CZ156892A3 - Rapamycin dimers - Google Patents

Description

Tento vynález pojednává o dimerech rapamycinu ^ÍHobecnáho vzorce 31/, které poskytují imunosupresivní a/nebo fungicidní a/nebo antitunorosní účinek in vivo a/nebo inhibují in vitro a jsou tím užitečné v léčbě transplantačníoh odmítavých reakcí, antoimunních nemocí / například lupus, revmatoidr.í artritida, diabetes mellitus, sklerosis multi plex / infekcí způsobených houbami / například Candida albicans /, rakoviny a zánětlivých nemocí.

Dosavadní stav techniky

Kapamycin je makrocyklické trienní antibiotikum produkované 2t£x£tomyces_hygroskopicus, u kterého byla zjištěna fvngicidní aktivita, zvláště proti Sandida albicans, obojí jak in^vitro tak in_viyo / C.Vezina et al., J.Antibiot. 28, 721 / 1975 /; S.K. Seghal et al., / 1975 /» n. A. Baker et al., / 1978 /; U.S.Patent 3,922,922

J.Antibiot. 28, 727 J.Antibiot. pi» 5>9 a U.S.Patent 3,995,749 /.

Ukázalo se,že rapamycin sám /U.S.Patent 4,885,171 / nebo v kombinaci s picibanilem / U.S.Patent 4,401,653/ má antituaorosní aktivitu.R.kartel et al. / Can.Physiol. Phamacol. 55,48 / 1976 / objevil, že rapamycin je efektivní v experimentálním modelu alergické encefalomyeliídy, u modelu pro sklerosis multiplex, u modelu adjuvantní ^artritidy, u modelu pro revmatoidnx artritidu, a je efektivní v inhibici formací 115 podobných protilátek.

Imunosupresivní efekt rapamycinu byl odkryt ve FASSSu 3,5411· '/ 1>’Q9 /, ukázalo-se, že rapamycin . je efektivní v inhibici transplantačních odmítavých reakcí / U.S.Patent Application Ser. Uo >52,544 podáno ó.června 1989 A Ukázalo se, Se Cyklosporin a a FK-500,

odmítavým reakcím / FASS3 3,3411 / 1969 /# ?a££3 3» 525ο

Ukázalo se,še mono- a diacylované deriváty rapamycinu

výše popsané estery budou v poloze ýl a 42.

Podstata vynálezu

Tento vynález pojednává o dímerech rapamycinu Jpšť|obecného vzorce /IX , který poskytuje imunosupresivní a/nebo antifunglcidní a/nebc antitumorosní ‘ a/nebo protizánštlivou aktivitu in vivo a/nebo irihibujs proliferaci thymocytů. in_vitro , a proto je užitečný v léčbě transplantačních odmítavých reakcí, ^aut o imunních namoci / například lupus, revmatoidní arthritis, diabetes mellitus, skierosis multiplex /, infekcí způsobených houbami / např. Candida albicans /, rakoviny a zánětlivých onemocnění.

A je - /os₂z_a- , - /CHj/j,- /;E=cy-/2H₂/_a - ,

- '-PP ⁵ =- /-/«i/a-. -^/cV_n-A0-p=^E:

- /CH=GK/£-—/Cfí=CH/_m-, substutuovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkynpl, substituovaný aromatický kruh ;

- j-v, m = χ - 10 a r. = m neoo n m ueco farmaceuticky vhodná sul t toho .tt ·/ ' v yyVJŮn Y ·

Dimery rapamycinu /1/ z tohoto vynálezu mohou být připraveny standardními literárními procedurami jak je Načrtnuto níže •71 71 r

3 - CH + 0 = 7 - A - 7 = 0-> 3 - 0

H . ·· ^ «· kde 3 je rapamycin a A je jak definováno nahoře

Výhodné provedení

Byla popsána tvorba esterů mezi alkoholem a alkyl halidea / Jerry lilarch, Advanced Organic Chemistry, J.vydání publikované v roce 1985,strana J4ó/. Specifické podmínky reakce využité v tomto vynálezu byly vyvinuty S.Bakhitem ² Ayerst laboratoří a vydány v U.S.Patentu 4,516,385 / 2j>. únor 1982 /.

Imunosupresivní aktivita sloučenin tohoto vynálezu byla zhodnocena standardními farmakologickými testovacími procedurami provedenými in__vitro ke změření lymfocytámí proliferace / LAF /.

Procedura navození komitogenní thyaocytární proliferace / LAP / byla použita jako in vitro míra imunosupresivního efektu representativních sloučenin. Jmenovitě, buňky z thymu normálních BALB/f* myší byly pěstovány po dobu 72 hodin 3 PEA a IL - 1 a pulzně značeny thymidinem posledních 6 hod. Buňky jsou pěstovány 3 nebo bez řízných koncentrací rapamycinu, cyklosporinu A nebo testovací sloučeniny.

Buňky jsou sklizeny a inkorporovány; radioaktivita je určena. Inhibice proliferace lymfccytu je určena v procentech změny ^v jednotkách za minutu 3 kontrol nepodrobených léku.

Výsledky jsou vyjádřeny následujícím vzorcem :

-^Η-kontrolní buňky thymu- S^-thymové buňky podrobené rapam.

-Ή-kontrolní buňky thymu- IP-bunky podrobené testova<£ sl.

Následující tabulka sumarizuje výsledky sloučenin tohoto wnálezu v teto standardní řep re z ent at i vní ch testovací proceduře.

A Já ti 1 ik JI 1 Biologická aktivita - lh? esey

Příklad 1	R/+Á ve 100 nm	v 10 nm Or95	T IC50
Příklad 2	0?9ó	0?28	-
Příklad J	1,°	O?59	-
Příklad 4	1^0	IjlO

⁺Helativn£ potence analogů/rapamycinu v dávkách lOC^nm a ici

Výsledky těchto standardních farmakologických testovacích procedur pro representativní sloučeniny tohoto vynálezu demonstrují, že sloučeniny tohoto vynálezu jsou užitečné jako imunosupresivní látky.

Sloučeniny mohou být podány holé nebo s nosičem potřebným savcům.Parmakologický nosič nebo tekutá látka.

farmekologickým může být tuhá

Tuhý nosič může zahrnovat jednu nebo více substancí, které mohou také působit jako látky ochucujíeí,lubrikantní, solubilizující,jako suspenzní látka, plni dlo, klouzadlo, stlačující látka, vázající nebo tablety rozkládající látka, může to být také látka vytvářející obal.V pudrech je nosičem jemně -rozemletá pevná látka ,která je ve směsi rozemletou aktivní složkou.V tabletách je aktivní složka smíchána s nosičem, který má nezbytné ztlačujíeí vlastnosti ve vhodných proporcích a je utvořena v požadovaném tvaru

neí

--6a velikosti.Pudry a tablety nejvhodněji obsahují více 99% aktivní látky. Láezi vhodné pevné nosiče patří např. * »ta»an;a foofgrbfůanyno cium stearat /'Talek, cukr, lektosa, de.xtrín, škrob, želatina, oelulosa, methyhjzelulosa, sodium karboxynethyl oelulosa, polyvinylpyrolidin, nízko rozpustné vosky a ionové pryskyřice.

Tekuté nosiče se používají k přípravě roztoků , suspenzí, emulsí, sirupů, elixírů a překapávaných kompozicí, Aktivní složka může být rozpuštěna nebo suspendována ve farmakologicky vhodném tekutém nosiči jako je voda, organická rozpouštědla, směsi obou nebo farmakologicky vhodné oleje a tuky. Tekuté nosiče mohou obsahovat další vhodná farmaceutická aditiva jako jsou solubilizéry , emulsifikátory, nárazníky, látky chránící, látky oslazující, ochucuj ící, suspendovací látky, zesilující látky, barviva, regulátory viskozity, stabilisátory nebo osmo regulátory. Vhodné příklady tekutých nosičů pro orální nebo parenterální podání zahrnují vodu / částečně obsahující aditiva jak bylo napsáno výše, např. deriváty celulosy, nejlépe roztok, k

sodium karboxymethylcelulosy /, alkoholy / včetně __₍ hydricmy p^Tyhydri gkýcH alkoholů, jako jsou např.glykoly/ a·jejich deriváty, oleje / frakcionovaný kokosový olej a arašídový olej /. Pro parenterální podání mohou nosiče být také estery olejů jako je ethyl_jcleát a isopropyl^ ^mýristát. Sterilní tekuté nosiče jsou vhodné pro sterilní tekuté formy určené pro parenterální podání. Tekuté nosiče pro tlakové komposice mohou být halogenované nebo ostatní farmakologicky vhodné poháněči látky.

Tekuté farmaceutické komposice jako jsou sterilní roztoky nebo suspenze mohou být utilisovány například intramuskulární, intraperitor.eální nebo subkutánní injekcí. Sterilní' roztoky mohou být také podány intravenózně. Sloučeniny mohou být také podány orálně a to jak v tekuté, tak v řevné formě.

- 7 Kejvhodnějši je farmaceutická forma v jedné dávkové formě, jako jsou například tablety nebo kapsle. v takové formě je sloučenina rozdělena do jednotlivých dávek obsahujících příslušné množství aktivní složky; jednotlivá dávková forma může být balená komposice, například balené pudry, lahvičky,'amnule, dněné injekční stříkačky nebo sáčky obsahující tekutinu. Jednotlivá dávka muže být například kapsle nebe tableta sama o sobě, nebo to muže být příslušný počet takových kompozicí v balené formě. Dávka určená k léčbě musí být subjektivně určená ošetřujícím lékařem.

následující příklady ukazují přípravu reprezentativních sloučenin tohoto vynálezu.

yror^oCLu^

Příklad 1

HaOamycin_<_-_e42_2>42_-_diester_-s_kyselinou_-hexsnedikarboxyloyou

Roztok O^IJ g adipoyl chloridu v 1 ml suchého toluenu byl po kapkách při pokojové teplotě přidáván k roztoku 1.10^ rapamycinu ve 20 ml suchého toluenu a 2 ml suchého pyridinu; výsledný rostok byl zahříván na.50*0 v prostředí dusíku sa stálého míchání po dobu 65 hodin.Produkt byl extrahován do ethyl acetátu po přidání 20 ml 2normální kyseliny chlorovodíkové a 20 ml fyziologického roztoku. Roztok ethyl__acetátu byl vysušen iSgS04 a rozpuštědlo odstraněno při sníženém tlaku.Chromatografie přes silikagel při použití 10 %/ethyl acetátu v dichlormeth^au poskytla 50 mg produktu ve formě žluté tuhé látkytání 111 - 142^0.

IR / RRr / : >4J0,2925,1713,1645,1552,1170,7S5 a 6J2 cm¹.

MiJR / CDClj, 400 MHz / : 5 3/7 /s,6H, OCRy, / s,6H, OCHj/

5_r14 /s,6R,0CH^ /, 1_;75 / 3,6r , CHj /, 1.65 /s,6H,CH^/.

IÍ3 / neg PAR / : 1?57,5$Ό.

Příklad 2 hanamvcin - 42_χ42*- diester s h“Ot^^d3^rbo2tylovoLi_^^^eA^^^oH

Roztolc Oj25 g pimeloyl^hloridu v 1 al toluenu byl přidán lc roztoku l_t12 g rapamycinu ve 35 tal toluenu a 2 ml Pyridinu; výsledný roztok byl po dobu 44 hodin za stálého míchání zahříván na 50^1 v prostředí dusíki.Během chlazení bylo přidáno 10 ml 2noraální 3C1 a 20 ml fysiologického ro’ztolcu a produkt byl extrahován do ethyl^cetátu / JO ml / který byl proprán fysiologickým roztokem, vysušen ^gS0₄ a vypařen . Zbytek byl chromátografován přes silikagel za použití gradientu od 5‘/e člo 30^e/<^ethyl acetátu ^v dichlormethanu, a byl získáno 75 mg purifikovaného Produktu ve formě bledě žluté tuhé látky, tání 12O-15Cjr G. IR / R5r /: >440,2930,1732,1648 a 1455 cm^.iJMR / CDClj,

400 MHz/: $3^7 /s, 6H,0CHj/, 3_;34 / s,6H,0CHj /,3^14 / s,62,0CHj/. MS / neg PÁB /: 1951, 590.

£*íklad_£

2&2££Τ£2ϊ£_242_λ42*-» jdiester s^oct^edikarb^xylovou^Jcyselinou

Promíchaný roztok z 1^24 g rapamycinu a <^,>0 g suberoyl chloridu ve 100 ml toluenu a 2 ml pyridinu byl zahříván na 5oj°C po dobu 66 hodin v prostředí dusíku, potom zchlazen, rozředěn 100 ml ethyl^acetátu a zpracován s 20 ml 2normální

HC1 a 50 ml fysiologického roztoku.Organická část byla proprána fysiologickým roztokem, vysušena MgSO₄, ^vyšíhána z rozpouštědla a chromatografována přes silikagel pri použití gradientu 0^5% až 20 % methanolu v dichlormethanu byle získáno. 140 mg produktu ve formě bledě žluté pevné látky, eon tání 11? - 1>4^C.

IR /H3r/ : 3430,2920,1726,1640,1+4? a 980 ca*¹. M / CDClj,400 MHZ/ : S 3_Z37 / s, 62, OMe/, 3_Z 33 / β,οΗ^ΟΜβ /,

3^14 / 3,65,OMe/. MS / neg PMB / : 1965, 590.

£ří klad —i _r- * »i,·- y a ·> *1»^ ikys ?1 lha._3_non^gdjk^ij)5>x)rlpyou_kyselinou Roztok 1^27 rapamycinu a 50 mg azelaoyl^hlcridu ^ve 125 ml toluenu a 2 ml pyridinu byl promícháván při teplot? 20 C v prostřeli dusíku po lobu c5 hodin,potom zchlazen a zpracován se 20 ml 2 normální HC1.Organická část bvla promyta fysiolcgickým roztokem,vysušena peXs kgSCn, vyžihána z rozpouštědla a chromatografována přes silikagel při použití gradientu od 0^5' do 10 ^é/<? methanolu v dichlormethanu,bylo získáno 110 ng produktu ve formě bledě žluté pevné látky,ώ^Λ^ηί 107 - 125

12, / H2r /; 5450,2935, 1750, 1650, 1455, 1100 a 99c cm¹.

Příklad 5 z l

5^£2SZ2Í5_^2_JL42_--_diester_s_l_£ 4-g^enylenedi akrylovou kyselinou

Hoztok ICO mg 1,4-p^enylenelia^rylGvé kyseliny v 5 ml thicny-^ohloridu byl zahříván pod refluxem v prostředí dusíku po dobu dvou hodin. Thiony\jihlorid byl odstraněn pod sníženým tlakem; zbytek byl rozpuštěn v 5 ml toluenu přidán k promíchanému roztoku 0^90 g rapamycinu ve 25 ml toluenu a 2 mi pyridinu,zahříván na teplotu'50^2 hodin. Zchlazená reagující směs byla zpracována s 20 ml 2nornáiní HC1 a zředěna 20 ml ethyl acetátu a 50 ml fysiolc**· gického roztoku.?rcdukýbyl extrahován do ethyl acetátu a chromatografován přes silikagel při pužití gradientu od •do 5 procent nethaňolu v dichlormethanu, získáno cO mg ,Ά produktu jako blědě žluté pevná látky, ání 121-i;i

9HM·!

- 10 ia / K3r Z : >42C,29>0, 1?15, 1640, 1445, 1100 a 930 ca“¹. MLH / CDCl^.,400 UHs/íS 7^64 /d,2H,J =l2_yOC Hz/, 7_;52 /s,4E, aromat i o/, 6.47 /<1,2H,J=12?0 Hz /, 3p33 /3,62,0^/, >^>2 / 3,6H,CiůeZ z_?12 / 3,6H,0Ae /. -S /ne* ?xB/ ^: 2009 /m”/,1112, 590.

Zastupuje:

Dr. ZDENKA KpftEJZOVÁ

kde

«Χ?*<»έΤΧ£*«Π^Ζ»,

Claims (7)

1. «Χ?*<»έΤΧ£*«Π^Ζ», cimer rapamycinu raorce x 'ΧΛ

   A je - ZCIL>Z^

   - — , — / CH^Z•'J'/Οχι ⁼ Cií/—/ Cn~/ £2 —,

   -. ZG^Z^-Z-G = G-Z-ZCH?/™-, -/CH2Z_n-(—CH?Z_a - ZCH » GHZ^-^^^-/CH s GSZ~-, substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alld.nyl, substituovaný aromatický kruh η = 1 — 10, m — 1 — 10 a n. = m nebo η / u · nebo famaoeutiokv vhoúná sú*! z toho
2. 2. Dimer podle nároku 1, v němž A znamená skupinu

   - (CH₂)₄ - nebo sůl této látky, přijatelná z farmaceutického hlediska.

   .
3. 3.' Dimer podle nároku 1, v němž A znamená skupinu vzorce

   - hebo· sůl této sloučeniny, přijatelná z farmaceutického hlediska.
4. 4.Dimer podle nároku 1, v němž A znamená skupinu vzorce -(CH₂)g- nebo sůl této sloučeniny, přijatelná z farmaceutického hlediska.
5. 5. Dimer podle nároku 1, v němž A znamená skupinu vzorce -(CH₂)₇- nebo sůl této sloučeniny, přijatelná z farmaceutického hlediska.
6. 6. Dimer podle nároku 1, v němž A znamená skupinu vzorce

   -CH=CH-á Λ-CHeCH- nebo sůl této sloučeniny, přijatelná z farmaceut4re4eeho hlediska.
7. 7. Farmaceutický prostředek k léčení transplantačních odmítavých reakcí, autoimunních onemocnění, infekcí, způsobených houbami, rakoviny a zánětlivých onemocnění, vyznačující se tím, že jako svou účinnou složku obsahuje dimer rapamycinu podle nároku 1 nebo jeho sůl, přijatelnou z farmaceutického hlediska spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.

   Zastupuje:

   Dr. ZDENKA SOREJZOVá

   - 14 Anotace PV 1558-92

   Vzorec k anotaci