CN1897935A - 罗替戈汀用于治疗或预防多巴胺能神经元损失的用途 - Google Patents

Abstract

本申请涉及罗替戈汀或其盐和前药用于生产用于治疗或预防在与多巴胺能细胞破坏增加关联的疾病中的多巴胺能细胞破坏的药物的用途。特别是本发明申请还涉及罗替戈汀作为预防性治疗帕金森病的药物的用途。

Description

罗替戈汀用于治疗或预防多巴胺能神经元损失的用途

介绍

背景技术

帕金森病的出现是慢性、进行性神经元退化的结果，其原因还不完全清楚。临床上显示的主要症状形式是静止性震颤、强直、运动过慢和***不稳定。

最初用作缓解运动症状的药物是左旋多巴、多巴胺激动剂例如罗替戈汀、普拉克索、溴隐亭、罗匹尼罗、卡麦角林、培高利特、阿朴***和麦角乙脲，抗胆碱能药物、NMDA拮抗剂、β-阻断剂以及MAO-B抑制剂司来吉兰(selegeline)和COMT抑制剂恩他卡朋。这些活性物质中多数都能干涉多巴胺能和/或胆碱能信号级联并以这种方式在症状上影响身为帕金森病典型的运动障碍。

迄今为止，已经从主要症状开始对帕金森病进行治疗。如果能确定四种主要症状(运动过慢、静止性震颤、强直和***不稳定)中的至少两种而且L-多巴有作用，那么临床上一般就被认为是帕金森疾病(Hughes，J Neurol Neurosurg Psychiatry 55，1992，181)。然而不幸的是，一旦黑质(SN)中有约70到80％的多巴胺能神经元已经被不可逆地损伤，那么帕金森病患者就仅发展了运动障碍(Becker等，J Neurol 249，2002，Suppl 3：III，40；Hornykiewicz，Encyclopedia of Life Science 2001，1)。有持续治疗效果的可能性在此时是还仅仅是小的。这样就期望尽可能早地开始治疗。

现在，当前的临床观察和解剖及遗传研究显示能对早期帕金森病患者进行诊断而且还能鉴别高危病人。

例如以下，能由此被用作诊断标志：

-生化标志，例如神经黑素(Gerlach，Neurotox Res 5，2003，35；WO02/31499)、S-100贝塔(Muramatsu，Glia 42，2003，307)、α-synuclein(WO03/069332；WO 00/02053)或二乙嗪蛋白(parkin protein)(Sharma，Neurol Clin N Am 20，2002，759)和信号素(WO 03/007803)。

-基因标记，例如park基因1-8(Guttman，CMAJ 4，2003，168；WO03/76658)、CYP2D6-B(WO 03/012137)、染色体2q 36-37(Pankratz，AmJ Hum Gen 72，2003，e-pub)、a-synuclein(Polymeropoulos，Science.276，1997，2045)或CYP2D6-B和GSTM1缺失中的突变(WO 03/012137)。

-成像法，例如SN大小的超声检测，任选与其它方法组合(Becker等，J Neurol 249，2002，Suppl 3：III，40)或是MRI(Hutchinson M，RaffU.，J Neurol Neurosurg Psychiatry.1999Dec；67(6)：815-8)。

-成像法，例如PET或SPECT(Prunier C，Bezard E等，Neuroimage.2003 Jul；19(3)：810-6)。

-感觉障碍或行为异常，例如睡眠和嗅觉障碍，特别是“REM睡眠行为障碍”型睡眠障碍，(Henderson，J Neurol Neurosurg Psychiatry74，2003，956)，或认知异常(Rammsayer，Int J Neurosci.91，1997，45)。

-器官问题，例如顽强便秘(Krygowska-Wajs，Funct Neurol 15，2000，41)。

-抑郁(Camicioli R.Drugs Today(Barc).2002 Oct；38(10)：677-86)。

-短期活动异常，例如舞蹈病或***异常。

-上述标志的组合(Stern，Annals of Neurol 56，2004，169)。

当出现许多帕金森病主要运动症状时仍有更多的神经元存在时，便由此产生了在某时间点影响疾病过程的可能性，并由此保护了数量上更大量的神经元。预期在较早阶段给予有效量的神经保护剂将能显著延缓疾病发展：治疗开始得越早，能达到长期预防降低生活质量的症状发生的可能性就越大。

由此，需要不仅能影响多巴胺能传递并能在晚期缓解疾病帕金森症状，而且还能在帕金森病早期、大量运动无症状期间逆转、预防或至少显著降低多巴胺能神经元进行性破坏的药剂(Dawson，NatureNeuroscience Supplement 5，2002，1058)。

罗替戈汀[(-)-5，6，7，8-四氢-6-[丙基[2-(2-噻吩基)乙基]氨基]-1-萘酚]在现有技术中已知为是多巴胺激动剂，并作为帕金森病症状的纯粹治疗剂。WO 02/089777记载，例如，经皮给予帕金森病患者罗替戈汀并伴随UPDRS(统一的帕金森病评定等级)得分改善。UPDRS得分是诊断和监测帕金森病患者进展和/或治疗的重要手段(Fahn S，Elton RL，Members of the UPDRS Development Committee(1987)UnifiedParkinson′s Disease Rating Scale.In：Fahn，S，CD Marsden，DB Calne，M Goldstein(eds)Recent Developments in Parkinson′s Disease.Vol.II.Macmillan Healthcare Information，Florham Park(NJ)，pages 153-163，293-304)。然而，UPDRS得分仅记录了活性物质对帕金森病症状的作用。其不允许就以下内容形成任何陈述：活性物质是否能影响多巴胺能细胞的破坏，这是症状的潜在原因。

Metman等(Clin Neuropharmacol 24，2001，163)还记载了罗替戈汀对与帕金森病有关的运动障碍的作用。受治患者已经有显著的运动障碍，其能通过给予罗替戈汀而被改善。

由此，罗替戈汀在现有技术中就已知为是用于帕金森病症状治疗的多巴胺激动剂。然而，仅对症状有效的帕金森药物不能保证对帕金森病的预防性治疗有优势，因为它们对多巴胺能细胞的破坏和对疾病的进展和/或强烈度没有影响。

发明内容

然而，目前实验性试验已经令人惊奇地显示，罗替戈汀，其迄今为止仅用于帕金森病的症状治疗，具有神经保护性和/或促进神经元单位(elements)的再生力，这样罗替戈汀就能由此被用作预防多巴胺能细胞损失尤其是帕金森病较早期或高危患者的药物和/或预防药。

附图的简要说明

附图

图1显示了基于作为纹状体残留神经末稍密度指征的多巴胺转运体的密度而测定的罗替戈汀神经保护作用的代表性实例。

组1到7接受了以下处理：组1：未处理的对照组；组2：由罗替戈汀和MPTP的载体溶液所处理的对照组；组3：MPTP处理；组4：MPTP处理加罗替戈汀0.3mg/kg；组5：MPTP处理加罗替戈汀1.0mg/kg；组6：MPTP处理加罗替戈汀3.0mg/kg；组7：仅用罗替戈汀处理(3.0mg/kg)。

图2显示了在不同的组中结合在纹状体背侧和腹侧部分的多巴胺转运体(DAT)，对根据图1所示实验的DAT密度进行定量。条形图1到7相应于如图1所示的组1到7。标有*的组与对照组2相比在DAT结合方面有显著的下降。标有#的组与MPTP处理组3相比在DAT结合方面有显著的增长。

发明描述

假定细胞凋亡过程在帕金森病发病机理中的多巴胺能神经元破坏中发挥了重要作用(Barzilai，Cell Mol Neurobiol 21，2001，215)。由此能阻止或甚至逆转多巴胺能细胞破坏的神经保护物质是令人期望的。因此，MPTP模型被认为是所需神经保护特征的预兆(Dawson，NatureNeuroscience Supplement 5，2002，1058)。

罗替戈汀在急性和亚急性MPTP模型中令人惊奇地显示了令人期望的药理学曲线。实验结果暗示，细胞凋亡过程被罗替戈汀所预防。

罗替戈汀例如在帕金森病小鼠模型中显示了神经保护作用：急性(acute)给予能在人和猴子中引起帕金森症状的MPTP后，一方面测定了急性期变性神经元的数量(表1)，另一方面通过测定终神经末稍多巴胺转运体的密度来确定亚急性期纹状体的功能完整性(图1和2)。这两种情况能说明，罗替戈汀具有神经保护作用：一方面，在给予罗替戈汀后中脑退化神经元的数量被降低，另一方面，纹状体的多巴胺能神经支配几乎完全被保持或恢复了。

表1：小鼠中变性神经元的数量，以FluoroJade染色显示

组	变性神经元的数目	标准偏差
			1：用载体处理的对照组	2.0	2.4
2：MPTP中毒	73.5	34.0
			3：MPTP中毒+罗替戈汀0.3mg/kg	66.7	30.5
4：MPTP中毒+罗替戈汀1.0mg/kg	76.8	41.6
			5：MPTP中毒+罗替戈汀3.0mg/kg	34.9	31.9
5：MPTP-载体+罗替戈汀3.0mg/kg	3.8	4.3

在初步研究中，罗替戈汀对猴子的神经保护作用也已经被进行了检测。

在所用模型中，其能反映灵长类帕金森疾病的进展阶段，猴子(恒河猴)在几天内被注入下意识毒性剂量的MPTP。模型中发展的帕金森症状经历了约2周。一旦达到特定的损伤水平，就每天注射位于制剂中的罗替戈汀，其中制剂能在24小时内产生持续的血浆水平。一旦运动活性被降低到确定程度(约5天后)就停止注射MPTP。每天都测定动物的行为。开始给予MPTP六周后，停止注射罗替戈汀并在不进行治疗下继续观察动物两周。据观察，动物的运动活性在治疗期间和随后的清除期都有明显的改进。

动物组在给予罗替戈汀终了和清除期终了时被处死，从组织学和生化方面测定基底神经节的状况。纹状体神经末端的密度与未处理动物相比有显著的提高。前脑啡肽原的含量，它是基底神经节“间接通路”中完整网络的指示剂，显示在处理后和清除期后有正常化的趋势。

结果显示，罗替戈汀的神经保护潜力也能在帕金森病的灵长类模型中得以证实。因此，预期在人中也有神经保护作用。

由此，随着罗替戈汀活性物质被用于治疗，其以理想的方式适于被制成药物和/或预防药用于预防神经变性疾病中的多巴胺能神经元损失。

因此，本申请的主题是罗替戈汀用于制备用于治疗或预防患有与多巴胺能细胞破坏增加有关的神经变性疾病的患者或有多巴胺能细胞破坏增加危险的患者的多巴胺能神经元损失的药物的用途。

多巴胺能神经元损失的增加经常出现在帕金森病患者中。然而，还时常在其它神经变性疾病中发现，例如α-synucleopathien或亨廷顿病和REM睡眠障碍以及嗅觉障碍。

与迄今为止使用罗替戈汀相比，其仅限于有运动障碍的帕金森病患者的纯症状治疗，特别是帕金森病早期个体和/或由于遗传或其他危险而易于发展为帕金森病的个体的预防性治疗，这已经开发了新的使用领域。如上所述，既然给予了罗替戈汀，这种个体就尤其能得益于罗替戈汀的神经保护作用，当与已经出现运动症状的患者相比仍有较多数目的多巴胺能神经元存在时，多巴胺能细胞的损失在此时被阻止或缓慢降下来了。

因此，本发明的主题是罗替戈汀或其盐和前药作为药物用于在以下个体中预防性治疗多巴胺能细胞损失的用途，其中个体在开始预防性治疗前，帕金森病的四个主要症状选自运动过慢、强直、静止性震颤和***不稳定中的至少三个是没有出现的或仅是初步或部分出现。

个体还能是表面上健康的个体，其遗传或传染因素还不能指示帕金森病发展的危险性增加。

然而，特别是在帕金森病发展危险性增加的个体或帕金森病的早期临床、临床/化学或临床/物理症状能被检测到，但是还没有出现帕金森病主要症状中的两个或多个的患者中，能被考虑用罗替戈汀治疗。

最后，罗替戈汀还能用作神经保护剂，如果诊断不明确，但是能预测到向帕金森样神经变性发展的症状。

以下个体特别需要对神经元多巴胺能细胞损失的预防

(a)帕金森病危险性增加的个体或

(b)有帕金森病早期症状的个体。

术语“疾病帕金森”和“帕金森病”在本专利申请中被用作同义词，并包括先天和遗传性帕金森病。所谓的帕金森-附加(Parkinson-Plus)综合征和继发性帕金森被由此而区分。

术语帕金森病的“主要症状”在本专利申请中被理解为运动过慢、强直、静止性震颤和***不稳定中的一个或多个症状。

“帕金森病危险性增加的个体”在本专利申请中特别被理解为还没有出现任何可发觉的帕金森病症状，但是具有某种危险因素的个体。

这种危险因素能是遗传突变(Nussbaum NEJM 348，2003，25)。例如，染色体6q25.2-27(PARK2)上的二乙嗪(Parkin)基因与少年帕金森病有关并更经常出现在有常染色体隐性遗传帕金森的家族中(Matsumine，Am.J.Hum.Genet.，60，1997，588；Kitada，Nature 392，1998，605；Abbas，Hum.Mol.Genet.8，1999，567；Tassin，Am.J.Hum.Genet.，63，1998，88 und Lucking，N.Engl.J.Med.342，2000，1560-7)。其它的基因位点，例如PARK6和PARK7，也被发现在有少年隐性遗传帕金森病的家族中发生频率增加(Valente，Am.J.Hum.Genet.68，2001，895；van Dujin，Am.J.Hum.Genet.69，2001，629)。另一方面，PARK8基因与帕金森病的迟发有关(WO 03/076658)。在有少年、常染色体占遗传优势的帕金森病家族中发现了α-synuclein基因(PARK1)的突变(Polymeropoulos，Science 276，1997，2045)。

除遗传倾向外，环境影响，例如较多暴露在例如杀虫剂中(Vanacore，Neurol Sci.，Sep；23Suppl 2，2002，page 119)也能表示危险因素。

在本专利申请中，“有帕金森病早期症状的个体”被理解为特别是还没有出现或仅初步或部分出现帕金森病四个主要症状(强直、静止性震颤、运动过慢和***不稳定)中的至少三个，但是出现在诊断中可用的早期临床、临床/生化和/或临床/物理症状的个体。

临床/生化标志能是α-synuclein或神经黑素模式的变形(WO02/31499)。这种变形能是由于例如遗传性变体如α-synuclein的表达，聚集物或丝状体例如α-synuclein的发展，或由细胞贮存例如被毁坏细胞的细胞质中的释放增加而产生的，如神经黑素一样。

早期临床/物理症状能是大脑结构或功能的变化，其能被例如PET和SPECT研究或经颅超声检查方法而在身体上检测到(Becker，JNeurol 249，Suppl 3，2002，III/40；Prunier C，等，Neuroimage.2003 Jul；19(3)：810-6)。

早期临床症状能是嗅觉障碍、抑郁、顽强便秘、视觉障碍和认知功能损伤或具体的睡眠障碍形式，尤其是“REM睡眠行为障碍”型的，由此，不同实验的组合也能用于早期诊断(Becker，J Neurol 249，Suppl 3，2002，III/40；Stem，Annals of Neurol 56，2004，169)。

如上所讨论，有约70到80％的黑质多巴胺能神经元已经在四个主要症状中的至少两个已首次出现时就被破坏了。为了有效使用罗替戈汀的令人惊奇的神经保护潜能，由此对患者的预防性治疗就优选在当患者的黑质(SN)多巴胺能细胞损失时的阶段开始进行。因此，优选用罗替戈汀对刚以清楚显著的形式出现帕金森病主要症状中的一个或没有出现的个体中进行治疗。

优选被治疗的是出现小于70％、60％、50％和特别优选小于40％、30％、20％或10％的SN中多巴胺能细胞损失的个体。

有两个评分能用于帮助诊断已经出现显著运动障碍的患者并控制对其的治疗，即UPDRS评分及Hoehn和Yahr评分。

在本发明的优选方面中，用罗替戈汀进行预防性治疗的患者集合有改进的Hoehn和Yahr得分，即0到2，特别优选0到1且尤其优选0。

表2：根据Hoehn确定改进阶段，前-左旋多巴和后-左旋多巴时期帕金森病的自然史。Neurologic Clinics 10，1992，331阶段0＝没有病征。阶段1＝单侧疾病(unilateral disease)。阶段1.5＝单侧加轴式混乱(Involvement)。阶段2＝没有平衡损伤的双侧疾病。阶段2.5＝在牵拉测验中有恢复的轻度双侧疾病。阶段3＝轻度到适中的双侧疾病：轻度***不稳定；身体上独立。阶段4＝严重残疾；没有帮助下仍能走路或单独站立。阶段5＝没有帮助下座轮椅或卧床不起。

UPDRS评分，部分III(参见实施方案5)，至少为10的患者通常被分为能被考虑用于多巴胺能治疗的患者。然而，适于从罗替戈汀神经保护作用中受益的患者集合优选具有非常低或无法检测的运动UPDRS评分(部分III)。因此，在本发明的涵义内，用罗替戈汀进行的预防性治疗应该优选在UPDRS运动评分小于10、9、8、7、6、5、4、3、2或1的患者中进行。特别优选还完全没有任何运动障碍的患者。

术语“防止”、“预防”和“预防性治疗”在本专利申请中被用作同义词。它们包括将药物给予预期有或已经出现多巴胺能细胞损失的个体。特别是以下患者，其还没有出现或仅有初步或部分出现帕金森病四个主要症状(强直、静止性震颤、运动过慢、***不稳定)中的至少三个，以便防止或延缓帕金森病运动症状的出现或明显发展和/或进一步的多巴胺能神经元损失，尤其是黑质中的神经元损失。接受预防性治疗的个体优选没有出现清晰显著的任何主要症状。接受预防性治疗的个体优选有小于10，小于9、8、7或6以及特别优选小于5、4、3、2或1的UPDRS评分。

在本专利申请中，罗替戈汀的“前药”尤其被理解为能在人体内以治疗有效量断裂、转化或代谢为罗替戈汀的化合物，尤其在血浆或穿过皮肤或粘膜期间。

罗替戈汀具有下式

这样，特别的酚羟基衍生物就能被考虑作为前药，例如酯如芳基羰基酯、烷基羰基酯或环烷基羰基酯，尤其是有最高达6个碳原子的烷基羰基酯和环烷基羰基酯；碳酸酯；氨基甲酸酯；缩醛；缩酮；酰氧基烷基醚；磷酸酯；膦酸酯；硫酸酯；磺酸酯；硫代羰基酯；氧基硫代羰基酯；硫代氨基甲酸酯；醚和甲硅烷基醚。

术语“烷基羰基酯”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与-C(O)-烷基结合的化合物。

术语“环烷基羰基酯”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与-C(O)-环烷基结合的化合物。

术语“芳基羰基酯”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与-C(O)-芳基结合的化合物。

术语“碳酸酯”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与-C(O)-O-R基团结合的化合物。

术语“氨基甲酸酯”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与基团-C(O)-NRR1、-C(O)-NH-R1或-C(O)-NH₂结合的化合物。

术语“缩醛”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与基团-CH(OR)-R1结合的化合物。

术语“缩酮”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与基团-C(OR)-R1R2结合的化合物。

术语“酰氧基烷基醚”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与基团-CHR-O-C(O)-R1或CH2-O-C(O)-Rl结合的化合物。

术语“磷酸酯”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与基团-P(O2H)OR结合的化合物。

术语“膦酸酯”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与基团-P(O2H)R结合的化合物。

术语“硫酸酯”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与基团-S(O)2OR结合的化合物。

术语“磺酸酯”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与基团-S(O)₂R结合的化合物。

术语“硫代羰基酯”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与基团-C(＝S)-R结合的化合物。

术语“氧基硫代羰基酯”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与基团-C(＝S)-O-R结合的化合物。

术语“硫代氨基甲酸酯”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与基团-C(＝S)-N-RR1、-C(＝S)-NH-R1或-C(＝S)-NH₂结合的化合物。

术语“醚”包括其中罗替戈汀的氧原子在每种情况下都与基团-R结合的化合物。

在以上定义的前药中，R、R1和R2各自彼此独立地选自氢、烷基、环烷基或芳基，优选C1-6烷基、C3-10环烷基和苯基。

R3是烷基，尤其是C1-6烷基。

“烷基”能是支链或非支链烷基，优选具有1到10个C原子，特别优选1到6个C原子。烷基也能另外被一个或多个取代基例如卤素取代。

“环烷基”是能仅由纯成环C-原子组成或能任选有其它支链C-原子的烷基。优选的链长是3到10，特别优选是4到8或4到6个C-原子。

“芳基”优选是苯基。苯基也能任选在一个或多个位置上被例如烷氧基、烷基、卤素或硝基另外取代。

通过将罗替戈汀与相应的活性前体例如酰基氯、酸酐、氨甲酰氯、磺酰氯等反应形成前药是临床化学领域技术人员已知的，并能在有关技术文献中找到。文献的例子有Bundgaard：Design of prodrugs，Elsevier，Amsterdam，1985；Higuchi and Stella：Pro-drugs as novel drugdelivery systems in American Chemical Society，Washington DC，1975；Sloan：Prodrugs-Topical and Ocular Drug Delivery，Ed：M.Dekker，1992；Roche：Design of biopharmaceutical properties through prodrugsand analogs，Washington，DC，1977。

不同的罗替戈汀外消旋体前药(N-0437)已被记载，例如在以下文献中记载：Den Haas等，Naunyn Schmiedeberg′s Arch Pharmacol342，1990，655；Den Haas等，Naunyn Schmiedeberg′s Arch Pharmacol.341，1990，186and Den Haas等，J Pharm Pharmacol 43，1991，11。

作为前药的罗替戈汀衍生物的基本适宜性能通过在确定条件下用酶鸡尾酒、细胞匀浆或含酶细胞部分孵育各个化合物并测定得到的罗替戈汀来确定。适宜的酶混合物包含例如Gentest，Woburn，Ma.，USA.公司的S9-肝制剂。

孵育还能用新鲜血液或血浆或甚至是真皮匀浆来进行以便指示前药转化为活性成分的不依赖于肝的新陈代谢。对于经皮应用来说，需要在离体皮肤上进行体外渗透检测。在疾病模型中，适应性和潜在有效性的最终证据通过测定由前药形成的血浆中的2-N-丙基氨基-5-羟基四氢萘来获得。

在体内，前药应该能释放足够多的罗替戈汀以便在血浆中得到罗替戈汀的治疗/预防有效稳态浓度。因此，0.01到50ng/mL，优选0.05ng到20ng/mL且特别优选0.1到10ng/mL的血浆中罗替戈汀浓度一般被认为是有效浓度。

罗替戈汀是5，6，7，8-四氢-6-[丙基[2-(2-噻吩基)乙基]-氨基]-l-萘酚的S(-)-对映体。这意味着根据本发明，(R)-对映体，其在帕金森模型中无活性，在药物中的比例是较低的。(R)-对映体，基于罗替戈汀的总量，优选以＜10摩尔％的比例，特别优选＜2摩尔％的比例，尤其优选＜1％的摩尔比例存在于药物中。

罗替戈汀及其前药能以游离碱或生理学上可接受盐的形式，例如盐酸盐的形式存在于药物中。

“生理学上可接受的盐”包括罗替戈汀与有机或无机酸形成的无毒加成盐。适宜盐的优选实例是HCl盐。

适于给予罗替戈汀及其前药的施用方法有很多，本领域技术人员能依需要、患者状况和年龄、所需剂量和所需施用间隔对其进行选择和匹配。

给予罗替戈汀的优选方式是经皮给药。给药的形式基本上可以选自例如软膏、糊剂、喷雾、膜剂、硬膏或离子电渗疗法的装置。

罗替戈汀优选以硬膏的形式被施用到患者皮肤上，活性物质优选存在于粘性聚合物基质中，例如自粘聚硅氧烷。适宜经皮制剂的实例能在WO 99/49852、WO 02/89777、WO 02/89778、WO 2004/058247和WO 2004/012721以及实施方式1中找到。这种给药形式能基本上建立恒定的血浆水平，因此就能在整个施用间隔期间进行恒定的多巴胺能刺激(WO 02/89778；Metman，Clinical Neuropharmacol.24，2001，163)。

另一方面，如果期望是皮下或肌肉贮库形式的药物，那么罗替戈汀就可以例如作为盐结晶，如结晶盐酸盐，而混悬在疏水性无水介质中并被注射，例如WO 02/15903和实施方案2的记载。

罗替戈汀也基本上能以微囊、微粒或基于生物可降解聚合物的植入物形式，例如WO 02/38646记载的，而被给予。

给予罗替戈汀及其前药的其它可能形式是经粘膜制剂，例如舌下喷雾、直肠制剂或用于肺部给药的气雾剂。

罗替戈汀的适宜剂量为0.05到约50mg/天，日给药剂量优选为0.1到40mg，特别是0.2到20mg/天。因此，剂量给药能以逐渐增加的方式进行，即治疗可以任选从低剂量开始，然后升高直至达到维持剂量。

本领域技术人员很清楚，剂量给药间隔可以随施用量、施用方式和患者的每日需求而变化。这样，就可以设计例如每日一次、每三日一次或每七日一次的经皮施用形式，同时，皮下或肌肉贮库能注射给予，例如以每周、每两周或每四周的周期给予。

除罗替戈汀外，能防止多巴胺能细胞损失发展的其它活性物质也能存在于神经保护药物中。

其实例是有抗细胞凋亡作用的物质(米诺环素、FK-506、环孢菌素A、zVAD)以及神经营养因子例如源自神经胶质-细胞的神经营养因子(GDNF)。

在组合制剂中，能实现连续给药，例如其中给药形式，例如口服片，具有两个有对不同药理活性成分来说有不同释放曲线的不同层。本领域技术人员很清楚，各种给药剂型和施用模式方案都能在本发明的内容中，所有这些形成了本发明的主题。

本申请的另一个主题是用于早期诊断和治疗疾病帕金森的试剂盒。这种试剂盒包含(a)诊断剂，其能在早期或无症状期诊断帕金森病和/或发展为帕金森病的趋势，以及(b)含有罗替戈汀、其盐或前药的药物制剂用于治疗或预防多巴胺能细胞损失。

这种试剂盒可以包含，例如：

(a)检测神经黑素的试剂或诊断试剂盒，

(b)包含罗替戈汀、其盐和前药的药物制剂。

在本发明的另一个实施方案，试剂盒可以包含：

(a)检测信号素3的试剂或诊断试剂盒，

(b)包含罗替戈汀、其盐和前药的药物制剂。

在本发明的另一个实施方案，试剂盒可以包含：

(a)检测α-synuclein和/或其凝聚体的试剂或诊断试剂盒，

(c)包含罗替戈汀、其盐和前药的药物制剂。

在本发明的又一个实施方案，试剂盒可以包含：

(a)用于遗传性检测与出现帕金森病有关的突变和/或与更频繁地出现帕金森病有关的等位基因，其尤其来自PARK基因1、2、3、4、5、6、7或8以及基因位点CYP2D6-B和GSTM1，的试剂或诊断试剂盒，

(b)包含罗替戈汀、其盐和前药的药物制剂。

具体实施方式

实施方案

实施例1：罗替戈汀硬膏

将1.8g罗替戈汀(游离碱)溶解在2.4g乙醇中并加入0.4g Kollidon90F(溶解在1g乙醇中)。将这个混合物加入到位于庚烷中的74％硅酮聚合物溶液中(8.9g BioPSA 7-4201+8.9g BIO-PSA 7-4301[DowComing])。加入2.65g石油醚后，在700rpm下搅拌该混合物1小时以便得到均匀的分散体。在聚酯中成层后，于50℃下干燥。硬膏的最终重量为50g/cm2。

实施例2.罗替戈汀贮库混悬液

(a)将1411.2g Miglyol 812称量到Duran烧瓶中。向Miglyol中加入14.4g Imwitor 312，然后在搅拌下加热30分钟至80℃。将澄清溶液冷却到室温并过滤。

(b)将1188g在(a)中生成的溶液转移到玻璃实验室反应器中，加入12g罗替戈汀并在氮中于10,000rpm下的Ultraturrax中匀化10分钟。将该混悬液轻轻倒入棕色玻璃瓶中，同时运行Ultraturrax(2,000rpm)。

实施例3：亚急性MPTP模型

出于中毒的目的，将80mg/kg神经毒素1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢-吡啶(MPTP)给予小鼠(批量为20mg/kg，间隔为两小时，图1和2中的组3到6)，其能导致约50到60％的黑质神经元变性(图1和2中的组3变性最大)。每天给予罗替戈汀共7天，剂量分别为0.3、1或3mg/kg，作为所谓的“缓释制剂”(参见实施例2)(图1和2中的组4到6)。将罗替戈汀载体溶液(参见没有罗替戈汀HCl的实施例2)给予MPTP处理动物组(组3)并作为参考。组1、2和7作为对照，由此组1丝毫没有接受任何治疗，组2用MPTP和罗替戈汀的载体溶液处理，组7接受了唯一的罗替戈汀。在第8天时处死动物，除去其脑并冷冻。在磷酸盐缓冲液中，pH 7.4，用100pm[¹²⁵I]PE2I([¹²⁵I]-(E)-N(3-碘丙-2-烯基)-2β-羧甲基-3β-(4′-甲基苯基)-降托烷)孵育冷冻切片，以便标记仍然存在于纹状体中的多巴胺转运体数量，这作为功能性神经末端的数量的指示。罗替戈汀剂量依赖性地改善了神经元及其神经末端的存活率。这是物质神经保护性质的清晰指示(图1和2)。

实施例4：急性MPTP模型(包括细胞凋亡)

出于中毒的目的，将80mg/kg神经毒素1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢-吡啶(MPTP)给予小鼠(批量为20mg/kg，间隔为两小时)，其能导致约50到60％的黑质神经元变性。约16小时前，分别以0.3、1或3mg/kg的剂量给予罗替戈汀，作为所谓的“缓释制剂”。然后，当给予MPTP时，扩散和吸收潜伏期致使最理想地得到了罗替戈汀。24小时后处死动物并对其脑进行固定。脑切片用FluoroJade染色以识别变性细胞。酪氨酸羟化酶的免疫组化标记有助于识别多巴胺能神经元。酪氨酸羟化酶染色在治疗和未治疗动物中没有显示任何区别，FluoroJade染色显示了大量变性神经元，然而，神经元没有被完全除去，这暗示细胞破坏出现了细胞凋亡。施用罗替戈汀后，变性神经元的数量约为50％以下，这进一步说明了物质的神经保护性(表1)。

实施例5：测定运动UPDRS得分

使用下表2给出的标准18至31对患者进行检测来确定运动UPDRS得分(UPDRS得分的部分III)，将每个标准得到的分值(pointscores)分别加在一起。

III.运动测定

18.语言

□0-正常。

□1-轻度丧失表达、发音和/或音量。

□2-单调，急促不清但可以理解；适度损伤。

□3-显著损伤，理解困难。

□4-难以理解。

19.面部表情

□0-正常。

□1-最小变化的模仿，能是正常的“无表情面孔”。

□2-轻度但的确是面部表情异常减少。

□3-适度减少的模仿，嘴唇有时张开。

□4-有严重或完全失去表情的隐蔽(masked)或僵硬(fixed)面容，嘴唇张开达7mm。

20.静止震颤：(G＝面部，RH＝右手，LH＝左手，RF＝右脚，LF＝左脚)

G RH LH RF LF

□□ □ □ □ 0-没有。

□□ □ □ □ 1-轻度但不常出现。

□□ □ □ □ 2-幅度轻且持久；或中等幅度

                但间歇性出现。

□□ □ □ □ 3-中等幅度且在大部分时间中出现。

□□ □ □ □ 4-幅度显著且在大部分时间中出现。

21.手的动作或姿势性震颤：(R＝右，L＝左)

R L

□□ 0-没有。

□□ 1-轻度，有动作。

□□ 2-中等幅度，有动作。

□□ 3-中等幅度，保持一个姿势

       并有动作。

□□ 4-幅度显著，防碍进食。

22.强直：(由呈坐姿患者的主要关节的被动运动判定。可以忽略钝齿轮)。(N＝颈，ROE＝右上肢，LOE＝左上肢，RUE＝右下肢，LUE＝左下肢)。

N ROE LOE RUE LUE

□ □ □  □  □ 0-没有。

□ □ □  □  □ 1-轻度或仅当被镜相或

                   其它运动激活时可检测到。

□ □ □  □  □ 2-轻度到中度。

□ □ □  □  □ 3-显著，但仍可达到

                   全活动度。

□ □ □  □  □ 4-严重，难以进行所有运动。

23.手指轻叩：(患者最大幅度地快速连续轻叩拇指和食指且两手分开)。(R＝右，L＝左)。

R L

□□ 0-正常。

□□ 1-轻度缓慢和/或幅度下降。

□□ 2-中度受限。明显且过早疲劳。

       运动可以偶尔被中断。

□□ 3-严重受限。运动的延缓启动或

       连续运动的中断。

□□ 4-几乎不能完成任务。

24.手部运动：(患者以最大的幅度快速连续地开合手且两手分开)。(R＝右，L＝左)。

R L

□□ 0-正常。

□□ 1-轻度缓慢和/或幅度下降。

□□ 2-中度受限。明显且过早疲劳。

       运动可以偶尔被中断。

□□ 3-严重受限。运动的延缓启动

       或连续运动的中断。

□□ 4-几乎不能完成任务。

25.手的快速交替运动：(手的内转/反掌运动，垂直或水平，最大幅度地，两手同时)。

R L

□□ 0-正常。

□□ 1-轻度缓慢和/或幅度下降。

□□ 2-中度受限。明显且过早疲劳。

       运动可以偶尔被中断。

□□ 3-严重受限。运动的延缓启动

       或连续运动的中断。

□□ 4-几乎不能完成任务。

26.腿的灵活性：(患者的脚根快速连续地点地由此提升整个腿部。幅度应当至少为7.5cm)。

R L

□□ 0-正常。

□□ 1-轻度缓慢和/或幅度下降。

□□ 2-中度受限。明显且过早疲劳。

       运动可以偶尔被中断。

□□ 3-严重受限。运动的延缓启动

       或连续运动的中断。

□□ 4-几乎不能完成任务。

27.从椅子上站起：(患者试图从直背木制或金属椅上站起，手臂交叠在胸部)。

□ 0-正常。

□ 1-缓慢，可能需要不止一次的尝试。

□ 2-用把手将自己推起。

□ 3-倾向于后退并可能有一些尝试，但不帮助还能站起。

□ 4-没有帮助就不能站起。

28.姿势：

□ 0-正常直立。

□ 1-未完全直立，轻度弯腰***；对老人来说能是正常的。

□ 2-中度弯腰***，的确不正常；能向一侧轻度倾斜。

□ 3-有驼背的严重弯腰***；能向一侧中度倾斜。

□ 4-显著弯曲，有非常不正常的***。

29.步态

□ 0-正常。

□ 1-走路缓慢，有很短的几步可能拖着脚走，但不是慌张步态或前冲步态。

□ 2-走路困难，但需要很少或不需要帮助；能是轻度慌张步态，短促步伐或前冲步态。

□ 3-严重的步态障碍，需要帮助。

□ 4-在也没有帮助下完全不能走路。

30.姿势稳定性：(对由牵拉患者的肩膀引起的突然后移有反应，同时患者是直立的且眼睛张开和脚轻微分开。预备患者。)

□ 0-正常。

□ 1-后退，但在没有帮助下可独立恢复。

□ 2-没有姿势反应；如果不被检查者抓住就会摔倒。

□ 3-非常不稳，倾向于本能地失去平衡。

□ 4-没有帮助就不能站立。

31.身体运动过慢或运动功能减退：(通常是缓慢、迟疑、减少摆臂、小幅运动和一般运动不能的组合。)

□ 0-没有。

□ 1-最低限度的缓慢，运动是有意的；对一些人来说是正常的。可能减小了幅度

□ 2-轻度缓慢和运动不能，其明显是异常的。或者也能是幅度下降。

□ 3-中度的缓慢和运动不能或幅度下降。

□ 4-显著的缓慢、运动不能或幅度下降。

实施例6：前药在体外转化为活性物质

通过差速离心由人、猴、狗、猫或小鼠的肝细胞匀浆得到包含主要代谢酶的微粒体部分；也能得到细胞质(cytoplasmatic)部分。将亚细胞部分混悬在缓冲液中，这样就得到了有确定蛋白含量的溶液。向其中加入1μm待测前药后，在37℃下孵育60分钟。然后通过HPLC/UV或也能通过HPLC/MS对罗替戈汀进行定量，并涉及用量。检测浓度或时序用于详细分析。

Claims (14)

1.罗替戈汀或其盐和前药用于生产用于治疗或预防在与多巴胺能细胞破坏增加有关的疾病中的多巴胺能细胞破坏的药物的用途。

2.根据权利要求1的用途，其中多巴胺能细胞破坏与帕金森病有关。

3.根据前述权利要求任意之一的用途，其中在选自以下的个体中进行预防性治疗：

(a)没有帕金森病症状但是发展为帕金森病的危险性高的个体，或者

(b)有帕金森病早期症状的个体，其中帕金森病四个主要症状(强直、静止性震颤、运动过慢、***不稳定)中的至少三个还没出现或仅部分出现。

4.根据权利要求3的用途，其中个体可以具有以下早期临床症状中的一个或多个：嗅觉障碍、抑郁、“REM睡眠行为障碍”型睡眠障碍、顽强便秘和短期运动异常。

5.根据权利要求3的用途，其中个体出现PARK基因突变和/或α-Synuclein或神经黑素模式的变形。

6.根据前述权利要求任意之一的用途，其中个体在开始给药前，黑质中多巴胺能细胞损失小于60％。

7.根据前述权利要求任意之一的用途，其中个体在开始给药前，UPDRS得分小于9。

8.根据前述权利要求任意之一的用途，其中个体的Hhn-Yahr得分为0或1。

9.根据前述权利要求任意之一的用途，其中提供药物用于胃肠外、经皮或粘膜给予。

10.根据前述权利要求任意之一的用途，其中罗替戈汀以每天0.05到50mg的剂量给予。

11.根据前述权利要求任意之一的用途，其中前药选自酯、氨基甲酸酯、缩醛、缩酮、磷酸酯、膦酸酯、硫酸酯、磺酸酯和甲硅烷基醚。

12.根据权利要求1至10任意之一的用途，其中前药选自碳酸酯、酰氧基烷基醚、硫代羰基酯、氧基硫代羰基酯、硫代氨基甲酸酯和醚。

13.用于诊断和预防性治疗帕金森病的试剂盒，其含有：

(a)能在早期或无症状期诊断帕金森病和/或发展为帕金森病的素因的诊断剂，以及

(b)含有罗替戈汀、其盐或前药的药物制剂。

14.根据权利要求13的试剂盒，其中诊断剂(a)选自

(i)检测神经黑素的试剂或诊断试剂盒，

(ii)检测信号素3的试剂或诊断试剂盒，

(iii)检测α-Synuclein和/或其聚集物的试剂或诊断试剂盒，或

(iv)遗传检测与出现帕金森病有关的突变和/或与更频繁出现帕金森病有关的等位基因的试剂或诊断试剂盒。

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