CZ292631B6 - Deriváty pyridonkarboxylové kyseliny, protinádorové a farmakologické prostředky je obsahující - Google Patents

Abstract

Deriváty pyridonkarboxylové kyseliny obecného vzorce I nebo jejich soli, kde R.sub.1.n. je vodíkový atom, C.sub.1-5.n.alkoxyskupina, atom halogenu, C.sub.1-5.n.alkylskupina, jež může být substituována halogenem, nebo fenylová skupina, jež může být substituována halogenem; R.sub.2.n. je karboxylová skupina, C.sub.1-5.n.alkoxykarbonylskupina nebo formylskupina; R.sub.3.n. je vodíkový atom, aminoskupina, jež může být chráněná benzylovou nebo tritylovou skupinou, halogenový atom nebo C.sub.1-5.n.alkylskupina, která může být substituována halogenem; A je CH; m je celé číslo 1 nebo 2 a Y je odstranitelná skupina vybraná ze skupiny obsahující vodíkový atom, C.sub.1-5.n.alkoxyskupinu, C.sub.1-5.n.alkylthioskupinu, C.sub.1-5.n.alkylsulfinylskupinu, C.sub.1-5.n.alkylsulfonylskupinu, arylsulfonylskupinu, C.sub.1-5.n.alkylsulfonyloxyskupinu a arylsulfonyloxyskupinu, nebo skupina mající následující vzorec Y', kde R.sub.4.n. je vodíkový atom nebo C.sub.1-5.n.alkylová skupina; Z je vodíkový atom, C.sub.1-5.n.alkylová skupina, alanylová skupina, butoxykarbonylová skupina nebo acylová skupina, R.sub.5.n. je vodíkový atom, halogen, C.sub.1-5.n.alkoxylová skupina, C.sub.1-5.n.alkylthioskupina nebo C.sub.1-5.n.alkylskupina, která může být substituována halogenem; n je celé číslo 0 nebo 1 a p je celé číslo 1, 2, 3 nebo 4. Protinádorové a farmakologické preparáty, obsahujících výše zmíněné látky jako aktivní složku, jsou vhodné pro léčení nebo profylaxi pevných a nepevných tumorů.ŕ

Description

Tento vynález se týká nových derivátů pyridonkarboxylových kyselin, protinádorových látek obsahujících tyto deriváty jako aktivní složku a způsobů přípravy nových derivátů pyridonkarboxylových kyselin.

Dosavadní stav techniky

Byly již známy jak různé deriváty pyridonkarboxylových kyselin obsahujících 2-thiazolyl skupiny samy o sobě, tak i fakt, že tyto deriváty pyridonkarboxylových kyselin vykazují antibakteriální aktivitu. Například, následující látka A je popsána v příkladu 24 japonské patentové přihlášky (Kokai) č. 152682/1986 (dále označována jako Ref. 1):

V příkladu 5 zmíněné Ref. 1 je ukázána následující látka B:

COOH .HCI (B)

Dále je v příkladu 12 v Ref. 1 popsána následující látka C:

-1 CZ 292631 B6

Výše zmíněné látky B a C jsou také popsány v tabulce 1 japonské patentové přihlášky (Kokai) č. 33176/1987 (dále označená jako Ref. 2).

Kromě toho je látka D zmíněna v příkladu 24-4 také v japonské patentové přihlášce (Kokai) č. 56959/1985 (odpovídající Evropské patentové přihlášce EP 131839 a americkému patentu US 4 730 000, dále společně označené jako Ref. 3) a také v příkladu 15 japonské patentové přihlášky (Kokai) č. 251667/1986 (dále označovaná jako Ref. 4).

Následující látka E je zmíněna v příkladu 28-16 japonské patentové přihlášky (Kokai) č. 163866/1985 (odpovídající Evropské patentové přihlášce EP 154780 a americkému patentu US 4 774 246, dále společně označené jako Ref. 5).

Také následující látka F je ukázána v příkladu 8 japonské patentové přihlášky (Kokai) č. 85255/1990 (dále označena jako Ref. 6).

Avšak chemická struktura těchto látek je odlišná od struktury I tohoto vynálezu, a to v následujících bodech (1) a (2).

(1) Pozice 6 látek A až F je vždy substituována atomem fluoru.

(2) Substituent v pozici 7 látek A, C, D, E až F není substituovaná 1-pyrrolidinyl skupina.

Kromě toho reference 1 až 6 se pouze zmiňují, že látky A až F vykazují antibakteriální aktivitu a neříkají nic o jejich protinádorové nebo protinádorové aktivitě.

Je známo, že určité deriváty pyridonkarboxylové kyseliny vykazují protinádorovou nebo protirakovinovou aktivitu. Například Cancer Research 52, 2818 (1992) referuje o protirakovinové aktivitě následující látky G:

V tomto pojednání je popsáno, že bylo zkoumáno 90 typů derivátů pyridonkarboxylových derivátů na protinádorovou aktivitu a že většina zmíněných derivátů nevykazuje žádnou protinádorovou aktivitu s výjimkou pouze několika typů těchto derivátů. Dále se zmiňuje, že cyklopropylová skupina, která je substituentem v poloze 1, popř. dva halogenované atomy, kterými jsou substituovány polohy 6 a 8, hrají důležitou roli pro vykázání protinádorové aktivity, a že deriváty pyridonkarboxylových kyselin, které neobsahují tyto substituenty nevykazují žádnou protinádorovou aktivitu.

Stručný popis obrázků

Obrázky 1 až 9 ukazují inhibici změny lychlosti růstu nádoru (IR) s poklesem v případech, kde látka podle tohoto vynálezu byla podávána myším, kterým byly transplantovány různé lidské rakovinné buňky.

Obrázky 10 až 14 ukazují změnu hmotnosti nádoru s poklesem v dále zmíněných experimentech.

Číslice v každém obrázku jako „1-1 (50) [91]“ znamenají ve stejném pořadí „Číslo látky, (Podané množství látky v mg/kg), [Inhibice rychlosti růstu nádoru IR v % pozorování z posledního dne].

Obrázky 15 až 19 ukazují reakční schémata reakcí, zmíněných v příkladech série A (Příprava intermediátů podle tohoto vynálezu), příkladech série B (Příprava výchozích látek podle tohoto vynálezu) a příkladech série C (Příprava látek podle tohoto vynálezu), které budou zmíněny později.

Podstata vynálezu

Jako výsledek intenzivního hledání látek s protinádorovou aktivitou bylo zjištěno, že nové deriváty pyridonkarboxylových kyselin, mající 2-thiazolylovou skupinu, která může být popř. substituována, vykazují významnou protinádorovou aktivitu.

Tento vynález se týká derivátů pyridonkarboxylových kyselin, které mají 2-thiazolylové skupiny a které mají následující obecný vzorec I

(O

kde Ri je vodíkový atom, Ci_₅alkoxyskupina, atom halogenu, Ci_5alkylskupina, jež může být substituována halogenem, nebo fenylová skupina, jež může být substituována halogenem;

R₂ je karboxylová skupina, Ci_₅alkoxykarbonylskupina nebo formylskupina;

R₃ je vodíkový atom, aminoskupina, jež může být chráněná benzylovou nebo tritylovou skupinou, halogenovaný atom nebo Ci_₅alkylskupina, která může být substituována halogenem;

A je CH;

m je celé číslo 1 nebo 2 a

Y je odstranitelná skupina vybraná ze skupiny obsahující vodíkový atom, Ci_₅alkoxyskupinu, C]_₅alkylthioskupinu, Ci_₅alkylsulfmylskupinu, Ci_₅alkylsulfonylskupinu, arylsulfonylskupinu, Ci_5alkylsulfonyloxyskupinu a arylsulfonyloxyskupinu, nebo skupina mající následující vzorec Y'

R₄.

(CHán ^z P (Rs)p kde R4 je vodíkový atom nebo C]_₅alkylová skupina;

Z je vodíkový atom, Ci^alkylová skupina, alanylová skupina, butoxykarbonylová skupina nebo acylová skupina,

R₅ je vodíkový atom, halogen, Ci_₅alkoxylová skupina, Ci_₅alkylthioskupina nebo Ci_₃alkylskupina, která může být substituována halogenem;

n je celé číslo 0 nebo 1 a p je celé číslo 1, 2, 3 nebo 4 a jejich solí.

Látky podle tohoto vynálezu zahrnují samozřejmě jejich stereoizomery, optické izomery, hydráty, solváty a pod.

-4CZ 292631 B6

Látky I podle tohoto vynálezu jsou klasifikovány do dvou kategorií podle charakteru jejich substituentů.

Jedna z kategorií zahrnuje látky vzorce I, kde Y je „eliminovatelná skupina“ a tyto látky jsou užitečné jako přímé intermediáty pro látky, kde Y je Y' jak je zmíněno výše. Takže jeden z předmětů tohoto vynálezu spočívá v zajištění intermediátů pro deriváty pyridonkarboxylových kyselin, které jsou užitečné jako protinádorové látky.

Jako „eliminovatelná skupina“ v substituentu Y může být použita jakákoliv skupina, pokud může být substituována s dále popsaným pyrrolidinovým derivátem IH a tím eliminována, přičemž příklady takovéto skupiny zahrnují halogen, nižší alkoxyskupinu, nižší alkylthioskupinu, nižší alkylsulfinylovou skupinu, nižší alkylsulfonylovou skupinu, aiylsulfonylovou skupinu, nižší alkylsulfonyloxyskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, a pod. Mezi těmito skupinami jsou preferovány halogenové atomy jako je chlor nebo fluor. Pokud jde o ostatní skupiny nebo soli, konkrétní příklady jsou uvedeny v popisu látek I-a dále v tomto vynálezu.

Látky druhé kategorie podle tohoto vynálezu jsou látky obecného vzorce I, kde Y je Y' a jsou užitečné jako vynikající protinádorové nebo protirakovinové látky. Takže tento vynález zajišťuje deriváty pyridonkarboxylových kyselin mající vzorec I, jejich fyziologicky akceptovatelné soli, způsob přípravy těchto derivátů a jejich solí a protinádorové přípravky, které obsahují zmíněné deriváty nebo soli jako aktivní složky:

(I-a), kde A, R_b R₂, R₃, R4, R₅, Z, m, n, a p jsou podle definice výše.

Soli sloučenin majících vzorec I-a zahrnují soli odvozené od karboxylové kyseliny, která je zahrnuta v definici R₂ vzorce I-a a adiční soli odvozené od bazických substituentů, které jsou vázány v poloze 3 v 1-pyrrolidinylové skupiny.

Příklady zmíněných solí karboxylové skupiny zahrnují soli kovů, jako je sodík, draslík, hořčík, zinek, stříbro, hliník a platina, popř. soli s organickými bázemi jako je dimethylaminoethanol, methylaminoethanol, triethylamin a guanidin.

Pokud jde o příklady kyselé adiční soli na bazickém substituentu, vázaném do polohy 3 v 1-pyrrolidinylové skupině podle vzorce I-a, můžeme uvést soli anorganických kyselin jako jsou chlorovodíková kyselina, bromovodíková kyselina, jodovodíková kyselina, kyselina sírová a fosforečná kyselina, popř. soli organických kyselin jako jsou kyselina šťavelová, kyselina, malonová kyselina, citrónová kyselina, kyselina vinná, kyselina benzoová, kyselina methansulfonová, kyselina p-toluensulfonová, kyselina askorbová, kyselina glukuronová, kyselina 2-hydroxyethansulfonová, kyselina laktobionová a kyselina glukoheptonová.

Každý z výše jmenovaných substituentů je vysvětlen dále:

-5CZ 292631 B6

V této specifikaci znamená „nižší alkylová skupina“ alkylovou skupinu s rovným řetězcem nebo rozvětvený alkyl mající 1 až 5 atomů uhlíku, přičemž příklady zahrnují takové skupiny jako jsou methylskupina, ethylskupina, n-propylová skupina, izopropylová skupina, n-butylová skupina, t-butylová skupina a pod. „Nižší alkoxylová skupina“ znamená alkoxyskupinu mající 1 až 5 atomů uhlíku, přednostními příklady jsou methoxy- a ethoxyskupina.

Příklady „atomu halogenu“ zahrnují atom chloru, fluoru a bromu.

Substituent Ri ve vzorci I-a je umístěn v poloze 4- nebo 5 na 2-thiazolylové skupině, přičemž preferované příklady zahrnují vodíkový atom, atom halogenu jako je fluor, chlor a brom, nižší alkoxyskupina jako je methoxy a ethoxy skupina, nižší alkylskupina jako je methylová nebo ethylová skupina, nižší alkylová skupina substituovaná atomem halogenu jako je trifluoromethylová skupina, a fenylová skupina, jež může být substituována halogenovým atomem jako např. 3,4-difluorofenylová skupina.

Jako skupinu „přeměnitelnou na karboxylovou skupinu“ obsaženou v definici substituentu R₂, může být použita jakákoliv skupina, pokud je ji možné přeměnit na karboxylovou skupinu s použitím chemických nebo enzymatických prostředků, preferované příklady této skupiny zahrnují hydroxymethylovou skupinu, formylovou skupinu, esterovou formu a fyziologicky přijatelné soli karboxylové kyseliny.

Příklad esterové formy přeměnitelné na karboxylovou kyselinu většinou pomocí chemických prostředků zahrnuje estery nižších alkylových derivátů jako je methyl a ethylester.

Příklady esterových forem, které jsou přeměnitelné na karboxylovou skupinu nejen chemickými ale také enzymatickými prostředky, zahrnují nižší alkanoyloxyderiváty esterů, jako je acetoxymethylester, 1-acetoxyethyl ester a pivaloyloxy-methylester, nižší alkoxykarbonyl alkylestery jako jsou 1-ethoxykarbonyloxyethyl ester; di—nižší alkyl-amino nižší alkylester jako je 2—dimethylaminoethyl ester; 2-(l-piperidinyl)ethyl ester; 3-butyrolaktonyl ester; cholinový ester, phthalidylový ester; (5-methyl-2-oxo-l,3-dioxol—4-yl)methyl ester a pod.

Výhodné příklady substituentu R₃ zahrnují vodíkový atom, atom halogenu jako je fluor, chlor, aminoskupinu, aminoskupinu ochráněnou příslušnou chránící skupinou, a nižší alkylovou skupinu substituovanou halogenem jako je např. trifluoromethylová skupina. Jako zmíněná chránící skupina může být použita jakákoliv skupina vhodná ke chránění aminoskupin, pakliže je snadno eliminovatelná obvyklými deprotekčními reakcemi jako je hydrolýza nebo hydrogenolýza, bez nějakého významného vlivu na ostatní strukturní elementy. Konkrétně, řečená chránící skupina je stejná jako „skupina přeměnitelná na vodíkový atom“ podle definice substituentu Z, který je objasněn později. Příklady chránících skupin zahrnují benzylovou a tritylovou skupinu.

Substituent R4 je vodíkový atom nebo nižší alkylskupina a přednostně použité jsou vodíkový atom, methylová a ethylová skupina. Mimochodem, poloha 3 na 1-pyrrolidinové skupině, ke které je vázán bazický substituent vykazující R4 a Z, je obsazen asymetrickým atomem uhlíku, který může vyvolat vznik optické izomerie.

Přednostní příklady substituentu Z zahrnují halogenovaný atom, nižší alkylskupinu jako je methyl a ethylová skupina, nebo „skupina přeměnitelná na vodíkový atom“. Jako již řečená „skupina přeměnitelná na vodíkový atom“ může být použita jakákoliv skupina pokud je přeměnitelná na vodíkový atom pomocí chemických prostředků jako je hydrolýza a hydrogenolýza nebo pomocí enzymologických prostředků.

Příklady skupiny Z jako „skupiny převoditelné na vodíkový atom“ zahrnuje zaprvé hydrolyzovatelné skupiny. Konkrétními příklady hydrolyzovatelných skupin jsou acylové skupiny, skupiny mající oxokarbonylovou skupinu, zbytky aminokyselin a peptidů, a dále například o-nitrofenylsulfenyl, trimethylsilyl, tetrahydropyranyl, difenylfosfinyl a pod. Obecně jsou látky

-6CZ 292631 B6 vzorce I-a podle tohoto vynálezu, kde Z je zbytek aminokyseliny nebo peptidu jako skupina hydrolyzovatelná na vodíkový atom, lepší pokud jde o rozpustnost než ty látky kde Z není ani zbytek aminokyseliny ani peptidu a jsou výhodně používány ve formě kapalných prostředků jako např. injekcí.

Příklady výše zmíněných acylových skupin zahrnují formyl, acetyl, trifluoroacetyl a pod.

Další příklady dříve zmíněných skupin majících oxykarbonylovou skupinu zahrnující ethoxykarbonyl, t-butoxykarbonyl [(CH₃)₃C-OCO-], benzyloxykarbonyl, p-methoxybenzyloxykarbonyl, vinyloxykarbonyl, (B-(p-toluensuIfonyl)ethoxykarbonyl a pod.

Dále příklady zbytků aminokyselin zahrnují aminokyselinové zbytky samotné a dále zbytky chráněné chránící skupinou, které jsou obvykle používány při syntéze peptidů. Příklady chránících skupin pro aminoskupinu obvykle používané v peptidové syntéze zahrnují acylové skupiny jako je formyl a acetyl, arylmethoxykarbonyl, p-nitrobenzyloxykarbonyl, t-butoxykarbonyl [(CH₃)₃C-OCO-] a pod.

Pokud jde o zbytky aminokyselin, mohou být použity jakékoliv jako např. zbytek alaninu [CH₃CH(NH₂)CO-] nebo leucinu [(CH₃)₂CHCH₂CH(NH₂)CO-]. Obecně jsou tyto aminokyseliny reprezentovány sadou tří anglických písmen a tento princip je dodržen také v této specifikaci. L-Formy, D-formy nebo jejich směsi jsou rozlišovány přidáním symbolů „L“, „D“ nebo „DL“. Tyto symboly jsou vynechány mluvíme-li o izomerech jako celku.

Konkrétní příklady zbytků aminokyselin zahrnují takové aminokyseliny, jako jsou Gly (glycin), Ala (alanin), Arg (arginin), Asn (asparagin), Asp (asparagová kyselina), Cys (cystein), Glu (glutamová kyselina), His (histidin), Ile (izoleucin), Leu (leucin), Lys (lysin), Met (methionin), Phe (fenylalanin), Pro (prolin), Ser (serin), Thr (threonin), Trp (tryptofan), Tyr (tyrosin), Val (valin), Nva (norvalin), Hse (homoserin), 4-Hyp (4-hydroxyprolin), 5-Hyl (5-hydroxylysin), Om (omithin) a β-Ala.

Dvě až pět, přednostně dvě až tři výše zmíněné aminokyseliny tvoří peptidové zbytky. Jako příklady takovýchto peptidových zbytků můžeme uvést peptidy, jako jsou Ala-Ala [CH₃CH(NH₂)CO-NHCH(CH₃)CO-J, Gly-Phe, Nva-Nva, Ala-Phe, Gly-Gly, Gly-Gly-GIy, Ala-Met, Met-Met, Leu-Met a Ala-Leu.

Zbytky těchto aminokyselin nebo peptidů mohou mít stereochemickou konfiguraci D-formy, L-formy nebo jejich směsi, ovšem L-forma je upřednostňována. Dále je-li Z zbytek aminokyseliny nebo peptidu, může mít tento zbytek podle okolností také asymetrický uhlíkový atom. Příklady aminokyselinových zbytků majících asymetrický uhlík zahrnují aminokyseliny jako Ala, Leu, Phe, Trp, Nva, Val, Met, Ser, Lys, Thr a Tyr, popř. jako příklady peptidových zbytků majících asymetrický atom uhlíku mohou být takové, které obsahují jako konstituenty výše uvedené aminokyseliny s asymetrickým atomem.

Skupina Z „převoditelná na vodíkový atom“ může být reduktivně eliminovatelná hydrogenolyzovatelná skupina a příklady takových skupin zahrnují o-toluensulfonyl, methylové skupiny substituované fenylem nebo benzyloxyderivátem jako jsou benzyl, trityl a benzyloxymethyl; arylmethoxykarbonylové skupiny jako jsou benzyloxykarbonyl a o-methoxybenzyloxykarbonyl; popř. halogenethoxykarbonylové skupiny jako je β,β,β-trichloroethoxykarbonyl a β-iodethoxykarbonyl.

Substituent „(Ríjp-,, v 1-pyrrolidinylové skupině vzorce Y' je vázán k pyrrolidinovému kruhu zmíněné 1-pyrrolidinové skupiny. Značka p znamená celé číslo 1 až 4. Je-li p rovno 2 až 4, R₅ může být identický nebo odlišný. R5 může být navázán v kterékoliv poloze 1-pyrrolidinové skupiny, ovšem výhodně buď do polohy kde je vázán bazický substituent obsahující jak R4 tak i Z (tato poloha je dále nazývána polohou 3 na 1-pyrrolidinové skupině nebo do polohy s ní

-7CZ 292631 B6 sousedící (dále označována jako poloha 2 nebo 4 na 1-pyrrolidinové skupině). Je-li R_s vázán do jiné polohy než v poloze 3 na 1-pyrrolidinové skupině a není-li R₅ vodíkový atom je zřejmé, že zmíněná 1-pyrrolidinová skupina má nejméně dva asymetrické atomy uhlíku, což má za následek, že látky I-a podle tohoto vynálezu mohou existovat jako stereoizomery (cis a trans formy) a jako optické izomery. Přednostní příklady substituentů R₅ zahrnují vodíkový atom, nižší alkylové skupiny jako jsou methyl nebo ethyl, nižší alkylové skupiny substituované halogenovými atomy jako fluoromethylová skupina nebo trifluormethylová skupina, nižší alkoxyskupiny, nižší alkylthioskupiny jako je methylthioskupina, popř. halogen jako je chlor nebo brom.

Látky I-a podle tohoto vynálezu mající takové substituenty, které byly detailně popsány výše a jejich fyziologicky akceptovatelné soli, jsou novými a vynikajícími protinádorovými látkami.

V látkách podle tohoto vynálezu majících obecný vzorec I-a mají základní struktury vykazující protinádorovou aktivitu následující vzorec I-b

kde Ri, m, R4, n, R₅, p a A jsou tak jak je definováno ve vzorci I-a; R₃' je vodíkový atom, aminoskupina, halogen, nebo nižší alkylová skupina, která může být substituována halogenem; Z je vodíkový atom nebo nižší alkylová skupina.

V následujícím textu budou látky reprezentované vzorcem I-b někdy zkracovány jako „aktivní látky“. Je-li látka, která není aktivní, vpravena do živého organismu, zmíněné látky jsou převedeny na látky aktivní uvnitř těla podle podmínek. V takovém případě je látka, která není aktivní někdy nazývána „prolék“ (prodrug). V tomto vynálezu zahrnují příklady takovýchto prekurzorů látky vzorce I-a, kde Z je zbytek aminokyseliny nebo peptidový zbytek, nebo kde R₂ je formylová skupina, popř. esterová forma jako je acetoxymethoxykarbonyl.

Mimo to, v popisu předložené specifikace a nároků, látky, které lze převést na aktivní látky pomocí chemických nebo enzymologických prostředků, jsou obecně označeny jako „konvertibilní látky“.

Strukturní charakteristika látek I-a podle tohoto vynálezu spočívá v tom, že zmíněné látky mají následující konstituci:

1) látky mají jako základní skelet pyridonkarboxylovou kyselinu reprezentovanou následujícím vzorcem 1,

-8CZ 292631 B6

kde A je podle výše zmíněné definice a a,b,c,d označují pozice, ve kterých jsou navázány substituenty,

2) 2-thiazolylová skupina, která může mít substituent, je vázána v poloze „a“,

3) karboxylová skupina nebo skupina převoditelná na karboxylovou skupinu je vázána v poloze „b“,

4) poloha „c“ je nesubstituována neboje v této poloze substituent jako je aminoskupina,

5) A je buď dusíkový atom nebo uhlík, který není substituovaný halogenem, jako třeba fluorem,

6) poloha „d“ je substituována s určitou 1-pyrrolidinylovou skupinou, která má nejméně substituent reprezentovaný následným vzorcem 2 ^N-lCHdn— (2)_z kde R4, Z a n jsou podle výše zmíněné definice.

Látky I-a podle tohoto vynálezu jsou novými látkami, které jsou strukturně charakteristické obzvláště kombinací substituentů, které jsou každý navázán v pozicích „a“ a „d“ a také faktem, že A neobsahuje atom fluoru.

Všechny látky podle tohoto vynálezu zahrnuté ve vzorci I-a a jejich fyziologicky přijatelné soli jsou výbornými protinádorovými nebo protirakovinnými látkami. Obzvláště látky kde A je CH jsou upřednostňovány jako protinádorové látky. Velmi výhodné jsou látky kde A je CH, m a p je 1 anje 0.

Zvláště výhodné jsou látky, kde A je CH, map jsou 1, n je 0, Ri je vodíkový atom, R₂ je karboxylová skupina, R₃ je vodíkový atom, R4 je vodíkový atom nebo nižší alkylová skupina, Z je vodíkový atom a R5 je vodíkový atom, nižší alkylová skupina nebo nižší alkoxyskupina. Příklady těchto látek zahrnují l,4-dihydro-7-(3-methoxy-4-methylamino-l-pyrrolidinyl)-4oxo-l-£2-thiazolyl)-l,8-naffyridin-3-karboxylovou kyselinu (viz. Látka 1-1 v dále uvedené tabulce 1) a látky, které lze na ni přeměnit.

Ačkoliv konkrétní příklady výhodných látek podle vzorce I-a jsou později zmíněny v příkladech, následující látky a látky na ně převoditelné mohou být dále přijaty jako výhodné příklady 1,8-naftyridinového typu látek vzorce I-a tohoto vynálezu:

7-(3-amino-4-fluor-l-pyrrolidinyl)-l,4-dihydro-4—oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3karboxylová kyselina

-9CZ 292631 B6

7-f3-amino-4-methoxy-3-methyl-l-pyrrolidinyl)-l,4—dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8naftyridin-3-karboxylová kyselina

7-(3-amino-4-methoxy-4-methyl-l-pyrrolidinyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8naftyridin-3-karboxylová kyselina

7-(3-amino-3-fluoromethyl-l-pynOlidinyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3-karboxylová kyselina,

7-(3-amino-4-fluoromethyl-l-pyrrolidinyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3-karboxylová kyselina

7-(3-amino-4-trifluoromethyl-l-pyrrolidinyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-nafityridin-3-karboxylová kyselina

7-(3-amino-l-pynOlidinyl)-l-(4-chloro-2-thiazolyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l,8-naftyridin-3karboxylová kyselina

7-(3-amino-l-pyrrolidinyl)-l-(4,5-difluoro-2-thiazolyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l,8-naftyridin3-karboxylová kyselina

5-amino-7-(3-amino-l-pyrrolidinyl)-l-(4-fluoro-2-thiazolyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l,8-naftyridin-3-karboxylová kyselina

7-(3-amino-l-pyrrolidinyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l-(4-trifluoromethyl-2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3-karboxylová kyselina

7-(3-amino- 1-pyrrolidinyl)-1 - [(4-(3,4-difluorophenyl-2-thiazolyl)-l ,4-dihydro-4-oxo-1,8naftyridin-3-karboxylová kyselina

7- (3-amino-l-pyrrolidinyl)-l-(5-bromo-2-thiazolyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l,8-naftyridin-3karboxylová kyselina.

Následující látky popř. látky na ně převoditelné mohou být uvedeny jako příklady pyridopyrimidinového typu látek vzorce I-a podle tohoto vynálezu:

5,8-dihydro-2-(trans-3-methoxy-4-methylamino-1 -pyrrolidinyl)-5-oxo-8-(2-thiazoly 1)pyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karboxylová kyselina

8- (4-fluoro-2-thiazolyl)-5,8-dihydro-2-(trans-3-methoxy-4-methylamino-l-pyrrolidinyl)-5oxo-pyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karboxylová kyselina

Příklady provedení vynálezu

Farmakologické testy

Příklady testů

V následující části je popsána protinádorová aktivita látek I-a podle tohoto vynálezu. Jako kontrolní látky byly použity jak látka A, která je popsána v japonské patentové přihlášce 152682/1986 (Ref. 1) a o které se píše v přehledu dosavadního stavu techniky tohoto vynálezu, a také Etoposid, což je komerčně dosažitelný protirakovinný preparát mající strukturu, která je popsána dále.

-10CZ 292631 B6

Příklad 1

In vitro protinádorová aktivita (IC₅₀: pg/ml) proti leukémii myších lymfocytů P388

Testovaná látka byla zkoušena na protinádorovou aktivitu podle MTT [3-(4,5-dimethylthiazol2-yl)-2,5-difenyl-tetrazolium bromid] metody, s použitím leukemických myších lymfocytních buněk P3 88.

Kultivační médium obsahující 1000 až 2000 myších P388 lymfocytních leukemických buněk a testovanou látku v předem definované koncentraci bylo naneseno v množství 0,1 ml do každé z 96 misek a buňky byly kultivovány 72 hodin při teplotě 37 °C a 5% atmosféře CO₂ ve vzduchu. Po kultivaci byl přidán roztok MTT (5 mg/ml) v množství 0,02 ml na každou misku a poté byly buňky dále kultivovány 4 hodiny. Kultivační médium pak bylo odstředěno (4 °C, 2000 otáček/min, 20 min) a kapalina byla odsáta. Poté bylo do každé misky přidáno 0,1 ml dimethylsulfoxidu k rozpuštění vzniklého formazanu a následně bylo přidáno dalších 0,1 ml dimethylsulfoxidu. Absorbance (OD) každého ze získaných roztoků byla měřena s použitím Multiskan Bichromatic (hlavní vlnová délka 570 nm, vedlejší vlnová délka 690 nm). Za předpokladu, že absorbance buněk bez testované látky (kontrolní vzorek) je 100 %, byla stanovena 50% proliferace inhibitomí koncentrace (50 % inhibitomí koncentrace: IC₅₀: pg/ml) metodou nejmenších čtverců. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 1.

Tabulka 1 In-vitro protinádorová aktivita (IC50: pg/ml) proti leukemickým myším lymfocytním buňkám P388.

Látka	R3 0 xxVRi υ·^νλν< hci N^S	XC-50 (pg/mí)
A	Ri	Rs	Y'	Rz
1-1	CH	H	H	εΗ3ΝΗΛ_ * [n-	COz H	0,0107
1-2	CH	H	H	Stejně jako nahoře [(-·-) forma]	CO2 H	0,00641
1-3	CH	H	H	Stejně jako nahoře {(—) forma]	CO2 H	0,0200
1-4	CH	H	H	CH,NH CHjO*^	C02 H	0,0200
2	CH	Ή 1	H	ΗΧΝ. CH3OV^/	CO 2 H	0,0178

-11 CZ 292631 B6 *Sterická struktura každého substituentu ukazuje relativní konfiguraci (totéž platí i v následujícím popisu)

3	CH	H	H	H'\>.	CO 2 H	0,0103
4	CH	H	H	CHaNH ch3<An-	CO z H	0,017'5
5	CH	H	H	CHSNH. rv	C02 H	0,0117
6	CH	H	H	CHjNH θ’’	CO2 H	0,0105
7	CH	H	H	HA> CH,''·''	CO z H	0,00955
8	CH	F	H	H,N O-	C02 H	0,00413
9	CH	H	nh2	H,N O·	CO 2 H	0,00809
10	CH	H	H	chzQn-	CO 2 H	0,0192
1 i	CH	H	H	CHaNH V- CHjjO'	CHO	0,0309
12	CH	H	H	H2N. Ch/TV	COz H	0,0195

- 12CZ 292631 B6

13	CH	H	H	C^NH. L NCH3Ov^	CO z H	0,0252
14	N	H	H	H’NY-X Ό*·	CO z H	0,0465
15	CH	H	NHz	Ο-ί,ΝΗ. V^N- CH3Ov<^	CO2 H	0,0157
16	CH	F	H	CH.NH. CHaO''^	C02 H	0,0344
A	CF	H	H	O	CO z H	0,0942
H	Etoposid	0,00849

Látka H: Etoposid

Jak je uvedeno v tabulce 1, protinádorové in-vitro aktivity (IC₅₀) látek podle tohoto vynálezu 5 proti myším leukemickým lymfocytním buňkám P388 jsou 2 až 22 krát silnější než u látky A.

Příklad 2

Kultivační médium obsahující 500 až 2000 lidských rakovinných buněk bylo umístěno v množství 0,1 ml do každé z 96 misek a buňky byly kultivovány 20 hodin při teplotě 37 °C a v 5% atmosféře CO₂ ve vzduchu. Po kultivaci byl přidán roztok testovaných látek o dané koncentraci a poté byly buňky kultivovány po dalších 72 hod. Po kultivaci byl přidán roztok MTT (5 mg/ml) v množství 0,01 ml do odpovídajících misek a buňky byly kultivovány další

4 hod. Kapalné kultivační médium bylo odsáto, bylo přidáno 0,1 ml dimethylsulfoxidu aby se rozpustil vzniklý formazan a poté bylo přidáno dalších 0,1 ml DMSO. Ze vzniklých roztoků byla

-13CZ 292631 B6 stanovena 50% proliferace inhibitomí koncentrace stejným způsobem jako v příkladu 1. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 2.

Tabulka 2. In vitro protinádorová aktivita (IC50: pg/ml) proti lidským rakovinným buňkám

Látka	Lidské rakovinné buňky
KB	HMY-2	AZ-521	HKK45	WiDr	C-33A	A-427
1-1	0,110	0,131	0,0561	0, 150	0,379	0,137	0,0871
1-2	0,0873	0,114	0,0396	0/155	0,357	0,0828	0,0925
1-3	0,208	0,234	0,110	0,222	0,503	0,148	0,107
1-4	0,147	0,197	0,0985	0,131	0,273	0,143	0,158
2	0,309	0,382	0,331	0,579	1,88	0,314	0,169
3	0,153	0,210	0,181	0,364	1,08	0,184	0,0588
4	0,172	0,187	0,100	0,199	0,392	0,144	0,194
5	0,0805	0,0944	0,0433	0,0978	0,218	0,106	0,0927
6	0,0987	0,122	0,0622	0,160	0,381	0,156	0,0832
7	0,111	0,139	0,0719	0,112	0,314	0,105	0,0933
8	0,0494	0,0578	0,0285	0,143	0,323	0,0712	0,0625
9	0,106	0,211	0,0625	0,148	0,412	0,151	0,100
10	0,190	0/386	0,292	0,468	0,797	0,247	0,153
i1	0,179	0,214	0,0307	0,144	0,264	0,161	0,0749
12	0,125	0,265	0,101	0,164	0,295	0/131	0,146
13	0,150	0,171	0,0717	0,139	0,268	0/138	0,150
14	0,636	0,872	0,310	—	—	—	—
15	0,0604	0,119	0,0288	0,0964	0,259	0,0854	0,0696
16	0,126	0,181	0,0798	0,148	0,322	0,132	θ’145
A	1,94	2,88	0,797	V27	4,09	0,651	0,854
H	0,201	0,298	0,080	0,490	1,63	0,084	0,095

KB:

HMV-2

AZ-521

MKN-45

WiDr

C-33A

A-427

KB lidská nasopharynx rakovina HMV-2 lidský melanom AZ-521 lidská rakovina žaludku MKN-45 lidská rakovina žaludku WiDr lidská colorektální rakovina C-33A lidská rakovina krku A—427 lidská rakovina plic

-14CZ 292631 B6

Příklad 3:

Nárůst délky života myší, do kterých byly implantovány leukemické buňky lymfocytů P388 x 10^s leukemických lymfocitních buněk P388 bylo intraperitoneálně implantováno do každé zSLC:BDFl myší (8-10 týdnů staré, 7 zvířat na jednu skupinu). Testovaná látka byla buď rozpuštěna v 0,1 N NaOH nebo suspendována v 0,4% karboxymethylcelulózovém roztoku a vzniklý roztok nebo suspenze byla naředěna destilovanou vodou nebo 0,4% roztokem karboxymethylcelulózy, tak aby byly získány koncentrace určené k aplikaci. Získaný roztok byl dvakrát intraperitoneálně (ip) aplikován, první a pátý den po implantaci pokaždé v množství 0,2 ml. Úmrtí myší bylo pozorováno během 30 dnů a střední doba přežití (dále v textu jako MST) byla určena pro každou skupinu a nárůst délky života (ISL, %) byl spočítán podle následující rovnice:

ILS (%) = [{(MST testované skupiny)/(MST kontrolní skupiny)}-l] x 100

Efekt testované látky byl posuzován následovně (podle kritéria U.S. Národního institutu pro rakovinu (NCI):

ILS =

75% nebo více

- 74% nebo méně ++ (značně účinný) + (účinný)

- (neúčinný)

Výsledky jsou shrnuty v tabulce 3.

Tabulka 3: Nárůst doby života myší s implantovanými buňkami leukemických lymfocytů P388

Látka	Dávka (mg/kg)	ILS (%) (v roztoku)	ILS (%) (v suspenzi)	Vyhodnocení
1-1	50	>275		++
	25	200		++
	12,5	150	175	++
	6,25	125		++
	3,13	100	80	++
	1,56	63		+
	0,78	50		+
1-2	25	>275		++
	12,5	>275	213	++
	6,25	175		-H-
	3,13	125	113	++
	1,56	88		++
	0,78	50		+
1-3	50	>275	200	++
	25	200		-H-
	12,5	138	125	++
	6,25	88		++
	3,13	63	63	+
W	12,5 3,13		100 25	++ +

-15CZ 292631 B6

Tabulka 3 - pokračování

Látka	Dávka (mg/kg)	ILS (%) (v roztoku)	ILS (%) (v suspenzi)	Vyhodnocení
2	50	>275	238	++
	25	213		++
	12,5	125	138	++
	6,25	100		++
	3,13	88	63	++
	1,56	50		+
3	25	>275		++
	12,5	188	175	++
	6,25	113
	3,13	75	88	++
	1,56	63		+
4	25	150		++
	12,5	125	125	++
	6,25	88		++
	3,13	63	63	+
5	12,5	188	188	++
	6,25	150		++
	3,13	113	88	++
	1,56	50		+
6	50		>275	++
	25	225		++
	12,5	150	200	++
	6,25	138		++
	3,13	100	100	++
	1,56	63		+
7	50		188	++
	12,5	-	100	++
	3,13		75	++
8	12,5		>275	++
	3,13	-	175	++
	0,78		75	++
9	50		250	++
	12,5	—	125	++
	3,13		100
10	50	>275		++
	25	125		++
	12,5	100	113	++
	6,25	75		++
	3,13	63	50	+

-16CZ 292631 B6

Tabulka 3 - pokračování

Látka	Dávka (mg/kg)	ILS (%) (v roztoku)	ILS (%) (v suspenzi)	Vyhodnocení
11	50		225	++
	12,5	-	150	++
	3,13		88	++
12	12,5		75	++
13	50		213	++
	12,5	-	100	++
	3,13		25	+
14	50		>275	++
	12,5	-	113	++
	3,13		63	+
15	50		238	++
	12,5	-	200	++
	3,13		88	++
16	50		238	++
	12,5	-	138	++
	3,13		38	+
17	50	—	150	++
A	50	38		+
	25	25	-	+
	12,5	0		—
H	25	>275		++
	12,5	150		++
	6,25	100	—	++
	3,13	75		++
	1,56	50		+

Jak je ukázáno v tabulce 3, vliv látek podle tohoto vynálezu na nárůst doby života myší s implantovanými buňkami leukemických lymfocytů P388 je mnohem větší než je tomu u kontrolní látky A.

Příklad 4

Inhibice růstu nádoru u myší s implantovanými myšími nádorovými buňkami (kmen 26)

2% roztok myších nádorových buněk (kmen 26) byl subkutánně implantován v abdominální části SLC : CDF1 myších samiček v množství 0,1 ml každé (stáří 7 až 9 týdnů, 7 zvířat na skupinu). 15 Poté byla testovaná látka rozpuštěna v 0,1 N roztoku NaOH a naředěna destilovanou vodou na předem stanovené koncentrace pro aplikaci. Získané roztoky byly intraperitoneálně (ip) aplikovány v dávce 0,2 ml na den, a to od prvního do devátého dne po implantaci. Dvacátý první nebo dvacátý druhý den po implantaci byla hmotnost nádoru odhadnuta z průměru nádoru

-17CZ 292631 B6 a inhibice růstu nádoru (IR%) aplikované látky ve srovnání s kontrolní skupinou byla stanovena podle následující rovnice:

IR (%) = [1-{(MTW zkoumané skupiny)/(MTW kontrolní skupiny)}] x 100

MTW = střední hmotnost nádoru

Jak ukazuje tabulka 4, inhibice růstu nádorů u myší s implantovanými nádorovými buňkami (kmen 26) látek podle tohoto vynálezu je vynikající. Na druhé straně, efekt látky A podle tohoto vynálezu je viditelně horší, a to jak pokud jde o dávku tak i výsledky inhibice.

Tabulka 4: Inhibice růstu nádorů (IR) u myší s implantovanými nádorovými buňkami (kmen 26)

Látka	Dávka (mg/kg)	IR(%)
1-1	1,56	86
1-2	1,10	69
1-3	1,56	50
	2,21	75
W	3,13	61
2	12,5	79
3	3,13	77
4	1,56	64
	3,13	89
5	1,56	78
6	1,56	71
7	1,56	61
	,13	95
8	0,39	57
	1,56	91
9	3,13	62
	6,25	97
11	3,13	74
11	0,78	50
	1,56	58
12	3,13	48
	6,25	84
13	1,56	41
14	3,13	55
	6,25	68
15	3,13	68
16	3,13	77
A	12,5	23
H	12,5	57

V následujících příkladech 5 až 9 byly implantovány lidské rakovinné buňky holým myším, kterým byly aplikovány testované látky po rozpuštění ve vodných roztocích NaOH a poté byl sledován stupeň inhibice růstu rakovinných buněk.

Výsledky příkladů 5 až 9 jsou shrnuty v obrázcích 1-14.

Obrázky 1 až 9 ukazují inhibici růstu nádorů (IR) v závislosti na dnech.

Obrázky 10-14 ukazují vztah mezi hmotností nádorů a počtem dní v případech, kde byla použita látka 1-1. Vertikální osa odpovídá hmotnosti nádoru, zatímco horizontální osa představuje počet dní uplynulých od začátku aplikace. Hmotnost nádoru byla odhadnuta z průměru nádorů. Výraz „Control“ v obrázcích 10-14 znamená závislost změny hmotnosti nádoru na počtu dní u

-18CZ 292631 B6 holých myší, kde, ačkoliv byly implantovány rakovinné buňky, nebyla aplikována žádná testovaná látka.

Každý z obrázků ukazuje množství každé aplikované látky (mg/kg/den) a IR (%) v posledním dni pozorování jak je vysvětleno v příkladu 4.

V následujícím je vysvětleno schéma podávání testovaných látek holým myším. Po uplynutí určitého počtu dní (x) od implantace lidských rakovinných buněk holým myším byly podávány intraperitoneálně (ip) testované látky během y dní a to bylo následováno „vymývací periodou“ trvající z dní. Poté je testovaná látka aplikována znovu v dní. V tomto případě je cyklus podávání (y dní) a přerušení (z dní) nazýván „běh“. Takovéto schéma lze zapsat podle následujících značek:

[(x) (y) (z) (běh) (ip)]

Tyto značky jsou objasněny níže pomocí příkladů. Značka „Ť“ znamená den podání testované látky.

Příklad: Testované látky jsou aplikovány (ip) 25 dní po implantaci, poté je podávání přerušeno na 6 dní a pak je v podávání opět pokračováno. Tato operace je opakována 5-krát.

Implantace

[(25)(1)(6)(5 Běh )(ip)J

Příklad 5

Protinádorový efekt na KB lidskou mesofarynx rakovinu implantovanou holým myším.

Experiment byl proveden za následujících podmínek:

Podmínky:

Použitá zvířata: Samičky BALB/cAnNCrj-nu/nu holých myší (9 až 14 týdnů staré, 6 zvířat na jednu skupinu)

Rakovinné buňky: Buňky KB lidské mesofarynx rakoviny

Implantace rakovinných buněk: 2.5 x 10⁶ rakovinných buněk bylo subkutánně implantováno v abdominální části holých myší.

Schéma podávání: [(5) (1) (6) (6 běhů) (ip)]

Výsledky: Shrnuty v obrázcích 1-2 a 10

-19CZ 292631 B6

Příklad 6

Protinádorový efekt na buňky MX-1 lidské rakoviny implantované holým myším.

Experiment byl proveden za následujících podmínek:

Podmínky:

Použitá zvířata: Samičky BALB/cAnNCrj-nu/nu holých myší (9 týdnů staré, 5-6 zvířat na jednu skupinu)

Rakovinné buňky: Lidská MX-1 rakovina

Implantace rakovinných buněk: kousek rakovinné tkáně byl implantován do zadní části holých myší.

Schéma podávání: [(16 a 23) (1) (6) (6 běhů) (ip)]

Výsledky: Shrnuty v obrázcích 3-5 a 11

Příklad 7

Protinádorový efekt na WiDr lidskou colorektální rakovinu implantovanou holým myším.

Experiment byl proveden za následujících podmínek:

Podmínky:

Použitá zvířata: Samičky BALB/cAnNCrj-nu/nu holých myší (9 až 14 týdnů staré, 6 zvířat na jednu skupinu)

Rakovinné buňky: Lidská colorektální rakovina WiDr

Implantace rakovinných buněk: 2,5 x 10⁶ rakovinných buněk bylo subkutánně implantováno v abdominální části holých myší.

Schéma podávání: [(9) (1) (6) (6 běhů) (ip)]

Výsledky: Shrnuty v obrázcích 6 a 12

Příklad 8

Protinádorový efekt na buňky HMV-2 lidského melanomu implantované holým myším.

Experiment byl proveden za následujících podmínek:

Podmínky:

Použitá zvířata: Samičky BALB/cAnNCrj-nu/nu a BALB/c nu/nu holých myší (11 až 15 týdnů staré, 6 až 7 zvířat na jednu skupinu)

Rakovinné buňky: Lidský melanom HMV-2

-20CZ 292631 B6

Implantace rakovinných buněk: 4.4 x 10⁶ rakovinných buněk bylo subkutánně implantováno v abdominální části holých myší.

Schéma podávání: [(8-9) (1) (6) (9 běhů) (ip)]

Výsledky: Shrnuty v obrázcích 7-8 a 13

Příklad 9

Protinádorový efekt na buňky LX-1 lidské rakoviny plic implantované holým myším.

Experiment byl proveden za následujících podmínek:

Podmínky:

Použitá zvířata: Samičky BALB/cAnNCrj-nu/nu holých myší (13 týdnů staré, 6 zvířat na jednu skupinu)

Rakovinné buňky: Lidská rakovina plic

Implantace rakovinných buněk: Kousek rakovinné tkáně o velikosti 2 mm³ byl subkutánně implantován v zadní části holých myší.

Schéma podávání: [(19 a 26) (1) (6) (5-6 běhů) (ip)]

Výsledky: Shrnuty v obrázcích 9 a 14

Jak je vidět na výše zmíněných obrázcích 1-14, látky podle tohoto vynálezu významně inhibují růst lidských rakovinných buněk implantovaných na holé myši.

Příklad 10

Akutní toxicita

Roztoky testovaných látek o předem definované koncentraci byly podávány (0,1 ml/10 g hmotnosti) samicím myší BALB/c CrSIc (5 až 10 zvířat na jednu skupinu, stáří 10 týdnů). Hodnoty LD₅₀ byly spočteny z mortality myší čtrnáctý den po podání. Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce.

Tabulka 5 Akutní toxicita (LD₅₀: mg/kg)

Látky	Intraperitoneální podání (ip)	Intravenózní podání (iv)
1-1	93,2	-
2	135	-
3	55,2	119
4	-	>100
5	-	66,7

H 71 123

Jak je ukázáno v tabulce 5, akutní toxicita látek podle tohoto vynálezu je téměř totožná jako je tomu u látky H (Etoposid), komerčně dostupného protirakovinového prostředku.

-21 CZ 292631 B6

Příklad 11

Rozpustnost

Byly měřeny rozpustnosti látek 1-1, 1-1-3, 3 a 3-1 v 0,1 mol fosfátovém pufru (pH 7,2) a v destilované vodě, přičemž byly získány následující výsledky.

Látka 1-1-3 je L-Ala derivátem látky 1-1 a připravuje se podle příkladu C-l (5), zatímco látka 3-1 je L-Ala derivátem látky 3 a připravuje se podle příkladu C-6 (4).

Jak je ukázáno v tabulce 6, látky 1-1-3 a 3-1, jejichž Z je aminokyselinový zbytek, vykazují rozpustnost přibližně 10 x větší než látky 1-1 a 3, jejichž Z je vodíkový atom. Kromě toho, rozpustnost látky 1-1 v neutrálním stavuje tak vysoká, že je vhodná jako kapalný prostředek do injekcí.

Tabulka 6 Rozpustnost

Látka	Destilovaná voda (mg/ml)	0,1 mol fosfátový pufr (pH 7,2), (mg/ml)
1-1	2,9	20,1
1-1-3	>98,7	>233,5
3	8,3	—
3-1	79,4	-

Jak vyplývá z výše uvedených výsledků testu, látky podle tohoto vynálezu vykazují významnou protinádorovou aktivitu nejen proti nepevným tumorům, ale také proti leukémii lymfocytů, různým typům pevných tumorů, které se vyskytují např. v tkáních plic, prsou, žaludku, dělohy, kůže, střev, močového měchýře a nasophaiynxu. Kromě toho mají látky podle tohoto vynálezu srovnatelně vyšší bezpečnost. Látky jsou proto užitečné jako prostředky pro léčení nebo profylaxi lidských nádorů.

Látky podle tohoto vynálezu jsou podávány v takových množstvích aby zabránily tumorům, přičemž toto množství závisí na jejich farmakodynamických charakteristikách, způsobu podávání, symptomech, věku, důvodu podávání (profylaxe nebo léčení) apod. Obvykle jsou však látky podávány v množstvích kolem 0,25 mg až 50 mg, přednostně 0,5 až 20 mg, na den a kg hmotnosti. Například, 13 mg až 2,5 g, přednostně 25 mg až 1 g celkového množství aktivní ingredience je podáváno denně pacientům majících hmotnost kolem 50 kg. Výše zmíněné denní dávky mohou být rozděleny do dvou nebo čtyř a podávány odděleně. Způsob podávání může být buď orálně nebo parenterálně, přičemž parenterální způsob je doporučen.

Látky podle tohoto vynálezu jsou obecně podávány ve formě farmaceutických preparátů. Tyto preparáty mohou být připraveny složením látek podle tohoto vynálezu s farmaceutickými nosiči. Například, farmaceutický nosič pro kapalné přípravky, jako farmaceutický preparát pro parenterální podávání, obsahuje rozpouštědlo jako nezbytnou ingredienci, pokud je to nezbytné, případně také látky upravující povrchové napětí, solubilizátory, utišující prostředky, látky upravující pH, pufry a konzervační činidla.

Pokud jde o rozpouštědlo, obvykle se používá voda, organická rozpouštědla jako jsou propylenglykol nebo směsi vody a organického rozpouštědla.

Příklady látek upravujících tonicitu zahrnují cukiy jako jsou sorbit a mannit, popř. NaCl, ovšem cukry se používají přednostně.

-22CZ 292631 B6

Jako činidla upravující pH mohou být použity báze jako třeba hydroxid sodný a kyseliny jako např. chlorovodíková kyselina a fosforečná kyselina.

Příklady solubilizátorů zahrnují surfaktanty jako jsou Polysorbát 80 a Pluronic F68, popř. organické kyseliny jako kyselina mléčná a kyselina trifluoromethansulfonová, které mohou tvořit adiční soli společně s látkami podle tohoto vynálezu.

Jako utišující prostředky mohou být použity lidokain hydrochlorid a prokain hydrochlorid. Jako konzervační činidlo se používá benzylalkohol a jako příklad stabilizátoru může být uveden antioxidant jako je askorbová kyselina. Pokud jde o pufr, používají se soli kyselin jako jsou fosforečná, citrónová nebo mléčná kyselina.

Kapalné přípravky jako jsou injekce nebo infuze mohou být připraveny rozpouštěním nebo suspendováním, přednostně rozpouštěním látek podle tohoto vynálezu v rozpouštědle, nebo je-li to nezbytné zahrnutím dalších látek před nebo po rozpuštění nebo suspendování. Lyofílizované farmaceutické preparáty se připravují sušením-vymrazováním těchto kapalin. Mají-li být aplikovány, lyofílizované farmaceutické přípravky jsou znovu rozpuštěny nebo znovu suspendovány.

Pokud jde o nosiče v pevných farmaceutických přípravcích jako třeba v tabletách, kapslích, granulích, granulkách a prášcích, může být použito cokoliv, pokud nedochází k reakci s látkami podle tohoto vynálezu a pokud jsou pro takové použití známé. Konkrétní příklady těchto nosičů zahrnují škroby, mannitol, krystalická celulóza, karboxymethylcelulóza a pod.

Tyto farmaceutické preparáty mohou dále obsahovat další jiné složky, než látky podle tohoto vynálezu, užitečné pro léčení.

Způsob přípravy

Způsoby přípravy látek podle tohoto vynálezu jsou následující. Látky (I) podle tohoto vynálezu a jejich soli se připravují (a) substituční reakcí pyrrolidinu, (b) cyklizační reakcí, (c) oxidační reakcí.

(a) Substituční reakce pyrrolidinu

Mezi látkami vzorce (I) podle tohoto vynálezu, jak látky (I-a), kde Y je 1-pyrrolidinová skupina (Y') mající substituent, tak i jejich soli se připravují reakcí látky mající následující vzorec (Π) nebo její soli s pyrrolidinovým derivátem následujícího vzorce (IU).

(H) kde L je eliminovatelná skupina a A, R], R₂, R₃ a m jsou definovány výše.

-23CZ 292631 B6

kde R4, R₅, Z, n a p jsou definovány výše.

Pokud jde o eliminovatelnou skupinu (L) ve vzorci (Π), můžeme uvést stejné skupiny jako v případě vzorce (I), kde Y je eliminovatelná skupina. Přednostně lze uvést jako příklad skupiny (L) atom halogenu, nižší alkoxylovou skupinu, nižší alkylsulfonylovou skupinu, arylsulfonylovou skupinu, nižší alkylsulfonyloxy skupinu, arylsulfonyloxy skupinu a pod.

Výše zmíněná reakce může být provedena buď bez použití rozpouštědla nebo v příhodném rozpouštědle, s výhodou v přítomnosti báze při teplotách mezi 10 až 150 °C. Jako rozpouštědlo lze použít acetonitril, vodu, ethanol, pyridin, dimethylsulfoxid, l-methyl-2-pyrrolidon a pod. Jako báze se používá taková, která funguje jako akceptor kyseliny, konkrétní příklady zahrnují triethylamin, l,8-diazabicyklo[5,4,0]-7-undecen a uhličitany jako třeba uhličitan sodný a hydrogenuhličitan sodný. Látka (ΙΠ) se používá v přebytku takže může zároveň sloužit jako akceptor.

Látky (Π), které se používají jako suroviny, jsou také nové látky a mohou být připraveny např. následující cyklizační reakcí.

(b) Cyklizační reakce

Látky (I) podle tohoto vynálezu a jejich soli mohou být připraveny vystavením látky reprezentované následujícím vzorcem (IV) cyklizační reakci.

(IV), kde L je eliminovatelná skupina a R_b R₂, R₃, A, Y a m jsou definovány výše.

Jako eliminovatelná skupina L může být použita stejná skupina jako v definici Y, jak je popsáno výše u vzorce (Π).

Cyklizační reakce může být provedena mícháním směsi látky (IV) a rozpouštědla v přítomnosti báze jako např. uhličitanu draselného, uhličitanu sodného, hydridu sodného, t-butoxidu draselného nebo fluoridu draselného, jejíž množství je jeden až trojnásobek látkového množství látky (IV) při teplotách 30 až 150 °C, přednostně 30 až 100 °C, jednu až 6 hodin. Příklady vhodného solventu zahrnují ethanol, dioxan, tetrahydrofuran, dimethylformamid, dimethylsulfoxid a pod.

-24CZ 292631 B6

Látky (IV), které jsou používané jako suroviny, jsou také nové látky a mohou být připraveny způsoby popsanými v následujících příkladech.

(c) Oxidační reakce

Látky podle tohoto vynálezu představované vzorcem (I) a jejich soli mohou připraveny vystavením látky následujícího vzorce (V) oxidační reakci.

CHO (V), kde Ri, R₃, A, Y a m jsou definovány výše.

Tato oxidační reakce se provádí smícháním výše uvedené látky (V) s oxidačním činidlem v rozpouštědle a mícháním vzniklé směsi několik hodin při teplotách 100 °C nebo nižších, přednostně 0 až 50 °C. Příklady oxidačních činidel zahrnují 2,3-dichloro-5,6-dikyanoethylen, palladium na uhlíku, N-bromsukcinimid. Jako příklady rozpouštědla lze uvést 1,4-dioxan, toluen, xylen, terc-butanol, ethylacetát, dimethylformamid a pod.

Látky (I) podle tohoto vynálezu a jejich soli mohou být připraveny reakcí látky (I) podle tohoto vynálezu, kde Z je vodíkový atom, s aminokyselinou nebo peptidem s využitím obvyklých metod, nebo aminací látky (I), kde R₃ je halogenový atom, aby byla výše zmíněná látka přeměněna na derivát, kde R₃ je aminokyselina.

Jsou-li látky podle tohoto vynálezu získané výše uvedenými způsoby ve formě esteru, řečené látky mohou být přeměněny na karboxylové kyseliny pomocí hydrolýzy esterové části obvyklými metodami. Kromě toho, karboxylová část látky (I) může být esterifikována obvyklými způsoby. Za další, je-li Z ve vzorcích látek podle tohoto vynálezu aminokyselinový zbytek, zbytek peptidu chráněný chránící skupinou, může být tato chránící skupina odstraněna běžnými metodami.

Látky připravené podle tohoto vynálezu mohou být izolovány a čištěny obvyklými způsoby. Podle podmínek izolace a čištění mohou být tyto látky získány ve formě solí, jako volné karboxylové kyseliny nebo volné aminy, které jsou poté převedeny na další podle potřeby, takže látky mohou být obdrženy v požadované formě.

Jsou-li látky podle tohoto vynálezu racemické, mohou být, je-li to nezbytné, separovány na jednotlivé optické izomery známými metodami. Stereoizomery (cis a trans formy) mohou být, pokud je to nezbytné, separovány navzájem s využitím obvyklých metod jako je např. frakční krystalizace nebo chromatografické metody.

Je samozřejmě možné užití optických izomerů nebo stereoizomerů jako surovin a převést je tak na odpovídající požadované látky, takovýto způsob je obecně výhodný.

-25CZ 292631 B6

Příklady

Tento vynález je detailně popsán níže uvedenými pracovními příklady. V dalším textu zahrnují příklady série A specifické příklady způsobů přípravy intermediátů (Π) [obecný vzorec Π], příklady série B zahrnují vzory způsobů přípravy surovin (ΙΠ)) [obecný vzorec ΠΙ]. Příklady série C zahrnují specifické příklady látek (I-a) a příklady série D obsahují specifické příklady způsobu přípravy farmaceutických přípravků.

Kromě toho obrázky 15-19 ukazují reakční schémata, zmíněná v následujících příkladech série A, série B a série C-14.

1. Série A

Příklad A-l. Příprava intermediátů (Π). Ethyl ester 7-chloro-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazoly 1)—1,8-nafthyridin-3-karboxylové kyseliny (1)—1 2,6-Dichloropyridin (20 g) byl rozpuštěn ve 200 ml tetrahydrofuranu a ke vzniklému roztoku byl v proudu argonu přikapán roztok n-butyllithia (1,6 M) v hexanu (84,5 ml) při teplotě -78 °C během 30 minut. Směs pak byla míchána další hodinu při stejné teplotě a poté byl přidán velký přebytek CO₂ (s). Poté byla reakční směs míchána další hodinu, přičemž teplota během té doby vystoupila na -10 °C, pak byla přidána voda a chlorovodíková kyselina až do pH 1-2 a výsledný roztok byl extrahován ethylacetátem. Získaný extrakt byl sušen nad Ňa₂SO₄ a rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku. K získané tuhé látce byl přidán thionylchlorid (40 ml) a výsledná směs byla zahřívána k refluxu 3 hodiny. Přebytek thionylchloridu byl oddestilován za sníženého tlaku a surový produkt byl vakuově destilován za vzniku 19,8 g 2,6-dichloronicotinoylchloridu.

Teplota varu: 97 - 99 °C/1 mmHg.

IR (čistý) cm¹: 1784.

(1) —2 Směs 2,6-dichloronikotinové kyseliny (50,6 g) s thionylchloridem (100 ml) byla refluxována 2 hodiny. Přebytek thionylchloridu byl oddestilován za sníženého tlaku a surový produkt byl vakuově destilován za vzniku 44,9 g 2,6-dichloronikotinoylchloridu.

Teplota varu: 115 až 120 °C/3 mmHg.

IR (čistý) cm^-1: 1784.

(2) Diethylester Ethoxymagneziummalonové kyseliny, získaný z kovového hořčíku (5,36 g), diethylesteru malonové kyseliny (35,4 g) a ethanolu (27 ml), byl rozpuštěn ve směsi tetrahydrofuranu (35 ml) a toluenu (140 ml). Výsledný roztok byl ochlazen ledem a za míchání byl přikapán roztok složený z 19 ml tetrahydrofuranu, 32 ml toluenu a 44,9 g chloridu kyseliny získaného ve výše popsané reakci (1)—1 nebo (1)-2. Po přikapání celého objemu byla reakční směs míchána přes noc při laboratorní teplotě. Směs byla zakoncentrována za sníženého tlaku, ke zbytku byla přidána vodná kyselina chlorovodíková a směs byla míchána s ethylacetátem. Získaný extrakt byl sušen nad Na₂SO₄ a rozpouštědlo bylo oddestilováno při sníženém tlaku za vzniku olejovitého zbytku. Byla přidána voda (190 ml) a kyselina p-toluensulfonová (0,1 g) a směs byla refluxována 2 hod. Po ochlazení byla směs extrahována chloroformem a sušena sNa₂SO₄, rozpouštědlo bylo odstraněno za vakua za vzniku olejovitého materiálu. Získaný surový produkt byl vakuově destilován za vzniku 45,2 g diethylesteru 2,6-dichloronikotinoyloctové kyseliny.

Teplota varu: 135-140 °C/2 mmHg.

-26CZ 292631 B6 (3) Směs 44,9 g látky získané podle výše uvedeného předpisu (2), acetanhydridu (43,8 g) a ethylformiátu (37,7 g) byla refluxována 1 hod. Směs pak byla odpařena do sucha za vakua a za chlazení ledem bylo přidáno 500 ml diizopropyl etheru a 20 g 2-aminothiazolu. Výsledná směs byla refluxována 5 hodin. Krystaly byly odfiltrovány za vzniku 52,6 g ethyl esteru 2-(2,6-dichloronikotinoyl)-3-(2-thiazolylamino)akrylové kyseliny.

Teplota tání: 119 - 122 °C (krystalizováno z diizopropyletheru),

IR (KBr) cm*¹: 1700.

(4) Látka (3) získaná z předešlé reakce (51,7 g) byla rozpuštěna v 310 ml dioxanu a bylo přidáno 21,4 g uhličitanu draselného. Výsledná směs byla míchána při teplotě 60 °C 1 hod. Pak byla přidána ledová voda, směs byla neutralizována 10% vodným roztokem chlorovodíkové kyseliny a vzniklé krystaly byly zfiltrovány. Kiystalická látka byla rekrystalizována ze směsi chloroformu a diizopropyletheru za vzniku 44,6 g ethylesteru 7-chloro-l,4-dihydro—4-oxo-(2thiazolyl)-l ,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny.

Teplota tání: 176-177 °C.

IR (KBr) cm*¹: 1724.

NMR (CDC1₃) δ: 1,43 (t, 3H, J = 6,5 Hz), 4,45 (q, 2H, J = 6,5 Hz), 7,38 (d, 1H, J = 3,5 Hz), 7,52 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,75 (d, 1H, J = 3,5 Hz), 8,78 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 10,00 (s, 1H).

Příklad A-2 Příprava intermediátu (Π) ethylester 7-chloro-l-(4-fluoro-2-thiazolyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l ,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny

Směs složená z esteru (250 mg) získaného v předcházejícím příkladě 1 (4), N-fluoro-2,6-dichloropyridinium tetrafluoroborátu (240 mg) a 1,2-dichlorethanu (10 ml) a byla zahřívána krefluxu 2 dni. Pak byla k reakční směsi přidána voda a vzniklý roztok byl extrahován chloroformem. Získaný extrakt byl sušen s Na₂SO₄, rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn chromatograficky (eluent: chloroform) a výše popsaná látka byla získána po krystalizaci z ethylacetátu (40 mg).

Teplota tání: 174- 175 °C.

IR (KBr) cm*¹: 1700.

NMR (CDC1₃) δ: 1,42 (t, 3H, J = 6,5 Hz), 4,45 (q, 2H, J = 6,5 Hz) 7,33 (d, 1H, J = 3,5 Hz), 7,51 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,78 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 9,85 (s, 1H).

Příklad A-3 Příprava intermediátu (II) 5,7-díchloro-4-oxo-l-(2-thiazoIyI)-l,8-naftyridin-3karboxylová kyselina (1) Ke směsi složené z 5,5 g 4-amino-2,6-dichloropyridinu, Cu₂Cl₂ (4,4 g) a koncentrované chlorovodíkové kyseliny (50 ml) bylo pomalu přidáno 3,5 g dusitanu sodného za chlazení ledem a solí. Vzniklá směs byla míchána 1 hod při stejné teplotě a poté 4,5 hodin při laboratorní teplotě, přidána voda a směs byla extrahována chloroformem. Získaný extrakt byl sušen sNa₂SO₄, rozpouštědlo bylo oddestilováno za vakua za vzniku 5,5 g 2,4,6-trichloropyridinu.

IR (čistý) cm*¹: 1563, 1357, 1155, 851, 823.

-27CZ 292631 B6

NMR (CDCI₃) δ: 7,31 (s, 2H).

(2) Ke směsi látky (5,5 g) získané v předcházejícím odstavci (1) a tetrahydrofuranu (55 ml) bylo přikapáno 20 ml roztoku butyllithia (1,6 M) vn-hexanu při teplotě -78 °C. Směs pak byla míchána 1 hod při téže teplotě a byl přidán velký přebytek tuhého CO2. Směs pak byla míchána 1 hod, teplota nechána vystoupit na 0 °C, byla přidána vodná HC1 až do kyselé reakce a výsledný roztok byl extrahován ethylacetátem. Obdržený extrakt byl sušen nad Na₂SO₄ a rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku. Ke zbytku byl přidán diizopropylether a vzniklé krystaly byly zfíltrovány za vzniku 6,5 g 2,4,6-trichloronikotinové kyseliny.

Teplota tání: 138- 141 °C.

IR(KBr) crrT¹: 1715.

(3) Směs látky (6,5 g) získané v předcházejícím postupu (2) a 25 ml thionylchloridu byla zahřívána k refluxu 3 hod. Přebytečný thionylchlorid byl odstraněn za vakua a surový produkt byl vakuově destilován za vzniku 6,6 g 2,4,6-trichloronikotinoylchloridu.

Teplota varu: 93 - 95 °C/1 mmHg.

IR (čistý) cm^-1: 1791.

(4) Roztok methylmagnezium bromidu (3 M) v 19 ml etheru byl přikapán při teplotě 0 °C ke směsi monoethylesteru malonové kyseliny (3,6 g) a tetrahydrofuranu (30 ml). Reakční směs byla míchána 1 hod při laboratorní teplotě a byla přikapána směs výše získané látky (3) (6,6 g) a tetrahydrofuranu (30 ml) a získaný roztok byl zahříván 1,5 hod při 60 °C. Rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku, ke zbytku byla přidána vodná kyselina chlorovodíková a směs byla extrahována chloroformem. Získaný extrakt byl sušen s Na₂SO₄, rozpouštědlo oddestilováno za sníženého tlaku a zbytek vakuově destilován za vzniku 4,8 g ethylesteru 2,4,6-trichloronikotinoyloctové kyseliny.

Teplota varu: 160-162 °C/2 mmHg.

IR (čistý) cm^-1: 1746.

(5) Směs látky (4) získané v předcházejícím popisu (4,8 g), acetanhydridu (4,2 g) a ethylorthoformiátu (3,6 g) byla zahřívána k refluxu 1,5 hod. Směs pak byla odpařena do sucha za sníženého tlaku a za chlazení ledem bylo přidáno 100 ml diizopropyletheru a 1,6 g 2-aminothiazolu, směs pak byla míchána další 3 hod při laboratorní teplotě. Solvent byl oddestilován za sníženého tlaku a získaný zbytek byl čištěn chromatografícky kolonovou chromatografíí na silikagelu (eluent=chloroform) za vzniku 4,0 g ethylesteru kyseliny 2-(2,4,6-trichloronikotinoyl)-3-(2-thiazolylamino)akrylové, která byla rekrystalizována z ethylacetátu.

Teplota tání: 126 - 127 °C.

IR (KBr) crrT¹: 1691.

(6) Směs 4,0 g výše získané látky (5), uhličitanu draselného (1,5 g) a ethylacetátu (40 ml) byla zahřívána 1 hod na teplotu 60 °C. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a zbytek extrahován chloroformem. Získaný extrakt byl sušen nad Na₂SO₄, rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a zbytek byl čištěn s pomocí kolonové chromatografie na silikagelu (eluent = chloroform). Ethylester 5,7-dichloro-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny (2,5 g) byl získán krystalizací z chloroformu.

Teplota tání: 226 - 227 °C.

-28CZ 292631 B6

IR(KBr)cm^-1: 1737, 1692.

(7) Směs 1,8 g výše připraveného esteru (6) s 60 ml 20% vodného roztoku chlorovodíkové kyseliny byla zahřívána k refluxu 5 hod. Po ochlazení směsi byla přidána voda, vzniklé krystaly byla zfiltrovány a promyty vodou za vzniku výše identifikované 5,7-dichloro-l,4-dihydro-4oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-nafityridin-3-karboxylové kyseliny (1,4 g).

Teplota tání: 264 - 266 °C.

IR(KBr)cm^_1: 1729.

Příklad A-4 Příprava intermediátu (Π) 5-amino-7-chloro-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-

I, 8-naftyridin-3-karboxylová kyselina (1) Směs 500 mg látky získané v příkladu A-3, benzylaminu (140 mg), triethylaminu (280 mg) a toluenu (15 ml) byla refluxována 30 minut. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku, byla přidána voda a získaná směs byla extrahována chloroformem. Extrakt byl sušen nad Na₂SO₄ a poté bylo rozpouštědlo odstraněno za sníženého tlaku. Zbytek byl podroben kiystalizaci z ethylacetátu za vzniku 510 mg ethylesteru 5-benzylamino-7-chloro-l,4-dihydro-4-oxo-l(2-thiazolyl)-l ,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny.

Teplota tání: 141 - 143 °C.

IR(KBr) cm^-1: 1733.

NMR (CDC1₃) δ: 1,42 (t, 3H, J = 7 Hz), 4,41 (q, 2H, J = 7 Hz), 4,49 (d, 2H, J = 6,5 Hz), 6,47 (s, 1H), 7,31 (d, 1H, J = 3,5 Hz), 7,32 - 7,40 (m, 5H), 7,70 (d, 1H, J = 3,5), 9,87 (s, 1H),

II, 2-11,7 (m, 1H).

(2) Směs 1,0 g esteru z předcházející reakce (1), koncentrované kyseliny sírové (2 ml) a octové kyseliny (8 ml) byla míchán a při teplotě 110 °C 5 hod. Po ochlazení a přidání 8 ml vody byla směs míchána při 110 °C další hodinu. Krystalická látka byla zfiltrována a promyta vodou za vzniku 740 mg výše definované látky.

Teplota tání: 264 - 265 °C.

IR (KBr) cm’¹: 1727.

Příklad A-5 Příprava intermediátu (Π). Ethylester 7-chloro-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-5-trifluoromethyl-l,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny (1) Směs 2,6-dichloro-4-trifluoromethylpyridinu (5 g) s tetrahydrofuranem (50 ml) byla ochlazena na -78 °C a ke směsi byl přikapán roztok butyllithia (1,6 M) v n-hexanu (16 ml) a reakční směs byla míchána 30 min. Pak byl přidán velký přebytek pevného CO₂ a směs byla míchána další 1 hod. Teplota byla nechána vystoupit na 0 °C, reakční směs byla extrahována ethylacetátem a chlorovodíkovou kyselinou, organická vrstva byla sušena s Na₂SO₄. Rozpouštědlo bylo odstraněno za vakua, ke zbytku byl přidán thionylchlorid (20 ml) a vzniklá směs byla zahřívána k varu 6 hod. Nadbytečný thionylchlorid byl oddestilován za vakua a zbytek byl destilován za sníženého tlaku za vzniku 3,8 g 2,6-dichloro-4-trifluoromethylnikotinoylchloridu.

Teplota tání: 77 - 78 °C / 2 mmHg.

-29CZ 292631 B6

IR (KBr) cm^-1: 1797.

(2) Kapka CC1₄ byla přidána ke směsi hořčíku (0,36 g) v ethanolu (1,5 ml) a poté byla přikapána k reakční směsi směs složená z diethylmalonátu (2,4 g), ethanolu (1,5 ml), toluenu (10 ml) a směs byla míchána další dvě hodiny. Po ochlazení směsi ledem byl ke směsi přidán po kapkách roztok látky (1) v 10 ml tetrahydrofuranu a reakční směs byla míchána 3 hod při laboratorní teplotě. Směs pak byla extrahována ethylacetátem, promyta ředěnou HC1 a organická vrstva byla sušena nad Na₂SC>4. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku, bylo přidáno 20 ml vody a 50 mg p-toluensulfonové kyseliny a reakční směs byla refluxována 3 hod. Směs byla následně extrahována chloroformem a vodou a organická vrstva byla sušena s Na₂SO₄. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za vzniku 0,9 g ethylesteru 2,6-dichloro-4-trifluoromethyl~ nikotinoyl octové kyseliny.

IR (čistý) cm^-1: 1744,1721.

MS (m/z): 330 ΜΗ* (3) Směs 0,9 g látky z předešlého postupu (2), ethylorthoformiátu (0,6 g) a acetanhydridu (0,7 g) byla zahřívána krefluxu 1,5 hod při 140 °C. Reakční směs byla odpařena do sucha za sníženého bodu varu. Ke směsi byl přidán izopropylether (20 ml) a poté za chlazení 0,3 g

2-aminothiazolu. Směs pak byla míchána 3 hod při laboratorní teplotě a rozpouštědlo bylo odstraněno za vakua. K takto vzniklé směsi byl přidán chloroform a voda na extrakci. Výsledná organická vrstva byla sušena nad Na₂SO₄. Rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku a zbytek čištěn kolonovou chromatografií (eluent: chloroform) za vzniku 0,37 g ethylesteru 2-(2,6-dichloro-4-trifluoromethylnikotinoyl)-3-(2-thiazolylamino)akrylové kyseliny.

IR (čistý) cm¹: 1713.

MS (m/z): 440 (Mffif).

(4) Směs 0,37 g látky z předcházející reakce (3), 0,13 g uhličitanu draselného a 10 ml ethylacetátu byla zahřívána k refluxu 15 min. Pak byla přidána voda a ethylacetát kvůli extrakci a výsledná organická vrstva byla sušena sNa₂SO₄. Rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku a zbytek byl krystalizován z ethylacetátu za vzniku 0,27 g výše identifikovaného ethylesteru 7-chloro-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-5-trifluoromethyl-l,8-naftyridin-3karboxylové kyseliny.

Teplota tání: 184-185 °C.

IR (KBr) cm’¹: 1736,1703.

Příklad A-6 Příprava intermediátu (Π). Ethylester 5,8-dihydro-2-methansulfonyl-5-oxo-8-(2thiazolyl)pyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karboxylové kyseliny (1) Roztok monoethylesteru malonové kyseliny (12,3 g) v 80 ml tetrahydrofuranu byl ochlazen ledem, poté bylo přikapáno 64 ml 3M roztoku methylmagneziumbromidu v etheru. Vzniklá směs byla míchána 20 min a poté byl přidán roztok 8,6 g 2-methylthio-4-chloropyrimidin-5karbonylchloridu ve 100 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs pak byla míchána další dvě hodiny při laboratorní teplotě. Směs byla nalita do ledové lázně, byla přidána konc. chlorovodíková kyselina až do pH 5-6 a roztok byl následně extrahován ethylacetátem. Získaný extrakt byl sušen nad Na₂SO₄ a rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku. Izolace byla provedena s pomocí kolonové chromatografie na silikagelu (eluent = chloroform) za vzniku 8,0 g ethylesteru 3-(2-methylthio-4-chloropyrimidin-5-yl)-3-oxopropionové kyseliny.

-30CZ 292631 B6

IR (čistý) cm 1743.

MS (m/z): 275 (MH*).

(2) Směs 7,95 g látky z předchozí reakce (1), 6,80 g ethylorthoformiátu a 7,76 g acetanhydridu byla zahřívána kvaru při teplotě 130 °C 1 hod a poté byla zkoncentrována za sníženého tlaku. Pak bylo za chlazení ledem přidáno 100 ml diizopropyletheru a 3,28 g 2-aminothiazolu a reakční směs byla míchána přes noc při laboratorní teplotě. Krystalická látka byla odfiltrována a promyta diizopropyletherem. Tyto krystaly byly rozpuštěny v 70 ml 1,4-dioxanu a ke vzniklému roztoku bylo za chlazení přidáno 2,72 g uhličitanu draselného. Směs pak byla míchána 5 hod při laboratorní teplotě. Směs pak byla ochlazena ledem, bylo přidáno 200 ml ledové vody a směs neutralizována 10% vodným roztokem chlorovodíkové kyseliny. Krystalická látka byla zfiltrována, krystaly promyty vodou, 1,4-dioxanem a diizopropyletherem za vzniku 6,0 g ethylesteru 5,8dihydro-2-methylthio-5-oxo-8-(2-thiazolyl)pyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karboxylové kyseliny.

Teplota tání: 183- 185 °C.

IR(KBr)cm’: 1736.

(3) Roztok 5,99 g látky připravené v předcházející reakci (2) ve 450 ml dichlorethanu byl ochlazen ledem, ke vzniklé směsi byla přidána po troškách 80% kyselina m-chlorperoxobenzoová a směs byla míchána přes noc při laboratorní teplotě. Reakční směs pak byla postupně promyta vodným roztokem thiosulfátu sodného, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po vysušení s Na₂SO₄ bylo rozpouštědlo oddestilováno za sníženého tlaku a výše jmenovaný ethylester 5,8-dihydro-2-methansulfonyl-5-oxo-8-(2thiazolyl)pyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karboxylové kyseliny (4,48 g) byl získán krystalizací ze směsi ethylacetát-diizopropylether.

Teplota tání: 185-187 °C.

IR (KB r) cm^-1: 1741.

2. Série B

Příklad B-l Příprava suroviny (III). Trans-3-(N-t-butoxykarbonylmethylamino)-4-methylpyrrolidin (1) Trans-3-amino-l-benzyl-4-methylpyrrolidin (19 g) byl rozpuštěn v 200 ml dichlormethanu a ke vzniklému roztoku byl za chlazení ledem přidán roztok 22,9 g di-t-butyldikarbonátu ve 20 ml dichlormethanu. Výsledná směs byla míchána při laboratorní teplotě 1 hod a odpařena za vakua za vzniku trans-l-benzyl-3-(t-butoxykarbonylamino)-4-methylpyrrolidinu (28,2 g).

Teplota tání: 138 - 140 °C (rekrystalizováno ze směsi ethylacetát-n-hexan).

IR(KBr)cm^_1: 3198,1706.

MS (m/z): 291 (ΜΡΓ).

(2) Ve 150 ml toluenu byl rozpuštěn 70% toluenový roztok (40 ml) natrium bis(2-methoxyethoxy)aluminium hydridu a ke vzniklému roztoku bylo za chlazení ledem přidáno po troškách 10 g látky z předcházející reakce (1). Reakční směs byla zahřívána k refluxu 1 hod a po ochlazení byla rozložena vodou. Nerozpustná látka byla odstraněna filtrací, filtrát byl sušen nad MgSO₄

-31 CZ 292631 B6 a rozpouštědlo odpařeno za vakua. Zbytek byl rozpuštěn v dichlormethanu (100 ml) a za chlazení ledem byl přidán roztok di-t-butyldikarbonátu (7,5 g) v 10 ml dichlormethanu. Reakční směs byla míchána 3,5 hod při laboratorní teplotě a poté zkoncentrována za vakua. Zbytek byl chromatografován na koloně silikagelu (eluent = n-hexan:ethylacetát = 5:1) za vzniku 9,9 g trans-l-benzyl-3-(N-t-butoxykarbonylmethylamino)-4-methylpyrrolidinu.

IR (čistý) cm’¹: 1694.

MS (m/z): 305 (ΜΗ^{2 * 4}).

(3) 1,52 g Látky získané v předcházející reakci (2) bylo rozpuštěno v 50 ml ethanolu, bylo přidáno 200 mg 10% palladia na uhlíku a poté bylo absorbováno teoretické množství vodíku při 50 °C. Katalyzátor byl odfiltrován a rozpouštědlo odpařeno za vakua za vzniku trans-3-(N-tbutoxykarbonylmethylamino)-4-methylpyrrolidinu (950 mg).

IR (čistý) cm^-1: 3337, 1685.

MS (m/z): 215 (MlT).

Příklad B-2 Příprava suroviny (ΙΠ). (+)-Trans-3-(N-t-butoxykarbonylmethylamino)-4methoxypyrrolidin (1) Trans-3-amino-l-benzyl-4-methoxypyrrolidin (racemický, 22,4 g) popsaný vjaponském patentu č. 69474/1990 a 19,6 g L-vinné kyseliny bylo rozpuštěno ve 350 ml methanolu a výsledný roztok byl ponechán 7 hod při laboratorní teplotě. Vyloučený L-tartrát byl zfiltrován a podroben krystalizaci z vodného methanolu za vzniku 14,1 g L-tartrátu trans-3-amino-lbenzyl-4-methoxypyrrolidinu, který vykazoval níže popsané vlastnosti. Matečné louhy byly slity, rozpouštědlo odstraněno za sníženého tlaku a byl přidán nasycený roztok NaCl. Reakční směs byla neutralizována uhličitanem draselným až do bazické reakce a extrahována ethylacetátem. Extrakt byl promyt s nasyceným roztokem NaCl, byl sušen nad Na2SO₄ a rozpouštědlo bylo odpařeno za vakua. Vzniklý zbytek byl rozpuštěn společně s 6,73 g vinné kyseliny ve 180 ml methanolu a roztok byl nechán stát 7 hod při laboratorní teplotě. Vyloučený D-tartrát byl odstraněn filtrací a podroben rekrystalizací z methanolu a vody za vzniku 9,9 g D-tartrátu trans-3-amino-l-benzyl—4-methoxypyrrolidinu mající následující vlastnosti.

L tartrát

Teplota tání: 206 - 208 °C (rozklad).

[a]_D ²⁹ +33,0 °C (c = 1,003, voda).

Elementární analýza (%): C12H18N2O.3/2 C₄H6O₆ Vypočteno: C, 50,11; H, 6,31; N 6,49.

Nalezeno: C, 49,85; H, 6,26; N, 6,27.

D-tartrát

Teplota tání: 207 - 209 °C (rozklad). [a]_D ²⁹ -33,0° (c = 1,020, voda).

Elementární analýza (%): C12H18N2O.3/2 C₄H₆O₆

Vypočteno:	C, 50,11; H, 6,31;N, 6,49.
Nalezeno:	C, 50,35; H, 6,32; N, 6,47.

(2) K 3,65 g L-tartrátu získaného podle předcházející reakce (1) byl přidán nasycený roztok

NaCl, výsledný roztok byl neutralizován uhličitanem draselným a extrahován ethylacetátem.

Extrakt byl promyt nasyceným roztokem chloridu sodného a poté sušen s Na₂SO₄. Rozpouštědlo

-32CZ 292631 B6 bylo vakuově oddestilováno za vzniku 1,23 g (+)-trans-3-amino-l-benzyl-4-methoxypyrrolidinu.

[a]_D ²⁷ +32,2° (c = 1,053, methanol).

(3) Látka (5,74 g) získaná v předcházejícím postupu (2) byla rozpuštěna v 65 ml methanolu a za chlazení ledem bylo přidáno 7,29 g di-t-butyldikarbonátu a směs byla míchána 30 minut při této teplotě a další 4 hod při laboratorní teplotě. Rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku a zbytek byl čištěn chromatograficky na koloně silikagelu (eluent: chloroformimethanol = 50:1) za vzniku (+)-trans-l-benzyl-3-(t-butoxykarbonylamino)-4-methoxypyrrolidinu (8,55 g).

Bod tání: 44-45 °C.

[a]_D ²⁹ +9,5° (c = 1,044, methanol).

(4) L1AIH4 (3,43 g) byl suspendován ve 150 ml THF a ke vzniklé suspenzi byl přikapán roztok 8,4 g látky získané v předcházejícím předpisu (3) v 50 ml bezvodého THF, směs pak byla míchána 1 hod při laboratorní teplotě. Po refluxu 5 hod byl přebytek činidla rozložen vodou za chlazení ledem a nerozpustná látka byla odfiltrována. Získaný filtrát byl extrahován ethylacetátem, extrakt promyt s nasyceným roztokem NaCl a sušen nad Na₂SO₄. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, zbytek byl rozpuštěn ve 180 ml dichlormethanu a k roztoku byl za chlazení ledem přidán di-t-butyldikarbonát (6,3 g). Směs pak byla míchána 30 min při stejné teplotě, 2 hod při laboratorní teplotě a rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn na koloně silikagelu (eluent = chloroform: methanol = 50:1) za vzniku 8,26 g (+)-trans-l-benzyl-3-(N-t-butoxykarbonylmethylamino)-4-methoxypyrrolidinu.

[a]_D ²⁹ +9,9° (c = 1,002, methanol).

(5) Požadovaný (+)-trans-3-(N-t-butoxykarbonylmethylamino)-4-methoxypyrrolidin (5,59 g) byl získán z látky (8,15 g) získané podle předpisu (4) stejným způsobem jako v příkladu B-l (3).

[a]_D ²⁹ +12,5° (c = 1,051, methanol).

IR (čistý) cm^-1: 3318, 1693.

MS (m/z): 231 (MFf).

Příklad B-3 Příprava suroviny (ΙΠ). (-)-Trans-3-(N-t-butoxykarbonylmethylamino)-4methoxypyrrolidin (1) (-)-Trans-3-amino-l-benzyl-4-methoxypyrrolidin (1,01 g) byl získán ze 2,57 g D-tartrátu vyrobeného podle příkladu B-2 (1) stejným způsobem jak je popsáno v příkladu B-2 (2).

[a]_D ²⁷ -32,7° (c = 1,016, methanol).

(2) (-)-Trans-l-benzyl-3-(t-butoxykarbonylamino)-4-methoxypyrrolidin (4,5 g) byl získán ze 3,03 g látky získané v předpisu (1) stejným způsobem jako v příkladě B-2 (3).

Teplota tání: 44 - 45 °C.

[a]_D ²⁹ -9,5° (c = 1,080, methanol).

-33CZ 292631 B6 (3) (-)-Trans-l-benzyl-3-(N-butoxykarbonylmethylamino)-4-methoxypyrrolidin (4,25 g) byl získán ze 4,25 g látky získané v předcházejícím předpisu (2) podle stejného postupu jako v příkladu B-2.

[ct]_D ²⁹ -10,1° (c = 1,054, methanol).

(4) Požadovaný (-)-Trans-3-(N-t-butoxykarbonylmethyl-amino)-4-methoxypyrrolidin (2,81 g) byl získán ze 4,25 g látky získané v předchozím postupu (3) stejně jako v příkladu B-2 (5).

[a]_D ²⁹ -12,2° (c = 1,003, methanol).

IR (čistý) cm’¹: 3318, 1693.

MS (m/z): 231 (ΜΗ*).

Příklad B-4 Příprava suroviny (ΙΠ). 3-(N-t-butoxykarbonylmethylamino)-3-methylpyrrolÍdin (1) l-Benzyl-3-(N-t-butoxykarbonylamino)-3-methylpyrrolidin (28,3 g) byl získán ze 20 g

3-amino-l-benzyl-3-methylpyrrolidinu podle stejného postupu jako v příkladu B-l (1).

IR (čistý) cm’¹: 3356, 1716,1697.

MS (m/z): 291 (MřT).

(2) l-Benzyl-3-(N-t-butoxykarbonylmethylamino)-3-methylpyrrolidin (7,5 g) byl získán z 11,4 g látky z předchozí reakce podle stejného postupu jako v příkladu B-l (2).

IR (čistý) cm’¹: 1697.

MS (m/z): 305 (MřT).

(3) Požadovaný 3-(N-t-butoxykarbonylmethylamino)-3-methylpyrrolidin (5,5 g) byl získán z 7,5 g látky z předchozí reakce podle stejného postupu jako v příkladu B-l (3).

IR (čistý) cm’¹: 3337, 1682

MS (m/z): 215 (MlT).

3. Série C

Příklad C-l Příprava požadovaného produktu (I) l,4-Dihydro-7-(trans-3-methoxy-4-methylamino-l-pynOlidinyl)-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8naftyridin-3-karboxylová kyselina, její soli a její L-Ala deriváty (1) Triethylamin (18 ml) byl přidán k suspenzi ethylesteru 7-chloro-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2thiazolyl)-l,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny (7,1 g) získané v příkladu A-l a trans-3methoxy-4-methylaminopyrrolidin dihydrochloridu (6,0 g) ve 150 ml acetonitrilu. Vzniklá reakční směs byla míchána 5 hod při laboratorní teplotě a poté koncentrována za sníženého tlaku. Pak byl přidán roztok hydrogenuhličitanu sodného a vzniklá směs byla extrahována chloroformem. Získaný extrakt byl sušen nad Na₂SO₄, rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a zbytek byl čištěn chromatograficky na koloně silikagelu (eluent = chlorofomr.methanol = 6:1)

-34CZ 292631 B6 za vzniku 6,1 g ethylesteru l,4-dihydro-7-(trans-3-methoxy—4-methylamino- 1-pyrrolidinyl)-

4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l ,8-nafiyridin-3-karboxylové kyseliny.

Teplota tání; 73 - 76 °C.

(2) Roztok 6,0 g esteru z předcházející reakce ve 100 ml 18% vodné kyseliny chlorovodíkové byl míchán 28 hod při teplotě 100 °C. Krystaly byly zfiltrovány a promyty směsí ethanoldiizopropylether za vzniku 4,45 g hydrochloridu l,4-dihydro-7-(trans-3-methoxy-4-methylamino-l-pyrrolidinyl)-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny. (Látka 1-1)

Teplota tání: 270 - 273 °C.

(3) Roztok 51,5 g hydrochloridu z předcházející reakce (2) v 500 ml vody a 40 ml vodného amoniaku byl míchán přes noc při teplotě 50 °C. K roztoku byl přidán acetonitril, směs koncentrována za sníženého tlaku a vzniklé krystaly odsáty. Krystaly byly promyty vodou a acetonitrilem za vzniku 32,6 g l,4-dihydro-7-(trans-3-methoxy-4-methylamino-l-pyrrolidinyl)-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyrídin-3-karboxylové kyseliny (Látka 1-1-1).

Teplota tání: 290 - 292 °C (rozklad).

(4) Směs 2,0 g látky (3) z předešlé reakce, 3,1 g kyseliny mléčné a 4 ml destilované vody byla zahřívána při 60 °C až do rozpuštění. Vzniklý roztok byl ochlazen na pokojovou teplotu, bylo přidáno 70 ml ethanolu, krystaly byly zfiltrovány a promyty ethanolem za vzniku 2 g laktátu (Látka 1-1-2).

Teplota tání: 288 - 291 °C (rozklad).

(5) Ke směsi 1,89 g látky získané výše (1), 1,26 g N-t-butoxykarbonyl-L-alaninu a 80 ml dichlormethanu bylo přidáno 1,27 g hydrochloridu l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu (WSC) a vzniklý roztok byl míchán 3 hod při laboratorní teplotě. Po promytí vodou byla směs sušena nad Na₂SC>4 a poté byla koncentrována za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn kolonovou chromatografií na silikagelu (eluent = chloroform:methanol = 50:1) za vzniku 2,15 g ethylesteru 7-{trans-3-[N-(N-t-butoxykarbonyl-L-alanyl)]methylamino-4-methoxy-l-pyrrolidin}-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny.

Teplota tání: 120 - 123 °C.

[a]_D ²⁸ +10,2° (c = 1,0, chloroform).

Směs 1,71 g ethylesteru vyrobeného v předešlé reakci, 42 ml 0,5N chlorovodíkové kyseliny a 22 ml ethanolu byla míchána 17,5 hod při 80 °C. Vzniklý roztok byl zkoncentrován za sníženého tlaku, kiystaly byly zfiltrovány a poté promyty 10% chlorovodíkovou kyselinou a ethanolem za vzniku 1,16 g hydrochloridu 7-[trans-3-(N-L-alanylmethylamino)-4-methoxyl-pyrrolidinyl]-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-nafityridin-3-karboxylové kyseliny. (Látka 1-1-3).

Teplota tání: 230 - 233 °C.

[a]_D ²⁹ +8,4° (c = 1,0, voda).

-35CZ 292631 B6

Příklad C-2 Příprava požadované látky (I) (+)-l ,4-Dihy dro-7-(trans-3-methoxy-4-methylamino-l -pyrrolidinyl)-4-oxo-1 -(2-thiazolyl)-

1.8- naftyridin-3-karboxylová kyselina (Látka 1-2-1) a její hydrochlorid (Látka 1-2) (1) S použitím ethylesteru 7-chloro-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3karboxylové kyseliny získané v příkladu A-l (4) a (+)-trans-3-(N-t-butoxykarbonylmethylamino)-4-methoxypyrrolidinu z příkladu B-2 byl připraven ethylester (-)-7-[trans-3-(N-tbutoxykarbonylmethylamino)-4—methoxy-l-pyrrolidinyl]-l,4-dihydro-4-oxo-lÝ2-thiazolyl)-

1.8- naftyridin-3-karboxylové kyseliny (amorfní) podle postupu z příkladu C-l (1).

[a]_D ²⁹ -9,1° (c = 1,006, chloroform).

(2) Výše jmenovaný hydrochlorid (Látka 1-2) byl získán z ethylesteru připraveného výše (1) podle reakce popsané v příkladu C-l (2).

Teplota tání: 278 - 282 °C.

[a]_D ²⁹ +24,8° (c = 0,500, voda).

(3) Roztok 28,1 g hydrochloridu získaného v bodu (2) ve 300 ml vody a 25 ml vodného amoniaku byl míchán přes noc při teplotě 50 °C a poté zkoncentrován za sníženého tlaku. Krystaly byly promyty vodou a methanolem za vzniku 19,5 g požadované karboxylové kyseliny (Látka 1-2-1).

Teplota tání: 268 - 271 °C.

[a]_D ³⁰ +53,1° (c = 1,005, 1 N NaOH).

Příklad C-3 Příprava požadované látky (I) (-)-1,4-Dihydro-7-(trans-3-methoxy-4-methylamino-l-pynOlidinyl)-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-

1.8- naftyridin-3-karboxylová kyselina (Látka 1-2-1) a její hydrochlorid (Látka 1-3) (1) S použitím ethylesteru 7-chloro-l,4-dihydro-4—oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3karboxylové kyseliny získané v příkladu A-l (4) a (+)-trans-3-(N-t-butoxykarbonylmethylamino)-4-methoxypyrrolidinu získaného v příkladu B-3 byl získán ethylester (-)-7-[trans-3(N-t-butoxykarbonylmethylamino)-4—methoxy-l-pyrrolidinyl]-l,4-dihydro-4-oxo-lÝ2thiazolyl)-l,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny (amorfní) podle postupu z příkladu C-l (1).

[a]_D ²⁹ +9,0° (c - 1,002, chloroform).

(2) Výše jmenovaná látka byla získána z ethylesteru připraveného v bodě (1) podle postupu popsaného v příkladu C-l (2).

Teplota tání: 278 - 282 °C.

[a]_D ²⁹ -25,2° (c = 0,504, voda).

-36CZ 292631 B6

Příklad CM a C-5 Příprava požadovaných látek (I)

Následující látky byly získány podle stejné metody, tak jak je popsáno v příkladu C-l.

Příklad	Látka č.	O C O O R a rWx >A \=J	Teplota tání fC)
Y	Ra	X
C-4		CH,NH CH3O’A'/	Et*		253-259 rozklad
1-4	Stejně jako nahoře	H	HCÍ	263-269 rozklad
C-5		HV> ch3ov^/	Et		98-100
2	Stejně jako nahoře	H	HC1	268-271 rozklad |

*: Et označuje ethyl (totéž platí i v dalším textu)

Příklad C-6 Příprava požadované látky (I)

Hydrochlorid 7-(3-Amino-l-pyrrolidinyl)-l ,4-dihydroM-oxo-l-(2-thiazolyl)-l ,8-naftyridin3-karboxylové kyseliny (Látka 3) a její L-Ala derivát (Látka 3-1) (1) Roztok 1,6 g 3-aminopyrrolidinu v 10 ml acetonitrilu byl přikapán k suspenzi 2,0 g esteru získaného v příkladu A-l (4) v 80 ml acetonitrilu. Vzniklá směs byla míchána 1,5 hod při laboratorní teplotě a krystaly byly odfiltrovány. Ethylester 7-(3-Amino-l-pyrrolidinyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny (1,89 g) byl získán krystalizaci ze směsi chloroform, methanol, diizopropylether.

Teplota tání: 219-221 °C.

(2) Suspenze složená z 1,0 g esteru získaného v předcházející reakci a 15 ml 10% vodného roztoku chlorovodíkové kyseliny byla 3,5 hod míchána při teplotě 95 °C. Krystaly byly zfiltrovány, promyty směsí chloroformu a methanolu za vzniku 0,93 g hydrochloridu 7-(3-Amino-l-pyrrolidinyl)-l,4-dihydroM~oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3karboxylové kyseliny (Látka 3).

Teplota tání: 267 °C (rozklad).

-37CZ 292631 B6 (3) Ke směsi 2,1 g ethylesteru získaného v bodě (1) a 1,5 g N-t-butyloxykarbonyl-L-alaninu v 80 ml dichlormethanu bylo přidáno 1,6 g l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid hydrochloridu (WSC) a vzniklá směs byla 2 hod míchána při laboratorní teplotě. Po promytí vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného byla směs sušena nad Na₂SO4, koncentrována ve vakuu a následně čištěna na koloně silikagelu (eluent chloroform:methanol = 20:1) za vzniku 2,9 g ethylesteru 7-[3-(N-t-butoxykarbonyl-L-alanyl)amino-l-pyrrolidinyl]-l,4-dihydro-4oxo-l-(2-thiazolyl)-l ,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny.

Teplota tání: 138 - 140 °C.

[a]_D ²⁷ -46° (c = 1,0, chloroform).

(4) Směs 1,4 g esteru z předcházející reakce (3), 30 ml 0,5 N chlorovodíkové kyseliny a 16 ml ethanolu byla míchána při teplotě 70 °C 2 dny. Rozpouštědlo bylo odstraněno za vakua a rekrystalizací zbytku z 10% chlorovodíkové kyseliny bylo získáno 0,77 g hydrochloridu 7-(3-Amino-l-pyrrolidinyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny.

Teplota tání: 229 - 231 °C.

[a]_D ²⁷ +10° (c = 0,5, voda).

-38CZ 292631 B6

Příklady C-7 až C-10 Příprava požadovaného produktu (I)

Následující látky byly připraveny podle stejné metody jako je uvedena v příkladu C-l.

Příklad	Látka č.	O ^xJCcOORa rW.x tAs v=/	Teplota tání (°C)
r	Ra	X
C-7		ch3>n * BchA>	Et		9,5-97
	4	CH3NH	H	HC1	297-29,9 rozklad
C-8		Boc' YV gh3'v	Et	—	154-156
	5	CH3NH. rv	H	HC1	279-282 rozklad
C-9		ch,nh O-	Et	—	157-159
	6	Stejně jako nahoře	H	HC1	266-270 rozklad
C-10		BocNH TV CS,''·'	Et	—	238-240
	7	H’Y>. ch3	H	RC1	269-271 rozklad

*: Boc označuje t-butoxykarbonyl (totéž platí i v dalším textu).

Příklad C-l 1 Příprava požadovaného produktu (I)

Hydrochlorid 7-(3-amino-l-pyrrolidinyl)-l-(4-fluoro-2-thiazolyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l ,8naftyridín-3-karboxylové kyseliny (Látka 8) (1) Směs 30 mg ethylesteru 7-chloro-l-(4-fluoro-2-thiazolyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny získané v příkladu A-2, 19 mg 3-(t-butoxykarbonylamino)

-39CZ 292631 B6 pyrrolidinu, 26 mg triethylaminu a 10 ml acetonitrilu byla míchána za laboratorní teploty 30 minut. Rozpouštědlo pak bylo odstraněno za vakua, přidána voda a směs extrahována chloroformem. Získaný extrakt byl sušen sNa₂SO₄ a rozpouštědlo oddestilováno za vakua. Zbytek byl podroben krystalizaci z ethylacetátu za vzniku 40 mg ethylesteru 7-(3-t-butoxykarbonylamino-l-pyrrolidinyl)-l-(4-fluoro-2-thiazolyl)-l,4-dihydro-4-oxo-l,8-naftyridin3-karboxylové kyseliny.

Teplota tání: 233-234 °C.

(2) Roztok 40 mg esteru z předešlé reakce (1) a 2 ml 20% chlorovodíkové kyseliny byl zahříván krefluxu 1,5 hod. Po ochlazení byly krystaly zfiltrovány, promyty ředěnou chlorovodíkovou kyselinou za vzniku 32 mg výše zmíněné látky 8.

Teplota tání: 283 - 284 °C.

Příklad C-12 Příprava požadovaného produktu (I)

Hydrochlorid 5-amino-7-(3-amino-l-pyrrolidinyl)-l ,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l ,8naftyridin-3-karboxylové kyseliny (Látka 9) (1) 5-Amino-7-chloro-1,4-dihydro-4-oxo-l -(2-thiazolyl)-1,8-naftyridin karboxylová kyselina (1,0 g) získaná v příkladu A-4 (2) a aminopyrrolidin (800 mg) byl podroben reakci podle příkladu C-l za vzniku výše zmíněné látky 9 (610 mg).

Teplota tání: 261 -263 °C.

Příklady C-l 3 Příprava požadovaného produktu (I)

Následující látky byly připraveny stejným způsobem jako je popsáno v příkladu C-l.

Příklad	Látka č.	rťrCOOB’ •iAs X=1	Teplota tání (°C)
r	Ra	X
C-l 3		H,N οη3Ύν_	Et	—	248-25l
10	Stejně jako nahoře	H	HC1	243-246

-40CZ 292631 B6

Příklad C-14 Příprava požadovaného produktu (I)

Hydrochlorid 3-Formyl-l,4-dihydro-7-(trans-3-methoxy-4-methylamino-l-pyiTolidinyl)-4oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridinu (1) Triethylamin (13,4 ml) byl přidán k suspenzi 8,49 g ethylesteru 7-chloro-l,4-dihydro-4oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny získané v příkladu A-l (4), 6,5 g trans-3-methoxy—4-methylaminopyrrolidin dihydrochloridu a 400 ml acetonitrilu. Směs byla míchána přes noc při laboratorní teplotě a poté zkoncentrována za sníženého tlaku. Byl přidán vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a směs byla extrahována chloroformem. Získaný extrakt byl promyt nasyceným roztokem NaCl, sušen sNa₂SC>4 a rozpouštědlo odpařeno za vakua. Ke zbytku bylo přidáno 500 ml dichlormethanu a poté za chlazení ledem přidáno 6,4 g di-t-butyldikarbonátu. Směs byla míchána přes noc při laboratorní teplotě, směs byla zkoncentrována a zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu (eluent chloroform:methanol = 100:1) za vzniku 9,1 g ethylesteru 7-[trans-3-(N-t-butoxykarbonylmethylamino)-4-methoxy-l-pyrrolidinyl]-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3karboxylové kyseliny.

IR(KBr)cm^_1: 1735, 1695.

MS (m/z): 530 (MFT).

(2) 1 N roztok hydroxidu sodného (150 ml) byl přidán ke směsi 8,95 g esteru získaného v předešlé reakci (1) a 150 ml ethanolu a vzniklá reakční směs byla míchána při stejné teplotě 30 minut a poté přes noc při teplotě. Směs pak byla okyselena roztokem kyseliny octové a byla extrahována chloroformem. Získaný extrakt byl promyt nasyceným roztokem NaCl a sušen nad Na₂SC>4. Rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku za vzniku 7,19 g [trans-3-(N-tbutoxykarbonylmethylamino)-4-methoxy-l-pyrrolidinyl]-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)1,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny.

Teplota tání: 185- 188 °C.

IR (KB r) cm“¹: 1715,1690.

MS (m/z): 502 (MFf).

(3) Ke směsi 7,15 g látky získané v předešlé reakci (2) a 400 ml methanolu bylo přidáno 2,16 g NaBHi za chlazení ledem. Výsledná směs byla míchána 15 min při stejné teplotě a poté přes noc při teplotě místnosti. Rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku a zbytek byl extrahován chloroformem. Extrakt byl promyt nasyceným roztokem NaCl a pak sušen nad Na₂SO₄. Rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku a zbytek byl čištěn chromatografií na koloně silikagelu (eluent chloroform:methanol = 100:1) za vzniku 3,9 g 7-[trans-3-(N-tbutoxykarbonylmethylamino)-4-methoxy-l-pyrrolidinyl]-l,2,3,4-tetrahydro-4-oxo-l-(2thiazolyl)-l ,8-naftyridinu.

IR (KB r) cm¹: 1690.

MS (m/z): 460 (MFT).

(4) Látka získaná v předešlé reakci (3,8 g) byla rozpuštěna v 500 ml tetrahydrofuranu a k roztoku bylo přikapáno 6,1 ml roztoku n-butyllithia (1,6 M) v hexanu při teplotě -78 °C. Získaný roztok byl míchán 30 minut při stejné teplotě, bylo přidáno 1,34 ml ethylformiátu a poté byla nechána teplota pomalu vystoupit na teplotu místnosti a míchána přes noc. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, ke zbytku byl přidán vodný roztok octové kyseliny a reakční směs byla extrahována s chloroformem. Extrakt byl promyt nasyceným roztokem NaCl a sušen

-41 CZ 292631 B6 sNa₂SO4. Po odpaření rozpouštědla bylo získáno 3,87 g 7-[trans-3-(N-t-butoxykarbonylmethylamino)—4-methoxy-l-pyrrolidinyl]-3-formyl-l,2,3,4-tetrahydro-4-oxo-l-(2thiazolyl)-l ,8-naftyridinu.

IR (čistý) cm^-1: 1690, 1615.

MS (m/z): 488 (MFf).

(5) Látka (3,6 g) získaná v předešlé reakci (4) byla rozpuštěna ve 160 ml 1,4-dioxanu a ke 10 vzniklému roztoku bylo postupně přidáno 2,51 g 2,3-dichloro-5,6-dikyanobenzochinonu. Směs pak byla míchána 2,5 hod, rozpouštědlo odpařeno, ke zbytku byl přidán vodný roztok NaOH a směs extrahována chloroformem. Extrakt byl promyt nasyceným roztokem NaCl a poté sušen sNa₂SO₄. Rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku a zbytek byl podroben chromatografii na koloně silikagelu (eluent chloroform.methanol = 100:1) za vzniku 1,73 g 15 7-[trans-3-(N-t-butoxykarbonylmethylamino)-4-methoxy-l-pyrrolidinyl]-3-formyl-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridinu.

Teplota tání: 130 - 132 °C.

IR (KBr) cm“¹:1695,1645,1615.

MS (m/z): 486 (MlT).

(6) Směs 1,65 g látky připravené v předcházející reakci (5) a 40 ml 10% chlorovodíkové 25 kyseliny byla zahřívána 7 hod při teplotě 50 - 60 °C. Krystaly byly zfiltrovány, promyty ethanolem a diizopropyletherem za vzniku 1,05 g hydrochloridu 3-Formyl-l,4-dihydro-7(trans-3-methoxy-4-methylamino-I-pyrrolidinyl)-4-oxo-l-(2-thiazolyl}-l,8-naftyridinu.

Teplota tání: 255 - 263 °C.

IR (KBr) cm’¹: 3460, 1695,1645.

MS (m/z): 386 (MFf).

-42CZ 292631 B6

Příklady C-15 až C-27 Příprava požadovaných produktů (I)

Následující látky byly připraveny podle způsobu popsaného v příkladu C-l.

Příklad	Látka č.	ArooRa tZs	Teplota tání (°C)
A	Ra	R1	Y'	Ra	X
C-15		CH	H	H	WTnchZ'”'	Et	—	92-95
	12	CH	Ή	H	Stejně jako nahoře	H	HCI	245-248
C-16		CH	H	H	C,HSNH	Et	—	amorfní
	13	CH	H	H	Stejně jako nahoře	U	HCI	293-295 (rozklad)
C-17		N	H	H	H’V- CN-	Et	—	228-230
	14	H	H	H	Stejně jako nahoře	H	HCI	288-291 ( (rozklad) )
C-18	15	CH	nh2	H	ch3nh CH3Ov<^	H	—	247-250
C-19		CH	H	F	ch3nh ch3ov<^	Et	—	198-199
	16	CH	H	F	Stejně jako nahoře	H	HCI	277-279 (rozklad)

-43 CZ 292631 B6

í Příklad	Látka č.	γ· N N .X K r; r/	Teplota tání (°C)
Bi	Ri '	Y'	Ra	X
C-20		H	H	AcNfV(H3 * O-	Et	—	152-155
	17	H	H	HN O-	H	HC1	296-299 (rozklad)
C-21		F	H	n2N CH3J^N-	Et	—	246-247
	18	F	H	Stejně jako nahoře	H	HC1	vyšší než 300
C-22		H	Cl	BocNH O-	Et	—	228-229
	19	H	Cl	O-	H	HC1	236-237
		H	H	BocNH P- ch3	Et	—	236-238
C-2 3	20	H	H	H2N P· ch3	H	HCI	259-262 (rozklad)

-44CZ 292631 B6

Příklad	Látka C.	Rj P Avco0Ba Λ \=J	Teplota tání (°C)
Rs	r	Ra	X
C-24		H	BOC	Et	—	109-111
21	H	c2h5nh^o^	H	HCl	vyšší než 300
C-25		CFs	H,N	Et		208-209
22	CFs	Stejně jako nahoře	H	HCl	291-292 (rozklad)
C-26	23	Cl	H,N O-	H	ΗθΙ	vyšší než 300
C-27		H	BocNH^pN Cl^	Et	—	128-132
24	H	Cl^	H	HCl	285-288 (rozklad)

Příklad C-28 Příprava požadovaného produktu (I)

Hydrochlorid l,4-Dihydro-7-(trans-3-methylamino-4—methylthio-l-pyrrolidinyl)-4-oxo-l5 (2-thiazolyl)-l ,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny (Látka 25) (1) S použitím ethylesteru 7-chloro-l,4-dihydro-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3karboxylové kyseliny z příkladu A-l (4) a trans-3-methylamino-4-methylthiopyrrolidinu byl získán ethylester 1,4-dihydro-7-(trans-3-methylamino-4-methylthio-l-pynOlidinyl)-4-oxo- o 1 -(2-thiazolyl)-1,8-naftyridin-3-karboxylové kyseliny stej ně j ako v příkladu C-l (1).

Teplota tání: 164- 165 °C.

(2) Výše zmíněná látka byla připravena z ethylesteru získaného v předešlé reakci (1) stejným 15 způsobem jako v příkladu C-l (2).

-45CZ 292631 B6

Teplota tání: 271-272 °C.

4. Série D

Příklad D-l Příprava kapalných činidel

Předpis

Látka 1-1

Sorbitol

NaOH

Destilovaná voda pro injekce

2g g

odpovídající množství odpovídající množství 1000 ml

Způsob přípravy:

Látka 1-1 a sorbitol byly rozpuštěny v části destilované vody pro injekce a zbytek destilované vody byl přidán tak, aby pH vzniklého roztoku bylo nastaveno na hodnotu 4,0. Tento roztok byl zfiltrován přes membránový filtr (0,22 pm) za vzniku kapaliny pro injekce.

Příklad D-2 Příprava lyofilizovaného činidla

Předpis

Látka 1-1

Mannitol

NaOH

Destilovaná voda pro injekce g

5g odpovídající množství odpovídající množství 1000 ml

Způsob přípravy:

Látka 1-1 a mannitol byly rozpuštěny v části destilované vody pro injekce a zbylá destilovaná voda byla přidána tak, aby pH výsledného roztoku bylo 5,0. Tento roztok byl zfiltrován na membránovém filtru (0,22 pm) a získaný filtrát byl podroben lyofilizaci za vzniku práškového prostředku pro injekce.

Průmyslová využitelnost

Látky podle tohoto vynálezu jsou užitečné v lékařství, a to zvláště jako protinádorové prostředky pro savce včetně člověka.

Claims (19)

1. Deriváty pyridonkarboxylové kyseliny obecného vzorce I kde Ri je vodíkový atom, Ci-salkoxyskupina, atom halogenu, C^alkylskupina, jež může být substituována halogenem, nebo fenylová skupina, jež může být substituována halogenem;

R₂ je karboxylová skupina, Ci_₅alkoxykarbonylskupina nebo formylskupina;

R₃ je vodíkový atom, aminoskupina, jež může být chráněná benzylovou nebo tritylovou skupinou, halogenovaný atom nebo C]_₅alkylskupina, která může být substituována halogenem;

A jeCH;

m je celé číslo 1 nebo 2 a

Y je odstranitelná skupina vybraná ze skupiny obsahující vodíkový atom, Ci_₅alkoxyskupinu, Ci^alkylthioskupinu, Ci_₅alkylsulfínylskupinu, Ci_₅alkylsulfonylskupinu, arylsulfonylskupinu, Ci-salkylsulfonyloxyskupinu a arylsulfonyloxyskupinu, nebo skupina mající následující vzorec Y' kde R4 je vodíkový atom nebo Ci_salkylová skupina;

Z je vodíkový atom, Ci_salkylová skupina, alanylová skupina, butoxykarbonylová skupina nebo acylová skupina,

R₅ je vodíkový atom, halogen, Ci-salkoxylová skupina, Ci_₅alkylthioskupina nebo Ci_₅alkylskupina, která může být substituována halogenem;

n je celé číslo 0 nebo 1 a p je celé číslo 1, 2, 3 nebo 4 nebo jejich soli.

-47CZ 292631 B6

2. Deriváty pyridonkarboxylové kyseliny nebo jejich soli podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Y je odstranitelná skupina uvedená v nároku 1.

3. Deriváty pyridonkarboxylové kyseliny obecného vzorce I-a kde R! je vodíkový atom, C]_5alkoxyskupina, halogen, Ci_₅alkylová skupina, která může být substituována halogenem, nebo fenylová skupina, jež může být substituována halogenem;

R₂ je karboxylová skupina, Ci_₅alkoxykarbonylskupina nebo formyl;

R₃ je vodíkový atom, aminoskupina, která může být chráněná benzylovou nebo tritylovou skupinou, halogen nebo Ci^alkylová skupina, která může být substituována halogenem;

Ri je vodíkový atom nebo Ci_₅alkylskupina;

Z je vodíkový atom, C]_₅alkylová skupina, alanylová skupina, butoxykarbonylová skupina nebo acylová skupina,

R₅ je vodíkový atom, halogen, Ci_₅alkoxyskupina, Ci_₅alkylthioskupina nebo Ci_₅alkylskupina, která může být substituována halogenem;

A jeCH;

m je celé číslo 1 nebo 2;

n je celé číslo 0 nebo 1;

p je celé číslo 1, 2, 3 nebo 4 nebo jejich soli.

4. Deriváty pyridonkarboxylové kyseliny nebo jejich solí podle nároku 3, jejichž soli jsou buď odvozeny od karboxylové skupiny R₂ vzorec I-a nebo adiční soli kyselin odvozené od bazické skupiny substituentu, vázaného v poloze 3 na 1-pyrrolidinové skupině.

-48CZ 292631 B6

5. Deriváty pyridonkarboxylové kyseliny obecného vzorce I-b (Ri)m ^Rs)p kde Ri je vodíkový atom, Ci_₅alkoxyskupina, halogen, Ci_₅alkylová skupina, která může být substituována halogenem, nebo fenylová skupina, která může být substituována halogenem;

R₃· je vodíkový atom, aminoskupina, halogen, nebo Cj-salkylová skupina, která může být substituována halogenem;

R4 je vodíkový atom nebo Ci-salkylskupina;

Z' je vodíkový atom, Cι-salkylová skupina;

R₅ je vodíkový atom, halogen, Ci-salkoxyskupina, Ci_5alkylthioskupina nebo Ci_₅alkylskupina, která může být substituována halogenem.

A jeCH;

m je celé číslo 1 nebo 2;

n je celé číslo 0 nebo 1;

p je celé číslo 1, 2, 3 nebo 4 nebo jejich soli.

6. Deriváty pyridonkarboxylové kyseliny nebo její soli podle nároku 5 obecného vzorce I-b, kde jak m tak p jsou 1 a n je 0.

7. Deriváty pyridonkarboxylové kyseliny nebo její soli podle nároku 5 obecného vzorce I-b, kde m ap je 1, n je 0,

Ri je atom vodíku nebo fluoru, R₃- je vodíkový atom, R4 je vodíkový atom nebo C]_₅alkylová skupina, Z' je vodíkový atom, R₅ je Ci_₅alkylová skupina nebo C]_₅alkoxyskupina.

8. Derivát pyridonkarboxylové kyseliny podle nároků 1 a 3, kterým je l,4-dihydro-7-(3methoxy-4-methylamino-l-pyrrolidinyl)-4-oxo-l-(2-thiazolyl)-l,8-naftyridin-3-karboxylová kyselina nebo její soli.

9. Deriváty pyridonkarboxylové kyseliny podle nároku 8, kterými jsou cis nebo trans izomery 1,4-dihydro-7-(3-methoxy-A-methylamino-1 -pyrrolidinyl)-4-oxo-l -(2-thiazoly 1)-1,8naftyridin-3-karboxylové kyseliny nebo jejich opticky aktivní deriváty nebo jejich soli.

-49CZ 292631 B6

10. Protinádorové prostředky, vyznačující se tím, že obsahují jako aktivní složku deriváty pyridonkarboxylových kyselin vzorce I-a podle nároku 3, nebo jejich fyziologicky přijatelné soli.

11. Protinádorové prostředky, vyznačující se tím, že obsahují jako aktivní složku deriváty pyridonkarboxylových kyselin vzorce I-b podle nároku 5, nebo jejich soli.

12. Protinádorové prostředky podle nároku 10 nebo 11 pro léčení nebo profylaci pevných i nepevných tumorů.

13. Protinádorové prostředky podle nároku 12, kde nepevnými tumory jsou leukemie nebo zhoubný lymfom.

14. Protinádorové prostředky podle nároku 12, kde pevným tumorem je nádor vyskytující se ve tkáních plic, prsou, žaludku, kůže, vaječníku, dělohy, střev, močového měchýře, nosohltanu, hlavy nebo krku, jícnu, jater, žlučovodu, pankreatu, ledvin, varlat, prostaty, kostí nebo mozku.

15. Farmakologické prostředky, v y z n a č uj í c í se tí m , že zahrnují jak deriváty pyridonkarboxylové kyseliny vzorce I-a podle nároku 3 nebo vzorce I-b podle nároku 5 nebo jejich fyziologicky přijatelné soli, tak i farmaceuticky přijatelné nosiče.

16. Farmakologické prostředky podle nároku 15, vyznačující se tím, že zmíněným nosičem je rozpouštědlo.

17. Farmakologické prostředky podle nároku 15 ve formě roztoku.

18. Farmakologické prostředky podle nároku 17 ve formě prostředku pro infuzi nebo injekci.

19. Farmakologické prostředky podle nároku 15 ve formě lyofilizovaného preparátu.

12 výkresů

-50CZ 292631 B6

Obr.1: Proťinádorová aktivita proti lidské rakovině nasopharynxu (KB)

Obr. 2: Protinádorová aktivita proti lidské rakovině nasopharynxu (KB)

-51 CZ 292631 B6

Obr. 3: Protinádórová aktivita proti lidské rakovině prsu (MX-1)

Inhibice rychlosti růstu nádoru (%) £ Inhibice rychlosti růstu nádoru (%) : Protinádorová aktivita proti lidské rakovině prsu (MX-1)

-52CZ 292631 B6

Obr. 5: Protinádorová aktivita proti lidské rakovině prsu (MX-1)

Inhibice rychlosti růstu nádoru (%) σ' i .... ....

^v > r* Inhibice rychlosti růstu nádoru (%)

6: Protinádorová aktivita proti lidské kolorektálni rakovině (WiDr)

100

Počet dní po počáteční aplikaci

O mg/kg IR (%) 1-1 (25) [70] • 1-2 (25) [82] □ 1-3 (50) [74] 11 (50) [59] L 16 (5p) [64]

-53 CZ 292631 B6

Obr. 7: Protinádorová aktivita proti lidskému melanomu (HMV-2)

Inhibice rychlosti růstu nádorů (°/<4 i .... .. .

* ' q Inhibice rychlosti růstu nádoru (%) . 8: Protinádorová aktivita proti lidskému melanomu (HMV-2)

-54CZ 292631 B6

Obr. 9: Protinádorová aktivita proti lidské rakovině plic (LX-1)

Inhibice rychlosti růstu nádoru (%)

Obr. 10: Protinádorová aktivita proti lidské rakovině nasopharynxu (KB)

-55CZ 292631 B6

Obr. 11: Protinádorová aktivita proti lidské rakovině prsu (MX-1)

Obr. 12: Protinádorová aktivita proti lidské kolorektální rakovině (W-íDř)

-56CZ 292631 B6

Obr. 13: Protinádorová aktivita proti lidskému melanomu (HMV-2)

Hmotnost tumoru (mg)

Obr. 14: Protinádorová aktivita proti lidské rakovině plic (LX-1)