.uroe ab._.otreniit, ui:d das Lösungsmittel ..arje duron AVoa:..χ:ft.. ii., Vakuum entfernt. Der EüCitstai-d, aer aie I¹X¹Uie ...t-aoe Viucal iukoblaötin entnielt, wuröe in etwa 100 ccir. ...ethanol gelost und axe erhaltene Lösung mit la.-sför&l^e..,. C'.lorwasserstox'i' gesättigt. Die saure Lösung wurae etwa 72 Ötundeu bei Kauu.te..»peratur . erührt und soar.nn etv.a 3 Ütunden auf d\'o.if Iu-tempers tür erhitzt. Des lteai tiousje^ioo.· v.'ur.e abgekühlt. ϋ!ε wurde ein Überschuß an 14 η Ar.moniunüiyuroxyd zugegeben unl aie erhaltene xreie 3a;_-e u.±t ..ilfe von LethalCi.aicixlorid extraliiert. Der kethylendiehloridextrakt v.urue abgetrennt und das LosunjüLiittel durch Abaa:..pfen ic Vakuum entfernt. Die Dünnsc-.iciitchronatorrax^iiie aes erhaltenen Rückstandes zeigte, aa:i er aU3 e Lne:.. ieuisch aus Jesacetylvincaieukoblcbtin und Vinkaleukoblastin bestand.

BAD OBiGlNAL

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I · 1 ■

J 1 1

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Beispiel 5

Alternativverfaiiren zur Herstellung von Desacetylvincaleukoblastin

1 g Vincaleukoblastin wurde in 300 ecm Methanol gelöst. i\'"acii Zugabe von 150 mg Kaliumcarbonat wurde das Gemisch über' fracht auf Rückfluiitemperatur erhitzt. Die organischen Basen wurden nach dem Verfahren von Beispiel 4 isoliert und gereinigt". Die DümischichtChromatographie des Produktes zeigte, daß es zur Hauptsache aus Desacetylvincaleukoblastin bestand. Das Desacetylvincaleukoblastin wurde aus dem Rückstand unter Verwendung eines aus Äthanol und Wasser bestehenden Lösungsmittelgemisches in kristalliner Form erhalten.

Beispiel 6 Desacetylvincaleukoblastinisobutyrat

400 mg Desacetylvincaleukoblastin wurden in einem Überschuß an Isobuttersäureanhydrid gelöst, und die erhaltene Lösung wurde etwa 72 Stunden bei Raumtemperatur stiiengelassen. Zur Zerstörung des unumgesetzt gebliebenen Anhydrids wurde ein Überschuß an Methanol zugegeben und das erhaltene Reaktionsgemisch weitere 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die flüchtigen Bestandteile wurden durch Abdampfen im Vakuum entfernt. Zu dem erhaltenen Rückstand wurde ein Überschuß an '

BAD ORIGINAL

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14n Ammoniumüydroxyd gegeben. 'Die erhaltenen freien Basen wurden mit Hilfe von Methyleridichlorid extrahiert. Die organische Phase wurde abgetrennt und das Lösungsmittel durch Abaampfen im Vakuum entfernt. Der erhaltene Rückstand wurde in 10 Jblger wäßriger balzsäure gelöst. Die saure wäßrige Phase wurde durch Zugabe eines Überschusses an 14 η Ammoniumhydroxyd erneut basisch gemacht, und die erhaltenen freien Basen wurden mit hilfe von .methylendicniorid extra-hiert. Die organische Phase wurde abgetrennt und das Lösungsmittel ■ durch Abdampfen im Vakuum entfernt. Die DünnschichtChromatographie eines aliquoten Teils des erhaltenen .Rückstandes zeigte, daß es sich um ein Gemisch aus mono- und diacyliertem Material handelte. Der Rückstand wurde daher in 100 ecm 20 ifaigem wäßrigem Alkohol gelöst, dem 2 g Ohromatographie-Kieselsäuregel zugesetzt worden waren. Das Gemisch wurde bei Raumtemperatur über Kacht gerührt und sodann filtriert. Beim Eindampfen des Filtrate im Vakuum wurde ein Rückstand erhalten, der aus reinem Desacetgrlvincaleukoblastinisobutyrat bestand, wie sich durch Dünnschichtehromatographie zeigte. Die Infrarotspektren und die Kernmagnetischen Resonanzspektren des Produktes befanden sich mit der erwarteten struktur in Übereinstimmung.

Mach dem obigen Verfahren läßt sich Desacetyllleurocristinisobutyrat herstellen, wenn man von Desacetylleurocriatin anstelle von Desacetylvincaleukoblastin ausgeht.

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J Λ Λ MJJ J J 1 J J-

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• Beispiel 7
Desacetylvincaleukbblastinforniiat

Ein Gemisch aus 5 ecm Ameisensäure und 2 ecm Acetanhydrid wurde etwa 2 Stunden unter Rückfluß erhitzt, wodurch das gemischte Anhydrid aus Ameisensäure und Essigsäure erhalten wurde. 500 mg Desacetylvincaleukoblastin wurden in dem gemischten Anhydrid gelöst, und die erhaltene Lösung wurde über flacht bei Raumtemperatur gerührt. Die. flüchtigen Bestandteile wurden durch Abdampfen im Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde in Wasser gelöst und die erhaltene saure Lösung durch Zugabe von 14 η Ammoniumhydroxyd basisch gemacht. Die organischen Basen, die in dera alkalischen Phase unlöslich sind, schieden sich ab und wurden mit Hilfe von Methylendichlorü extrahiert. Die Dünnschichtehromatograpnie des in die Methylendichloridphase extrahierten x^aterials zeigte, dai3 ein neues Acylderivat des Desacetylvincaleukoblastins zugegen war. Die kernmagnetischen Resonanzspektren und die Infrarotspektren des Produktes zeigten, daß das erwartete Desacetylvincaleukoblastininformiat erhalten v/orden war.

Die Verwendung von Acetanhydrid anstelle des gemischten Anhydrids von Ameisensäure und Essigsäure bei dem obigen Verfahren liefert das Vincaleukoblastin selbst.

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ΐ '- t. ?r. * r

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Beispiel 8 Sesacetylvincaleukoblastingropionat

500 mg DesacetylTin^aleukoblastin wurden in etwa 5 ecm Eropionsäureanhyürid"gelöst. Die Lösung wurde 3 Sage bei Raumtemperatur gerührt. Zur Umsetzung mit dem übersohüseigen Anhydrid wurden 10 mg Methanol zugegeben und die flüchtigen Bestandteile aus dem Gemisch durch Abdampfen im Vakuum entfernt» Der erhaltene .Rückstand mu-de in Wasser gelöst. 14 η Ammoßiumhyclroxyd wurä-9 augegebe·., um die wäßrige Phase alkalisch zu machen, und die nunmehr unlöslichen organischen Basen wurden mit Hilfe "70 ώ. Methylendichlorid extrahiert, Der Methylendichloridextrakt wurde durch eine Aluminiumoscyd-(Stufe III)- Säule gegeben. Die Dünnscixiehtchromatographie des aus der Säule herausfließenden Materials auf Kieselsäure zeigte, daß sich ein neues Acyl'derivat des Desacetylvinoaleukoblastins gebildet hatte. Die Infrarotspelctren und die kernmagnetischen Hesonanzspektren zeigten, daß es sich bei des neuen iiOylierungsprodukt um die erwartete Verbindung, DesaeetylTincaleukoblastinpropionat, handelte.

Nach dem obigen Verfahren läßt sich Desacetylleucocristinpropionat erhalten, wenn iuan von Desacetylleurochristin anstelle von Desacetylvincaleukoblastin ausgeht.

BAD ORiGiNAL

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Beispiel 9 Desacetylvincaleukoblastinphenylacetat'

0 i*5 ecm Triathylamiii und 1oo mg Phenyl essigsaure wurden in Dioxan bei O C gelöst. 0,1 ecm Chlorarneisensäureäthylester wurden zugegeben, und die erhaltene Lösung wurde

1 Stunde bei 0 0 gerührt. Eine Lösung von 300 mg Desacetylvincaleukoblastin in 100 ecm Dioxan wurde innerhalb von etwa i 15 Minuten tropfenweise zu der Lösung des Anhydrids gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde dann 2 Stunden bei O⁰C und sodann etwa 3 Sage bei Raumtemperatur gerührt. Nach dem Verfahren von Beispiel 6 wurde Desacetylevincaleuko-.blastinphenylacetat aus dem Reaktionsgemisch isoliert. Die Dünnschichtchromatographie eines aliquoten Teils des Methylendichloridextraktes zeigte, daii ein neues aeyliertes Desacetjrlvincaleukoblastin zugegen war. Die kernmagnetischen Resonanzspektren und die Infrarotspektren zeigten, daß es sich bei dem neuen aeylierten Produkt um die 'erwartete •Verbindung, Desacetylvincaleukoblastinphenylacetat, handelte.

Beispiel 10 Desacetylvincaleukoblastinchloracetat

5,26 g Desacetylvincaleukoblastinsulfat wurden in. Wasser gelöst. Zu der erhaltenen Lösung wurde ein Überschuß an 14 η Anmoniumhydroxyd gegeben. Die freie Base Desacetylvinxt-

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schieu sich ab und. wurue in iieth^lendichlorid aufgenommen. Die iuethylendichloridlösung v/urde abgetrennt und durcii Zugabe von Benzol und Abdestiliieren des azeotropcn Zolizo1-\,'3. ,_oi-Cei„ibcliet in. "Vekuun. _eetrLcknet. 2,6 £_ Chloracttenh^öric vuröeii 2U der getrccicneten Lxthylendici.loric.lc&urii-, gegeben. Das 3eaktionsgemisch wurde über ITacht bei Haumtemperatur belassen und sodann etwa 2,5 Stunden unter Hückfluis erhitzt. Zu dera Eeaktionsgemisch !

wurae ein ^bex'sciiui) an ..-.ethanol gegebetj, uiü'noch voriiandeies uberaciiüssiges Chlor acetanhydrid zu zerstören. Die flüchtigen

Eeatandteile wurden durch Abdampfen im Vakuum entfernt. j

Der .Rückstand wurue in Wasser gelöst und die lösung mit 14 η Aumoniumhydroxyd basisch gemacht. Die organischen Basen, die sich abschieden, wurden in xuethylendichlorid extrahiert. iüs wurde Äther zugegeben. 4,5 g eines Gemisches aus dem ^ono- und dem Di-(chloracetat) von Desacetylvincaleukoblastin wurden erhalten. Die Hydrolyse mit Hilfe von Kieselsäuregel nach dem Verfahren von Beispiel 6 lieferte Desacetylvincaleucoblastin, wie sich an Hand des kernmagnetischen -lesonaiizspeictrums des Produktes zeigte.

Geilt man bei dem obigen Verfahren von Desacetylleurocristin aus, so erhält man das Desacetylleurocristinchloricetat^-

BAD

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Beispiel 11

Alternativverfahren zur Herstellung von Desacetylvincal eukoblastinphenylacetat

350 mg DesacetylvincaleukoblastinsLilfat wurden, unter Erhitzen und Rühren in 75 ecm Acetonitril gelöst. 600 mg Phenylacetanhydrid wurden zugegeben, und das erhaltene Gemisch wurde 14 Stunden auf etwa 60⁰C erhitzt. Die Lösungsmittel wurden durch Abdampfen im Vakuum entfernt, und zur Umsetzung mit dem überschüssigen Phenylacetanhydrid wurde überschüssiges Methanol zugegeben. Die flüentigen Bestandteile wurden erneut durch Abdampfen im Vakuum entfernt, wobei ein sirupartiger .Rückstand zurückbliebt. Der .Rückstand wurde in Wasser gelöst, die wäßrige lösung alkalisch gemacht und das bei der obigen Umsetzung gebildete Desacetylvincaleukoblastinphenylacetat, das sich abgeschieden hatte, in kiethylendichlorid extrahiert. Der Methylendichla?oridextrakt wurde an einer Aluminiumoxyd(3ufe II)-Säule chromatographiert, wobei Methyle^dichlorid als Entwicklungsmittel verwendet wurde. Das Methylecdichlorid wurde aus dem Eluat durch Abdampfen im Vakuum entfernt. Der erhaltene Rückstand wurde in Methanol gelöst. Zu der Lösung wurden Wasser und Kieselsäuregel gegeben. Das Gemisch wurde etwa 4 Stunden am Rückfluß erhitzt. Die erhaltene Lösung wurde an einer mit Aluminiumoxyd (Stufe II)

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ti r rc

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gefüllten Säule chromatographiert und das aus dem Eluat erhaltene Desacetylvinealeukoblastinphenylacetat aus einem Methanol-Wasser-Gemisch kristallisiert. Das kernmagnetische Besonanzspektrum des Produktes zeigte, daß sich Desacetylvincaleukoblastinphenylacetat gebildet hatte.

Beispiel 12

Deaacet.ylvincaleukoblastintriohloracetat

'■'%■'

Unter Anwendung des Verfahrens von Beispiel 6 wurde Deeacetylvincaleukoblastin mit 'frichloracetanhydrid umgesetzt, wobei ein Überschuß des Anhydrids als Lösungsmittel verwendet wurde. Das Desacetylvincaleukoblastintrichloracetat wurde nach dem Verfahren von Beispiel 6 isoliert und durch Chromatographie an Aluminiumoxyd (Stufe II) gereinigt. Das Produkt wurde direkt aus dem bei der Chromatographie erhaltenen Eluat Kristallisiert. Das kernmagnetische Resonanzspektrum des kristallinen Produktes zeigte, daß eich Desacetylvincaleukoblastintrichloracetat gebildet hatte.

Beispiel 13 Desacetylvincaleukoblastin-n-butyrat

i;ach ae:n Verfahren von Beispiel 6 wurde Desacetylvincaleukoblastir \it ^-Buttersäureanhydrid unter Anwendung eines bbersc. ^sjea des Anhydrids als Lösungsmittel umgesetzt.

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Däs auf diese Weise gebildete Desacetglvincaleukoblastin-

n-butyrat wurde nach dem Verfahren von Beispiel 6 isoliert und durch Chromatographie gereinigt. Das auf diese Weise erhaltene gereinigte Desacetylvincaleukoblastin-n-butyrat wurde aus einem Äther-kethylendichlorid-Lösungsinittelgemisch kristallisiert.

Das auf diese Weise erhaltene Produkt wurde in einem Gemisch- aus Methanol und Wasser gelöst. 1 °/o±ge Schwefelsäure wurde bis auf pH = 2 zugegeben, wodurch Desacetylvincaleukoblastin-n-butyratsulfat gebildet wurde, das abgetrennt und sodann aus einem Gemisch von Äthanol und Isöpropanol kristallisiert wurde.

Beispiel 14

Alt^rnativverfahren zur Herstellung von Desacetylvincaleukobiastinisobutyrat

Durch Umsetzung von 1 ecm Isobuttersäure und 2 ecm Trifluoracetanhydrid in Lösung in Acetonitril bei Raumtemperatur wurde das geruischfe Anhydrid aus Isobuttersäure und Trifluoressigsäure hergestellt. Die Anhydridlösung wurde etwa 30 Minuten gerührt. Sodann wurden 300 mg Desacetylvincaleukoblastin, gelöst in 50 cc::. Acetonitril, hinzugegeben. Das erhaltene Reaktionsgeniisci- wurde etwa 3 2a?age bei

Raumtemperatur ger'.'hrt. Das Desacetylvincaleukoblastinisobuty-i. rat wurde nacL den Verfahren vor. £eisj.iel 6 isoliert und durch,

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Chromatographie an einex" Säure mit -aluminiumoxrd (Stufe II) ge.Leinigt. Das Desacetylvincaleukoblastinisobutyrat wurde direkt aus dem üluat kristallisiert. Das kernmagnetische Resonanzspektrum des kristallinen liatfcrials zeigte, daß in dem Molekül eine einzige Iso^- buttersäureestergruppe an einem sekundären Kohlenstoffatom vorlag.

Das auf diese Veise hergestellte Desacetylvincaleukoblastmisobutyrat wurde nach dem Verfahren von Beispiel in das entsprecnende Sulfat umgewandelt.

Beispiel 15 DesacetylvincaleukoblaBtinbezoat

1,5 g Benzoesäureanhydrid wurden zu einem Gemisch aus 1,35 mg DesacetylvincaleukolDlastinsulfat und 50 ecm Acetonitril gegeben. Das .Reaktionsgemisch wurde etwa 2 Stunden auf Rückflußtemperatur erhitzt und sodann etwa 3 Tage bei Raumtemperatur belassen. Die flüchtigen Bestandteile wurden aus dem Reaktionsgemisch durch Abdampfen im Vakuum entfernt. Der erhaltene Rückstand, der Deaacetylvincaleukoblastin· benzoatsulfat enthielt, wurde mit Äther gewaschen, um das unumgesetzte Benzoesäureanhydrid zu entfernen. Die ümkristal- !isation des Rückstandes aus Äthanol ergab ein kristallines

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Produkt, das sich bei der Dünnschichtchromatographie als ein Gemisch aus Desacetylvincaleukoblastin und DesacetylvincaleukolDlastinbezoat erwies.

Das erhaltene kristalline Produkt wurde dann durch Extraktion bei stufenweise erhöhten pH-Werten gereinigt. Dieses Extraktionsverfahren wurde wie folgt durchgefUrirt: Es wurde eine Oitronensäurelösung hergestellt, die 2,1 g Citronensäure und 100 ecm Wasser enthielt. Das Gemisch aus Desacetylvincaleukoblastin und Desacetylvincaleukoblastinbenzoat wurde in 50 ecm dieser Citronensäurelösung gelöst und die erhaltene Lösung mit Benzol bei pH = 3,1 extrahiert. Der pH-Wert wurde dann auf etwa 3_f6 erhöht und die Extraktion wiederholt· Der pH-Wert wurde sodann durch Zugabe von ■ Ammoniumhydroxyd schrittweise um je etwa 0,5 pH-Einheiten bis auf pH = 7,5 erhöht, wobei nach jeder pH-Steigerung eine Benzolextraktion durchgeführt wurde.' Der Benzolextrakt, der durch Extraktion aus der Lösung bei pH = 3,9 erhalten worden war,, enthielt eine einzige Substanz, wie sich durch Dünnschichtchromatographie an Kieselsäure zeigte. An Hand von Infrarotspektren sowie von kerniiagnetischen Resonanzspektren zeigte sich weiterhin, daß diese Fraktion, das gewünschte ;)esaoetylvincaleukoblaatinbenzoat enthielt.

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γι f r ir

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Die durch Extraktion bei pH= 3,1 - 4» 6 erhaltenen Fraktionen wurden vereinigt. Die Lösungsmittel wurden I duroh Abdampfen im Vakuum entfernt, und der erhaltene Rückstand wurde in Äthanol gelöst und mit Hilfe von 1 $iger Schwefelsäure nach dem Verfahren von Beispiel 13 in das ■ Sulfat umgewandelt. Die Umkristallisation des Sulfats aus einem Methanol-Athanol-Gemisch ergab reines DesacetylvincaleukoblaBtinbezoatBulfat. ■

Beispiel 16 DeBaoetylviiioaleukoblastindichloracetat

Naoh dem Verfahren von Beispiel 6 wurde Desaoetylvincaleukoblastin mit einem Überschuß an Dichloracetanhydrid in Lösung in llethylendichlorid umgesetzt. Das auf diese Weise hergestellte Desacetjfl. vincaleukoblastindichloracetat wurde nach dem Verfahren von Beispiel 6 isoliert. Die Dünnschichtchromatographie des aus dem Methylendichloridextrakt erhaltenen Produktes zeigte, daß ein neues acyliertes Desacetyl vincaleukoblastiii zugegeben war. Das kernmagnet is ehe Hesonanzspeictrum des Produktes zeigte, daß sich jjesacetylvincaleukoblastindichloracetat gebildet hatte. Die Verbin-

dung wurde durch Zugabe von 1 ^iger Schwefelsäure bis auf

pH = 2 naci: aer: "/erfahren von Leispiel 13 in ά as Sulfat um-

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Beispiel 17

Ue s ao e t yl ν inc al eukobl as t incy anacβ ta^fa

Liach aeiL Vs rfahr^ii. von J:eicpiel 7 vur,e ^ebacet leukoblastin nit at., -'-.-isehvön λΓ-ϊι^ _"id aUu Cyunessigsäure and jrifluorei&i₀sL'ure umgesetzt. ^^ mi disse ,/eise gebildete iieaacetj-ivinc- lPV-ko"Dlaetin°-_tö.nacetat' '.*;urde rxacii deu Verfahr-, u von .':eit;,iel 6 isoliert uuö ciurcii Oiiromatographie gereinigt. L-ie Terbindui^ v/urae :-u3 Äther ;.riita~lisiert und sodann ir: i. s.z entt^recn-nde ouifat unrgewai-del.t, das aus -^ethanol zur Kristallisation _oe racnt wurde. iüiii kerrimagnetisch.es Hesonanzspektruia des Produktes bestätigte, daß DesacetyivincaleukoblaGtincyanacet&t gebildet worden war.

Beispiel 18 Desacetylleurocristin

400 mg Leurocristin wurden in etwa 5 0 ecm !,.ethanol gelöst, die mit wasserfreier. Chlorwasserstoff gesättigt worden waren Das Gemisch wurde üter Nacht bei Haumtenperatur gehalten und sodann im Vakuum zur vrockne eingedar:.:ft. Der■ erhaltene Rückstand wurde in '.<asser ^elbst und iie v.^;ä.jiri_&e Phase mit 12 η Aiamoniumhydroxyd basisch gemacht. Lie basische Lösung wurde mit Uethyle.ichlorid extrahiert, die Lethylenchloridphase abgetrennt und aas i,.ethyleric:.lorid durch Abdampfen

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BAD

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im Vakuum entfernt. Die DünnschichtChromatographie eines aliquoter- I'eils des Rückstandes zeigte dad Vorliegen einer einzi_oen oubstanz, d.h. von Desacetyldesfomiylleurocristirio Der Rückstand wurue in 5 ecm einer Lösung aufgenommen, die 98 /«ige Ameisensäure und Acetanhydrid in eineiu molverhältnis von 1,1 : 1,0 enthielt. (Dieses Grerjiscli war 2 Tage vorher hergestellt und während aieaer Zeitdauer bei Raumtemperatur gehalten worden). Die erhaltene Lösung wurde über Uacht bei Raumtemperatur gehalten. Ein Überschuß an Methanol wurde zugegeben und die erhaltene Lösung 2 Stunden bei Raumtemperatur gehalten. Sodann wurde ein Überschuß eines üis-wasser-tfemisches, gefolgt von einem Überschuß an 12 η Ammoniumhydroxyd, zugegeben. Die erhaltene basische mischung wurde mit Methylendichlordi extrahiert, der Methylendichloridextrakt abgetrennt und das Methylendichlorid durch Abdampfen im Vakuum entfernt. Der erhaltene Rückstand, der sowohl Desacetylileurocristin als auch einen i'ormiatester des .Desacetylleurocristins enthielt, wurde hydrolysiert, indem über fracht in ^ethanol in Gegenwart von 0,1 g Kieselsäuregel am Rückfluß erhitzt wurde·. Durch dieses Verfahren konnte die Hydrolyse einer wesentlichen kenge der fformiatesterverbindung in Desacetylleurocristin erreicht 'werden. Der nach Abtrennung von

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Kieselsäuregel bei der Hydrolyse Erhaltene Eückstand wurde an Aluminiumoxyd chromatοgrapniert. Diejenigen Fraktionen, die nach der Dünnschi chtchromatograp hie vorweiegend Desacetyl-f

leurocristin enthielten, wurden miteinander vereinigt und : einem Jixtraktionsverfahren bei stufenweise veränderten pH-Werten unterworfen, wie es in der USA-Patentschrift j

(USA-Patentanmeldung Ser· Uo. 147 911 vom 26. Oktober 1961) I beschrieben wird,, Die nach diesem Verfahren bei pxi = 5,5 und 6,5 extrahierten Fraktionen enthielten - v?ie die Dünnschichtchromatographie ergab - lediglich eine einzige Verbindung und wurden miteinander vereinigt. Die Infrarotspektren und die kernmagnetischen Hesonanzspektren der in den vereinigten Fraktionen enthaltenen Verbindung befanden sich mit der dem Desacetylleurocristin zukommenden Struktur in Übereinstimmung.

Wird die Formylierung des Desformyldesacetylleurocristins bei dem obigen Verfahren lediglich eine halbe Stunde anstatt über Macht fortgesetzt, ist die &~B'ormylierung die Hauptreaktion, und es wird praktisch reines Desacetylleurocristin erhalten.

Beispiel 19

Herstellung von Salzen I

Andere Salze mit anorganischenTAnioneh, wie z.B. Chloride,

■ BAD

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Bromiifle, Phosphate, iiitrate und dgl«, sowie balze mit organischen Anionen, wie z.B. Acetate, Chloracetate, Triciiloracetate, Benzoate und dgl.,' wurden nach einem Verfahren hergestellt, dae dem in Beispiel 15 für die Herstellung der Sulfate oeschriehenen Verfahren analog •war. Dabei wurde die entsprechende Saure in geeigneter Verarmung anstelle der in Beispiel 13 benutzten 1 ^ wäßrigen Schwefelsaure verwendet.

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Claims

1 . Ve... bind mit der

Pat ent aiic prüche

OH

00(

OH

(a)

^ii.-suot.titui&rte C, -C^-AIk₁, l-Ot-äruppe

in der E eine ar^lsucLtituierte

eine aryl-Oü-^

ο α er eine C₁. Ursulastmtuierte G.-G^-ülkyl-CO-üruppe beaeutet} und in der H' eine C,-Cc-Alk^l^ruppe, HGO- oder eine C,-C₁--Alkyl-CO-Gruppe bedeutet, und deren saure

2. Verbindung nacL Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, aas saure Aaditicussalz ein öuiitt i.jt.

4. Xesacet":l.V"inc£..l3u.i':oc^ä3tin-beii.zcat.

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Neue unterlagen (A

BAD ORIGINAL

5o Desacetjlvincaleukoblastin-cyanacetat. 6ο DeüaoatylviiicalGukublastin-diciiloracetat. 7 ο JDesacetylviricaleukoblaijtiri-vxieriylaeetat.

ο. Verfahren zur üersteilung einas .^istera einer desacylierten vielkornigen Indplverbindun^ der allgen.einen Formel

(b)

000OH,

in der ß¹ eine O₁-G₅-AIkJl-, H-CO- oder O₁-G₅ Gruppe und H" eine G₁-G₅-AIkJl-OO-, fl-OÜ-, arjlsubstitLiierbü G₁-G₅-AIkJl_-GO-, iirjl-00-, halo^ensubstituierte O₁-O₅-AIkJl-GO- oder cjaisubjtituierte G₁-O₅-AIkJl-CO-ü-ruppe bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung d r allgemeinen Formel

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BAD ORl.GINAl

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in einem sauren ο der basischen Liedium eselektiv zu einer Verbindung der allgemeinen formel

OR

hydrolysiert, wobei in.den letzteren beiden i'oriLelri £' die obengenannte Bedeutung hat, daß man die hydrolysierte Verbindung in Gegenv/art eines Lösungsmittels für das Acylierungsmittal und die zu acylierende Verbindung mit einem Acylierungsmittel zu einem Gemisch von mono- und diacylierten Produkten acyliert» daß man sodann dieses G-emiach. in "

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BAD OBiGlNAU

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eineia Lösungsmittel für diesem Geuiceh niit Kaesels&ure behandelt und aau.dei· ■ - i.rl: iie jjbtcr wahlweise in ein saures /u-diticnsaalz übr üürt wire.

9· Verfahren nach Anspraol. ε, dadurch gekeuiiseicüßt, daß in der als Aus^an^sLiatei^iai eintet.et~tei. viel^erni^en Indolverbindung, die eine 4-AcetylgrupT)e aufweist, der Rest R" eine u-CQ- oder eine ^-Oc-Alkyl-GO-Grruppe ist, daß die (iruppe H' während der- Hydrolyse entfernt wird, und daß die erhaltene vielkernige 1-Deöacyl-4-desacetjl-iriaoi-

! Verbindung nachfolgend alisrliert oder acyliex-t wir α, uu ι einen C₁-Cg-AIk^-I-, H-GO- oder ,C^-C^- • in der l-£>telluii£

10. Verfahren nucL ausprac^ L oder 9, dadurch gekennseicLntt, daß man Viiicaleu.ltCLj.ao«iu 5i.il; CJ-.ior'.vioRerotuff in .ethanol, Hydra£iii in .ütliylsr.&l^-kol oder .^uLa::jI« oiei' ^laläui-icarbcnut oder ivaliuüi:_t ..ro^, -I i:. ....tl.an.1 f-1^ ;iydrolyEo^.ittel Lehai^elt die Lc^"Jiii_t.£>:.ii"t"c -_ durc. -Λ·αε-.ι.ί!-ϊΐ i:.x Vakuum entfernt, den Rückstand in .ats-i-r oder einei.. uiudertu jilkjlaxkohul lest, die erhaltene jjwjuuq LliC;-lii5Ch .^ϋΰΐ^τ, üie «li.ti.lisoi.fc I.cüul_o Eiit ..ethyier:dic„-.oi'id e;iträniert, da.- ..et.^iG;-dichlcriä iu Vakuum abdai^rft, den i.acl. de^. -.-Χάε.::^ i'eü vercleib-cnaen itückstand iu i/aoccr oder eiiiiia nieäero;. -.„k*\Laikohol oder eins:

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BAD ORIGINAL

G-emisoh aus diesen Lösungsmitteln löst, die Kristallisation einleitet, daa so erhaltene Desacetylvincaleukofolastin mit einem Überschuß von Acetanhydrid oder einem gemischben sauren Anhydrid in Berührung bringt, zur Umsetzung mit dem Überschuß des Anhydrids Methanol zugibt, die Lösungsmittel durcn Abdampfen im Vakuum entfernt, das Medium alkalisch macht, die erhaltene freie Base mit hilfe von kethyleiidichlorid extrahiert, das kethylendichlorid im Vakuum entfernt, den Rückstand in einem wäßrigen Alkohol, der Kieselsäuregel enthält, löst, das Gemisch rührt, filtriert und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt.

11. Verfahren nach Anspruch 8, 9 oder 10, dadurch gekennzeichnet, dai3 man zu einem Gemisch von Desacety. »incaleukoblastineulfat in Acetonitril Benzoeseureanhydrid gibt, das Gemisch am Eückfluü erhitzt und dann zur Umsetzung mit äeu* 'Jberechuß des Anhydrids Methanol zugibt.

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