CZ69094A3 - Heterocyclic inhibitors of farnesylprotein transferase - Google Patents

Description

Vynález se týká sloučenin, které inhibují farnesylprotein transferásu· a Ras protein farúesylaci, což je činí vhodnými jako protirakovinová činidla. Tyto sloučeniny jsou také vhodné při léčení chorob·, jiných než je rakovina, spojených se signálními transdukčními drahami operujícími přes Ras a tím spojenými s. GAAX-obsahujícími proteiny jinými než je Ras, které jsou také posttranslačně modifikovány enzymem· farnesyl protein transferásou. Sloučeniny také mohou působit jako inhibitory jiných prenyl transferás a jsou tak účinné při léčení chorob spojených s jinými prenyl modifikacemi proteinů.

Podstata vynálezu

Rodina samčích ras genů zahrnuje tři geny, H-ras, K-ras a N-ras. Ras proteiny jsou rodina GTP-vázajících a hydrolyzujících proteinů,, které regulují buněčný růst a diferenciaci. Nadprodukce normálních Ras proteinů nebo mutace, které inhibují jejich GTPásovou aktivitu mohou vést k nekontrolovatelnému! buněčnému dělení.

Transformační aktivita ras je závislá na lokalizaci proteinu k plasmové membráně. Tato vazba k membráně se uskutečňuje sérií posttranslačních modifikací cytosolických Ras proteinů. Prvním a podstatným stupněm v této sekvenci je vždy farnesylace těchto proteinů. Reakce je katalyzována farnesyl protein transferásou; (FTP) a farnesyl pyrofosfáfc (FPP) slouží jako· donor farnesylové skupiny v této reakci. Ras C-terminus obsahuje motiv sekvence Cys-Aaa^Aaa₂~Xaa box (CAXX box), kde 8ys je cystein, Aaa je alifatické aminokyselina a Xaa je serin nebo methionin. Farně-2sylace probíhá na cysteinylovém zbytku CAAX boxu (Cys-186), čímž je připojena prenylskupina ^proteinu- vazbou thioetherovou.

Podstata vynálezu

V souladu s předloženým vynálezem sloučeniny obecného vzorce I

H(X)

H(Gi) její enantiomery a diastereomery a farmaceuticky přijatelné soli, prodrugs a jejich solváty, inhibující S-farnesyl protein transferásu;, což je enzym zahrnutý do ras onkogenní funkce. Ve vzorci I a v celém popise, pokud není uvedeno jinak, jsou výše uvedené symboly definovány následovně

A^ a Ag jsou každý nezávisle na druhém H, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, fenyl nebo substituovaný fenyl,

G₁ je S rrebc O,

G₂ je ff, -0(0)011, -C(O)NH₂, 5-tetrazolyl, -C(O)N(R_?)OH nebo GHgOH,

X je O nebo· R_gN,

Y a Z jsou nezávisle na sobě každý -CHg- nebo; -C(O)-,

R^ ,. Rg, R^, R^, R^, Rg a Ry jsou každý nezávisle na ostatních H nebo alkyl,

-3R^ může být také alkanoyl,

R₁ a A₁ společně mohou znamenat ’

Rg je H, alkyl, fenyl,, fenylalkyl, substituovaný fenyl, (substituovaný fenyl)alk.yl nebo -C(O)Rg,

Rg je H_ř alkyl, fenyl, fenylalkyl, substituovaný fenyl nebo (substituovaný fenyl)alkyl, m je 3 nebo 4, n je 0,1 nebo 2, p je 0,1 nebo 2 a q je 0 nebo 1 s podmínkou, že jr-li p 0, potom je q také 0.

Déle jsou uvedeny definice různých termínů používaných v tomto popise'. Tyto definice je třeba aplikovat na výrazy, které jsou v popise použity, pokud není ve specifio.kých příkladech uvedeno jinak, bu3 jako samostatné nebo jsou-li částí větší skupiny.

Výraz alkyl nebo alk- označuje přímé nebo rozvětvené řetězce nesubstiťuovaných uhlovodíkových skupin s 1 až 7 atomy uhlíku. Výraz nižší alkyl označuje nesubstituované alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku.

Výraz cykloalkyl označuje cyklické uhlovodíkové skupiny se 3- až 8 atomy uhlíku.

Výraz halogen nebo halo označuje fluor, chlor, brom a jod.

Výraz alkoxy označuje alkyl-O-.

-4Výraz alkanoyl označuje alkyl-C(O)-.

Výraz alkanoyloxy označuje alk,yl-C(O)-O-.

Výraz alkylamino a dialk.ylamino označuje (alkyl)NHa (alkyl)₂N-.

Výraz·, alkanoylamino označuje alkyl-C(O)-NH-.

Výraz alkylthio označuje alkyl-S-.

Výraz alkylthiono označuje alkyl-S-40)-.

Výraz alkylsulfonyl označuje alkyl-SÍO^-.

Výraz karbamyl označuje -CÍOÍNH^·

Výraz alkoxykarbonyl označuje alkyl-O-C(O)-.

Výrazy “subsjtituovaný alkyl a substituovaný cykloalkyl označují alkylovou nebo cykloalkylovou skupinu, substituovanou například jedním až čtyřmi substituenty jako je halo, hydroxy, alkoxy, alkanoyl, alkanoyloxy, amino, alkylamino, dialkylamino, alkanoylamino, thiol, alkylthio, alkylthiono, alkylsulfonyl, sulfonamido, nitro, kyan, karboxy, karba myl, N-hydroxykarbamyl, alkoxykarbonyl, fenyl, substituovanný fenyl, guanidino:, indolyl, imidazolyl, furyl, thienyl, thiazolyl, pyrrolidinyl, pyridyl, pyrimidyl a podobně.

Výraz substituovaný fenyl zahrnuje fenylovou skupinu substituovanou například¹ jedním až čtyřmi substituenty jakoje alkyl, halo, hydroxy, alkoxy, alkanoyl, alkanoyloxy, amino, alkylamino, dialkylamino, alkanoylamino, thiol, alkylthio, nitro, kyano, karboxy, karbamyl, alkoxykarbonyl., alkylthiono, alkylsulfonyl, sulfonamido a podobně.

-5Sloučeniny vzorce I tvoří soli, které také spadají do rozsahu předloženého vynálezu. Farmaceuticky přijatelné (tj. netoxické, fyziologicky přijatelné) soli jsou preferovány, i když jiné soli jsou také vhodné, např. při izolaci nebo čištění sloučenin podle vynálezu.

Sloučeniny vzorce I mohou tvořit soli s alkalickými kovy jako je sodík, draslík a lithium, s kovy alkalických zemin jako je vápník a hořčík, s organickými bázemi jako je dicyklohexylamin, tributylamin, pyridin a aminokyseliny jako je arginin, lysin a podobně. Tyto soli mohou být získány výměnou protonů karboxylové kyseliny ve sloučenině vzorce I za požadovaný ion v prostředí, ve kterém se sůl sráží nebo ve vodném prostředí s následujícím odpařením.

Jestliže sloučenina vzorce I obsahuje bázickou skupinu, jako je amino nebo substituovaná amino, může tvořit soli s různými organickými a anorganickými kyselinami. Tyto soli zahrnují ty, které jsou vytvořeny s chlorovodíkem, bromovodíkem, kyselinou methansulfonovou, kyselinou sírovou, kyselinou octovou, kyselinou tiifluoroctovou, kyselinou maleinovou, kyselinou benzensulfonovou, kyselinou toluensulfonovou a různé jiné (např. nitráty, fosfáty, boráty, tartróty, citráty, sukcináty, benzoáty, askorbáty, salicyláty a podobně). Tyto soli mohou být vytvořena reakcí sloučeniny vzorce I v ekvivalentním množství kyseliny v prostředí, ve kterém se sůl sráží nebo ve vodném mediu s následujícím odpařením.

Dále mohou být vytvořena zwitteriony (vnitřní soli).

Sloučenina vzorce I může také mít formu prodrug. Jakékoliv sloučenina, které se in vivo bude konvertovat tak, Ze

-6poskytne bioaktivní činidlo (tj.. sloučeninu vzorce I) je prodrug v rozsahu a duchu vynálezu. Například může být slou čenina vzorce I ve formě prodrug, majícího vzorec II

H(X)_q

.COOR i q

H(Gi) kde je nižší alkyl jako je methyl, ethyl a podobně, substituovaný nižší alkyl jako je 2-(N-morfolin)ethyl a podobně, nižší aralkyl jako je benzyl, bifenylmethyl a podobně, (acyloxy)alkyl jako je (pivalyloxy)methyl, 1 -(propanoylox.y)-2-methyl-1 -propyl a podobně, (aminoacyloxy )aroyloxyalkyl, jako je para-gl.ycyloxybenízoyloxymethyl a podobně, (aminoalkoxy )aroyloxyalkyl, jako je para-2-/(N-morfolin) ethoxy/benzoyloxymethyl a podobně, substituované amidy jako je N,N-di (2-hydr oxy ethyl )acetamido, 4-methylpiperazin-1-acetyl, 4- (2-hydroxyethyl )pi-7perazin-1-acetyl a podobně nebo dioxolanmethyl jako je (5-’methyl-2-oxo-1,3“dioxolan4-,yl) methyl a podobně.

Dále u sloučeniny vzorce O, kde A je -(CH₉) OH (kde w je 2 nebo 3.) a G₂ je -C(O)OH, mohou být A₂ a G₂ spojeny za vzniku laktonového kruhu, který může být otevřen in vivo za vzniku sloučeniny vzorce I, kde A^ je -(CH₂)_wOH (kde w je 2 nebo: 3) a G₂ je -C(O)OH.

Různé formy prodrugs jsou v oboru dobře známé. Příklady takových prodrug derivátů viz:

a) Design of Prodrugs, vyd.H.Qundgaard, (Elsevier, 1985) a lViethods in Enzymology, Vol.42, str. 309 až 396, vyd.K.

Widder a spol., (Academie; Press, 1985),

b) Textboolc of Drug Design and Development, vyd. Krogsgaad-Larsen a H.Bundgaard, kapitola 5, D_Psign and Application of Prodrugs, H.Bundgaard, str. 113-191 (1991),

c) H.Bundgaard, Advanced Drug Dplivery Rewiews, 8, 1-38 (1902),

d) H.Bundgaard a spol., Journal of Pharmaceutical Sciences,

77, 285 (1988) a

e) N.Kakeya a spol., Chem:.Pharm.Bull, 32.692 (1984).

Do rozsahu vynálezu spadají také solváty (např.hydráty) sloučenin vzorce I. Způsob solvatace je obecně v oboru znám.

Výhodné skupiny

Pro sloučeninu vzorce I jsou preferovány následující skupiny:

A^ a A₂ jsou každý nezávisle na druhém H nebo D-,L- nebo DL-ch₃, -ch(ch₃)₂, -ch₂ch(ch₃)₂, -ce(ch₃)ch₂ch₃, -c(ch₃)₃,

-0¾ OH, -ΟΗτ,ΟΗ,,ΟΗ, -CH₂CH₂CH₂0H, -CH(OH)CH₃

-CK2 νΛ

OH

-CH2 ch₂ ch₂ ch₂ nh₂.

CH₂CH₂CH₂NH— C-NH2 MH

-CE₂C(O)OH, -SIT₂CH₂C(O)OH·, -CH₂C(O)NH₂, -CH₂CH₂C(O)NR_nR_l2, kde R₁₁ ^a R12 J^sou nezávisle na sobě každý' H, alkyl nebo fenyl a R11 a R₁₂ spoli mohou tvořit -(CH₂)₀- , kde o je 2 až 6, -0¾ 0¾C(O)NHOH, -CH₂SH, -CH₂CH₂SH,

-Grr₂GE₂S(O)₂NH₂, -Cff₂CH-₂OCH₃ nebo -CHgCf^SCHy

Zvláště preferovány jsou následující skupiny: a₁ je -0¾, -cir(cff₃)₂, -ch₂ch(ch₃)₂, -c(ch₃)₃, -ch(ch₃)ch₂ch₃, -0¾ OH nebo -CH^r(OH)GH_3r

A₂ je -CH₂CH₂SCH₃, -CH₂CH^OH·, -CH₂CH₂CH₂OH,

-0H'₂CH₂0(0)NR₁₁R₁₂, kde ₁ a R_{] 2} jsou nezávisle na sobě každý H, alkyl nebo fenyl a a R₁₂ mohou spolu tvořit -.(0¾)_σ- , kde o je 2 až 6>, -01^0^00¾ nebo -CHgCI^SH,

G₁ je S,

G₂ je -0(0)0ϊΓ,

X je RgN,

Y je -CÍT₂-,

Rj , R₂,5 R₃r Rp Rg> Ry ^a Rg jsOU? H, n je 1 a p je 1.

-9Použití a využitelnost

Sloučeniny obecného vzorce I jsou inhibitory S-farnesyl protein transferásy. Proto mohou·· být použitelné při léčení' různých rakovin, zahrnujících (ale neomezujících se tak) následující:

- karcinom, zahrnující karcinomy měchýře, prsu, střeva, leďvin, jater, plic;, vaječníků, pankreasu, žaludku, cervixu·, thyroiďts a kůže,.

- hematopoietické tumory lymfoidní linie, zahrnující akutní lymfoc.ytické leukemie, B-buněčný lymfom· a Burkettův lymfom,

- hematopoietické tumory myeloidní linie, zahrnující akutní a chronické myelogenní leukemie a promyelocytické leukemie,

- tumory mesenchymálního původu, zahrnující fibrosarkom a rhabdomyosarkom a

- jiné tumory, zahrnující melanomy, seminomy, tetratokarcinomy, neuroblastomy a gliomy.

Sloučeniny vzorce I jsou zejména použitelné při léčení tumorů, majících vysoký výskyt ras zapojení, jako jsou střevní, plicní a pankreatioké tumory. Při podání přípravku, obsahujícího jednu (nebo; kombinaci) ze sloučenin podle vynálezu, se vývoj tumorů v savčím hostiteli redukuje.

Sloučeniny vzorce I mohou také být použitelné' při léčení chorob jiných než je rakovina, které mohou být spojeny se signální transdukcí drah, operujících přes Pas, např. neuro-fibromatosfd.

Sloučeniny vzorce I mohou být také použitelné při léčení chorob spojených s CAAX-obsahujícími proteiny jinými než Pas (např. jaderné laminy a transducin), které jsou; také posttranslačně modifikovány enzymem farnesyl protein

-10transferásou.

Sloučeniny vzorce I mohou také působit jako inhibitory jiných prenyl transferás (např. geranylgeranyl transferásy) a být tak účinné při léčbě chorob snojených s jinými prenyl modifikacemi (napřv geranylgeranylace) proteinů (např. rap, rab, rac· a rho genové proďukty a podobně). Například mohou nalézt použití jako- léčiva vůči Hepatitis delta viravým (HDV) infekcím·, jak bylo v poslední době potvrzeno zjištěním, že geranylgeranylace? velké isoformy delta antigenu HDV je požadavkem· pro; produktivní virovou infekci /J.S.Glenn a spol., Science, 256, 1331 (1992)/.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být také použitelné v kombinaci se známými protirakovinovými a cytotoxickými činidly. Jestliže jsour formulovány' jako pevná dávka, mohou takové' kombinační produkty obsahovat sloučeniny podle vynálezu’ v dávkovém rozmezí popsaném dále a jiné farmaceuticky aktivní činidlo· v jeho doporučeném dávkovém rozsahu. Sloučeniny vzorce I mohou být použity postupně se známými protirakovinovými nebo cytotoxickými činidly, jestliže je kombinační přípravek nevhodný.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být formulovány s farmaceutickým vehikulem nebo ředidlem pro orální, intravenozní nebo subkutánní podání.. Farmaceutický přípravek múzo být formulován klasickým způsobem na použití pevných nebo.· kapalných vehikul, ředidel a aditiv vhodných pro požadovaný způsob podání. Orálně mohou být sloučeniny podávány ve formě tablet, kapslí, granulí, prášků a podobně. Tyto sloučeniny mohou být podávány v dávkovém rozsahu od asi 0,05 do 50 mg/kg/den, výhodně méně než 50 mg/kg/den, v jediné dávce nebo 2 až 4 rozdělených, dávkách.

-1 1Způsob přípravy

Sloučenina dále uvedeného vzorce III, kde Pro^ je chránící skupina aminoskupiny (např. terč.butyloxykarbonyl (Boc), benzyloxykarbonyl (Cbz) a podobně):

(III) může být koDulována s aminokyselinovým dérivétem chráněným na karbox.yskupině vzorce IV

Rs ΐ

(IV) ma Ýaniku; sloučeniny vzorce V dále, kde Pro₂ je chránící skupina karboxyiové skupiny (např. alkyl, benzyl, p-methoxybenzyl a podobně):

o a₂

-1 —

Další příklady chránících skupin amino- a karboxyskupin ( jakož i způsoby přípravy a eventuálního odstranění chránících skupin) viz. T.W.Greene a P.G.M.Wuts, Protective Groups in Organic S.ynthesis, 2.vydání, John Wiley aná Sons, New York, 1991.

Pro tuto kopulaci mohou být použita různá kopulační činidla, zahrnující 1 -(3-dimethylamihopropyl)-3-ethylkarbodiimid hydrochloriď (EDCI) s 1-hydroxybenzotriazolem (HOBT), dicyklohexylkarbodiimiď (DCC) s HOBT, benzotriazol-1-yloxytris (dimethylamino)forfoniumhexafluorofosfát (BOP) s nebo bez HOBT, karbonyldiimidazol (CDI), bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)fosfochlorid (BOP chlorid), isopropylchlorformiát (IPCF) a podobně.

Sloučeniny vzorce IV jsou známé v oboru. Viz např. R.M. Williams, S.ynthesis of Optically Active -Amino Acids, Pergamon Press, Oxford’, 1989·

Sloučeniny vzorce III mohou být připraveny metodami v oboru známými. Například¹, pro sloučeniny vzorce III, kde n je 1 a Rj je alkyl, viz např. J.W.Skiles a spol., J.Med.

Chem., 29, 784 (1986) a U.Schollkopf a spol., Angew.Chem. Int.Ed.Engl., 26, 143 (1987). Pro sloučeniny vzorce III, kde R^ je alkyl a n je 1 viz například I.Huber a D. Seebach, Helvetica Chim Acta, 70, 1944 (1987). Pro sloučeniny vzorcem III, kde n je 0 a R^ je H viz např. J.L. Stantorr a spol., J. Med.Chem., 26, 1267 (1983) a kde n je 2 a R^ je H viz např·.

M.Okada a spol., JP 02,193,971, 31.červenec 1990.

Sloučeniny vzorce V mohou být zpracovány se vhodným N-deprotekčním činidlem pro poskytnutí odpovídajícího volného aminu vzorce VI

CO₂Pro₂

O A₂ (VI) (Pr^ a Pro^ chránící skupiny jsou zvoleny tak, že Pro^ může být selektivně odstraněna za přítomnosti Ργο£).

Amin vzorce VI může být kopulován se vhodnou aminochrá něnou aminokyselinou vzorce VII (kde Pro^ je aminovou skupinu chránící skupina):

(VII) za použití vhodného kopulačního činidla (např. ΒΟΡ-CL) za vzniku sloučeniny vzorce VIII

(Sloučeniny vzorce VIII jsou v oboru známé# Viz např'. R.lí.

-13Williams, Synthesis of Optically Active -amino Acids”, Pergamon Press, Oxford, 1989).

Sloučeniny vzorce VIII mohou být také připraveny kopulací C-terminálně chráněné aminokyseliny vzorce IX (kde Pro^ je chránící skupina karboxylové kyseliny):

(ÍX) s amino-chráraěnou aminokyselinou vzorce VII výše za vzniku sloučeniny vzorce X:

Pro^ chránící skupina sloučeniny X může být selektivně odstraněna metodami v oboru známými za vzniku sloučeniny vzorce XI dále

(Pro^ a ^Ρι,°4 chránící skupiny jsou voleny tak, že Pro^ může být selektivně odstraněna za přítomnosti Pro^).

Kopulací sloučeniny vzorce XI s aminoesterem vzorce IV pak může být poskytnuta sloučenina vzorce VIII.

Sloučenina vzorce VIII může být selektivně N-zbavena chránící skupiny metodami v oboru známými za vzniku aminu vzorce XII

(Pro₂ a Pro^ chránící skupiny jsou voleny tak, že Pro^ může být selektivně odstraněna za přítomnosti Pro₂).

Kopulací amino vzorce XII s kyselinou vzorce XIII (kde X a jsou popřípadě chráněny):

(XIII) se vhodným kopulačním činidlem se získá sloučenina vzorce

Odstraněním? Pro₂ skupiny z XIV a odstraněním popřípadě přítomných chránících skupin, chránících X a se pak získá sloučenina vzorce I, kde Y a Z jsou -C(O)- a G₂ je -C(O)OH. (Viz Τ'.W.Greene a P.G.M.Wuts, Protective^ Groups in Organic· Synthesis”, John Wiley and Sons, New Yonk, 1991,pro příklady chránících skupin pro X a G₁ , jejich tvorbu a odstranění).

Alternativně, odstranění dusík chránící skupiny (Proy) ze sloučeniny vzorce X poskytne amin vzorce XV:

O (XV)

-16který pak může být kopulovém s kyselinou vzorce XIII za vzniku sloučeniny vzorce XVI, kde X a G₁ jsou popřípadě chráněny:

Selektivní odstranění Pro^ ne kyselinu vzorce XVII chránící skupiny XVI poskyt-

která může být kopulována s aminem vzorce IV za vzniku sloučeniny vzorce XIV. Odstranění Pro₂ chránící skupiny z XIV a odstranění popřípadě přítomných; chránících skupin na X a G₁ pair také poskytne sloučeninu vzorce I, kde Y a Z jsou -C(O)a G₂ je -C(O)OE.

Sloučenina vzorce I, kde Y a Z jsou -C(0)- a G₂ je -C(O)-OH nebo -C(O)NR₂, mohou být připraveny automatickou peptidovóu syntézou v pevné fázi za použití metod dobře v oboru známých.

-17Viz například:

a) M.Bodanszky a A.Bodanszky, “The Practice of Peptide Synthe sis, Springer Verlag, Beriín/Heidelberg/New York/Tokyo, 1984.

b) J..M. Stewart a J-D.Young, Solid Phase Peptide Syn thesis, Pierce Chemical Co., Rockport, Illinois, 1984.

Redukce sloučeniny vzorce XVIII dále, kde Pro^ je aminchránící skupina (např. T_erc►butyloxykarbonyl (Boc), benzyloxykarbonyl (Cbz) a podobně):

Pro ₅

(XVIII) s redukčním činidlem jako je boran, poskytne alkohol vzor ce XIX:

Pro ₅

(XIX)

Sloučenina vzorce XIX může nýt zbavena chránící N-skupiny metodami známými v oboru za vzniku aminu vzorce XlXa:

H‘

Rs

ch₂oh a₂ (XlXa)

-18který může být kopulován se sloučeninou vzorce XVII za vzniku sloučeniny vzorce XX

H(G_X)

Odstranění popřípadě přítomných chránících skupin chránících X a G pak poskytne sloučeninu vzorce I, kde Y a Z jsou -C(O) a Gg je -CHgOH.

Sloučeniny vzorce XVTII jsou známé v oboru·. Viz například R.M.Williams, Synthesis of Optically Avtive? X-Amino Acids, Pergaraon Press, Oxford, 1989.

Sloučenina vzorce I, kde Y a 2. jsou -C(O) a Gg je -CHgOH mohou být také přioraveay použitím automatizované peptidové syntézy v pevné fázi provedením· rutinního konečného stupně uvolnění produktu? z jeho pevného nosiče postupem podl© ď.M.Stewarta a spol., US patent č. 4254023 (1981). Například C-terminální aminokyselinový zbytek obvykle připojený k fenylacetamidomethyl (PAM) pryskyřici může být uvolněn jako primárnií alkohol po zpracování s lithiumborohydridem ve vhodném rozpouštědle jako je tetráhydrofuran.

Kopulace sloučeniny vzorce VII se sloučeninou vzorce

XXI

-19H' *5

A₂ (XIX) a odstranění případných chránících skupin X a G₁ poskytne sloučeninu vzorce I, kde Y a Z jsou -C(O)- a G₂ je H. Slou· čeniny vzorce XXI mohou být připraveny metodami známými v oboru.

Selektivní odstranění Pro₂ skupiny ve sloučenině vzorce XIV metodami známými v oboru; poskytne sloučeninu vzorce XXII, kde X a G₁ jsou popřípadě chráněny:

Sloučenina vzorce XXII může být kopulována s alkoxyaminem,· vzorce XXIII dále (kde PrOg je vhodná chránící skupina známá v oboruqi např. benzyl, 2-tetrahydropyranyl (THP) a podobně):

HN - OPro<

I

R₇ (XXIII) metodami známými v oboru za vzniku hydroxamového etherui vzorce XXIV, kde X a G₁ jsou popřípadě chráněny:

-20H(X)

H(Gi) (CH₂) /

o

0Pro₆ (XXIV)

Vhodné odstranění chránících skupin ze sloučeniny vzorce XXIV, je-li žádoucí', závisí na definicích. Pro^, G\j poskytne sloučeninu vzorce I, kde Y a Z jsou -C<0)je c(o)nt(r₇)oh;

Kyselina vzorce XVIII může být kopulována s amoniakem metodami v oboru známými za vzniku amidu vzorce XXV:

Amid vzorce XXV může být dehydratován za vzniku nitrilu vzorce XXVI metodami známými v oboru: (např· POCl^ v pyridinu nebo p-toluensulfonylchloridu v pyridinu):

^A2

ProJT

ΟΓΓ ^R6 (XXVT)

Sloučenina vzorce vzorce XXVII, kde Pro? metodami v oboru známým	XXVI může je vhodná i:	být převedena na teťrazol-chránící	tetrazol skupina
A2	Pro 7
		I N		(XXVII)
ΡΓΟςΝ**** I F	V
<6 \\	//
Rs	N-	—N

Hapříklaď zahřétím sloučeniny vzorce XXVI s tributylcínazidem v organickém rozpouštědle (např. toluenu), s násle dujícím ošetřením hydroxidem a tritylchloridem; se získá sloučenina vzorce XXVII, kde Pro? je tritylová skupina. Viz napru P.Brooks a spol., J.Chem.Soeu, 925 (1960); Í.Hirotsui a spol.,. Bull.Chem.Son.Japan, 40, 2945 (1967): Z.Grzonka a B.Liberek, Roczniki Chemii Ann.Soc„Chim.Polonorum, 45, 967 (1971 ).

Alternativně může být sloučenina vzorce XVIII kopulována s aminem vzorce XXVIII dále metodami v oboru známými:

- Pro γ (XXVIII) za vzniku amidu vzorce XXIX:

(XXIX)

-22který může být zpracován za podmínek známých v oboru·· (např. azidotrimethylsilanems, trifenylfosfinern, diethylazodikarboxylátem v tetrahydrofuranu, jak je popsáno· v práci J.V. Duncia a spol., J.Org.Chem. 56 2395 (1991 )) za vzniku sloučeniny vzorce XXVII. Například sloučenina vzorce XXVII, kde Pro?, je kyanoethylskupina, může být připravena použitím tohoto alternativního postupu.

Odstranění Pro^ chránící' skupiny ze sloučeniny vzorce XXVII poskytne amin vzorce- XXX

a₂ Pro7 (XXX) který může být kopulován s kyselinou vzorce XVII za vzniku sloučeniny vzorce XXXI, kde X a G₁ jsou popřípadě chráněny (XXXI)

H(GÍ)

-23Vhodné odstranění' chránících skupin ze sloučeniny vzorce XXXI je-li žádoucí, závisí na definicích Pro^,, X a metodami známými v oboru, poskytne sloučeninu vzorce I, kde Y a Z jsou -C(O)- a G£ je 5-tetrazolyI.

Aminokyselina vzorce? VII (kde Pro^ je vhodná aminochránící skupina) může být převedena na N-methoxy-N-methylamiď vzorce XXXII metodami známými v oboru:

ΡΓΟ:

zíSr₂ II o

.NCH₃

I •o (XXXII)

XXXII může být redukována na aldehyd· známými v oboru' (např·. Fehrentz a spol

Sloučenina vzorce vzorce XXXIII metodami Synthesis, 676 (1983)) ·

Ai (XXXIII)

Pro₃ *

r₂ II

Rl O

Alternativně, sloučenina vzorce XXXIII může být připravena redukcí sloučeniny vzorce VII redukčním činidlem jako je boran s následující oxidací vzniklého alkoholu za použití například Swerovy metody oxidace (např·. Lul.y a spol., J.Org.

-24Chem., 52, 1497 (1987)j Stanfielď a spol., J.Org.Chem., 46, 4797 (1981)). V ještě další alternativě, sloučenina vzorce⁵ XXXIII může být připravena redukcí esteru’ sloučeniny vzorce VII redukčním činidlem jako je diisobutylaluminiumhydroxiď. Viz např. Rich' a spol., J.Org.Chem·,43, 3624 (1978).

N-Chráněný aldehyd vzorce XXXIII může být redukčně ami novén: aminem vzorce VI za vzniku sloučeniny vzorce XXXIV použitím metod? známých v oboru (např. Borch a spol., J.Am. Chem.Soc., 93, 2897 (1971)):

(XXXIV)

Sloučenina vzorce XXXIV může být zpracována se vhodným N-deprotekčním činidlem za vzniku odpovídajícího volného aminu vzorce XXXV

Re

I ^C0₂Pro₂ (XXXV)

-25H(Gi) (Prc>2 a Pra^ chránící skupiny jsou zvoleny tak, že Pro^ může být selektivně odstraněna za přítomnosti ΡγΟ£)·

Sloučenina vzorce XXXV může být kopulována s kyselinou vzorce XIII (kde X a G^ jsou popřípadě chráněny) za použití vhodného kopulačního činidla za vzniku sloučeniny vzorce XXXVI:

H(X)_q

(XXXVI)

Odstranění ΡΓΟ2 chránící skupiny XXXVI a odstranění popřípadě přítomných chránících skupin, na X a G^ poskytne* sloučeninu vzorce I, kde Y je -C(O)-, Z je -Cffg“ a G2 je G(0)0H. (Viz.T.W.Greene- a P.G.M.Wuts, Protective Groups. in Organic Syn thesis”, 2. vydání, John Wiley and Sons., New York 1991, pro příklady chránících skupin X a Gp jejich tvorbu a odstranění)..

Kyselina vzorce XIII (kde X a G₁ jsou popřípadě chráněny) může být také převedena na N-me t hoxy-N- methy lam i ď vzorce XXXVII metodami známými v oboru (např. Fehreatz a spol Synthesis, 676^; (1983))^:

-26η(χ),η 5

Γ r<\ yCH₂)_pCH₃ ^CH3 (XXXVII)

H(G_X)

Sloučeniny vzorce XXXVII může být selektivně redukována na aldehyd’ vzorce XXXVIII metodami známými v obora (např. Fehrentz a spol., Synthesis, 676 (1983))!

;ch₂)_p

HÍGjJ (XXXVIII)

Aldehyd vzorce XXXVIII může být reduktivně aminovára aminem vzorce XII za vzniku: sloučeniny vzorce XXXIX použitím metod známých v oboru (Borch a spol., ď.Am.Chem.Soc. 93.,

2897 (1971)):

(XXXIX)

Deprctekcď Pro₂ skupiny XXXIX a odstraněním popřípadě pří tomných chránících skupin na X a G^ se získá sloučenina

-27vzorce I, kde Y je -CH₂-_ř Z je -C(O)- a G₂ je Ο(Ο)ΟΗ.

Kombinací vhodných výše uvedených stupňů může odborník v oboru připravit sloučeninu vzorce I, kde oba Y a Z jsou -CH),- a G₂ je C(0)0h. Dále kombibací' výše uvedených vhodných: stupňů může odborník v oboru připravit sloučeniny vzorce I, kde jeden nebo oba Y a Z jsou -CH₂~ a G₂ je H, -C(O)NH₂, 5-tetrazolyl, -Ο(Ο)Ν(Κ_?)ΟΗ nebo -Cff₂Off.

V ještě dalším procesu může být aldehyd vzorce? XXXVIII redukčně aminován aminem vzorce; XXX£,kde Prog je chránící skupina karboxylové kyseliny (např. alkyl, benzyl., p-methoxy benzyl a podobně), za vzniku sloučeniny vzorce XXXI použitím metod v oboru známých (Borch a spol., ď. Am. Chem. Soc;. , 93, 2897' (1971 )):

H(Gi) (XXXXů (XXXXI)

Prog chránící skupina může být selektivně odstraněna me todami známými v oboru za vzniku odpovídající karboxylové kyseliny', které může být kopulována s aminem vzorce VI za vzniku sloučeniny vzorce^ XXXIX. Odstranění chránících skupin jak je popsáno výše, poskytne sloučeninu vzorce I, kde Y je -OIT₂-, Z. je -C(O)- a G₂ je C(O)OH.

-28V ještě dalším procesu může být sloučenina vzorce XXXI kde R₁ je H chráněna na sekundárním aminu vhodnou N-chránící skupinou PrOg (jako j;e Cbz? skupina) za vzniku sloučeniny vzorce? XXXXII:

H f r | R: ;ch₂)p _prO9

H(Gi) 'C0₂Proe (XXXXII)

PrOg chránící skupina sloučeniny vzorce· XXXXII může' být selektivně odstraněna metodami v oboru známými za poskytnutí odpovídající karboxyiové kyseliny, která může být kopulována s aminem vzorce? IX za poskytnutí sloučeniny vzorce XXXXIII:

H(X)

C0₂Pro_{4 z}(CH₂)_p

H(Gi) (XXXXIII)

Pro^ chránící skupina sloučeniny vzorce XXXXIII může být selektivně odstraněna metodami známými v oboru za poskytnutí odpovídající karboxyiové kyseliny, která' může být kopulována s aminem vzorce IV za vzniku· sloučeniny vzorce

XXXXIV:

-29H(X)_q

,^(CH2>P Pro₉ O /

(XXXXIV)

H(G_X) o a₂

Deprotekce Pro^ skupiny XXXIV, odstranění N-chránící skupiny Pro^ (například použitím směsi kyseliny trifluoroctové', thioanisolu a bromtrimethylsmlanu) a odstranění popřípadě přítomných chránících skupin na X a Gp poskytne sloučeninu vzorce I, kde Y je -0Η₂-, 2 jě'-C(O)-, R^ je H a G₂ jé G(O)OH.

Chránící skupiny .? postranního řetězce mohou být použity v procesech pro aminokyseliny, mající seaktivreí funkce, jako je hydroxyl, karboxyl, amino, merkapto, guanidino, imidazolyl a podobně. Zvláštní chránící skupiny použité pro jakékoliw aminokyselinové zbytky závisejí na vedlejších řetězcích:, které se chrání a jsou obecně v oboru známé. Příklady chránících skupin postranních řetězců zahrnují acetyl, benzoyl, benzyl., terč.butyl a podobně pro hydroxyl; cyklohexyl', benzyl, methyl, ethyl, terč.butyl a podobně pro karboxyl; benzyl, 4-me thyi benzyl, 4-me thox.y benzyl, acetyl, acetamidomethyl, trifenylmethyl{trityl), a podobně pro merkapto; terč.butoxykarbonyl (Boa.·), benzyloxykarbonyl (Gbz), N'-/(9H-fluorers-9-ylmethoxy)karbonyl/ (Fmoa), ftaloyl (Pht), p-toluensulfonyl (Tos), trifluoracetyl2-(trimethylsilyl)ethoxykarbonyl (Teoc) a podobné pro amino; 2,4-dinitrofenyl, benzyl oxyme thyi,. Tos, Boc, tri tyl a podobně pro imidazolyl;

-30formy!, Cbz, Teoc, 2,2,2-trichlorethylkarbamát (TROC) a podobně pro indolyl; a tosyl, nitro, bis(1-adamantyloxykarbonyl) a podobně pro guaniďino.

Chránící skupiny postranního řetězce mohou být odstraněny/, je-li to žádoucí, například¹, zpracováním· s jedním nebo více deprotekčními činidly v inertním rozpouštědle nebo směsi rozpouštědel. Příklady chránících skupin a vhodných, deprotekčních činidel viz M.3odansky a A.Qodansky, The ©ractice? of' Peptiďe Synthesis, Springer-Verlag, lne. (1984) a T.W.Greene a P.G.M.Wuts, Prote.ctive Groups in Organic.· Synthesis, 2.vydání', John Wiley/and Sons, New York, 1991.

Vynález nyní bude blíže popsán· následujícími příklaďy provedení', které představují výhodné provedení vynálezu·. Všechny teploty jsou ve 3c pokud není uvedeno jinak. Sloučeniny, jejichž příklady jsou zde uvedeny, které obsahují bázic/koujsÉkupinui jako je amin nebo substituovaný amin, mohou existovat jako· sole organické nebo anorganické kyseliny. Tato informace není explicitně popsána ve všech příkladechi, ale je třeba chápat, že oďborníkům v oboru je zřejmá. Příklady jsou míněny jako ilustrativní a ne omezující.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 (R^x,S*’)-N-//2-/N-2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/-1 ,2,

3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin·

HO

A. (R*)-N-//2-/(1 ,1 -Dimethylethoxy)karbonyl/-1 ,2,3,4-tetrah,ydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionÍn, methylester

Roztok (S)~3,4-dih.ydro-2,3(1 H)-isochinolindíkarboxylové kyseliny, 2-(1,1-dimethylethyl)esteru (2,0 g^r, 7,21 mmol) a L-methionin-methylesteru-RCl (1,44 g, 7,21 mmol) v? 5:15 N-methypyro?lidinonu>-CH2Cl2 se míchá při 4 °C. Přidá se N,NΦίisopropylethylamin (1,23 ml, 7,21 mmol) a dále N-hydroxybenzotriazol (974 mg, 7,21 mmol). Reakční směs se míchá 5 minut, potom se přidá 1 -ethyl-3-(3-dimethylarainopropyl)karbodiimiGErHCl (1,38 g, 7,21 mmol). Řeakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, míchá se přes noc; a rozdělí se mezi CHíýCIg ^a nasycený' NaCl. Organická fáze se postupně promyje kyselinou citrónovou, NaHCO^ a NaCl, suší se nad MgSO^ a zahuštěním ve vakuu se získá' 2,64 g (86 %) sloučeniny A. Tato se použije v dalším stupni bez dalšího čištění.

B; (R*)-N-/(1 ,2,3,4-Tetrahydro-3-isochinolinyl)karbon.yl/-Lmethionin, methylester

Roztok sloučeniny A (2 g, 6,22 mmol) v 10 ml CíTgClg se zpracuje při teplotě místnosti s 10 ml kyseliny trifluoroctové a 0,5· ml dimethylsulfidu a míchá se 0,5 hodiny·» Reakční směs se zahustí ve vakuu, rozpustí v CHgC^ a zahustí. Tento postup se opakuje pětkrát za získání sloučeniny 3 (99 %)

-32jako čisté sklovité látky. Tato se použije- v dalším stupni bez- dalšího; čištění.

C. (R*)-N-//2-/N-/(1,1-dimethylethoxy)karbonyl/-L-valyl/1,2,3 _ř4-tetrahydro-3-isochinolin.yl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Sloučenina 3' (4,73 mmol) se rozpustí v CHgClg (20 ml) a ochladí na 0 °C. Přidá se N-terč.butyloxykarbonyl-L-valin (2,06 g,9,466 mmol), bis (2-oxo-3-oxazolidin.yl )fosforný chlorid' (1,2 g, 4,733 mmol) a N, N-diisoprop.ylethylamin (1,2 g, 1,6 ml, 9,466 mmol). Reakční směs se míchá 24 hodin při 0 °C. Přidá se další bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)fosforný chloridů (1,2 g, 4,733 mmol) a N,N-diisopropylethylamin (590 mg, 0,8 ml, 4,733 mmol) a reakční směs se míchá' dalších 12 hodin při 0 °C. Reakční směs se zahustí a chromatografuje (silikagel, eluce 50% ethylacetátu, 50 % hexanu). Aktivní frakce se spojí a zahustí. Získá se Sloučenina G jako čirý olej’(2,4 g, 97 %).

D. (R* )-N-//2-/L-Valyl )-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-$j-methionin, methylester

Sloučenina G (190 mg, 0,45 mmol) se míchá v meth.ylsulfidu (0,3 ml) a 4N HC1 v dioxanu· (10 ml) 30 minut při teplotě místnosti. Reakční směs se zahustí ve vakuu, rozpustí v CHgClg (30 ml) a zahustí. Posledně uvedený postup se opakuje pětkrát a poskytne sloučeninu D (99 %) jako čiré sklo. Tato se použije v dalším kopulačním stupni bez dalšího čištění.

-33o

Ε. Ν -/(1 ,1 -Dimeth,ylethoxy)karbon.yl/-N-methoxy-N-meth,yΙέ- (trif enylmethyl )-L-cysteinamid

N-Butyloxykarbonyl-S-trityl-L-cystein (20,0 g, 43,14 mmol), 1 -ethyl-3-(3-dimeth,ylaminopropyi)karbodiimid.HC1 (8,3 g, 43,1 mmol) a hydrát 1-hydroxybenzotriazolu (5,8 g, 43,1 mmol) se rozpustí v dimethylformamidu (100 rjil). Ptom se přidá Ν,Ο-dimethylhydroxylamin-hydrochlorid (4,91 g, 50,6 mmol) a N,N-diisopropylethylamin (6,13 g, 47,5 mmol).

Reakční' směs se míchá 5 hodin při teplotě místnosti, nalije se do vody (50 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (3 x 500 ml) a solankou (200 ml), suší (síran hořečnatý), zahusti a chromatografují (silikagel, eluce 40 % ethylacetátu, 60 % hexanu).· Frakce, obsahující' produkt se spojí a zahuštěním se získá sloučenina E jako bílá pevná látka (19,95 g, 92 %).

F. N-/(1 ,1-Dimethylethoxyikarbonyl/-S-(trifenylmethyl) — L-cysteinal

Sloučenina E (1,00g, 1,89 mmol) se rozpustí v tetrahydrofuranu (4 ml) a roztok se ochladí na 0 °C. Po kapkách se během 20 minut přikape 1M LiAlH^ v tetrahydrofuranu (4,9 ml, 4,9 mmol).. Reakční směs se míchá 30 minut při 0 °G pod dusíkem.. Diethylether (200 ml) se přidá a reakční směs se rozruší při 0 °C přikapaným 1M KHSO^ (40 ml). Směs se míchá dalších 30 minut při 0 °C a vrstvy se oddělí. Organické vrstva se promyje nasyceným NaHCOj (50 ml), 1M KHSO^ (50 ml) a solankou (50 ml), suší se (MgSO^) a zahuštěním se získá sloučenina F jako: bílé sklo (840 mg, 99 %) která se použije? ihned v dalším stupni bez dalšího čištění.

G. (R*,S* )-N-//2-/N-/2-//(1,1 -Dimethylethoxy)karbonyl/amino/-3-/(trifenylmethyl)thio/propyl/-L-valyl/-1,2,3,4tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

-34Sloučenina D (0,45 mmol) a sloučenina F (250 mg, 0,54 mmol) se rozpustí v methanolu (10 ml) a ledové kyselině octové (0,2 ml) při teplotě místnosti. Kyanoborohydrid sodný (28 mg, 0,45 mmol) se rozpustí' v methanolu (2 ml) a během 30 minut se přikape’. Reakční směs se 3 hodiny míchá. Potom se Dřidé další sloučenina F (125 mg, 0,27 mmol) a reakční směs se míchá další 3 hodiny. Směs se ochladí na 0 °C a pomalu se přidá nasycený NaHCOj (50 ml). Produkt se pak extrahuje do ethylacetátu (60 ml). Ethylacetátová vrstva se promyje vodou (100 ml) a solankou (100 ml), suší (MgSO^), zahustí a chromatografuje na silikagelu: za eluce 40 % ethylacetátu a 60 % hexanu. Frakce, obsahující produkt se spojí a zahuštěním se získá' sloučenina G jako čirý olej (260 mg, 6? %)►

H.. (R^x, S*)-N-//2-/N’-(2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/1,2,3,4- tetrahydro-3-isochinolin,yI/karbonyl/-Lmethionin

Sloučenina G (1,8 g, 2,11 mmol) se rozpustí v methanolu (30 ml) a 5N NaOH (10 ml) při teplotě místnosti. Reakční směs se míchá 3 hodiny při teplotě místnosti. Směs se neutralizuje na pH 6 za použití 5N HC1, zahustí a rozpustí v ethylacetátu (100 ml) a vodě (100 ml). Vodná vrstva se oddělí, okyselí na pH 2 použitím 5N HC1 a extrahuje se ethylacetátem (100 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí solankou (50 ml), suší (MgSO^) a zahustí na bílou pevnou látku. Tento materiál se rozpustí v CHgClg ml), kyselině trifluoroctové (10 ml) a triethylsilanu (1,0 ml) a míchá se 40 min při teplotě místnosti. Směs se žahustí, rozpustí v CHgClg (50 ml) a potom se opět zahustí. Posledně uvedený postup se opakuje pětkrát za získání surového produktui jako bílé lepivé látky (kvantitativní získání surové látky).

Surová pevná látka se čistí preparativní HPLC (YMC-C18 kolona

-352,2 x 25 c:m, 5 mikrometrů, 120 angštrom; rozpouštědlo A,

0,1 % trifluoroctové kyseliny ve vodě; rozpoštědlo B,

0,1 % trifluoroctové kyseliny v acetonitrilu: 25-35 % B v A během 40 minut, průtoková rychlost 9 ml/min, UV monitorováno při 220 nm). Frakce,, obsahující sloučeninu H se spojí a lyofilizací se získá bílá pevná látka (790 mg, 75% výtěžek), t.t. 103 až 104 °C.

optická otáčivost: -44,2° (c= 0,5, methanol)

MS: (M+H)⁺ 497^.

Elementární analýza pro: 2,20 C₂HF₃O₂> θ»^{80 H}2°^: vypočteme- 45,03 % G, 5,68 % FT, 7,99 % N, 13,40 % F nalezeno 45,03 % C, 5,44 % H, 7,95 % N, 12,99 % P ¹H-NMR (CD₃OD, 270 MHz)& (ppm) 7,17 (4H,m), 4,72 (4H,m),

4,48 (1H, m), 4,29 (1H,m), 3,92 dH,m), 3,25 (2H,m), 2,69 (2H, m), 2,12 (3H,. m), 1,95 (3H,ď), 1,83 (2H,m), 0,98 (6ff,m).

Přiklaď 2 (R* )-N-//2-/N- (L-Cystě inyl )-L-valyl/-1 ,2,3,4-te trah.ydro3-isochinolin,yl/karbonyl/-L- methionin

A. (R* )-N-//2-/N-/N«-/( 1,1 -Dime thyle thoxy) karbonyl Αεί trif enylmethyl)—L-cysteinyl/-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro—

3-isochinolin,yl/karbonyl/-D-methionin, methylester

-36Roztok sloučeniny 1C (1,2 g, 2,3 mmol) v 7m5 ml Cř^Clg se zpracuje při 4 °C se 7,5 ml kyseliny trifluoroctové a mícá se jednu hodinu. Reakční smčs se zahustí ve vakuu, rozpustí vy CHgClg ^a neutralizuje N,N-diisopropylethylaminem. Výsledný roztok se přidá k na ledové lázni chlazenému roztoku N-terc.butyloxykarbonyl-S-trityl-L-cysteinu (3,21 g, 6,9 mmol), benzotriazol-1-yloxy-tris(dimethylamino)fosfonium-hexafluorofosfátu (3,05 g, 6,9 mmol) N-hydroxybenzotriazolu (936 mg, 6,9 mmol) a N,N-diisopropylethylaminu (1,2 ml, 9 mmol) v tetrahydrofuranu', Reakční smčs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetátu. Organický roztok se promyje postupně nas.ycenoým roztokem kyseliny citrónové, NaHCO^ a NaCL, potom se suší nad síranem hořečnatým a zahuštěním ve vakuu se získá bílý pěnovitý zbytek. Purifikaci na 5 x 16 sloupci silikagelu za eluce 25 % až 40 % eth.ylacetátu/hexanu se získá 1,34 g (1,55 mmol, 67 %) sloučeniny A.

Alternativně se sloučenina 1C (3 g, 5,75 mmol) přidá k roztoku 2N HCl v kyselině octové (10 ml) a dimethylsulfidu (1 ml). Po míchání po 3 hodiny se rozpouštědla odstraní ve vakuu a zbytek se trituruje s etherem (3 x 50 ml). Roztok výsledného materiálu (2,4 g) v ethylacetátu (100 ml) se promyje? hydrogenuhličitanem sodným (20 ml), suší se nad síranem sodným, filtruje a zahustí ve vakuu·. Zbytek (2,19

g) se rozpustí v dimethylformamidu! (30 ml) a ochladí na 0 °C pod dusíkem.. Přidá se N-terc.butyloxykarbony1-3-trityl-Lcystein (2,42 g, 5,21 mmol), N,N-diisopropyleth.ylamin (905 ml, 5,21 mmol) a benzotriazol-1-yloxy-tris(dimethylamino)fosfonium-hexafluorof osfá't (2,30 g, 5,21 mmol). Po 30 minutách se reakční směs nechá ohřát na teplotu místnosti. Po 6 hodinách míchání se reakční směs zředí ethylacetátem (300 ml)

-37a promyje se postupně nasyceným h.ydrogenuhličitanem sodným (100 ml), fosfátovým pufrem· (pH=4, 100 ml) a 10% chloridem lithným (3 x 100 ml). Organická vrstva se suší nad síranem sodným, filtruje a zahustí se ve vakuu. Zbytek se čistí na silikagélu (400 ml, eluce 3*·1 už 1:1 hexanem/ethylacetátem). Získá se sloučenina A (4,23 g, 86 %).

TLC: Rp = 0,49 (1:1 hexan/ethylacetát, vizualizováno síranem ceritoamonným), t.t. 82 až 84 °C.

B. (R* )-N-//2-/N-/N-/(1,1-Dimethylethoxy)karbonyl/-S(trif enylmethyl )-L-cys tein,yl/-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro

3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin

Sloučenina A (1,34 g, 1,55 mmol) v 90 ml methanolu se zpracuje při teplotě místnosti s EiOH (162 mg, 3,88 mmol) ve 30 ml vody po 3 hodiny. Methanol se rozpustí ve vakuu, a vodný roztok se zředí vodou, promyje se etherem a okyselí se nasycenou kyselinou citrónovou. Produkt se extrahuje z. vodné fáze ethylacetátem. Organický roztok se promyje⁵ nasyceným NaCl a suší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu, získá se 650 mg (0,76 mmol, 50 X) sloučeniny 3, která se použije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

Alternativně se k roztoku sloučeniny A (1,0 g, 1,15 mmol) v tetrahydrofuranu (4 ml) při 0 °C přidá 1N hydroxid^ sodný (2,30 ml, 2,30 mmol). Po 2 hodinách míchání se reakční směs nalije do 1N kyseliny chlorovodíkové (10 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 50 ml). Organická vrstva se suší nad síranem sodným, filtruje a zahuštěním ve vakuu se získá sloučenina B (970 mg, 99 %)TLC: R^ = 0,75 (9:1:0,05 chloroform/methanol/kyselina octová, vizualizováno síranam ceritoamonným), t.t.

112 až 115 ^ttC.

-38C. (R* )-N-//2-Z-(L-cysteinyl)-L-valyI/-1 ,2,3,4-tetrah.ydro3-isochinolinyl/-karbon.yl/-L-methionin

Sloučenina B se zpracuje při teplotě místnosti se směsí 95 ml kyseliny trifluoroctové, 3 ®1 thioanisolu, 1 ml methylsulfidu: a 1 ml ethandithiolu, po 3,5 hodiny. Těkavé látky se odstraní za vakua a zbytek se trituruje se studeným etherem. Surový peptid se vysráží a shromáždí se 286 mg (0,56 mmol, 74 %) látky, promyje se studeným etherem a nakonec se extrahuje do ledové kyseliny octové. Roztok kyseliny octové se lyofilizuje a lyofilizát se purifikuje pomocí HPLC s reverzní fází za použití gradientu 25 až 60 % rozpouštědla B v rozpouštědle A během 60 minut (rozpouštědlo A, 0,05# kyselina trifluoroctová ve vodě; rozpouštědlo B, 0,05 % kyseliny trifluoroctové π CH^CH), získá ae, po lyofilizaci, 120 mg (42 #) čisté sloučeniny C.

PA3-MS: 533(M Na⁺) 511 (MH⁺), 362 (M-ttet H⁺), 309 (M-Tic Met H⁺).

Elementární analýza pro ^28^34^405^2•^C2^HF3°2·^Η2θ^: vypočteno' 47,22 % C, 5,82 % H, 8,85 % N, 10,12 # S,8,55 % P nalezeno 47,21 % C, 5,67% H, 8,60 % N, 10,15 # S, 8,41 % F

Příklad 3 (R* )-N-//2-/N- (L-Cys teinyl )-L-valyl/-1,2,3,4- tetrahydro3-isochinolinyl/karbonyI/-L-methionin, meth.ylester h₂n

A r

o o

Titulní sloučeniny (100 mg, 27%) se připraví ze sloučeniny 2A (672 mg, 0,72 mmol) za použití postupu popsaného pro přípravu· sloučeniny 2C ze sloučeniny 23 s tím rozdílem, že se reakce provede při 0 °'G.

FA3-MS: 525 (MH⁺), 547 (MNa⁺).

Elementární analýza pro ^σ24^36^Ν4^Ο5³2’¹ * ^2^^2^3^2*¹ vypočteno 47,66 % C, 5,6?% H, 8,41 % N, 9,62 % S, 10,44 % F nalezeno 47,66 % C, 5,41 % H, 8, 1 7 % N, 9,85 % S, 10,42 % F.

Příklad 4 (R*)-N-//2-/N-(3-Merkapto-1 -oxopropyl)-L-valyl/-1 ,2,J,4tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin

A. (R* )-N-//2-/N-/3-/(trifen,ylmethyl)thio/-1-oxopropyl/L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinoliňyl /karbonyl/L-me:thionin, methylester

Sloučenina 1C (2,61 g, 5 mmol) se zpracuje při 0 °C s.

ml 1:1 kyseliny trifluorOctové/CHgClg po jednu· hodinu. Těkavé látky se odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí ve 25 ml tetrahydrof uranu, neutralizuje se N,N-diisopropylethyl-40aminem a přidá se k ledově studenému roztoku S-trityl-3merkaptopropionové kyseliny (5,22 g, 15 mmol, připravené podle Kwang-a a spol., J.Med.Chem., 13, (1970) 414), benzotriazol1-yl,. oxy-tris(dimethylamino)fosfonium hexafluorofosfátu (6,65 g, 15 mmol), N-hydroxybenzotriazolu (2,03 g, 15 mmol)' a NjN-diisopropylethylaminu (2,7 ml) v 75 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Reakční směs se zahustí ve vakuu a zbytek se rozdělí' mezi ethylacetát a NaCl. Organická fáze se promyje kyselinou citrónovou, hydrogenuhliči taném; sodným a HCl_r suší se naď síranem hořečnatým a zahuštěním se získá bílý pěnovítý zbytek. Tento se čistí na 5 x 16 sloupci silikagelu za použití 20-60% ethylacetátu/hexanu jako elučního činidla. Získá se 2,07 g (55 %) sloučeniny A.

B’.. (R^ie)-N-//2-/N-/3“/(Trifenylmethyl) thio/-1 -oxopropyl/L-J-valyl/-1 ,2,3,4—tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/L-methionin

Sloučenina A (1,59 g, 2,1 mmol) se zpracuje s LiOFT jak je popsáno pro přípravu sloučeniny 23 za vzniku 1,25 g (88 %) sloučeniny BC... (R^x)-N-//2-/N-(3-Merkapto-1 -oxopropyl)-L-valyl/-1,2,3,4tetrahydro-3-isochlnolinyl/karbonyl/-L-methionin

Sloučenina B (740 mg, 1 mmol) se zbaví chnénících skupím v·’ kyselině trifluoroctové/thioanisolu/methylsulfidu/ ethanthiolu· jak je popsáno pro přípravu sloučeniny 3A. Po odstranění těkavých látek se zbytek trituruje s etherem/pemtanenr a vysrážený surový produkt se' promyje studeným pentaneor, potom se extrahuje ďo 0,5% kyseliny trifluoroctové v acetonitrilu. Acetonitrilový roztok se zředí stejným objemem; 0,5% kyseliny trifluoroctové ve vodě; lyofilizuje a zbytek se čistí HPLC s reverzní fází. Získá se sloučenina C,.

-41FAB-MS: 496(MH⁺), 518(MNa⁺).

Elementární analýza pro θ23^33^3θ5^2*θrASCgHFjOg.O,03^0 vypočteno 52,40 % G, 6,16% H, 7, 79 % N, 11,91 % S, 4,73% F nalezeno 52,40 % C, 6,24 % H, 7,79 % N, 1 1 ,91 % S, 4,72 % F

Přiklaď 5 (R*, R* )-N-//2-/2- (L-Cys teiny lamino)-3-me thylbutyl/-1,2,3,4tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin

_zCH₂«·· ch₂

HO

A. N -/(1,1 -Dimethylethoxy)karbonyl/-N-methoxy-N-methylL-valinamiď

N,O-Dimethylhydroxylamin-h.ydrochloriď (4,91 g, 50,6 mmol) se rozpustí' v CHgC^ (100 ml$. Přidá se N-terc.Butyloxy karbonyl-L-valin (10,0 g, 46 mmol), 1-ethy1-3-(3-dimethylaminopropyD-karbodiimiď.HCl (9,7 g, 50,6 mmol) a N,N-diisopropylethylamin (6,13 g, 8,3 ml, 47,5 mmol). Peakční směs se míchá 16 hodin při teplotě místnosti, zahustí se a chromatograf uje (silikagel, eluce 40% ethylacetátu, 60% hexanu). Aktivní frakce se spojí a zahuštěním se získá sloučenina A jako čirý olej' (3,5 g·, 42 %).

B. N-/(1 , 1-Dimethylethoxy )karbon,yl/-L-valinal

Sloučenina B (2,6 g·, 99%^.', bezbarvý olej) se připraví ze sloučeniny A{3,5 g, 11,8 mmol) použitím postupu popsaného pro přípravu, sloučeniny 1F ze sloučeniny 1E.

G. (R*)-N-//2-/2-//( 1 ,1-Dimeth.ylethoxy)karbonyl/amino/-3methylbut.yl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/-kaΓbonyl/-L-methionih, methylester

K roztoku sloučeniny B (2,6 g·, 11,82 mmol) a sloučeniny

1B (4,66 g, 13,0 mmol) v methanolů (100 ml) při teplotě místnosti se přidá ledová kyselina octová (2,0 ml). Po částech se během 30 minut přidá kyanoborohydrid sodný (743 mg, 11,82 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 4 hodiny. Směs se ochladí na 0 °C.. Pomalu se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanů sodného (100 ml) a produkt se extrahuje ethylaoetátem¹ (200 ml). Ethylacetátová vrstva se promyje vodou (200 ml) a solankou (100 ml), suší se (síran hořečnatý), zahustí a chromatografuje (silikagel, eluce 50% diethyletheru, 50 % hexanui). Frakce, obsahující produkt se spojí a zahustí'. Získá se sloučenina G jako čirý olej; (1,5 #, 30 %).

D. (R*_rR* )-N-//2-/2-//W-/(l, 1 -Dimethylethoxy )karbon.yl/-S(trif enylmethyl )-L-cys teinyl/amino/-3-uiethylbut,yl/-1 ,2,3,4tetrah.ydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylesteir

Sloučenina C (1,5· g, 2,96 mmol) se míchá v methylsulfidu (0,4 ml) a 4N HC1 v dioxanu (10 ml) 30 minut při teplotě místnosti. Směs se zahustí',, rozpustí v 0H₂Cl₂ (30 ml) a potom se opět zahustí'. Tento posledně uvedený postup se opakuje pětkrát, získá se amin hydrochlorid jako čiré sklo. Tento materiál se rozpustí v dimethylformamidu (20 ml) a N,N-diisopropylethylaminu (3θ3 mg’» 0,52 ml, 2,96 mmol). Tento

-43roztok se přikape k míchanému roztoku’ N-terc-butyloxykarbonyl-S-trityl-L-cysteinu' (1,65 g, 3,55 mmol), 1-ethyl-3-(3dimethylaminopropyl)-karbodiimidu<-HCl (737 mg, 3,85®mol) a 1-hydroxybenzotriazol-hydrátui (519 mg, 3,85 mmol) v dimethylf ormamidu (30 ml). Reakční směs se míchá 16 hodin. Směs se nalije do vody (100 ml) a produkt se extrahuje ethylacetátem· (2 x 100 ml). Spojené ethylacetátové vrstvy se promyjí vodou (3 x 200 ml) a solankou (100 ml), suší (MgSO^), zahustí se a chromatografuje(silikagel, eluce 50 % ethylacetátu, 50 7o hexanu). Frakce, obsahující produkt se spojí a zahuštěním se získá sloučenina D jako čirý olej' (1,9 g', /5 %).

E. (R*, R*)-N-//2-/2-(L-Oys teiny lamino )-3-methylbut,y 1Z1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin

Sloučenina E /50 %( se připraví ze sloučeniny D (1,4 g, 1,64 mmol) použitím postupu¹ popsaného pro přípravu sloučeniny 1ff ze sloučeniny 1G.

t.t.· 112 až 113 °G optická otáčivost: -55,7° (c= 0,5, methanol)

MS:(M+H)⁺ 497⁺

Elementární analýza pro 2,2002^^02.0 ,80^0 vypočteno 43,123 % C, 5,02 % H, 6,84 % N nalezeno 42,83 % 0, 5,12 % B, 7,13 % N ¹H-NMR (CDjOD, 270 MHz:) á(ppm) 7,28 (4H,m), 4,57(2H,m),

4,39 dH,m), 4,22 (2H,m), 4,11 (1H,m), 3,14 (4H, š m), 2,55 (2H,m), 2,21 (2H,m), 2,10 (3H,s), 1,9? (3H,m), 0,98 (6H,m).

-44Příklad &

(R³*) -N-//2-/N- (3-Merkap t opropyl) -L-vályl/-1,2,3,4-tetrahydro 3- is axíhinol lny 1/kar bony 1’/-L-me thi onin

A. 3-/(Tr if eny lme thyl) thio/-N-methoxy-N-methylpropanamid

K míchanému roztoku S-trityl-3-merkaptopropionová kyseliny (4,5 gr, 12,9 mmol, připravené podle Kwanga a spol., J.Med.Ghem., 13,, (1970) 414) v OH₂C1₂ (40 ml) se přidá'N,Ndiisopropylethylamin (2,.2 ml, 12,9 mmol) a déle benzotriazol-1-yloxy-tris (dimethylamino)fosfonium-hexafluorofosfát (5,7 St 12,9 mmol). Po několika minutách; se přidá 11,0dimethylhydroxylamin-hydrochloriď (1,31 g, 13,5 mmol) spolu s dalším· diisopropylethylaminem (2,2 ml, 12,9 mmol). Roztok se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti. Přidá' se další (80 al) 0Η₂Ο1₂ a roztok se promyje 1ΓΓ KHSO^. (3*0, nasyceným NaHCO^ (3x) a solankou (2x). Organická vrstva se suší (MgSO^) a zahustí. Zbytek se rekrystaluje dvakrát za použití? ethylacetfcátu/hexanů. Získá se sloučenina A (4,12 g·,

#).

-45Β. /(Trifenylmethyl)thio/propanal

Sloučenina B (1,5 g, 88 %) se připraví ze sloučeniny A (1,8 St 5,2 mmol) použitím postupu popsaného pro přípravu: sloučeniny 1F ze sloučeniny IE.

C. . (R*)-N-//2-/W-/3-/(Trifenylmethyl)-thio/propyl/-L-valyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Sloučenina C (1,8 g, 53 %) se připraví ze sloučeniny 8 (1,5 g, 4,6 mmol) a sloučeniny 1D (2,2 g, 5,2 mmol) postupem analogickým postupu popsanému pro přípravu sloučeniny 5C ze sloučeniny 5B a sloučeniny IB.

D. (R*)-N-//2-/N-(3-Merkaptopropyl)-L-val,yl/-1 ,2,3,4tetrahydra>-3-isochinolinyl/karbonyI/-L-methionin

Sloučenina D (bílý prášek ,49%) se připraví ze sloučeniny C (700 mg, 0,94 mmol) použitím- postupu analogického postupu popsanému pro přípravu sloučeniny 1H ze sloučeniny 1G.

MS (M+H)⁺ 482^{+ 1}H-NMR (CD₃OD, 270 MHz) 6(ppm) 7,23-7,13 (4H,m), 4,65-4,49 (4F,m), 4,26 (1H,m), 3,22 (1H,m), 3,06-2,88 (3H,m), 2,51-2,35 (4H,m), 1,97 (3H,s), 2,33-1,77 (4H,m), 1,10-1,07 (6H,m). Elementární analýza pro Cg^Hj^N^O^Sg» 1 jSCgHFjOg.l ,35^® vypočten© 47,53 % C, 5,95 % H, 6,55 % N, 9,99 % S, 10,68 % F nalezen© 47,54 % C_r 5,85* % ff, 6,69 % N, 9,76 % S, 10,66 % F optická otáčivost: -33,(ο® θ,7, methanol)

-46Rříklad 1 (R*) -N-//2-/N- (3-Merkap t apropyl )-L-alan.yI/-1,2,3,4-te tra hydro-3-isochinolonyl/karbonyl/-L-methionin

A. (R*·) —Ν'— //2-/N-/ (1,1 -Dimethylethoxy )karbonyl/-L-alanyl/1,2,3,4-te trahydro-3-isochinolinyl/kar bonyl/-L-me thionin, methylester·

Sloučenina 1A (4,0 g, 9,47 mmol) se míchá v dimethylsulf idu (0,5 ml) a 4N HCl vz dioxanu (10 ml) 30 minut. Směs se zahustí, rozpustí v methylenchloridu (50 ml) a zahustí'. Posledně uvedený postup se opakuje pětkrát a získá se aminhydroohlorid jako čiré skla. Tento materiál se rozpustí v methylenchloridu (40 ml) a ochladí se na 0 ®C. Přidá se terc.butyloxykarbonyl-L-alanin (3,58 g, 19,93 mmol), bis.(2oxo-3-oxazolidinyI )f osf orný chloriď (4,82 g, 19,93 mmol) a NjN-diisoprop^lethylamin (3,68 g, 5,0 al, 28,40 mmol). Reakčni směs se míchá 24 hodin při 0 Reakčni směs se zahustí a chromatografuje (silikagel, eluce 40 % ethylacetátu, 60 % hexanu). Prakoe, obsahující produkt se oddělí a zahustí, získá se sloučenina A jako bílé sklo (4,6 g, 99%).

-47B. (R* )-N-//2-/ří-/3-/(Trifenylmethyl)^hio/propyl/-L-alanyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isoch£nolinyl/karbonyl/-Lmethionin, methylester

Sloučenina A (2,5 g, 5,07 mmol) se míchá v methylsulfidu (0,3 ml) a 4N HC1 v dioxanu: (10 ml) po 30 minut při teplotě místnosti. Směs se zahustí, rozpustí se v methylenchloridu? (30 ml) a zahustí, ^ento posledně uvedený postup se opakuje pětkrát a získá se aminhydrochlorid jako čiré sklo. Tento materiál a sloučenina 6b (4,4 g, 13,25 mmol) se rozpustí v methanolu (100 ml) a ledová kyselině octové (2,0 ml) při teplotě místnosti. Po částech se během· 30 minut přidá kyanoborohydrid sodný (833 mg» !3,25 mmol). Reakční směs se míchá 4 hodiny při teplotě místnosti. Směs se ochladí na 0 °G a pomalu se přidá nasyceným roztok ^waHCO^ (100 ml). Produkt se pak extrahuje do ethylacetátu (200 ml). Ethylacetátová vrstva se promyje vodou (200 ml) a solankou (100 ml), suší se (MgSO^), zahustí a chromatografuje? (silikagel, eluce 5Q % ethylacetátu, 50 % hexanu). Frakce, obsahující produkt se spojí a zahuštěním se získá sloučenina B jako čirý olej^- (2,0 g, 56%).

0:. (R*)-N-//2-(N-(3-Metkaptopropyl)-L-alanyl/-1,2,3,4tetrahydro-3-isochÍnolinyl/karbonyl/-L-methionin

Sloučenina G se připraví ze sloučeniny B použitím postupu?, popsaného pro přípravu sloučeniny 1H ze sloučeniny 1G t.t. 81 až 82 °G

-43,,3° <o=1 ,0, methanol),

MS: (M+H’)⁴’ 454⁺.

Elementární analýza pro vypočteno? 46,82 % C, 5»θ9 % H, 7,12 % M nalezeno? 46,83 % C, 5,52 % IT, 7,05 % IT

-48^jH-NMR (CD-jOD, 270 MHz) (pp«n) 7,16 (4H, m), 4,67 (2H,m), 4,56^- (2H,a), 4,51 (1H,m), 4,39 (1H,m), 4,03 (1H,m), 3,19 (2H-,m)„ 3,01 (2H,m), 2,48 (2H_rm), 2,35 (1IT,m), 1,99 (lH,m)_ř 1,96 (3H,s), 1,86 (2H,a)„ 1,51 (3H,m).

Příklad 8 (R* )-N-//2-/N- (3-Merkaptopropyl )-N-methyl-L-valyl/-1 ,2,3,4te trahydro-3-is ochinolinyl/kar bonyl/-L-methionin

A. (R*)-N-//2-/N-/(9H-Fluoren-9-ylmethoxy)karbonyl/-N-methylL-valyl/-1,2,3,4-te trahydro-3-is ochinolinyl/karbonyl/-Laethionin, methylester

Sloučenina 1A (2,0 g, 4,733 mmol) se zbaví N-chránící skupiny postupem popsaným v přípravě sloučeniny 7A. Výsledný amin hydrochlorid se rozpustí v CH^C^ (20 ml) a ochladí se na 0 °C. Přidá se Fmoo-N-methyl-L-valin (1,67 g, 4,733 mmol), bis-(2-oxo-3-oxazolidinyl)fosforný chloriď (2,41 g\

-499,46? mmol) a Ν.,Ν-diisopropylethylamin (2,45 g, 3,3 ml, 18,9 mmol). Reakční směs se míchá 4 hodiny při 0 °C. Reakční směs, se zahustí a chromátografuje (silikagel, eluce 40 % ethylacetátu, 60 % hexanu). Získá se sloučenina A jako bílé sklo (2,4 g, 78 %).

B. (R*) -Ν-//2-/ΓΤ-/3-/(Trif eny lme thyl) thio/pr opy1/-N-me thyl L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolin,yl/karbonyl/-Lmethionin, methylester

Sloučenina A (1,20 g, 2,309 mmol) se míchá v acetonitrilu (30 ml) a diethylaminu (2,4 ml) 1 hodinu při teplotě místnosti. Směs se zahustí, rozpustí se v methylenchloridU;

(50 ml) a potom se opět zahustí. Posledně uvedený postup se opakuje sedmkrát a poskytne amin jako čiré sklo. Tento amin se převede na hydrochloridovou sůl 4N HC1 v dioxanu (10 ml). Výsledný roztok se zahustí, rozpustí se v methylenchloridU (50 ml) a potom se opět zahustí. Posledně uvedený postup se třikrát opakuje a získá se amin-hydrochloriď jako směs čirého skla/oleje. Tento produkt a sloučenina 6b (1,33 g, 4,018 mmol) se rozpustí v methanolu (35 ml) a ledové kyselině octové! (0,6 ml) při teplotě místnosti. Po částech se během 1 hodiny přidá kyanoborohydrid sodný (253 mg,, 4,018 mmol). Reakční směs se 16 hodin míchá. Směs se ochladí na 0 °C a pomalu se přidá nasycený roztok NaHCO^ (50 ml). Produkt se pak extrahuje do ethylacetátu; (100 ml). Ethylacetátová vrstva se promyje vodou (100 ml) a solankou (50 ml), suáí se (MgSO^), zahustí a chromatografuje (silikagel, eluce 95 % methylenchloridU, 5 % methanolu). Frakce, obsahující požadovanou sloučeninu se spojí a zahuštěním se získá sloučenina B jako Čirý olej: (1,4 g, 52 %).

C. (R* )-N-//2-/N^r-(3-Merkaptopropyl )-N-methyl-L-valyl/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin

Sloučenina C (60% výtěžek) se připraví ze sloučeniny B(1,3 g, 1,73 mmol) použitím postupu popsaného pro přípravní sloučeniny 1fTze sloučeniny 10.

t.t. 85-86 °C / -31,9° (c=0,7, methanol)

MS: (M+H)⁺ 496⁺

Elementární' analýza:

vypočtena: 49,38 % C, 6,17 % H, 6,59 % Ν’, 9,84 % F nalezeno 49,50 % C, 6,39 % H, 6,41 % 9,70 % F ¹H-NMR (CD-jOD, 270 MTTz) (ppm) 7,21 (4H,m), 4,87 (2ff,m), 4,5-5- (2H,m), 3,241 (2H,m), 3,06 (2H,m), 2,48 (2H,m), 2,32 (1H,m), 2,07' (1H,m), 1,98 (3H,s), 1,88 (3H,m), 1,22 (3H, d, J=7,0jHz), 0,95 (3H, 6, J=6,45Hz).

Příklad 9 (R*,R^JI)-N-//2-/2-/(3-MerkaptopropyX)amino/-3-methylbutyl/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolonyl/karbonyl/-L-methionin

i

-51A. (R*)-N-//2-/2-//3-/(TrifenyImethyl)thio/propyl/amino/3-methylbutyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin

Sloučenina A (1,7 g, 54 %) se připraví ze sloučeniny

5C (2,00 g, 3,95 mmol) použitím dvoustupňového postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 7B ze sloučeniny 7A s tím rozdílem, že se ve druhém stupni použije pouze 1,1 ekvivalentď (4,34 mmol) sloučeniny 6b a 1,1 ekvivalentu· (4,34 mmol) kyanoborohydridu sodného.

Bi (R* ,.R^m )-N-//2-/2-/(3-Merkap topropyl)amino/-3-methylbutyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-i<methionin

Sloučenina B' (70% výtěžek) se připraví ze sloučeniny

A (1,6 g, 2,21 mmol) použitím postupu' popsaného pro přípravu) sloučeniny 1R ze sloučeniny 1G. t.t. 68 až 69 /p(/^⁵= -19,2^a (c= 0,6, methanol)

MS: (M+H)⁺ 468⁺.

Elementární analýza:.

vypočtenu· 49,40 % C, 6,25· % H, 6,78 % 11,49% F nalezeno: 49,40 % C_r 6,50 % H_ř 6,60 % ΓΓ, 11,33 % F ¹R-NMR (CDjOD, 270 MHz) á (pprn) 7,18 (4H,m), 4,64(1H,m), 4,04 (2H’,m), 3,84 (1H,m), 3,25 (2H,m)_ř 3,12 (2H,m), 2,77 (2H',m), 2,67 (2H,m), 2,54 (2H_řm), 2,18 (1H,m), 2,08 (3H,s), 2,02 (4H, m), 1,03 (3ff, d, J=6,45Hz), 0,95 (3H,d,J=7,03Hz).

Příklad 10 (R*)-N-//2-/N-(3-Merkaptopropyl)-L-propyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochÍnolinyl/karbonyl/-L-methionin

A, (R*)-N-//2-/N'-/( 1,1-Dimet&ylethoxy)karbonyl/-L-propyl1,2, 3,4-tetrahydΓO-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Sloučenina A (1,2 g, 49 %) se připraví' ze sloučeniny

1A (2,0 g', 4,73 mmol) použitím dvoustupňového postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 8A ze sloučeniny 1A s tím rozdílem,, že sdruhý stupeni používá terč.butyloxykarbonyl L-prolin f2,04 g, 9,46 mmol) místo Fmoc-H-methyl-L-valinu.

Βς. (R* )-Ν-//2-/Ν·-/3-/(Trif eny lme thyl) thio/propyl/-L-prolyl/-1 ,2,3,4-te trahydro-34isochinolinyl/kar bon.yl/-Lmethionin, methylester

Sloučenina B (čirý olej', 1,5 g, 89 %) se připraví ze sloučenina A (1,20 g_ř 2,31 mmol) použitíiji postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 7B ze sloučeniny 7A.

G. (R*)-N-//2-/říi-(3-Merkaptopropyl)-L-prolyl/-1,2,3,4tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-l<-methionin

Sloučenina G (70 % výtěžek) se připraví ze sloučeniny B (1,5 g, 2,04 mmol) použitím postupu: popsaného pro přípravu sloučeniny 1IT ze sloučeniny 1G.

-53t.t. 54 až 55 °C /(^./25= -50,Ο^σ (_c= 0,7, methanol)

MS: (M+H)⁺ : 480+

Elementární analýza:

vypočten® 48,75 % θ, 5,75 % H, 6,74 % N, 10,51 % F nalezeno 48,63 % C, 5,92 % H, 6,65 % Ν’, 10,66 % F ¹E-NMR (CDjOD, 270 ΜΗζΟ'ί (ppo) 7,18 (4E,m), 4,67 (2H,m), 4,53 (2H, o), 4?41 (1H,m), 4,30 (1H,m), 3,72 (1H,m), 3,24 (4ff, m), 2,70 (lH,m), 2,46 (2H„a), 2,34 (lH,o), 2,11 (2H,m), 1,98 (2H,m), 1,96(3H,s), 1,87 (4H,m).

Přiklaď 11 (R* )-^-//2-/^- (2-Merkaptoethyl )-L-valyI/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinalinyl/karbonyl/-L-methionin

HS

A. 2-/Trifenylmethyl)thio/-N-methoxy-N-methylacetsmiď

Sloučenina A (6,.0 g, 76 %) se připraví' za použití postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 6A s tím roždí-54lem, že se použije- kyselina trifenylmethylthiooctová (7,0 g, 20,96 mmol) místo kyseliny S- (trifenylmethyl)-3-merkaptopropionové'.

B'. /(Trifenylmethyl)thio/acetaldehyď

Sloučenina B se připraví ze sloučeniny A (2,0 g, 5,3 mmol) ve kvantitativním výtěžku za použití postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 6B ze sloučeniny 6A.

C. (R* )-N-//2~/N-//2-/N-/2-/(Trif enylmethyl) thio/ethyl/L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin, methylester

Sloučenina C (490 mg, 12,8 %) se připraví ze sloučeniny

B (5,3 mmol) a sloučeniny 1C (2,8 g, 5,3 mmol) použitím postupu popsaného^ pro; přípravu sloučeniny 6C ze sloučeniny 6B.

D. (R^x)-N-//2-/íP-(2-Merkaptoethyl)-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrah.ydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin

Sloučenina D (bálý práěek, 50% výtěžek) se připraví ze sloučeniny 0 (490 mg, 0,68 mmol) použitím postupu popsaného; pro přípravui sloučeniny 6D ze sloučeniny 6C. t.t· 94 až 96 °C

-36,7® (c=0,8l, methanol)

MS¹: (M+H)⁺ 468⁺.

Elementární analýza:

vypočteno 48,38 % C, 5,87 % H, 7,05 % Ν’, 9,57% F nalezeno 48,39 %' C, 6,09 % H, 7,14 % N, 9,60 % F ¹H-NMR (CDjOD, 270 MHz) <5 (ppm) 7,19 (4H,m), 4,58 (4H,m), 3,07 (2H,m),. 2,65 (2H,m), 2,47 (1H,m), 2,29 (1H,m), 2,08 (1H,m), 1,97 (3H,s), 1,90 (2H,m), 1,07 (6H,m)·

-55Příklad 12 (R*) -Ν'- //2-/lí- (3-Merkapto-1 -oxopropyl )-L- vály 1/-1 ,2,3,4tetrahydro.-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Triethylsilan (223 mg, 306 ml, 1,9 mmol) v 10 ml CH’₂C1₂ a kyselina trifluoroctové (10 ml) se přikapeu, střídavě, k roztoku sloučeniny 4A (480 mg, 0,64 mmol) v 5 ml CH^Clg. Reakční směs se míchá pod dusíkem při teplotě místnosti 40 minu, potom se zahustí za vakua. Zbytek se trituruje? s etherem/pentanem a sraženina se oddělí, promyje se vícekrát etherem a pentanem a potom se extrahuje do CÍT^CN/

0,5% kyseliny trifluoroctové:. Tento roztok se zředí vodou/0,5% kyselinou trifluoroctovou a lyofilizací se získá 250 mg (0,5 mmol}''7?%) surového esteru jako bílé pevné látky. Purifikací HPLC s reverzní fází (35 až 90 % rozpouštědla B v rozpouštědle A během 100 minut: rozpouštědlo A, 0,05 % kyseliny trifluoroctové ve vodějyozpouátědlo B, 0,05 % kyseliny trifluoroctové v CH^CN) se získá 105 mg (0,21 mmol,

%) čisté titulní sloučeniny jako amorfního bílého prášku.

-5.6FA3-MS: 510 MH⁺, 508 ΜΗ”.

¹H NMR; 57,3-7,4 (a), 4,8-5,2 (a), 3,83 (s), 3,77 (s), 3,23,7 (a), 2,5-2,9 (m), 2,2 (s), 2,1 (s), 1,2 (a). Elementární analýza pro ¢24^35.^3^5¾ .í^O vypočteno 54,66 % C, 7,06 % H, 7,97 % N, 12,16 % S nalezeno 54,79 % C, 6,64% H, 7,84% N, 11,91 % S

Přiklaď 13 (R*,S* )-2-/N- (2-Amino-3-aerkaptopropyl )-L- vály 1/-1 ,2,3,4tetrahydro-N-/3-(methylthio)propyl/-3-isochinolinkarboxamid

SMe

A. (S)-2-/(1, 1-Dime thyle thoxy) kar bony 1/-1,2,3,4-tetrahydroN-/3- (methyl thio )propyl/-3-isochinolikarboxamid

K dusíkem propláchnuté, ledem chlazené suspenzi N-terc. butyloxykarbonyl-L-(1,2,3,4-tetrahydro)isoohinolin-3-karboxylátu (3,0 g, 10,8 mmol) a (3-rme thyl thio )propy laminu (1,13 g, 10,8 mmol) ve 40:13 CHgClg/N-aethylpyrolidinonu, se přidá

-57Ν,Ν-diisopropylethylamin (1,85 mi, 10,8 mmol) a N-hydroxybenzotriazol (1,46' g, 10,8 mmol). Po pěti minutách míchání při 0 °C se přidá 1 - (3-dimethylaminoprop.yl )-3-ethylkarbodiimid-hyďrochlorid (2,07 g, 10,8 mmol). Během jedné hodiny se získá čirý roztok. Reakční směs se nechá pomalu ohřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Roztok se postupně promyje nasyceným NaCl, kyselinou citrónovou, nasyceným hydrogenuhličitanem sodným a nasyceným NaCl, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu. Výsledbý zbytek se rozpustí v CHClj a promyje se vícekrát nasyceným NaCl. Organická vrstva se suší' nad síranem hořečnatým a zahuštěním ve vakuu se získá sloučenina A (3,91 g, 10,2 mmol)(94%) jako bezbarvý olej.

B. (R*)-2-/N-/(l ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/-L-valyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-N-/3- (methyl thio )prop.yl/-3-isochinolinkarboxamid!

Sloučenina A (10,2 mmol) se míchá pod¹ dusíkem ve 40 ml 1:1 kyseliny trifluoroctové' CHgC^ po jednu hodinu. Roztok se zahustí ve vakuu. Přidá se CHgCl^ a roztok se opět zahustí; těmto poslední krok se opakuje dvakrát navíc·. Zbytek se rozpustí v 0Η2θΐ2» zpracuje se s N,N-diisopropylethylamineim (1,77 ml, 10,2 mmol) a přidá se k ledem chlazené, dusíkem propláchnuté; (asi 20 min) reakční směsi N-terc.butyloxykarbonyl-L-valinu (4,42 g, 20,4 mmol), bis(2-oxo-3oxazolidinyDf osf orného; chloridu; (5,19 g, 20,4 mol) a Ν,Ν-diisopropylethylaminu; (3,55 ml, 20,4 mmol) v CHgClg. pH se upraví na 6 přídavkem dalšího 0,9 ml N,N-diisopropylethylaminu a reakční směs se umístí pod dusíkem- do místnosti o telotě 4 °C přes noc;. Roztok se postupně promyje? nasyceným NaCl, 50 mM KHSO^, nasyceným hydrogenuhličitanem sodÉým a nasyceným NaCl. Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatý^ a zahuštěním ve vakuu se získá olejovitý zbytek. Rychlá chromátografie na 5 x 12 sloupci silikagelu, elucí 12,5 %

-58až 50 % ethylacetátu v hexanu* se získá sloučenina B (1,9 g,

4,1 mmol)·.

C. (R*, ^)-2-/^/2-//(1, 1-Dimeth.ylethoxy )karbonyl/araino/-3/(trifenylmethyl)thio/propyl/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-N-/3-(methylthio)propyl/-3-isochinolinkarboxamid¹

Dusíkem propláchnutý roztok sloučeniny B (0,93 g, 2,0 mmol) a methylsulfidu (1,5 ml, 20 mmol) ve 20 ml 1:1 kyseliny trifluoroctové-CHgClg se míchá při 0 °C po jednu hodinu. Směs se zař ústí ve vakuu, rozpustí v CHgClg a opět zahustí ve vakuu’. Posledně uvedený postup se několikrát opakuje až je pH roztoku CHgClg 4. Tento roztok se zahustí', spojí se se sloučeninou 1F v bezvodém methanolu pod dusíkem a pH se upraví na 1 přikapáním: N^N-dilsopropylethylaminu. Pevný NaBHjCN' (160 mg, 2,8 mmol) se přidá po částech, a reakce se nechá probíhat při teplotě místnosti přes noc. pH se znovu upraví na 9 až 6 4 kapkami ledové kyseliny octové a reakční směs se míchá dalších 1,5 hodiny. Směs se zahustí ve vakuu, Zbytek se ochladí na ledu a rozdělí se mezi studený ethylacetát a nasycený hydtogenuhličitan sodný. Organická fáze se promyje nasyceným NaCl, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu. Zbytek se purifSkuje ryckleu sloupcovou chromatografií na 2 x 18 cm silikagelu za eluce 25 %, potom 40 %, ethylacetátu v hexanu, získá se 625 mg (0,79 mmol, %} sloučeniny C.

D. (R*,S*)-2-/ΓΓ-(2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-vály1/-1,2,3,4tetrahydrO-N-/3-(methylthio)propyl/-3-isochinolinkarboxarnid

K dusíkem propláchnutému roztoku sloučeniny C (0,79 mmol) v 5 ml CHgClg se po kapkách přidá a střídavě, kyselina trifluoroctová (15 ml) a triethylsilan (10 ml). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 3 hodiny, zahustí se ve vakuu

-59a trituruje se s etherem a pentanem, získá se pevný zbytek. Tento pevný zbytek se oddělí, promyje se několikrát etherem a pentanem a potom se extrahuje do ledové kyseliny octové. Kyselý roztok se lyofilizuje a získá se tmavý olejovitý zbytek.. Tento zbytek se rozpustí v 50:50 CH^CN/O,^ kyselině trif luoroc tové-^O/0,5% kyselině trifluoroctové, filtruje se přes Nořit pro odstranění tmavé barvy a potom se čistí preparativní HPLC, za eluce gradientem 20 % až 50 % B· v A (A je 0,05 % kyseliny trifluoroctové ve vodě; B je 0,05 % kyseliny trifluoroctová v CH^CN). Lyofilizací produkt obsahujících frakcí se získá 27 mg (0,06 mmol, 8 %) titulní sloučeniny jako bílého amorfního prášku.

FAB' MS: MH⁺ 453¹H NMR (CD-jOD): O>°-7,2 (m), 4,5-4,9 (m), 3,9 (d), 3,7 (d), 2,9-3,5 (m), 2,6-2,9 (m), 2,3 (dt), 1,9-2,2 (tn), 1,6 (m),

1,4-1,5 (m), 0,9-1,1 (dď).

Elementární analýza pro ^22^35^4^2¾»^5 kyselina trifluoroctová.2,10 HgO vypočtenu 43,70 % C, 5,83 % H, 7,87 % N, 9,01 % S, 15,61 % F nalezeno 43,67 % G, 5,52 % IT, 7,55 % N, 8,67 % S, 15,83 % F.

Příklad 14 (R*^í)-2-/N- (3-Merkaptopropyl)-L-valyl/-1 ,2, i, 4-tetrahydro-N'/3- (methylthio )propyl/-3-isochinolinkarboxamid

-60A. (R*)-2-/N-/3-/ (Tpifenylme thyl)thi o/propy1/-L-vály1/-1,2,3,4tetrahydro-N-/3-(methylthio)propyl/-3-isochinolikarboxamid

Dusíkem propláchnutý roztok sloučeniny 138 (0,95 g, mmol), kyseliny trifluoroctové (10 ml) a methylsulfidu· (1,5 ml, 20 mmol) v 10 ml CHgC^ se míchá 1 hodinu při 0 °C a potom se zahustí ve vakuu. Zbytek se rozpustí v CH^C^ a zahustí (tento proces se opakuje čtyřikrát). Aminová sůl se pak rozpustí spolu se sloučeninou 6B v 15:1 směsi tetrahydrofuranmethanol. pH se upraví na 7 N^N-diisopropylethylaminem a po částech se během několika minut přidá pevný NaBHjCřT (160 mg,

2,8 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti přes noc?, v této době se pH udržuje pod 6 několika málo kapkami octové kyseliny. Přidá se další NaBE^CN (80 mg, 1,4 mmol) a reakční směs se míchá dalších 24 hodin. Směs se ochladí na 0 °C a přeruší přídavkem) ethylacetátu a NaHCOj. Fáze se oddělí a organická fáze: se promyje* nasyceným NaCL, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu, Zbytek se aplikuje pro čištění na 2 x 20 cqt sloupec pro rychlou chromatografii silikagelu. Elucí 25 % potom 40 % ethylacetátu v hexanu se získá 385 mg (0,55 mmol, 28 %) sloučeniny A,

B. . (R^í*)-2-/W-(3-Merkaptopr opyl )-L-val,yl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-N’- /3- (methyl thio)propyl/-3-isochinolinkarboxamid

Sloučenina A se míchá při O °C pod dusíkem v roztoku. 95:3:1:1 kyseliny trifluoroctové-thioanisolu-methylsulfiduiethandithiolu (50 ml) po tři hodiny. Těkavé látky se odstraní ve vakuu a zbytek se analyzuje? HPLC, bylo zjištěno) významné množství výchozího materiálu. Zpracování s 95:3:1:1 kyselinou trifluoroctovou-thioanisolem-methylsulfidem-ethandithiolea (50 ml) se opakuje při teplotě místnosti po 2 hodiny. Směs se zahustí ve vakuu a zbytek se čistí preparativní HPLC (C-18).- Elucí gradiente» 20 až 50 % rozpouštědla B v rozpouštědle A a lyofilizací frakcí, obsahujících produkt (roz-61pouštědlo A je 0,05% kyselina trifluoroctová ve vodě, rozpouštědlo 3 je 0,05% kyselina trifluoroctová v CHjCřT) se získá titulní sloučenina (63,6 ng, 0,15 mmol) jako· chmýřovitý bílý amorfní prášek.

FAB MS: MH⁺ 438.

¹ íF NMR (CDjOD): & 7,0-7,3 (m), 4,5-4,9 («), 4,15 (d), 2,83,4 (m), 2,1-2,5 (m), 1,7-2,1 (m), 1,601,7 (m), 1,4-1,5 (m), 0,9-1,1 (dd).

/o</2°(methanol) -27,8°.

Elementární analýza pro .kyselina trif luoroctová. EgO vypočteno 50,69 % C, 6,56% H, 7,39 % N, 11,28 % S, 10,02 % F nalezena 50,67 % C, 6,60 % H, 6,96 % N, 11 ,61 % S, 10,0j % F.

Příklad 15 (r* )-N-//2-/N- (L-Cysteinyl)-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3isochinolinyl/karbonyl/-L-alairfn

o

OH

-62Chráněný peptidový meziprodukt se připraví postupně metodou v pevné fázi v zařízeni Applied Biosystems Model 430A Peptide Synthesizer za použití N-methylpyrrolidin(NMP)HOBT terč.Boc chemického programu? ďodaného se zařízením, Butylox.ykar bon,yl-L-Ala-PAM pryskyřice (0,5 g, 0,23 mmol) se získá komerčně. Aminokyseliny^ se kopulují jako jejich.

N-terc.butyloxykarbonylderiváty a reaktivní vedlejší řetězec cysteinu se chrání p-methoxybenzylem. N-terc.Butyloxykarbonyl skupiny se odstraní' v každém cykli následnými 1Ominutovými zpracováními s 33% a 50% kyselinou trifluoroctovou: v Neutralizace* o<-aminoskupin se provede 10% N,N-diisopropylethylaminem v CHgClg. Každá aminokyselina se kopuluje s DDC/HOBT v NMP/CH₂C1₂ směsích při teplotě místnosti. Jakékoliv volné aminoskupiny se acetylují 10% acetanhydridem/5% N,N diisoprop.ylethylaminem v CH^Clg P° ¹⁰ minut. Po konečné kopulaci se N-terc.butyloxykarbonylové skupina odstraní jak je popsáno výše. Sušená, chráněná peptidyl-pryskyřice' váží 584 mg (93 %).·

Celý výše uvedený produkt se zbaví chránících skupin a odštěpí od pryskyřice zpracováním s bezvodým kapalným HF následovně: peptidyl-pryskyřice (584 eg) se umístí do Kel-F HF reakční nádoby s míchací tyčinkou a zpracuje se s 0,75 ml thioanisolu, 0,25 ml ethandithiolu a 0,25 ml methylsulfidu. Nádoba se evakuuje v HF zařízení a ochladí se v lázni suchý led/ethanol. Přibližně 10 ml HF se oddestiluje z válce do reakční nádoby a lázeň suchého ledu se nahradí lázní led-voda. Reakční směs se míchá při 4 °C 1,5 hodiny a potom se HF odstraní za vakua během 30 minut. Produkt se vysrážf a promyje se etherem a potom se rozpustí v 15% vodná kyselině octové' a oddělí od pryskyřice filtrací. Filtrát se zmrazí na suchém ledu a lyofilizací se získá 103 mg surového peptidového produkt®. Podíly vzorku (10 mg) se aplikují na YMC ODS-AQ C_1S kolonu (10 x 250 mm, 5 mi) a provede se HPLC s reverzní fází za následujících podmínek: rozpouštědlo A, 0,05 % kyselina trifluoroctová ve vodě, rozpouš-63tědlo B; 0,05 % kyseliny trifluorroctové v CH^CN: lineární gradient od 10 do 50 % rozpouštědla B v rozpouštědle A během 40 min, průtoková rychlost 8 ml/min. Frakce, obsahující hlavní pík (220 nm) eluujíc.í' při 30,3 min se spojí a lyofilizují, získá se 7 mg titulní sloučeniny jako bílého, chmýřovitého práškvu.

Analytická HPLC: YMC ODS-AQ C₁ θ (4,6·» 250 mm), 220 nm, 1,0 ml/min,. lineární gradienti od 5 % do 60 % rozpouštědla & v rozpouštědle A během 40 min (rozpouštědlo A, 0,05 % kyseliny trifluoroctové ve vodě; rozpouštědlo B, 0,05 % kyseliny trifluoroctové' CH^CH). RT 21,7 min.

H. I.: >98 %

MS: 451⁺ (M+H)⁺.

¹H NMR (CDJOD, 270 MHz )^ (ppm) 7,12 (m, Ar-H), 5,60-5,90 (m), 4,22 (m), 3,95 (a), 3,08 (J= 5,9 Hz), 2,0? (J= 11,1 Hz.),

I, 86 (J»16,4 Hz), 1,27 (J= 7,0 Hz), 1,17 (ď= 7,0 Hz.), 1,06 (ď = 7,6 Hz), 1,00 (Js 6,0 Hz), 0,94 (J= 6,5 H_z).

Příklad 16 (r* o») ’ ~H-//2-/N- (2-Amino-4-hydroxy-1 -oxobutyl )-L-valyl/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyI/karbonyl/-L-methionin

OH

-64Titulní sloučenina (6 mg, bílý ohmýřovitý prášek) se připraví použitím metody v pevné fázi popsané v příkladu 15 s následujícími modifikacemi.:.

N-terc.Butyloxykarbonyl-L-Met-PAM pryskyřice (0,59 g, 0,25 mmol) se získá komerčně. Neaktivní vedlejší řetězec homosjerinu se chrání jako benzylether.

MS: (M+H)⁺ 509⁺.

Tff-NMR «H>₃OD, 270 MHz·): $ (ppm) 7,52 (m), 7,24 (a), 5,14 (m) 5,02 (m), 5,06 (m), 5,09 (m), 4,7 (m), 4,5 (m), 3,78 (m), 3,64 (a), 3,19 (m), 2,72 (m), 2,39 (a), 1,92 (m), 1,12 (a:)_r 1,03 (m).

Pozorovány rotamery.

Příklad 17 (R*, S*^:)-2-/N- (L-Cys teiny 1 )-L-valyI/-1 ,2,3,4-te trahydro-N/1 - (hydroxymethyl )-3- (methylthio )propyl/-3.-isochinolinkarboxamid

Titulní sloučeniny (5,5 mg, skelná pevná látka) se připraví použitím·, metody v pevné fázi popsané v příkladu· 15

-65s následujícími modifikacemi:

N-terč.Butyloxykarbony1-L-Met-PAM pryskyřice (1,0 g,

0,42 mmol) se získá komerčně.

Tetrapeptidový produkt se odštěpí z pryskyřice zpracováním s LiBH^. Ve čtyřech částech; se přikape roztok· LiBH^ (28 mg, 1,30 mmol) v 5 ml bezvodého tetrahydrofuranu během 1 hodiny k 0,,788 g (0,26^- mmol) tetrapeptidové pryskyřice suspendované ve 30 ml bezvodého tetrahydrofuranu při 0 °C. Směs se ohřeje' na teplotu místnosti a míchá se 1 hodinu. Reakce se přeruší přídavkem ledové kyseliny octové (4 x 1 ml). Přidá se další' ledová kyselina octová (5 ml) a potom 15% vodné kyselina octová (10 ml). Produkt se oddělí oď pryskyřice filtrací a postupným promytím ledovou kyselinou octovou', 15% kyselinou octovou a vodou. Filtrát se lyofilizuje a získá se surový chráněný peptiďalkohol jako skelná pevná látka.

Chráněný peptidalkohol se suspenduje v 15 ml CH^Clg a zpracuje se s 1,5 ml thioanisolu, 0,5 ml ethandithiolu,

0,5 ml methylsulfidu a 19 ml kyseliny trifluoroctové při teplotě místnosti. Směs se míchá' při teplotě místnosti 2 hodiny a potom se zahustí ve vakuu. Zbytek se promyje diethyletherem’ a dekantuje (4 x 15 ml). Zbytek se rozpustí v ledové kyselině octové (2 ml) a 15% kyselině octové (45 ml) a pak se lyofilizuje. Lyofilát (20 mg) se čistí' HPLC s reverzní fází' jak je popsáno v příkladu 15 a získá se 5,5 mg titulní sloučeniny.

MS: (M+H)⁺ 497^· tffNMR (400 MHz, D6 DMSO, 30 ^C):/ (ppm): 8,70 (m, vyměnitelný), 8,13. (á s, vym), 7,50 (m, vyrnu), 7,17' (m, 5H,Ar-H), 6,49 (š s, vym.., CONff), 4,50-5,15 (m, a-HÍ., 4,15 (δ,vym), 3,69 (á,vym), 3,01 (d, J=6,4 Hz), 2,75-2,95 (m)_t 2,32 (m),

-662,16 (a), 1,99 (s), 1,77 (a), 1,50 (a), 1,24 (s), 1,02 d, ď= 6,84 Hz), 0,96 (ď, 6,4 H_z).

Příklad 18 (R* )-N-//2-/tt- (L-Cysteinyl )-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro3-isochinolinyl/karbonyl/-i>-f enylalanin

A. (R*)-2-/lT-/(1,1-Dimethylethoxy )karbonyl/-L-valyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinkarboxylová kyselina, fenylmethylester

Benzyl- (S)-1,2,3,4-tetrahydr ois ochinolin-3-kar boxylá t (S)-sůl s mandlovou kyselinou (připravená podle B.O.T.Kammer aeiera a spol., Synthesis, 1157 (1992)/ (80 g, 0,19 aol) se rozdělí aezi 2 1 ethylacetátu?a 1 1 0,9M hydrogenuhličitanů sodnéh©. Organická vrstva se suší (síran hořečnatý) a odpaří se olej'. Olej se rozpustí v 600 al dichloraethanu a roztok se zchladí na 5· ®C pod dusíkea. Studený roztok se zpracuje postupně s N-terč. buty loxykarbonyl-L-valinem (46 g,

0,21 mol), N,N-diisopropylethylaainea· (60 ml, 44,5 g, 0,35

-67mol), a bisj(2-oxo-3-oxazolidinyl )fosfoxmý chlorid? (58,3 g._t 0,23 mol) s ochlazením na 5 °'C po každém přídavku. Směs se míchá přes noc; při 5 °G a získá se kaše. Směs se nalije do 2 1 ethylacetátu a postupně se promyjsp 1,5· 1 kyseliny chlorovodíkové, 1 1 vody, 1,5 1 IN hydrogenuhličitanu sodného a 1 1 solanky. Druhý 1 1 ethylacetátového extraktu se spojí s prvním. Třetí extrakt obsahuje převážně polárnější materiál a nespojuje se. Extrakty, obsahující produkt se spojí a odpaří na olej. Odčerpáním· ve vakuu na konstantní hmotnost se získá 82,3 g (93% výtěžek) produktu ve formě hustého bezbarvého oleje, který částečně stáním tuhne.

B·. (R*)-2-L-Valyl-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinkarboxylová kyselina, fenylmethylester

Roztok sloučenina A (7,94 g, 0,017 mol) v 1M HCl v kyselině octové (34 ml) se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti. Přidá se další 1M HCl v kyselině octová (23,5 ml) Reakční směs se míchá další 1,5 hodiny a rozpouštědla se odstraní ve vakuu. Ethylacetát se přidá a reakční směs se zahustí ve vakuu. Zbytek se trituruje s hexanem a suší ve vakuu, získá se sloučenina B (6,26 g, 99 %)· t.t.: 80-83 °C

TLC: R~^aó,65' (9:1:0,05 chloroform/methanol/octová kyselina, vizualizováno síranem ceritoamonným)

MS: (M+H')⁺ 367.

C. (R* )-2-/N-/N-/(1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyI/-S-(trifenylmethyl'4-L-cys teinyl/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3isochinolinkarboxylová kyselina, fenyImethylester.

K roztoku N-terc.but.yloxykarbonyl-S-trityl-L-cysteinui (7,78 g, 16,8 mmol) v dimethylf ormamidu (80 ml) při 0 °c poď dusíkem se přidá benzo triazol-1-y loxy- tris (dimethy lamino )f os-68foniumhexafluorofosfátu (7,42 g, 16,8 mmol) a N,N-diisopropylethylamin (2,92 ml, 16,8 mmol). Po 30 minutovém míchání se přidá sloučenina B (6,96 g, 16,8 mmol, 1 ekv.) a N,N-diisopropylethylamin (2,92 ml, 16,9 mmol). Po 16 hodinách míchání při 0 °C se reakční' směs zředí ethylacetátem (500 ml) a postupně se promyje nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (100 ml) a 10% lithným chloridem (4 x 100 ml). Organická vrstva se suší nad síranem sodným, filtruje a zahustí ve vakuu. Zbytek se čistí na silikagelu (400 ml, eluce 1:4 až 3:7 ethylacetát/hexan), získá se sloučenina C (10,46 g,

%).· t.t. 85 až 87 °C,

TLC: ^=.0,40 (2:1 hexan/ethylacetát, vizualizováno síranem ceritoamonným).

D. (R*)-2-/N-/N-/(1,1-Dimethylethoxy)karbonyl/-S-(trifenylmethyl )-L-cys teinyI/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3isochinolinkarboxylová kyselina

K roztoku sloučeniny C (8,61 g, 1^,6. mmol) v tetrahydrofuranui/methanolu (40 ml 3*1) při 0 θ se přidá 1N hydroxid lithný (15,9 ml, 15,9 mmol). Po 1 hodině míchání při 0 °C a 1 hodině při teplotě místnosti se reakční směs zředí vodou (20 ml) a IN kyselina chlorovodíková se přidá (pH=2). Reakční směs se extrahuje ethylacetátem (2 x 100 ml). Organické vrstvy se spojí, suší se nad síranem sodným, filtrují a zahuštěním ve vakuu se získá sloučenina D (8,54 g_t 73% podle HPLC).

MS: (M-H·)” 720.

¹H NMR 400 MHz- (CD^OD): 0,89 (d, 3H, J= 5,86), 1 ,00 (d, 3H, 5,86), 1,45 (s, 9H), 2,03 (m, 1H), 2,22 (m, 1H), 2,6l (m,

1H), 2,92 (m, 1H), 3,14 (m, 1H), 3,93 (m, 1H), 4,62-5,41 (m, 4Ή), 7,27 (a, 19H),

-69¹³C NMR 100 ΜΗ® (CD-jOD): 1 7,4, 19,0, 28,0, 30,2, 31,0, 33,6·, 45,5, 51,5, 54,1, 64,6, 66,5, 79,8,. 126,0, 126,6, 126,8, 127,2, 127,8, 128,2, 129,3, 13-1,4, 131,8, 140,6, 144,1,

154,9, 170,5, 171,7, 173,6.

E. (R* )-N-//2-/N-/( 1 , 1-Dimethylethoxy )karbonyl/-S-(trif enylme thyi )-L-cystein.yl/-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-fenylalanin, methylester.

K roztoku sloučeniny D (573 mg, 0,70 mmol, 88 0 hmotn.) v dimethylformamidu (3 ml) při 0 ^QC pod dusíkem se přidá methylester L-fenylalaninu (181 mg, 0,84 mmol), N-methylmorfolin (184 ml, 1,68 mmol) a benzotriazol-1-yloxy-tris(dimethylamino)fosfonium-fiexafluorofosfát (371 mg, 0,84 mmol).

Po míchání při 0 °C po 16 hodin se reakční směs zředí ethylacetátem (100 ml) a postupně se promyje nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (30ml), 1% hydrogensíranem draselným (30 ml) a 10% chloridem lithným (3 x 30 ml). Organická vrstva se suší nad síranem sodným, filtruje a zahustí ve vakuu. Zbytek se čistí na silikagelu ^uierck (100 ml, eluce 3:1 až 2:1 hexanem/ethylacetátem), získá se sloučenina E (458 mg, 76 %), t.t. 88 až 92 °C. TLC: R_f= 0,15 (2:1 hexan/ ethylacetát, vizualizováno síranem ceritoamonným).

F. (R*)-N-//2-/N-/N-/( 1,1-Dimethylethoxy)karbonyl/-S- (trifenylme thyi)-L-cys te inyl/-L-valy1/-1,2,3,4-te trahydro3-isochinolin.yl/karbonyl/-L-fenylalanin

K roztoku sloučeniny E (376 mg, 0,426 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml) při 0 °C se přidá 1ΓΓ hydroxid sodný (0,853 ml, 0,853 mmol). Po 3 hodinách míchání se reakční směs zředí ethylacetátem (100 ml) a vodou (100 ml) a pH-.se upraví na 1řT kyselinou chlorovodíkovou (pH je 2). Vrstvy.se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem¹ (2 x 100 ml). Organické vrstvy se spojí, suší nad síranem sodným, fitrují a

-70zahustí se ve vakuu, získá se sloučenina F (0,354 g, 96 %). t.t..: 125 až 129 °C

TLC: R^= 0,65 (9:1:0,05 chloroform/methanol/octová kyselina, vizualizováno síranem; cerMtoamonným).

G. (R^x)-Ν-//2-/ΓΓ-(L-Cysteinyl)-L-valyI/-1 ,2,3,4-tetrahydro3-isochinolinyl/karbonyl/-L-fenylalanin (Všechna rozpouštědla použitá v příkladu 18G jsou odplyněna). K roztoku sloučeniny F (377 mg, 0,434 mmol) v dichlormethanu (2 ml) při 0 °C pod dusíkem se přidá triethylsilan (0,69 ml, 4,34 mmol) a kyselina trifluoroctová (2 ml), při 0 °C a. 1 hodině při teplotě místnosti se rozpouštědla odstraní ve vakuu. Zbytek se rozpustí v methanolu (5 ml) a voda (3 ml) se přidá. Sraženina se odfiltruje? a. polovina filtrátu se čistí preparativní HPLC (YMC ODS S-10, 30 x 500 mm, 21 ml/min, gradient 36-90 % vodhý CH^OH, 0,1 % kyseliny trifluoroctová), získá se titulní sloučenina (54 mg, 40 %).·

t.t. 137 až 142 °C.

TLC: íL·? 0,32 (4:1:1 hutanol/octová kyselina/voda, vizuaJí sj* lizováno síranem ceriítoamonným)

MS: (M+H)⁺ 527'.

/<x/_D= -9,9° /o=0,102, Cff₃OHZ ^!Η NMR 400 MHz (CD-jOD): 0,096-1,74 (m, 6H), 2,06-2,20 (m, 2H), 2,88-3,42 (m, 6H), 4,0?, 4,23 (dd, 1H, J=5,13, 5,55), 4,44-5,00 (m, 5H, také pík vody), 7,06-7,26 (m, 9H).

¹³C NMR 100 MHz (CD₃OD): 18,3., 18,6, 19,7, 19,9, 26,5, 26,9, 31,4, 31,®, 31,7, 32,3, 37,6, 38,4, 44,0, 47,3, 47,5, 54,9, 55,3, 55,5, 55,β, 56,0, 5^,9, 57,0, 57,6, 127,1, 127,2, 127,6,

127.8, 127,9, 128,0, 128,8, 129,4, 130,4, 130,5, 131,0,

132.9, 133,3, 134,8, 134,9, 138,0, 138,6, 168,4, 169,2,

171,5, 172,8, 173,1, 173,3, 174,2, 175,1.

-71Příklad 19 (R* )-ΪΓ-//2-/Ν-(L-Cysteinyl )-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro3-isochinolinyl/karbonyl/-L-serin

Titulní sloučenina (137 ag, 37%, bezbarvá- pevná látka) se připraví z methylesteru L-serinu a sloučeniny 18D (574 ag) třístupňovým postupem analogicky tomu, který je popsán pro přípravu sloučeniny 18G ze sloučeniny 18D.

MS: 467 (M+H)⁺.

Příklad 20.

(^-1^-//2-/^-(L-Cysteinyl)-L-valyl/-1 ,2,3,4- tetrahydro3-isochinulinyl/karbonyI/-N-hydroxy-L-methioninamiď

A. O-Tetrahydropyran-2-yl-hydroxylamin

K roztoku: N-hydroxyftalimidu (20 g, 0,2123 mol) v tetra hydrofuranu (350 ml) se přidá dihydropyran (17,0 al, 0,187 ol) a monohydrát kyseliny p-toluenjsulffbnové' (400 mg) pod dusíkem pří teplotě místnosti. Další dihydropyran (5,6- ml, 0,062 mol) se přidá po 8 hodinách a 24 Hodinách. Reakční směs se odfiltruje a zahustí na 15Ό ml. Potom se přidá dihydropyran (11,,2 ml, 0,125 mol) a monohydrát kyseliny p-ttoluensulfonové (800 mg). Po 16 hodinách míchání se reakční směs zahustí ve vakuu· Zbytek se rozpustí v ethylacetátu: (400 ml) a promyje se hasycewým hydrogenuhličitaném sodným (3 x 15Q ml). Organická vrstva se suáí nad síranem sodným, zfiltruje se a zahustí ve vakuu. Zbytek se trituruje s hexahem (3 x 200 ml) a získá se tetrahydropyranylether N-hydroxyf talimide (23,9 g, 78%).

t.t.: 210 °C

TLC: 0,81 (3:7 hexan/ethylacetátt, vizualizováno pomocí

UV 254 nm)

MS: (M+H)⁺ 248.

K roztoku výše připraveného meziproduktu (23,64 &,

0,09^ mol) v toluenu (60 ml) se přidá aethylhydrazin (5,59

-73ml, 0,105 mol). Po zahřívání' na 80 °C po 1 hodinu se rozpouštědlo odstraní ve vakuu. Zbytek se trituruje s etherem (20 ml) a filtruje. Pevná látka se rozpustí v hexanu, zpracuje se s aktivním uhlím, filtruje přes celit a zahustí na 50 ml. Krystaly se odfiltrují a suší. Získá se sloučenina A (5,542 g, 50 %).

t#t.: 33 až 38 °C

TLC:R^= 0,67 (1:4 hexan/eth.ylacetát, vizualizováno; síranem ceritoamonným)

MS: (M+E)⁺ 118.

¹H 400 MHz (CDCl-j): 1,53-1,78 (m, 6H), 3,57 (m, 1H), 3,91 (m„ 1H), 4,71 (m„ 1H), 5,49 (šs, 2H), ¹³C 100 MHz (CDClj): 19,6, 25,3, 28,8, 62,5, 102,5

B-. (R* )-N-//2-/N-/N-/(l, 1 -Dimethylethoxy)karbonyl/-S(trif enylmethyl )-L-cys teinyI/-L-valyl/-1 ,2,3,4- te trahydro3-isochinolinyl/karbonyl/-N-tetrahydropyran-2-yloxy-l«methioninamidů

K roztoku sloučeniny 2B (400 mg, 0,469 mmol) v dimethyl formamidu· (3 ml) při. 0 °C pod dusíkem, se postupně přidá sloučenina A (55 mg, 0,469 mmol), N,N-diisopropylamin (81,5 ml, 0,469 mmol) a benzotriazol-1-yioxy-tris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorofosfát (207 mg, 0,469 mmol). Po míchání při 0 °C po 18 hodin se reakční směs zředí ethylacetátem; (70 ml) a postupně se promyj© nasyceným· hydrogenuhličitanem sodným (30 ml), 1% KHSO^ (30 ml) a 10% chloridem lithným (3 x 30 ml). Organická vrstva se suší nad síranem sodným, filtruje a nahustí se ve vakuu. Získá se sloučenina B (427 mg, 96 %).

t.t.: 113 až; 115 C

TLC: R_í»= 0,85 (9:1:0,05 chj.oroform/methanol/kyselina octová, vizualizováno síranem ceríftoamonným)

MS: (M+H)⁺ 952

-74C. (R³*)-Ν'-//2-/BF-( L-Cys teinyl)-L-valy 1/-1 ,2,3,4-tetrahydro 3-is ochinolinyl/karbonyl/-N-hydroxy-L-me thi oninamid

Sloučenina C (72 ag, 33 %) se připraví ze sloučeniny B (323 mg, 0,340 mmol) za použití postupu; analogického postupu popsanému; pro přípravu: sloučeniny 18G ze sloučeniny

18F.

t.t. 135 až 139 °'C

TLC: R_f = 0,17 ( 9:1:0,05 chlorofo^o/methanol/kyselina octová, vizualizováncc síranem cerátoamonným)

MS·: (M+H)⁺ 526 ¹H'NMR 400 MHz (CT^OH): 1,06 (m, 6H), 1,99,. 2,05 (s, 3H) 1,89-2,45 (m, 5Hj, 2,90-3,18 (a, 4H), 4,0045,20 (a, 6H)_ř 7,22 (b m, 4H).

Příklad 21 (R* )-Ν-//2-/ίΓ- (L-Cysteínyl)-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro3-isochinolinyl/karbonyl/-3- (2-thienyI)-DL-alanin

<v 1:1 směs

-75A. 3-(2-Thienyl)-DL-alanin, methylestexr

Bezvoďý HCl se probublává suspenzí kyseliny R,S-í/,amino-2-thiofenpropionové (2 g, 11,68 mmol) a methanolu (75 ml) při 0 do dosažení roztoku. Směs se míchá 16 hodin při teplotě místnosti, 3 hodiny pod refluxem a potom se zahustí za vakua. Pevná látka se rozpustí ve vodě (50 ml), extrahuje 0¾^¾ (3 x 5Ό ml). Vodná vrstva se zalkalizuje 10% NaHCO^ a extrahuje CH₂C1₂ (4 x 50 ml). Spojené organické extrakty z bázického podílu se suší' (MgSO^), zfiltruje? a zahuštěním za vakua se získá sloučenina A (2,0 ff, 93%).

TLC: R.£= 0,51 (9:1:0,05 CHCl^/methanol/kyselina octová, vizualizace síranem cerljtoamonným/molybdát amonný/kyselina sírová/voďa).

MS: (M+H)⁺ 186.

B. (R^3ef)-N-//2-/N^r-/H-/(l ,1 -dimethylethoxy )karbonyl/-S(trifenylmethyl)-L-cysteinyl/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-J-isochinolinyi/karbonyl/^-^-thienyD-DL-alanin, methylester

N,N-Diisopropylethylamin (0,130 ml, 0,748 mmol) se přidá k roztoku sloučeniny 18D (0,539 g, 0,748 mmol), sloučenina A (0,138 g, 0,748 mmol), benzotriazol-1-yloxy-tris(di methylamino)fosfonium-hexafluorofosfát (0,331 8t °»748 mmol) v CH^CřT (15 ml) a dimethylformamid (3 ml) se míchají při teplotě místnosti 16 hodin. Reakce se přeruší 1N HCl (100 ml) a extrahuje se ethyiacetátem (3x100 ml). Spojené organické fáze?se postupně promyjí 10% NaHCOj (2 x 100 ml), a 10% LiCl (2 x 100 ml), suší se (MgSO^), filtrují a zahuště ním za vakua se získá zbytek.. Tento; se čistí rychlou chro>matografií (eluoe 4:1 hexan/aoeton) a získá se sloučenina B (0,616 ff, 93 %).

-76t.t·: 51 až 58 °C

TLC: R_f = 0,56 (2:1 hexan/aceton, vizualizace síranem cer^oamonným/Mlybďeaanem amonným/HgSO^/v.odou).

MS: (M+H)⁺ 889·

C. (R^x)-N-//2-/N¹—(L-Cys teinyl)-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro3-is ochinolinyl/karbony1/-3-(2-thieny1)-DL-alanin

Sloučenina C (57%) se připraví ze sloučeniny B (0,61 g, 0,687 mmol) použitím dvoustupňového postupu: analogického postupu popsanému pro přípravu sloučeniny 18G ze sloučeniny 18E·

t.ť. 140 až 147 °C.

TLC: R^f 0,28 (9:1:0,05 CHCl^/methanol/kyselina octová, vizualizace síranem cer^oamonným/molybdenanem amonným/ kyselinou sírovou/vodou)·

MS: (M+H)⁺ 533 / ς</2²β*-20,0° (o« 0,05, CH₃OH) ’h (CD₃OD): 0,98 (d, 1,5 H, J= 5,3), 1,00 (d!, 1,5 H, J=

6,4), 1,03. (d, 1,5 H, J= 7,,1), 1,05 (d, 1,5 Η, J» 6,4), 2,20-2,40 (m, IH), 2,91-3,35 (m, 6H), 4,05-4,13 (m, IH), 4,58-5,10 (m, 5H), 6,72-6,92 (m, 3H), 7,14-7,50 (m, 5H). Elementární analýza pro ^σ25^Η'32^4θ5⁵2 H^O. CgHI^Og vypočtena 49,19 % 0, 5,21% H, 8,.53 % M, 9,77# S, 8,68 % F nalezeno 49,,64 % C, 5,32 % H, 8,60 % K, 9,57% S, 8,25 % F.

Příklad 22 (R*) -N-//2-/N-(L-Cys teinyl )glycyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin

A. (R*)-W-/(1,2,S,4-Tetrahydro-3-isochinolinyl)karbonyl/-Lme t hi onin, qge thy les ter

HCl/dioxan (bezvodý, 4M, 0,18 al, 0,007 aaol) se přidá k suspenzi sloučeniny 1A (1,5 g, 3,55 amol) v CH^OH/tetrahydrofurann (20/3. al) při teplotě místnosti pod argonem. Po 15 hodinách: se reakční směs zahustí ve vakuu. Zbytek se krátce trituruje s etheremi a pevná látka se suší. Získá se sloučenina A (1,14 g, 100 %).

B. (R* )-N-//2-/N-/( 1,1 -Dimethylethoxy )karbonyl/glycyl/1, 2,3,4-tetΓahydrα-3-isochinolinyl/kaΓbonyl/-I*-methion£n, methylester

Bis (2-oxo-3-oxazolidinyl)f osf orný chlorlď (1,08 gí, 4,24

-78mmol) se přidá k míchanému roztoku sloučeniny A (1,14 g,

3,53 mmol), N-tero.butyloxykarbonylglycinui (0,68 g, 3,88 mmol) a N,N-diisopropylethylaminu (2,02 ml, 1,50 g, 11,6 mmol) v CHgG-lg (14 ml) při 0 °C pod argonem·. Po 2,5denním míchání se reakční směs rozdělí mezi ethylacetát. (35 ml) a 10% HC1 (10 ml). Vodná vrstva se extrahuje (2 x 30 ml) ethylacetátem). Spojené organické extrakty se promyjí postupně 10% H01 (2 x 10 ml), vodou (2 x 20 ml), nasyceným NaHCO^ (2 x< 10 ml) a nasyceným NaCl (2 x 20 ml). Organická vrstva se suší nad MgSO^, filtruje a zahuštěním se získá sloučenina B (1,7 g, 100 %), která se použije' bez dalšího čištění.

MS: (M+H)⁺ 400⁺

TLC^R^ 0,75 (ethylacetát), vizualizováno UV, molybdenan carítoamonný.

C. (R*)-N-//2-/N-/N-/(1,1-Dimethylethoxy)karbon,yl/-S(trif enylme thyl¹ )-L-cys te inyl/glycyl/-1,2,3,4- te trahydro3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Sloučenina C (82 %) se připraví ze sloučeniny B (1,64 g, 3,41 mmol) za použití dvoustupňového postupu popsaného pro přípravu sloučeniny B ze sloučeniny 1A s tím rozdílem, že se ve druhém stupni použije? N-terc.butyloxykarbonyl-Strityl-L-cystein (0,78 g, 1,6? mmol) místo N-terc.butyloxykarbonylglycinu.

θ,69 (ethylacetát), vizualizováno UV, molybdenanem oer^jřoamonným)

D. (R*)-N-//2-/N-(L-Cysteinyl)glycyl/-1,2,3,4-tetrahydro3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin

Sloučenina D (39 %) se připraví ze sloučeniny C (1,09 g, 1,58 mmol) za použití postupu analogického postupu popsanému pro přípravu sloučeniny 1H ze sloučeniny 1G s tím rozdílem, že se titulní sloučenina čistí chromatograf!í na

-79silikagelu za použiti' eluce pomoci CHCl^ a. CHCl^/CH^Off (9:1) a preparativní' HPLC. t.t. 95 až 99 °G

TLC: IL, 0,3 (9:1:0,1 CHCl-,/CH_qOH/CH,COOH) _t vizualizováno í ¹ a, J J J

UV, molydbenanem· cerDtoamonným).

MS’: (M+ff)⁺ 469+.

Příklad 23· (R* )-N²-//2-/ÍT- (L-Cys teinyl )-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro3-isoohinolinyl/karbonyl-L-glutamin

A. (R* )-N²-//2-/N-/ÍT-/( 1,1 -Dimethylethoxy )karbonyl/-S(trif enylmethyl )-L-eys teinyl/glyeyl/-! ,2,3,4-tetrahydro3-isochinolinyl/karbonyl/-L-glutamin, 1,1 -dimethylethy1ester

K ochlazenému roztoku (4 °C) sloučeniny 18D (722 mg,

0,5: mmol) se přidá terc.butylester L-glutaminu (120 mg, 0,5 mmol), 4-methyImorfolin (137 ml, 1,25 mmol) v dimethylformamidui (2,5 ml) a benzotriazol-1-yloxy-tris(dimethylamino)80fosfonium-hexafluorofosfát (332 mg, 0,75 mmol). Směs se míchá při 4 °C 18 hodin, nechá se ohřát na teplotu místnosti a míchá se dalších 24 hodin. Směs se nalije do kyseliny chlorovodíková (50 ml, 0,5 N) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 100 ml). Organické extrakty se spojí, promyjí hydrogenuhliěitanem sodným (50 ml, nasycený vodný roztok), suší (síran hořeěnatý) a zahuštěním ve vakuu se získá sloučenina A (510 mg, 68% výtěžek, 60% čistota), který se použije bez dalšího čištěni.

B^!. (R* )-N²-//2-/N- (L-Cysteinyl )-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro3-isochinolinyl/karbonyl/-L-glutamin

Roztok sloučeniny A (470 mg, 0,52 mmol),triethylsilanu (832 ml, 5,2 mmol), kyseliny trifluoroctové (5 ml) a dichlor methanu (5 ml) se míchá dvě hodiny, zahustí se ve vakuu na ambrový olej a čistí se preparativní HPLC (YMC S-15 ODS 50 x 500 mm kolona eluovamá' 35 ml/min 10 až 90% vodným roztokem methanolového gradientu, obsahujícího 0,1 % kyseliny trifluoroctové během- 1 hodiny, UV detekce při 215 nm). Vhodné frakce se spojí (stanoveno- pomocí analytické HPLC), zahustí se ve vakuu a lyofilizací z vody se získá titulní sloučenina jako bílé pevná látka (80 mg, 0,11 mmol, 22 %)· t.t. 145 až 150 °C /X/²²= -27,5° (o»0,10, GH₃OH)

Příklad 24 (R^x )-N-//2-/B- (L-Cysteinyl )-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro3-isochinolinylAarbonyl/-L-histidin

Titulní sloučenina (0,196 g, 30%) se připraví ze sloučeniny 18D (0,60 g) a L-histidinu-methylesteir-hydrochloridu za použití tříszupňového postupu popsaného? pro přípravu sloučeniny 21C; ze sloučeniny 18D a sloučeniny 21 A, s tím rozdílem, že v prvním stupni se eliminuje přerušení 1N HClt.t. 130 až 13? ^aQ

TLC: R^= 0,26 (6:3:J n-propanol/hydroxid amonný/voda, vizualizace síranem ceřljíoamonným/molybdenanem: amonným/kyselinou sírovou/vodou).

MS: (M+H)⁺ 516 (CD₃OD): 1,03 (d, 3H, J= 6,5), 1,08 (d, 3H, J= 6',5), 2,20· 2,28t (a, 1H), 2,93 (d, 2H, 5-,3.), 3,00-3,42 (m, 4H)_r 4,15 (t, 1H, <7= 5,9), 4,59-5,13 (a, 5H), 7,17-7,40 (m, 6h).

Příklad 25 (R* )-N-//2-/řT- (L-Cys teinyi)-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3isochinolinyl/karbonyl/-3- (f enylmethyl )-L-alanin

K roztoku L-homofenylalaninu (0,99 g, 5,53 mmol) v absolutním methanolu (50 ml) pod argonem, se přidá p-TgOH.^O (2,09 g, 11,0 mmol) a směs se zahřívá' pod refluxem 6 hodin. Reakční směs se ochladí a zahustí ve vakuu. Zbytek se trituruje s etherem· a získá se sloučenina A (2,0 g, 90 %).

B. (R^m )-Ν-//2-/Ν-/Ν-/(1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/-St rif eny Ime thyl)-L-cysteinyl/-L-vály I/-1 ,2,3,4-tetrahydro3-isochinolinyI/karbonyl/-3-(fenylmethyl)-L-alanin, methyl ester

Ke studenému (0 ^Q<2) roztoku sloučeniny 18D (360 mg, 0,5 mmol) v dichlormethanu (5 ml), obsahujícím dimethylformamiď. (0,5 ml) se přidá sloučenina A (292 mg, 0,8 mmol), bis(2-oxo3-oxazolidinyl)fosforný chlorid? (128 mg, 0,5 mmol) a N-methyl morfolin (0,22 ml, 2,0 mmol). Po 2 hodinách-se reakční směs nechá ohřát na 5 °C a míchá se přes no© (16 hodin). Směs se zředí chloroformem (10 ml) a postupně se promyje vřdy 10 ml IN HC1, nasyceného roztoku hydrogenúhličitanu sodného a solanky. Organická vrstva se suáí (MgSO^), filtruje a zahustí se fce vakuu. Purifikací rychlou sloupcovou chromatografií na silikagelu za eluce 30% ethylacetátem v hexanech se získá sloučenina B (330 mg; 73 %)»

TLC: Rz. 0,46 (40^6 ethylacetátu v hexanech), vizualizace molybdenanem· cerljtoamonným).

-83MS: (FAB) (M+H)⁺ = 897⁺.

C. (R*)-N-//2-/N-(L—Cysteinyl)-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydrol-isochinolinyl/karbonyl'/-3-(fenylmethyl)-L-alanin

Titulní sloučenina (60=6 výtěžek) se připraví ze slouv čeniny H (195 mg) použitím dvoustupňového postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 18G ze sloučeniny 18E. t.t. 120 až 123 °G

MS: (FAB) (M+H)⁺ = 541.

/ξ/2²= -34,7° (o= 0,426, methanol)

Elementární analýza pro * θ’⁸ kyselina trifluoroctová:

vypočteno 53,14 % C, 5,71 % H, 8,19 % N, 9,,42 % F nalezeno 53,14 % G, 5,68 %' H, 8,1 9 % N, 9,44 % F.

A

Příklad 26 (R*)-N-//2-/N-(L-Seryl)-!»valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin

SMe

-84Titulní sloučenina (6 mg, chmýřovitý prášek) se připraví použitím metody v pevné fázi popsané v příkladu. 15 s následujícími modifikacemi:

N-terc.Butyloxykarbonyl-L-Met-PAM pryskyřice (0,59 g,

0,25 mmol) se získá komerčně. Reaktivní vedlejší řetězec šeřinu je chráněn jako benzylether.

MS: (M+H)⁺ 495⁺.

¹H NMR (CD^OD): (ppe) 7,23 (m), 5,03, (m), 4,95 (m), 4,71 (m), 4,46 (m), 4,22 (m), 4,06-3,69 (m), 3,44 (m), 3,38 (m), 3,16 (m), 2,39 (m), 2,24 (m), 2,08 (m), 2,04 (s), 1,94 (ar), 1,29 (m), 1,09 (J= 6,4 Hz), 1_řQQ (m). (Pozorovány rotamery).

Příklad 2?

(R*',R*)-2-/N- (3-Merkapto-1-oxopropyl)-L-valyl/-1 ,2,3,4tetrah,ydro-N-/3-(methylthio)-l-(1H-tetrazol-5-yl)propyl/-3isochinolinkarboxamidí

A. N-(2-Kyanoethyl)-N²-/(1,1-dimethylethoxy)karbonyl/-Lmethionin

-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid-hydrochlorid

-85(16,24 g, 85 mmol), 3-aminopropionitril (10,9 g, 85 mmol, fumarátová sůl), Ν,Ν-diisopropylethylamin (17,9 ml, 100 mmol) se přidá k roztoku N-terc.butyloxykarbonyl-L-methioninu;

(19,9 g, 80mmol) a N-hydroxybenzotriazolu (13,0 g, θ5 mmoll v tetrahydrofuranu (150 ml) při teplotě místnosti pod argonem. Reakční směs velmi zhoustne a vytvoří se sraženina. Přidá se další tetrahydrofuran (80 ml) a dimethylformamid (50 ml). Po 7 hodinách se přidá další aminová sůl (2 g) a Ν,Νdiisopropylethylamin (3 ml) a směs se míchá dalších 18 hodin. Reakční směs se rozdělí mezi nasycený chlorid amonný (100 ml) a ethylacetát (i 10 ml). Organická vrstva se postupně promyje 1N HC1 (100 ml) a NaHCO-j (100 ml). Organická vrstva se suší (MgSO^), filtruje a zahustí. Získaný olej se čistí sloupcovou chromátografií na silikagelu za eluce gradientem do 50 % ethylacetátu v hexanech. Získá se sloučenina A (1 1 ,2 g, 47 %).

MS (Cl), (M+K)⁺=320.

TLC: Rf 0,,11 (50%, ethylacetát v hexanech, bizualizováno UV a molybdenanem cerytoamonným).

(R)-/1-/1-(2-Kyanoethyl)-1 H-tetrazol-5-yI/-3-(methylthio)propyl/karbamová' kyselina, 1,1-dímethylester

K roztoku sloučeniny A (10 g, 33,2 mmol) v tetrahydrofuranu (3OO ml) při teplotě místnosti pod argonem se postupně přidá trifenylfosfin (18 g, 69,8 mmol), diethylazodikarboxylát (10,99 ml, 69,8 mmol) a azidotrimethylsilan (9,26 ml, 69,8 mmol). Po 72 hodinách se těkavé látky odstraní na rotační odparce za užití bezpečnostního šťítur Zbytek se zpracuje s

-86dusičnanem ceričitoamonným (3 g v 50 ml). Sraženina se tvoří spolu s vývojem plynu·. Přidá se voda (50 ml) a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (100 ml). Organická vrstva se suší (MgSO^), filtruje a zahustí ve vakuu. Čištěním zbytku rychlou sloupcovou chromatografií na silikagelu (50 x 300 mm), elucí 40% ethylacetátem v hexanech se získá krystalická (dlouhé jehlice) sloučenina B (7,2 g, 66 %).

MS (CI):(M+H)⁺ 327TLO: Rf 0,3 (50%, ethylacetát v hexanech, vizualizace UV a molybdenamem ceričitoamonným).

C. (R*)-2-/N-/(1 ,1-Dimethylethoxy )karbonyl/-L-val,yl/1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinkarboxylová' kyselina

K roztoku sloučeniny 18A (3,1 g, 6,66 mmol) v 50 ml methanolů se přidá 150 mg Pd(OR)₂ (20% na uhlí). Směs se míchá pod R₂ atmosférou (balónek) 1,5 hodiny. Směs se zfiltruje přes celit a filtrát se zahustí ve vakuu, získá se sloučenina O (2,3 g, 92 %) jako bílá pevná látka, t.t. 89 °C.

MS:(M+H)⁺ 377.

D. (R*,R*)-2-/lT-/(1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/-L-valyl/-1 ,2,

3,4-tetrah.ydro-N-/3- (methyl thio )-1-/1 -(2-kyanoethyl )1 H-tetrazol-5-yl/propyl/-3-isochinolinkarboxamid’

Bezvodý HC1 (4H v dioxanu, 1 ml, 4 mmol) a triethylsilan (0,3 ml) se přidají k pevné sloučenině B (64 mg, 0,2 mmol) při teplotě místnosti pod argonemi. Po míchání přes noc; (16 hodin) se vytvoří bílá sraženina. Dioxanový supernatant se odstraní pipetou a pevná látka se trituruje s etherem a sušením ve vakuu se získá pevná látka (120 mg). (MS: (M+H)⁺ 227⁺).

Tento materiál (120 mg) se rozpustí v dichlormethanu

-87(1,5 ml) při teplotě místnosti pod argonem a postupně se zpracuje se sloučeninou C (90 mg, 0,25 mmol), N-methylmorfolinem (0,08 ml, 0,75 mmol) a benzotriazol-1-yloxy-tris(dimethylamino)fosfonium-hexafluorofosfátenv (105 mg, 0,25 mmol). Po míchání přes noc: (16 hodin) áe směs zředí ethylacetátem (5 ml) a promyje se 1N HC1, nasyceným RaHCO^ a solankou (vždy 5 ml). Organická vrstva se suší (MgSQ^), filtruje a zahuštěním se získá olej. Čištěním rychlou sloupcovoi chromatografií na silikagelu za eluce 40 % ethylacetátu v; hexanech se získá sloučenina D (101 mg, 85 %).

MS: (Cl) (M+H)⁺= 585⁺.

TLC (R^ 0,67' (80 %, ethylacetát v hexanech, vizualizováno UV a molybdenanem ceričitaamonným).

E. (R*,R*)-2-/N-/3-/(Trifenylmethyl)thio/-1 -oxopropyl/-Lvalyl/-1,2,3,4-tetrahydro-N-/3-(methylthio)-1-/1-(2kyanoethyl)-1H-tetrazol-5-yl/propyl/-3-isochinolinkarboxamid

Sloučenina E se připraví ze sloučeniny D za použiti dvoustupňového postupu; popsaného výše pro přípravu sloučeniny D ze sloučeniny 8' s tím rozdílem, že ve druhém stupni se místo sloučeniny C použije S-trityl-3-merkaptopropionová kyselina.

TLC R^ 0,48 (80% ethylacetát v hexanech vizualizováno molybdenanem ceričitoamonným).

MS (FAB) (M+H?)⁺= 815.

F. (R*,R*)-2-/N-/3-/(Trifenylme t hy 1) t h i o /-1 - o x o p r o py 1 /- Lval,yl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-N-/3-(methylthio)-1- (1 lite trazol-5-yl)propyl/-3-isochinolinkarboxamidi

K roztoku sloučeniny E (180 mg, 0,22 mmol) v tetrp:hydrofuranu (1,5 ml) při teplotě místnosti pod argonem se při

-88dá roztok LiOH' (0,44 al, 0,44 mmol). Pro získání homogennní směsi se přidá methanol (0,4 ml) a roztokem se 2 minuty probublává argon. Po 1 hodině se směs zředí 1N HC1 (5 ml) a extrahuje se ethylacetátem (2 x 10 ml). Organické extrakty se spojí, suěí (MgSO^) a zahuštěním ve vakuu se získá sloučenina F (160 mg, 95%) jako pěnovité pevná látka.

TLC: R_f 0,05 (70% ethylacetát v hexanech, vizualizovúno molybdenanem ceričitoamonným).

MS (FAB) (M+H)⁺ = 762.

G'. (R*,R^x )-2-/N-(3-Merkapto-1-oxopropyl )-L-valyl/-1 ,2,3,4tetrahydro-N-/3-(methylthio)-1-(1H-tetrazol-5-yl)propyl/-3-isochinolinkarboxamid (Všechna rozpouštědla použitá v přípravě sloučeniny G ze sloučeniny F, s výjimkou trifluoroctové kyselina, byla zbavena kyslíku probubléním argonem před použitím).

K roztoku sloučeniny F (150 mg, 0,2 mmol) v dichlormeth^nu (2 ml) při teplotě místnosti pod argonem se přidá kyselina trifluoroctová (0,1 ml). Po 5 min se přikape voda (5 ml) a potom nasycený NaHCO^ (do pH=8) a potom se znovu okyselí 1N HC1 (1 ml). Výsledná směs se extrahuje chloroformem (2 x 10 ml). Organické extrakty se spojí, suší (MgSO^), filtrují a zahustí. Zbytek se čistí preparativní HPLC (YMC,. S10, C18, 30 x 500 mm sloupec.·) za elace 50-90% vodným methanolem. Vhodné frakce se spojí. Methanol se odstraní na rotační odparce a vodný roztok se lyofilizuje» Získá se titulní sloučenina..

t..t. 102 °C.

TLC: R_f 0,49 (CHClj:methanol:octová kyselina, 9:1:0,1, vizualizace molybdenanem· ceričito amonným)

MS' (FAB)(M+H)⁺= 520

-89Elementární analýza pro ^23¾^7°3^2‘°*^ %° vypočteno 52,07 % G, 6,50 % B, 18,48 % B nalezeno 52,07% C, 5,38%' B, 18,24 % N.

Příklad 28 ^12^,5^-17-//2-/14- (2-Amino-3-merlcaptopropyl)-N-methyl-Lvalyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin

A. (iť* )-N-//2-/N-/( 1,1 -Dimethylethoxy )karbonyI/-N-tnethylL-valyl/-1 ,2,3,4-1 e trahydr o-3-is ochinoliny1/kar bonyl/D-nethionin, methylester

Sloučenina A (čirý oleji, 3,θ g, 99 %) se připraví ze sloučeniny 1A (2,0 gr, 4,73 mmol) použitím dvoustupňového postupu popsanéhcc pro přípravu sloučeniny 8A s tím rozdílem že se ve druhém stupni použije místo N-Fmoc-N-methyl-L-balinu N-terc.butyloxykarbonyl-N-methyl-L-valin (1,80 g, 7,78 mmol). MS: (M+H)⁺ 536.

-50B. (R%S*)-W/2-/fr-/2-//(l,1-Dimethylethoxy)karbony1/amiao/-3-/(trif eny Imethyl) t hio/pro pyl/-N-ae thy 1-lávaly 1/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/L-methionin, aethylester

Sloučenina B (čirý olej', 200 mg, 5%) se připraví’ ze slou čeniny A (2,5 g, 4,7J mmol) použitím; dvoustupňového postupu analogického postupu popsanému pro přípravu sloučeniny 7B, s následujícími modifikacemi: ve sdruhém stupni se použijesloučenina 1F (2,2 g^r, 4,92 mmol) místo sloučeniny 6B a použije se pouze jeden ekvitralent kyanoborohydridu sodného (298 mg, 4,73 mmol).

MS: (M+K)⁺ 867.

C. (R^?ířS*)-N-//2-/N'-(2-Amino.-3-merkaptopropyl)-N-methylL-valyl/-1,2,3 ,.4- tetrahydro-3-isochÍnolinyl/karbonyl/-L-methionin

Sloučenina C; (26. mg,. 22%) se připraví ze sloučeniny B (200 mg*, 0,231 mmol) použitím postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 1ΪΓ ze sloučeniny 1G. t.t. 59 až 60 °C /Ck/j⁵» -12,0® (o=0,1, CH₃OH)

MS^-: (M+H9* 511 ⁺ .

¹H-NMR (CD₃OD, 270 MHz?) (ppm) 7,18 (4H,m), 4,43 (1H,m), 4,28 (lH’,m), 3,55 (1ff,m), 3,15 (4H, δ. a), 2,69 (2H, a), 2,48 (2H; a;), 2,40 dH,m), 2,27 (311,01), 2,20 (2H,m), 1,95 (3H, ď), 1,85 (3H,a), 0,91 (6H, a).

Příklad 29 (R* R^x, S* )-N'-//2-/2-/2-/(2-Amino-3-merkaptopropyl)amino/3-aethylbutyl/-1,2,3,4, tetrahydro-3-isochlnolinyI/karbonyl/L- aethionin

A. (R^jR³*,S*)-N-//2-/2-//2-//( 1,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/-3-/(trifenylmethyl) thicr/propyl/amino/-3-methylbutyl/-1 ,2,3_>4-tetΓahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin, methylester·

Sloučenina A (1,2 g, 32 %) se připraví ze sloučeniny 5C (2,30 g, 4,54 mmol) použitím dvoustupňového postupu· analogického postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 73 s následujícími modifikacemi: ve druhém stupni se použije sloučenina 1F (2,2 g, 4,92 mmol) místo sloučeniny 6B, a použij© se pouze jeden ekvivalent: kyanoborohydridu sodného (285 mg, 4,54 mmol).

MS: (M+H)⁺ 839·

B. (R*,,Κ*,S*)-®-//2-/2-/(2-Amino-3-merkaptopropyI)amIno/3-me thyl butyl/-1,2,3> 4-te trahydrcl·-3-isochinolinyl/kar bony l/-l*-methi onin

Sloučenina B (50% výtěžek) se připraví ze sloučeniny

A (1^2 g, 1,43 mmol) použitím dvoustupňového postupu popsaného pro přípravu: sloučeniny 1H ze sloučeniny 1G.

t.t. 72 až 73 °C /0(/25^ ._3Ojo° (c= 0,18, CH₃OH)

MS: (M+H)⁺ 481

-92¹H-NMR (CDjOD, 270 MHz:) £ (ppm) 7,28 (4H, m), 4,68 (1H, m), 4,19 (1H, m),. 3,66 (1H, m:), 3,42 (2H, m) „ 3,24 (2H, m),

3.,03. (2H, a), 2,94 (2H, d, J= 4,28 Hz), 2,60 (2H, m), 2,20 (2H, o:), 2,10 (3H,. s), 2,07 (3H, m), 1,01 (3H„ ď, J=7,03 Hs) 0,93 (3H,. ď, 7,.04 Hz).

Příklad 30 (R* )-N-//l -/H- (L-Cys teinyl)-L-valyl/-2,3-dihydro-1H-indol2-yl/karbonyl/-L-me thi onin

A. (R*)-1-/&-/(1 ,1-Dimethyl’e thoxy) kar bony 1/-L-vály 1/-2,3dihydro-1H-indol-2-karboxylová kyselina, ethylester

Bis (2-oxo-3.-oxazolidinyl)f osf orný chlorid* (2,54 g·, 10 mmol), (S)-2,3-dihydro-1H-indol-2_karboxylová kyselina -ethyl esteir (1,15 g, 5 mmol) /viz Stanton a spol., J.Med. Chem.,

26, 1267 (1983,)/ a N-methylmorfolin (2,2 ml, 20,Q mmol) se přidají k roztoku N-terc. butyl oxykar bony 1-L-valinu (2,17 g, 10 mmol) v dichlormethanu (30 ml.), obsahujícím dimethylformamicB (1 ml) při 0 °C pod argonem. Reakční směs se nechá ohřát na 5 °C během 2 hodin a míchá se přes no® (20 hodin). Reakční směs se promyje 1N HC1 (30 ml)_ř a. 10% LÍCI (30 ml), suší se (MgSO₄₎, futruje a zahustí. Získaný olej se

-93čistí sloupcovou chromatografíí na silikagelu za použití eluce 10% acetonem v hexanech, rozpustí se v etheru (30 ml) a promyje se 1N HC1 (3 x 20 ml). Organická vrstva se zahustí ve vakuu¹ a získá se sloučenina A (880 mg, 47%) jako olej.

MS (Cl), (M+H)⁺ = 391⁺*

TLC: R_f 0,6 (20%, ethylacetát v CHClp vizualizace UV a molybdenanem ceričitoamonraým).

Β. (R^x)-2-/N-/(1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/-L-valy1/2.3- dihydro-1H-indol-2-ylkarboxylová kyselina

Sloučenina B (650 mg, 83 %) se připraví ze sloučeniny A (840 mg, 2,15 mmol) použitím postupu popsaného pro přípravu sloučeniny 18D ze sloučeniny 18C.

MS: (Cl) (M+H)⁺ = 363⁺.

C. (R*)-N-//1-/N-/(1 „1-Dimethylethoxy )karbonyl/-L-vályV2.3- dihydro-1H-indol-2-yl/karbonyl/-L-methionin, 1,1-dime thyle thy les terr

Sloučenina C (340 mg, 74 %) se připraví ze sloučeniny B (300 mg-, 0,83 mmol) použitím postupu analogického postupu popsanému pro přípravu sloučeniny 23A s následujícími modifikacemi: L·- methionin-terc.butylester-hydrochlorid (242 mg, 1,0 mmol) se použije místu hydrochloridu terč.butylesteru L-glutaminu a produkt se čistí sloupcovou ohromatografii za eluce 30% ethylacetátem v hexanech.

t.t. 79 až 81 °G

MS(Cl) (M+H)⁺ - 550⁺.

TLC R_f 0,2 (30% ethylacetát v hexanech, vizualizace UV, molyb denanem ceričitoamonným).

D. (R*)-N-//1-(L-ValyI)-2,3-dihydro-1 H'-indol-2-yl/karbonyl/L-methionin, 1,1-dimethylethylester

-94K roztoku sloučeniny C (130 mg, 0,24 mmol) v kyselině mravenčí (98%, θ,5 ml) při teplotě místnosti pod argonem se přidá triethylsilan (0,08 ml) a postup reakce se sleduje pomocí TLC analýzy reakčni směsi. Po 9 hodinách se ke směsi přidá nasycený hydrogenuhličitan sodný (5 ml) a extrahuje se CHClj (2 x 5 ml). Organické extrakty se spojí', siší se (MgSO^), filtruje a zahuštěním se získá sloučenina D (100 mg, 92 %).

MS (Cl) (M+H)⁺ = 450⁺.

E. (R³*)—N—//1 —/N—ZIT—/T( 1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/-S-(trif enylmethyl )-Ij-c.ysteinyl/-L-valyl/~2,3-dihydro-1 H-indol2-yi/karbonyl/-L-methionin, 1,1-dimethylethylester

X roztoku sloučeniny D (100 mg, 0,22 mmol) v dichlormethanu (1 ml) při 0 °C pod argonem: se postupně přidá N-terc. butyloxykarbonyl-S-trityl-L-cystein (122 mg, 0,26 mmol), Nmethylmorfolin (0,33 ml, 0,3 mmol) a benzotriazol-1-yloxy-tris (dimethylamino)fosfonium-hexafluorofosfát (115 mg, 0,26 mmol). Reakčni směs se nechá ohřát na teplotu místnosti během 2 hodin a potom se míchá přes noc (16 hodin). Reakčni směs se pak zředí chloroformem·. (5 ml) a promyje se postupně 1N HCl, nasyceným NaHCO^ a solankou (vždy 5 ml). Čištěním rychlou sloupcovou ohromatografií na silikagelu za eluce 30% ethylacetátem v hexanech se získá sloučenina E (160 mg, 81 %).

TLC R_f 0,11 (70% ethylacetát v hexanech, vizualizace UV, molybdenan ceričitoamonný).

MS (FA3) (M+H)⁺= 895⁺.

F. (R^K )-N-//1-/N-(L-Cys teinyl )-L-val,yi/-2,3-dihydr o-1 Hindol-2-yl/karbonyl/-L-methionin

K roztoku sloučeniny E (140 mg, 0,16 mmol) v dlchlormethaau (1,5 ml) při teplotě místnosti pod argonem se přidá

-95triethylsilan. (0,2 ml, 1,25 mmol) a kyselina trifluoroctová (0,5 ml). Po 2 hodinách se těkavé látky odstraní odpařením na rotační odparce a zbytek se Čistí preparativní HPLC (C-18', S10, 30 x 500 mm; kolona) za eluce lineárním gradientem 10 až 90% vodného methanolu, obsahujícího 0,1 % kyseliny trifluoroctové. Vhodné frakce se spojí, methanol se odstraní na rotační odparce a vodný roztok se lyofllizuje, získá se titulní sloučenina (56 mg, 70 %).

t.t. 72 až 74 °G

MS: (M+H)⁺= 497* /oC/_D = -49,-8° (c= 0,49, Cff₃0H)

HPLC: (C-18', S3, 6 x 150 mm; kolona), 1,.5 ml/min, 220 nm: 10-90% vodný methanol, obsahující 0,2 % H^PO^, RT= 18,06 min.

Elementární analýza pr® ^23^33^7^3^2^^^2^ vypočteno 52,07 % C, 6,50 % H, 18,48 % N nalezeno 52,07% C, 6,38% H, 18,24% H·

Příklad 31 (S* R*)-N-//2-/lT- (2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/-1,2,

3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester, trifluoracetátová sůl (1:2)

SCH₃

-96A. (s*jR*)-N-//?-/lT-(2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/-1 ,2

3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester, trifluoracetátová sůl (1 :2)

K roztoku 180 mg (0,211 mmol) sloučeniny 1G ve 3 ml dichlormethanu se přidá 0,20 ml (1,27 mmol) triethylsilanu. Výsledný roztok se ochladí na O °c a probublá argonem.

Přidá se 1 ml kyseliny trifluoroctové. Směs se ohřeje na teplotu místnosti a míchá se 2 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se trituruje s hexanem. Zbytek se čistí pomocí HPLC (YMC S-10 ODS' 30 x 500 mm, 220 nm, 28 ml/min, 40-90 % vodný methanol s 0,1% kyseliny trifluoroctové). Vhodné frakce se zahustí ve vakuu a lyofilizací se získá titulní sloučenina (70 mg) jako bílý lyofilizát. t-t. 56 až 68 °C

MS: (M+H)⁺ 511

Příklad 32 /3S-/2-/R*(S*)/, 3R* (R*)//-2-/^- (2-Amino-3-merkaptopropyl)L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-N-(tetrahydro-2-oxo-3-furanyl/3-isochinolinkarboxamiď, trifluoracetátová (1:2) sůl

-97A. (S^M )-N-/2-//( 1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/-3-/( trif eny lme thyl) thio./propyl/-L-valin, meth.ylester

Kyselina octová (2,6 ml',44 mmol) se přidá k roztoku sloučeniny 1F (20 g, 44,7 mmol) a hydrochloridu methylesteru L-valinu (9,0 g, 53,7 mmol) v methanolu (50 ml). Směs se míchá při teplotě místnosti 30 minut. Přikape se kyanoborohyrid sodný (2,8 g, 44,7 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) a směs se míchá při teplotě místností 2 hodiny. Reakce se přeruší hydrogenuhličitanem sodným (3,75 &, 44,7 mmol) ve vodě (20 ml) a zahustí se za vakua. Zbytek se rozpustí v 10% hydrogenuhličitanu sodném (10 ml) a extrahuje se dichlormethanem (3 x 100 ml). Spojené organické extrakty se suší (síran hořečnatý), filtrují a zahustí se za vakua. Zbytek se čisti rychlou chromatografií (eluce 9:1 hexan/aceton) a získá se sloučenina A (17,7 g, 70 %).

TLCíRjp 0,25 (8:1 hexaníaceton, vizualizace UV).

MS: (M+H)⁺ 563

IR: (Cff₂Cl₂ film) 1491, 1715 cm“¹.

B. (S*)-N-/2-//(1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/-3-/(trif eny lme thyl) thio/prop.yl/-N-/(f enylmethoxy )karbonyl/-Lvalin, methylester

Benzylchlorformiát (asi 90%, 3,2 ml, 20,3 mmol) se přidá k roztoku sloučeniny $ (3,θ g, 6,76 mmol) a diisopropylethylaminu (3,θ ml, 21,6* mmol) v dichlormethanu (20 ml) při 0 °C. Směs se ohřeje na teplotu místnosti a míchá se 16 hodin. Reakční směs se zředí dichlormethanem’ (100 ml) a postupně se promyje IN kyselinou chlorovodíkovou (2 x 100 ml) a 10% hydrogenuhličitanem sodným (2 x 100 ml). Organická vrstva se suší (síran hořečnatý), filtruje a zahustí ve vakuuj. Zbytek se čisti rychlou chromatografií (eluce 8:1 hexan/aceton) a získá se sloučenina B (4,3 g, 92 %) jako bílá pevná látka.

-98t..t. 48 až 52 °C

TLC: R_f 0,35 (4:1 hexan:aceton, vizualizace UT).

C. (S*)-N-/2-//(1,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/-3-/(Trifenylmethyl)thio/propyl/-N-/(fenylmethoxy)karbonyl/-Lvalin

Hydroxid¹ lithný (2N, 1,5 ml, 3,0 mmol) se přikape k roztoku sloučeniny B (0,696 g, 1,0 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml) a methanolu (3,5 ml). Homogenní reakční směs se ohřeje na teplotu místnosti a míchá se 16 hodin. Směs se zahustí za vakua , zředí 1N kyselinou chlorovodíkovou (30 ml) a extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se suší (síran hořečnatý), filtrují a zahusti za vakua. Získá se sloučenina C (0,68 g,. 100 %).

t..t. 66 až 72 °C

TLC: 0,61 (9:1:0,05 chlorof ormi:methanol :kyselina octová, vizualizace UT)

MS (M-H)“ 681

D.. /3S-/2/R*(S*)/,3Η^χ//-2-/Ν·-/2-//( 1 ,1 -Dimethylethoxy)karbonyl/amino/-3-/( trif eny lme thyl) thio/prop.yl/-N-/(f enylmethoxy)karbonyl/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolin-karboxylová kyselina, methylester

Diisopropylamin (19,7 ml, 113 mmol) se přidá k roztoku sloučeniny C (24,15 g', 35,4 mmol), hydrochloridu methylesteru kyseliny (S)-1,2,3,4-tetrahydroisochinolini-3-karboxylové (9,66 g, 42,5 mmol) a benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino )fosfonium-hexafluorofosfátui -hydrochloridu (10,8 g, 42,5’ mmol) v dichlormethanu (200 ml). Směs se míchá při 0 ®C po 16 hodin. Reakce se přeruší 1N kyselinou chlorovodíkovou (300 ml) a extrahuje.se dichlormethanem: (3 x 100 ml). Spojené organické extrakty se promyjí 10% hydrogenuhličitanem sodným (100 ml), suší, filtrují a zahustí za va-99kua. Zbytek se čistí rychlou chromatografií (eluce 4:1 hexan: aceton) a získá se sloučenina D (21,8 g, 72 %) jako bílá pevná látka.

t.t. 66 až 70 °C

TLC: R^. 0,28 (4:1 hexan:aceton, vizualizace UV)

MS (M+H)⁺ 856'

E. /3S-/2/R*’(S*)/,3R*//-2-/N^>-/2-//(1 ,1-Dimethylethoxy)karbon.yl/amino/-3-/( t rif enylmethyl) thio/pr opyl/-N-/ (fenylme thoxy)karbonyl/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinkarboxylová kyselitia

Sloučenina E se připraví za použití sloučeniny D (12,5 g, 14,6 mmol) postupem popsaným v příkladu 32C. Sloučenina E (12,3 100 %) se připraví jako bílá pevná látka,

t.t. 88 až 94 °C

TLC: R^ 0,52 (9:1 :0,05 chloroform:methanol:k,yselina octová, vizualizace UV)

MS: (M-ff)“ 840

F. /3S-/2/R*)(S*)/,3R*(R*)//-2-/tf-/2-//(1,1-Dimethylethoxy’)karbonyl/amino/-3-/(fcrifen,ylmethyl)thio/propyl/-N/(fenylmethoxy)karbonyl/-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-ΓΓ(tetrahydro-2-oxo-3-furanyl)-3-isochinolikarboxamid;

Diisopropylethylamin (0,651 ml, 3,74 mmol) se přidá k roztoku sloučeniny E (1,5 g, 1,78 mmoě), hydrochloridu laktonu L-homoserinu (0,245 g, 1,78 mmol) a benzotriazol-1-yloxy tris (dimethylamino )f osf onium-hexafluorofosfátu (0,789 g, 1,78 mmol) v acetonitrilu·' (3 ml) a dimethylformamidu (1 ml). Směs se pak míchá při teplotě místnosti 16 hodin. Reakce se přeruší 1N kyselinou chlorovodíkovou (50 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 75 ml). Spojené organické extrakty se promyjí 10% chloridem lithným (2 x 50 ml), suší,filtrují

-100a zahustí za vakua. Zbytek se čistí rychlou chromatografií (eluce 2:1 hexan:aceton)a získá se sloučenina F (1,45 g, 88 %) jako guma.

TLC: Rje. 0,61 (1:1 hexan:aceton, vizualizace UV).

G‘. /3S-/2/R* (S*)/,3R^X (R*)//-2-/N- (2-Amino-3-merkaptopropyl )L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-N-(tetrahydro-2-oxo-3-furanyl)-3-isochinolinkarboxamid, trifluoracetátová (1:2) sůl

Kyselina trifluoroctová (4,3 ml, 55,8 mmol) se přidá k roztoku sloučeniny F (0,8 g, 0,866 mmol) v dichlormethanu (9 ml) a triethylsilanu (1,4 ml, 8,66 mmol). Výsledný roztok se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu. Reakční směs se zahustí ve vakuu a zbytek se trituruje? s hexanem: (3 x 10 ml). Hexanové vrstva se odlaží. Ve zvláštní bance se zpracuje kyselina trifluoroctová s thioanisolem (1 ml, 8,5 mmol) a 1 ,2-ethandithiolem·. (0,726 mi, 8,66 mmol) při 0 °C. Tento roztok se přidá k triturovanému zbytku a dále se po kapkách přidá bromtrimethylsilan (1,1 ml, 4,3 mmol). Roztok se míchá při 0 ^aC 1 hodinu. Reakční směs se zpracuje s diethyletherero (40 ml) a výsledná sraženina se odstředí. Super natant se odstraní a odloží a pevná látka se promyje a odstředí s diethyletherem· (3 x 40 ml), ethylacetátem (2 x 40 ml) a diethyletherem· (1 x 40 ml). Pevná látka se čistí preparativní HPLC (YHC S-10 ODS 30 x 500 mmi, 220 nm, 35 ml/min, 10-90% voďný methanol s 0,1 % kyseliny trifluoroctová - gradient). Vhodné frakce se zahustí za vakua při teplotě místnosti. a zbytek se lyofilizuje, získá se titulní sloučenina (0,13 g, 26 %).

t.t. 95 - 107 °C

TLC: R_f - 0_r68 (6:3:1 n-propanol/hydroxid amonný:voda, vizualizace síranem ceričitoamonným/molybdenanem amonným, kyselinou sírovou/vodou)

MS: (M+H)⁺ 449 volná báze?

-101XR: (KBr) 1678’, 1773, 2974 cm¹

Elementární analýza pro ^G26^H34^N4^F6^S1°6- 2,56, H>,O vypočteno 45,21 % C, 5,71 % H„ 8,11 % JF, 4,64 % S nalezeno 45,26 % C, 5,25 % JT, 8,06 % N, 4,83 % S (ODjOD): 1,06-1,13 (m, 6H), 2,11-2,46 (m, 5H), 2,85 4 2,89 (m, 3H), 3,12-3,20 (m, 2ΓΓ), 3.,50-3,80 (m, 1H), 4,254,91 (m, 6H), 7,28 (s, 4R) /o^/'_D= -6,7°, c= 0,76 (methanol)

Příklad 33.

(S*,R*)-rF-//2-/N-(2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/1 ,.2,3ί, 4-tetrahydro-3“isochinolinyl/karbonyl/-N’-hydroxy-Lmeťhioninamid, trifluoracetátová (1:2) sůl

SCH₃

A* (S*,R*)-NU//2-/N-/2-//(1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/3-/(trifenyImethyl)thia/propyl/-N-/(fenylmethoxy)karbonyl/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/kant>onyl/ L-methionin, methylester

Sloučenina A (707 mg, 60% výtěžek) se připraví za po-102užití sloučeniny 32E (1,00 g, 1,19 mmol) a hydrochloridu methylesteru methioninu; (237 mg, 1,19 mmol) způsobem popsaným v příkladu 32F.

t.t. 77 až 79 °G

TLC: Rp= 0,72 (1:1 hexan:ethylacetát, vizualizováno kyselinou fosfomolybdenovou)

MS: (M+H') ⁺ 987

9. (S^B\ R*^)-N^-//2-/ΝΓ-//( 1 ,1 -Dimethylethoxylkarbonyl/amino/3-r/(trifenylmethyl)thio/propyl/-N-/(fenylmethoxy)karbonyl/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3“isochinolinyl/karbonyl'/-N- (tetrahydropy ran-2-y loxy )-L-methioninamid

K roztoku sloučeniny A (600 mg, 0,608 mmol) v tetrahydrofuranu: (3 ml) při 0 °C se přidá 1N hydroxid lithný (0,912 ml, 0,912 mmol). Po 2 hodinách míchání se přidá 1N kyselina chlorovodíková (0,912 ml, 0,912 mmol) a reakční směs se zahustí na 1 ml. Směs se zředí dichlormethanem (100 ml) a 1N kyselinou chlorovodíkovou (10 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje díchlormethanem (i x 100 ml) a ethylacetátem (100 ml), suší, filtruje a zahustí. Získá se surová kyselina (500 mg, 85% výtěžek). HPLC ukazuje směs, obsahující 7:3 poměr požadované kyseliny a odpovídající methioninsulfoxiď. ^ato se použije bez dalšího čištění.

MS: (M+Li)⁺ 979 a (M-H)“ 971 (M+Li)* 997 a (M-H)~ 987

K roztoku výše uvedeného materiálu (500 mg, 0,514 mmol) v dimethylf ormamidu (3 ml) při 0 °C pod¹ dusíkem: se přidá sloučenina 20A (60 mg, 0,514 mmol), diisopropylethylamin (89 ml, 0,514 mol) a benzotriazol-1-yloxytris-(dimethylamina)fosfonium-hexafluorofosfát (227 mg, 0,514 mmol). Po 20 hodinách míchání při O °C se přidá diisopropylethylamin (30 /ul, 0,171 mnrol), sloučenina 20A (20 mg, 0,171 mmol) a benzotriazol1-yloxytris-(dimethylaaino)fosfonium)hexafluorofosfét

-103(45 mg, 0,102 mmol) se přidá k reakci. Po ohřátí na teplotu místnosti a míchání po 4 hodiny se směs zředí ethylacetátem (100 ml), promyje se postupně nasyceným hydrogenuhličitanem· sodným (50 ml), 1% hydrogensíranem draselným (50 ml), a 10% chloridem lithným (3 x 50 ml), suší se;, filtruje a koncentruje ve vakuu. Zbytek, se čistí' na silikagelu (20 ml, eluce hexanem/ethylacetátem 4:1 až 0:1) a získá se sloučenina 3 (300 mg, 54% výtěžek).

t-t. 150 až 151 °’C

TLC: Rjp. = 0,37^; (2:1 hexan/aceton, vizualizowáno fosfomolyfc»denovou kyselinou)

MS’: (M+H) ⁺ 1072

C.. (S*, R* )-N²-//2-/N- (2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-N-hydroxy-Lmethioninamidi, trrifluoracetátová (1:2) sůl

Sloučenina C (57 mg, 33 %) se připraví ze sloučeniny S (250 mg, 0,233 mmol) použitím·' metody popsané v příkladu 32

t.t. 94 až. 97 °C

TLC: R^= 0,14 (chloroforoumethanol roštová kyselina 9:1:0,05, vizuslizováno síranem ceričitoamonným)

MS: (M⁺)⁺ 512

IR: (K3ř) 1676, 1206 cm’¹ /^/_D= -31,5° (c= 0,260, methanol/ ¹ff NMR 400 MHz (CDCl^): 0,92 - 1,23 (o, 6®), 1,72-2,50 (m,

10H?), 2,73-3,21 (my 4H), 3,55 (m, 1H), 4,22-4,72 (m, 5H),

7,26 (m, 4H) ¹³C 100MHz (GDClj): 15,3, 17',9, 18,1, 19,6, 19,9, 25,6, 25,7, 30,6, 30,9, 3.1,1, 32,2, 32,4, 32,6, 33,3, 46,0, 47,6, 48,4, 48,6.., 48,8, 49,0, 49,2, 49,4, 49,7, 51 ,5, 51 ,7, 53,2, 53,5, 57,3, 57,7, 59,1, 65,9, 66,0, 126,9, 127,7, 128,3, 128,6, 128,8, 129,0, 129,3, 129,7, 130,9, 133,6, 134,0, 135,3, 135,4, 170,4, 170,8, 172,4, 173,3, 173,3, 173,5, 173,8

-104Elementární analýza pro. 023^37^5^4³ *1,71 EgQ·^»⁰ CFjCOgH vypočteno 42,09 % C, 5,55 % H, 9,09 % W, 8,32 % S, 14,79 % F nalezena 42,19 % C, 5,20 % H, 8,73 % », 8,35 % S, 15,24 % F

Přiklaď 34 /R- (R³* ,S* )/-N²-//2-/N- (2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-vály 1/1 , 2,3,4-tetrahydra-3-isochÍnolinyl/karbonyl/-L-glutamin, tri fluoracetátová' (1:2) stli

A· (S^x ^^)-1^2-//2-/^-/2-//( 1, 1-Dimethyle thoxy) kar banyl/amin®/ 3-/(trif enylmethyl) thio/propyI/-N-/(fenylmethoxy)karbanyl/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-is ochinolinyX/kacbonyl/ L-glutamin, 1 ,1-dimethylethylesteir

Sloučenina A (1,0 g, 90 % se připraví jako bílá pevná látka použitím sloučeniny 32E (1,0 g, 1,19 mmol) a tero.butyl esteru- L-glutaminu.HCl (0,284 g, 1,19 mmol) metoďou popsanou v příkladu 32F.

t.t. 80 až 86 °C

-105TLC: R^: 0,82 (9:1 chloroform/aethanol, vizualizace UV)

MS': (M+3)⁺ 1026

3. /R- (R*, 3^)/-^-//2-VN- (2.Amino-J-merkapťopropyl )-L-valyl/·

1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-glutamira, trifluoracetátová (1:2) sůl

Titulní sloučenina (0,425 g, 56 %) se připraví jako bílý lyofilizátt použitím sloučeniny A (1,0 g, 0,976 mmol) metodou popsanou v příkladu 32G.

t.t. 65 až 75 °C

TLC: R_f - 0_ř69 (6/3/1 n-propanol/hydroxid amonný/voda_ř vizualizace síranem ceričitoamonným)

MS: (M+3)⁺ 494, volný amin IR: (KBH 1202, 1670', 2567 em“^{1 1}3 (CD-jOD): 1_ř07^ 1,08_r 1,09 (ď, 63; J=7,.6), 1,93 (á mi, 13), 2,12-2,31 (m, 6H), 2,78-3,49 (m, 53),. 4,23, 4,25, 4,38 (á e, 23), 4,64-4,91 (m, 33), 7,22-7,33 (a, 43) /ςς/₀= -21 ,.4® (c= 0>69, methanol)

Přiklaď 35 /S- (R*,S*)/-2-/3- (2-Amino-3-merkaptopropyl )-L-valyl/-1,2,3,.4te£rahydro-N-(tetrahydro-2-oxo-3-thienyl)-3-isochinolinkarboxamiď, trifluoracetátová (2,5) sůl

-106ohlrální *_ls0Berr „_A„ “isomer ”B^W

A. /3S-/2-S*) ,3R^ÍE//-2-/N-//(1 ,1 -Dime thyle thoxy) kar bony 1/amj.no/-3i-/(trif eny lme thyl) thio/propyl/-N-/(fenylmethoxy)karbony1/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-N-(tetrahydro-2-oxo 3-thienyl)-3-isochinolinkarboxamid^í

Sloučenina A (0,62 g, 63 %) se připraví použitím hydrochloridové soli thiolaktonu D,L-homocysteinu’ (0,16 g, 1,04 mmol) a sloučeniny 32E (^w.,88 g, 1,04 mmol) metodou popsanou v příkladu 32F..

TLC: R_f 0,37 (1:1 hexan/ethylacetát), vizualizováno UV,

PMA

MS: /M-H/~939~

3.. /R-(R*,S^m)/-2-/N-(2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-N-(tetrahydro-2-oxo-3-thienyl)-3isochinolinkarboxamid!, trifluoracetátová(2,5) sůl

Titulní sloučenina (0,056 g, 57%) se připraví jako směs isomerů za použití sloučeniny A. (0,40 g, 0,42 mmol) metodou popsanou v příkladu 32G.

(^somer A)

Elementární analýza pro; ^G22^ír32^íí4°3^S2* ^voda· ²,50 kyselina trifluoroctová vypočtena 41,55 % C, 4,90 % H, 7,18 % N nalezeno: 41 ,55 % C, 4,60 % H, 7,18 % N

TLC: R_r 0,5 (9/1/0,1 tnichlormethan/methanol/kyselina octová), vizualizováno UV, PMA

HPLC Rt 13,12 minut (96%), 10-90% vodí# methanol s 0,1 % pufru kyseliny fosforečná* 30 minut gradiente, 1,5 ml/minut, 220 na* C_1g (6,0 x 150 mm) sloupec-107IR: (KBr) 2928, 1684, 1643, 1206, 1140,cm“¹ MS: (M+H)⁺ 46 5⁺ (Isomejr 3 )

Elementární analýza pro CggH^g^O^g .1,40 ff₂O. 2 kyselina trifluoroctová vypočteno.· 42,81 % C, 5,03 % H, 7,56 % N nalezeno 42,64 % C, 4,81 % H, 7,θ5 % H

TLC: R^ 0,4 (6/3/1 n-propanol/hydroxid amonný/vodá, vizuali zováno UV, PMA)

HPLC Rtt 14,0 minut (9%), 10-90%vodný methanol s 0,2% pufru kyseliny fosforečné, 30 minut gradient, 1,5 ml/minutu;,

Cjg, (6,0 x 150 mm) sloupec.

IR (KBrr) 2971, 1682, 1645, 1206, 1136, 723 cm“¹

MS /M+H/⁺ 465⁺

Přiklaď 36 (S*, R* )-N²-//2-/H- (2-Amino-3-merkap topropyl )-L-valyl/1 _J2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyI/-L-asparagin, trifluoracetátová (1 :2) sůl

HS h₂n

O /\ ch₃ ch₃ nh₂ chirální

-108A. (S*,R* )-N²-//2-/N-//(1,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino7-3-/ (trif enylmethyl) thio/propyl/-N-/(f enylme thoxy )karbonyl/-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolin.yl/karbon.yl/-L-asparagín, 1 ,1 -dímethylethylester

Sloučenina A (1,4 g, 93%) se připraví jako bílá pevná látka za použití sloučeniny 32E (1,25 g, ¹,5 mmol) a terč. butylesteru; L-asparaginu (0,282 g, 1,5 mmol) metodou popsanou v příkladu; 32F.

ť.t. 88 až 96 °'C

TLC: R_f - 0,34 (2/1 hexan/aceton, vizualizace UV)

MS: (M+H)⁺ 1012

9. (S*,R* )-N²-//2-/N- (2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-isochinolinyl/karbonyl/-L-asparagin, trifluoracetátová (1 :2) sůl

Titulní sloučenina (0,14 r, 18%) se připraví jako bílý lyofilizétt použitím sloučeniny A (1,14 g, 1,13 mmol) metodou popsanou v příkladu 32G.

t.t. 95 až 110 °C

TLC: R_f= 0,50 (6/3/1 n-propanol/hydroxid amonný/voďa, vizualizace síranem ceričitoamonným)

MS: (M+H)⁺ 480, volný amin IR: (KBfr) 1204, 1674, 3424 cm^{1 1}Ε tfCDjQD) 1,02, 1,04, 1,15 (d, 6E, J= 6,84, 7,27), 1,98 2,20 (S m, 1H), 2,51 až 2,89 (m, 5H), 3,08-3,51 (ιη, 5H), 4,65-4,89 (m, 4H), 7,22- 7,24 (m, 4H) /X/_D= -16,1^a (c= 0,54, methanol)

-109—

Příklad 37’ (S³*, R*) -N-//2-/( 2-Amino-3-iaerkap topropyl )-L-valyl/-1 ,2,3,4tetrahydro-3-isochinoliny1/karbonyl/-L-norleuciii, trifluoracetátová (1:2) sůl.

A. (3^,^)-14-//2-/17-//(1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/3-/(trifenylmethyl)thio/prOpyl/-N-/(fenyImethoxy)karbonyl/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyI/-L-norleucin, methylester

Sloučenina A (1,265 g, 79%) se připraví jako bílá pevná látka za použití sloučeniny 32E (1,39 g, 1,65 mmol), hydrochloridu: methylesteru norleucinu (0,3 g, 1,65 mmol) a benzotriazol-1-yloxytris-(dimethylamino)fosfonium-hexafluorofosfátui (0,73 g_t 1,65 mmol) v acetonitrilu (9 ml) a dimethylf ormarnid ix. (3 ml) metodou popsanou v příkladu 32P. t.t. 58 až 68

TLC: R_f 0,37 (4/1 hexam/acetom, vizualizace UV)

MS·: (M+H)⁺ 969

1103. (S*,R*)-N-//2-/řT-/2-//(l , 1-Dimethylethoxy )karbon.yl/amíno/-3-/( trif enylmethyl )thio/propyl/-N'-/(f eny Imethoxy)karbonyl/-L-valyI/-1, 2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbon.yl/-L-norleucin

Sloučenina B (1,1 g, 98 %) se připraví jako hygroskopická pevná látka použitím sloučeniny A (1,14 g, 1,18 mmol) metodou popsanou v příkladu 32C.

t.t„ 86 až 94 °C

TLC: R^= 0,53 (9/1/0,05 chloroform/kyselina octová, vizualizace síranem ceričitoamonným(molybdenanem smonným/k.yselinou síro#ou/vodo.u)

MS: (M+H)⁺ 955

C. (S*,R* )-N-//2-/(2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl /karbony!/-L-norleucin.·, trifluoracetátová (1:2)sůl

Titulní sloučenina (0,248 g, 33%) se připraví jako· bílý lyofilát použitím sloučeniny B (1 ,0 g, 1,05 mmol) metodou popsanou v příkladu 32G·

t.t. 80 až 90 °C

TLC: R^ 0,69 (6/3/1 n-propanol/hydroxid amonný/vodá, vizualizace síranem ceričitoamonným)

MS': (M+H)⁺ 479, volný amin IR (KBr) 1674 , 3435 cm¹

Elementární analýza pro C₂gH^₀ir^FgS .1,29 H^O vypočteno 46,07 % C, 5,85% H, 7,68 % N, 4,39 % S„ 15,62 % F nalezeno 46',39 % C, 5,82 % H, 7,36 % N, 4,45 % S, 15,53 % F ¹H (CDjOD): 0,83-1,31 (m, 13H), 1,49-1,82 (m, 4H), 2,10, 2,21 (š a·, 1H), 2,75-3,77 (m, 5H), 4,06-4,34 (m, 2ff), 4,51-4,89 (m, 3H), 7,22-7,29 (m, 4ΓΓ).

/qC/_d ⁼ -27,7® (c= 0,43, methanol)

-1 1 1Příklad 38 (S*,R* )-N«-/(2-/(2-/N- (2- Amino-3-merkaptopropyl )-L-valyl/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-/^-(aminosulfonyl)-L-0( -aminomáselná kyselina, trifluoracetátová (2:5) sůl

A. (5)-4-(AmInosulf©nyI)-2-aminamáselná kyselina, methylester, hydrochloriď

Plynná kyselina chlorovodíková se probublávé roztokem kyseliny (S)—4—(aminosulfonyI)-2-amino-máselné (0,50 g, 2,7 mmol) v methanolu (100 ml) při teplotě místnosti. Reakční směs se míchá 13 hodin a zahustí se. Zbytek se trituruje a etherem· a získá se sloučenina A jak© pevná látka (0,55 g,

100 #).

B. (S^3ť^R*)-^-(Aminosulfonyl)-N^r-///2-/N-/2-//(1,1-dimethylethoxy )karbonyl/amino/-3-/( trif eny lme thyl) thio/propyl/N-/ (feny lme thoxy) kar bony l/-L-valy 1/*~1 ,2,3,4-1e trahydro3,-isochinolinyl/karbonyl/-L-y -aminomáselná kyselina, methylester

-112

Sloučenina Β (0,428 g, 68%) se připraví použitím sloučeniny A (0,123 g, 0,61 mmol) a sloučeniny/32E (0,51 g, 0,61 mmol) metoďou popsanou v příkladu 32F.

Elementární analýza pro ^C55^H65^N5^O10^S2²’^{73 H}2° vypočteno 61,77% C, 6,64 % H, 5,55 % W nalezeno 61,72% C, 6,11 % H, 6,52% ří

0. (S*,R*)-^.-(Aminosulfonyl)-N-//2-/N-/2-//(1 ,1-dimeth.yle thoxy) kar bonyl/amino/-3-/(trif enylmethyl )thio/propyl/-N/(fenylme thoxy)karbonyl/-L-vály1/-1,2,3,4-te trahydro-3isochinolin,yl/karbonyl/-L--aminomáselná kyselina

Hydroxid sodný (1ÍT, 0,47 ml, 0,018 g·, 0,47 mmol) se přidá k roztoku sloučeniny B' (01^40 g, 0,39 mmol) v methanolu (2 ml). Po míchání’ po 13 hodin při teplotě místnosti se reakce přeruší 10% kyselinou chlorovodíkovou (10 ml) a ethylacetátem: (20 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2 x 20 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí 10% kyselinou chlorovodíkovou (1 x 10 ml) a solankou (1 x 20 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, zfiltruje a zahustí - získá se kyselina. Produkt se čistí prep HPLC (YMC S-10, ODS, 30 x 500 mm, Cl8 kolona) za eluce: 10-90% vodným methanolem, obsahujícím 0,1% kyseliny trifluoroctové, gradient během 30 minut. Frakce a produktem se zahustí a lyofilizací se získá kyselina sloučenina C (0,065 g).

D. (S*,R*)-řr-/(2-/N’-(2-Amino-3-merkapť.opropyl)-L-valyl/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinylAarbonyl/-pí_k- (aminosulfonyl)-L- -aminomáselná kyselina, trifluoracetátová (2:5) sůl

Titulní, sloučenina (0,.0329 g, 63%) se připraví použitím sloučeniny C (0,100 g, 0,095 mmol) metodou popsanou v-příkladu 32G.

-113Elementární analýza pro ^22^35^5^^2*θ’'?^ H₂0. ²’^ ^TFA vypočteno 39,16 % C, 4,75 % Η, B,46 % Př nalezenu 39,15 % C, 5,00 % R, 8,36 % Př

Rf= 0,6 (6/3/1 n-propanol/hydroxld amonný/voda), vizuallzováno UV, PMA

HPLC Rt 11,05· minut <97%), 10-90 % vodný methanol s 0,2 % pufru kyseliny fosforečná, 30 minut gradient, 1,5 ml/min, 220 nnr, (6,0 x 150 mař.) kolona

IR (KBp) 3439, 1678, 1653, 1437, 1206, 1142, 723- cm“¹ MS: /M+H)⁺ 530⁺ /»</p=: -16,3° (c= 0,19, methanol)

Příklad 39 (S^x, R* )-PT-//2-/PT- (2-Amino-3-merkap;topropyl )-L-valyl/1 ,2,3_J,4-tetrahydro-3-isochinolinylAarbonyl/-L-glutamová kyselina, triflíuoracetátová sůl

A. L-Glutamová kyselina, 1,1-dimethylethylesten·

Vodný hydrogenuhličitan sodný (10%, 150 ml) se přidá k suspenzi, dicyklohexylaminové solí 1,1-dimethylethylesteru

-114kyseliny N-/(fenylmethoxy)karbonyl/-L-glutamové (2,3 g, 4,43 mmol) v etheru^- (50 ml). Vodná vrstva se okyselí 3N kyselinou chlorovodíkovou, (pHs2) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se zahustí za vakua. Zbytek se rozpustí' v methanolu (10 ml), zpracuje s 10% hydroxidem paladia/C (150 mg-) a míchá se poď atmosférou; vodíku při teplotě místnosti 16 hodin. Reakční směs se zfiltruje a filtrát se zahustí za vakua, získá se sloučenina A (0,700 g, 78%), která se použije bez dalšího čištění. MS: (M+H)⁺ 204 ¹H (CD-jOD): 1,52 (s, 9H), 2,00-2,43 (m, 2H), 2,41 (t, 2H,

J= 6,41), 3,87-3,90 (m, 1H)

Bu (s*,R*)-N-//2-/rr-/2-//(1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/3-/( trif enylmethyl.) thio/pr opy 1/-N-/(fenylmethoxy)karbony!/-!·- vály 1/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-glutamová kyselina, 1,1-dimethylethylester

Hydrochlorid' 1 -(3-dimethylaminopropyl )-3-eth.ylkarbodiimidu (0,228 g, 1,19 mmol) se přidá k roztoku- sloučeniny 32E (1,0 g, 1,19 mmol) a N-hydroxysukcinimidu (0,137 g, 1,19 mmol) v dimethylformamidu (10 ml) a míchá se 1 hodinu při 0 °C. Přidá se hydrogenuhličitan sodný (0,084 g, 1,0 mmol) ke sloučenině A (0,201 g, 1,0 mmol) ve vodě (1 ml) a roztok se přidá k aktivovanému esteru. Směs se pak míchá při teplotě místnosti 16 hodin. Reakce se přeruší 1N kyselinou chlorovodíkovou (50 ml), a extrahuje se ethylacetátem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí 10% chloridem lithným (3 x 100 ml), suší (síran hořečnatý), filtrují a zahustí za vakua. Zbytek se čistí rychlou chromatografií (eluce 1/1 hexan/aceton) a získá se sloučenina B (0,55 g, 54 %) jako bílá pevná látka.

t.t. 78 až 88 °C

TLC: R_f 0,68 (1/1 hexan/aceton, vizualizace- UV)

-115MS: (M+H)⁺ 1027

C. (S^x, R* J-N-//2-/N-(2-Amino-l-merkaptopropyl )-L-valyl/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/-karbonyl/-L-glutamová kyselina, trifluoracetátová sůl

Titulní sloučenina (0,123 g, 35%) se připraví použitím sloučeniny B' (0,5 g, 0,487 mmol) metodou popsanou v příkladu; 32G.

t.t. 115 ažl 1 25 °C

TLC: Rf = 0,40 (6/3/1 n-propanol/hydroxid amonný/voda, vizualizace síranem ceričitoamonným)

MS: (M+H)⁺ 495, volný amin IR (KBr) 1431, 1672, 2976, 3428 cm’¹

Elementární analýza pro ^23^34^4θδ⁸ . 1,4 í^O . 1,8 TFA vypočtena 44,06 % C, 5,37 % H, 7^73 % Ν', 4,42 % S, 14,15 % F nalezena 44,13 % C> 5,21 % H, 7,60 % Pí, 4,45 % B, 14,02 % F ¹H* (CD₃OD): 1,026-1,15 (a, 6H), 1,89-2,37 (m, 6H), 2,713,31 (a, 6H), 3,60, 4,05, 4,27, 4,61 (á a, 2H), 4,67-4,91 (a, 3H), 7,22-7,27 (a, 4H), /0^/^= -41,8® (c= 0,33, methanol)

Příklad 4Q (S^M, 8^)-^-//2-^- (2-Amino-3-merkap top ropyl )-L-valyl/í ,2,3,4-tetrahydro-3-is ochinol Jiný l/karbonylAil^-hydroxy-Lglutamin, trifluoracetátová (1:2) sůl

HS

o co₂h

H

NHOH chirální

-116A. (S³* ,^)-^-//2-/14-/2-//(1 ,1-Dimeth,ylethoxy )karbon.yl/amino/ 3-/(trifenylme thyl)thio/propyl/-N-/(fenylmethoxy)kar bony 1/-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-N^-(tetrahydropyran-2-yloxy)-L-glutamin, 1 ,1 -dime thy l.e thy lester

Sloučenina A (0,50 g, 91 %) se připraví jako bílé pevná látka za použití sloučeniny 39B (0,5 g', 0,487 mmol) a sloučeniny 20A (0,057 g, 0,487 mmol) metodou popsanou v příkladu 32F.

t.t. 70 až 80 °C

TLC: R_f 0,75^- (1/1 hexan/aceton,. vizualizace UV)

MS: (M+II)⁺ 1126,5

3. (S*,R*)-N!²-//2-/N-(2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/c ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-N -hydroxyL-glutamin, trifluoracetátová (1:2) sůl

Titulní sloučenina (0,050 g, 16%) se připraví jako bílý lyofilát použitím sloučeniny A (0,471 g, 0,419 mmol) metodou popsanou v příkladu 32G.

t.t.: rozklad nad* 95 ®C

TLC: R_f= 0,52 (6/3/1 n-propanol/hydroxid araonný/voda, vizualizace síranem ceričitoamonným)

MS: (M+H)⁺ 510, volný amin

IR: (KBr) 1204, 1676, 2976, 3430 cm“¹

Elementární analýza pro · 1,0 T^O · 2,15- TFA vypočteno- 42,43. % C, 5,11 % H, 9,06 % ΓΓ, 4,15 % S, 15,86 % F nalezeno 42,46 % C, 4,96 % H, 8,99 % Ν', 4,41 % S, 15,85 % F ¹H (CD₃OD): 1,07-1 ,25 (m,. 6H), 1 ,97-2,30 (a, 7ΓΓ), 2,75-3,40 (a, 5H), 3,θ0, 3,95-, 4,40 (š a, 2H), 4,60-5,00 (m, 3H), 7,22-7,35 (a, 4H) /o</_D= -23,2® (c= 0,22, methanol)

-117Příklad 41 /R- (R^m,S*)/-N-//2-/N- (2-Amino-3-merkaptopropyl )-L-valyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolin,yl/karbon,yl/-L-methioninamid', trif luoracetátová (1:2) sůl

A. (S*,R*)-K²-//2-/®-/2-//(1 , 1-Dimethylethoxy)karbony1/amino/-3-/( trif enylmethyl) thio/prop.yl/-N~/(fenylmethoxy) karbonyl/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methioninamid

Sloučenina A (633 mg, 65%) se připraví použitím sloučeniny 32E (841 mg, 1,00 mmol) a hydrochloridu? L-methioninamidu: (185 mg, 1,00 mmol) metodou popsanou v příkladu: 32P.

ET. /R-(R*,S*)/-N-//2-/N- (2-Amino-3-merkaptoprop.y!)-L-valyl/

1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methioninamiď, trifluoracetátová (1 :2) sůl

Titulní sloučenina (0,13 g, 45 %) se připraví použitím sloučeniny A (0,579 g, 0,596 mmol) metodou popsanou v příkladu 32G.

-1 18Elementární analýza pro· ^G23^37^5^3^2 ^2θ’ ^A vypočteno: 43,39 % C, 5,61 % ET, 9,37 % N nalezeno 43,39 % C, 5,64 %H, 9,44 % N

TLC: R_f 0,5 (6:3:1, n-propanol/hydroxid amonný/voda), vizualizováno UV, PMA

HPLC Rt 14,1 minut (96%), 10-90% vodný methanol s 0,2 % pufru kyseliny fosforečné, 30 minut gradient, 1,5 ml/minutu, 220 nm, C_ig (6,Q x 150 mm) kolona

IR: (KBr) 3435, 2972, 1678’, 1435, 1206, 1140, 841, 723 om¹ MS: /M+H/· 496⁺ /o</_D= -23,6° (c= 0,44, methanol)

Příklad 42

N-//(S )-2-/N-/(R)-2-Amino-3-merkaptopropyI'/-L-valyl/-1,2,3,4 tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyI/-2-mathyl-DL-methi.onin, trifluoracetátové (1:2) sůl

A. 2-Methyl-DL-methionin, methylesteir

Roztok D,L-o^-methylmethioninu (0,500 g, 3,06 mmol) ve 20 ml methanolu se nasytí kyselinou chlorovodíkovou: (g), míchá se 48 hodin při teplotě místnosti a potom se zahřívá

-119pod refluxem 12 hodin. Směs se zahustí ve vakuu. Zbytek se rozpustí v 5Q ml dichlormethanu a promyje 10% hydrogenuhliČitaném· sodným (50 ml). Organická vrstva se suší (síran sodný), filtruje a zahustí za vakua a získá se 320 mg (59 %) sloučeniny A.

B. N-//(S)-2-/N-/(R)~2-//(1,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/ 3-/(trifenylmethyl)thio/prop.yl/-N-/(fenylmethoxy)karbonyl/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-DL-methionin, methylester

Sloučenina B' (0,766 g, 77%) se připraví jako bílá pevná látka použitím sloučeniny 32E (0,841 g, 1,00 mmol) a sloučeniny A (0,195 g^T, 1,10 mmol) metodou popsanou v příkladu 32F.

C. . N-//(S)-2-/N-/(R)-2-//(l , 1 -Dimethylethoxy )karbonyl/amina·/

3-/(trifenylmethyl)thia/propyl/-N~/(fenylmethoxy)karbonyl/-L-valyI/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolin.yl/-karbonyl/-DL-methionin

Sloučenina 0(0,716 gy 9θ%) se připraví použitím sloučeniny 3’ (0,74 g, 0,740 mmol) metodou popsanou v příkladu 32C.

D. N-//(S)-2-/N-/(R)-2-Amino-3-merkaptopropyl/-L-valyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-2-methylDL-methionfn, trifluoraoetátová (1 :2) sůl

Titulní sloučenina (0,095 g, 29%) se připraví jako* bílý lyofilát použitím sloučeniny C (0,400 g, 0,406 mmol) metodou popsanou! v příkladu 32G.

t.t. 95 až 110 ®C

MS: (M+H)⁺ 511

Příklad 43 (S\ R* )-N.-//2-/N- (2-Amino-3-merkaptopropyl )-L-alanyl/-1201,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin

chírální

A. <S*,H*)-N-//2-/N-/2-//(l,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/ 3-/( trif eny Ime thyl.) thio/propyl/-l*-alanyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isachÍnolinyl/karbon.yl/-L-methionin, methylester

Sloučenina A se připraví jako čirý olej; (700 mg, 28%) použitím sloučeniny 7A (1,50 g, 3,04 mmol) a= sloučeniny 1F (2,10 g, 4,74 mmol) ve dvoustupňovém postupu popsaném v příkladu 7B.

t

BL (S^^H* )-N-//2-/lT- (2—Amino-3-merkaptopropyl)-L-alanyl/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochÍnolin.yl/karbonyl/—L-methionin

Titulní sloučenina (96 mg, 15 %) se připraví za použití sloučeniny A (700 mg, 0,85· mmol) ve dvoustupňovém postupu popsaném v příkladu 1H.

t.t. 89 až 90 °0, čistota 98 %, / /£⁵= -32,1° (c= 1,0, methanol), MS (M+ff)⁺ 469⁺.

Elementární analýza: pro 1,90 trifluoroctovou kyselinu · 3,1? voďu vypočteno 40,12 % C, 5,46% H, 7,55 % Ν’, 14,59 % P nalezeno 40,12 % C, 5,05 % B, 7,31 % B, 14,24 % F

-121-

1fT-NMR (CD-.OD,	270	MHz)	ď (ppm)	7,16	(4H,m), 4,	71 (2H, o),
4,57	(2H,	m),	4,43	(1H,	m), 4,32	(1H,	m), 3,98	(1H, m),
3,56	(1H,	m),	3,33-	•3,02	(2H, m),	2,84	(2H, m),	2,37 (1H, m)
1 ,98	(2H,	m) r	1,89	(IB,	m), 2,10·	-1,76	(3H,m), 1	,57 (2H, m),
1,43	(1H,	m).
Příkl	ad 44

(S*, R* )-Ν-//2-/ΓΓ- (2-Amino-3-merkaptopropyl )-L-leucyl/1 ?ě?š?č-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, trifluoracetátová (1:2) sůl

A. (Η^μ)-Ν-//2-/ϊΓ-/(1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/-L-leucyl/1,2,1,4-tetrah,ydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin, methylester

N-terc.Butyloxykarbonyl-L-leucin (1,0 g, 4,01 mmol) a sloučenina 1B (hydrochlorid, 1,43 g, 4,01 mmol) se rozpustí

-122v dichlormethanu (10 ml). Přidá se brom-tris-pyrrolidino-fosfonium-hexafluorof osfát. (2,10 g, 4,41 mmol) a 4-dimethylamino pyridin (100 mg, 0,815 mmol). Přikape se N.,N-diisopropylethylamin (1,49 g, 2,0 ml, 11,5 mmol). Reakční směs se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti, zahustí se a chromatografuje (silikagel, 5,0 x 15 cm) (40% ethylacetát', 60% hexan). Frakce, obsahující požadovanou sloučeninu se oddělí a zahuštěním se získá sloučenina A jako čirý olej’ (2,0 g, 93 %) (M+H)* 536*

0. (S*,R* )-N-//2-/N-/2-//(1 ,1 -Dimethylethoxy)karbonyl/amino/3-/(trif enylmethyl )thio/propyl/-L-leuc,yl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Sloučenina B (600 mg, 25%) se připraví jako čirý olej za použití sloučeniny A (1,5 g, 2,81 mmol) a sloučeniny 1F (1,43 g, 2,81 mmol) ve dvoustupňovém postupu popsaném v příkladu 73.

(M+H)* 867⁺

C. (S\R*)-N-//2-/N-(2-Amino-3-merkaptépropyl)-L-leucyl/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, trifluoracetátová (1 :2) sůl

Titulní sloučenina (200 mg, 38%) se připraví použitím sloučeniny B’ (600 mg, 0,693 mmol) ve dvoustupňovém· postupu popsaném v příkladu 1 H.

t.t. 85 až 86 °C, čistota 98,4% /(//2^= -35,3° (C=0,15, methanol)

MS (M+H)* 511, elementární analýza pro 1,95 trifluoroctové kyselina .

0,95 voda:

vypočteno 44,67% C, 5,62 % H_r 7,47% H nalezeno 44,36 % C, 5,75 % H, 8,09 % ΓΓ

-123-

1H-NMR (cd.od	, 400	MHfc)	ď (ppm) 7	,26 (4H,	ot)4	,68 (2H, a),
4,51	(1H„	m) r	4,40	(IH,	»),	4,24	(1H, a),	3,62	(1 H, ro) ,
3,3.4	(2ΓΓ,	«;) ,	3,10	(2H„		2,82	(2H,. m),	2,46	(2H, »),
2,05	(3H,	m),	1 ,90	(2H,	a),	1,72	(IH, m),	1,62	(1H:, a),
1,46	(11F,.	au),	1,03.	(6ff,	m).

Příklad 45 /R*'/R^3íf(S*’)//-N-//2-/2-/(2-Amino-3-merkaptopropyl )amino/1 -oxobut.yl/-! ,2,3,4-tetrahydrof-3-isochinolinyl/karbon.yl/L-methionin, trifluoracetátová (1:1) sůl

A.. Kyselina (S)-2-//(1,1-dimethylethoxyOkarbonyl/amino/máselná

Směs (S)-(+)-2-aminomáselné kyseliny (5,0 48,5 aaroL), pelet hydroxidu sodného (2,0 g, 50 mmol), vody (5 ml), terč.butanolu (20 ml) a di-terc.butyldlkarbonátu (11,0 g, 50 mal) se míchá' při 25 ^aC 18 hodin. Směs se pak nalije do vody a promyj'e se etherem?. Vodná vrstva se okyselí přídavkem zředěné kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se ethylacetátem (2 x). Extrakt se pak suší' a zahuštěním se získá sloučenina A jako bezbarvý olej (10,3 g, >100 %)

-1243’. (R*,R^M)-N-//2-/2-//(1, 1-Dimethylethoxy') karbonvl/amino/1 -oxobutyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Směs sloučeniny A (550 mg, 2,7 mmol), hydrochloridu sloučeniny 13 (895 mg, 2,5 mmol), diisoprop.yleth.ylaminu (0,70 ml, 4 mmol), 4-dimethylaminop,yridinu (61 mg, 0,5 mmol) a brom-tris-pyrrolid^:ino-fosfonium-hexafluorofosfátu (1,86 g, 4 mmol) v methylenchloridu (10 ml) se míchá při 25 °C 20 hodin. Směs se pak míchá v 1N roztoku kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se ethylacetátem. Extrakt se promyje? nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suáí se a zahuštěním· ve vakuu se získá zbytek.

Tento se čistí rychlou chromatografií na silikagélu (300 g, EM), za eluce hexanem:ethylacetátem (1:1) a získá se sloučenina B jako čirý olej (600 mg, 47%)

C./R^x/R* (S^K )//-^-//2-//2-//(1 ,1 -Dimethylethoxy)karbon,yl/amino/-3-/( trif enylmethyl )thio/propyl/amino/-1 -oxobut.yl/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin, methylester

Roztok sloučeniny 3 (600 mg, 1,18 mmol) v kyselině octové nasycené chlorovodíkem Í10 ml) se míchá při 25 jednu hodinu¹, potom se zahustí ve vakuu a získá se sloučenina B (450. mg, 94 %).. K roztoku tohoto materiálu (443 mg,

1,0 mmol) v methanolu (2 ml) se přidá sloučenina 1F (445 mg, 1,0 mmol). Po 30 minutách se přidá kyselina octová (0,2 ml) a kyanoborohydriá sodný (63 mg, 1,0 mmol) a výsledná směs se míchá při 25· °C 48 hodin. Směs se pak nalije do přebytku 1N kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se ethylacetátem.

Vodná vrstva se zalkalizuje přídavkem: hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje se opět ethylacetátem. Extrakty se spojí, suší a zahusti ve vakuu. Zbytek se čistí rychlou chromatografií na silikagélu (60 g, EM) za eluce hexanenuethylacetátem (1:1) a získá se produkt a vysokým R^ (BOC-trityl-cysteinol),

-125a potom sloučenina C (100 mg, 12 %).

D. /R^m/R*(S*)/-N-//2-/2-/(2-Amino-3-merkaptopropyl)amino/1 -oxobutyl'/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/L-methionin, trifluoracetátová sůl (1 :1 )

Směs sloučeniny 0 (100 mg, hydroxidu sodného (2 ml) a methanolu (2 ml) se míchá při 25 °C 2 hodiny, potom se nalije do přebytku 1N kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se ethylacetátem. Extrakt se suší a zahustí na sklo (90 mg).

Sklo se rozpustí’ v kyselině trifluoroctové (2 ml) a triethylsilan (0,2 ml) se přidá'. Směs se míchá jednu hodinu při 25 °0 a potom se zahustí ve vakuu. Zbytek se čistí preparativní HPLC- (YMC S-10 ODS kolona, 30 x 500 mm, eluce 50 ml/minutu lineárního gradientu od 10 % do 90 % vodného methanolu, obsahujícího 0,1 % kyseliny trifluoroctové během 30 minut).

Frakce se sledují UV absorbarrcí při 220 nm. Ty, které obsahují' první hlavní eluovaný produkt se spojí a zahustí. Zbytek se lyofilizuje a získá se titulní sloučenina jako h.ygroskopickó' bílá pevná látka (30 mg, 52 %).

t.t. 85 až 95 °C /${/&* -31° (c= 0,1, ethanol)

IR (KBr): 3435, 2924, 1674, 1431 cm¹

MS: 483⁺ (M+H)^{+ ]}H NMR: (CDjOD) 1,1 (6H, tm), 1,97 a 2,07 (3H, s·: (rotamery)),

1,8-4,9 (20H, m), 7,25 (4H, m).

TLG: R_f 0,15 , EM silikagel, 2:1 ethylacetát:/pyridin 20: kyselina octová 6: voda 11/, UV + PMA vybarvení HPLC;: >90 % při 14,9 minutách (YMC S3 ODS kolona, 6,0 x 150 mm, eluce 30 minut libeárním gradientem od 10 % do 90 % vodného methanolu, obsahujícího 0,2 % kyseliny fosforečné, monitorována při 220 nm·).

-126Elementární analýza pro ^σ22^34^4θ4^2*¹’θθ trif luoroctové kyselina. 1,5 voda vypočteno 42,66% C, 5,40 % H, 7,71 % 8,83 % S, 14,91 % F nalezeno' 42,81 % G, 5,32 % H, 7,77 % N, 8,99 % S, 14,81 % F.

Příklad 46 (S*,R*)-N-//2-/(2-Amino-3-merkaptapropyl)amino/-4-methylpentyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L— methionin, trifluoracetátová (2:3) sůl

chirální

A. ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/-N-methoxy-N-methyl-L— leucinamld

N-terc.Butyloxykarbonyl-D-leucin (3.,0 g, 12,05 mmol) a Ν,Ο-dimethylhydroxylamin-hydrochlorid (1,3 g, 13,25 mmol) se rozpustí' v dichlormethanu; (100 ml). Přidá se bram-trispyrrolidinaífosfonium-hexafluorofosfát (6,18 g, 13,25 mmol) a 4-dimethylaminopyri'din; (300 mg, 2,45 mmol). Přikape se N^Iř-diisoprapylethylamin (3,71 g, 5,0 ml, 28,65mmol).

Reakční směs se míchá 4 hodiny při teplotě místností, zahustí se a chromá tografuje= (silikagel, 5,0 x 15 cm, 40 % ethyl

-127acetáti, 60% hexan). Frakce, obsahující požadovanou sloučeninu se spojí a zahuštěním se získá sloučenina A jako slabě žlutý olej (2,S g, 80 %).

(M+H)⁺ 275^:+

3. (1-Formyl )-3-methylbut,yl )karbatnová kyselina, 1 ,1-dimethy 1 ethyles teir

Sloučenina A (2,8 g·, 9,61 mmol) se použij© v metodě popsané v příkladu» 1F pro přípravu sloučeniny B· jako čirého: oleje (2,1 g’, 99 %), která se použije ihned v dalším stupni bez dalšího· čištění.

C.. (R^K,R*)-N-//2-/2-//(1 , 1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/-4 me thylpentyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-is ochinolinyl/karbonyl/-L-methionim, methylester

Sloučenina 1A (3,0 g, 7,11 mmol) se míchá v dimeth.ylsulfiduv (1,0 ml) a 4N kyselině chlorovodíkové v dioxanu (20 ml) 30 minut. Směs se zahustí, nazpustí v methylenchloridu (30 ml) a zahustí. Tento postup' se opakuje pětkrát a získá se amin jako čiré sklo. Tento amin a sloučenina 3 (2,1 g·, 9,60 mmol) se rozpustí v methanolu (20 ml) a ledové kyselině octové (0,4 ml). Fo částech se během. 30 minut přidá kya npborohydrid soďhý (447 mg, 7,11 mmol). Reakční smě®· se míchá 16 hodin. Směs se ochladí na Q °C a pomalu se přidá nasycený hydrogenuhličitan sodný (100 ml). Fpodukt se pak extrahuje? do ethylacetátu (100 ml). Ethylacetátová vrstva se promyje vodou: (200 ml) a solankou (100 ml), suší se (síran hořečnatý), zahustí a chromatografuje (silikagel, 4,1 x·15 c«|, 25% ethylacetát, 75 % hexan.). Frakce, obsahující požadovanou sloučeninu se odeberou a zahustí na sloučeninu C jako čirý olej (2,3 g, 62 %).

(M+H)⁺ 522⁺

-128D. /R*/R* (S*)//-N- //2-/2-//2-//(1,1-Dimethyl e thoxy) kar bonyl/

3-/( trif enylmethyl)thio/propy l/amino/-4-me thylpent.yl/1 , 2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Sloučenina D (500 mg, 24 %) se připraví jako čiré sklo použitím sloučeniny C (1,3 g, 2,40 mmol) a sloučeniny 1F (5,¹ g, 11,4 mmol) ve dvoustupňovém· postupu popsaném v příkladu 46C.

(M+H)⁺ 853⁺

E. (S^R*)-N-//2-/2-/(2-Amino-3-merkaptopropyl)amino/-4meth,ylpentyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/—b-methionin, trifluoracetátové' (2:3) sůl

Titulní sloučenina (35 mg, 24 %) se připraví za použití sloučeniny D (500 mg, 0,587 mmol) ve dvoustupňovém postupu popsaném v příkladu 1H.

t.t. 118 až 119 ®C, čistota;? 98% /</|⁵= -29,.2°· (o« 0,1,2 methanol), MS (M+H)⁺ 497⁺

Elementární analýza pro 2,80 kyselina trifluoroctová. 3,50 voda vypočtenu 40,44 % C, 5,71 % H, 6,37% N nalezeno 40,47 % C, 5,35 % H, 6,52 % N

H-NMR (CD-jOD, 400 MHe) d (ppm) 7,14 (4H, m), 4,53 (1H, m), 4,10 (2H, m), 3,87 (1H, m), 3,60 (1H, m), 3,09 (4H,m), 2,85 (4E, m), 2,42 (1H, m), 2,31 (1H, m),. 2,08 (1H, m·), 1,98 (3H,. s), 1,92 (1H, m), 1,53 (2H, m)„ 1,30 (1H, m), 0,84 (6H, nu)

Příklad 47 (R)-N-//2-/1 -/(2-Amino-3-merkapt‘opropyl )-L-prolyl/-1 ,2,3,4tetrahydro-3-isochinolinyIl/karbonyl-L-methionini, trifluor-129acetátová (1:2) sůl h₂n

HS °ύ\ o

A. (R* )-N-//2-/1-/(1 , 1-Dimethylethoxy )karbonyl/-L-propyI/1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyI/karbonyl/-Lmethionin, methylester

Sloučenina 1 B¹ (hydr o chlorid¹, 1,88 g, 4,1 mmol) se spojí s N-terc.butyloxykarbonyl-L-prolinem (0,881' g, 4,1 mmol), brom-tris-pyrrolidinofosfonium-hexafluorofosfátea (1,91 St 4,1 mmol) a diisopropylethylaminear- (2,1 ml, 12,1 mmol) v methylenchlori-dui (40 ml). Nechá se míchat 2 hodiny při teplotě místnosti a potom se zahustí za vakua. Zbytek se chromatografujě (silikagel, 7,1 x 20 cm·, 50 % ethylacetát, % hexan) a frakce, obsahující požadovanou sloučeninu ae spojí a zahustí. Získá se sloučenina A jakn sklo (výtěžek:

,88 g, 72 %).

MS (M+ir)⁺ 520⁺

Β. (β^,Η³*)-N-//2-/1 -/2-//(1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/aminaA

-1303-/( trifenylmethyl)thio/propyl/-·^-prolyl/-1, 2,3,4- te trahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Sloučenina 5 (5,21 mg, 25 %) se připraví použitím· sloučeniny A (1,38 g, 2,66 mmol), sloučeniny 1F (1,28 g, 2,88 mmol) a kyanoborohydridu: sodného (167 mg, 2,6 mmol) ve dvoustupňovém· postupu popsaném v příkladu 73.

(M+H)⁺ 851 ⁺

Rf 0,75' (chloroform·, methanol', octová kyselina 85:10:5)

C. (R)-N-//2-/1-/(2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-prolyl'/1 ,2,3,4-te trah,ydro^3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, trifluoracetátová (1:2) sůl

Titulní sloučenina (70 mg, 15 %) se připraví jako bílý prášek použitím sloučeniny B (520 mg, 0,61 mmol) ve dvoustupňovém postupu popsaném v příkladu IH.

(M+H)⁺ 495+

t.t. 69 až 71 °G, ¹H-NMR (CDjOD, 400 MHz) d (pprn) 7,15 (4H, m), 4,91 (1H, t), 4,63 (4H, m), 4,40 (1H, a), 4,20 (1H, dď), 3,85 (1H, a), 3,65 (4H_r a), 3,42 <1H, dd), 3,27 (1H, m), 3,08 (1H, dd), 2,80 (2H, a), 2,40 (1H, m), 2,18 (1H, m), 2,00 (1,5H, s), 1,99 (3H, m), 1,89 (1,5H, s).

Elementární analýza pru ¢23^34^4(¼¾ ^voda vypočteno 42,97 % C, 4,90 % H, 7,24 % N, 8,28 % S, 17,30 % F nalezeno 42,6? % G, 4,78 % H, 7,05 % N, 8,63 % S, 17,13 % F

-60,4° (c= 0,5, methanol).

S.98% při 13,1 minutách (YMC S3-ODS kolona 6,0 x 150 mm, minut lineární gradient od 10 do 90 % vodného methanolu, obsahujícího 0,2 % kyseliny fosforečné 1,5 ml/min, monitorování při 220 nm).

-131Příklad 48 /R^/S³* (S* )//-N-//2-//l-(2-Amino-3-merkaptopropyl)-2-methyl2-pyrrolidinyl/karbon.yl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, trifluoracetátová (1:2) sůl

A. .ÍS⁵* ,R^K)-N- //2-//1-/(1 ,1 -Dimethylethoxy) kar bony 1/- 2-me thy 12-pyrrolidinyl/karbonyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-is ochinolinyI/karbonyI/-L-methionin, methylestec (R)-2-Methyl-1,2-pyrrolidindikarboxylová kyselina —(1 ,1-dimethylethyl)ester /viz D.Seeback a spol., J.Am. Chem.Socc., 1983, 105 $390/ (0|27 g, 1,18 mmol) se spojí se sloučeninou 1D (1 g, 2,7 mmol), brom-tris-pyrrolidino-fosfonium-hexaflurofosfátern (1,2 g:, 2,6 mtnol), dimethylamibpyridineo (0,2 g) a diisopropylethylaminem (0,8 ml, 5,2 mmol) v methylenohloriídu (40 ml). Míohá se 16 hodin a zahustí se za vakua. Zbytek se chromatografuje (silikagel, 4,5· x 21 cm·, 50 % ethylacetát, 50 % hexan) a frakce, obsahující požadovanou sloučeninu se spojí a zahuštěním se získá sloučenina A jako skla> (508 mg, 81 %)

MS (M+H)⁺ 534⁺ —132—

B. /R^a*^^/S^aK(S*)//—Μ—//2—//1 —/2—//(1,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/-3-/(trifenyImethyl)thio/propyl/-2-methyl-2-pyrrolidin,yl/karbonyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbon,yl/-L-methionin

Sloučenina B (270 mg, 34 %) se připraví použitím sloučeniny A (0,5 g, θ,93 mmol) a sloučeniny 1F (1,31 g, 2,88 mmol) ve dvoustupňovém postupu popsaném v příkladu· 73.

MS (M+H)⁺ 865⁺

C. 0„ /R^m/S*(S*)//-N-//2-//1-(2-Amino-3-merkaptopropyl)2- methyl-2-pyrrolidinyl/karbon.yl/-1 ,2,3,4-tetrahydro3- isochinolinyl/-karbonyl/-L-methionin, trifluoracetátové (1:2) sůl

K 10 al methanoiu se přidá sloučenina B (180 mg, 0,21 mmol) spolu se 2N hydroxidem sodným pro úpravu na pH 12.

Míchá se až do kvantitativního zmizení výchozí výchozího materiálu (4 hodiny). pH se upraví na 3-4 použitím 1N hydrogensíranu draselného, a ethylacetát · (30 ml) se přidá. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se promyje-· ethylacetátem (3 x 30 ml). Organické extrakty se spojí, suší (síran hořečnatý) a zahustí.

Zbytek (179 mg, 0,21 mmol) se spojí s kyselinou trifluor ootovou (5 ml), methylenchloridem· (10 ml) a triethylsilanem (0,25 ml,. 1,55 mmol). Roztok se míchá 1 hodinu: a potom se zahustí za vakua. Přidá se methylenchlorid a roztok se znovu zahustí a> pečlivě suší za vakua. Zbytek se aplikuje na YMC C18 kolonu (S-10, ODS 30 x 500 mm) za monitorování při 220 nm. Provede se HPL© čištění za následujících podmínek: rozpouštědlo A: 0,1% kyselina trifluoroctové ve vodě, rozpouštědlo Βχ 0,1% kyselina trifluoroctové v methanoiu; 20-50 %

B v A během 40 minut. Frakce, obsahující hlavní pík se spojí a lyofílizujf. Získá se 25 mg?titulní sloučeniny jako?

-133bílého prášku.

MS (M+H)⁺ 50 9⁺

t.t. 107 až 108 °C ’Κ-ΝΜΡ (CD₃0D, 400 MHz) (ppm) 7,29 (4H, m), 4,60 (4H, m), 3,40 (1H, m),. 3,22 (1H, m), 3,14 (1ΓΓ, m·.), 2,97 (1H, m), 2,97 (1H, m), 2,78 (2H, m), 2,59 (1H, m), 2,33 (2H, m), 2,21 (1H, m), 2,11 (1H; m), 2,05 (3H, s), 1,92 (2ff, m), 1,80 (1H, at), 1,53. (3H, s),

Elementární analýza pra ^G24^ff36^4^4^S2*‘^2,^^G2^íí5,3⁰2’^ ^voda vypočteno 41 ,63 % C, 5,41 % H_ř 6,79 % PI nalezeno 41,31 % C, 4,98 % ff, 6,64 % N /0^/25+26,3° (c= 0,36 methanol) % při 13,9 minutách (YMC S3-0DS kolona 6,0 x 150 mm 30 minut lineární gradient od 10 ďo 90 % vodného methanolu, obsahujícího 0,2 % kyseliny fosforečné', 1,5 ml/min, monitorování při 220 nm).

Příklad 49 (S^x,^)-1^-//2-/^- (2-Amino-3-merkaptopropyl )-3-methyi-L-valyl/ 1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, trifluoracetátová (1 :2) sůl

— 134—

A. N—/(1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/-3-methyl-L-valin

K suspenzi L-terc.leucinu (1,0 gm, 7,6 mmol) v dioxanu (10 ml) při 0 °C se přidá 1N hydroxid sodný (7,6 ml, 7,6 mmol) a voda (7 ml). K výslednému čirému roztoku se přidá terč.butoxykarbonylanhydriď (1,86 gm, 8,5 mmol) a odstraní se chladící lázeň. Po 1 hodině se reakční směs zahustí na polovinu a za intenzivního míchání se přidá' ethylacetát (15 ml) a 1N kyselina chlorovodíková (10 ml). Vodná vrstva se oddělí a extrahuje se ethylacetátem (10 ml). Organické vrstvy se spojí, suší (sinán hořečnatý), filtrují a zahustí ve vakuu a získá se sloučenina A (2,0 g).

MS (FAB'), (M+H)⁺ = 232⁺ '

8.. (R^h:)-N-//2-/N-/( 1 ,1-Dime thyl ethoxy )karbonyl/-3-methyl-Lvalyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbony1/-Lmethionin, methylester

K roztoku sloučeniny A (0,4 g, 1,7 mmol) v dichlorme thanu (5 ml) při 0 °G pod argonem· se postupně přidá bromtris-pyrrolidincp-fosfonium-hexafluorofosfát (0,79 g, 1,7 mmol), diisopropylethylamin (0,72 ml, 5,1 mmol) a dimethylaminopropylamin (22 mg, 0,2 mmol). Po 5 minutách se přidá hydrochloričE sloučeniny 1B (0,6 g, 1,68 mmol). Reakce se nechá ohřát na teplotu místnosti. Po 3 hodinách se reakční směs pr omyje? postupně 1N kyselinou chlorovodíkovou!, nasyceným hydrogenuhličitanem sodným a solankou (vždy 5 ml). Každá vodná vrstva se extrahuje chloroformemi (5 ml). Organické vrstvy se spojí_r suší (síran hořečnatý), filtrují a zahustí. Zbytek se čistí rychlou: sloupcovou chromatografií na silikagelu za eluce 30 % ethylacetátu v hexanech. Získá se sloučenina B (430 mg, 48%).

MS (Cl) (M+H)⁺= 536⁺

-135C. (S*, R* )-N-//2-/N-/2-// (1,1 -Dimethylethoxy)karbonyl/amino/ 3-/( trif eny Imethy!)thio/propyl/- 3-me thyl-L-valyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-3_isochinolinyl/karbonyl/-L-fliethionin, methylester

Bezvodý chlorovodík (4M v dioxanu, 1 ml, 4 mmol) a trieth.ylsilanu (0,24 ml, 1,5 mmol) se přidá k pevné sloučenině B (400 mg, 0,75 mmol) při teplotě místnosti pod argonem.. Po 2 hodinách míchání se reakčni směs zahustí a zbytek se trituruje s etherem: a suší ve vakuu:, získá se 325 mg materiálu (MS: (M-H)“= 434”). X roztoku tohoto tripeptidu (310 mg,

0,66 mmol) v methanolu (2 ml) se přidá' roztok sloučeniny 1F (0,3 g, 0_r6 mmol) v methanolu (1 ml) a kyselina octová (0,1 ml). Po 5 minutách se přidá pevný kyanoborohydrid sodný (33 mg, Q,6 mmol). Po 1 hodině se přidá další aldehyď (0,3 g, 0,6 mmol) v methanolu (1 ml) a kyanoborohydroď sodný (67 mg, 1,2 mmol). Po 30 minutách se přidá aldehyd (0,3 g, 0,6 mmol) v methanolu (1 ml). Po dalši 1 hodině se reakčni směs zředí ethyiacetátem (5 ml) a etherem (5 ml) a promyje se nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (10 ml). Organické vrstva se promyje solankou (10 ml), suší (síran hořečnatý), filtruje a zahustí se ve vakuu. Zbytek se čistí sloupcovou ohromatografií na silikagelu za eluce stupňovitým gradientem 30 50 % ethylacetátu v hexanech. Získá se bílá pěna sloučeniny C (540 mg, 95 %).

MS (FAQ) (M+H)⁺ - 86 7⁺

D. (S*, R* )-N~//2-/N- (2-Amino43-merkaptopropyl )-3-meth,yl-Lvalyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin, trifluoracetátová (1:2) sůl

K roztoku sloučeniny C (0,3 g, 0,34 mmol) v methanolu (1,5 ml) při 0 °0 se přidá vodný 1N hydroxid sodný (0,4 ml, 0,4 mmol) Vytvořená sraženina se rozpustí přídavkem tetrahydrofuranu (0,8 ml) Reakčni směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Po 1 hodině se přidá 1N kyselina chlorovodíková (1 ml) a směs se extrahuje ethyiacetátem (5 ml). Organická

-136vrstva se suší (MgSO^), filtruje a zahustí ve vakuu. Získá se bílá pevná látka (0,28 g, 98 %).

MS (M-H)~ 851

K- roztoku této pevné látky (270 mg, 0,31 mmol) v dichlormethanu (1,5 ml) při teplotě místnosti pod argonem se přidá triethylsilara (0,5 ml) a kyselina trifluoroctová (1,5 ml). Po 1,5 hodině se těkavé látky odstraní na rotační odparce? a zbytek se rozpustí v? 50% godném methanolu zbaveném kyslíku. Vytvořená sraženina se filtruje přes nylonový 0,45 /um filtr a filtrát se čistí pomocí RPHPLC (YMC, S10, C18, 30 x 500 mm· kolona) za eluce lineárním gradientem 26%-66% vodného methanolu, obsahujícího- 0,1 % kyseliny trifluoroctové' během 1 hodiny. Vhodné frakce se spojí, zahustí na rotační odparce pro odstranění methanolu a potom se lyofilizují.

Získá se titulní sloučenina (153 mg, 63 %) jako bílý lyofilát) t.t. 87 až 90 °C

MS: (FA3) (M+H)⁺= 511 ⁺

IR (KBr): 1676, 1204 cro**¹ / /p= -27 ⁰¹ (c= 0,46, methanol)

HPLC: YMC, S3, C18 (6 x 150 mm) kolona, 220 nm, 1,5 ml/min, 0-90% vodný methanol s o,2 % kyseliny fosforečné, gradient během 30 minut: Rt: 17,5 min

Elementární analýza pro Ο^-24^38^4θ4^2’¹ ’ ^2θ ’ ¹kyselina trifluoroctové vypočteno 44,44 % 0, 5,77% H, 7,48 % Ν', 8,57% S, 14,08% F nalezeno 44,38 % C, 5,47% H, 7,39 % M, Q,50 % S, 14,13 % F ¹H NMR (CD₃OD), 400 MHz): d 7,35-7,20 (4H, m), 5,0-4,55 (5H, m), 3,45-3,1 (2H, ra), 2,90-2,45 (5H, m), 2,07, 2,03. (3H,

2s, rotamerní), 2,2-1,95 (2H_ř m), 1,12, 1,06 (9H, 2s, rotamerní).

-137Příklad 50 /R^/R*(S^x )//-N-/(2-//(2-Amino-3-merkaptopropyl )amino/fenylacetyl/-1 ,2,3,4- te trgthydro-3-isochinolinyl/kar bonyl/-Lmethionin,trifluoracetátová sůl (1:2)

A. -X-Aminobenzenoctová kyselina, methylester, hydrochlorid

Plynný chlorovodík se probublává.' roztokem, kyseliny aminobenzenové (5,00 g, 33,0 mmol) v methanolu (100 ml). Po míchání po 6 dnů se reakční směs zahustí a zbytek se trituruje s etherem a pevná látka se odfiltruje a suší vzduchem·. Získá se sloučenina A (5,8 g, 88%).

3. /R- (R*, S*)/- ^-//2-//( 1 ,1 -Dimethylethoxy)karbonyl/amino/3-/(trifenylmethyl)thio/propyl/amino/benzenoctová kyselina, methylester

Kyselina octová' (0,5 ml) se přidá k roztoku sloučeniny

1F (0,30 g, 0,67 mmol) a sloučeniny A (0,144 g, 0,87 mmol)

-1 38pod argonem· při teplotě místnosti. Po 10 minutách míchání se přidá kyanoborohydrid sodný (0,050 g, 0,87 mmol) a reakční směs se míchá 13 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí hydrogenuhličitanem sodným (10 ml) a ethylacetátem (20 ml) a vrstvy se oddělí. Vodné vrstva se extrahuje ethylacetátem (2 x 20 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí' solankou (1 x 20 ml), suší se nad síranem hořečnatým, filtrují a zahustí. Zbytek se čistí rychlou sloupcovou chromatograf ií na silikageli za eluce 9/1, 8/2 hexan/eth.ylacetét. Získá se sloučenina 3 (0,22 g, 56%).

C. /R-ÍR^jS*)/-Á -//2-//(1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amina/3-/(trifenyImethyl)thio/propyl/amino/benzenoctová kyselina

Hydroxid sodný (IN, 0,47 ml, 0,019 g, 0,47 mmol) se přidá k roztoku sloučeniny B (0,22 g, 0,37 mmol) v methanolu (2 ml). Po míchání po 13 hodin při teplotě místnosti se reakce přeruší 10% kyselinou chlorovodíkovou (10 ml) a ethylacetátem (20 ml). Vrstvy se oddělí' a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2 x 20 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí 10% kyselinou chlorovodíkovou (1 x10 ml) a solankou (1 x 20 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahustí. Získá se kyselina- slou čenina C (0,21 g, 94 %).

D. /R*/R*(S*)//-N-//2-/N-//2-//(1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/-3-/( trif enylme thyl) thio/propyl/amino/fenylacetyl/1,2 ,J,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Hydrochlorid benzotriazol-1-yloxytris-(dimethylamino)fosfonium-hexafluorofosfátu (0,093 g, 0,36 mmol) se přidá k roztoku sloučeniny C (0,21 g, 0,36mmol),sloučeniny 13, hydrochloridu (0,21 g, 0,36 mmol), sloučeniny tB, hydrochloridu; (0,14 g, 0,40 mmol) a diisopropylethylaminu (0,13 ml, 0,10 g, 0,80 mmol) v dichlormethanu (2 ml) pod argonem.

-139T’ato reakční směs se míchá 13 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí 10% kyselinou chlorovodíkovou (10 ml) a ethylacetátem (20 ml). Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2 x 20 ml). Spojené oragnické vrstvy se promyjí 10% kyselinou chlorovodíkovou (2 x10 ml), vodou (l xIO ml) hydrogenuhličitanem sodným (2 x10 ml) a solankou (2 x 20 ml) Suší se nad síranem hořečnatým, filtrují a zahustí. Produkt se čistí rychlou chromatografií na sloupci silikagelu za eluce 7/3, 1/1 hexanem/ethylacetátem. Získá se sloučenina D (0,087 g-, 28 %).

E. /R^/R*(S*)/-N-/(2-//(2-Amino-3-merkaptopropyl(amino/fanylacetyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/-karbonyl/-L-methionin, trifluoracetátová (1:2) sůl

Titulní sloučenina (0,03 g) se připraví ze? sloučeniny D (0,09 g, 0,10 mmol) ve dvoustupňovém postupu popsaném v příkladu 49D.

Elementární, analýza pro; θ26^34^4θ4^2*^’^v0^^a* 2,1 kyselina trifluoroctová vypočteno 44,50 % C, 5,08 % H, 6,87 % N nalezena 44,30 % C, 4,75 % H, 6,,90 % N

TLC: Rf Q„6 (6/3/Γ, n-propanol/hydroxid amonný'/voda), vizualizace?' UV, PMA

HPLC Rt 18_r6. minut (92 %), 10-90% vodný methanol s pufrem ky seliny fosforečná, 30 min (0,2%) gradient, 1,5 ml/min·, C18 (6,Q x< 150 mm) kolona

IR (K3r) 3435, 2924, 1680, 1206, 1134 cm¹

MS: /M+H/* 531⁺

Přiklaď 51 /R^x/R^x (S*)//-N-//2-/2-/(2-Amino-J-merkaptopropyl)amino/— 140—

2-cyklohexylacetyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-is ochinolinyl/kar« bonyI/-L-methionin, trifluoracetátovď (1:2) sůl

A. (S)-//(1,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/cyklohexanoctová kyselina

Sloučenina A (3,5' g) se připraví za použití L-cyklohexylalaninu (1,6 g, 10,1 mmol) /P.J.Corringer a spol., J. Med.Chem., 1993, 36, 166/ metodou popsanou v příkladu 49A. MS (PAB), (M+H)⁺ = 258⁺.

3. (R*,R* )-N-//2-/Cy kl ohexy 1//O , 1-dime thyle thoxy ikarbony 1/ amino/acetyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Sloučenina B (430 mg, 48%) se připraví použitím sloučeniny A (0,77 g, 3,01 mmol) a sloučeniny 13, hydrochloridu; metodou popsanou v příkladu 493·

MS (Cl), (M+H)⁺ = 56'2⁺

C. /R^3f/R^M(S*)//-B-//2-/cyklohexyl//2-//(1,1-dime thyle thoxy)· karbony l/amina-3-/.Xtrifenylmethyl) thio/propyl/amino/acetyl/J ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-141methionin, methylester

Sloučenina C (230 mg, 59%) se připraví jako bílá pěna použitím sloučeniny 3 (250 mg, 0,44 mmol) a sloučeniny 1F (0,2 g, 0,4 mmol) ve dvoustupňovém postupu popsaném v příkladu 49C.

MS: (FAB) (M+H)* = 893⁺

D. /R^M/R*(S*)//-N-//2-/2-/(2-Amino-3-merkaptopropyl)amino/2~cyklohexylacetyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolin,yl/karbonyl/-L-methionin, trifluoracetátová (1:2) súl

Titulní sloučeniny (55 mg, 50 %) se připraví jako bílý lyofilát použitím sloučeniny C (0,22 g, 0,25 mmol) ve dvoustupňovém postupu?, popsaném v příkladu 49D.

t.t. 100 až 105 ^Q’C

MS (FAB'): (M+H)* - 537⁺

IR (K3r): 2934, 1676, 1434, 1204 om“¹

HPLC: YMC, SJ, C18 (6 x 150 mm) kolona, 220 nm, 1,5 ml/min: 0-90% vodný methanol s 0,2% kyselinou fosforečnou, gradient během 30 min fcetenční čas: 20,3 minut

ΛΧ/ρ = -31° (c= 0,3, methanol)

Elementární analýza pro 1 ,8 voda, 2,0 kyselina trifluoroctové' vypočteno 45,20 % C, 5,77% H, 7,03 % Ν’, 8,04% S nalezeno 45,29 % C, 5,49 % H, 6,98 % N, 7,76 % S ^HNMR (CD^OD, 40Q MHz): d 7,30-7,15 (4H, m), 4,90-4,50 (5H, m), 3?40 (1H, m), 3,15 (1H, o,), 3,00-2,70 (3H, m), 2,602,40 (2H_r m), 2,20-1,50 (1 6H, m), 2,06, 2,00 (2ff, 2s, rotamer ní), 1,40-1,10 (6H, m)

Příklad 52 (S* _rR* )-N-//2-/NT- (2-Amino-3-merkaptoprop,yl )-3-methyl-L-valyl/

-1421 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester, trifluoraoetátová (1 :2) sůl

A. <S*„ R^Jť)-N-//2-/JT-(2-Amino-3-nierkaptopropyl)-3-methylL-valyI/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyI/-Lmethionin, methylester, trifluoraoetátová (1:2) sůl

Triethylsilám (0,66 ml, 0,048 g, 0,415 mmol) se přidá k roztoku sloučeniny 49C (0,180'· g, 0,207 mmol) a kyseliny trif luor octové' (0,4 ml) v dichlormethanu: (0,8 ml). Po míchání po 3 hodiny s*e teakční směs zahustí' a vznikne pevná látka, která se čistí prep.HPLG (YMC, S-10, ODS^-, 30 x 500 moj kolona) za eluce 30-90% vodným methanolem, obsahujícím 0,1 % kyseliny trifluoroctové, gradient během 30 minut. Frakce a produktem se zahustí a lyofilizací se získá titulní sloučenina (0,36 g, 23 %).

Elementární analýza pco °25®4Ο^Ι,,4θ4³2 0,73 H₂° * ²>° kyselina trifluoroctové vypočteno 45,48 % C, 5,72 % H, 7,31 % 1T nalezeno 45,48% C, 5,71 % H, 7,37 % N

HPLC: Rfc 19,85 minut (99 %), 10-90% vodný methanol s 0,2 % kyseliny fosforečné-pufrut, 30minut gradient, 1,5 ml/minuta,.

-143220 nm, Ο^θ (6,0 χ< 150 mat) kolona

IR: (KBř) 3435, 2924, 1437, 1682, 1636, 1208, 1134 cm’¹ MS': /M+hZ 525⁺ /<A/_d= -32® (o= 0,25, methanol)

Příklad 53· (S*, R* )-Ν²-//2-/ΓΓ- (2-AmÍno-3-merkaptopropyl )-3-methyl-Lvalyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-N^methyl-L-glutamin, trifluoracetátovď (1:2) sůl

HS h₂n

p C

A. N -/(1 ,1-Dimethylethoxy)karbony1/-K -methy 1-L-glutamin, 'v.

1,1-dimethylethylester

K roztoku 1-(1,1-dimethyl'ethyl)esteru kyseliny N-/(1,1 dimethylethoxy) kar bony l/-L-glutamové'. (3,03, g, 10 mmol) v? dichlormethanm (40 ml) se při teplotě místnosti pod argonem přidá benzotriazol-1-yloxytris-(dimethylamino)fosfoniumhexafluorofosfáť (4,42 g, 10 mmol) a diisopropylethylamin (7,1 ml, 40 mmol). P_o 15 minutách se přidá hydrochlorid methylaminu (2,01 g, 30 mmol). Po míchání přes noc.· (18 h) se reakční směs promyje postupně 1H kyselinou chlorovadí-144kov?ou; (30 ml) a hydrogenuhličitanem sodným (30 ml), Vodné promývací roztoky se extrahují odděleně chloroformem· (30 ml), suáí (síran horečnatý), filtrují a zahustí. Získaný olej se čistí sloupcovou chromatografií na silikagélu za eluce 30 % acetonu v hexanech a získá se sloučenina A (2,8 g, 88 %)..

MS (Cl), (M+H')⁺ = 317

B’. N -Methyl-L-glutamin-1 ,1 -dimethylethylester

K roztoku sloučeniny A (0,6 g, 1,9 mmol) v dichlormethanu (2 ml) při teplotě místnosti se pod argonem přidá 2,6lutidin (0,49 ml, 4,2 mmol) a potom terč.butyldimethylsilyltriflát (0,52 ml, 2,28 mmol). Po 30 minutách se reakční směs promyje nasyceným chloridem amonným (2 x 5 ml) a extrahuje chloroformem (5 ml). Organická vrstva se zahustí za vakua (produkt se částečně rozloží na silikagelové TLC destičce). Získaný olej se rozpustí v tetrahydrofuranu (3 ml) a 1 Ν'kyselině chlorovodíkové (2 ml). Získaná směs se intenzivně míchá 20 minut a promyje se etherem (5 ml). Vodná vrstva se zalkalizuje na pH 8,5 přídavkem nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, promyje se etherem (2 κ 5 ml) a zahustí se ve vakuu. Ke zbytku se přidá acetonitril a zahustí se (2 x 5 ml). K získané pevné látce se přidá chloroform a methanol (1:1) a nerozpustné anorganické látka se odfiltrují. Filtrát se zahustí ve vakuu a pevná látka se suspenduje v acetonitrilu (5 ml) a zahustí ve vakuu a získá se sloučenina 3' (0,37 g), která se použij#· bez dalšího čištění.

C. 3-Methyl-N-/(fenylmethoxy)karbonyl/-L-valin

K roztoku L-terc.leucinu (10,2 g, 77,6 mmol) ve vodném hydroxidu sodném (2N, 40 ml) při 0 °C se přidá benzylchloroformiát (Ι2*μ1 ml, 85,4 mmol) a hydroxid sodný (2N, 40 ml) stři dávě v 5 dávkách během 30 minut. Chladící lázeň se odstraní a po 1 hodině se pH směsi upraví na 10. Směs se extrahuje

-145etherem (2 x 50 ml). Vodná vrstva se ochladí na 0 °C a okyselí se (pIí 2) 5N kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje se etherem. (3 x 70 ml). Organická vrstva se suší (síran hořečnatý) a zahuštěním se získá' (ve vakuu) lepkavý olej sloučeniny C (18,2 g, 88 %)

MS (CI): (M+H)⁺= 266⁺

D. (S)—1, 2,3,4-Tetrah.ydro-2-/3-methyl-N-/(f enylme thoxy )karbonyl/-L-valyl/-3-isochinolinkarboxylová kyselina, methylester

K roztoku sloučeniny C (5,31 g, 20 mmol) v dichlormethanu (80 ml) pří 0 °G pod argonem se postupně přidá diisopropylethylamin (10,6 ml, 60 mmol), benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino)fosfonium-hexafluorofosfát (5,08 g, 20 mmol) a hydrochlorid methylesteru (S)-1,2,3,4-tetrahydroisoohinolin-3-karboxylové kyseliny (5,68 g, 25 mmol).

Reakční směs se nechá ohřát na 5 °C během 2 hodin a potom se míchá přes noc. (16 hodin. Směs se promyje⁷· 1N kyselinou chlorovodíkovou, nasyďeným hydrogenuhličitanem sodným a solankou (vždy 50 ml). Organická vrstva se suší (síran hořečnatý), filtruje a zahuštěním se získá olej. Přečištěním rychlou chromatografií na sloupci silikagelu za eluce 20 % ethylacetátu v hexanech se získá sloučenina D (4,0 g, 45 %). MS': (CI) (M+H)⁺ = 439*

E. (S)-1,2,3,4-Tetrahydro-2-/3-methyl-N-/(fenylmethoxy)karbony l/-L-valyl/-3-isochinolinkarboxylová kyselina

K roztoku sloučeniny D (830 mg, 1,9 mmol) v tetrahydrofuranu/methanolu (4 ml/5 ml) při teplotě místnosti se přidá hydroxid lithný (1N“, 1,9 ml). Po 1 hodině se přidá hydroxid lithný (1N, 1,5 ml). Po 2 hodinách se přidá hydroxiď sodný (IN, 1,9 ml). Po ještě další hodině se rozpouštědlo odstraní a zbytek se rozdělí mezi 1N kyselinu chlorovodíkovou

-146a ethylacetát (10 ml vždy). Organická vrstva se suší (síran hořečnatý) a zahuštěním ve vakuu· se získá sloučenina E (820 mg).

F. (R* J-W^-wiethyl-N^-//] ,2,3,4-tetrahydro-2-/3-methyl-N/ (fenylmethoxy)karbonyl/-L-valyl/-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-glutamin, 1,1-dimethylethylester & roztoku sloučeniny B' (370 mg, 1,71 mmol) a sloučeniny

E (800 m&, 1,88 mmol) ve směsi dimethylformamidu:tetrahydrofuranu (2 ml: 1 ml) při 0 °G pod argonem se přidá 1-h.ydrox.ybenzotriazol (290 mg, 1,9 mmol) a potom hydrochlorid

1-(3.-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (363 mg, 1,9 mmol). Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti během 1 hodiny a potom se míchá přes noc· (18 hodin). Směs se 2zředí ethylacetátem (10 ml) a promyje se IN kyselihou chlorovodíkovou, nasyceným hydrogenuhličitanem sodným a solankou (vždy 10 ml). Přečištěním na sloupci silikagelu chromatograficky za eluce 30 % acetonu v hexanech se získá bílá pěnovítá pevná látka- sloučenina F (585 mg, 55 %)

MS (Cl) (M+H)⁺ = 623

G. (S*,R*)-N²-//2-/N·-/2-//(1 ,1 -Dimethylethoxy)karbon.yl/amino/-3-/( trif enylmethyl )thio/propyl/-3-methyl-L-valyl/c ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-N -methyl-Lglutamin, 1,1-dimethylethylester

K roztoku sloučeniny F (300 mg, 0,48 mmol) v ďichlormethanu (2 ml) se při teplotě místnosti pod argonem přidá triethylsilan· (115 /ul, 0,72 mmol), diisopropylethylamin (14 yul, 0,1 mmol) a octan paladia (11 mg, 0,05 mmol). Vytvoří se černá sraženina. Po 1 hodině indikuje· TLC analýza na silikagelu nepřítomnost sloučeniny F a přítomnost méně polárního produktu, který se částečně na TLC desce rozkládá. Směs se filtruje přes Celite^R a filtrát se zahustí ve vakuu. Produkt se použije bez dalšího čištění»

-147K roztoku zbytku (0,48 mmol celkem) v methanolu (l,5 ml) při teplotě místnosti se přidá kyselina octová (0,5 ml). Roztok aldehydu sloučeniny IF (447 mg, 1,0 mmol) v methanolu (1,5 ml) se připraví'. Po 20 minutách se přidá výše uvedený roztok aldehydu (0,8 ml). Po 5 minutách se přidá kyanoborohydrid¹ sodný (20 mg, 0,33 mmol). Ve dvou podílech se během 20 minutového intervalu přidá zbylý roztok aldehydu a kyanoborohydridu sodného (vždy 20 mg). Po dalších 20 minutách se těkavé látky odstraní ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a nasycený hydrogenuhličitan; sodný (vždy 20 ml).. Vodná vrstva se oddělí a extrahuje se ethylacetátem (15 ml) a organické vrstvy se spojí, suší (síran hořečnatý) a zahustí ve vakuu. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu za eluce 80 % ethylacetátu v hexanech; na malé koloně, získá se sloučenina G (310 mg).

MS (FAB): (M+H)⁺= 920

Η. (δ^,β*)-N^-//2-/N-(2-Amino-3-merkapťopropyl)-3-methyl-Lvalyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-N^methyl-L-glutamin, trifluoracetátová (1 :2) sůl

K roztoku sloučeniny G (270 mg, 0,29 mmol) v/ suchém dichlormethanu (2 ml) se pod argonem přidá kyselina trifluoroctová (2 ml) a triethylsilan, (0,5 ml). Po 2 hodinách se těkavé látky odstraní ve vakuu. Ke zbytku se přidá vodný methanol (50%, 1,5 ml zbavený kyslíku). Bílá sraženina se odfiltruje přes bylonový filtr a filtrát se čistí preparativní RP HPLC (EM Science E8, 50 x 250 mm, S12 lichrosféry) za eluce 30 až 74% vodným methanolem, obsahujícím 0,1 % kyseliny trifluoroctové:. Vhodné frakce se spojí a lyofilizují.

Získá se titulní sloučenina (177 mg, 75 %)·

M3T (FAB?): (M+H)⁺ = 522

IR (KBr) 3432, 1678, 1647, 120, 1138 cm¹ /,^/^= -15° (c= 0,92, methanol)

-148HPLC: HPLC: (YMC S3 ODS 6 x 150 mm, Cl 8 kolona při 60 °C), 70-90% vodný methanol, obsahující 0,2 % kyseliny fosforečné, retenční čas 13,9 minut.

Elementární analýza pro ^25^39^5^5⁵ ·2>31 kyselina trifluoroctová. 1,39 voda vypočteno 43,95 % C, 5,48% H, 8,65% N, 3,96% S, 16,26% P nalezeno; 43,95 % C, 5,29% H, 8,68 % řF, 3,98% S:, 16,26% F

Příklad 54 (S*_r R* )-^2-.//2-/^-(2-Amino-3-merkaptopropyl)-3-methyl-Lvalyl'/-1 ,2,3,.4-tetrahydro-3-isochinolinyl’/karbonyl/-Lglutamin, trifluoracetátová (1 :2) sůl

A. (R*)-íf²-//i ,2,3,4-Tetrahydro-2-/3-<neth.yl-N-/(fenylmeth®xy )karbonyl/-L-valyl/-3-isochÍnolinyl/karbonyl/-Lglutamin, 1, 1-dimethylethyles ten*

Sloučenina A (1,1 g, 87 %) se připraví jako bílá pevná látka použitím sloučeniny 53E (0,9 g, 2,1 mmol) a L-glu-149taminu -terč.butylesteru-hydrochloridu (0,501 g, 2,1 mmol) metodou popsanou v; příkladu 32F). t.t.. 60 až 68 °C

B. (^)-1^2-//1 ,2,3,4-Tetrahydro-2-(3-methyl-L-val.yl/-3isochinolinyl/karbonyl/-L-glutamin, 1,1-dimethylethylester, hydrochlorid

Hydroxid palladia na uhlí (10%, 0,091 g) se přidá k roztoku sloučeniny A (0,914 g, 1,5 mmol) v tetrahydrofuranu (9,1 ml) s 1 Ν' kyselinou chlorovodíkovou· (1,5 ml). Připojí se k reakční směsi balónek s vodíkem a směs se míchá při teplotě místnosti 3 hodiny. Reakční směs se zfiltruje p

přes Celit®· a zahuštěním za vakua se získá' sloučenina 3 (0,767 g, 100 %), která se použije bez dalšího čištění, t-t.: pění a uvolňuje plyn nad 128 C.

C. (3*,.Κ^χ)-^2-//2-/Ν-/2-//(1 ,1 -Dimethylethoxy)karbonyl/amino/

3-/(trif en.ylme thyl) thio/propy l/-3-methyl-L- vály l/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochÍnolinyl/karbonyl/-L-glutamin,

1,1-dimethylethylester

Kyanoborohydrid sodný (0,077 g, 1,22 mmol) se po částech přidá k roztoku sloučeniny 8 (0,464 g, 0,91 mmol), sloučeniny 1F (0,609 g, 1,4 mmol) a kyseliny octové (0,135 ml) v methanolu (4,5 ml) a míchá se při teplotě místnosti 2,25 hodiny. Reakce se přeruší vodou (100 ml) a extrahuje se dichlorme thanemi (3 x 100 ml). Spojené organické extrakty se suší (síran hořečnatý), filtrují a zahustí se za vakua. Zbytek se čistí rychlou chromatografií (eluce' ethylacetátem) a získá se sloučenina C (0,55 g, 67 #) jako guma.

MS: (M+H)⁺ 906

-1 50D. (S * R*)-N²-//2-/N-(2-Amino-3-nierkaptOpropyl)-3-íaethyl-Lvalyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isoohinolinyl/karbonyl/-Lglutamin, trifluoracetátová (1 :2) sůl

Kyselina trifluoroctová (5 ml, 65 mmol) se přidá k roztoku sloučeniny G (0,487 g, 0,538 mmol) a triethylsilanu (0,843 ml, 5,38 mmol) v dichlormethanu (5 ml) při 0 °G, ohřeje se na teplotu místnosti a míchá 3 hodiny. Přidá se chloroform (10 ml) a reakce se zahustí za vakua. Zbytek se trituruje· s hexanem· (hexanová vrstva se odloží) a zahustí se za vakua.

Zbytek se čistí preparativní HPLC (EM S-1 2 Lichrosphere Select 3, 50 x 250 mm, 220 nm, 40 ml/minutu, gradient 10-90% vodný methanol s 0,1 % tetrahydrofuranu). Po zahuštění vhodných frakcí se zbytek rozpustí ve vodě, filtruje a lyofilizuje. Získá se· titulní sloučenina (0,28 g, 71 %)· t»t.: rozklad nad¹ 97 °G

TLG: R_f= 0,55 (6/3/1 n-propanol/hydroxid amonný/voda, vizualizace síranem· ceričitoamonným)

MS’: (M+H)⁺ 508

IR: (KBfr) 1431, 1674, 2972, 3437' cm'¹

Elementární analýza pro ^C28^R39^N5°9^SF6*¹voda vypočteno? 44,54 % C, 5,49 % H, 9t;28 % Ν', 4,25 % S, 15,10 % F nalezeno 44,56 % C, 5,17 % H, 9,26 % N, 4,23 % S, 15,48 % F ΛΧ/_η= -17’,6° (c= 0,33, methanol) ¹H(DMSO): 1,00 (s, 9H), 1,81-1,96 (m, 2H), 2,08-2,13 (m,2H), 2,35-2,47 (m, 2H¹), 2,72 (š m, 1H), 2,96 (š m, 2H), 3,34 (ám, 2H), 4,18-4,20 (m, 1H), 4,52-4,59 (m, 1H), 4,85-5,02 (m, 3H), 7,17 (s, 4H).

-151Příklad 55 (S*„R* )-N²-//2-/N- (2-Amino-3-merkaptopropyl )-3-methyl-Lvalyl/-1 ,2,3,4-teťrahydro-3“iscrchinolinyl/karbonyl/-L-glutamin, methylester, trifluoracetátová (1: 2) sůl

Α.ΓΓ²-/(1 ,1 -Dimethylethoxy)karbonyl/-L-glutamin, methylester

1-Methy 1-3-nitrn-l-ni trasoguaniďin: (9 g, 61,0 mmol) se po částech přidá ke směsi (1:1) diethyletheru/50% vodného' hydroxicPa draselného (200 ml) při -10 °C. Organická vrstva se dekantuje a suáí naď pevným hydroxidem draselný, V oddělené lahvi se rozpustí N -/(1 _r1 -dimeth.ylethoxy)karbony 1/-Lglutamim (5,0 g, 20,3. mmol) v tetrahydrof urania (K5 ml) při -10; °C. Po částech se přidá diazomethanový roztok k roztoku kyseliny až ďtx· přetrvání žlutého zbarvení. Reakce se přeruší kyselinou octovou (3 ml), zředí se diethyletherem (100 ml) a promyje se 10% hydrogenuhličitanem sodným (100 ml). Vodná vrstva se extrahuj© ethylacetátem¹. (3 x 150 ml) a spojenéí organické extrakty se suší (síran hořečnatý), filtrují a zahustí za vakua. Získá se? sloučenina A (2,0 g, 3θ %)

-1 52která se použije bez dalšího čištění.

MS: (M+H)⁺ 26J

B. L-Glutamln, methylester, hydrochloriď

Chlorovodík v dioxanui (4M, 20 ml) se přidá ke sloučenině A (2,0 g, 7,7 mmol) a míchá se při teplotě místnosti 0,5 hodiny. Reakční směs se zahustí za vakua a získá se sloučenina B (1,4 g·, 93 %) ·

MS: (M+H)⁺ 161

C. (R*)-N²-//1,2,3,4-Tetrahydro-2-/3-methy1-N-/(fenylmethoxy )karbonyl/-L-valyl/-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-glutamin, meth.ylester

Sloučenina C (1,05 g, 88%) se připraví jako bílá pevná látka za použití sloučeniny B (0,26 g, 3,2 mmol) a sloučeniny 52E (0,90 g, 2,1 mmol) metodou popsanou v příkladu 32F. t.t. 55 až 60 °C

D. (R*)—N²—//1,2,3,4-Tetrahydro-2-(3-methyl-L-valyl)-3isochinolinyl/karbonyl/-L-glutamin, methylester, hydroohlorid

Sloučenina D (0,715' g, 91 %) se připraví použitím sloučeniny C (0,95 g, 1,68 mmol) metodou popsanou v příkladu 548.

t.t.: pění a uvolňuje plyn nad¹ 100 °C

E. (S^x,R^x)-N²-//2-/íT-//(1,1-Pimethylethoxy)karbonyl/amino/3-/(trif enylmethyl) thio/pΓOpyl/-3?-methyl-L-valyI/1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-glutamin, methylester

-153Sloučenina Ε (1,25 g, 70 %) se připraví jako guma za použití sloučeniny D (0,645 g, 1,33 mmol) a sloučeniny 1F (0,925 g', 2,07 mmol) metodou popsanou v příkladu 54C.

F. (S³* ,R* )-N.2-//2-/N·- (2-Amino-3-merkaptopropyl )-3-methyl-Lvalyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyI/karbonyl/-Lglutamin, methylester, trifluoracetátová (1 :2) sůl

Titulní sloučenina (0,291 g, 60 % ) se připraví použitím sloučeniny E (0,55 g, 0,649 mmol) metodou popsanou v příkladu? 54D.

t.t. 67' až 77 °C

TLC: R^=- 0,73 (6/3/1 n-propanol/hydroxid amonný/voda, vizualizace síranem ceričitoamonným)

MS: (M+H)⁺ 522

IR (KBr) 1431, 1674, 2972, 3437 cm¹

Elementární analýza pro ¢25^39^50582. 2,45 kyselina trifluoroctová. 0,59 voda vypočteno? 44,25 % C, 5,29 % B, 8,63 % N, 3,95 % S, 17,20 % F nalezeno, 44,25 % C, 5,20 % H, 8,51 % B, 3,θ0 % S, 17,21 % F

-22,7° (c= 0,30, methanol) ¹H’DMSO): 1,00 (s, 9H), 1,79-1,99 (m, 2H), 2,01-2,13 (m, 2H), 2,44 (š my 2Hj, 2,72 (š m, 3H), 2,97 (š m, 1H), 3,33 (á m·,

1H), 3,51, 3,55 (s, 3B), 4,20-4,28 (m, 1H), 4,51-4,60 (m, 1H), 4,85-4,96 (m, 2H), 5,02-5,04 (m, 1H), 7,15-7,18 (s, 4H)

Příklad 56 /R^x/R* (S^íť )//-Ni-//2-/(2-AminoA3-merkaptopropyl)amino/-3methylbutal/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/Ni-me thy1-L-methionin

-154-

A. 17-/(1,1-Dimethylethoxy)karbonyI/-N-methyl-L-methionin, fenyltne thyles ter

Hydrid sodný (3,37 g 60% suspenze v minerálním oleji., 84,2 mmol) se rozmíchá v hexanu (3 x 50 ml) a nechá usadit. Hexan se oddekantuje a tetrahydrofuran (100 ml) se přidá. Přidá se roztok NT-terc..butyloxykarbonyI-L-methioninu. (7„00 g, 28,1 mmol) v tetrahydrofuranu (120 ml) k roztoku hydridu sodného při 0 °C a zpracuje se s methyljodident (12,0 g, 5,24 ml,. 84,2 mmol) po kapkách. Směs se míchá při teplotě místnosti 20 hodin, zředí se ethylacetátem (100 ml) a přeruší vodou? (50 ml). Organická vrstva se oddělí a extrahu>je nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (3 x 100 ml) a spojená hvdrogenuhiičitanová vrstva se okyselí na pH 2 použitím hydrogensíranu draselného. Ke kyselému roztoku se přidá nasycený chlorid sodný a produkt se extrahuje- ethylacetátem (3.x 100 ml). Spojené ethylacetátová promývací roztoky se suší (síran hořečnatý) a zahuštěním se získá' požadovaný produkt jako slabě nažloutlý olej^: (5,43 g, 73 %), MS: (M+H)⁺ 264⁺.

-155Benzyl bromid! (1,43 g,· 1,00 ml, S,36 mmol) se přidá k získanému oleji (2,00 g, 7,60 mmol) a uhličitanu draselnému ¢-1,16 g, 8,36; mmol) v dimethylformamidu (12 ml). Směs se míchá 48 hodin a rozdělí se mezi vodu’ (100 ml) a ethylacetát (100 ml). Ethylacetátová vrstva se promyje nasyceným hydrogenuhličitanem sodným· (3 x 50 ml), vodou (3 x 50 ml) a solankou (2 x 50 ml), suší se (síran hořečnatý) a zahuštěním se získá' sloučenin sa A jako čirý olej; (2,32 g, 86 %), MS (M+H)⁺ 3.54⁺.

3’. (R^w)-N-//2-/(1 ,1 -Dimethylethoxy )karbonyl/-1 ,2,3,4tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-N-methyl-Lmethionin, fenylmethylester

Sloučenina A (1,5 g, 4,234 mmol) se míchá v· dimethy 1sulfidu (0,6 ml) a kyselině chlorovodíkové' v dioxanu (10 ml) po 30 minut. Směs se zahustí, rozpustí se v methylenchloridu (30 ml) a zahustí. T_pnto postup se opakuje pětkrát a získá se hydrochlorid aminu jako čiré skla. Tento amin se rozpustí v methylenchloridu: (20 ml) a ochladí na 0 °C. Přidá se terc.butyloxykarbonyl-L-1,2,3,4.terahydroisochinolin-3karboxylová kyselina (1,76 g, 6,35 mmol), bis-(2-oxo-3-oxazo lidinyl)-fosforný chlorid⁵ (3,23 g, 12,7' mmol) a N,N-diisopropyrlethylamin (1,64 g, 2,22 ml, 12,7 mmol). Reakční směs se míchá 24 hodin při 0 °G. Přidá se další' bis-(2-oxo-3oxazolidinyí)-fosforný chlorid’ (1,61 g, 6,35 mmol) a N,lidi isopropyle thy lamini (820 mg, 1,1 ml, 6,35 mmol) a reakční směs se míchá dalších 24 hodin při 0 ®C. Reakční směs se zahustí a chromatografuje³ (silikagel, 4,1 x 20 cm, 40 % ethylacetát, 60 % hexan). Frakce, obsahující požadovanou sloučeninu se spojí a zahustí. Získá s? sloučenina S jako čirý oleji (2,4 g, 99 %).

(M+H)* 513⁺

-156C. (R*,R^H)-N-//2-/2-/2-//(1,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/ 3-methylbutyl/-1 ,2,3,4- tetrah.ydr o-3-isochinol inyl/kar bony l/-N-methyl-L-methionim, feny Ime thylester

Sloučenina C (800 mg, 50 %) se připraví jako čirý oleo“ použitím sloučeniny B (1,4 g, 2,64 mmol) a sloučeniny 5B (770 mg, 3,84 mmol) ve dvoustupňovém postupu popsaném v příkladu· 7B.

(M+Hj⁺ 590⁺

D. /R*/R*(S*-//-tf-//2-/2-/2-//(1 ,1-Dimeth.ylethoxy)karbonyl/amino/-3-/( trif eny Ime thyl) thio/pr op,yl/-3-me thyl but,yl/1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-N-methyl-Lmethionire, fenylmethylester

Sloučenina D (150 mg, 16 %) se připraví jako čirý olej použitím sloučeniny C (600 mg, 1,00 mmol) a sloučeniny 1F (890 mg, 2,00 mmol) ve dvoustupňovém postupu popsaném v příkladu 7B.

E. /R*/R*(S*)//-N-//2-/(2-Amino-3-merkaptopropyl)amino/3-methylbutyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-is ochinolinyl/-karbony l/-R-me thyl-L-me thi onin

Titulní sloučenina (28 mg, 19 %) se připraví za použití sloučeniny D (150 mg, 0,161 mmol) ve dvoustupňovém postupu popsaném v příkladu? 1H.

/.^/25L „20,Q° (c= 0,1, methanol)

MS (M+H’)⁺ 497⁺

Elementární analýza pro 2,70 kyselina trifluoroctová . 5,50 voda vypočteno 39,08 % C, 5,99 % H, 6,20 % R, 17,03 % F nalezeno 39,12 % C, 5,38 % K, 6,22 % R, 17,03 % F

-157NMR (CDjOD, 270 MHz) d (ppm) 7,19 (4H, m), 4,28 (4H, m)_r 3,46 (1H, m), 3,32 (2H, m), 2,82 (2H, m), 2,61 (2H, m),

2,49 (2H, m), 2,25 (1H, m), 2,12 (1h, m), 2,11 (3H, se) ,

2,01 (3H, s), 1,97 ( 1H, m), 0,88 (6H, m)

Příklad 57 (S*, R^)-N-//2-/2-/N- (2-Amino-3-merkaptoprop.yl )meth.yl-amino/

3-methylbutyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-Ísochinolin,yl/-karbonyi/-L-methionin, trifluoracetátová (í.*3) sůl

A. (s)-(1-FormyI-2-methyIpropyI)methyl-karbamová kyselina, 1 ,1 .čfime thyl ethylester

Sloučenina A (1,8 g, 58 %) se připraví jako· čirý olej' použitím N²-/(1,1-dimethylethoxy)karbonyl/-N-methoxy-N,Nudíme thyl-L-valinamidu (4,0 g, 14,62 mmol) metodou popsanou v příkladu· 1F.

(M+H)⁺ 522⁺

-158B; (R* )-Ν-//2-/Ν-/(1,1-Dimethylethoxy)karbonyl/methylamino/3-methylbutyl/-1,2,3,4-tetrah,ydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Sloučenina B (1,9 g·, 60 %) se připraví jako čirý olej použitím· sloučeniny 1Λ (6,0 g, 14,22 mmol) a sloučeniny A (1,8 g, ®,43 mmol) ve dvoustupňovém postupu popsaném v příkladu 7B.

(M+H)⁺ 522+

0. /R*/R*(S* )//—N-//2-/2-/N-/2-//( 1 ,1-Dimethylethoxy)karbonyl/amino/-3-/( trifenylmethyl)thio/propyl/meth.ylamino/3-methylbutyl/-1,2,J,4-tetrahydΓO-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Sloučenina C (1,1 g, 35 %) se připraví jako čirý olej použitím sloučeniny B (1,9 g·, 3,64 mmol) a sloučiny 1F (8,4 g, 18,8 mmol) ve dvoustupňovém· postupu popsaném v příkladu 7B.

(M+H)⁺ 853⁺

D. (S*)-N-//2-/2-/N-(2-Amino-3-merkaptopropyl)methylamino/

3-methylbutyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, trifluoracetátová (2:3) sůl

Titulní sloučenina se (380 mg) připraví za použití sloučeniny C (500 mg, 0,587 mmol) metodou popsanou v příkladu 1H.

t.t. 113 až 114 °C, čistota 98%, /X/²⁵= -38,0^α (c= 0,1, methanol), MS (M+H)⁺ 497⁺

Elementární analýza pro 1,90 kyselina trifluoroctová. 1,00 voda:

-159vypočteno 45,72 % 0, 5,92 % Η, 7,67 % N nalezeno 45,75 % C, 5,94 % H, 7,99 % Ν' ¹H-NMR (CDjOD, 400 MHz) ď (ppm) 7,27 (4H, m), 4,64 (1H, m), 4,39 (1H, m), 4,29 (2H, m), 3,56 (1H ,m), 3,39 (3H, ot),

3,01 (2ff_ř m), 2,85 (4H, m), 2,60 (2H, m), 2,56, <3H, s), 2,18 (1H , m), 2,09 (3H, s), 1,94 (2H, m), 0,99 (3H, d, J=6,8 Hz), 0,82 (3H, ď, 6,4 Hz)

Příklad 58 (_S*,R^K)-N-//2-/N-Acetyl-N-(2-amino-3-merkaptopropyl)-Lvalyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin, trifluoracetátová (1:1) sůl

A. (S*, R* )-N’-//2-/N’-Acetyl-N-/2-//(1 ,1-dimethylethoxy )karbonyl/-amino/-3-/(trifenylmethyl)thí©/propyl/-L-valyl/1 ,2,3,4-1e trahydro-J-is ochinolinyl/karbony1/-L-me thi0nin, methylester — 160—

Sloučenina 1G (700 mg, 0,821 mmol) se míchá v acetanhydriďui (5,41 g, 53, θ mmol) a N,N-diisopropylethylaminu· (3,70 g·, 5,0 ml, 28,6 mmol) 24 hodin při teplotě místnosti. Směs se zahustí, rozpustí v methylenchloridu (30 ml) a zahustí'. Posledně uvedený postup se opakuje pětkrát a získá se surový produkt jako hnědý olej (700 mg, směs).

MS (M+H)⁺ 895⁺

B. (S*,R*)-řT-//2-/N-Aceťyl-N-(2-amino-3-merkaptoprop,yl)-Lvalyl/-1 ,2,3,4-tetrah,ydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin, trifluoracetátová (1:1) sůl

Titulní sloučeniny (41 mg) se připraví za použití sloučeniny A (700 mg,, 0,82 mmol celkem) ve dvoustupňovém postupu popsaném v/ příkladu 1H. Čistota 98 %, /«X/p^s -38,0 (c= 0,V, methanol), MS (M+H)⁴' 539⁺

Elementární analýza pro 1,10 kyseliny triflucroctové .

1,30 vody vypočteno.' 47,52% 0, 6,11 % H, 8,1 5^: % N nalezeno. 47,52 % 0, 6,07 % H,. 8,09% N ¹H-NMR (CD-jOD, 270 MHz) &(ppm) 7,19 (4H, m), 5,47-5,13 (2H, 4,58^; (2H, m), 4,45· (2H_r m), 4,20 (1H, m), 3,92 -3,58 (2H, m), 3,42 (2H, ni), 3,18 (1H, m), 2,84 - 2,55 (2ff, m), 2,43 (1H_r m), 2,31 (1H,. m), 2,11 (3H, s), 1,98 (3H, m), 1,85 (IH, m), 0,75-1 ,13 (6H,. m).

Přiklaď 59 (S^X ,R^K )-N-//2-/N-/3-24erkapto-2- (methylamino )propyl/-L-valyl/

1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, trifluoracetátová (2:3) sůl

-161-

A. N.-Methyl-L-cysťein ^Jak je v práci Blodeau-a a spol., Can.J.Chem.,45, 49, 1967', uváděno, přidá se kovový sodík k roztoku kyseliny (R)4-thiazolidínkarboxylové'· (22,0 165,2 mmol) v kapalném amoniaku? a ochladí se na lázni aceton/suchý led na -30 ®C. Získá se modře? zbarvený roztak, který přetrvává 20 minut. Reakce se přeruší' chloridem amonným' až jo reakšhí směs čirá. Amoniak se odpaří prodem dusíku a získá se^- purpurový· zbytek,. který se okyselí koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou na pH =0. Reakční směs se zahustí a extrahuje se horkým ethanolem: (2 x 50 ml) a extrakty se zahustí, získá se: sloučenina A (19·,θ g, 89 %).

MS:/M+H/⁺ 136*

Β» N-Methyl-S-(trifenylmethyl)-L-cystein

Tritylalkohol (1,93 g, 7,39 mmol) se přidá' k roztoku sloučeniny A (1,Q0 g, 7,39 mmol) v kyselině trifluoroctové (10 ml) a míchá se pod argonem·. Reakční směs se zahusti, zby tek se triturujee s hexanem? a extrahuje trichlormethanem (2x10 ml). Organická vrstva se zahustí a získá se sloučenina θ’ (1,6 g, 57^z%). TLC:R_f. 0,16 (ethylacetát) vizualizovánu UV“, molybdenanem ceričitoamonným.

-1620. N.—/(1 ,1-Dimethylethoxy )karbonyl/-N-methy 1-S-(trifenylmethyl )-L-cystein

Di-terc-but.yldikarbonát (1,50 g, 6,88 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml) se přikape k roztoku sloučeniny 3 (2,0 g, 5,29 mmol) v tetrahydrofuranu a vodném hydrogenuhličitanu sodném (Γ0 ml, nasycený) při 0 °C. Reakce se ohřeje? na teplotu místnosti a míchá se 15 hodin. Reakční směs se nalije do směsi solanky (25 ml) a methylenchloridu (50 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (2 x 50 ml).. Spojené organické vrstvy se promyjí 10% hydrogensíranem draselným (2 x 20 ml) a solankou (25 ml) a suší se nad síranem hořečnatým·, fiůtrují a zahuštěním se získá olej, který se čistí' na silikagelavé rychlé koloně za eluce trichlormethanem/methanolem/kyselinou octovou (9:1:9,1) a získá se sloučenina G (1,82 g, 72%).

MS: /M-H/~ 476

D. (R)-N-/1-FormyI-2-/(trifenylmethyl)thio/e thyl/me thylkarbamová kyselina, 1,1-dimethylethylester

Sloučenina D (0,55 g, 57 %) se připraví použitím sloučeniny 0. (1,0 g, 2,09 mmol) ve dvoustupňovém postupu jak je popsáno v příkladu 1E a F.

MS: /M+H/⁺ 521 ⁺

Ε. (S^m,R*)-N-//2-/N-/2-/N-/(1 ,1-Dimethylethoxy)karbony1/methylamino/-3-/( trifenylmethyl )thio/prop.yl/-L-valyl/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Kyanoborohydrid sodný (0,023 g, θ,37 mmol) se přikape jako roztok v methanolu (0,5 ml) k míchanému roztoku slou-163čeniny D z příkladu 1 (0,17 g, 0,41 mmol) a sloučeniny D (0,14 g’, 0,31 mmol) v kyselině octové (1 ml) a methanolu (1 ml) při 0 °'C. Směs se pomalu ohřeje na teplotu místnosti a míchá se 15 hodin. Reakční směs se zředí nasyceným hydrogenuhliči taném· sodným při 0 °C a extrahuje se ethylacetátem (3 x 20 ml). Spojené extrakty se promyjí' solankou a suší se nad síranem hořečnatým·, filtrují a zahustí, Produkt se čistí na silikagelové rychlé koloně za eluce 7/3, 1/1 hexanem/ethylacertáteav. Získá se sloučenina E (0,141 g,

%).

MS: /M+H/⁺ 867⁺

IR: (KS'r) 2926, 1636, 1165, 702 cm’¹

F. (S*, R^if,)-N-//2-/2-/N^!-/3-Merkapto-2- (methylamino )-propyl/L-valyl/-1,2,3,4-tetrah.ydro-3-isochÍnolinyl/karbonyl/-Lmethionin, trifluoracetátová (2:3) sůl

Hydroxid sodný (1N, 0,32 ml., 0,012 g, 0,31 mmol) se přidá k roztoku sloučeniny E (0,23, g, 0,26 mmol) v methanolu' (2 ml). Po míchání po 3 hodiny při teplotě místnosti se reakce přeruší' 10% kyselinou chlorovodíkovou (15 ml) a ethylacetátem (20 ml).. Vrstvy se oddělí a vidná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2 x 20 ml).. Spojené organické vrstvy se promyjí 10% kyselinou chlorovodíkovou (1 x 10 ml) a solankou (1 x 20 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, filtruje a zahuštěním se získá kyselina. Produkt se čistí prep HPLC (YMC S-10, ODS, 30 x 500 mm, C18 kolona) za eluce 10-90% vodným methanolem, obsahujícím· 0,1 % kyseliny trifluoroctové', gradient během 30 minut. Frakce s produktem se zahustí a lyofilizují (0,13 g, 59 %).

Pevná látka se převede na sloučeninu F (0,072 g, 39 %) použitím metody⁷popsané v příkladu 34D·

-1 64Elementární analýza pro? ^G2 4^38^4^^2 ‘ ^>35 H^O. 1,6 kyselina trifluoroctová vypočtena 46,71 % C, 5,81 % H, 8,01 % R nalezeno- 46,71 % C, 5,88% H, 7,84% N

TLC: R^ 0,32 (9/1/0,1 trichlormethan/methanol/kyselina octová), vizualizováno UV, PMA.

HPLC Rt 17,15 minut (99 %), 10-90% vodný methanol s 0,2 % pufru kyseliny fosforečné, 30 minut gradient, 1,5 ml/min,

220 nm_ř C18 (6,0 x 150 mm) kolona.

IR: (K3r) 2421, 1670, 1435, 1202, 1136, 721 cm¹

MS: /M+H/⁴· 51 1 ⁺ /<Á/-q= -25,5° (c= 0,2, methanol)

Příklad 60 (S* ,R* )-H-//1 , 2,3,4-Tetrahydro-2-/R-/3-merkapto-2-/(f enylmethyl) amino/propyl/-L-valyl/-3-isochinolin.yl/karbonyI/-L-inethionin, trifluoracetátová' (2:3) sůl

-165A. (S*,R*)-N-//1 ,2,3,4-Tetrahydro-2-/Tí-/2-/(fen.ylmethyl)amina/-3-/(trifenylmethyl)thio/propyl/-L-valyl/-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester

Sloučenina 1G (400 mg, 0,469 mmol) se míchá v kyselině trifluoroctová (7,5 g-·, 5,0 ml, 65,8 mmol) a dichlormethanu 30 minut. Směs se zahustí, rozpustí v methylenchloridu (50 ml) a zahustí. Posledně uvedený postup se opakuje pětkrát a získá se čiré sklo;. Toto a benzalčehyd (50 mg, 0,05 ml, 0,469 mmol) se rozpustí v methanolu (10 ml) a ledové kyselině octové (0,2 ml).. Po částech se během 15 minut přidá kyanoborohydrid sodný (30 mg, 0,469 mmol). Reakční směs se míchá 16 hodin. Směs se ochladí na 0 °C a pomalu se přidá nasycený hydrogenuhličitan sodný (10 ml) Produkt se pak extrahuje do ethylacetátu (60 ml). Ethylacetátová vrstva se promyje vodou (100 ml) a solankou (100 ml) a suší (síran hořečnatý), zahustí a chromatografuje (silikagel, 4,1 x 15 cm, 95% dichlormethan, 5% methanol). Frakce, obsahující' požadovanou sloučeninu se spojí a zahuštěním se získá sloučenina A jako čirý olej (270 mg, 68 %).

(M+H)⁺ 843⁺

B, (S* ,R*)-N-//1,2,3,4-Tetrahydro-2-/N-/3-merkapto-2-/(fenyl methyl)amino/propyl/-L-valyl/-3-isochinolinyl/karbonyl/-L methionin, trifluoracetátová (2:3)súl

Titulní sloučenina (40 mg) se připraví za použití sloučeniny A (270 mg, 0,32 mmol) ve dvoustupňovém postupu popsaném v příkladu 1H.

čistota >-94%, /°</p⁵= -18,0° (c= 0,1, methanol)

MS (M+H)⁺ 587*

Elementární analýza pro 1,69 kyselina trifluoroctová.2,18 voda:

-166vypočteno 48,97% ¢, 5,91 % Ε, 6,84 % N nalezen® 48,96 % C, 5,57% H, 6,71 % N

1E-NMR (CDjODj	, 270	MEz) c> (ppm) 7,	42 (5H,	m), 7,	21 (4Er m),
4,93. (1H, m),	4,73-	(1H,	m),	4,51	(2H, m),	4,28	(1H,	m;),
3,52 (1H',. m),	3,43	(1H,	m),	3,18	(4Hr m),	2,87	(3H,	m),
1,98 (2H, m),	1,94	(3H,	s),	1 ,87	(2H, m),	1 ,67’	(1 H,	m),
1 ,06 (3H, d),	0,97	(3H,	d)
Příklad 61

(s\R®)-N-//2-/N-/2- (Acetylamino )-3-merkaptopropyl (-Lvalyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyI/karbonyl/-Lmethionin, trifluoracetátová (4:5) sůl

A. (S*, R*)-^íí-//2-/N'-/2-Aniino-3-/ (trif enylme thyl) thio/pr opy l/-L- vály 1/-1 ,2,3,4- tetrahydro-3-isochinolin.yl/karbonyl/-I*-methionin, methylester

Sloučenina 1σ (230 mg, 0,469 mmol) se míchá v kyselině trifluoroctové (7,5 g, 5,0 ml, 65,S mmo3L) a methylenchloridu (5,0 ml) 30 minut. Směs se zahustí, rozpustí v methylenchloridu (50 ml) a zahustí*. Tento poslední postup se opakuje pětkrát a získá se sloučenina A jako čiré sklo (200 mg, 99 %), (M+H)+ 75>3⁺·

-167B. (S* *R* )-Ν-//2-/ίΓ-/2- (Acetylamino)-3-/(trifenylmethyl)thio/ propyl/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, methylester·

Sloučenina A (200 mg, 0,266 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (10 ml). N,N-Diisoprop.ylethylamin (74 mg, 0,1 ml, 0,574 mmol) a acetanh.ydriď (55 mg, 0,1 ml, 0,541 mmol) se přidá. SmSs se míchá 2 hodiny, zahustí a chromatografuje (silikagel., 4,1 x 15 cm, 50% ethylacetát, 50?á hexan).

Frakce, obsahující požadovanou sloučeninu se spojí a zahuštěním se získá sloučenina B jako čirý olej (100 mg, 47 %). (M+H)⁺ 795⁺

C. (8*,R*j-N-//2-/N-/2-(Acetylamino)-3-merkaptopropyl/-Lval,yl/-1 ,2,3,4-tetrah.ydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin, trifluoracetátová (4:5) sůl

Titulní sloučenina (38 mg) se připraví za použití sloučeniny B (100 mg, 0,126 mmol) metodou, popsanou v příkladu 1H..

t.t< 98 až 99 °C, čistota > 98,9 % /i//p^= -41,0° (c= 0,1, methanol)

MS' (M+H)⁺ 539⁺

Analýza pro 1,25· kyselina trifluoroctová. 0,96 voda vypočteno 47,28 % C, 5,94 % H, 8,02 % N nalezeno 47,28 % C, 5,60 % H, 7,81 % ΒΓ ¹H-NMR (CD-jOD, 400 MHz) o (ppm) 7,28 (4H, m), 4,84 (2H, m),

4,65 (1H, m), 4*52 (2H* m), 4,31 (1H, m.), 4,09 (1H, d,

6,4 Hz), 3,63 (1H, m·), 3,48 (2R, m), 3,14 (1H, m), 2,68 Í2H* m), 2,38 (2H, m), 1,99 (3H, m), 1,92 (1H,. m), 1,89 (3H^r, s), 1,77 (1H* m), 1,66 (1H, m), 1,14 (6H, m).

-168

Příklad 62 /R*/S*(S^3ť)//-N-//2-/N^,-/2-Amino-3-/(2-amino-2-karboxyethyl)dithio/propyI/-L-vály1/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyI/-L-methionin.

chirální

A. /R*/S* (S*)//-H-//2-/N- (2-Amino-3-/(2-amino-2-karboxye thyl) di thi ©/propyl/ -L-vylyl/-1 ,2,3,4-1 e t rahydro-3-is ochinolinyl/karbonyI/-L-methionin

Cystin (59 mg, 0,24 mmol) se spojí se sloučeninou 1H (30 mg, 0,06 mmol) ve 2 ml 0,2M Hepes pufru upravujícího na pff 7,4. Roztok se nechá stálí 5 hodina potom se provede HPLC purifikaee? (YMC S-10, ODS 30 x 500 mm, monitorování při 220 nm, průtoková rychlost 20 ml/min, 30 až 50 % B během 45 minut). Vhodné frakce se spojí a lyofilizaci se získá 14 mg (38%) titulní sloučeniny.

t.t. 130 až 132 °C

MS: (M+H)⁺ 61 6^{+ 1}H-NMR (CDjODj. 270 MHz:)^(ppm) 7,14 (4H, m), 4,71 (1H, m), 4,60 <1H„ m), 4,45 (1H, d), 4,30 (1H, ď), 4,0? (2H, m),

3,55 (1H*_r m), 3,47 (1H _řm), 3,07 (2H, dd), 2,87 (HT, m),

-1692,75 (1H, m), 2,6 (1H, m), 2,40 (1H, m), 2,1-1,75 (2H ,m), 1,95 (3H, 2s_), 0,99 (6H, m)

Elementární analýza pro .1 ,3.voda vypočtena 37,28 % C, 4,38 % H_r 6,39 % N nalezena 37,6% C, 4,81 % H, 6,70 % M /ck/p^’= -84° (c= 0,05, methanol)

C-18 (YMC ODS, 5 mikrometrů, 120 A, 6 χ 150 mm), 220 nm, isokratické podmínky při 10-90% vodném methanolu během 30 minut, obsahujícím; 0,2 % kyseliny fosforečné, 1,5 ml/min monitorování při 220' nm

Rt 15,05 minut

HI - >98 %

Příklad 63 (S*,R* )-N,N*-Dithiobís (2-amino-3,1 -propandi.yl)bis/N-//2(L-valyl )-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyI/karbon.yl/-Lmethionin chirální

— 1 70—

A„ (s*, R*)-N,N'-Dithiobis (2-amino-3,1 -propandiyl)bis/N-//2(L-valyi)-1 ,2,3,4-te trahydro-3-is ochinolinyl/kar bon.yl-Lmethionin

Sloučenina 1H (70 mg, 0,141 mmol) se rozpustí v 0,1% kyselině trifluoroctové ve vodě' (10 ml). Roztok se nechá stát při teplotě' místnosti 72 hodin a lyofilizuje se. ^Tato surová pevná látka se čistí preparatívní HPLC (YMC-C18 kolona,. 2,2 x 25 cm, 5 mikrometrů, 120 angstromů, rozpoštědlo A, 0,1% kyselina trifluoroctové' ve vodě, rozpouštědlo 3, 0,1% kyselina trifluoroctová v acetonitrilu: 30-40 % B během 40 minut, průtoková rychlost. 9 ml/min, UV monitorování při 220 nm). Frakce, obsahující požadovaný produkt se spojí a lyofilizací se získá titulní sloučenina (30 mg,

%).

t.t. 115 až 116 °C čistota 96 % /£Á/^= -42,2° (o= 0,09, methanol)

MS: (M+H)⁺ 991 +

Elementární analýza pro 4,0 kyselinu trifluoroctov.ou .

3,71 vodu vypočteno 42,83 % G, 5-,42 % H, 7,40 % N nalezeno 42,83 % C, 5,28 % H, 7,47% N ¹H-NMR (CD^OD, 400 MHz;) é (pprn) 7,26 (8H, m), 4,84 (8H, m), 4,55 (2H, m), 4,38 (2H, m), 3,80 (2H, m), 3,57 (2H, m),

2,95 (4H',. m), 2,72 (2H, m), 2,48 (2H, m), 2,31 (2ΓΓ, m),

2,13 (4H, m.), 2,05 (6ff, m), 1,96 (4ΤΓ, m), 1,07 (12H,m)

Příklad 64 (S*,R*)-N-//2-/N-/2-Amino-3-(methyldithio)propyl/-Lvalyl/-1,2,3,4- te trahydro-3-is ochinolinyl/kar bonyl/-Lmethionin, trifluoracetátová' (1:2) sůl

-171-

A. (S* , R* )-N-//2-/N'-/2-Amino-3- (methyldithio)propyl/-Lvalyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/L-methionin, trifluoraoetátová (1:2) sůl

K roztoku sloučeniny 1ΡΓ (100 mg, 0,20 mmol) ve směsi methanolu/vody (0,5/0,3 ml, zbavené kys'líku) při 0 °C pod argonem se přidá methylmethanthiosulfonát (36 /ul, 0,35 mmol).

Reakční směs se ohřeje a míchá při 5 °C přes noc. (16 hodin). Těkavé látky.'· se odstraní ve vakuu. Zbytek se čistí preparativní RP HPLG (YMC, S10, 30 x 500 mm, G18 kolona) za eluce 36% až 70% vodným methanolem během 1 hodiny. Vhodné frakce se spojí a lyofilizací se získá bílý lyofilát titulní sloučeniny (65 mg)..

t.t. 77 až 8Q °C

MS (FAB): (M+H)⁺ = 543

IR (KBrr) 2974, 1676’, 1431 , 1204, 1140 cm’¹ /o</_D= -45,9® (c= 0,18, methanol)

HPLG: YMC, S3, C18 (6 x 150 mm), kolona, 220 nm, 1,5 ml/min:

10-90 % vodný methanol s 0,2% kyseliny fosforečné, lineární gradient během. 30 minut retenční čas: 18,8 minut

-1 72Elementární analýza pro ^G24^38^4^4^3,’¹^2θ* ^2,1 kyselina trifluoroctové:

vypočtena: 41,76'% C, 5,38 % ff, 6,91 % N, 11,86% S, 14,76 nalezeno 41 ,75 % C, 5,23 % ff, 6,77 % ff, 1 1 ,88 % S, 14,70 ¹H'NMR (CDC1₃ s 5 % CD₃OD, 400 MHz): í 7,29-7,20 (4H, m),

4,92 (1H, <$, J= 16,7 Hz), 4,77 (1H, αν), 4,56 (1H, d, J=

16,7 Hz), 4,48 (1H,nr), 3,50-2,90 (6H, m), 2,44 a 2,34 (3H, dva s), 2,2-2,1 (2H, m), 2,04 a 1,91 (3H, dva s), 1,80 - 1,60 (3H,. m), 1,11 (3H, d, J= 6,8 Hz), 1,09 (6H, d, J= 6,4 Hz)

Příklad 65

N-//(S)-1,2,3.,4-Tetrahydro-2-/N-//(4R)-2-methyl-4-thiazo1 idiny1/me thy 1/-L- valyl/-3- i s ochinol in.yl/kar bony 1/-Lmethionin, trifluoracetátová (1:2) sůl

A. N-//(S)-1,2,3,4-Tetrahydro-2-/ff-//(4R)-2-niethyl-4-thiazolidinyl/methyl/-L-valyl/-3-isochinolinyl/karbonyl/L-methionin, trifluoracetátová (1:2) sůl;

-1 73Sloučenina IH (60 mg, 0,121 mmol) se rozpustí v dichlormethanu· (10 ml). Roztok se ochladí na 0 °C a acetaldehydu (0,39 g, 0,50 ml, 8,94 mmol) se přidá. Směs se míchá 1 hodinu při 0 °C. Rozpouštědlo se odpaří na polovinu objemu pod proudem- dusíku a pevná látka se odfiltruje a suší za vakua 5 hodin a získá se titulní sloučenina (35 mg, 55 %). t.t. 156 až 15-7 °G čistota 93 % /o</25= -8,0 (c= Q,1, methanol)

MS (M+H)⁺ 523⁺

Elementární analýza pro 1,90 kyselina trifluoroctová. 1,25 voda vypočteno 45,40 % G, 5,61 % H, 7,35 % B nalezeno 45,39·% C, 5,47% H, 7,00 % B ¹ff-NMR (CD^OD, 400 MHz.) 5) (ppm) 7,27 (4H, m), 4,75 (2H, m),

4,65 (1H, mO, 4,56. (2H, m), 4,11 (1H, m), 4,03 (1H, m), 3,21 (1H, m), 3,16 (3H-, a), 3,00 (1H, m), 2,75 OH, m), 2,55 (2H,

m), 2,42 (1H, m), 2,14 OH, m·.), 2,07 (3B, a), 1,93. OH, m),

1,43 (3ΗΪ m), 1,19 (3H, d, J= 6,.8 Hz), 1,14 (3B, ď, J- 7,3 Hz)

Příklad 66 (S*,R* Í-B-//1 ,2,3,4-Tetrah.ydro-2-/N- (4-thiazolidinylmethyl )L-val.yl/-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, trifluor-

-174A. (R)-4-/(N'-Methoxy-N-methylamino)karbonyl/-3-thiazolidinkarboxylová kyselina, 1 ,1-dimethyleth.yles ter (R)-3,4-Thiazolidinkarboxylová kyselina, 3-(1, 1-dime thyle thyl) es ter (1 g, 4,97 mmol), brom-tris-p.yrrolidinofosfonium-hexafluorofosfát (5,1 g, 10,93 mmol) a dimethylaminopyridin (200 mg, 1,6 mmol) se rozpustí v methylenchloridu,' (20 ml).. Přidá se N,O-dimethylhydroxylamin-hydrochlorid (1,07' g, 10,93 mmol) a N',N-diisopropylethylamin (4,5 ml, 25,7 mmol).. Reakční směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti, a zahustí se a chromatografuje (silikagel, 7,1 x 20 cm, 40 % ethylacetát, 60 % hexan). Frakce, obsahující požadovanou sloučeninu se spojí a zahuštěním se získá sloučenina A jako bílá pevná látka (700 mg, 51 %).

(M*>H)⁺ 277⁺

B„ (R)-4-Formyl-3-thiazolidinkarboxylová kyselina, 1,1-dimethylethylester

Sloučenina B (500 mg, 92 %) se připraví jako bílé sklo za použití sloučeniny A (0,7 g, 2,5 mmol) metodou popsanou v příkladu 1F.

0. (S*,R^x)/-N-//2-/N-//3-/(1,1-Dimethylethoxy)karbonyl/-4thiazolidinyl/methyl/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin;, methylester

Sloučenina C (400 mg, 25 %) se připraví použitím· sloučeniny B' (0,5 g, 2,3 mmol) a sloučeniny 1D (1,6. g, 2,5 mmol) metodou popsanou v příkladu 1G.

MS: (M+H)* 622⁺.

-175D. (S* ,R*)/-N-//2-/N-//3-/(1 ,1 -Dimethylethox.y )karbonyl/4-thiazolidinyl/methyl-L-val,yl/-1 ,2,3,4-tetrah.ydro-3isochinolin.yi/karbonyl/-L-methionin

Ke 25 ml methanolu se přidá sloučenina C (300 mg, 0,48 ml) spolu se 2N hydroxidem sodným upravujícím pH na 12. Nechá se míchat, dokud není dosaženo kvantitativní tvorby požadované sloučeniny podle TLC (chloroform, methanol, kyselina octová 85:10:5) (3 hodiny). pH se upraví na 3 až 4 použitím 1N hydrogenuhiičitanu draselného a přidá se éthylacetát (30 ml). Vrstvy se oddělí’ a vodná vrstva se promyje ethylacetátem (3 x 30 ml). Organické extrakty se spojí, suší (síran hořečnatý) a zahuštěním se získá 312 mg sloučeniny D (98 %).

MS (M+H)⁺ 609⁺

E. (S^K,R*)-N-//1,2,3,4-Tetrahydro-2-/N-(4-thiazolidinylmethyl) L-valyl/-3~-isochinolinyl/karbonyi/-L-methionin, trifluoracetátová (1:5) sůl

Sloučenina D 250 mg (0,41 mmol) se spojí' s kyselinou trifluoroctovou (10 ml), methylenchloridem (5 ml) a dimeth.ylsulfideic- (0,5 ml). Roztok se 1 hodinu míchá a potom se zahustí za vakua. Přidá se meth.ylenchloriď a roztok se znov-u zahustí a pečlivě suší ve vakuu. Výtěžek zbytku, 240 mg (kvantitativní výtěžek). HPLC purifikace byla provedena za následujících podmínek: rozpouštědloA: 0,1% kyselina trifluoroctová ve vodě, rozpouštědlo B: 0,1% kyselina trifluoroctová v methanolu (YMC S-10, ODS 30 x 500 mm, monitorování při 220 nm, průtoková rychlost 20 ml/min, 30-50 % B během 45 minut). Frakce, obsahující hlavní pík (220 nm) se spojí a lyofilifcací se získá 194 mg (67%) titulní sloučeniny jako bílého prášku.

-176MS (M+H)⁺ 509^{+ 1}H-NMR (CD₃OD, 270 MHz) (ppm) 7,17' (4H, nr), 4,67 (4H, m), 4,20 (2H,. m), 3,28 (2H, m), 3,06 (2H,. m), 2,89 (iH, q1, 2,40 (1H, m), 1,95 (2H„ s),. 1,89 (1H, s), 1,09 (6H_y m)

Elementární analýza pro ^24^3^4^4¾ ·¹,4C2HF₃O2·1,53 voda vypočteno 46,26 % C, 5,86% H, 8,05% B, 9,21 % S, 11,47% F nalezeno 46,26 % C, 5,70 % H, 7,82 % B, 9,03 % S, 11,46 % F = -30® (c= 0,94, methanol)

C-18 (YMC ODS, 5 mikrometrů, 120 A, 6 x<- 150 mm), 220 nm, isokratické podmínky při 10-90% vodném methanolu během 30 minut, obsahujícím 0,2 % kyseliny fosforečná, 1,5 ml/min monitorování při 220 nm

Rt 17,34 min

HI= >97% *

Příklad 67 (S^X,R^M )-N-//2-/N-/2-(Acetylaod.no )-3- (acetylthio)propyl/-Lvaly!/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin, trifluoracetátová (2:3) sůl

OH

-177A.. (S^K, R* )-Ν-//2-/Ν-/2- (Acet.ylamino )-3- (acetylthio )propyl/L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin, trifluoracetátová (2:3) sůl

Sloučenina 1H (70 mg, 0,141 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (10 ml). Přidá se Ν,ΚΓ-diisopropylethylamin (74 mg, 0,1 ml, 0,574 mmol) a acetanhydriď (55 mg, 0,1 ml, 0,541 mmol). Směs se míchá 2 hodiny, zahustí se a čistí preparativní HPLC (YMC S-10 ODS kolona, 30 x 500 nm, rozpouštědlo A 0,1 % kyseliny trifluoroctové v 90 % vody, 10 % methanolu, rozpouštědlo S0,1 % kyseliny trifluoroctové v; 1 0 % vody, 90 % methanolu, 50-1 00 % B v 70 minutách, průtoková rychlost 20 ml/min, UV monitorováno při 220 nm). Frakce, obsahující požadovaný produkt se spojí a lyofilizují. Získá se titulní sloučenina (30 mg).

t.t. 91 -92 čistota 7 97,9 % /(X/p⁵= -37° (c= 0,1, methanol)

MS (M+H)⁺ 581*

Elementární analýza pro 1,50 kyselina trifluoroctová.O, 1 3 voda vypočten© 47,78 % C, 5,58 % H, 7,43 % N nalezeno 47,78 % C, 5,78 % H, 7,55 % N ¹H-NMR (CD₃OD, 400 MHz)£ (ppm) 7,28 (4H, m>), 4,89-4,68 (2H, m), 4,53 (2H, m), 4,32 (1H,, m), 4,12 (1H, d, J= 7,3 Hz),

3,66 (1H,. m), 3,49 (1H, ď, 12,8Hz), 3,34 (1H, d, J= 10,7 Hz), 3,18-3,00 (3H, m), 2,40 (3H,s), 2,35 (1H,. m), 2,01 (1H,. m), 1,95 OH“, s), 1,89 (3H, s), 1,85 (1H, m), 1,71 (1H, m), 1,61 (1H,. m·),. 1,13 (6H, m).

-178Příklad 68

N-//(S)-1 ,2,3,4-Tetrahydro-2-/N- (2-hydroxy-3.-merkaptopropyl )-L- vály l/-3-is ochinolin.yl/-kar bon.yl/-L-me thi onin, trifluoracetátová (1:1) sůl

HS

A. //T_rifenylmethyl)thio/methyl/oxiram

Směs trifenylmethylmerkaptanu· (2,76 g, 10 mmol), (+)epichlorhyďrinu (1 ml, 12 mmol) a uhličitaau xcesného (4,87 g, 15 mmol) v dimethylformamidu; (25 ml) se míchá při 25 ^ttC 4 hodiny, potom se nalije do vody a extrahuje se ethylacetátem:. Extrakt se suší a zahustí na olej. Olej·' se čistí rychlou chromatografií na silikagelu (300 g), eluce 4:1 hexanem:ethyl acetátem, získá se olej. Trituraci s petroletherem, obsahujícím několik kapek diethyletheru se získá sloučenina A jako bílá pevná látka (2,0 g, 60 %).

-179β. N-//(S)-1,2,3,4-Tetrahydro-2-/N-/2-hydroxy-3-/(trifenylmethyl )thio/propyl/-L-valyl/-3-isochinolinyl/karbonyl/L-methionin·, methylester

Směs sloučeniny A (500 mg, 1,5 mmol), sloučeniny ID (640 mg, 1,4 mmol) a triethylaminu (0,28 ml, 2,0 mmol) v methanolu (7 ml) se zahřívá pod refluxem 15 hodin a potom se zahustí ve vakuu. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a hydrogenuhličitan sodný' a vodná vrstva se dále extrahuje ethylacetátem. (3x).. Spojený extrakt se suší a zahustí.

Zbytek se čistí rychlou chromatografií na silikagelu (300

g) za eluce? stupňovým gradientem· od 20:20:1 do 0:10:1 hexanu: ethylacetátceajayridinu· 20‘.kyselina octové 6 :voda 11/ a získá se sloučenina 3 jako zlatý olej (540 mg, 51 %).

0. N-//(S)-1,2,3,4-Tetrahydra-2-/N-/2-hydrox.y-3-/(trifenylmethyl·) thi o/propyl/-D- valyl/- 3- i sochinolinyl/kar bony!/L-methionin

Směs sloučeniny 3 (400 mg, 0,53 mmol), tetrahydrofuranui (10 ml), methanolu (10 ml) a 1N roztoku hydroxidu sodného (2 ml) se míchá při 25 °C 30 minut, potom se nalije do pře bytku 1N kyseliny chlorovodíkové' a extrahuje se· ethylacetátem.. Extrakt se' suší a zahuštěním se získá sloučenina C (350 mg, 89 %).

D.. N.-//(S)-1 ,2,3,4-Tetrah.ydro-2-/N-(2-hydrox.y-3-merkaptopropyl)-L-valyl/-3-isochinolinyl/-karbonyl/-L-methionin, trifluoracetátová (1:1) sůl

Směs sloučeniny C. (330 mg, 0,45 mmol), kyseliny trifluoroctová (20 ml) a triethylsilanu (1 ml) se míchá' jednu hodinu při 25 °C, potom se zahustí ve vakuu. Zbytek se čistí preparativní HPLC (YMC S-10 ODS kolona, 30 x 500 mm, eluce

-18050 ml/min lineárním gradientem od 32 % do- 90% vodného methanolu, obsahujícího; 0,1 % kyseliny trifluoroctová během 10 minut). Frakce¹ se monitorují UV absorbanci při 220 nm. Frakce, obsahující první hlavní produkt při eluci se spojí a zahustí.. Zbytek se lyofilizuje- a získá se titulní sloučenina jako hygroskopická bílá pevná látka (100 mg, 42 %). t.t. 91 až 105 °G /Ok/p= -33° (c= θ,6, ethanol)

IR (KBr): 3432, 2974, 2575, 1672, 1437 cm¹

MS: 498⁺ (M+H)^{+ 1}H NMR: (CD-jOD) 1,18 (6H, m), 2,07 (3H, sů , 1,8-4,9 (17H, m) ¹³(J NMR (CD-^OD) 174,8, 173,3, 168,2, 168,2, 135,4, 135,3,

129.3, 129,2, 128,4, 128,2, 126,9, 126,8, 69,8, 68,7, 64,1,

63.3, 5?,5, 51,7, 51,6, 32,5, 31,7, 31,0, 29,6, 29,3, 18,8, 18,5, 18,3, 18,.2, 18,0, 15,2 ppm·

TLC Rf = 0,67, EM silikagel, 1:1 ethylacetát:/pyridin 20: kyselina octové' 6:vida 11/, UV + PMA vybarvení HPLC: 97% při 17,8 minutách (YMG S3 ODS kolona, 6,0 x 150 mm, eluce 30minutov.ým lineárním gradientem· od 10% do 90% vodného methanolu, obsahujícího 0,2 % kyseliny fosforečné, monitorováno při 220 nm)

Elementární analýza pro Cg^^N^O^S^·! »00 kyselina trifluoroctová. 0,5 voda vypočteno 43,38 % C, 6,01 % H, 6,77 % N, 10,33 % S, 9,18 % F nalezeno 43,38 % C, 6,18 % H, 6,6? % N, 10,48 % S, 9,29 % F

Příklad 69 (S*, R*) -N-//1 ,2,3,4-Te trahydr o-2-/N'-/3-merkap to-2-/ (3fenyipropyl)amino/propyl/-L-valyI/-3-isochInolinyI/karbonyl/-L methionin, trifluoracetátpvá (1 :2) sůl

Λ. (S*,R*)-N-//1,2,3,4-Tetrahydro-2-/R-/2-/(3-fenylpropyl)amino/-3-/(trif enylmethyl) thio/pr op.yl/-L-valyl/-3-i sochinolin,yl/karbonyl/-l<-me thi onin, methylester

Sloučenina 61A (450 mg, 0,598 mmol) a hydrocinnamaldehydu (80 mg, 0,080 ml, 0,598 mmol) se použijí v metodě popsané v/ příkladu 5C pro přípravu sloučeniny A jako čirého oleje (300 mg, 58%), (M+H)⁺ 8?1⁺.

B'. (S*,R*)-N-//1 ,2,3,4-Tetrahydro-2-/N'-/3.-merkapto-2-/(3f enylpropyl )amino/propyl/-L-val,yl/-3-is ochinolinyl/karbonyl/-L-me.thionin, trifluoracetátová (1 :2) sůl

Sloučenina A (300 mg, 0,34 mmol) se použije ve dvoustupňovém postupu? popsaném v příkladu IH pro; přípravu titulní sloučeniny (57 mg^r, 20 %), čistota>99 % (YMC S3 ODS kolona, ffx 150 mm:, 220 nm, 1,5 ml/min, 0-100% B’v A během 30 minut (A, 0,2 % H3PO4 w 90% vody, 10 % methanolu; B, 0,2 % H^PO^ ^v 90 % methanolu, 10 % vody), Rti. 22,96 minut, HI> 99 %), /cA/^25 _ -41,0°' (_c_. Ují, methanol), MS (M+H)⁺ 615⁺· Elementární analýza pro 1,80TFA. 0,55^0 vypočtena 51 ,52 % C, 5,94 % H, 6,75 % N nalezeno· 51 ,54 % C, 5,77 % H', 6,65 % N.

¹HNMR (CDjOD ,. 270 MHz.) í (ppm) 7*33-7,16 (9H, m·), 4,84

-182(2H, au), 4,72 (1H, m), 4,69-4,59 (2H, m), 4,55 (1H, m), 4,37 (1H, m), 3,36 (2H, m), 3,16 -2,97 (3H, ar), 2,85 (2H, m), 2,80-2,68' (2H, m), 2,48 (1H, m), 2,29 (1H, ai), 2,212,08 (2H, m), 2,02 (3H, s), 1,99 (2H , ar), 1,90 (IH, m), 1,15-0,92 (6H„ m).

Příklad 70 (S^X,R^X )-M²-//2-/N- (2-Amino-3-merkaptopropyl )-L-valyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-N-hydrox,y-Nmethyl-L-methioninamid, trifluoracetátová' (1 :2) sůl

sch₃

A. (s\R *)-N²-//2-/N-/2-//(1 ,1-Dime thyle thoxy )karbonyl/amino/-3.-/ (trif enylme thyl) thio/propyl/-L-valyl/-1 ,2,3,4tetrahydra-3-isochinolinyl/karbonyI/-N-methyl-N-hydroxyL-methioninaatid

K roztoku sloučeniny 1G' (9,8 g, 0,176· mmol v tetrahydroruranu: methanolu (70 ml, 5:2) se přidá 2H hydroxid: lithný (15 ml., 30 mmol). Po 20 hodinách míchání' se přidá další 2N' hydroxid lithný (7,5 ml, 15 mmol).. Po míohéné po dalších 20 hodím se přidá 1H kyselina chlorovodíková (40 ml, 40 mmol) a reakční směs se zahustí na 60 ml. Vodný roztok

-183se extrahuje chloroformem (3 x 200 ml), suší se nad síranem sodným, filtruje a zahuštěním se získá bílá pevná látka (9,30 g, 100 %).

K roztoku, této pevné látky (400 mg, 0,477 mmol) v ďimethylformamidu (2 ml) při 0 °C pod dusíkem se přidá N-methyl hydroxylamin-hydrochloriď (40 mg, 0,477 mmol), diisopropylethylamin (166 /ul, 0,984 mmol) a benzotriazol-1-yloxytris (di methylamino)fosfonium-hexafluorofosfát (211 mg, 0,477 mmol). Po 20 hodinách míchání směsi při 0 °C se reakční směs zředí ethylacetátem; (100 ml) a postupně se promyje nasyceným: hyďrogenuhličitanem sodným (40 ml), 10% kyselinou citrónovou (40 ml) a 10% chloridem lithným (3 x 40 ml), suší se nad síranem· sodným, filtruje a zahustí se ve vakuu·. Zbytek se čistí na silikagelu; (100 ml, eluce hexan:aceton:methanol 5:2:0 až 1 :1 :0,01 ) a získá se sloučenina A (288 mg, 70 %, bílá pevná látka).

t.t. 83 až 86 ®C

MS: (M+H.)⁺ 868⁺

3. (S*,R*)-N²-//2-/N- (2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/1 ,2,3,4-tetrah.ydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-N-hydroxyN-methyl-L-methioninamiď, trifluoraoetátová (1:2) sůl

K roztoku sloučeniny A (288 mg, 0,332 mmol) v kyselině trifluoroctové (3 ml) při 0 °C pod dusíkem se přidá po kapkách triethylsilara až do zmizení žluté barvy. Po 30 minutách míchání při 0 °C se směs zahustí za vakua. Zbytek se čistí prep HPLC (YMC ODS S-10, 30 x 500 mm, 22 ml/min, 10-90% vodný methanol, 0,1 % kyseliny trifluoroctové', 60 min). Vhodné frakce se^; spojí, zahustí na 1/4 objemu a získá' se titulní sloučenina (85 mg, 32 %).

-184t.t. 103 až 105 ^σΌ

MS: (M+H)⁺ 526⁺ _i

IR (K3r) 1678,. 1653, 1520, 1433, 1204, 1184 cm“¹

TLC Rp = 0,18 (chloroform: methanol.: kyselina octová, 9:1:0,05 vizualizováno· síranem ceričitoamonným) /= -30,2° /c= 0,24, methanol/

HPLC: 96,6 % při 11,2 min, YMC S3 ODS, 6,0 χ 150 mm,

X = 220 nm·,. 27% vodný methanol, 0,2% H3PO4 » ml/min bí NMR 270 MHz (CD^OD): 1,15-1,38 (m, 6H), 1,87-2,62 (m,

8H), 2,92-3,86 (m, 1 1H plus;· CD^OD ), 4,42-5,23 (m, 4H plus., voda), 7,32-/,42 (m, 4H) ¹³C NMR 100 MHz- (CDjOD): 15,5, 15,6, 17,4, 17,6, 17,9,

18.2, 18,4, 19_r8, 20,2, 25,9, 26,1, 31,3, 31,5, 32,3, 32,5,

32,6·, 32,8, 33,0, 33,7, 36,9, 37,0, 46,3, 47,7, 50,6, 51,1,

53.2, 57,6, 57,7, 57,8, 66,3, 66,4, 127,2, 127,8, 128,2,

128,9, 129,0, 129,1, 129,5, 129,7, 133,9, 134,3, 134,6,

135,8, 171,7, 172,6, 173,4, 173,5, 173,8

Elementární analýza pro ^σ24^39^Ν5θ4^2*¹ ’θθ ^2θ’²*²^ CFjCO^H vypočteno; 42,77 % C, 5,45 % Η, θ,75 % N, 8,01 % S, 16,02 % F nalezena 42,86% C-, 5,14% H, 8,51 % N, 7,97% S, 16,23% F

Příklad 71 (S*^:,'R^M )-N-//2-/N- (2-Amino-3-merkaptopropyl )-L-valyl/-1,2,3,4 tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-0-methy1-L-homoserin, trifluoracetátová (1 :2) sůl

-185-

A. O-Methyl-L-homoserim, methylester, hydrochloridová sůl

Hydrid sodný (60%, 0,365 g:, 9,12 mmol) se přidá k roztoku N-terc.butyloxykarbonyl-L-homoserinu (1,0 g_ř 4,56 mmol) v tetrahydrofuranu (20 ml) při 0 °C. Reakční směs se míchá 30 minut při 0 °C, přidá se joďmethan (1,14 ml, 18,2 mmol) a reakce se ohřeje na teplotu místnosti a míchá se 16 hodin. Reakce se přeruší 1N kyselinou chlorovodíkovou?

(50 ml) a extrahuje se ethylacetátem (4 x 50 ml). Spojené organické extrakty se suší (síran hořečnatý), filtrují' a nahustí za vakua. Získá se 1,0 g’gumy, která se použije bez dalšího čištění. MS(M+H)⁺ 234

K roztoku této gumy v methanolu (60 ml), (guma 1,0 g, 4,29 mmol) se přidá bezvodý chlorovodík při 0 °C. Reakce se nechá ohřá't na teplotu místnosti a míchá se 72 hodin. Roztok se zahustí ve vakuu a získá se sloučenina A (0,788 g„ 100 %) , guma, která se použije bez dalšího čištění.

MS: (M+H)⁺ 148 volný amin.

-1860. (S^M,R*)-N-//2-/^-/2-//(1,1-Dimethylethoxy)karbony1/amino/-3-/ (trifenylme thyl) thi o/ prop.y 1/-N-/ (f eny lme thoxy) karbonyl/-L-val,yl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-0-methyl-L-homoserin, methylester

Diisopropylethylamin (1 ,12 ml,- 6,45 mmol) se přidá k roztoku sloučeniny A (0,394 g, 2,15 mmol), sloučeniny 32E (1 ,81 g,. 2,15 mmol) a benzotriazol-1-yloxytris-(dimethylamino )f osf onium-hexafluorofosfátu (0,951 g, 2,15 mmol) v acetonitrilu; (30 ml) a dimethylformamidui (10 ml). Směs se pak míchá' při teplotě místnosti 16 hodin. Reakce se přeruší' 1H kyselinou chlorovodíkovou; (50 ml) a extrahuje se ethylacetátem· (4 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí 10% chloridem lithným (3 x 100 ml), suší, filtrují a zahustí se za vakua. Zbytek se čistí rychlou chromatografií (eluce 3/1 hexan/aceton) a získá se sloučenina B (1,16 g, 56%) jako bílá pevná látka.

t.t. 57 až 65·

TLC: R_f 0,85 (1/1 hexan/aceton, vizualizace ceričitým barvivém) .

MS: (M+H)⁺ 971

C. (S*,R*J-N-//2-/N-(2-Amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-0-methyl-Lhomoserim, trifluoracetátová (1:2) sůl

Hydroxid sodný (1N¹, 1,02 ml, 1,96 mmol) se pomalu přidá k roztoku sloučeniny B (0,50 g, 0,52 mmol) v methanolu (15 ml) a míchá se 16 hodin.. Směs se zahustí za vakua, zředí se 1N HCl (100 ml) a extrahuje se dichlormethanem· (3 x 100 ml). Spojené organické'· extrakty se suší (síran hořečnatý), filtrují a zahuštěním za vakua se získá 0,497 g bílé pevné látky.

TLC: 0,37 (9/1 chloroform/methanol, vizualizace UV).

-187MS: (Μ+Ή)⁺ 979

Kyselina trifluoroctová (2,6 ml, 34 mmol) se přidá k roztoku výše uvedené pevné látky (0,5 g, 0,523 mmol) v dichlormethanu; (5 ml) a triethylsilanu (0,836 ml, 5,23 mmol) při 0 °C. Výsledný roztok se ohřeje a míchá při teplotě místnosti 1 hodinu. Reakční směs se zahustí za vakua a zbytek se trituruje s hexanem (2 x 20 ml). Hexanová vrstva se odloží'. V oddělené lahvi se zpracuje kyselina trifluoroctová (10,3 ml, 133- mmol) s thioanisolem· (0,614 ml, 5,23 mmol), 1,2-ethandithiolem (0,439 ml, 5,23 mmol) a p-thiokresolem (0,649 g, 5,23 mmol) při 0 ^QC. Tento roztok se přidá ke triturovanému zbytku a potom se přikape? bromtrimethylsilan (0,552 ml, 4,18 mmol, 8). Roztok se míchá při 0 ^QC 1,5 hodiny, ^eakční směs se zpracuje s diethyletherem; (30 ml) a výsledná sraženina se odstředí. Supernatant se odstraní a odloží a pevná látka se promyje a odstředí s diethyletherem; (2 x 30 ml), ethylacetátem (1 x 30 ml) a diethyletherem· (1 x 30 ml). Pevná látka se čistí pře parativní. HPLC- (YMC S-15 ODS 50 x 500 mm, 220 nm, 50 ml/min, 26% až 74% vodný methanol s 0,1 % kyseliny trifluoroctovégradient). Vhodné frakce se zahustí za vakua při teplotě místnosti a zbytek se lyofilizuje a získá se titulní sloučenina (0,197 g, 53 %)*

t.t. 78 až 88 °C

TLC: Rp = 0,65 (6/3/1 n-propanol/hydroxid amonný/voda, vizualizace síranem ceričitoamonným(molybdenanem· amonným/ kyselinou sírovou/vodou)

MS': (M+Hj⁺ 481 bolná báze IR (KBr) 1204, 1431, 1676, 2974 cm’

-188Elementární analýza pro ^G22^36^4^1 θ5’^2,ζ*' ^A. θ»3 Η₂θ vypočteno 43,95 % C, 5,17 % ff, 7,38 % N,. 4,22 % S, 18,01. % F nalezeno 43,95 % C, 5,28 % ff, 7,59 % ff, 4,45 X 3-, 18,Ol. % F ¹ ff (DMSO-dg, ?125 ^Q!O): 0,93 (d, 3H_r ^J= ⁶,45 ), 1,00 (d,

3H, J= 6,45), 1,75-1,80 (m·, 2H), 1,88-1,93 (m, 3H), 2,72

-3,00 (m, 5H), 3,17 (s, 3«), 3,23-3,29 (m, 2ff), 3,50 (š m, 1H), 4,23-4,25 (m, 1H), 4,53-4,96 (m, 3ff), 7,16, 17,18 (s, 4H).

/^/^= -19,1°, c= 0,22 (methanol)

-189-

Claims (4)

1 . Sloučenina obecného vzorce nebo její enan.tiomer, diastereomer, farmaceuticky přijatelná sůl, prodrug, nebo solvát, kde

A₁ a A₂ jsou každý nezávisle na druhém H, alkyl., substituovaný alkyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, fenyl nebo substituovaný fenyl,

Gj je S neb® 0, ff₂ je H, -C(O)OH, -C(O)NH₂, 5-tetrazolyl, -C(0)N(R_?.)0H nebo gh₂or,

X je 0 nebo· R_gN,

Y a Z jsou nezávisle na sobě každý -CH₂- nebo; -0(0)-,

RjR₂, Rp R^, Rg, Rg a jsou každý nezávisle na ostatní cit H nebo alkyl,

-190

R^ může být také alkanoyl,

R₁ a Aj mohou spolu tvořit “(CH₂)_m,

R_q je H, alkyl, fenyl, fenylalkyl, substituovaný fenyl, (substituovaný fen.yDalkyl nebo -C(O)Rg,

R₉ je H, alkyl, fenyl, fenylalkyl,, substituovaný fenyl nebo· (substituovaný fenyl)alkyl, m je 3 nebo· 4 n jé 0,1 nebo 2,

P jé 0,1 nebo 2 a^ q je 0 nebo: 1 s tou podmínkou, že když p je 0 pak je q také 0.

2. Sloučenina podle nároku 1, kde a A₂ jsou nezávisle na sobě každý H nebo· D-, L- nebo DL- -CH^, -CH(CH₃)₂, -Cff₂CH(C3₃)₂, -CH(CH₃)CH₂CH₃, -C(CH₃)₃, -CH₂0H, -CH₂CH₂OH, -ce₂ch₂gh₂03, -ch(oh)ch₃ , r\ -ΖΛ

O · -o •CH₂ CHj CH₂ NH— C- NH2

II

-CH₂C(O)OH,. -ch CH C(O)OH, -CH₂C(0)NR₂ ,

-OT₂CV<^0),ÍRU^B12’ ^{kde R}11 ^{a K}12 vidy nezávisle ne druhém každé H,. alkyl nebo fenyl, a Rn a R1 2 mohou spolu tvořit. -CH2)aTi ^{kde 0} 3^{e 2 až 6}» -CH2CH₂O(O)NHOH, -CHgSH, -CH₂CH₂S(O)₂NH₂, -CR₂CR₂OCH₃ ne to -CH^SCHy

-1913. Sloučenina podle nároku? 2, kde Aj a jsou vždy nezávisle na sobě.H nebo L- -CH^,. -CH(CH₃)₂, -CH₂CH(CH₃)₂, -Cří(CH₃)CÍ^CH₃,. -C(CH₃)₃, -ch₂oh, -ch₂ch₂oh,

-CH₂CH₂'CH₂OH, -CH(OH)CHj,

-O · O · •ch₂ ch₂ ch₂ nh — θ - nh₂

II

-CFF₂O(0)0H, -CH₂CH₂.C(O)OH, -CH₂C(O)NH₂,

-CH^!2CH₂C(0)NR_{1 1} R_{] 2}, kde Rj ₁ a R₁₂ jsou vždy nezávisle na sobě každý H,. alkyl nebo fenyl a R^ a R^ ₂ mohou spolu tvořit -(CH₂)_o-, kde o· je 2 až 6, -CH₂CH₂C(O)NHOH, -CH₂SH_r -CH₂CH₂SH, -CH₂CH₂S(O)₂NH₂, -C^CHgOCHj nebo? -CHgCHgSCHy

4. Sloučenina podle nároku 3, kde A₁ je L- -CHj, -CH(CHj)₂, -Cff₂CřT(Čff₃)₂, -C(Cff₃)₃, -CH(CH₃)CH₂CH₃, -CH₂OH nebe -CH(OH)CH₃ a

A₂ je L--CR₂CH^SCH₃, -CHgCHgOH, -CH^CH^CH^OH,

-CH₂CH₂C(O)NR₁R₁₂, kde R₁ a R₁₂ jsou každý nezávisle na druhák ΙΓ, alkyl nebo fenyl a R^a R^₂ mohou spolu tvoři.t -(CřT₂)_Q-, kde o je 2 až 6, -CH₂CH₂OCH₃ nebe -CHgCHgSR.

5. Sloučenina podle nároku 1, kde n· je Γ.

6. Sloučenina podle nároku 1, kde Rg je H.

-1927.. Sloučenina podle nároku? 1, kde A₁ je L- -CHj, -CH(CH₃)₂, -CH₂CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -ch(ch₃)ch₂gh₃, -CH₂OH neber-CH'(OH)CHp Ag je L- -CI^CH^SCHp -CHgCHgOH, -GH₂CH₂GFT₂OH, -CH₂CH₂C(0)NR₁ kde R_{] 1} a R,₂ jsou každý nezávisle na druhém H, alkyl nebo fenyl, a a R^mohou¹ spolu tvořit -(CH₂)₀-, kde o je 2 až 6, -CHgCHgOCH^ nebo -CHgCHgSH, G₁ je S, Gg je -G(O)OH, X je R_QN, Y je: -CHg-,

R₁ , R₂, R₃, R₄, Rg, Rg., R_? a Rq jsou každý Η, n je· 1 a p je 1 .

8. Sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce' nebo její enantiomer, diastereomer, farmaceuticky přijatelná sůl!., prodrug nebo solvát, kde

A^ a Ag jsou nezávisle na sobě každý H, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, fenyl, nebo substituovaný fenyl,

Gj je S nebo? O,

G₂ je H, -C(O)OH, -C(0)Nff₂, -C(O)íř(R₇)OH nebo- -CHgOH,

X je O nebo RgN', ^R1» ^R2’ ^R3» ^R4 ^{3 R}7 ^^S°^{U každ}^ nezávisle na druhém H nebo alkyl,

R₁ může být také alkanoyl,

-193Rj a Aj spolu mohou tvořit -CGÍ^^·»

Rg je H., alkyl, fenyl, fenylalkyl, substituovaný fenyl, (substituovaný fenyl)alk,yl neb.o? -C.(O)R^,

Rg je H,. alkyl, fenyl, fenylalkyl, substituovaný fenyl nebo (substituovaný fen.yl)alkyl, m jé 3 nebo; 4, n je 0,.1 nebo 2 p je 0,1 nebo: 2 a q je 0 nebo 1 s tou podmínkou, že když p je 0 je také q 0.

9.· Sloučenina podle nároku 1 obecného- vzorce·

H(X)

OH

HS nebo její enantiomer, diastereomer·, farmaceuticky přijatelná sůl, prodrug nebo solvát, kde

A^ a A^ jsou každý nezávisle? H, alkyl, substituovaný alkyl, cykloalk.yl, substituovaný c.ykloalkyl, fenyl nebo substituovaný fenyl,

X je O neb© ΗθΝ,

Y a 2 jsou nezávisle· -CH^- nebo -C(O)-,

R^ , R^, Rj, R^, Rej, R^ a R? jsou každý nezávisle ff neb© alkyl.,

R^ milže být také alkanoyl,

-194R₁ a A₁ spolu mohou tvořit -(θ^ια’

R₈ je H, alkyl,, fenyl, fenylalkyl, substituovaný fenyl, (substituovaný· fenyl)alkyl nebo· -C(O)Rg,

R₉ je H, alkyl, fenyl, fenylalkyl, substituovaný fenyl nebo (substituovaný fenyl)alkyl, m je 3 nebo 4, n je' 0, 1 nebo 2, p je 0,1 neb.o 2 a q je 0 nebo 1 s podmínkou, že když je p 0 je q také 0.

10. Sloučenina podle nároku 9, kde A^ je L- -CH^,

-ch(ch₃)₂, -ch₂cr(ch₃)₂, -c(ch₃)₃, -ch(ch₃)ch₂ch₃, -cil,oh nebo -CH(OIT)CH₃, A₂ je L- - (CH₂)₂SCH₃, -CH₂CH₂0H, -CH₂CH₂CH₂OR, -CH₂0H₂C(0)NR_hR₁₂, kde R_{] 1} a R_{} 2} jsou každý nezávisle na druhém H, alkyl nebo fenyl, a R^a R^₂ spolu mohou tvořit -(CH₂)_Q-, ⁰ 3θ 2 až 6, -CH₂0H₂0GH₃ nebo

-CH^CHgSff, Y j© -GH₂-, Z. j© -C(O)-, X j© R_QN,

R₁ , Rg, R₃, R₄, Rj, % a Rg jsou Η, n je 1 a p je 1.

11. Sloučenina podle nároku 1, vybraná ze skupiny, zahrnující (R*, S* )-N-//2-/W- (2-amino-3-merkaptopropyl )-L-valyl/1 _>2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, (r* 5-N-//2-/N- (L-cys teinyl )-L-valyi/-1,2,3,4-tetrahydro-3isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, (R* )-N-//2-/N- (L-cys teinyl )-L-val.yl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3isochinolinyl/karbon.yl/-L-methionin, methylester, (R* J-N-//2-/N- (3-merkapto) 1 -oxoprop.yl )-L-valyl/-1,2,3,4tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin,

-195(R*,R^s)-N-//2-/2-(L-cys teinylamino)-3-methylbutyl/-1,2,3,4tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, (R^x )-N-//2-/N·- (3-merkaptopropyl )-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, (r*)-N-//2-/N-(3-merkaptopropyl)-L-alanyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, (R*)_N-//2-/N-(3-merkaptoprop.yl)-N-methyl-L-valyl/-1,2,3,4tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, (R^x,R^X)-N-//2-/2-/(3-merkaptopropyl)amino/-3-methylbutyl/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, (R^m)-N-//2-/N-(3-merkaptoprropyl4-L-propyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, (R* )-N-//2-/N’- (2-merkaptoethyl )-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydr o-3-is ochinolinyl/karbonyl/-L-me thionin·, (R* )-N-//2-/N·- (J-merkapto-1 -oxopropyl )-L-valyl/-1 ,2,3,4tetrahydro-3-isochinolinyl/karbon,yl/-£-me thionin, methylester, (R*,S*4-2-/N-(2-amino-3-merkaptopropyl)-L-val.yl/-1,2,3,4tetrahydro-N-/3- (methylthio)propyl/-3-isochinolinkarboxamid^!, (r*)_2-/N- (3-merkaptopropyl )-L-val.yl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-N/3-(methylthiO')propyl/-3-isochinolínkarboxamid, (R* )-N-//2-/N- (L-cys teiny 1) -L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrah.ydro3-isochinolinyl/karbonyl/-L-alanin, (R*, R^x) -N-//2-/N- (2-ramino- 4-hyd roxy-1 - ox o butyl) -L-valyl/1,2_r3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin,

-1 96(R^M, R³* )-2-/N- (L-cysteinyl )-L-valyl/-1 ,2, J, 4-tetrahydro-N/1 - (hydroxymethyl )-3- (methylthio )propyl/-3.-isochinolinkarboxamid, (R*)-N-//2-(L-cys teinyl)-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3isochi'nolinyl/karbonyl/-L-fenylalanin, (R*)-N-//2-/N- (L-cysteinyl )-L-val.yl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3isochinolinyl/karbonyl./-L-serin, (R* )-Ν²-//2-/Ν- (L-cysteinyl )-L-val,yl/-1 ,2,3,4-tetrahydro3-isochÍnolinyl/karbonyl/-N-hydroxy-L-methioninamid^;, (R^h )-N-//2-/N- (L-cysteinyl)-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3isochinolinyl/karbonyl/-3-(2-thienyl)-DL-alanin, zřR*)-N-//2-/N-(L-cysteinyl)glycyl/-1,2,3,4.tetrahydro-3isochÍnolibyl/karbonyl/-L-methionin, (R* )-17^-//2-/17- (L-cysteinyl)-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3isochinolinyÍ/karbonyl/-L-glutamin, (R* )-N-//2-/17- (L-cys tein.yl/-L-valyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro3-isochinolinyl/karbonyl/-L-histidin, (R*j-N-//2-/N-(L-cys teinyl)-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro3-isochinolinyl/karbonyl/-3--(f enylmethyl )-L-alanin;, (R*)-N-//2-/N-(L-seryl)-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolhn.yI/karbonyl/-L-methionin, (R^jR*)-2-/N-(3-merkapto-1-oxopropyl)-L-valyl/-1 ,2,3,4tetrahydro-N-/3-(methylthio )-1-(1H-tetrazol-5-yl)propyl/3-isochinolinkarboxamid,

-197(R*,S^K )-Ν~//2-/ΡΓ- (2-amino-3-merkaptoprop.yl )-N-methyl-Lvalyl/-1, 2,3,4-tetrahydro-3-ísochinolinyl/karbonyl/-Irmě thionin, (R^K,R^x:, S^x)-N-//2-/(2-amino-3-merkaptopropyl)amino/-3-methyl butyl/-1,2,3,4-tetrah.ydro-3-isochin ďinyl/karbonyl/-Lmethionin, (R* )_N-//1- (Ν’- (L-cysteinyl )-L-valyl/-2,3-dih.ydro-1 H-indol2-yl/kar bony l/-L-me thionin,.

(S* ,R^X )-N.-//2-/2-/N- (2-amino-3~mert?aptopropy 1 )-L-valyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionih!, methylester, /3S-r/2/R^x (S*)/, 3R*(R^S )//-2-/N“ (2-amino-3-merkaptopropyl)-Lvalyl/-1,2,3,4-tetrahydro-N-(tetrahydro-2-oxo-3-furanyl)-3isochinolinkarboxamid, (S*,R^X )-N²-//2-/N- (2-amino-3-merkaptopropyl )-L-va.lyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-N.-hydroxy-Lmethioninamid, /R- (R* ,S* )/-N²-/ /2-/Ν'- (2-amino-3-merkaptopropyl)-L-val.yl/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/-karbonyl/-L-glutamin, /R- (R^x ,3*)/-2-/Ν- (2-amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/-1 ,2,3,4 tetrahydro-Ν’-(tetrahydro-2-oxo-3-thienyl)-3-isochinolinkarboxamiď, (S*,R*)-^2-//2-/1^- (2-amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/1_J2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-asparagin, (S*, R^x)-N—//2-/(2-amino-3-merkaptopropy1)-L-valyl/-1,2,3,4tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-norleucin,

-198(S⁵*,,Η³* )-N-/(2-/N- (2-amino-3-merkaptopropyl )-L-valyl/-1 ,2,3,4tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-^,-(aminosulfonyl)-L-i/ aminomáselná kyselina,.

(S*, R* )-N.-//2-/N- (2-amino-3-merkap top ropy 1 )-L-valyl/-1 ,2,3,4tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-glutamová kyselina, (S* ,.Η*-)Ν²-//2-/Ν- (2-amino-3-merkaptopropyl )-L-valyl/-1 , 2,

3.4- tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-N5_hydroxy-Lglutamin,.

/R-(R*, S*)/-N²-//2-/N-(2-amino-3-merkaptopropyl)-L-valyl/_

1.2.3.4- tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methioninamid,

N'-//(S)-2-/N'-/(R)-2-amino-3-merkaptopropyl/-L-valyl/-1 ,2,3,4tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-2-methyl-DL-methionin, (S* ,.R* )-N-//2-/N- (2-amino-3-merkaptopropyi)-L-alanyl/-1,2,3,

4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, (S*,.R*)-N-//2-/N- (2-amino-3-merkaptopropyI )-L-leucyl/-1 ,2,

3.4- tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin, /R^/R* (S* )//-N-//2-/2-/(2-amino-3-merkaptopropyl )amino/T-oxobutyi/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-is ochinolin.yl/karbonyl/-Lmethionin, (S*,R*)-N-//2-/2-/(2-amino-3-merkaptopropyl)amino/-4-methy1pentyl/-1,2,3,4. tetrahydro-3-isochinolinyl./karbon,yl/-Lmethionin, (R)-N-//2-/l-/(2-amino-3-merkaptopropyl)-L-prolyl/-1 ,2,3,4tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-L-methionin,

-199/R*/S* (S* )//-N-//2-//l- (2-amino-3-merkaptoprop,yl )-2-methyl

2-p.yrrolidinyl/karbonyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbon.yl/-L-methiorr_;in, (S*, R* )-N-//2-/N- (2-amino-3-mer kapt opropyl )-3-meth,yl-Lvalyl/-1 , 2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin, /R*/R* (S*)//-N-/(2-// (2-amino-3-merkaptopropyl)amino)feny lácetyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbon.yl/-Lmethionin,, /R*/R* (S* )//-N.-//2-/2-/(2-amino-3-merkaptopropyl)amino/2-cyklohexylacet.yl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-is ochinolin.yl/karbonyl/-L-methionin, (s\R* )-N-//2-/N- (2-amino-3-merkaptopropyl )-3~methyl-Lvalyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/'karbonyl/-Lmethionin';, methylester, (S*,R* )-N^-//2-/N- (2-amino-3-merkaptopropyl )-3,-methy 1-Lvalyl/-1 ,2,3,4.-tetrahydro-3-isochinolin.yl/karbonyl/-N·³methyl-L-glutamin, ('S* ,R* )-N^-//2-/N- (2-amino-3-merkaptopropyl )-3-methyl-Lvalyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyi/-Lglutamin, (S*,R* )-N²-//2-/N- (2-amino-3-merkaptopropyl)-3-methyl-Lvalyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-is ochinolinyl/karbonyl/-Lglutamin, methylester,

-200/R*/R* (S* )//-N-//2-/2-/(2-amino-3-merkaptapropyl )amino/-3,methylbuty1/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-is ochinolin.yl/-N-me thy 1L-methionin, (S* ,R* )-N,-//2-/2-/N'-/2-amino-3-merkaptopropyl) me thy lamin o/3-meth,ylbutyl/-l ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/ L-methionin_r (S* ,,R* )-N-//2-/N-acetyl-N- (2-amino-3-merkaptopropyl )-Lval.yl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin, (S*, R*) -Ν'-//2-/N- /3-me rkap to- 2- (me thy lamí n o) p r opyl /- Lvalylí/-,1 ,2,3,4- tetrahydro-3-is ochinolinyl/karbon.yl/-Lmethionin, (S*,,R* )-N~//1 ,2,3,4-tetrahydro-2-/N-/3-merkapto-2-/(fen,ylmethyl)amino/propyl/-L-valyl/-3-isochinolinyl/karbon.yl/-Lmethionin,

A'S% R^ -Ν-//2-/ΓΓ-/2- (acetylamino )-3-merkaptoprop.yl/-Lvalyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin, /R*/S* (S³* )//-R-//2-/N-/2-amino-3-/(2-amino-2-karboxyethyl)dithio/propyl/-L-valyl/-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolin.yl/ karbonyl/-L-methionin, (S^3fřR^3ť)-N_yN*-dithÍobia(2-amíno-3,1-propandiyI)bis-/N-//2(L-valyl)-1,2,3,4-tetrahydro-3-isochinolin,yl/karbonyl/-Lmethionin/, (S* >R* )-N-//2-/R-/2-amino-3- (methyldithio )propyl/-L-valyi/1,2,3,4-tetrahydro-3-isochÍnolinyl/karbonyl/-L-methioniny

-201_ » '^ί ><

-N-//(S)—1 ,2,3,4- te trahydro-2-/JT-//(4R )-2-methyl-4-thiazolidinyl/methyÍ/_L-valyl/-3-is ochinolinyl/karbonyl/-Lmethionin_r (S⁵* ,.£*) -24-//1/2,3,4-te trahydro-2-/N- (4-thiazolidinylmethyl)L-vály l/-J-is ochinolinyl/kar bony I/-I—methionin, a

_e (5*_rR*)-N-//2-/N-/2- (acetylamino)-3- (acetylthio)prop.yl/-Lvalyl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-3-isochinoiinyl/karbonyl/-Lmethionin,.

14-//(3)-1 , 2,3., 4-te trahydr 0-2-/N- (2-hydroxy-3-merkaptopropyl)L-vály l/-3-is ochinolinyl/kar bonyl/-L-methionin, (S^yR*)-^-//] ,2,3,4-tetrahydro-2-/N-/3-merkapto-2-/(3f eny lpr opyl )amino/pr op.yl/-L-valyl/-3-is ochinolinyl/kar bony 1/L-methionin„ (S³*,. R*)-N^-//2-/Ν’-Ϊ2 - amin o - 3 - m e r kap t op r o py 1) - L-va ly 1/1 ,2,3,4-tetrahydro-3.-isoohinolinyl/karbonyl/-N-hydroxyN-methyl-L-methioninamid a (S^3ííyR^3fc)-N-//2-/N- (2-amino-3-merkaptopropyl )-L-vaIyl/1 ,2,3,4-te trahydr o-3-is ochinolinyl/kar bonyl/-0-me thy 1-L* homoserin.

12. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z předchá· zejících nároků pro výrobu léčiva pro inhibici fsrnesyl protein třensferásy.

13. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z předchá zejících nároků pro výrobu léčiva pro inhibici prenyl transferásy.

-20214· Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z předcházejících nároků pro výrobu léčiva pro inhibici tumorů.

15. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z předcházejících nároků pro výrobu léčiva pro léčbu chorob spojených s drahami signální transdukce, operujícími přes Ras.

16. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z předcházejících nároků pro výrobu léčiva pro léčbu chorob spojených s proteiny, které jsou posttranslačnš modifikovány enzymem farněsyl protein transferásou.

17. Sloučenina vzorce (CH₂) /

HY její enantiomery a diastereomery a farmaceuticky přijatelné soli, prodrugs a solváty, kde

A a A- jsou každý nezávisle H nebo jakákoliv přirozené D- ,

—. — . _ s j Λ Μ.·.#* 4· m λ η·O Ί* *7. f* fl*·-

-203z·

X je O nebo R^N,

Y je S nebo 0_y

Z je Η , C(O)Off, tetrazolyl, C(0)N(R_?)0ff nebo- C(O)CH₂Off, , R₂, R^, R^ a Ry jsou každý nezávisle H nebo alkyl,

R.j a mohou spolu tvořit. (CH₂ )_m,_r

R^ je ff, alkyl, fenyl, fenylalkyl nebo C(O)Rg, kde fenyl a fenylalkyl mohou být popřípadě na fenylovém kruhu substi tuovány,

Rg je H, alkyl, fenyl, nebo fenylalkyl, kde fenyl a fenylalkyl mohou být popřípadě na fenylovém kruhu· substituovány m je 3 nebo 4, n je 0,1 nebo; 2, p je 1 nebo 2 a q je 0 nebo 1.

18. Sloučenina obecného vzorce nebo její enantiomery, diastereomery, farmaceuticky přija telné sole, prodrugs nebo solvóty, kde A₁ a A₂ jsou nezávisle každý H, alkyl, substituovaný alkyl, fenyl. nebo substituovaný fenyl,

Gj je S nebo; O, ,

-204σ₂ je Η, -C(O)OH, -C'O)Nff₂„ 5-tetrazoiyl, -C(O)N(R_T)OR nebo -CHgOIT,

X je O nebo RgB,

Y a Z. jsou nezávisle -CHg- nebo -C(O), ^R1 * ^2’ ^K3’ ^R4’ ^R5’ ^a C^sou každý nezávisle H nebo alkyl·,,

R₁ a A mohou spolu tvořin -(CH^m»

Rg je H, alkyl, fenyl, fenylalkyl, substituovaný fenyl, (substituovaný fen.yDalkyl nebo -G(O)R^,

R₉ je H, alkyl, fenyl, fenylalkyl, substituovaný fenyl nebo (substituovaný fenyl)alkyl, m je 3 nebo· 4, n je 0,1 nebo 2, p je? 0,1 nebo 2 a q je 0 nebo 1 s podmínkou, že když p je 0 je q také 0.

•Mk Petr KALENSKÝ «dvojčat