CN1997895A - 乙型肝炎病毒的检测方法 - Google Patents
乙型肝炎病毒的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1997895A CN1997895A CNA2005800237088A CN200580023708A CN1997895A CN 1997895 A CN1997895 A CN 1997895A CN A2005800237088 A CNA2005800237088 A CN A2005800237088A CN 200580023708 A CN200580023708 A CN 200580023708A CN 1997895 A CN1997895 A CN 1997895A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- hbv
- antigen
- surfactant
- virus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 63
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 title claims abstract 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 156
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 155
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 155
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 55
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 44
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 39
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 claims abstract description 35
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 claims abstract description 35
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 34
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 31
- 239000002280 amphoteric surfactant Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 138
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 45
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 claims description 33
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical group Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 20
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 18
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 18
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N urea group Chemical group NC(=O)N XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 17
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 15
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 14
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 claims description 12
- 238000005660 chlorination reaction Methods 0.000 claims description 10
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000031709 bromination Effects 0.000 claims description 8
- 238000005893 bromination reaction Methods 0.000 claims description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 8
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 claims description 8
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 6
- RKMJXTWHATWGNX-UHFFFAOYSA-N decyltrimethylammonium ion Chemical compound CCCCCCCCCC[N+](C)(C)C RKMJXTWHATWGNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- VICYBMUVWHJEFT-UHFFFAOYSA-N dodecyltrimethylammonium ion Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C VICYBMUVWHJEFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 5
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 claims description 5
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 4
- ZVZFHCZCIBYFMZ-UHFFFAOYSA-N 6-methylheptoxybenzene Chemical compound CC(C)CCCCCOC1=CC=CC=C1 ZVZFHCZCIBYFMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 4
- YBDSNEVSFQMCTL-UHFFFAOYSA-N 2-(diethylamino)ethanethiol Chemical compound CCN(CC)CCS YBDSNEVSFQMCTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DENMGZODXQRYAR-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylamino)ethanethiol Chemical compound CN(C)CCS DENMGZODXQRYAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HGPNKTHAVDVUNT-UHFFFAOYSA-N 2-dodecylpyridine;hydrochloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCC1=CC=CC=[NH+]1 HGPNKTHAVDVUNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CHZHMUWQBREXLK-UHFFFAOYSA-N C(C)(C)N(C(C)C)CCC(C)S Chemical compound C(C)(C)N(C(C)C)CCC(C)S CHZHMUWQBREXLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical group SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002798 cetrimide Drugs 0.000 claims description 3
- 229960000800 cetrimonium bromide Drugs 0.000 claims description 3
- WOWHHFRSBJGXCM-UHFFFAOYSA-M cetyltrimethylammonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C WOWHHFRSBJGXCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- GLFDLEXFOHUASB-UHFFFAOYSA-N trimethyl(tetradecyl)azanium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C GLFDLEXFOHUASB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 229960001927 cetylpyridinium chloride Drugs 0.000 claims description 2
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- UMWKZHPREXJQGR-UHFFFAOYSA-N n-methyl-n-(2,3,4,5,6-pentahydroxyhexyl)decanamide Chemical compound CCCCCCCCCC(=O)N(C)CC(O)C(O)C(O)C(O)CO UMWKZHPREXJQGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229920000259 polyoxyethylene lauryl ether Polymers 0.000 claims 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 17
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 abstract description 4
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 abstract description 4
- 239000002535 acidifier Substances 0.000 abstract 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 19
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 15
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 8
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 6
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 4
- CMBJWSUWPPPZTH-UHFFFAOYSA-N 1-(diethylamino)ethanethiol;hydrochloride Chemical compound Cl.CCN(CC)C(C)S CMBJWSUWPPPZTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 3
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M lithium;dodecyl sulfate Chemical compound [Li+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- RCEAADKTGXTDOA-UHFFFAOYSA-N OS(O)(=O)=O.CCCCCCCCCCCC[Na] Chemical compound OS(O)(=O)=O.CCCCCCCCCCCC[Na] RCEAADKTGXTDOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 2
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 2
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 2
- BHNQPLPANNDEGL-UHFFFAOYSA-N 2-(4-octylphenoxy)ethanol Chemical compound CCCCCCCCC1=CC=C(OCCO)C=C1 BHNQPLPANNDEGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=CC=C1OCCO IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LBCZOTMMGHGTPH-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCOCCO)C=C1 LBCZOTMMGHGTPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 206010019791 Hepatitis post transfusion Diseases 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical compound SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920004929 Triton X-114 Polymers 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- UKWLRLAKGMZXJC-QIECWBMSSA-L disodium;[4-chloro-3-[(3r,5s)-1-chloro-3'-methoxyspiro[adamantane-4,4'-dioxetane]-3'-yl]phenyl] phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].O1OC2([C@@H]3CC4C[C@H]2CC(Cl)(C4)C3)C1(OC)C1=CC(OP([O-])([O-])=O)=CC=C1Cl UKWLRLAKGMZXJC-QIECWBMSSA-L 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- XTPRURKTXNFVQT-UHFFFAOYSA-N hexyl(trimethyl)azanium Chemical compound CCCCCC[N+](C)(C)C XTPRURKTXNFVQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000002969 morbid Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5761—Hepatitis B
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供血清中乙型肝炎病毒(HBV)抗原的检测或定量方法,以及非常简便有效地处理上述检测和定量测定所用样本的方法。含有乙型肝炎病毒(HBV)的样本的处理方法的特征在于:用处理剂对含有HBV的样本进行处理,从而释放HBV抗原并破坏与HBV抗原结合的抗体,所述处理剂包括:(1)酸化剂,(2)蛋白质变性剂、分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂、或阳离子表面活性剂。
Description
技术领域
本发明涉及处理含有乙型肝炎病毒(下文中称为“HBV”)的样本以便高灵敏度地检测或定量测定血液中的HBV抗原的方法,以及应用所述处理方法检测或定量测定HBV抗原的方法。
背景技术
HBV是最早确定为通过手术中输血引起输血后肝炎和HBV感染的病原病毒。因此,为了筛选输血用血液,诊断血液是否受到HBV感染是极其重要的。
这种HBV感染的诊断方法有样本中抗HBV抗体的检测方法、HBV抗原的检测方法或HBV基因的检测方法。
在这些方法中,HBV基因检测方法包括核酸扩增法(NAT)和DNA探针检测法,目前临床上广泛采用这些方法。此外,由于NAT法应用的普及,HBV DNA的量与HBV携带者病态间的关系受到关注,NAT法已普遍用于抗病毒药物治疗后的监控中。
PCR法和TMA法等NAT法是基因片段的高灵敏度检测方法。然而,当从样本中提取HBV基因组DNA时,这些方法过于复杂,在手工操作时需要的处理时间长达2小时,而且还包括多个操作步骤,等等。另外,这一操作的复杂性增加了受污染的机会,并且还增加了产生假阳性样本的可能性。还有一个问题是需要熟练的技巧才能获到稳定的测量值。虽然近年来自动化仪器的研发采取了针对污染的措施,缩短了提取DNA的操作时间,但是仍需要十分昂贵的仪器,因此除大量样本需要在研究机构处理外,并没有普及使用。另外,因为DNA引物必须与目标基因一致,所以需要使用多种引物,这就产生了每次测试成本都比免疫测定法成本高的问题。
因为这些与HBV基因组检测法有关的问题,所以病毒抗原检测方法受到关注。在HBV抗原检测方法中,HBs抗原的检测法已成为血液筛选的常规方法,HBe抗原的检测法也广泛用于HBV增殖标记。
除了这些抗原检测法外,已开发出HBV核心抗原(HBc抗原)的直接检测法。Usuda等(Journal of Virological Methods,72,95-103,1998)开发出一种用具有HBV核心(HBc)抗原特异性的单克隆抗体检测血清HBc抗原的方法,并指出该方法与上述用于病毒基因组检测的NAT法有同样的临床效果。这一HBc抗原检测***因为扩增程序不包括在检测过程中,所以比较耐污染。
然而,即使用上述方法,仍会留下一些问题。用于测定的样本处理程序又复杂又耗时,如果将该方法用于筛选、监控等用途时就会出现问题。为了浓缩病毒颗粒并除去血清成分,处理样本(血清)时,包括用抗HBs多克隆抗体进行处理(37℃,2小时)、离心(10分钟)、除去上清液、用表面活性剂处理、用碱处理(35分钟)、添加中和剂等多个步骤的处理过程是必需的。因为这些步骤要求非常熟练的操作,所以必需有一定的熟练程度才能获得再现性。另外,处理时间最低大约需要3小时。而且,因为包括离心和除去上清液等步骤,所以自动化操作有困难,同时大量处理也有困难;因此就操作程序而言,上述方法不适于需要大量处理的应用。
另外,Oshihara等开发出一种无需使用抗HBs多克隆抗体进行处理,而是通过用碱处理、用链霉蛋白酶处理和添加非离子表面活性剂乙基苯基聚乙二醇P40(Nonidet P40,NP-40)和巯基乙醇测定HBc抗原的方法(日本专利特开平第8-50133号)。然而,这一方法的灵敏度低,检出限的HBc抗原浓度相当于2.2pg/ml的HBV-DNA浓度,该HBV-DNA的浓度估计为105~106拷贝/ml。
除了上述HBc抗原的检测方法外,还开发出允许同时测定HBe抗原和HBc抗原的HBV核心关连抗原(HBcr抗原)的测定方法(国际公布WO 02/14871 A1)和形成HBV病毒样颗粒的HBV p22cr抗原(HBV p22cr抗原)的测定方法(国际公布WO 04/22585 A1)。这些方法比HBc抗原检测法更灵敏,但是与HBV基因组测定法相比,灵敏度仍不能令人满意。
专利文件1:日本专利特开平第8-50133号。
专利文件2:国际公布WO 02/14871 A1。
专利文件3:国际公布WO 04/22585 A1。
非专利文件1:Journal of Virological Methods,72,95-103,1998。
发明内容
本发明所要解决的问题
免疫测定法操作简便,成本低。但是,HBe抗原用作增殖标记的现有测定法不能测定在抗HBe抗体存在时免疫复合物中存在的HBe抗原。另外,尽管HBc抗原的量与HBV DNA的量有关,但是因为上述预处理的复杂性和灵敏度不够,所以HBc抗原测定法不适用于临床研究。
另一方面,在HBV核心关连抗原测定和HBV p22cr抗原测定时,用表面活性剂和加热(56℃~70℃)对样本进行预处理,以破坏抗体和病毒颗粒,然后测定HBV核心关连抗原或HBV p22cr抗原。
然而,这些方法也需要换地方(off-board)处理样本,完全自动化的应用颇为困难。
因此,本发明的目的是为筛选乙型肝炎、监控慢性乙型肝炎患者的治疗等,提供即使在抗HBV抗体存在时,检测HBV核心关连抗原(HBe和HBc抗原)、HBV p22cr抗原等的预处理方法及应用该预处理方法进行测定的方法。换句话说,本发明的目的是提供检测HBV抗原的***,该***能够在较短时间内通过简便的预处理,方便地应用到自动化***等大量处理***中。
解决问题的手段
作为深入研究解决上述问题的结果,本发明的发明人关注的是:(a)含有HBV的样本的处理方法,该方法仅仅通过短时间内的简单操作,就可使样本中的HBV抗原转化成适于用探针检测的状态,(b)检测样本中的HBV抗原的处理方法,该方法通过短时间内的简单操作,使来源于宿主的抗HBV抗原的抗体与捕捉或检测探针竞争,同时使之失活。另外,本发明的发明人发现,对于HBV抗原测定,样本中存在的HBV抗原不仅可从病毒颗粒或免疫复合物释放出来,而且样本中存在的抗HBV抗原的人抗体还可用以下方法使之失活:(c)样本用酸化剂处理,(d)除了前述处理外,还用表面活性剂、蛋白质变性剂和还原剂处理,(e)使用该处理方法后,可提供最适于用抗体等探针进行免疫测定的样本。而且,本发明的发明人发现可以提供:(f)一种用处理剂处理样本的步骤,该步骤会释放含有来自病毒颗粒的HBV抗原样本中存在的HBV抗原,同时还使样本中存在的抗HBV的人抗体失活;一种通过包括处理步骤的免疫测定,检测和定量测定HBV抗原的方法,(g)含有处理剂的HBV抗原测定试剂盒,发明人基于这些发现完成了本发明。
因此,本发明提供下述第1~3项:
1.一种含有HBV的样本的处理方法,其特征在于用处理剂对含有HBV的样本进行处理,以释放HBV抗原,并使与HBV抗原结合的抗体失活,所述处理剂包括:
(1)酸化剂,和
(2)表面活性剂和/或蛋白质变性剂。
2.一种HBV抗原的免疫学检测方法,所述方法包括:
(1)前述第1项的含有HBV的样本的处理方法的实施步骤,和
(2)使用与HBV抗原结合的探针检测HBV抗原的步骤。
3.一种诊断试剂或诊断试剂盒,所述试剂或试剂盒在用于处理样本以检测HBV抗原的处理剂中包括以下所述的酸化剂(1)和至少一种选自(2)的物质:
(1)酸化剂;和
(2)同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂、同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂和蛋白质变性剂。
另外,含有HBV的样本的处理方法的一个优选的实施方案包括下述第1)项或第2)项:
1)一种含有HBV的样本的处理方法,该方法用处理剂对含有HBV的样本进行处理,以释放HBV抗原,并使与HBV抗原结合的抗体失活,所述处理剂包括:
(1)酸化剂,和
(2)蛋白质变性剂、同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂、同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的阳离子表面活性剂和非离子表面活性剂中的任一种。
2)一种含有HBV的样本的处理方法,其特征在于用处理剂对含有HBV的样本进行处理,以释放HBV抗原,并使抗HBV抗原的抗体失活,所述处理剂包括:
(1)酸化剂,和
(2)同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂、同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的阳离子表面活性剂、蛋白质变性剂、非离子表面活性剂和还原剂中任何两种以上的组合。
发明效果
本发明使HBV抗原在短时间内容易地从病毒颗粒中释放出来并呈适于免疫测定法的状态成为可能,该方法用抗体等探针检测抗原并使抗HBV抗原的抗体失活。另外,根据本发明所述方法处理含有HBV的样本,并通过用抗体等探针检测抗原的免疫测定法,使得在短时间内方便地检测和定量测定HBV抗原成为可能,而且灵敏度高。此外,根据本发明,通过除使用酸化剂外,还使用表面活性剂等,解决了由酸处理引起的沉淀问题,有效地破坏蛋白质,短时间内容易地释放出病毒抗原,带来了极好的提高灵敏度的效果。
附图简述
图1是表示样本处理中随酸化剂(盐酸)浓度而异的效果图。
符号说明
-▲-HBV抗原阳性样本(#990277)。
-△-HBV抗原阳性样本(#990544)。
-◆-HBV抗原阴性样本(正常血清)。
-□-HBV抗原阴性样本(正常血浆)。
实施本发明的最佳方式
本发明含有HBV抗原的样本的处理方法中所用的样本包括全血、血浆、血清、尿液、唾液和脑脊液、肝组织等生物学体液。
一般认为感染性HBV颗粒是一种Dane颗粒,具有直径为42nm的结构。包膜脂蛋白是HBs抗原,HBc抗原形成直径为27nm的内部核衣壳(核心颗粒)。另外,还有形成HBV核衣壳样颗粒的HBV p22cr抗原,一般认为这个分子形成核心样颗粒,其外部具有HBs抗原。
一般通过检测HBs抗原或HBe抗原,对乙型肝炎进行诊断。然而,测定这些抗原无法准确地反映出感染的时间和感染性颗粒的量。由于这一原因,有必要测定构成病毒颗粒或病毒样颗粒的HBc抗原、HBV核心关连抗原和HBV p22cr抗原。
样本中,HBc抗原和p22cr抗原形成病毒颗粒,HBe抗原等与抗HBV抗体形成免疫复合物。为了检测这些抗原中的HBc抗原、HBe抗原和HBV p22cr抗原,有必要的是:I)通过破坏HBV颗粒不仅使HBc抗原和HBV p22cr抗原从HBV颗粒中释放出来,而且尽量多地转化成它们的单体形式,II)使来源于宿主的抗HBV的HBc抗原和HBe抗原的抗体失活或除去,III)从与除抗HBV抗原的抗体以外的血液成分的相互作用中,释放HBc抗原、HBe抗原和HBV p22cr抗原。虽然可通过离心和亲和层析除去抗HBV抗原的抗体,但是处理步骤增加,因此看来有需要使之失活。
检测***内含量有限的样本中所含的HBc抗原、HBe抗原和HBVp22cr抗原以其单体状态最大量地从HBV颗粒、抗HBV抗原的抗体和其它血液成分中释放出来,会导致可与探针反应的抗原分子数量的增加。通过短时间和简便的样本处理,最大限度地释放单体状态的抗原,提高它们与探针的反应性十分重要。
已知的使样本中存在的抗体活性失活的条件有碱处理、酸处理等。当血清等用酸进行处理时,某些来自血清的蛋白质会发生不可逆变性,某些情况下产生沉淀或浑浊。因此,当用移液管吸取用酸处理后的样本时,常常发生堵塞等问题。另外,测定中,缠绕在变性蛋白质上的沉淀物可吸附在载体上,或吸附在与抗体等探针连接以捕捉目标抗原的固相上,导致假阳性。另外,目标抗原与那些沉淀物缠绕在一起,使可结合到探针上的抗原数量减少,因此存在灵敏度降低的问题。
本发明通过向酸化剂中加入另一种物质,使防止由酸处理引起的沉淀和浑浊、防止假阳性、提高灵敏度成为可能。
在此,盐酸、硫酸、乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸等作为酸化剂是合适的。具体地讲,处理时酸化剂的浓度优选0.05N~1N,更优选浓度为0.25N~1N。在这种情况下,加入酸化剂的样本在pH2.5以下进行处理,大多数样本则在pH2.0以下。
处理剂中,向酸化剂添加的物质之一包括表面活性剂。已知各种各样具有破坏蛋白质高级结构的作用,以及发挥破坏病毒颗粒膜、使抗体变性和使不溶性蛋白质增溶等效果的表面活性剂。然而,这种表面活性剂存在时,目标抗原的构象表位也遭到破坏,导致与捕捉抗原的抗体等探针的结合减弱,这就产生了灵敏度降低的严重问题。
另一方面,表面活性剂的变性作用常常是可逆的,通过稀释或透析降低表面活性剂的浓度,暂时的变性结构有时会回复到原来的结构。因此,样本中产生的抗体可与测定用的探针竞争,结果,灵敏度可能降低是显而易见的。因此,添加表面活性剂有上述这种两面性。表面活性剂可根据其结构和性质分为不同的类型。例如,有离子表面活性剂和非离子表面活性剂,离子表面活性剂进一步包括阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂等。
本发明的发明人发现与酸处理有关的问题例如产生沉淀,以及与表面活性剂处理有关的问题例如样本中抗体的再活化,可通过联合使用酸化剂与表面活性剂加以解决,对于HBV抗原检测,两者的联用显示出灵敏度显著提高的效果。
本发明的发明人发现尤其在表面活性剂中使用同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂或同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的阳离子表面活性剂,能取得显著的效果。
另外,酸化剂与同一分子中有12个以上碳原子的直链烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂,或同一分子中有12个以上碳原子的直链烷基和叔胺或季铵盐的阳离子表面活性剂联用,能取得相当显著的效果。
而且,已经发现更优选的是向含有酸化剂和表面活性剂的处理剂中添加非离子表面活性剂,例如Triton X-100等聚氧乙烯异辛基苯基醚或吐温20(Tween 20)等聚氧乙烯脱水山梨醇烷基酯,添加蛋白质变性剂例如尿素或硫脲,以及添加还原剂例如半胱氨酸、半胱胺、二甲基氨基乙硫醇、二乙基氨基乙硫醇、二异丙基氨基乙硫醇或二硫苏糖醇。
本发明提供含有HBV的样本的处理方法,其特征在于用处理剂对含有HBV的样本进行处理,以释放HBV抗原,并使与HBV抗原结合的抗体失活,所述处理剂含有:(1)酸化剂,(2)同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂或同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂和另外的蛋白质变性剂,(3)还原剂。
作为同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂,以下分子是合适的:N-十二烷基-N,N-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐、N-十四烷基-N,N-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐、N-十六烷基-N,N-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐、N-十八烷基-N,N-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐等。
另外,作为同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的阳离子表面活性剂,以下分子是合适的:氯化癸基三甲基铵、氯化十二烷基三甲基铵、氯化十四烷基三甲基铵、氯化十六烷基三甲基铵、溴化癸基三甲基铵、溴化十二烷基三甲基铵、溴化十四烷基三甲基铵、溴化十六烷基三甲基铵、氯化月桂基吡啶、氯化十四烷基吡啶、氯化十六烷基吡啶。
这种同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂或阳离子表面活性剂的处理浓度优选为0.1% ~15%,更优选为0.5%~10%。
作为添加到酸化剂和同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂或阳离子表面活性剂中的非离子表面活性剂,Triton X-100等聚氧乙烯异辛基苯基醚、NP40等聚氧乙烯壬基苯基醚或吐温80等聚氧乙烯脱水山梨醇烷基酯是合适的,处理时的浓度优选为1%~7.5%,更优选为1%~5%。
作为添加到酸化剂和同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂或阳离子表面活性剂的蛋白质变性剂,尿素、硫脲等是合适的,处理时的浓度优选为0.5M以上,更优选为介于1M和8M之间。然而,在溶解性不成问题的情况下,例如预先在处理样本的试管加入粉状尿素时,使用多至10M的浓度是可行的。
作为添加到酸化剂和同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂或阳离子表面活性剂的还原剂,半胱氨酸、半胱胺、二甲基氨基乙硫醇、二乙基氨基乙硫醇、二异丙基氨基乙硫醇、二硫苏糖醇等是合适的,处理时的浓度优选为介于0.25mM和1000mM之间,更优选为介于1.5mM和200mM之间。
如上所述,另外添加到酸化剂中的物质包括尿素等蛋白质变性剂。已知这类蛋白质变性剂具有通过削弱氢键,部分破坏蛋白质构象的作用,它能破坏病毒颗粒膜,并使样本中抗目标抗原的抗体发生变性。它还有使不溶性沉淀物增溶的效果,例如,使在大肠杆菌(E.coli)中表达的重组蛋白从其不溶性部分的包含体中溶解。然而在尿素等蛋白质变性剂存在时,目标抗原的构象表位也会遭到破坏,导致与捕捉抗原的探针例如抗体的结合减弱,这就出现灵敏度降低的问题。
另一方面,尿素等蛋白质变性剂的变性作用常常是可逆的,通过稀释或透析使蛋白质变性剂的浓度降低,暂时的变性结构有时会回复到原来的结构。这导致一种状态,在这种状态下,来源于样本的抗体可与测定用的探针竞争,结果,灵敏度可能降低是显而易见的。因此添加尿素等蛋白质变性剂会有上述这种两面性。
本发明的发明人通过发现与酸处理有关的问题例如沉淀的产生和与蛋白质变性剂处理有关的问题例如样本中抗体的再活化,可通过酸处理与蛋白质变性剂处理联用加以解决,从而完成了本发明的另一个发明。
本发明的发明人发现通过加入蛋白质变性剂之一的尿素,处理时的浓度为1M以上,经酸处理形成的沉淀可显著减少。对于这种蛋白质变性剂,尿素、硫脲等是合适的。另外,处理时蛋白质变性剂的浓度优选为1M以上,更优选介于1.5M和8M之间。而且,本发明的发明人发现,向含有酸化剂和蛋白质变性剂的处理剂中加入非离子表面活性剂,例如Triton X 100等聚氧乙烯异辛基苯基醚和吐温20等聚氧乙烯脱水山梨醇烷基酯,可发挥提高灵敏度的效果。另外,向含有酸化剂和蛋白质变性剂的处理剂中加入还原剂是可行的。
综上所述,本发明提供含有乙型肝炎病毒(HBV)的样本的处理方法,其特征在于用处理剂对含有HBV的样本进行处理,以释放HBV抗原,并使与HBV抗原结合的抗体失活,所述处理剂含有:(1)酸化剂和(2)同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂或阳离子表面活性剂,或者蛋白质变性剂。
另外根据本发明,含有HBV的样本的处理方法中处理温度可较高,但优选20℃~50℃,更优选25℃~42℃。
本发明与酸化剂联用的处理剂中,最优选的表面活性剂是同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂或同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的阳离子表面活性剂,另一种处理剂是蛋白质变性剂。向这两种处理剂中加入非离子表面活性剂,除此之外,还添加还原剂,发现这样做会提高处理效果(参见实施例4)。这表明处理剂联用导致处理效果提高。作为与酸化剂联用的处理剂,有例如同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂、同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的阳离子表面活性剂、蛋白质变性剂、非离子表面活性剂、还原剂、或者阴离子表面活性剂等。通过这些处理剂中两种以上的组合,同时用酸化剂处理,使高效处理含有HBV的样本成为可能。
本发明HBV抗原的免疫学检测法包括下述步骤:将含有HBV的样本与含有酸化剂和表面活性剂和/或蛋白质变性剂的处理剂接触(步骤1),使用与HBV抗原结合的探针,检测HBV抗原(步骤2),以释放出HBV抗原和使与HBV抗原结合的抗体失活。
在步骤2中,作为用于检测的探针,可使用例如与HBV抗原特异性结合的抗体、对HBV抗原表现出高亲和性的任何分子。需要一种以捕捉经过步骤1处理的样本中HBV核心关连抗原的探针,例如HB44、HB114或HB61等单克隆抗体。
本文所用的探针是例如通过对小鼠、大鼠、豚鼠、兔、鸡、山羊、绵羊或牛等实验动物进行免疫而获得的多克隆抗体,从通过使自免疫个体分离的脾脏细胞等和骨髓瘤细胞融合而获得的杂交瘤所产生的单克隆抗体,或者用EB病毒使免疫个体的脾脏细胞或血液中的白细胞无限增殖而获得的细胞系所产生的单克隆抗体,感染HBV的人、黑猩猩等所产生的多克隆抗体,或者对HBV抗原表现出特异性和亲和性都高的分子,该HBV抗原是通过重组技术从小鼠、人等的免疫球蛋白的cDNA或染色体DNA获得的可变区基因片段,或者是将免疫球蛋白的部分cDNA或染色体DNA与人工制备的序列组合而构建的可变区基因片段产生的。
根据本发明HBV抗原的免疫学检测法,HBV抗原与上述单克隆抗体经过抗原-抗体反应形成免疫复合物。这一免疫复合物是用两种以上抗体由夹心法免疫测定***(sandwich immunoassay system)形成的。可用这一免疫复合物中存在的标记酶作为信号,通过显色法或化学发光法,检测HBV抗原的存在。另外,可使抗体与荧光物质等直接结合,使荧光物质掺入免疫复合物作为荧光信号,检测HBV抗原。
而且,本发明提供应用上述免疫检测法诊断HBV感染的试剂盒。该诊断试剂盒在处理含有HBV的样本的处理剂中包括酸化剂和蛋白质变性剂和/或表面活性剂。优选试剂盒中含有探针,例如与HBV抗原结合的抗体。
实施例
下面将通过下述实施例对本发明进行更详细地说明。然而,应该理解这些实施例不以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
酸化剂的浓度:向100μl HBV抗原阴性样本或各HBV抗原阳性样本(#990277、#990544)中分别加入100μl不同浓度的盐酸水溶液,混合物在室温下孵育10分钟。然后将100μl混合物作为测试样本,按下述测定方法进行测定。
向96孔微量培养板(FluoroNunc Module,Maxisoap surface)各孔中,加入100μl抗HBV核心关连抗原的单克隆抗体混合物(HB44、HB114和HB61按2∶1∶1的比率混合),浓度4μg/ml,将该板在4℃下孵育过夜。
用含有0.15M NaCl的10mM磷酸缓冲液,pH7.3,洗涤2次后,向各孔中加入350μl含有0.5%酪蛋白钠的10mM磷酸缓冲液,pH7.1,将该板孵育2小时。除去封闭溶液后,向各孔中加入100μl含有中和剂的反应缓冲液及用样本处理方法得到的各测试样本,将板在室温下振荡孵育2小时,用350μl含有0.05%吐温20的10mM磷酸缓冲液(洗涤溶液),pH7.3,洗涤6次,然后向各孔中加入100μl碱性磷酸酶(ALP)标记的单克隆抗体(HB91和HB110等量混合),将板在室温下孵育30分钟。用洗涤溶液洗涤6次后,加入100μl底物溶液(TROPIX,CDP-star with Emerald II),将板孵育20分钟。
用发光计(DIA-IATRON,Luminous CT-9000D)测量发光强度,结果见图1。应当注意的是,图1所示的盐酸浓度是用样本与处理剂混合后处理时的浓度表示的。
室温下,在不合盐酸的溶液中孵育10分钟的HBV抗原阳性样本(#990277、#990544)中,几乎检测不出HBV核心关连抗原的免疫反应性。然而,当处理时的盐酸浓度为0.05N以上时,开始测到HBV核心关连抗原的免疫反应性,并在0.25N~1.0N时达到峰值。另外,当用硫酸代替盐酸进行研究时,得到几乎相同的结果。
实施例2
酸化剂存在时各种表面活性剂的浓度:向100μl HBV抗原阴性样本或各HBV抗原阳性样本(#990277、#990544、#990768)中,加入100μl溶解在1.0N盐酸水溶液的各种表面活性剂,使混合物在室温下孵育10分钟。将100μl处理样本用于测试,用实施例1所述方法进行测定。结果见表1~表5。各表中,测定值的加下划线部分表示超出各判断标准的情况。
根据表1~表5,3个样本中至少1个样本显示反应性大于各自样本标准的表面活性剂,被认定为HBV核心关连抗原的检测效果灵敏。结果,当不同表面活性剂与盐酸或硫酸等酸化剂一起添加时,发现表面活性剂在HBV抗原阳性样本中,可大大提高HBV核心关连抗原的免疫反应性。观察到有添加效果的表面活性剂是同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂和同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的阳离子表面活性剂。
另外,还发现Triton X100和吐温20等非离子表面活性剂也有相加效果。虽然阴离子表面活性剂、十二烷基硫酸钠(SDS)和十二烷基硫酸锂(LDS)的浓度等于或大于0.5%时,在与样本的反应中会产生浑浊,但是其效果通过添加含有中和剂的反应缓冲液使之溶解而得到证实。具有CHAPS等类固醇骨架的表面活性剂的反应性未显示出提高。另外,对N-月桂酰基肌氨酸钠、脱氧胆酸等进行测试,但是在酸化剂存在时,溶解不充分。
酸化剂中加入同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂或同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的阳离子表面活性剂时,发现灵敏度提高。当从这种含有酸化剂和表面活性剂的处理剂中除去酸化剂,样本只用有效的表面活性剂处理时,灵敏度显著下降。因此认为灵敏度提高是以酸化剂为基础的,而且酸化剂中加入表面活性剂时,灵敏度显著提高。
[表1]
TAC系列
无添加 | 浓度(%)0 | HBV阴性样本 | HBV阳性样本 | ||
正常血清 | #990277 | #990544 | #990768 | ||
139 | 9083 | 2838 | 37054 | ||
表面活性剂效果的标准 | 13625 | 4257 | 55581 | ||
添加到0.5N HCl中的表面活性剂 | |||||
氯化辛基三甲基铵[CH3(CH2)7N(CH3)3]Cl氯化癸基三甲基铵[CH3(CH2)9N(CH3)3]Cl氯化十二烷基三甲基铵[CH3(CH2)11N(CH3)3]Cl氯化十四烷基三甲基铵[CH3(CH2)13N(CH3)3]Cl氯化十六烷基三甲基铵[CH3(CH2)15N(CH3)3]Cl氯化月桂基吡啶[C5H5NCH2(CH2)10CH3]Cl | 0.51250.51250.51250.51250.51250.5125 | 1101046381118839490209139217141200208177224182198220260230246217264 | 877668104566180479775914712543511301411494164781028714941 15517 166281207515908 14148 1522812828947311807100437401 | 25942161145767322242136316713864413 535537747048 5985 6313 499742338062 6269420724942510233519321970 | 2544918317113343003199891451911655700130270353312824018743376613321435434265904264732201308312181224303209821358514991 |
[表2]
TAB系列
无添加 | 浓度(%)0 | HBV阴性样本 | HBV阳性样本 | ||
正常血清 | #990277 | #990544 | #990768 | ||
136 | 11014 | 2634 | 34595 | ||
表面活性剂效果的标准 | 15420 | 3688 | 48433 | ||
添加到0.5N HCl中的表面活性剂 | |||||
溴化己基三甲基铵[CH3(CH2)5N(CH3)3]Br溴化辛基三甲基铵[CH3(CH2)7N(CH3)3]Br溴化癸基三甲基铵[CH3(CH2)9N(CH3)3]Br溴化十二烷基三甲基铵[CH3(CH2)11N(CH3)3]Br溴化十四烷基三甲基铵[CH3(CH2)13N(CH3)3]Br溴化十六烷基三甲基铵[CH3(CH2)15N(CH3)3]Br | 0.51250.51250.51250.51250.51250.5125 | 253249214107136103198571461035880165116216190209278401294227254244602 | 1204410241784251651131688326652259610862997569884466143459962153091020416926 16655143751302318706 199371522111052 | 4302 4602 43013577352834243268793286833082558267736734581 5578 5402 6645 6869 682733008451 7813 41282538 | 2702428610222501378232491234721611137692608716957104118274303672949126777170914384137064292792411856923358552721017021 |
表[3]
APS系列
无添加 | 浓度(%)0 | HBV阴性样本正常血清 | HBV阳性样本 | ||
#990277 | #990544 | #990768 | |||
148 | 9294 | 2175 | 38028 | ||
表面活性剂效果的标准 | 13941 | 3263 | 57042 | ||
添加到0.5N HCl中的表面活性剂 | |||||
3-[3-(胆酰氨基丙基)二甲基-铵基]-1-丙磺酸盐N-十二烷基-N,N-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐CH3(CH2)11N(CH3)2[(CH2)3SO3]N-十四烷基-N,N-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐CH3(CH2)13N(CH3)2[(CH2)3SO3]N-十六烷基-N,N-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐CH3(CH2)15N(CH3)2[(CH2)3SO3]N-十八烷基-N,N-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐CH3(CH2)17N(CH3)2[(CH2)3SO3] | 0.51250.51250.51250.51250.5125 | 192185185122171170116143135123212121158113170161269206283229 | 1006894297823691117118 26990 28246 32885 17307 30527 36256 42918 26139 25348 41969 35782 21151 20731 24829 34152 | 2306149812058815251 7945 7316 9698 5976 9273 8276 16172 9224 7818 9925 11916 11844 9871 13125 11351 | 2885019808173361476843825 50648 55167 47512 48591 62242 66746 64794 73370 85287 75342 55028 67221 57204 73931 77719 |
[表4]
非离子表面活性剂系列
无添加 | 浓度(%)0 | HBV阴性样本正常血清 | HBV阳性样本 | ||
#990277 | #990544 | #990768 | |||
180 | 10750 | 2494 | 39102 | ||
表面活性剂效果的标准 | 16125 | 3741 | 58653 | ||
添加到0.5N HCl中的表面活性剂 | |||||
Triton X-100Triton X-114吐温20吐温60吐温80Bridj 35MEGA-10 | 0.51250.51250.51250.51250.51250.51250.5125 | 233174181160170188160155205205232202240194245209234115216236175197289259145253332 | 1413314708140341794311857123491236412854126191278118025 354511140117189 18620 25964131841363920826 43646118621042416694789796801412920245 | 281728713128350428562412287421662732263937038842 4234 4315 10542 7551308635327126 15778279720092912265927934328 10125 | 3547133252396513840627651279562966933038343252974158099954954947364879 137707 144107390295116798056 17357834825454454386243319294724522285021 |
[表5]
阴离子表面活性剂系列
无添加 | 浓度(%)0 | HBV阴性样本 | HBV阳性样本 | ||
正常血清 | #990277 | #990544 | #990768 | ||
167 | 7793 | 2679 | 26751 | ||
表面活性剂效果的标准 | 11690 | 4019 | 40142 | ||
添加到0.5N HCl中的表面活性剂 | |||||
十二烷基硫酸钠CH3(CH2)11OSO3Na十二烷基硫酸锂CH3(CH2)11OSO3Li | 0.51250.5125 | 160152204301196135236448 | 12516 18948 45240 31229 14400 20956 29248 37765 | 37725767 13482 16960 4239 6324 10044 23853 | 53253 84477 168004 168734 53651 46040 89739 199795 |
实施例3
酸化剂存在下的蛋白质变性剂:
向100μl HBV抗原阴性样本或HBV抗原阳性样本(#990277、#990544、#990768)中,加入100μl溶解在1.0N盐酸水溶液的蛋白质变性剂之一的尿素,使混合物在室温下孵育10分钟。将100μl处理样本用于测试,按实施例1所述方法对样本进行测定。求出各HBV抗原阳性样本的免疫反应性与HBV抗原阴性样本的免疫反应性的比率(HBV抗原阳性样本的发光强度/HBV抗原阴性样本的发光强度,用S/N比表示),结果见表6。
结果证实,样本在添加尿素时,与只加入含有酸化剂的处理剂的样本相比,S/N比高出约1.5~3倍。只用酸化剂处理时,因为血清蛋白质等变性,所以在某些情况下产生沉淀或浑浊,这常常引起移液操作困难,且沉淀物也是假阳性的主要原因。另外,目标抗原与这些沉淀物缠绕在一起,有可能导致灵敏度降低。在处理时添加超过1M尿素时,发现可大大减少这些沉淀物的形成,尤其发现在处理时添加1.5M~8M的尿素时会更有效。虽然尿素溶解高达约10M,但是随贮存等条件的变化,仍可能产生沉淀。因此,处理时溶液中尿素的浓度取决于处理溶液和样本的体积比。
[表6]
S/N比
无添加 | 浓度(M)0 | HBV阴性样本正常血清 | HBV阳性样本 | ||
#990277 | #990544 | #990768 | |||
1.0 | 59.3 | 20.8 | 205.9 | ||
尿素 | 0.511.522.533.5 | 1.01.01.01.01.01.01.0 | 59.286.488.781.176.575.974.0 | 25.839.647.746.252.458.966.8 | 233.9258.1279.5225.6227.5200.8195.2 |
实施例4
酸化剂、蛋白质变性剂、非离子表面活性剂和同一分子中有烷
基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂存在时对还原剂的研究:
向100μl HBV抗原阴性样本(正常血清)或3个HBV抗原阳性样本(#990277、#990544、#990768)的各个样本中,加入100μl与含有1.0N盐酸、1.5M尿素、5.0%Triton X100和1.5%N-十六烷基-N,N-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐(C16APS)的溶液混合的二硫苏糖醇、半胱胺盐酸盐或二乙基氨基乙硫醇盐酸盐溶液,其中二硫苏糖醇、半胱胺盐酸盐或二乙基氨基乙硫醇盐酸盐是还原剂,使混合物在室温下孵育10分钟。将100μl处理样本用于测试,按实施例1所述方法进行测定(表7)。
还原剂的浓度分别用样本处理时的浓度表示。即使将还原剂添加到HBV抗原阴性样本(正常血清)中,也几乎观察不到样本信号的变化,然而,在样本处理时还原剂的浓度达5mM以上时,发现HBV抗原阳性样本#990544信号增强,而二乙基氨基乙硫醇盐酸盐浓度为10mM时,则发现两个样本(#990544、#990768)信号的增强大于30%。
还原剂 [表7]
对照 | 浓度(mM)0 | HBV阴性样本 | HBV阳性样本 | |||||
正常血清 | #990277 | #990544 | #990768 | |||||
231 | 19467 | 相对于对照(%) | 9855 | 相对于对照(%) | 69138 | 相对于对照(%) | ||
100 | 100 | 100.0 | ||||||
还原剂,添加到0.5N HCl/5%TritonX100/1.5M尿素/1.5%C16APS中 | ||||||||
二硫苏糖醇2-氨基乙硫醇盐酸盐2-二乙基氨基乙硫醇盐酸盐 | 0.010.050.10.20.5150.10.20.515100.10.20.51510 | 202215200189189196296252197329287240221332306346279323212 | 21074167551943921361185381823817429138121651618105203521583015632215711440923030183001474520377 | 108861001109594907185931058180111741189476105 | 7865731871359807879013611 2629575455269106439690110151519395731006911571889815063 15370 | 80747210089138 2677753108981121549710211790153 156 | 53087513704706553818558796451870368581174216866214763936163074164672057770173442788268167493213 | 7774687881931028461961108910797112106114118135 |
工业实用性
本发明提供一种简便和用户极易掌握的用于以高灵敏度检测或定量测定血液中HBV抗原样本的处理方法,以及应用该处理方法检测或定量测定HBV的方法,可以诊断血液是否感染了HBV,迅速准确地筛选出输血用血液。本发明还提供诊断试剂盒,极大地提高了HBV抗原检测的效率。
Claims (13)
1.一种含有乙型肝炎病毒的样本的处理方法,其特征在于用处理剂对含有乙型肝炎病毒的样本进行处理,以释放乙型肝炎病毒抗原,并使与乙型肝炎病毒抗原结合的抗体失活,所述处理剂包括:
(1)酸化剂,和
(2)表面活性剂和/或蛋白质变性剂。
2.权利要求1的含有乙型肝炎病毒的样本的处理方法,其中还向所述表面活性剂和/或蛋白质变性剂中加入还原剂。
3.权利要求1或2的含有乙型肝炎病毒的样本的处理方法,其中所述表面活性剂是至少一种选自以下的表面活性剂:同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂、同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的阳离子表面活性剂和非离子表面活性剂。
4.权利要求3的含有乙型肝炎病毒的样本的处理方法,其中所述表面活性剂的烷基碳原子数是12个以上。
5.权利要求1的含有乙型肝炎病毒的样本的处理方法,其中所述酸化剂是盐酸、硫酸、乙酸、三氯乙酸或三氟乙酸。
6.权利要求4的含有乙型肝炎病毒的样本的处理方法,其中所述同一分子中有12个以上碳原子的烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂是:N-十二烷基-N,N-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐、N-十四烷基-N,N-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐、N-十六烷基-N,N-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐或N-十八烷基-N,N-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐。
7.权利要求4的含有乙型肝炎病毒的样本的处理方法,其中所述分子中有12个以上碳原子的烷基和叔胺或季铵盐的阳离子表面活性剂是:氯化癸基三甲基铵、氯化十二烷基三甲基铵、氯化十四烷基三甲基铵、氯化十六烷基三甲基铵、溴化癸基三甲基铵、溴化十二烷基三甲基铵、溴化十四烷基三甲基铵、溴化十六烷基三甲基铵、氯化月桂基吡啶、氯化十四烷基吡啶或氯化十六烷基吡啶。
8.权利要求3的含有乙型肝炎病毒的样本的处理方法,其中所述非离子表面活性剂是聚氧乙烯异辛基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚或聚氧乙烯脱水山梨醇烷基酯、Bridj35、聚氧乙烯十二烷基醚、MEGA-10或癸酰基-N-甲基萄糖酰胺。
9.权利要求1的含有乙型肝炎病毒的样本的处理方法,其中所述蛋白质变性剂是尿素或硫脲。
10.权利要求2的含有乙型肝炎病毒的样本的处理方法,其中所述还原剂是半胱氨酸、半胱胺、二甲基氨基乙硫醇、二乙基氨基乙硫醇、二异丙基氨基乙硫醇或二硫苏糖醇。
11.一种乙型肝炎病毒抗原的免疫学检测方法,所述方法包括:
(1)权利要求1或2的含有乙型肝炎病毒的样本的处理方法的实施步骤;和
(2)使用与乙型肝炎病毒抗原结合的探针,检测乙型肝炎病毒抗原的步骤。
12.一种诊断试剂或诊断试剂盒,所述试剂或试剂盒在用于处理样本以检测乙型肝炎病毒抗原的处理剂中包括如下所述的酸化剂(1)和至少一种选自(2)的物质:
(1)酸化剂;和
(2)同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的两性表面活性剂、同一分子中有烷基和叔胺或季铵盐的阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂和蛋白质变性剂。
13.权利要求12的诊断试剂或诊断试剂盒,其中还向所述物质(2)中加入还原剂。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP149682/2004 | 2004-05-19 | ||
JP2004149682 | 2004-05-19 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1997895A true CN1997895A (zh) | 2007-07-11 |
Family
ID=35394279
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNA2005800237088A Pending CN1997895A (zh) | 2004-05-19 | 2005-05-19 | 乙型肝炎病毒的检测方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20090017443A1 (zh) |
EP (1) | EP1752768B1 (zh) |
JP (1) | JPWO2005111620A1 (zh) |
KR (1) | KR20070012838A (zh) |
CN (1) | CN1997895A (zh) |
AT (1) | ATE493659T1 (zh) |
DE (1) | DE602005025626D1 (zh) |
WO (1) | WO2005111620A1 (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2019109864A1 (zh) * | 2017-12-04 | 2019-06-13 | 厦门万泰凯瑞生物技术有限公司 | 一种定量检测HBsAg的试剂盒及方法 |
CN112513638A (zh) * | 2018-08-06 | 2021-03-16 | 积水医疗株式会社 | 免疫学检测肺炎支原体的方法 |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105074470B (zh) * | 2013-01-28 | 2016-10-19 | 希森美康株式会社 | 用于检测HBs抗原的样品的预处理方法及其利用 |
JP6641841B2 (ja) * | 2015-09-29 | 2020-02-05 | 富士レビオ株式会社 | ヒトパルボウイルスb19抗原の測定方法 |
JP7060510B2 (ja) * | 2016-09-06 | 2022-04-26 | 富士レビオ株式会社 | 腫瘍マーカーの測定方法及び測定試薬 |
JP7138627B2 (ja) * | 2017-05-17 | 2022-09-16 | 富士レビオ株式会社 | インスリンの測定方法及び測定試薬 |
JP7317005B2 (ja) | 2017-09-18 | 2023-07-28 | バイエル・ヘルスケア・エルエルシー | N-メチルグルカミドとその誘導体を使用したウイルスの不活化方法 |
JP2019152666A (ja) * | 2018-03-02 | 2019-09-12 | 富士レビオ株式会社 | ジカウイルスを検出する方法及びキット |
IL277890B2 (en) * | 2018-04-11 | 2024-03-01 | Regeneron Pharma | Methods for quantification of IL-33 |
US20220349889A1 (en) | 2019-09-27 | 2022-11-03 | Fujirebio Inc. | Immunoassay for hepatitis b virus core-related antigen and kit therefor |
CN110954692A (zh) * | 2019-12-20 | 2020-04-03 | 蓝怡科技集团股份有限公司 | 一种还原剂缓冲液及其制备方法和应用 |
JPWO2023013725A1 (zh) * | 2021-08-06 | 2023-02-09 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE68907996T2 (de) * | 1988-05-11 | 1994-01-05 | Abbott Lab | Verfahren zur Erhöhung der Spezifizität in kompetitiven Immuntests. |
JPH0850133A (ja) | 1994-08-05 | 1996-02-20 | Toray Ind Inc | 免疫化学的測定方法 |
KR960023066A (ko) * | 1994-12-10 | 1996-07-18 | 성재갑 | 전에스 (s) 2 펩티드 함유 비 (b) 형 간염 표면항원의 정제 방법 |
JP3176570B2 (ja) * | 1997-08-04 | 2001-06-18 | 株式会社先端生命科学研究所 | Hcvの検出又は測定方法 |
EP0967484B1 (en) * | 1997-08-04 | 2007-05-02 | Advanced Life Science Institute, Inc. | Methods for detecting or assaying virus |
KR100847586B1 (ko) * | 1998-07-30 | 2008-07-22 | 가부시끼가이샤 센단세메이가가꾸겐큐죠 | C형 간염 바이러스의 측정방법 |
JP2000105233A (ja) * | 1998-09-29 | 2000-04-11 | Sekisui Chem Co Ltd | 小粒子化HBs抗原の調製法並びにこれを用いた免疫測定試薬の製造方法、免疫測定試薬及び免疫測定方法 |
ATE470148T1 (de) * | 2000-08-01 | 2010-06-15 | Sysmex Corp | Verfahren zum vorbehandeln einer probe |
US7323331B2 (en) * | 2000-08-11 | 2008-01-29 | Advanced Life Science Institute, Inc. | Method for detecting or assaying HBV |
CN100547001C (zh) * | 2002-09-06 | 2009-10-07 | 株式会社先端生命科学研究所 | 可形成颗粒的乙型肝炎病毒前核心蛋白 |
US8546075B2 (en) * | 2003-10-28 | 2013-10-01 | Advanced Life Science Institute, Inc. | Method of detecting hepatitis C virus |
-
2005
- 2005-05-19 DE DE602005025626T patent/DE602005025626D1/de active Active
- 2005-05-19 US US11/596,663 patent/US20090017443A1/en not_active Abandoned
- 2005-05-19 EP EP05741615A patent/EP1752768B1/en active Active
- 2005-05-19 KR KR1020067024352A patent/KR20070012838A/ko not_active Application Discontinuation
- 2005-05-19 WO PCT/JP2005/009158 patent/WO2005111620A1/ja active Application Filing
- 2005-05-19 AT AT05741615T patent/ATE493659T1/de not_active IP Right Cessation
- 2005-05-19 CN CNA2005800237088A patent/CN1997895A/zh active Pending
- 2005-05-19 JP JP2006513634A patent/JPWO2005111620A1/ja active Pending
-
2010
- 2010-06-30 US US12/828,209 patent/US20100291546A1/en not_active Abandoned
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2019109864A1 (zh) * | 2017-12-04 | 2019-06-13 | 厦门万泰凯瑞生物技术有限公司 | 一种定量检测HBsAg的试剂盒及方法 |
US11543413B2 (en) | 2017-12-04 | 2023-01-03 | Xiamen Innodx Biotech Co., Ltd | Kit and method for quantitative detection of HBsAg |
CN112513638A (zh) * | 2018-08-06 | 2021-03-16 | 积水医疗株式会社 | 免疫学检测肺炎支原体的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ATE493659T1 (de) | 2011-01-15 |
JPWO2005111620A1 (ja) | 2008-03-27 |
DE602005025626D1 (de) | 2011-02-10 |
EP1752768A1 (en) | 2007-02-14 |
WO2005111620A1 (ja) | 2005-11-24 |
KR20070012838A (ko) | 2007-01-29 |
EP1752768A4 (en) | 2007-11-28 |
EP1752768B1 (en) | 2010-12-29 |
US20100291546A1 (en) | 2010-11-18 |
US20090017443A1 (en) | 2009-01-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1997895A (zh) | 乙型肝炎病毒的检测方法 | |
CN107817232A (zh) | 用于进行过敏症和自身免疫性疾病的诊断测定的自动化免疫分析*** | |
JP6348553B2 (ja) | HBs抗原を検出するための前処理用試薬キットおよびHBs抗原検出用試薬キット | |
WO2009055442A1 (en) | Methods of performing ultra-sensitive immunoassays | |
CN101975859A (zh) | 一种乙型肝炎病毒表面抗原的磁微粒分离化学发光免疫分析检测方法 | |
CN1871518B (zh) | 丙型肝炎病毒的检测方法 | |
JP2018507422A (ja) | 免疫分析用の免疫抑制剤薬物の抽出試薬 | |
JP3917753B2 (ja) | 免疫グロブリンの結合活性を測定する方法 | |
JP2013533487A (ja) | 医療現場における迅速検査結果を試験所ベースの方法と関連づける方法 | |
CN110672844A (zh) | 一种新城疫病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒及其应用 | |
CN106501503A (zh) | 透明质酸(ha)测试试剂盒及其制备方法 | |
Sickinger et al. | Performance characteristics of the high sensitivity Alinity i & ARCHITECT HBsAg Next Qualitative/Confirmatory assays | |
Ferreira-Gonzalez et al. | CLINICAL UTILITY OF A QUANTITATIVE POLYMERASE CHAIN REACTION FOR DIAGNOSIS OF CYTOMEGALOVIRUS DISEASE IN SOLID ORGAN TRANSPLANT PATIENTS1 | |
Bouzgarrou et al. | Evaluation of a total core antigen assay for the diagnosis of hepatitis C virus infection in hemodialysis patients | |
JP4890399B2 (ja) | Hbv抗原検出用の精度管理用試薬及びその製造方法 | |
JP4298850B2 (ja) | C型肝炎ウィルス(hcv)検出方法 | |
CN106632618A (zh) | 一种猪戊型肝炎病毒orf2重组蛋白的制备方法及其orf2蛋白和检测试剂盒 | |
CN105441425B (zh) | 一种提取rna的提取液和方法 | |
US20230243816A1 (en) | Fluorescence counting system for quantifying viruses or antibodies on an immobilized metal substrate by using an antigen-antibody reaction | |
Miyachi et al. | Automated specific capture of hepatitis C virus RNA with probes and paramagnetic particle separation | |
EP1590671A1 (en) | Improved method of detection of hcv antibodies in combination assay or sole antibody assay | |
JP4292670B2 (ja) | 抗HBc抗体の免疫測定法 | |
Gupta et al. | Correlation between two chemiluminescence based assays for quantification of hepatitis B surface antigen in patients with chronic hepatitis B infection | |
Bamaga et al. | Nucleic acid amplification technology screening for hepatitis C virus and human immunodeficiency virus for blood donations | |
Zhao et al. | Laboratory diagnosis of HEV infection |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20070711 |