CN103497186B - 含有烷氧亚氨基取代的萘啶酮羧酸衍生物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式（I）所示萘啶酮羧酸类化合物，其制备方法和医药用途以及以其为有效成分的抗肿瘤药物组合物。更具体地讲，本发明涉及一类萘啶酮羧酸衍生物，其在萘啶酮核的1-位取代基是2-噻唑基，7-位取代基是含有烷氧亚胺基的吡咯烷基，其中，式（I）中R1是氢、甲基；R2是甲基、乙基、苄基；n是0、1。

Description

含有烷氧亚氨基取代的萘啶酮羧酸衍生物及其制备方法
技术领域
本发明属于医药化学领域，涉及具有抗肿瘤活性的萘啶酮羧酸衍生物及其制备方法，以及含有它们的抗肿瘤药物组合物。具体地说，涉及1-（噻唑-2-基）-7-[3-氨基/氨甲基-（3-甲基）-4-烷氧亚胺基吡咯烷-1-基）]萘啶酮羧酸类化合物及其制备方法。
背景技术
自1962年萘啶酸（J Med Chem,1962，5:1063）问世以来，喹诺酮（包括萘啶酮）类药物已发展成为目前仅次于头孢菌素的一类广谱、高效、低毒性的抗感染化疗药物(中国医药工业杂志,2011,42:840)。近年来，科学家通过对喹诺酮的结构改造，成功地将其经典的抗菌作用转化为对哺乳动物的细胞毒性，并筛选出若干具有明确抗肿瘤活性的化合物，其中某些候选化合物目前已处于临床研究或临床前评价阶段(中国医药工业杂志,2010，41：456)。
在喹诺酮抗肿瘤研究领域取得成就最大者当属对1-（噻唑-2-基）萘啶酮羧酸的结构改造。2002年日本学者Tomita等公开了7-位具有不同氮杂环胺片段的6-氟-1-（噻唑-2-基）萘啶酮羧酸类化合物的合成及其抗肿瘤活性（J.Med.Chem.2002,45,5564），其中优秀代表物AT-3639（化合物A）对小鼠P388白血病细胞显示出良好的体内外抗肿瘤活性。
日本学者Tsuzuki等进一步研究发现，AT-3639的6-去氟类似物（化合物B）对小鼠P388白血病细胞的体外抗肿瘤活性是AT-3639的2倍（J.Med.Chem.2004,47,2097）。遗憾的是，化合物B的水溶性（0.0069mg/mL）较差,导致其体内抗肿瘤活性不理想。
1995年日本学者Tomita等公开了7-位氮杂环胺取代基中含有手性碳原子的1-（噻唑-2-基）萘啶酮羧酸类化合物的合成及其体内外抗肿瘤活性（CN:1158614A/1995），其中的优秀代表是目前处于III期临床试验的voreloxin(SNS-595,CN:103083316A/2005)。Voreloxin在保持化合物B体外抗肿瘤活性的基础上，其水溶性显著提高。除了具有广谱抗肿瘤活性外，本品的突出优点是与其他抗肿瘤药物之间没有交叉耐药性，其缺憾是它的7-位吡咯烷取代基结构中存在两个手性碳原子，将导致其生产成本极大提高，从而限制了它在临床上的应用范围。
为了克服上述现有技术所存在的缺陷，本发明人进行了广泛的研究，设计合成了7-位具有各种烷氧亚胺基取代的吡咯烷结构片段的1-（噻唑-2-基）萘啶酮羧酸类化合物，并测定了它们的抗肿瘤活性。最终发现，不同于以往文献报道的1-（噻唑-2-基）-7-[（3-氨甲基/氨基-（3-甲基）-4-烷氧亚胺基-1-吡咯烷基]萘啶酮羧酸类化合物具有意想不到的强抗肿瘤活性，与同类喹诺酮抗肿瘤候选化合物B以及具有相同作用靶点（哺乳动物拓扑异构酶II）的上市抗肿瘤药物依托泊苷相比，具有更加优越的抗肿瘤活性。
发明内容
本发明的目的是提供一类由通式（I）表示的萘啶酮羧酸类化合物及其药用盐，
其中：
R1代表氢、甲基；
R2代表甲基、乙基、苄基；
n代表0、1。
在本发明的通式（I）化合物的吡咯烷基部分中，与氨甲基（或氨基）和甲基相连的碳原子是不对称碳原子，因此可以R或S或R和S混合的形式存在，本发明包括所有这些异构体和混合物。
在本发明的通式（I）化合物的吡咯烷基部分中，由于含有肟基，因此通式（I）化合物可以E型或Z型或E型和Z型混合物的形式存在，本发明通式（I）化合物包括所有这些异构体和混合物。
本发明的式（I）化合物的在药学上可接受的非毒性的药用盐，包括与无机酸，如盐酸、硫酸形成的盐，与有机酸，如乙酸、三氟乙酸、柠檬酸、马来酸、草酸、琥珀酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、抗坏血酸或苹果酸形成的盐，以及氨基酸，如丙氨酸、天冬氨酸、赖氨酸形成的盐或与磺酸，如甲磺酸、对甲苯磺酸形成的盐。
本发明的式（I）化合物也可以溶剂化物（如水合物）的形式存在，因此，这些溶剂化物（如水合物）也包括在本发明的化合物之内。
本发明具体包括以下化合物，以及它们的药用盐：
7-[3-氨甲基-3-甲基-4-（甲氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
7-[3-氨甲基-3-甲基-4-（乙氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
7-[3-氨甲基-3-甲基-4-（苄氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
7-[3-氨甲基-4-（甲氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
7-[3-氨甲基-4-（乙氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
7-[3-氨甲基-4-（苄氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
7-[3-氨基-3-甲基-4-（甲氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
7-[3-氨基-3-甲基-4-（乙氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
7-[3-氨基-3-甲基-4-（苄氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
7-[3-氨基-4-（甲氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
7-[3-氨基-4-（乙氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
7-[3-氨基-4-（苄氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
本发明还涉及式（I）化合物的制备方法，如反应路线1所示。
反应路线1：
在反应路线1中，R、n1和n2如前述的定义。
式（IV）化合物可这样制备：在质子溶剂中加入缚酸剂，使式（II）化合物与式（III）化合物通过缩合反应来制备式（IV）化合物。
为了提高较贵的起始物式（II）化合物的反应效率，使用过量的反应物式（III）化合物，例如对相对起始物为等摩尔到10倍摩尔量，优选等摩尔量到3倍摩尔量。在室温到80℃，有或无压力条件下搅拌反应式（II）化合物和式（III）化合物3.5～30小时，来制备式（IV）化合物。用于本反应的质子溶剂选自水、醇或醇-水混合溶剂;缚酸剂选自三乙胺、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾。
然后将式（IV）化合物置于质子溶剂中加入碱，其中，碱相对式（IV）化合物为等摩尔到15倍摩尔量，优选等摩尔量到5倍摩尔量。在0℃～80℃下搅拌2～20小时，进行水解反应，得式（I）化合物。用于本反应的质子溶剂选自水、醇或醇-水混合溶剂;所述的碱选自氢氧化钠或氢氧化钾。
在本发明中用作起始物的式（II）化合物为已知化合物,并按现有出版物中已知的方法可容易地制得，例如J.Med.Chem.2004,47,2097。另一起始物的式（III）化合物也为已知化合物，并按现有出版物中已知的方法可容易地制得，例如，中国药物化学杂志，2009，19：109；Asian J Chem.2013,25:327；Chem.Res.Chin.Univ.,2011,27(6):981；J Med Chem,1997,40:3584;Bioorg Med Chem Lett,1998,8:221。
本发明还提供含有如上所定义的式（I）化合物及其药用盐作为活性成分的抗肿瘤药物组合物。
药物组合物含有的萘啶酮羧酸类化合物在组合物中的重量比为0.1～99.9%，药物可接受的载体在组合物中的重量比为0.1～99.9%。药物组合物以适合药用的制剂形式存在。药用的制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、粉针剂、注射剂。其中，所述片剂为糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂或缓释片剂；所述胶囊剂为硬胶囊剂、软胶囊剂、缓释胶囊剂；所述粉针剂为冻干粉针剂。
上述制剂可通过常规制药方法制备。可用的药用辅剂的例子包括赋形剂（醣类衍生物，如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖和山梨糖醇；淀粉衍生物，如玉米淀粉、土豆淀粉、糊精和羧甲基淀粉；纤维素衍生物，如结晶纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙和羧甲基纤维素钠；***胶；右旋糖酐；硅酸盐衍生物，如偏硅酸镁铝；磷酸盐衍生物，如磷酸钙等）、粘合剂（明胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇）、崩解剂（纤维素衍生物如羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮）、润滑剂（滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、鲸蜡、硼酸、苯甲酸钠、亮氨酸）、稳定剂（对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯）、矫味剂（常用的甜味剂、酸味剂、香料）、稀释剂和注射液用溶剂（蒸馏水、乙醇、甘油）。
本发明的药物组合物，作为制剂形式，每剂中含有的发明化合物的有效量为0.1～1000mg，所述每剂指的是，每一制剂单位，如片剂的每片，胶囊的每粒，也可指每次服用剂量，如每次服用100mg。
为了易于给药及剂量均一，将上述药物制剂配制成剂量单位形式是特别有利的。制剂的剂量单位形式指适于作为单一剂量的物理分离单位，每个单位含有产生所期望的治疗效果的计算好的预定量的活性成分。这种剂量单位形式可为包装形式，如片剂、胶囊或装在小管或小瓶中的粉剂。
虽然剂量单位形式中所含活性成分的量可以变化，但一般根据所选择活性成分的效力，调节在1～800mg范围内。
本发明中的式（I）化合物或其药用盐的给药量随患者的年龄、性别、种族、病情等的不同而不同。一般成人的日给药量大约为50-1000mg，优选100-800mg，可一次给药或分数次给药。
如上所述，本发明化合物对白血病及多种实体瘤细胞具有意想不到的强抗肿瘤活性。与同类喹诺酮抗肿瘤候选化合物B以及具有相同作用靶点的上市抗肿瘤药物依托泊苷相比，具有更加优越的抗肿瘤活性、更简单的制备方法，同时具有良好的水溶性及其稳定性。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1 7-[3-氨甲基-3-甲基-4-（甲氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
1-（噻唑-2-基）-7-氯-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸乙酯（304mg,0.6mmol）、3-氨甲基-3-甲基-4-甲氧亚胺基吡咯烷二盐酸盐（345mg,1mmol）、三乙胺（1.0mL，7.5mmol）和无水乙醇（15mL）的混合物于75℃搅拌反应8h。减压浓缩，残余物经硅胶色谱柱分离纯化（洗脱剂：V甲醇:V二氯甲烷=1:30），得淡黄色固体产物325mg（收率78%）。
上述固体（59mg,0.13mmol)、1.0N氢氧化钠溶液(0.39mL,0.39mmol)和无水乙醇(5mL)的混合物于室温搅拌反应10h。用1N盐酸溶液调反应液pH7，充分搅拌1h。过滤,滤饼依次用蒸馏水、乙醇和异丙醚洗涤，干燥，用DMF-乙醇重结晶，得淡黄色固体29mg（收率：53%），mp:286-288℃。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ（ppm）9.76(s,1H),8.33(m,1H),7.85(m,2H),6.97(m,1H),4.51(m,2H),4.17(m,1H),3.88(s,3H),3.64(m,1H),2.72(d,J=29.7Hz,2H),1.26(s,3H).ESI-MS:m/z429.23(M+H)+.HRMS-ESI:m/z Calcd.for C19H21O4N6S(M+H)+:429.13395;Found429.13251.
C19H20N6O4S C H N S
计算值 53.26 4.70 19.61 7.48
实测值 53.29 4.69 19.59 7.50
实施例2 7-[3-氨甲基-3-甲基-4-（乙氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
同实施例1化合物的制备方法，1-（噻唑-2-基）-7-氯-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸乙酯先与3-氨甲基-3-甲基-4-乙氧亚胺基吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解。粗品用DMF-乙醇重结晶，得淡黄色固体（收率：47%），mp:286-288℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ（ppm）9.77(s,1H),8.32(m,1H),7.85(m,2H),6.98(m,1H),4.54-4.45(m,2H),4.14(q,J=7.0Hz,3H),3.62(m,2H),2.74(m,2H),1.27(s,3H),1.24(t,J=7.0Hz,3H).ESI-MS:m/z443.23(M+H)+.HRMS-ESI:m/z Calcd.for C20H23O4N6S(M+H)+:443.14960;Found443.14899.
实施例3 7-[3-氨甲基-3-甲基-4-（苄氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
同实施例1化合物的制备方法，1-（噻唑-2-基）-7-氯-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸乙酯先与3-氨甲基-3-甲基-4-苄氧亚胺基吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解。粗品用DMF-乙醇重结晶，得淡黄色固体（收率：79%），mp:285-288℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ（ppm）9.62(s,1H),8.27(s,1H),7.76(s,2H),7.40-7.34(m,5H),6.82-6.77(m,1H),5.15(s,2H),4.48(s,2H),3.63(m,2H),2.74-2.61(m,2H),1.23(s,3H).ESI-MS:m/z505.27(M+H)+.HRMS-ESI:m/z Calcd.for C25H25O4N6S(M+H)+:505.16525;Found505.16312.
实施例4 7-[3-氨甲基-3-甲基-4-（苄氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸盐酸盐
回流搅拌下，向实施例3化合物（506mg,1mmol）的无水乙醇悬浊液（15mL）中加入1.5倍摩尔量的6N盐酸（溶清），加热回流0.5小时，降至室温，析出固体。过滤，干燥，得7-[3-氨甲基-3-甲基-4-（苄氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸盐酸盐488mg（黄色淡固体，收率：90%）。
C25H24N6O4S.HCl C H N S Cl
计算值 55.50 4.66 15.53 5.93 6.55
实测值 55.49 4.66 15.52 5.94 6.54
类似地也可以制备下述的盐，例如：
7-[3-氨甲基-3-甲基-4-（苄氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸乳酸盐；
7-[3-氨甲基-3-甲基-4-（苄氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸甲磺酸盐。
实施例5 7-[3-氨甲基-3-甲基-4-（苄氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸一水合物
将实施例3化合物（507mg,1mmol）溶于5%醋酸（8mL），室温搅拌下，用1N氢氧化钠溶液调pH=7，放置析出固体。过滤，干燥，得7-[3-氨甲基-3-甲基-4-（苄氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸一水合物420mg（淡黄色固体，收率：80%）。
C25H24N6O4S.H2O C H N S
计算值 57.46 5.01 16.08 6.14
实测值 57.47 5.03 16.07 6.11
实施例6 7-[3-氨甲基-4-（甲氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
同实施例1化合物的制备方法，1-（噻唑-2-基）-7-氯-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸乙酯先与3-氨甲基-4-甲氧亚胺基吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解。粗品用DMF-乙醇重结晶，得淡黄色固体（收率：77%）。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ（ppm）9.21(s,1H),7.95(d,J=7.5Hz,1H),7.29(d,J=7.5Hz,1H),6.80(m,1H),6.32(m,1H),4.68(m,1H),4.36(m,1H),3.95(s,3H),3.69(dd,J=12.3,8.8Hz,1H),3.64(dd,J=12.4,8.8Hz,1H),2.99–2.82(m,2H),2.79(dd,J=11.9,7.5Hz,1H).ESI-MS:m/z414.17(M+H)+.HRMS-ESI:m/z Calcd.forC18H18O4N6S(M+H)+:414.17595;Found414.17573.
实施例7 7-[3-氨甲基-4-（乙氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
同实施例1化合物的制备方法，1-（噻唑-2-基）-7-氯-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸乙酯先与3-氨甲基-4-乙氧亚胺基吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解。粗品用DMF-乙醇重结晶，得淡黄色固体（收率：78%），mp:275-278℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ（ppm）9.69(s,1H),8.23(m,1H),7.77(m,2H),7.01-6.90(m,1H),4.35(s,3H),4.17(dd,J=13.9,6.9Hz,2H),3.61(m,2H),3.17(m,2H),1.26(t,J=6.8Hz,3H).ESI-MS:m/z429.17(M+H)+.HRMS-ESI:m/zCalcd.for C19H21O4N6S(M+H)+:429.13395;Found429.13205.
实施例8 7-[3-氨甲基-4-（苄氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
同实施例1化合物的制备方法，1-（噻唑-2-基）-7-氯-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸乙酯先与3-氨甲基-4-苄氧亚胺基吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解。粗品用DMF-乙醇重结晶，得淡黄色固体（收率：70%），mp:>300℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ（ppm）9.72(s,1H),8.35(m,1H),7.83(m,2H),7.41-7.35(m,5H),6.96(m,1H),5.16(s,2H),4.49(m,2H),4.11(m,2H),3.22–3.08(m,2H),2.81(m,1H).ESI-MS:m/z491.10(M+H)+.HRMS-ESI:m/z Calcd.forC24H23O4N6S(M+H)+:491.14960;Found491.14841.
实施例9 7-[3-氨基-3-甲基-4-（甲氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
同实施例1化合物的制备方法，1-（噻唑-2-基）-7-氯-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸乙酯先与3-氨基-3-甲基-4-甲氧亚胺基吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解。粗品用DMF-乙醇重结晶，得淡黄色固体（收率：55%），mp:182-184℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ（ppm）9.74(s,1H),8.29-8.31(d,J=9.2Hz1H),7.84(m,2H),6.99-6.97(d,J=8.8Hz1H),4.49-4.45(m,2H),3.91(s,3H),4.04-3.84(m,2H),1.48(s,3H).ESI-MS:m/z415.56(M+H)+.HRMS-ESI:m/zCalcd.for C18H19O4N6S(M+H)+:415.11830;Found415.11700.
实施例10 7-[3-氨基-3-甲基-4-（乙氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
同实施例1化合物的制备方法，1-（噻唑-2-基）-7-氯-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸乙酯先与3-氨基-3-甲基-4-乙氧亚胺基吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解。粗品用DMF-乙醇重结晶，得淡黄色固体（收率：41%），mp:255-258℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ（ppm）9.79(s,1H),8.36(s,1H),7.87(m,2H),7.03(s,1H),4.49(m,2H),4.16(m,2H),4.05–3.62(m,2H),1.46(s,3H),1.27(m,3H).ESI-MS:m/z429.20(M+H)+.HRMS-ESI:m/z Calcd.forC19H21O4N6S(M+H)+:429.13395;Found429.13332.
实施例11 7-[3-氨基-3-甲基-4-（苄氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
同实施例1化合物的制备方法，1-（噻唑-2-基）-7-氯-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸乙酯先与3-氨基-3-甲基-4-苄氧亚胺基吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解。粗品用DMF-乙醇重结晶，得淡黄色固体（收率：65%），mp:175-177℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ（ppm）9.67(s,1H),8.24(s,1H),7.78(s,2H),7.42(m,5H),6.89(m,1H),5.16(s,2H),4.48(m,2H),3.77(m,2H),1.41(s,3H).ESI-MS:m/z491.17(M+H)+.HRMS-ESI:m/z Calcd.for C24H23O4N6S(M+H)+:491.14960;Found491.14758.
实施例12 7-[3-氨基-4-（甲氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
同实施例1化合物的制备方法，1-（噻唑-2-基）-7-氯-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸乙酯先与3-氨基-4-甲氧亚胺基吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解。粗品用用DMF-乙醇重结晶，得淡黄色固体（收率：45%）。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ（ppm）δ9.58(s,1H),8.23(d,J=7.8Hz,1H),7.67(d,J=7.8Hz,1H),6.93(m,1H),4.51(m,1H),4.17(d,J=12.3Hz,1H),3.88–3.72(m,2H),3.62(dd,J=12.5,3.3Hz,1H),3.55(s,3H),2.69(dd,J=12.5,3.3Hz,1H).ESI-MS:m/z400.47(M+H)+.HRMS-ESI:m/z Calcd.for C17H16O4N6S(M+H)+:400.48360;Found400.48758.
实施例13 7-[3-氨基-4-（乙氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
同实施例1化合物的制备方法，1-（噻唑-2-基）-7-氯-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸乙酯先与3-氨基-4-乙氧亚胺基吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解。粗品用DMF-乙醇重结晶，得淡黄色固体（收率：53%）。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ（ppm）9.47(s,1H),8.22(m,1H),7.75(m,2H),6.98(m,1H),4.58-4.49(m,2H),4.24(q,J=7.0Hz,3H),3.72(m,2H),2.70(m,2H),1.24(t,J=7.0Hz,3H).MS-ESI(m/z):414.42。HRMS-ESI:m/z Calcd.for C18H18O4N6S(M+H)+:414.45365;Found414.45758.
实施例14 7-[3-氨基-4-（苄氧亚胺基）-吡咯烷-1-基）]-1-（噻唑-2-基）-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸
同实施例1化合物的制备方法，1-（噻唑-2-基）-7-氯-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸乙酯先与3-氨基-4-苄氧亚胺基吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解。粗品用DMF-乙醇重结晶，得淡黄色固体（收率：72%）。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ（ppm）9.42(s,1H),8.37(s,1H),7.79(s,2H),7.38-7.27(m,5H),6.92-6.87(m,1H),5.05(s,2H),4.38(s,2H),3.65(m,2H),2.75-2.68(m,2H).MS-ESI(m/z):(M+H)+476.52。HRMS-ESI:m/z Calcd.for C23H20O4N6S(M+H)+:476.49325;Found476.49259.
实施例15
包衣片
片芯处方:
取上述成分混合均匀，制粒后过筛整粒，干燥、压片制成100片片芯。
包衣液处方:
欧巴代(Opadry)5g，80%乙醇适量包衣。
实施例16胶囊
处方：
制备方法：
取处方量原辅料，分别过筛，加入5%聚乙烯吡咯烷酮醇液和吐温80制软材，用20目筛制粒，在室温下晾干，加入十二烷基硫酸钠，混合均匀，按0.27g/S装入0号胃溶胶囊，取样化验，溶出限度为Q=80%，含量应为标示量的90-110%。
实施例17注射剂的制备
配方
制备方法：取2克实施例3化合物和山梨糖醇50克，加入适量注射用蒸馏水溶解，再加入注射用蒸馏水至1000毫升，混合均匀后，调溶液pH至4.0。该溶液用膜过滤器（0.22μm）过滤，即得注射剂。
实施例18冷冻干燥制剂的制备
配方
制备方法：取1克实施例9化合物和甘露糖醇5克，加入适量注射用蒸馏水溶解，在加入注射用蒸馏水至100毫升，混合均匀后，调溶液pH至5.0。该溶液用膜过滤器（0.22μm）过滤，使之冷冻干燥，即得注射用粉末制剂。
试验例1对白血病细胞HL60的抗肿瘤活性（IC50：μM）
本实验例在于研究本发明化合物对白血病细胞HL60的抗肿瘤活性，试验方法采用MTS法。
根据肿瘤细胞生长速率，将处于对数生长期白血病细胞HL60以170μL/孔接种于96孔培养板，贴壁生长24h后加药(30μL/孔)，每个浓度设3复孔。并设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞调零孔。肿瘤细胞在37℃、5%CO2条件下培养48h。培养后，取出培养板，每孔加入MTS10μL，再放入培养箱中2-5h。然后用酶联免疫检测仪测定490nm处的OD值。按以下公式计算肿瘤细胞生长的抑制率：根据各浓度抑制率，采用Logit法计算半数抑制浓度IC50。以上每个实验重复2～3次，求出2～3次实验的平均IC50值作为最终指标。
表1列出了本申请的式（Ⅰ）化合物中的若干代表化合物对白血病细胞HL60的抗肿瘤活性，并与同类喹诺酮抗肿瘤候选化合物B以及具有相同作用靶点的上市抗肿瘤药物依托泊苷进行比较。
表1实施例3、7化合物对白血病细胞HL60的抗肿瘤活性(IC50：μM)
样品 实施例3化合物 实施例7化合物 化合物B 依托泊苷
IC50：μM 0.4041 0.5383 1.2938 2.9097
由表1可见，本申请的式(Ⅰ)化合物中的实施例3、7化合物对白血病细胞HL60的抗肿瘤活性（IC50：0.4041-0.5383μM）是对照化合物B和依托泊苷（IC50：1.2938-2.9097μM）的2.4-7.2倍。
试验例2对实体瘤细胞的抗肿瘤活性（IC50：μM）
本实验例在于研究本发明化合物对实体瘤细胞的抗肿瘤活性，试验方法采用SRB（磺酰罗丹明）法。
根据肿瘤细胞生长速率，将处于对数生长期的贴壁实体瘤细胞以170μL/孔接种于96孔培养板，贴壁生长24h后加药(30μL/孔)，每个浓度设3复孔。并设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞调零孔。肿瘤细胞在37℃、5%CO2条件下培养48h。培养后，取出培养板，每孔加入50％(m/v)的三氯乙酸(TCA)50uL4℃放置lh，固定细胞。弃固定液，用蒸馏水洗涤5次，在空气中干燥后，每孔加SRB溶液100uL，室温下放置10-30min，进行染色。去上清液，用1％醋酸洗涤5次，空气中自然干燥后，每孔加入10mM Tris溶液150μL，在平板振荡器上振荡10min。用酶联免疫检测仪测定570nm处的OD值，用空白对照调零。按以下公式计算肿瘤细胞生长的抑制率： 根据各浓度抑制率，采用Logit法计算半数抑制浓度IC50。以上每个实验重复2～3次，求出2～3次实验的平均IC50值作为最终指标。
表2列出了本申请的式（Ⅰ）化合物中的若干代表化合物对多种实体瘤细胞（HCT-116/结肠癌，MCF-7/乳腺癌，A549/肺癌，PANC-1/胰腺癌，HeLa/***）的抗肿瘤活性，并与同类喹诺酮抗肿瘤候选化合物B以及具有相同作用靶点的上市抗肿瘤药物依托泊苷进行比较。
表2实施例3、9化合物对实体瘤细胞的抗肿瘤活性(IC50：μM)
由表2可见，本申请的式(Ⅰ)化合物中的实施例3、9化合物对多种实体瘤细胞（HCT-116/结肠癌，MCF-7/乳腺癌，A549/肺癌，PANC-1/胰腺癌，HeLa/***）的抗肿瘤活性（IC50：4.0537-15.7553μM）是对照化合物B和依托泊苷（IC50：14.5900->50μM）的2.6->9.4倍。
试验例3对接种结肠癌HCT-116裸鼠模型的体内抗肿瘤活性
本实验例在于研究本发明化合物对接种实体瘤裸鼠模型的体内抗肿瘤活性。
BALB/CA-nu小鼠（20-24g，8只/组）皮下接种结肠癌HCT-116的2%浆状物0.1ml。实验化合物溶解在0.1N NaOH中，用蒸馏水稀释至各给药浓度。从接种的次日（第1日）到第9日每日1次经腹腔内（ip）给药0.2ml各溶液。根据接种后第21-22日的肿瘤体积求出肿瘤重量，按下式计算出给药组相对于对照组的肿瘤增生长抑制率（%）。
肿瘤生长抑制率（%）=[（1-（给药组平均瘤重/对照组平均瘤重）]×100
表3实施例3化合物对接种结肠癌HCT-116裸鼠的体内抗肿瘤活性
由表3可见，本申请的式(Ⅰ)化合物中的实施例3化合物对接种结肠癌HCT-116裸鼠显示良好的体内抗肿瘤活性。在相同给药量（6.25mg/kg）的条件下，实施例3化合物对接种结肠癌HCT-116裸鼠的肿瘤生长抑制率（97%）高于2种对照化合物B（71%）和依托泊苷（34%）。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (9)

1.式(I)所示化合物及其药用盐，
其中：
R1代表氢、甲基；
R2代表甲基、乙基、苄基；
n代表0、1。
2.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物及其药用盐，其特征在于，其化合物为：
7-[3-氨甲基-3-甲基-4-(甲氧亚胺基)-吡咯烷-1-基)]-1-(噻唑-2-基)-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸，
7-[3-氨甲基-3-甲基-4-(乙氧亚胺基)-吡咯烷-1-基)]-1-(噻唑-2-基)-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸，
7-[3-氨甲基-3-甲基-4-(苄氧亚胺基)-吡咯烷-1-基)]-1-(噻唑-2-基)-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸，
7-[3-氨甲基-4-(甲氧亚胺基)-吡咯烷-1-基)]-1-(噻唑-2-基)-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸，
7-[3-氨甲基-4-(乙氧亚胺基)-吡咯烷-1-基)]-1-(噻唑-2-基)-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸，
7-[3-氨甲基-4-(苄氧亚胺基)-吡咯烷-1-基)]-1-(噻唑-2-基)-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸，
7-[3-氨基-3-甲基-4-(甲氧亚胺基)-吡咯烷-1-基)]-1-(噻唑-2-基)-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸，
7-[3-氨基-3-甲基-4-(乙氧亚胺基)-吡咯烷-1-基)]-1-(噻唑-2-基)-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸，
7-[3-氨基-3-甲基-4-(苄氧亚胺基)-吡咯烷-1-基)]-1-(噻唑-2-基)-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸，
7-[3-氨基-4-(甲氧亚胺基)-吡咯烷-1-基)]-1-(噻唑-2-基)-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸，
7-[3-氨基-4-(乙氧亚胺基)-吡咯烷-1-基)]-1-(噻唑-2-基)-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸，
7-[3-氨基-4-(苄氧亚胺基)-吡咯烷-1-基)]-1-(噻唑-2-基)-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸。
3.一种制备权利要求1所述式(I)化合物的方法，其特征在于，其包括如下步骤：
1)在质子溶剂中加入缚酸剂，于室温～80℃，式(Ⅱ)化合物和式(III)化合物进行缩合反应3.5～30小时，得式(IV)化合物；
其中：
R1、R2和n的定义同权利要求1；
2)然后将式(IV)化合物置于质子溶剂中加入碱，在0℃～80℃下搅拌2～20小时，进行水解反应，得式(I)化合物。
4.根据权利要求3所述式(I)化合物及其药用盐的制备方法，其特征在于，所述的质子溶剂选自水、醇或醇-水混合溶剂；所述的缚酸剂选自三乙胺、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾；所述的碱选自氢氧化钠或氢氧化钾。
5.权利要求1或2所述式(I)所示化合物及其药用盐在制备治疗实体瘤和非实体瘤的药物中的应用。
6.根据权利要求5的应用，其特征在于，所述实体瘤包括肺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌、头颈癌、食道癌、结肠癌、胰腺癌、肾癌、***癌、骨癌和脑癌；所述非实体瘤指白血病。
7.含有权利要求1或2所述式(I)所示化合物及其药用盐的用于胃肠道或非胃肠道给药的抗肿瘤药物组合物。
8.根据权利要求7所述的抗肿瘤药物组合物，其特征在于，该组合物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、粉针剂、注射剂。
9.根据权利要求7所述的抗肿瘤药物组合物，其特征在于，所述片剂为糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂或缓释片剂；所述胶囊剂为硬胶囊剂、软胶囊剂、缓释胶囊剂；所述粉针剂为冻干粉针剂。
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