CN106501503A - 透明质酸(ha)测试试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种透明质酸测试试剂盒,包括:磁分离试剂,标记HABP蛋白(透明质酸结合蛋白)的纳米磁性微球,浓度为167μg/ml;试剂R1,含有碱性磷酸酶标记的aggrecan蛋白,所述碱性磷酸酶标记的aggrecan蛋白浓度为1μg/ml;试剂R2,含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液;含有HA抗原的牛血清白蛋白组分五(BSA V)溶液的标准品、质控品和校准品;清洗浓缩液,含有Tween‑20和Proclin‑300的缓冲液;稀释液,含有牛血清白蛋白组分五(BSA V)的溶液;发光底物,金刚烷的衍生物IUMIPHOS530。本发明提供的透明质酸(HA)测试试剂盒及其制备方法,特异性强,灵敏度高,获得检测结果的时间短,操作方式简便,检测结果准确可靠。
Description
技术领域
本发明涉及免疫分析医学领域,尤其是涉及一种透明质酸(HA)测试试剂盒及其制备方法。
背景技术
透明质酸(hyaluronic acid,HA)是一种大分子葡萄氨基多糖,分子量为4000万~8000万,主要由***合成。HA主要存在于***、皮肤、关节液、软骨及玻璃体液等处。构成该部位的组织基质。血清HA水平主要反映肝脏内皮细胞功能及受损程度,反映活动性纤维化,预测肝硬化等疾病的良好指标。如肝硬化,病程长,肝组织纤维化变性程度严重,血清HA水平明显增高,甚至达1000μg/L以上,主要因为肝硬化时门-腔静脉分流,携HA的体循环血进入肝脏分解代谢减少;肝组织受损,肝内皮细胞数量减少,代谢功能降低。肝硬化时HA增高水平与肝组织病理改变程度有密切关系;HA水平达250μg/L,可判定为肝硬化。慢性活动性肝炎和慢性迁延性肝炎,血清HA水平亦有较明显改变,前者高于后者,其水平亦与肝细胞损害和肝纤维化活动程度有关;HA水平达165μg/L,可作为慢性活动性肝炎和慢性迁延性肝炎的分界。急性肝炎,由于肝细胞受损,坏死物质间接刺激肝脏***合成HA增多,血清HA水平可有轻度升高。对肝病患者而言,HA总体水平依据病损和病理改变程度表现为:肝硬化>慢性活动性肝炎>慢性迁延性肝炎>急性肝炎。可见HA做为反映肝细胞纤维化损害的指标,优于ALT。因为ALT在肝细胞停止破坏,肝内纤维化,肝硬化时反而不见升高。对于肝癌,HA亦可有明显增高。对于肺癌,由于癌浸润组织及周围***释放HA及透明质酸酶抑制物增加,特别是肺间皮细胞癌,血清HA水平可明显升高,同时肺泡灌洗液HA(即BAL-HA)水平增高远远超过血清HA(S-HA)水平,如果BAL-HA/S-HA比值明显增高,则对肺部恶性肿瘤的诊断有一定参考价值。慢性肾炎及慢性肾功能不全,血清HA水平明显高于正常对照组,并与肌酐、尿素氮呈正相关。肾病时血清HA可反映肾功能的损害程度。这与血中有毒代谢物聚集刺激组织***合成HA增多有关。而肾透析前后HA水平没有明显变化,由于HA是一种大分子物质,而透析用透膜只能滤过分子量小于35000的物质,故透析法不能把HA清除;HA作为肾脏功能损害的一项指标,反映肾损害的程度有一定参考价值。
发明内容
本发明提供了一种透明质酸(HA)测试试剂盒及其制备方法,特异性强,灵敏度高,获得检测结果的时间短,操作方式简便,检测结果准确可靠。
为了解决上述问题,本发明实施例公开了一种透明质酸测试试剂盒,包括:
磁分离试剂,标记HABP蛋白的纳米磁性微球,浓度为167μg/ml;
试剂R1,含有碱性磷酸酶标记的aggrecan蛋白,所述碱性磷酸酶标记的aggrecan蛋白浓度为1μg/ml;
试剂R2,含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液;
含有HA抗原的牛血清白蛋白组分五(BSA V)溶液的标准品、质控品和校准品;
清洗浓缩液,含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液;
稀释液,含有牛血清白蛋白组分五(BSA V)的溶液;
发光底物,金刚烷的衍生物IUMIPHOS530,所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml。
优选地,各试剂体积比为:磁分离试剂4-6,试剂R1 4-6,试剂R2 4-6,标准品4-6,质控品1-3,校准品1-3,清洗浓缩液20-30,稀释液10-20,发光底物25-40。
一种透明质酸测试试剂盒的制备方法,包括如下步骤:
(1)磁分离试剂的制备
配制磁珠缓冲液:分别称取Tris、NaCl于容器中,配制Tween-20溶液,倒入所述容器中;量取Proclin-300,溶解于水中后倒入所述容器中,在所述容器中加入水,并充分搅拌,使加入的试剂完全溶解;调节PH值在7.95~8.05范围内;称取BSA V(牛血清白蛋白组分五)倒入所述容器中;定容,配制溶液中Tris浓度为4.58g/L,NaCl浓度为6.81g/L,Tween-20浓度为0.96g/L,浓度0.02%的Proclin-300,BSA V浓度为3g/L,PH值在7.95~8.05范围内,配制好的溶液用0.2μm滤器过滤,过滤后在于2~8℃下保存;
配制磁分离试剂:将DSS(辛二酸二琥珀酰亚胺)溶于DMSO中,配制成浓度为20mg/mL的溶液;取HABP蛋白溶于PH 9.5的0.1mol/L PB缓冲液中,浓度为2mg/mL;将DSS溶液加入到HABP蛋白溶液中,室温放置90分钟;离心处理;另取浓度为100mg/ml的磁珠,按与HABP蛋白溶液的体积比为1:2量取,加入反应杯中,经磁铁吸附2分钟后吸取上清液;用PH 9.5、0.1mol/L的PB清洗磁珠;将离心处理后的浓缩HABP蛋白溶液加入到清洗后的磁珠中混匀,室温放置4小时,保持混匀状态;磁珠-HABP蛋白混合液中加入1mol/L的Tris溶液,37℃下放置15分钟,所述Tris的加样量为1mgHABP蛋白加0.15mlTris;用PH 7.2、0.1mol/L的PB清洗已经标记好HABP蛋白的磁珠;用磁珠保存液稀释并制得浓度为0.05%的HA磁分离试剂;再将制得的HA磁分离试剂与制得的磁珠缓冲液按照1:1的比例混匀得磁分离试剂;
(2)试剂R1的制备
试剂R1稀释液的配制:量取Tris、NaCl、Zncl2、Proclin-300、MgCl2于容器中,加入水,充分搅拌,使加入的试剂完全溶解;调节PH在7.35~7.45范围内;加入BSA V;定容,配制溶液中Tris浓度为6.06g/L,NaCl浓度为13g/L,Zncl2的浓度为0.05g/L,Proclin-300的浓度0.02%,MgCl2的浓度为0.05g/L,BSA V浓度为3g/L,PH在7.35~7.45范围内,配制好的溶液用0.2μm滤器过滤,过滤后在于2~8℃下保存;
配制试剂R1,称取1mg碱性磷酸酶(ALP)溶于生理盐水中,离心浓缩处理;与离心浓缩后的ALP浓缩液按体积比5:1加入浓度为0.1M的NaIO4溶液,室温下避光搅拌20分钟;将搅拌后ALP溶液透析处理;透析处理后的ALP溶液中加入浓度为0.2M、PH9.5的碳酸盐缓冲液,使醛化ALP的PH升高到9.0~9.5,立即加入aggrecan蛋白,加入aggrecan蛋白的量按与ALP的重量比为1:10加入,在浓度为0.01M的碳酸盐缓冲液中,室温避光轻轻搅拌2小时;加入浓度为4mg/ml的NaBH4溶液混匀,置于4℃下2小时;透析处理;之后在搅拌下逐滴加入等体积的饱和硫酸铵,置于4℃下1小时;离心处理弃上清,沉淀物用半饱和硫酸铵清洗,将沉淀物溶于浓度为0.15M、PH7.4的PBS溶液中;透析处理,去除铵离子;离心处理去除沉淀,上清液为酶结合物,按与1M Mgcl2溶液100:1的体积比加入1M Mgcl2溶液,与制得的酶反应物稀释液以1:100的体积比混合均匀,即的试剂R1;
(3)试剂R2的制备
称取Tris、NaCl于容器中,量取Proclin-300,用水溶解后加入到所述容器中;在所述容器中加水,搅拌,使得加入到所述容器中的试剂完全溶解,调节PH在7.35~7.45的范围内;称取牛γ球蛋白(IgG),加入到所述容器中;定容,配制溶液中,Tris浓度为1.56g/L,NaCl浓度为4.23g/L,Proclin-300的浓度0.02%,牛γ球蛋白(IgG)的浓度为0.9g/L,PH在7.35~7.45的范围内,配制好的溶液用0.2μm滤器过滤,过滤后在于2~8℃下保存;
(4)标准品、质控品及校准品的配制
HA标准品配制浓度为0,25,180,200,600,1500ng/ml;质控品配制浓度点为47.5,600ng/ml;校准品配制浓度为70,600ng/ml;充分混匀后,2-8℃下保存;
(5)清洗浓缩液的配制
称取Tris和NaCl于容器中,称取Tween-20于水中溶解后将溶液加入到所述容器中;量取Proclin-300于水中溶解后将溶液加入到所述容器中;向所述容器中加入水,充分搅拌,使所加入的试剂完全溶解;调节PH在7.35~7.45范围内;定容,配制溶液中Tris浓度为12.54g/L,NaCl浓度为325.6g/L,Tween-20浓度为5g/L,Proclin-300的浓度0.02%,PH在7.35~7.45的范围内,配制好的溶液用0.2μm滤器过滤,过滤后在于2~8℃下保存;
(6)稀释液的配制
称取NaCl和BSA V于容器中;量取Proclin-300于水中溶解后将溶液加入到所述容器中;定容,配制溶液中NaCl浓度为9g/L和BSA V浓度为60g/L,Proclin-300的浓度0.05%,配制好的溶液用0.2μm滤器过滤,过滤后在于2~8℃下保存;
(7)发光底物的配制
称取Tris、NaCl、Na2SO3和Proclin-300于容器中,加入水,充分搅拌,使加入的试剂完全溶解;调节PH在7.95~8.05的范围内;定容,配制溶液中Tris浓度为2.35g/L,NaCl浓度为6.41g/L,Na2SO3浓度为0.002g/L,Proclin-300的浓度为0.02%,PH在7.95~8.05范围内,配制好的溶液用0.2μm滤器过滤,过滤后,配制溶液与IUMIPHOS530按4:1的体积比加入IUMIPHOS530,混匀后于2~8℃下保存。
优选地,所述步骤(1)中,DSS的投入量计算公式为:投入量=HABP蛋白质量/16000×10×368/CDSS。
优选地,所述步骤(1)中,所述离心处理为将加入DSS的HABP蛋白溶液于高速冷冻离心机中在3000g的离心力下浓缩30分钟,至浓缩体积为小于0.5ml。
优选地,所述步骤(1)中,所述磁珠直径为0.9~1.5μm,加入浓度为100mg/ml的磁珠。
一种透明质酸测试试剂盒的测试方法,包括如下步骤:
(1)加HA标准品、质控品、待测标本至对应试管底部;
(2)加试剂R1至每一试管中;
(3)加试剂R2至每一试管中;
(4)加磁分离试剂至每一试管中;
(5)各试管内试剂混匀后,置37℃水浴30分钟;
(6)将各试管放至磁分离器上,确保每支试管都与分离器表面接触,沉淀2分钟;缓慢倒出上清液,除去各试管内的液滴;
(7)清洗浓缩液用水稀释7倍后,加稀释后的清洗液至每一试管中,混匀;
(8)重复操作步骤(5)、(6)、(5)一遍;
(9)加底物溶液至试管中混匀3秒,迅速用准备好的发光检测仪进行检测。
优选地,所述步骤(1)之前使用校准品进行曲线校正,并用质控品进行质量控制。
本发明具有如下有益效果:
(1)本发明试剂盒将化学发光技术与免疫磁微粒相结合,提供了一种接近均相的反应体系,与现有技术相比,在出结果时间上较传统酶联免疫法少10-20分钟,同时使用HABP和aggrecan蛋白来检测HA抗原使得检测的准确性得到了很大的提高。
(2)本发明公开了一种新的专用试剂R2,通过添加牛IgG蛋白,和使用Tris体系使得反应过程更加稳定可靠,具有更高的检测灵敏度和特异性,并达到了较佳的性能参数。(3)试剂盒中的磁分离试剂,试剂R1,试剂R2,标准品,质控品,校准品,清洗浓缩液、稀释液以及发光底物的配比优化合理,在此反应体系下检测结果精准可靠,并且该配比体系为本发明试剂盒的使用有效期及检测性能提供了有力保障。
(4)本发明试剂盒因其近液相反应,同时采用了HABP和aggrecan两种蛋白来检测,使得试剂的精确度、灵敏度以及稳定性均优于现有技术中的同类产品。
具体实施方式
下文中将结合实施例来详细说明本发明。需要说明的是,在不冲突的情况下,本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
实施例1
本实施例提供了一种透明质酸(HA)测试试剂盒,所述试剂盒包括:
磁分离试剂,标记有HABP蛋白的纳米磁性微球,所述标记HABP蛋白的纳米磁性微球的浓度为167μg/ml;
试剂R1,含有碱性磷酸酶标记的aggrecan蛋白的偶联物,所述碱性磷酸酶标记的aggrecan蛋白的偶联物浓度为1μg/ml;
试剂R2,含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液;
标准品,含有HA抗原的牛血清白蛋白组分五(BSA V)溶液,浓度为0(S0)、25(S1)、180(S2)、200(S3)、600(S4)、1500(S5)ng/ml;
质控品,含有HA抗原的牛血清白蛋白组分五(BSA V)溶液,浓度为47.5ng/ml,600ng/ml;
校准品,含有HA抗原的牛血清白蛋白组分五(BSA V)溶液,浓度为70ng/ml,600ng/ml;
清洗浓缩液,含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液
稀释液,含有牛血清白蛋白组分五(BSA V)的溶液;
发光底物,金刚烷的衍生物IUMIPHOS530,所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml。
其中,本实施例试剂盒中各试剂按下述体积比配制:磁分离试剂4,试剂R1 4,试剂R2 4,校准品4,质控品1,校准品1,清洗浓缩液20,稀释液10,发光底物25。
本实施例透明质酸(HA)测试试剂盒的制备方法,包括如下步骤:
第一步:磁分离试剂的制备过程
一、磁珠缓冲液配制操作规程:配方见表1,以配制1L为例:
(1)称取Tris 4.58g和NaCl6.81g于1L容器中,称取0.96g Tween-20于20ml容器中加适量水使其完全溶解后,倒入上述容器中;
(2)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后,倒入上述1L容器中;然后在1L容器中加入800ml纯化水,充分搅拌,使试剂完全溶解;
(3)调节PH计测量其PH值;用4M HCl或4M NaOH调PH,测量其PH在7.95~8.05之间即符合要求;
(4)称取BSA V(牛血清白蛋白)3g倒入上述1L容器中;
(5)最后定容至1000ml,测PH值,范围在7.95~8.05之间即符合要求,用0.2um滤器过滤即得;过滤完后贴好标签于2~8℃冷库贮存;
表1磁珠缓冲液的配制
二、磁分离试剂的配制
(1)将1.0mg DSS(辛二酸二琥珀酰亚胺)溶于50ul DMSO中,即浓度为20mg/mL;取2mg HABP蛋白溶于PH 9.5的0.1mol/L PB缓冲液中至总体积为1ml;
(2)计算DSS的投入量,按照以下公式计算:(HABP蛋白质量/2000)×10×368/CDSS),其中CDSS指代DSS的物质的量浓度mol/L;
(3)用移液枪吸取相应体积的DSS加入到步骤1的HABP蛋白溶液中,置室温90min;
(4)将步骤3HABP蛋白溶液加入到Centricon-10浓缩管中,然后放入到sigma2-16k高速冷冻离心机中在3000g的离心力下浓缩约30min至体积为0.5ml;
(5)取0.5ml磁珠,所述的磁珠直径在0.01~5.0μm之间,加入5ml反应杯中,放入专用试管架,经磁铁吸附2分钟后吸取上清;
(6)每次加入1.5ml PH9.5 0.1mol/L PB,混匀30秒,上架,去上清,重复操作3次;将步骤4获得的HABP蛋白溶液加入到磁珠中,混匀后室温反应4小时,保持混匀状态;
(7)加入0.3ml 1mol/L的Tris溶液37℃15分钟,其中Tris的加样量为1mgHABP蛋白加0.15mlTris;
(8)每次加入1.5ml PH 7.2 0.1mol/L PB清洗已经标记的磁珠,混匀30秒,上架,去上清,重复操作3次;
(9)用100ml磁珠保存液将磁珠转入125ml玻璃瓶,即为0.05%的HA磁分离试剂;
(10)将步骤9获得的磁分离试剂用磁珠缓冲液按照1:1的比例混匀,即得本发明试剂盒中分离试剂。
第二步:试剂R1的制备过程
一、试剂R1稀释液配制操作规程:配方见表2,以配制1L为例:
(1)取Tris 6.06g、NaCl 13.0g、Zncl2 0.05g、Proclin-300 0.2ml和MgCl20.05g于烧瓶中;然后在烧瓶中加入800ml纯化水,充分搅拌,使试剂完全溶解;
(2)用4M HCl或4M NaOH调PH,测量使PH在7.35-7.45范围内;
(3)称取BSA V 3g倒入上述烧瓶中;
(4)最后定容至1000ml,测PH值,范围在7.35-7.45之间即符合要求,用0.2um滤器过滤;过滤完后,贴好标签于2-8℃冷库贮存;
表2试剂R1稀释液的配制
二、试剂R1的配制(碱性磷酸酶(ALP)标记的aggrecan蛋白)
(1)取10mgALP加入5ml生理盐水中,加入到Centricon-10浓缩管中,3000rpm离心大约20分钟,浓缩至1毫升。
(2)于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液,室温下避光搅拌20分钟。
(3)将上述溶液装入透析袋中,用1mM PH4.4的醋酸钠缓冲液透析,4℃过夜。
(4)加20μl 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液,使以上醛化ALP的PH升高到9.0~9.5,然后立即加入0.05mgaggrecan蛋白,在1ml 0.01M碳酸盐缓冲液中,室温避光轻轻搅拌2小时。
(5)加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液,混匀,再置4℃2小时。
(6)将上述液装入透析袋中,对0.15M PH7.4PBS透析,4℃过夜。
(7)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵,置4℃1小时。
(8)3000rpm离心半小时,弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次,最后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。
(9)将上述溶液装入透析袋中,对0.15M PH7.4的PB缓冲盐水透析约5个小时,去除铵离子后,10000rpm离心30分钟去除沉淀,上清液即为酶结合物,加入体积1/100的1MMgcl2溶液4℃保存。收集到的碱性磷酸酶(ALP)与aggrecan蛋白的偶联物用上述酶反应物稀释液以1:100的体积比混合均匀,即得本发明试剂盒中试剂R1。
第三步:试剂R2的制备
试剂R2配制操作规程:配方见表3,以配制1L为例:
(1)称取Tris(三羟甲基氨基甲烷,分子式:(HOCH2)3CNH2)1.56g和NaCl 4.23g于1L烧杯中;用移液器将Proclin-300量取0.2ml于少量纯化水的烧杯中完全溶解后,倒入上述1L容器中;
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中,充分搅拌,直至完全溶解;用4MHCL或4MNaOH调PH,测量其范围在7.35~7.45之间;
(3)称取牛γ球蛋白IgG 0.9g于800ml纯化水的烧杯中;
(4)最后定容1000ml,完全溶解后,测PH值,范围在7.35~7.45之间即符合要求,用0.2μm滤器过滤;过滤完后,贴好标签于2-8℃冷库贮存;
表3试剂R2的配制
第四步:标准品和质控品的配制:
(1)最高点:最高浓度点为X,目标点浓度为A,B,C,D,E,F,配制V体积的溶液时,需加入原料的体积如表4所示
表4配制V体积溶液时需加入原料的体积
(2)透明质酸(HA)定量测定试剂盒HA标准品原料配制成浓度点为0,0.1,1,5,50,100ng/ml;质控品配制的浓度点为0.6,50ng/ml。校准品配制的浓度点为1,50ng/ml
(3)完全溶解后,贴好标签于2-8℃冷库贮存;
第五步:清洗浓缩液配制操作规程:配方见表5,以配制1L为例:
(1)称取Tris 12.54g和NaCl 325.6g于1L容器中;
(2)称取5g Tween-20于100ml容器中加20ml水使其完全溶解后,倒入上述容器中;
(3)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于盛有10ml纯化水的烧杯中完全溶解后,倒入上述1L容器中;
(4)用量筒量取800ml纯化水于上述1L容器中,充分搅拌,直至完全溶解;
(5)用4M HCL或4M NaOH调PH,测量其范围在7.35-7.45之间;
(6)最后定容1000ml,测PH值,范围在7.35-7.45之间即符合要求,完全溶解后用0.2μm滤器过滤即得;过滤完后,贴好标签于2-8℃冷库贮存;
表5清洗浓缩液的配制
第六步:稀释液配方见表6,以配制1L为例:
(1)称取NaCl9.0g和BSA V 60g于1L的容器中;
(2)用移液器将Proclin-300量取0.5ml加10ml纯化水溶解,倒入上述1L的容器中;
(3)最后定容1000ml,完全溶解后,用0.2um滤器过滤,贴好标签于2~8℃冷库贮存;
表6稀释液的配制
第七步:发光底物配制操作规程:配方见表7,以配制1L为例:
(1)称取Tris 2.35g、NaCl 6.41g、Na2SO3 0.002g和Proclin-300 0.2ml于1L烧杯中;
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中,充分搅拌,直至完全溶解;用4M HCl或4MNaOH调PH,测量其范围在7.95~8.05之间;
(3)最后定容至1000ml,测PH值,范围在7.95~8.05之间即符合要求,用0.2μm滤器过滤;过滤完后,加入250ml IUMIPHOS530,混匀后,贴好标签于2~8℃冷库贮存;
表7发光底物的配制
本实施例透明质酸(HA)测试试剂盒的测试方法,包括如下步骤:
(1)使用前,需使用试剂盒内校准品(采用全自动仪器)进行曲线校正,并用质控品进行质量控制;测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加4份HA标准品、质控品、待测标本至对应试管底部;
(3)加4份试剂R1至每一试管中;
(4)加4份试剂R2至每一试管中;
(5)加4份磁分离试剂至每一试管中;
(6)用塑料薄膜覆盖试管,多管混匀器轻轻振荡试管架30s后,置37℃水浴30分钟;
(7)试管连架放至磁分离器上,确保每支试管都与分离器表面接触,沉淀2分钟。缓慢的倒转分离器倒出上清液,把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上,用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴;
(8)清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后,加26.7份稀释后的清洗液至每一试管中,置多管混匀器上轻轻振荡混匀30s。加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出。混匀要彻底;
(9)重复步骤(6)、(7)、(6)一遍;
(10)加25份底物溶液至试管中混匀3秒,迅速用准备好的发光检测仪进行检测;
(11)如遇到高值HOOK样本,建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数用稀释液对样品进行稀释。
实施例2
本实施例提供了一种透明质酸(HA)测试试剂盒,所述试剂盒包括:
磁分离试剂,标记有HABP蛋白的纳米磁性微球,所述标记有HABP蛋白的纳米磁性微球的浓度为167μg/ml;
试剂R1,含有碱性磷酸酶标记的aggrecan蛋白,所述碱性磷酸酶标记的aggrecan蛋白浓度为1μg/ml;
试剂R2,含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液;
标准品,含有HA抗原的牛血清白蛋白组分五(BSA V)溶液,浓度为0(S0)ng/ml、25(S1)ng/ml、70(S2)ng/ml、200(S3)ng/ml、500(S4)ng/ml、1000(S5)ng/ml;
质控品,含有HA抗原的牛血清白蛋白组分五(BSA V)溶液,浓度为45.5ng/ml,500ng/ml;
校准品,含有HA抗原的牛血清白蛋白组分五(BSA V)溶液,浓度为70ng/ml,500ng/ml;
清洗浓缩液,含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液
稀释液,含有牛血清白蛋白组分五(BSA V)的溶液;
发光底物,金刚烷的衍生物IUMIPHOS530,所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml。
其中,本实施例试剂盒中各试剂按下述体积比配制:磁分离试剂5.1,试剂R1 5.1,试剂R2 4,校准品5.1,质控品1.7,校准品1.7,清洗浓缩液25,稀释液17,发光底物34。
本实施例透明质酸(HA)测试试剂盒的制备方法与实施例1相同。
本实施例透明质酸(HA)测试试剂盒的测试方法,包括如下步骤:
(1)使用前,需使用试剂盒内校准品(采用全自动仪器)进行曲线校正,并用质控品进行质量控制;测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加5.1份HA标准品、质控品、待测标本至对应试管底部;
(3)加5.1份试剂R1至每一试管中;
(4)加5.1份试剂R2至每一试管中;
(5)加5.1份磁分离试剂至每一试管中;
(6)用塑料薄膜覆盖试管,多管混匀器轻轻振荡试管架30s后,置37℃水浴30分钟;
(7)试管连架放至磁分离器上,确保每支试管都与分离器表面接触,沉淀2分钟。缓慢的倒转分离器倒出上清液,把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上,用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴;
(8)清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后,加26.7份稀释后的清洗液至每一试管中,置多管混匀器上轻轻振荡混匀30s。加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出。混匀要彻底;
(9)重复步骤(6)、(7)、(6)一遍;
(10)加34份底物溶液至试管中混匀3秒,迅速用准备好的发光检测仪进行检测;
(11)如遇到高值HOOK样本,建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数用稀释液对样品进行稀释。
实施例3
本实施例提供了一种透明质酸(HA)测试试剂盒,所述试剂盒包括:
磁分离试剂,标记有小鼠抗人HA的单克隆HABP蛋白的纳米磁性微球,所述标记有HABP蛋白的纳米磁性微球的浓度为167μg/ml;
试剂R1,含有碱性磷酸酶标记的aggrecan蛋白,所述碱性磷酸酶标记的aggrecan蛋白浓度为1μg/ml;
试剂R2,含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液;
标准品,含有HA抗原的牛血清白蛋白组分五(BSA V)溶液,浓度为0(S0)ng/ml、30(S1)ng/ml、90(S2)ng/ml、180(S3)ng/ml、450(S4)ng/ml、900(S5)ng/ml;
质控品,含有HA抗原的牛血清白蛋白组分五(BSA V)溶液,浓度为60ng/ml,450ng/ml;
校准品,含有HA抗原的牛血清白蛋白组分五(BSA V)溶液,浓度为1ng/ml,50ng/ml;
清洗浓缩液,含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液
稀释液,含有牛血清白蛋白组分五(BSA V)的溶液;
发光底物,金刚烷的衍生物IUMIPHOS530,所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml。
本实施例透明质酸(HA)测试试剂盒的制备方法与实施例1相同。
本实施例透明质酸(HA)测试试剂盒的测试方法,包括如下步骤:
(1)使用前,需使用试剂盒内校准品(采用全自动仪器)进行曲线校正,并用质控品进行质量控制;测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加6份HA标准品、质控品、待测标本至对应试管底部;
(3)加6份试剂R1至每一试管中;
(4)加6份试剂R2至每一试管中;
(5)加6份磁分离试剂至每一试管中;
(6)用塑料薄膜覆盖试管,多管混匀器轻轻振荡试管架30s后,置37℃水浴30分钟;
(7)试管连架放至磁分离器上,确保每支试管都与分离器表面接触,沉淀2分钟。缓慢的倒转分离器倒出上清液,把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上,用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴;
(8)清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后,加26.7份稀释后的清洗液至每一试管中,置多管混匀器上轻轻振荡混匀30s。加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出。混匀要彻底;
(9)重复步骤(6)、(7)、(6)一遍;
(10)加40份底物溶液至试管中混匀3秒,迅速用准备好的发光检测仪进行检测;
(11)如遇到高值HOOK样本,建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数用稀释液对样品进行稀释。
本发明透明质酸(HA)测试试剂盒的临床试验:
1、检测数据
标本采自1000例正常体检、供血者。样本体检结果均无肝、脑、肾、消化道疾病,半年内无输血和大手术史,妇女不在妊娠期和哺乳期。将测值进行统计学分析,得出正常血清参考范围:3~120ng/ml。
本数据仅供参考,不同地区、不同个体以及采用不同方法进行检测,所测得的HA水平也会有所不同,建议各实验室建立自己的正常值范围。不可仅凭本方法得出的HA值作出诊断,仅作为中间数据参考作用,应结合临床其他资料分析结果,包括病人的具体情况和治疗状况。通过其他方法得到的样品中的HA浓度值与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。超出试剂盒测定范围的样本,***将无法给出确切的数值。如欲测定其确切的结果,建议稀释后再进行测定。本试剂盒的检测结果仅供临床参考,不能单独作为确诊或排除病例的依据,为达到诊断目的,此检测结果要与临床检查、病史和其它的检查结合使用。本品可用于血清样本的测定,用于其他体液样本中HA浓度测定的可靠性未得到充分确认。
2、本发明试剂盒性能指标
分析灵敏度定义为:对20次零标准品的测定,取其2倍的平均偏差,其在标准曲线上所对应的浓度即为分析灵敏度;分析灵敏度:0.03ng/ml;精密性:批内变异CV%≦10.0%;批间变异CV%≦15.0%;线性系数:r≥0.9900;线性范围:0.03-100ng/ml:受3种主要类似交叉反应物的干扰情况如表8所示。
表8与主要类似物的交叉反应情况:
最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (8)
1.一种透明质酸测试试剂盒,其特征在于,包括:
磁分离试剂,标记HABP蛋白的纳米磁性微球,浓度为167μg/ml;
试剂R1,含有碱性磷酸酶标记的aggrecan蛋白,所述碱性磷酸酶标记的aggrecan蛋白浓度为1μg/ml;
试剂R2,含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液;
含有HA抗原的牛血清白蛋白组分五(BSA V)溶液的标准品、质控品和校准品;
清洗浓缩液,含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液;
稀释液,含有牛血清白蛋白组分五(BSA V)的溶液;
发光底物,金刚烷的衍生物IUMIPHOS530,所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml。
2.根据权利要求1所述的透明质酸测试试剂盒,其特征在于,各试剂体积比为:磁分离试剂4-6,试剂R1 4-6,试剂R2 4-6,标准品4-6,质控品1-3,校准品1-3,清洗浓缩液20-30,稀释液10-20,发光底物25-40。
3.如权利要求1或2所述的透明质酸测试试剂盒的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)磁分离试剂的制备
配制磁珠缓冲液:分别称取Tris、NaCl于容器中,配制Tween-20溶液,倒入所述容器中;量取Proclin-300,溶解于水中后倒入所述容器中,在所述容器中加入水,并充分搅拌,使加入的试剂完全溶解;调节PH值在7.95~8.05范围内;称取BSA V(牛血清白蛋白组分五)倒入所述容器中;定容,配制溶液中Tris浓度为4.58g/L,NaCl浓度为6.81g/L,Tween-20浓度为0.96g/L,浓度0.02%的Proclin-300,BSA V浓度为3g/L,PH值在7.95~8.05范围内,配制好的溶液用0.2μm滤器过滤,过滤后在于2~8℃下保存;
配制磁分离试剂:将DSS(辛二酸二琥珀酰亚胺)溶于DMSO中,配制成浓度为20mg/mL的溶液;取HABP蛋白溶于PH 9.5的0.1mol/L PB缓冲液中,浓度为2mg/mL;将DSS溶液加入到HABP蛋白溶液中,室温放置90分钟;离心处理;另取浓度为100mg/ml的磁珠,按与HABP蛋白溶液的体积比为1:2量取,加入反应杯中,经磁铁吸附2分钟后吸取上清液;用PH 9.5、0.1mol/L的PB清洗磁珠;将离心处理后的浓缩HABP蛋白溶液加入到清洗后的磁珠中混匀,室温放置4小时,保持混匀状态;磁珠-HABP蛋白混合液中加入1mol/L的Tris溶液,37℃下放置15分钟,所述Tris的加样量为1mgHABP蛋白加0.15mlTris;用PH 7.2、0.1mol/L的PB清洗已经标记好HABP蛋白的磁珠;用磁珠保存液稀释并制得浓度为0.05%的HA磁分离试剂;再将制得的HA磁分离试剂与制得的磁珠缓冲液按照1:1的比例混匀得磁分离试剂;
(2)试剂R1的制备
试剂R1稀释液的配制:量取Tris、NaCl、Zncl2、Proclin-300、MgCl2于容器中,加入水,充分搅拌,使加入的试剂完全溶解;调节PH在7.35~7.45范围内;加入BSA V;定容,配制溶液中Tris浓度为6.06g/L,NaCl浓度为13g/L,Zncl2的浓度为0.05g/L,Proclin-300的浓度0.02%,MgCl2的浓度为0.05g/L,BSA V浓度为3g/L,PH在7.35~7.45范围内,配制好的溶液用0.2μm滤器过滤,过滤后在于2~8℃下保存;
配制试剂R1,称取1mg碱性磷酸酶(ALP)溶于生理盐水中,离心浓缩处理;与离心浓缩后的ALP浓缩液按体积比5:1加入浓度为0.1M的NaIO4溶液,室温下避光搅拌20分钟;将搅拌后ALP溶液透析处理;透析处理后的ALP溶液中加入浓度为0.2M、PH9.5的碳酸盐缓冲液,使醛化ALP的PH升高到9.0~9.5,立即加入aggrecan蛋白,加入aggrecan蛋白的量按与ALP的重量比为1:10加入,在浓度为0.01M的碳酸盐缓冲液中,室温避光轻轻搅拌2小时;加入浓度为4mg/ml的NaBH4溶液混匀,置于4℃下2小时;透析处理;之后在搅拌下逐滴加入等体积的饱和硫酸铵,置于4℃下1小时;离心处理弃上清,沉淀物用半饱和硫酸铵清洗,将沉淀物溶于浓度为0.15M、PH7.4的PBS溶液中;透析处理,去除铵离子;离心处理去除沉淀,上清液为酶结合物,按与1M Mgcl2溶液100:1的体积比加入1M Mgcl2溶液,与制得的酶反应物稀释液以1:100的体积比混合均匀,即的试剂R1;
(3)试剂R2的制备
称取Tris、NaCl于容器中,量取Proclin-300,用水溶解后加入到所述容器中;在所述容器中加水,搅拌,使得加入到所述容器中的试剂完全溶解,调节PH在7.35~7.45的范围内;称取牛γ球蛋白(IgG),加入到所述容器中;定容,配制溶液中,Tris浓度为1.56g/L,NaCl浓度为4.23g/L,Proclin-300的浓度0.02%,牛γ球蛋白(IgG)的浓度为0.9g/L,PH在7.35~7.45的范围内,配制好的溶液用0.2μm滤器过滤,过滤后在于2~8℃下保存;
(4)标准品、质控品及校准品的配制
HA标准品配制浓度为0,25,180,200,600,1500ng/ml;质控品配制浓度点为47.5,600ng/ml;校准品配制浓度为70,600ng/ml;充分混匀后,2-8℃下保存;
(5)清洗浓缩液的配制
称取Tris和NaCl于容器中,称取Tween-20于水中溶解后将溶液加入到所述容器中;量取Proclin-300于水中溶解后将溶液加入到所述容器中;向所述容器中加入水,充分搅拌,使所加入的试剂完全溶解;调节PH在7.35~7.45范围内;定容,配制溶液中Tris浓度为12.54g/L,NaCl浓度为325.6g/L,Tween-20浓度为5g/L,Proclin-300的浓度0.02%,PH在7.35~7.45的范围内,配制好的溶液用0.2μm滤器过滤,过滤后在于2~8℃下保存;
(6)稀释液的配制
称取NaCl和BSA V于容器中;量取Proclin-300于水中溶解后将溶液加入到所述容器中;定容,配制溶液中NaCl浓度为9g/L和BSA V浓度为60g/L,Proclin-300的浓度0.05%,配制好的溶液用0.2μm滤器过滤,过滤后在于2~8℃下保存;
(7)发光底物的配制
称取Tris、NaCl、Na2SO3和Proclin-300于容器中,加入水,充分搅拌,使加入的试剂完全溶解;调节PH在7.95~8.05的范围内;定容,配制溶液中Tris浓度为2.35g/L,NaCl浓度为6.41g/L,Na2SO3浓度为0.002g/L,Proclin-300的浓度为0.02%,PH在7.95~8.05范围内,配制好的溶液用0.2μm滤器过滤,过滤后,配制溶液与IUMIPHOS530按4:1的体积比加入IUMIPHOS530,混匀后于2~8℃下保存。
4.根据权利要求3所述的透明质酸测试试剂盒的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,DSS的投入量计算公式为:投入量=HABP蛋白质量/16000×10×368/CDSS。
5.根据权利要求3所述的透明质酸测试试剂盒的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所述离心处理为将加入DSS的HABP蛋白溶液于高速冷冻离心机中在3000g的离心力下浓缩30分钟,至浓缩体积为小于0.5ml。
6.根据权利要求3所述的透明质酸测试试剂盒的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所述磁珠直径为0.9~1.5μm,加入浓度为100mg/ml的磁珠。
7.如权利要求1或2所述的透明质酸测试试剂盒的测试方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)加HA标准品、质控品、待测标本至对应试管底部;
(2)加试剂R1至每一试管中;
(3)加试剂R2至每一试管中;
(4)加磁分离试剂至每一试管中;
(5)各试管内试剂混匀后,置37℃水浴30分钟;
(6)将各试管放至磁分离器上,确保每支试管都与分离器表面接触,沉淀2分钟;缓慢倒出上清液,除去各试管内的液滴;
(7)清洗浓缩液用水稀释7倍后,加稀释后的清洗液至每一试管中,混匀;
(8)重复操作步骤(5)、(6)、(5)一遍;
(9)加底物溶液至试管中混匀3秒,迅速用准备好的发光检测仪进行检测。
8.根据权利要求7所述的透明质酸测试试剂盒的测试方法,其特征在于,所述步骤(1)之前使用校准品进行曲线校正,并用质控品进行质量控制。
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---|---|
CN (1) | CN106501503A (zh) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110907641A (zh) * | 2019-12-18 | 2020-03-24 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种透明质酸检测试剂盒及检测方法 |
CN111024962A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-17 | 上海复星长征医学科学有限公司 | 一种用于从血清中检测叶酸含量的解离剂及检测方法 |
CN111537726A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-08-14 | 武汉大学 | 高效定量检测细胞外囊泡中pd-l1水平的方法、elisa试剂盒及使用方法 |
CN112213490A (zh) * | 2020-09-16 | 2021-01-12 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 透明质酸化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 |
CN117664885A (zh) * | 2023-11-28 | 2024-03-08 | 中国计量科学研究院 | 一种织物中透明质酸含量的定量检测方法 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1047391A (zh) * | 1990-06-07 | 1990-11-28 | 上海长征医院 | 一种检测透明质酸的方法 |
CN101533028A (zh) * | 2008-03-14 | 2009-09-16 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 透明质酸化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 |
CN102095847A (zh) * | 2009-12-10 | 2011-06-15 | 北京北方生物技术研究所 | 一种检测人血清中透明质酸含量的方法 |
CN102692408A (zh) * | 2012-04-26 | 2012-09-26 | 北京北方生物技术研究所 | 透明质酸一步法化学发光定量检测试剂盒 |
CN103439491A (zh) * | 2013-09-17 | 2013-12-11 | 北京润诺思医疗科技有限公司 | 一种透明质酸化学发光定量测定试剂盒及其制备方法 |
CN104698186A (zh) * | 2015-02-10 | 2015-06-10 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 检测透明质酸的试剂盒及其检测方法和应用 |
CN105467137A (zh) * | 2015-11-26 | 2016-04-06 | 北京豪迈生物工程有限公司 | 游离人绒毛膜性腺激素β亚单位测试试剂盒及其测试方法 |
CN105510594A (zh) * | 2015-11-26 | 2016-04-20 | 北京豪迈生物工程有限公司 | 一种降钙素原(pct)测试试剂盒及其测试方法 |
CN105510593A (zh) * | 2015-11-26 | 2016-04-20 | 北京豪迈生物工程有限公司 | 一种甲状腺球蛋白(tg)测试试剂盒及其测试方法 |
-
2016
- 2016-09-26 CN CN201610853157.8A patent/CN106501503A/zh active Pending
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1047391A (zh) * | 1990-06-07 | 1990-11-28 | 上海长征医院 | 一种检测透明质酸的方法 |
CN101533028A (zh) * | 2008-03-14 | 2009-09-16 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 透明质酸化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 |
CN102095847A (zh) * | 2009-12-10 | 2011-06-15 | 北京北方生物技术研究所 | 一种检测人血清中透明质酸含量的方法 |
CN102692408A (zh) * | 2012-04-26 | 2012-09-26 | 北京北方生物技术研究所 | 透明质酸一步法化学发光定量检测试剂盒 |
CN103439491A (zh) * | 2013-09-17 | 2013-12-11 | 北京润诺思医疗科技有限公司 | 一种透明质酸化学发光定量测定试剂盒及其制备方法 |
CN104698186A (zh) * | 2015-02-10 | 2015-06-10 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 检测透明质酸的试剂盒及其检测方法和应用 |
CN105467137A (zh) * | 2015-11-26 | 2016-04-06 | 北京豪迈生物工程有限公司 | 游离人绒毛膜性腺激素β亚单位测试试剂盒及其测试方法 |
CN105510594A (zh) * | 2015-11-26 | 2016-04-20 | 北京豪迈生物工程有限公司 | 一种降钙素原(pct)测试试剂盒及其测试方法 |
CN105510593A (zh) * | 2015-11-26 | 2016-04-20 | 北京豪迈生物工程有限公司 | 一种甲状腺球蛋白(tg)测试试剂盒及其测试方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
SARAH HASERODT ET AL: "A comparison of the sensitivity, specificity, and molecular weight accuracy of three different commercially available Hyaluronan ELISA-like assays", 《GLYCOBIOLOGY》 * |
刘秉文、陈俊杰主编: "《医学分子生物学》", 30 November 2000, 中国协和医科大学出版社 * |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110907641A (zh) * | 2019-12-18 | 2020-03-24 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种透明质酸检测试剂盒及检测方法 |
CN110907641B (zh) * | 2019-12-18 | 2022-05-03 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种透明质酸检测试剂盒及检测方法 |
CN111024962A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-17 | 上海复星长征医学科学有限公司 | 一种用于从血清中检测叶酸含量的解离剂及检测方法 |
CN111024962B (zh) * | 2019-12-31 | 2023-09-19 | 复星诊断科技(上海)有限公司 | 一种用于从血清中检测叶酸含量的解离剂及检测方法 |
CN111537726A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-08-14 | 武汉大学 | 高效定量检测细胞外囊泡中pd-l1水平的方法、elisa试剂盒及使用方法 |
CN112213490A (zh) * | 2020-09-16 | 2021-01-12 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 透明质酸化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 |
CN117664885A (zh) * | 2023-11-28 | 2024-03-08 | 中国计量科学研究院 | 一种织物中透明质酸含量的定量检测方法 |
CN117664885B (zh) * | 2023-11-28 | 2024-05-07 | 中国计量科学研究院 | 一种织物中透明质酸含量的定量检测方法 |
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