CN1880328A - 贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种贯叶连翘金丝桃苷和金丝桃素的制备方法，涉及金丝桃苷和金丝桃素药用活性成分的制备方法本发明综合利用我国丰富的贯叶连翘果实，同时制备出总收得率和产品纯度均高的金丝桃苷和金丝桃素两种药用活性成分，生产成本低；在生产过程中，实现了多种溶剂如乙醇***的回收和再次反复使用；实现了反胶束萃取剂及吸附树脂的再生和反复使用采用本发明方法制备出的植物生物活性物质，可广泛应用于清热解毒收敛止血利尿及抑郁治疗等药物中。
Description
一、技术领域
本发明属于药物活性成分的制备技术领域，特别涉及金丝桃苷和金丝桃素药用活性成分的制备方法。
二、背景技术
研究表明：用于清热解毒、收敛止血、利尿和抑郁治疗等药物中的主要活性成分，是金丝桃素和金丝桃苷。实践证明：金丝桃苷具有抗过敏、抗炎、解痉、利尿、显著止咳、降血压和胆固醇及肿瘤等作用，特别具有镇痛及保护心脏的功能，对预防糖尿病性白内障有促进作用等；金丝桃素具有调节人体昼夜节律、改善睡眠、松弛中枢神经等功能，对爱滋病毒、单纯疱疹病毒、副流感病毒、牛痘病毒等有抑制作用，有消炎镇痛作用，还可用于治疗C型肝炎及失忆症、预防和治疗痴呆症等。因此，制备金丝桃苷和金丝桃素对预防和治疗人类疾病、保障人体健康有非常重要的作用。
贯叶连翘中的金丝桃苷含量高达1.257％，金丝桃素的含量为0.03～0.38％，是提取金丝桃苷和金丝桃素的主要原料。我国贯叶连翘主要产于四川、陕西、河北、山东、江西、江苏等地，分布广泛、资源丰富，有利于金丝桃苷和金丝桃素的制备。
现有制备金丝桃苷的方法，如2002年10月29日申请的公开号为CN1493578的中国专利，以干燥的黄蜀葵花粉为原料，经亲水溶剂提取、柱层析、真空干燥等工艺制成；又如2003年9月3日申请的公开号为CN123032的中国专利，以吴茱萸药材为原料，经繁杂的工艺制成。现有制备金丝桃苷的方法，均未利用我国资源丰富的贯叶连翘，金丝桃苷提取率低，产品中金丝桃苷含量较低，生产成本高，在生产中有大量废液排放，既未综合利用资源又污染环境。
现有采用植物贯叶连翘为原料制备金丝桃素的方法有：如1998年9月9日申请的公开号CN1247071的中国专利采用的是加碱溶液煮沸、过滤、乙醇洗脱等工艺；如2002年6月7日申请的公开号为CN1385412的中国专利采用碱溶液浸泡、煮沸、过滤、干燥、水醇法精制等工艺；如2002年7月18日申请的公开号为1392128中国专利采用极性有机溶剂提取、两相萃取、酸沉等工艺；如2003年7月16日申请的公开号为CN1473812的中国专利采用机械榨汁、碱溶液提取等工艺。现有采用植物贯叶连翘制备金丝桃素的方法，只是制备单一的金丝桃素，没有同时制备金丝桃苷，未能充分利用我国丰富的贯叶连翘资源，在生产过程中还有大量的废液排放，污染环境。
三、发明内容
本发明的目的是针对现有金丝桃苷和金丝桃素制备方法的不足之处，提供一种贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法。本发明的特点是用贯叶连翘的果实为原料，同时制备金丝桃苷和金丝桃素。因此，本发明具有充分利用我国丰富的贯叶连翘资源，在生产过程中，重复利用萃取介质、树脂及溶剂等，产品纯度高，可用作深加工的原料，产品收得率高，生产成本较低，废液排放大为减少，有利于环境保护等特点。
本发明的目的是这样实现的：一种贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法，其特点是：用贯叶连翘果实为原料，同时制备金丝桃苷和金丝桃素。其制备原理是金丝桃苷又名槲皮素-3-O-β-D毗喃半乳糖苷，田基黄甙，海棠因，槲皮素-3-半乳糖甙，为淡黄色针状晶体，熔点227℃-230℃，分子式为C21H20O12，分子量为464.37，其结构如下：
金丝桃苷是黄酮醇苷化合物，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂中，因此可用这些有机溶剂提取；溶解于有机溶剂中的金丝桃苷，可被吸附树脂吸附，与其它杂质实现部分分离，实现金丝桃苷的部分纯化；在碱性条件下，金丝桃苷带负电荷。带负电荷的金丝桃苷可与带正电荷、由表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和微量水构成的反胶束形成静电相互作用，因而被萃取“增溶”进入反胶束中，与其它未带电荷的杂质分离；以水溶液作反萃取剂，破坏反胶束，使“增溶”的金丝桃苷反萃取进入水相；将反萃取液真空浓缩及冷冻干燥，即获得金丝桃苷产品。
金丝桃素，又名金丝桃蒽酮，海帕里辛，化学名为4，4，5，5，7，7-六羟基-2，2-二甲基-中位-萘并二蒽酮，分子式为C30H16O6；分子量504.43。其结构式如下：
二蒽酮类化合物溶于乙醇、甲醇、氯仿、***、苯、石油醚、吡啶、丙酮、硫酸溶液、盐酸溶液及氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化铵等溶液。可用这些溶剂提取。
使用反胶束分离金丝桃苷时，由于金丝桃素分子不带电荷且分子体积大，不能与反胶束形成静电相互作用，因此，与金丝桃苷分离。用特种吸附树脂对金丝桃素进行选择性吸附，然后洗脱，可进一步纯化金丝桃素。
一种贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法，其具体的方法步骤如下：
(1)连翘浸膏的制备
将贯叶连翘果实粉碎成连翘粉后，按连翘粉重量与85～95％的乙醇体积的比为1∶10～20的比例，在连翘粉中加85～95％的乙醇，在70～85℃温度下，回流提取4～6小时，再进行过滤，收集滤液，对滤渣，按滤渣重量与70～80％的乙醇体积的比为1∶5～10的比例，用70～80％的乙醇再进行回流提取2～3小时后，再过滤并收集滤液，弃滤渣。然后，将两次收集的滤液放置于蒸发器中，在-0.08～-0.05MPa真空下浓缩成贯叶连翘浸膏并回收的乙醇。对回收蒸馏的乙醇用酒精度计测定其中乙醇浓度，再用无水乙醇调节成乙醇浓度为85～90％的溶液，再次用于制备连翘浸膏。
(2)金丝桃苷浓缩液的制备
①洗涤
在第(1)步制备的连翘浸膏中，加入***搅拌洗涤，溶解连翘浸膏中的脂类物质，再进行离心分离；分别收集脱脂连翘浸膏和***洗涤液。对脱脂连翘浸膏再次进行***搅拌洗涤及再分离，如此反复进行2～4次，制备出脱脂连翘浸膏。每次加入的***洗涤液，按连翘浸膏的重量与***的体积的比例为1∶3～5。对每次收集的***洗涤液，合并后用于制备金丝桃素，对制备出脱脂连翘浸膏，用于下一步提取吸附金丝桃苷。
②吸附
对第(2)-①步制备的脱脂连翘浸膏，在带搅拌器的液体回流装置中，用沸腾蒸馏水重复进行2～4次搅拌提取，每次提取时间为15～30分钟，收集金丝桃苷提取液。然后，将每次收集的金丝桃苷提取液合并后，待其温度降至40～50℃时，按吸附树脂重量与金丝桃苷提取液体积比为1∶15～25的比例，在金丝桃苷提取液中，加入吸附树脂如HPD600或HZ-841，搅拌吸附30～60分钟，弃滤液后制备出吸附有金丝桃苷的HPD600或HZ-841吸附树脂。
③洗脱
对第(2)-②步制备出的吸附有金丝桃苷的HPD600或HZ-841吸附树脂，用4～6倍重量的蒸馏水进行洗涤后，再按吸附有金丝桃苷的HPD600或HZ-841吸附树脂重量与70～80％乙醇的体积比为1∶10～15的比例，用70～80％的乙醇进行搅拌洗脱，搅拌洗脱时间为30～45分钟，再进行过滤，并分别收集滤液和滤渣，其滤渣为洗脱金丝桃苷后的HPD600或HZ-841吸附树脂。对吸附树脂，再按吸附树脂重量与70～80％乙醇的体积比为1∶10～15的比例，用70～80％的乙醇再次进行搅拌洗脱，再次进行过滤，再次分别收集滤液和滤渣，如此重复2～4次。最后对进行了2～4次搅拌洗涤后的吸附树脂滤渣进行再生。每次收集的滤液均为金丝桃苷溶液，对每次收集的金丝桃苷溶液合并后进行下一步的真空浓缩。
④浓缩
对第(2)-③步收集并合并的金丝桃苷溶液，在真空浓缩器中、在-0.08～-0.05MPa下进行真空浓缩，待浓缩成膏状后，再用pH值为8.50～9.0的蒸馏水溶解，然后进行过滤除去杂质，制备出金丝桃苷浓度为2.31～2.80％的金丝桃苷浓缩液。
⑤吸附树脂再生
将第(2)-③步收集的洗脱金丝桃苷后的HPD600或HZ-841吸附树脂，先用重量为10～15倍的、pH值为5～6的水溶液搅拌洗涤再生，搅拌洗涤时间为30～60分钟，后进行过滤，弃滤液，收集再生吸附树脂滤渣，可再次用于处理金丝桃苷提取液。
(3)萃取剂的制备
按十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)阳离子表面活性剂重量∶正辛烷体积∶正庚烷体积∶蒸馏水体积为1∶27～54∶3～6∶0.3～0.6的比例，在CTAB阳离子表面活性剂中，先加入正辛烷和正庚烷，加热搅拌，其加热温度为40～60℃，后加入蒸馏水，继续搅拌至透明状，就制备出CTAB浓度为0.05～0.1mol/L的CTAB反胶束萃取剂。
(4)萃取分离
①萃取分离
在第(2)-④步制备的金丝桃苷浓缩液中，加入第(3)步制备的CTAB反胶束萃取剂，其金丝桃苷浓缩液∶CTAB反胶束萃取剂的体积比为1∶3～5，混合后，在转速为200～300转/分的低转速下搅拌萃取1～1.5小时，然后用离心机在6500～8000转/分的高转速下，离心分离10～20分钟，混合液分离为明显的上、下两相，分别收集上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液及下相金丝桃苷第一次萃余溶液。
②再萃取分离
在第(4)-①步收集的下相金丝桃苷第一次萃余溶液中，又加入第(3)步制备的CTAB反胶束萃取剂，其金丝桃苷第一次萃余溶液体积∶CTAB反胶束萃取剂的体积比为1∶1～3，混合后，在转速为200～300转/分的低转速下，再次搅拌萃取1～1.5小时，然后再用离心机在6500～8000转/分的高速下，再次离心分离10～20分钟，混合液分离为明显的上、下两相，再次收集上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液及下相金丝桃苷第二次萃余溶液。下相金丝桃苷第二次萃余溶液用于制备金丝桃素。
(5)金丝桃苷冻干粉的制备
①水反萃取分离
在第(4)-①和②步两次收集的上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液中，按水与萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液的体积比为1∶1～3，加入水溶液反萃取剂并混合，先在转速为200～300转/分的转速下进行搅拌反萃取15～30分钟，后用离心机在6500～8000转/分的高速下，离心分离30～60分钟，混合液明显分为上、下两相，分别收集上相反萃取后的反胶束萃取液及下相反萃取后的金丝桃苷溶液，对上相反萃取后的反胶束萃取液进行再生。
②浓缩冻干
对第(5)-①步收集的下相反萃取后的金丝桃苷溶液，先用蒸发器在-0.08～-0.05MPa真空进行浓缩，后用冻干机在-50～-60℃低温下，冻成金丝桃苷含量为83.6～87.3％、水份≤7.26～8.76％、灰分≤0.44～8.94％的金丝桃苷冻干粉。
③反胶束萃取液再生
对第(5)-①步收集的上相反萃取后的反胶束萃取液，按0.2～0.5mol/L碘化钾(KI)溶液与反胶束萃取液的体积比为1∶100～150的比例加入0.2～0.5mol/LKI溶液混合，在转速为200～300转/分的转速下，进行搅拌处理30～60分钟，然后在4000～6000转/分转速下，离心分离15～30分钟，分别收集上、下层溶液，收集的上层反胶束萃取液，可再次用于萃取金丝桃苷溶液，节约反胶束资源；收集的下层的KI溶液，补充适量的KI，使其浓度为0.2～0.5mol/L，可再次用作反胶束萃取液再生。
(6)金丝桃素冻干粉的制备
①吸附洗涤
对第(2)-①步收集合并的***洗涤液，用温度为50～65℃的水蒸汽蒸馏回收***后，制备出金丝桃素浸膏。然后用0.5～1％NaHCO3水溶液溶解金丝桃素浸膏，制备出含金丝桃素的NaHCO3水溶液，金丝桃素浸膏重量与0.5～1％NaHCO3水溶液体积的比例为1∶15～25。将制备出的含金丝桃素的NaHCO3水溶液与第(4)-②步收集的下相金丝桃苷第二次萃余溶液合并为金丝桃素溶液，然后在金丝桃素溶液中加入非极性吸附树脂(如HPD100或HPD200等)，在转速为200～300转/分的速度下，进行搅拌吸附，搅拌吸附的时间为1～2小时，非极性吸附树脂重量与金丝桃素溶液的体积比例为1∶10～15。然后过滤除去滤液后，收集吸附有金丝桃素的吸附树脂，再用pH值为8.50～9.50、浓度为90～95％的乙醇，在200～300转/分搅拌速度下进行搅拌洗脱，搅拌洗脱时间为30～60分钟，过滤，分别收集洗脱液滤液和吸附树脂滤渣，对收集的吸附树脂滤渣，再次用90～95％的乙醇进行搅拌洗脱，吸附树脂重量与乙醇体积的比例均为1∶10～15，再次过滤并分别收集滤液和滤渣，如此反复进行2～4次。各次收集的洗脱液滤液合并后称为金丝桃素纯化溶液，对金丝桃素纯化溶液进行下一步浓缩冻干；对进行了2～4次洗脱金丝桃素后的吸附树脂滤渣，进行再生处理。
②浓缩冻干
对第(6)-①步收集的金丝桃素纯化溶液，先用蒸发器在-0.08～-0.05Mpa的真空下，回收乙醇，浓缩成膏状金丝桃素，然后用0.5～1％的NaHCO3水溶液对膏状金丝桃素进行溶解，溶解成为金丝桃素NaHCO3水溶液，膏状金丝桃素重量与0.5～1％NaHCO3水溶液体积的比例为1∶20～30。对金丝桃素的NaHCO3水溶液，再进行过滤除去杂质，对其滤液用冻干机，在-50～-60℃的低温下冻成金丝桃素含量为22.82～26.35％的金丝桃素冻干粉。
③吸附树脂再生
对第(6)-①步收集的洗脱金丝桃素的HPD100或HPD200吸附树脂，用pH值为5～6的水溶液搅拌洗涤，再进行过滤分离。弃滤液，收集吸附树脂滤渣，对收集的吸附树脂再次用pH值为5～6的水溶液搅拌洗涤，再次过滤并收集吸附树脂，如此反复进行2～4次，吸附树脂重量与pH值为5～6的水溶液体积的比例每次均为1∶10～20，每次搅拌洗涤的时间为30～60分钟。对经过2～4次搅拌洗涤后的吸附树脂滤渣，可再次使用。
本发明采用上述技术方案后，主要具有以下特点：
1.从贯叶连翘果实中，同时提制备出金丝桃苷和金丝桃素两种药用活性成分；综合利用了我国丰富的贯叶连翘资源；
2.制备出产品的总收得率和产品纯度均高，分别是：金丝桃苷产品的总收得率为90.1～93.6％，产品纯度83.6～87.3％；金丝桃素产品的总收得率为85.7～91.5％产品纯度22.83％～29.63％，生产成本低；
3.在生产过程中，实现了多种溶剂如乙醇、***的回收和再次反复使用；实现反胶束萃取剂及吸附树脂的再生和反复使用，充分利用资源，减少废液排放，有利于环境保护。
采用本发明方法制备出的药用活性产品，为自然植物的绿色产品，可广泛应用于清热解毒、收敛止血、利尿和抑郁治疗等药物中，对预防和治疗人类疾病，保障人体健康有非常重要的作用。
四、具体实施方式
下面结合具体实施方式，进一步说明本发明。
实施例1
一种贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法，其具体的方法步骤如下：
(1)连翘浸膏的制备
将贯叶连翘果实粉碎成连翘粉后，按连翘粉重量与85％的乙醇体积的比为1∶10的比例，在连翘粉中加85％的乙醇，在70℃温度下，回流提取4小时，再进行过滤，收集滤液。对滤渣，按滤渣重量与70％的乙醇体积的比为1∶5的比例，用70％的乙醇再进行回流提取2小时后，再过滤并收集滤液，弃滤渣，然后，将两次收集的滤液放置于蒸发器中，在-0.08MPa真空下浓缩成贯叶连翘浸膏并回收的乙醇。对回收蒸馏的乙醇用酒精度计测定其中乙醇浓度，再用无水乙醇调节成乙醇浓度为85％的溶液，再次用于制备连翘浸膏。
(2)金丝桃苷浓缩液的制备
①洗涤
在第(1)步制备的连翘浸膏中，加入***搅拌洗涤，溶解连翘浸膏中的脂类物质，再进行离心分离；分别收集脱脂连翘浸膏和***洗涤液。对脱脂连翘浸膏再次进行***搅拌洗涤及再分离，如此反复进行2次，制备出脱脂连翘浸膏。每次加入的***洗涤液，按连翘浸膏的重量与***的体积的比例为1∶3。对每次收集的***洗涤液，合并后用于制备金丝桃素，对制备出脱脂连翘浸膏，用于下一步提取吸附金丝桃苷。
②吸附
对第(2)-①步制备的脱脂连翘浸膏，在带搅拌器的液体回流装置中，用沸腾蒸馏水重复进行2次搅拌提取，每次提取时间为15分钟，收集金丝桃苷提取液。然后，将每次收集的金丝桃苷提取液合并后，待其温度降至40℃时，按吸附树脂重量与金丝桃苷提取液体积比为1∶15的比例，在金丝桃苷提取液中，加入吸附树脂如HPD600，搅拌吸附30分钟，弃滤液后制备出吸附有金丝桃苷的HPD600吸附树脂。
③洗脱
对第(2)-②步制备出的吸附有金丝桃苷的HPD600吸附树脂，用4倍重量的蒸馏水进行洗涤后，再按吸附有金丝桃苷的HPD600吸附树脂重量与70％乙醇的体积比为1∶10的比例，用70％的乙醇进行搅拌洗脱，搅拌洗脱时间为30分钟，再进行过滤，并分别收集滤液和滤渣，其滤渣为洗脱金丝桃苷后的HPD600吸附树脂。对吸附树脂，再按吸附树脂重量与70％乙醇的体积比为1∶10的比例，用70％的乙醇再次进行搅拌洗脱，再次进行过滤，再次分别收集滤液和滤渣。最后对进行了2次搅拌洗涤后的吸附树脂滤渣进行再生。2次收集的滤液均为金丝桃苷溶液，对2次收集的金丝桃苷溶液合并后进行下一步的真空浓缩。
④浓缩
对第(2)-③步收集并合并的金丝桃苷溶液，在真空浓缩器中、在-0.08MPa下进行真空浓缩，待浓缩成膏状后，再用pH值为8.50的蒸馏水溶解，然后进行过滤除去杂质，制备出金丝桃苷浓度为2.31％的金丝桃苷浓缩液。
⑤吸附树脂再生
将第(2)-③步收集的洗脱金丝桃苷后的HPD600吸附树脂，先用重量为10倍的、pH值为5的水溶液搅拌洗涤再生，搅拌洗涤时间为30分钟，后进行过滤，弃滤液，收集再生吸附树脂滤渣，可再次用于处理金丝桃苷提取液。
(3)萃取剂的制备
按十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)阳离子表面活性剂重量∶正辛烷体积∶正庚烷体积∶蒸馏水体积为1∶54∶6∶0.6的比例，在CTAB阳离子表面活性剂中，先加入正辛烷和正庚烷，加热搅拌，其加热温度为40℃，后加入蒸馏水，继续搅拌至透明状，就制备出CTAB浓度为0.05mol/L的CTAB反胶束萃取剂。
(4)萃取分离
①萃取分离
在第(2)-④步制备的金丝桃苷浓缩液中，加入第(3)步制备的CTAB反胶束萃取剂，其金丝桃苷浓缩液∶CTAB反胶束萃取剂的体积比为1∶3，混合后，在转速为200转/分的转速下搅拌萃取1小时，然后用离心机在6500转/分的高转速下，离心分离10分钟，混合液分离为明显的上、下两相，分别收集上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液及下相金丝桃苷第一次萃余溶液；
②再萃取分离
在第(4)-①步收集的下相金丝桃苷第一次萃余溶液中，又加入第(3)步制备的CTAB反胶束萃取剂，其金丝桃苷第一次萃余溶液体积∶CTAB反胶束萃取剂的体积比为1∶1，混合后，在转速为200转/分的低转速下，再次搅拌萃取1小时，然后再用离心机在6500转/分的高速下，再次离心分离10分钟，混合液分离为明显的上、下两相，再次收集上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液及下相金丝桃苷第二次萃余溶液。下相金丝桃苷第二次萃余溶液用于制备金丝桃素。
(5)金丝桃苷冻干粉的制备
①水反萃取分离
在第(4)-①和②步两次收集的上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液中，按水与萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液的体积比为1∶1，加入水溶液反萃取剂并混合，先在转速为200转/分的低速下进行搅拌反萃取15分钟，后用离心机在6500转/分的高速下，离心分离30分钟，混合液明显分为上、下两相，分别收集上相反萃取后的反胶束萃取液及下相反萃取后的金丝桃苷溶液，对上相反萃取后的反胶束萃取液进行再生。
②浓缩冻干
对第(5)-①步收集的下相反萃取后的金丝桃苷溶液，先用蒸发器在-0.08MPa真空进行浓缩，后用冻干机在-50℃低温下，冻成金丝桃苷含量为83.6％、水份≤7.26％、灰分≤0.44％的金丝桃苷冻干粉；
③反胶束萃取液再生
对第(5)-①步收集的上相反萃取后的反胶束萃取液，按0.2mol/L碘化钾(KI)溶液与反胶束萃取液的体积比为1∶100的比例加入0.2mol/L KI溶液混合，在转速为200转/分的转速下，进行搅拌处理30分钟，然后在4000转/分转速下，离心分离15分钟，分别收集上、下层溶液，收集的上层反胶束萃取液，可再次用于萃取金丝桃苷溶液，节约反胶束资源；收集的下层的KI溶液，补充适量的KI，使其浓度为0.2mol/L，可再次用作反胶束萃取液再生。
(6)金丝桃素冻干粉的制备
①吸附洗涤
对第(2)-①步收集合并的***洗涤液，用温度为50℃的水蒸汽蒸馏回收***后，制备出金丝桃素浸膏。然后用0.5％NaHCO3水溶液溶解金丝桃素浸膏，制备出含金丝桃素的NaHCO3水溶液，金丝桃素浸膏重量与0.5％NaHCO3水溶液体积的比例为1∶15。将制备出的含金丝桃素的NaHCO3水溶液与第(4)-②步收集的下相金丝桃苷第二次萃余溶液合并为金丝桃素溶液，然后在金丝桃素溶液中加入非极性吸附树脂HPD100，在转速为200转/分速度下，进行搅拌吸附，搅拌吸附的时间为1小时，非极性吸附树脂重量与金丝桃素溶液的体积比例为1∶10。然后过滤除去滤液后，收集吸附有金丝桃素的吸附树脂，再用pH值为8.50、浓度为90％的乙醇，在200转/分的搅拌速度下进行搅拌洗脱，搅拌洗脱时间为30分钟，过滤，分别收集洗脱液滤液和吸附树脂滤渣，对收集的吸附树脂滤渣，再次用90％的乙醇进行搅拌洗脱，吸附树脂重量与乙醇体积的比例均为1∶10，再次过滤并分别收集滤液和滤渣。2次收集的洗脱液滤液合并后称为金丝桃素纯化溶液，对金丝桃素纯化溶液进行下一步浓缩冻干；对进行了2次洗脱金丝桃素后的吸附树脂滤渣，进行再生处理。
②浓缩冻干
对第(6)-①步收集的金丝桃素纯化溶液，先用蒸发器在-0.08Mpa的真空下，回收乙醇，浓缩成膏状金丝桃素，然后用0.5％的NaHCO3水溶液对膏状金丝桃素进行溶解，溶解成为金丝桃素NaHCO3水溶液，膏状金丝桃素重量与0.5％NaHCO3水溶液体积的比例为1∶20。对金丝桃素的NaHCO3水溶液，再进行过滤除去杂质，对其滤液用冻干机，在-50℃的低温下冻成金丝桃素含量为22.82％的金丝桃素冻干粉。
③吸附树脂再生
对第(6)-①步收集的洗脱金丝桃素的HPD100吸附树脂，用pH值为5的水溶液搅拌洗涤，再进行过滤分离。弃滤液，收集吸附树脂滤渣，对收集的吸附树脂再次用pH值为5的水溶液搅拌洗涤，再次过滤并收集吸附树脂，如此反复进行2次，吸附树脂重量与pH值为5的水溶液体积的比例每次均为1∶10，每次搅拌洗涤的时间为30分钟。对经过2次搅拌洗涤后的吸附树脂滤渣，可再次使用。
实施例2
一种贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法，其具体的方法步骤如下：
(1)连翘浸膏的制备
将贯叶连翘果实粉碎成连翘粉后，按连翘粉重量与95％的乙醇体积的比为1∶20的比例，在连翘粉中加95％的乙醇，在85℃温度下，回流提取6小时，再进行过滤，收集滤液。对滤渣，按滤渣重量与80％的乙醇体积的比为1∶10的比例，用80％的乙醇再进行回流提取3小时后，再过滤并收集滤液，弃滤渣。然后，将两次收集的滤液放置于蒸发器中，在-0.05MPa真空下浓缩成贯叶连翘浸膏并回收的乙醇。对回收蒸馏的乙醇用酒精度计测定其中乙醇浓度，再用无水乙醇调节成乙醇浓度为90％的溶液，再次用于制备连翘浸膏。
(2)金丝桃苷浓缩液的制备
①洗涤
在第(1)步制备的连翘浸膏中，加入***搅拌洗涤，溶解连翘浸膏中的脂类物质，再进行离心分离；分别收集脱脂连翘浸膏和***洗涤液。对脱脂连翘浸膏再次进行***搅拌洗涤及再分离，如此反复进行4次，制备出脱脂连翘浸膏。每次加入的***洗涤液，按连翘浸膏的重量与***的体积的比例为1∶5。对每次收集的***洗涤液，合并后用于制备金丝桃素，对制备出脱脂连翘浸膏，用于下一步提取吸附金丝桃苷。
②吸附
对第(2)-①步制备的脱脂连翘浸膏，在带搅拌器的液体回流装置中，用沸腾蒸馏水重复进行4次搅拌提取，每次提取时间为30分钟，收集金丝桃苷提取液。然后，将每次收集的金丝桃苷提取液合并后，待其温度降至50℃时，按吸附树脂重量与金丝桃苷提取液体积比为1∶25的比例，在金丝桃苷提取液中，加入吸附树脂如HZ-841，搅拌吸附60分钟，弃滤液后制备出吸附有金丝桃苷的HZ-841吸附树脂。
③洗脱
对第(2)-②步制备出的吸附有金丝桃苷的HZ-841吸附树脂，用6倍重量的蒸馏水进行洗涤后，再按吸附有金丝桃苷的HZ-841吸附树脂重量与80％乙醇的体积比为1∶15的比例，用80％的乙醇进行搅拌洗脱，搅拌洗脱时间为45分钟，再进行过滤，并分别收集滤液和滤渣，其滤渣为洗脱金丝桃苷后的HZ-841吸附树脂。对吸附树脂，再按吸附树脂重量与80％乙醇的体积比为1∶15的比例，用80％的乙醇再次进行搅拌洗脱，再次进行过滤，再次分别收集滤液和滤渣，如此重复4次。最后对进行了4次搅拌洗涤后的吸附树脂滤渣进行再生。4次收集的滤液均为金丝桃苷溶液，对4次收集的金丝桃苷溶液合并后进行下一步的真空浓缩。
④浓缩
对第(2)-③步收集并合并的金丝桃苷溶液，在真空浓缩器中、在-0.05MPa下进行真空浓缩，待浓缩成膏状后，再用pH值为9.0的蒸馏水溶解，然后进行过滤除去杂质，制备出金丝桃苷浓度为2.80％的金丝桃苷浓缩液。
⑤吸附树脂再生
将第(2)-③步收集的洗脱金丝桃苷后的HZ-841吸附树脂，先用重量为15倍的、pH值为6的水溶液搅拌洗涤再生，搅拌洗涤时间为60分钟，后进行过滤，弃滤液，收集再生吸附树脂滤渣，可再次用于处理金丝桃苷提取液。
(3)萃取剂的制备
按十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)阳离子表面活性剂重量∶正辛烷体积∶正庚烷体积∶蒸馏水体积为1∶27∶3∶0.6的比例，在CTAB阳离子表面活性剂中，先加入正辛烷和正庚烷，加热搅拌，其加热温度为60℃，后加入蒸馏水，继续搅拌至透明状，就制备出CTAB浓度为0.1mol/L的CTAB反胶束萃取剂。
(4)萃取分离
①萃取分离
在第(2)-④步制备的金丝桃苷浓缩液中，加入第(3)步制备的CTAB反胶束萃取剂，其金丝桃苷浓缩液∶CTAB反胶束萃取剂的体积比为1∶5，混合后，在转速为300转/分的转速下搅拌萃取1.5小时，然后用离心机在8000转/分的高转速下，离心分离20分钟，混合液分离为明显的上、下两相，分别收集上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液及下相金丝桃苷第一次萃余溶液；
②再萃取分离
在第(4)-①步收集的下相金丝桃苷第一次萃余溶液中，又加入第(3)步制备的CTAB反胶束萃取剂，其金丝桃苷第一次萃余溶液体积∶CTAB反胶束萃取剂的体积比为1∶3，混合后，在转速为300转/分的低转速下，再次搅拌萃取1.5小时，然后再用离心机在8000转/分的高速下，再次离心分离20分钟，混合液分离为明显的上、下两相，再次收集上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液及下相金丝桃苷第二次萃余溶液。下相金丝桃苷第二次萃余溶液用于制备金丝桃素。
(5)金丝桃苷冻干粉的制备
①水反萃取分离
在第(4)-①和②步两次收集的上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液中，按水与萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液的体积比为1∶3，加入水溶液反萃取剂并混合，先在转速为300转/分的低速下进行搅拌反萃取30分钟，后用离心机在8000转/分的高速下，离心分离60分钟，混合液明显分为上、下两相，分别收集上相反萃取后的反胶束萃取液及下相反萃取后的金丝桃苷溶液，对上相反萃取后的反胶束萃取液进行再生。
②浓缩冻干
对第(5)-①步收集的下相反萃取后的金丝桃苷溶液，先用蒸发器在-0.05MPa真空进行浓缩，后用冻干机在-60℃低温下，冻成金丝桃苷含量为87.3％、水份≤7.26％、灰分≤0.44％的金丝桃苷冻干粉；
③反胶束萃取液再生
对第(5)-①步收集的上相反萃取后的反胶束萃取液，按0.5mol/L碘化钾(KI)溶液与反胶束萃取液的体积比为1∶150的比例加入0.5mol/L KI溶液混合，在转速为300转/分的转速下，进行搅拌处理60分钟，然后在6000转/分转速下，离心分离30分钟，分别收集上、下层溶液，收集的上层反胶束萃取液，可再次用于萃取金丝桃苷溶液，节约反胶束资源；收集的下层的KI溶液，补充适量的KI，使其浓度为0.5mol/L，可再次用作反胶束萃取液再生。
(6)金丝桃素冻干粉的制备
①吸附洗涤
对第(2)-①步收集合并的***洗涤液，用温度为65℃的水蒸汽蒸馏回收***后，制备出金丝桃素浸膏。然后用1％NaHCO3水溶液溶解金丝桃素浸膏，制备出含金丝桃素的NaHCO3水溶液，金丝桃素浸膏重量与1％NaHCO3水溶液体积的比例为1∶25。将制备出的含金丝桃素的NaHCO3水溶液与第(4)-②步收集的下相金丝桃苷第二次萃余溶液合并为金丝桃素溶液，然后在金丝桃素溶液中加入非极性吸附树脂HPD200等，在转速为300转/分速度下，进行搅拌吸附，搅拌吸附的时间为2小时，非极性吸附树脂重量与金丝桃素溶液的体积比例为1∶15。然后过滤除去滤液后，收集吸附有金丝桃素的吸附树脂，再用pH值为9.50、浓度为95％的乙醇，在300转/分搅拌速度下进行搅拌洗脱，搅拌洗脱时间为60分钟，过滤，分别收集洗脱液滤液和吸附树脂滤渣，对收集的吸附树脂滤渣，再次用95％的乙醇进行搅拌洗脱，吸附树脂重量与乙醇体积的比例均为1∶15，再次过滤并分别收集滤液和滤渣，如此反复进行4次。各次收集的洗脱液滤液合并后称为金丝桃素纯化溶液，对金丝桃素纯化溶液进行下一步浓缩冻干；对进行了4次洗脱金丝桃素后的吸附树脂滤渣，进行再生处理。
②浓缩冻干
对第(6)-①步收集的金丝桃素纯化溶液，先用蒸发器在-0.05Mpa的真空下，回收乙醇，浓缩成膏状金丝桃素，然后用1％的NaHCO3水溶液对膏状金丝桃素进行溶解，溶解成为金丝桃素NaHCO3水溶液，膏状金丝桃素重量与0.5～1％NaHCO3水溶液体积的比例为1∶30。对金丝桃素的NaHCO3水溶液，再进行过滤除去杂质，对其滤液用冻干机，在-60℃的低温下冻成金丝桃素含量为26.35％的金丝桃素冻干粉。
③吸附树脂再生
对第(6)-①步收集的洗脱金丝桃素的HPD200吸附树脂，用pH值为6的水溶液搅拌洗涤，再进行过滤分离。弃滤液，收集吸附树脂滤渣，对收集的吸附树脂再次用pH值为6的水溶液搅拌洗涤，再次过滤并收集吸附树脂，如此反复进行4次，吸附树脂重量与pH值为6的水溶液体积的比例每次均为1∶20，每次搅拌洗涤的时间为60分钟。对经过4次搅拌洗涤后的吸附树脂滤渣，可再次使用。
附图说明
附图是本发明的工艺流程图。
Claims (3)
1.一种贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法，其特征在于具体的方法步骤如下：
(1)连翘浸膏的制备
将贯叶连翘果实粉碎成连翘粉后，按连翘粉重量与85～95％的乙醇体积的比为1∶10～20的比例，在连翘粉中加85～95％的乙醇，在70～85℃温度下，回流提取4～6小时，再进行过滤，收集滤液。对滤渣，按滤渣重量与70～80％的乙醇体积的比为1∶5～10的比例，用70～80％的乙醇再进行回流提取2～3小时后，再过滤并收集滤液，弃滤渣，然后，将两次收集的滤液放置于蒸发器中，在-0.08～-0.05MPa真空下浓缩成贯叶连翘浸膏并回收的乙醇，对回收蒸馏的乙醇用酒精度计测定其中乙醇浓度，再用无水乙醇调节成乙醇浓度为85～90％的溶液；
(2)金丝桃苷浓缩液的制备
①洗涤
在第(1)步制备的连翘浸膏中，加入***搅拌洗涤，再进行离心分离；分别收集脱脂连翘浸膏和***洗涤液，对脱脂连翘浸膏再次进行***搅拌洗涤及再分离，如此反复进行2～4次，每次加入的***洗涤液，按连翘浸膏的重量与***的体积的比例为1∶3～5；
②吸附
对第(2)-①步制备的脱脂连翘浸膏，在带搅拌器的液体回流装置中，用沸腾蒸馏水重复进行2～4次搅拌提取，每次提取时间为15～30分钟，收集金丝桃苷提取液，然后，将每次收集的金丝桃苷提取液合并后，待其温度降至40～50℃时，按吸附树脂重量与金丝桃苷提取液体积比为1∶15～25的比例，在金丝桃苷提取液中，加入HPD600或HZ-841吸附树脂，搅拌吸附30～60分钟，弃滤液；
③洗脱
对第(2)-②步制备出的吸附有金丝桃苷的HPD600或HZ-841吸附树脂，用4～6倍重量的蒸馏水进行洗涤后，再按吸附有金丝桃苷的HPD600或HZ-841吸附树脂重量与70～80％乙醇的体积比为1∶10～15的比例，用70～80％的乙醇进行搅拌洗脱，搅拌洗脱时间为30～45分钟，再进行过滤，并分别收集滤液和滤渣，对收集的洗脱金丝桃苷后的HPD600或HZ-841吸附树脂滤渣，再按吸附树脂重量与70～80％乙醇的体积比为1∶10～15的比例，用70～80％的乙醇再次进行搅拌洗脱，再次进行过滤，再次分别收集滤液和滤渣，如此重复2～4次；
④浓缩
对第(2)-③步收集并合并的金丝桃苷溶液，在真空浓缩器中、在-0.08～-0.05MPa下进行真空浓缩，待浓缩成膏状后，再用pH值为8.50～9.0的蒸馏水溶解，然后进行过滤除去杂质，制备出金丝桃苷浓度为2.31～2.80％的金丝桃苷浓缩液；
⑤吸附树脂再生
将第(2)-③步收集的洗脱金丝桃苷后的HPD600或HZ-841吸附树脂，先用重量为10～15倍的、pH值为5～6的水溶液搅拌洗涤再生，搅拌洗涤时间为30～60分钟，后进行过滤，弃滤液，收集再生吸附树脂滤渣；
(3)萃取剂的制备
按十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)阳离子表面活性剂重量∶正辛烷体积∶正庚烷体积∶蒸馏水体积为1∶27～54∶3～6∶0.3～0.6的比例，在CTAB阳离子表面活性剂中，先加入正辛烷和正庚烷，加热搅拌，其加热温度为40～60℃，后加入蒸馏水，继续搅拌至透明状，就制备出CTAB浓度为0.05～0.1mol/L的CTAB反胶束萃取剂；
(4)萃取分离
①萃取分离
在第(2)-④步制备的金丝桃苷浓缩液中，加入第(3)步制备的CTAB反胶束萃取剂，其金丝桃苷浓缩液∶CTAB反胶束萃取剂的体积比为1∶3～5，混合后，在转速为200～300转/分的低转速下搅拌萃取1～1.5小时，然后用离心机在6500～8000转/分的高转速下，离心分离10～20分钟，混合液分离为明显的上、下两相，分别收集上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液及下相金丝桃苷第一次萃余溶液；
②再萃取分离
在第(4)-①步收集的下相金丝桃苷第一次萃余溶液中，又加入第(3)步制备的CTAB反胶束萃取剂，其金丝桃苷第一次萃余溶液体积∶CTAB反胶束萃取剂的体积比为1∶1～3，混合后，在转速为200～300转/分的低转速下，再次搅拌萃取1～1.5小时，然后再用离心机在6500～8000转/分的高速下，再次离心分离10～20分钟，混合液分离为明显的上、下两相，再次收集上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液及下相金丝桃苷第二次萃余溶液；
(5)金丝桃苷冻干粉的制备
①水反萃取分离
在第(4)-①和②步两次收集的上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液中，按水与萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液的体积比为1∶1～3，加入水溶液反萃取剂并混合，先在转速为200～300转/分的转速下进行搅拌反萃取15～30分钟，后用离心机在6500～8000转/分的高速下，离心分离30～60分钟，混合液明显分为上、下两相，分别收集上相反萃取后的反胶束萃取液及下相反萃取后的金丝桃苷溶液；
②浓缩冻干
对第(5)-①步收集的下相反萃取后的金丝桃苷溶液，先用蒸发器在-0.08～-0.05MPa真空进行浓缩，后用冻干机在-50～-60℃低温下，冻成金丝桃苷含量为83.6～87.3％、水份≤7.26～8.76％、灰分≤0.44～8.94％的金丝桃苷冻干粉；
③反胶束萃取液再生
对第(5)-①步收集的上相反萃取后的反胶束萃取液，按0.2～0.5mol/L碘化钾溶液与反胶束萃取液的体积比为1∶100～150的比例加入0.2～0.5mol/L KI溶液混合，在转速为200～300转/分的转速下，进行搅拌处理30～60分钟，然后在4000～6000转/分转速下，离心分离15～30分钟，分别收集上层反胶束萃取液及下层KI溶液，对KI溶液，补充适量的KI，使其浓度为0.2～0.5mol/L；
(6)金丝桃素冻干粉的制备
①吸附洗涤
对第(2)-①步收集合并的***洗涤液，用温度为50～65℃的水蒸汽蒸馏回收***，然后用0.5～1％NaHCO3水溶液溶解金丝桃素浸膏，金丝桃素浸膏重量与0.5～1％NaHCO3水溶液体积的比例为1∶15～25，将制备出的含金丝桃素的NaHCO3水溶液与第(4)-②步收集的下相金丝桃苷第二次萃余溶液合并为金丝桃素溶液，然后在金丝桃素溶液中加入HPD100或HPD200非极性吸附树脂，在转速为200～300转/分的速度下，进行搅拌吸附，搅拌吸附的时间为1～2小时，非极性吸附树脂重量与金丝桃素溶液的体积比例为1∶10～15，然后过滤除去滤液后，收集吸附有金丝桃素的吸附树脂，再用pH值为8.50～9.50、浓度为90～95％的乙醇，在200～300转/分搅拌速度下进行搅拌洗脱，搅拌洗脱时间为30～60分钟，过滤，分别收集洗脱液滤液和吸附树脂滤渣，对收集的吸附树脂滤渣，再次用90～95％的乙醇进行搅拌洗脱，吸附树脂重量与乙醇体积的比例均为1∶10～15，再次过滤并分别收集滤液和滤渣，如此反复进行2～4次；
②浓缩冻干
对第(6)-①步收集的金丝桃素纯化溶液，先用蒸发器在-0.08～-0.05Mpa的真空下，回收乙醇，浓缩成膏状金丝桃素，然后用0.5～1％的NaHCO3水溶液对膏状金丝桃素进行溶解，溶解成为金丝桃素NaHCO3水溶液，膏状金丝桃素重量与0.5～1％NaHCO3水溶液体积的比例为1∶20～30，对金丝桃素的NaHCO3水溶液，再进行过滤除去杂质，对其滤液用冻干机，在-50～-60℃的低温下冻成金丝桃素含量为22.82～26.35％的金丝桃素冻干粉；
③吸附树脂再生
对第(6)-①步收集的洗脱金丝桃素的HPD100或HPD200吸附树脂，用pH值为5～6的水溶液搅拌洗涤，再进行过滤分离，弃滤液，收集吸附树脂滤渣，对收集的吸附树脂再次用pH值为5～6的水溶液搅拌洗涤，再次过滤并收集吸附树脂，如此反复进行2～4次，吸附树脂重量与pH值为5～6的水溶液体积的比例每次均为1∶10～20，每次搅拌洗涤的时间为30～60分钟。
2.按照权利要求1.所述的贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法，其特征在于一种贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法，其具体的方法步骤如下：
(1)连翘浸膏的制备
将贯叶连翘果实粉碎成连翘粉后，按连翘粉重量与85％的乙醇体积的比为1∶10的比例，在连翘粉中加85％的乙醇，在70℃温度下，回流提取4小时，再进行过滤，收集滤液，对滤渣，按滤渣重量与70％的乙醇体积的比为1∶5的比例，用70％的乙醇再进行回流提取2小时后，再过滤并收集滤液，弃滤渣，然后，将两次收集的滤液放置于蒸发器中，在-0.08MPa真空下浓缩成贯叶连翘浸膏并回收的乙醇，对回收蒸馏的乙醇用酒精度计测定其中乙醇浓度，再用无水乙醇调节成乙醇浓度为85％的溶液；
(2)金丝桃苷浓缩液的制备
①洗涤
在第(1)步制备的连翘浸膏中，加入***搅拌洗涤，再进行离心分离，分别收集脱脂连翘浸膏和***洗涤液，对脱脂连翘浸膏再次进行***搅拌洗涤及再分离，如此反复进行2次，每次加入的***洗涤液，按连翘浸膏的重量与***的体积的比例为1∶3；
②吸附
对第(2)-①步制备的脱脂连翘浸膏，在带搅拌器的液体回流装置中，用沸腾蒸馏水重复进行2次搅拌提取，每次提取时间为15分钟，收集金丝桃苷提取液，然后，将每次收集的金丝桃苷提取液合并后，待其温度降至40℃时，按吸附树脂重量与金丝桃苷提取液体积比为1∶15的比例，在金丝桃苷提取液中，加入HPD600吸附树脂，搅拌吸附30分钟，弃滤液；
③洗脱
对第(2)-②步制备出的吸附有金丝桃苷的HPD600吸附树脂，用4倍重量的蒸馏水进行洗涤后，再按吸附有金丝桃苷的HPD600吸附树脂重量与70％乙醇的体积比为1∶10的比例，用70％的乙醇进行搅拌洗脱，搅拌洗脱时间为30分钟，再进行过滤，并分别收集滤液和滤渣，对收集的洗脱金丝桃苷后的HPD600吸附树脂滤渣，再按吸附树脂重量与70％乙醇的体积比为1∶10的比例，用70％的乙醇再次进行搅拌洗脱，再次进行过滤，再次分别收集滤液和滤渣；
④浓缩
对第(2)-③步收集并合并的金丝桃苷溶液，在真空浓缩器中、在-0.08MPa下进行真空浓缩，待浓缩成膏状后，再用pH值为8.50的蒸馏水溶解，然后进行过滤除去杂质，制备出金丝桃苷浓度为2.31％的金丝桃苷浓缩液；
⑤吸附树脂再生
将第(2)-③步收集的洗脱金丝桃苷后的HPD600吸附树脂，先用重量为10倍的、pH值为5的水溶液搅拌洗涤再生，搅拌洗涤时间为30分钟，后进行过滤，弃滤液，收集再生吸附树脂滤渣；
(3)萃取剂的制备
按十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)阳离子表面活性剂重量∶正辛烷体积∶正庚烷体积∶蒸馏水体积为1∶54∶6∶0.6的比例，在CTAB阳离子表面活性剂中，先加入正辛烷和正庚烷，加热搅拌，其加热温度为40℃，后加入蒸馏水，继续搅拌至透明状，就制备出CTAB浓度为0.05mol/L的CTAB反胶束萃取剂；
(4)萃取分离
①萃取分离
在第(2)-④步制备的金丝桃苷浓缩液中，加入第(3)步制备的CTAB反胶束萃取剂，其金丝桃苷浓缩液∶CTAB反胶束萃取剂的体积比为1∶3，混合后，在转速为200转/分的转速下搅拌萃取1小时，然后用离心机在6500转/分的高转速下，离心分离10分钟，混合液分离为明显的上、下两相，分别收集上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液及下相金丝桃苷第一次萃余溶液；
②再萃取分离
在第(4)-①步收集的下相金丝桃苷第一次萃余溶液中，又加入第(3)步制备的CTAB反胶束萃取剂，其金丝桃苷第一次萃余溶液体积∶CTAB反胶束萃取剂的体积比为1∶1，混合后，在转速为200转/分的低转速下，再次搅拌萃取1小时，然后再用离心机在6500转/分的高速下，再次离心分离10分钟，混合液分离为明显的上、下两相，再次收集上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液及下相金丝桃苷第二次萃余溶液；
(5)金丝桃苷冻干粉的制备
①水反萃取分离
在第(4)-①和②步两次收集的上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液中，按水与萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液的体积比为1∶1，加入水溶液反萃取剂并混合，先在转速为200转/分的低速下进行搅拌反萃取15分钟，后用离心机在6500转/分的高速下，离心分离30分钟，混合液明显分为上、下两相，分别收集上相反萃取后的反胶束萃取液及下相反萃取后的金丝桃苷溶液；
②浓缩冻干
对第(5)-①步收集的下相反萃取后的金丝桃苷溶液，先用蒸发器在-0.08MPa真空进行浓缩，后用冻干机在-50℃低温下，冻成金丝桃苷含量为83.6％、水份≤7.26％、灰分≤0.44％的金丝桃苷冻干粉；
③反胶束萃取液再生
对第(5)-①步收集的上相反萃取后的反胶束萃取液，按0.2mol/L碘化钾溶液与反胶束萃取液的体积比为1∶100的比例加入0.2mol/L KI溶液混合，在转速为200转/分的转速下，进行搅拌处理30分钟，然后在4000转/分的转速下，离心分离15分钟，分别收集上、下层溶液，分别收集的上层反胶束萃取液及下层KI溶液，对KI溶液，补充适量的KI，使其浓度为0.2mol/L；
(6)金丝桃素冻干粉的制备
①吸附洗涤
对第(2)-①步收集合并的***洗涤液，用温度为50℃的水蒸汽蒸馏回收***后，然后用0.5％NaHCO3水溶液溶解金丝桃素浸膏，金丝桃素浸膏重量与0.5％NaHCO3水溶液体积的比例为1∶15，将制备出的含金丝桃素的NaHCO3水溶液与第(4)-②步收集的下相金丝桃苷第二次萃余溶液合并为金丝桃素溶液，然后在金丝桃素溶液中加入HPD100非极性吸附树脂，在转速为200转/分速度下，进行搅拌吸附，搅拌吸附的时间为1小时，非极性吸附树脂重量与金丝桃素溶液的体积比例为1∶10，然后过滤除去滤液后，收集吸附有金丝桃素的吸附树脂，再用pH值为8.50、浓度为90％的乙醇，在200转/分搅拌速度下进行搅拌洗脱，搅拌洗脱时间为30分钟，过滤，分别收集洗脱液滤液和吸附树脂滤渣，对收集的吸附树脂滤渣，再次用90％的乙醇进行搅拌洗脱，吸附树脂重量与乙醇体积的比例均为1∶10，再次过滤并分别收集滤液和滤渣；
②浓缩冻干
对第(6)-①步收集的金丝桃素纯化溶液，先用蒸发器在-0.08Mpa的真空下，回收乙醇，浓缩成膏状金丝桃素，然后用0.5％的NaHCO3水溶液对膏状金丝桃素进行溶解，溶解成为金丝桃素NaHCO3水溶液，膏状金丝桃素重量与0.5％NaHCO3水溶液体积的比例为1∶20。对金丝桃素的NaHCO3水溶液，再进行过滤除去杂质，对其滤液用冻干机，在-50℃的低温下冻成金丝桃素含量为22.82％的金丝桃素冻干粉；
③吸附树脂再生
对第(6)-①步收集的洗脱金丝桃素的HPD100吸附树脂，用pH值为5的水溶液搅拌洗涤，再进行过滤分离。弃滤液，收集吸附树脂滤渣，对收集的吸附树脂再次用pH值为5的水溶液搅拌洗涤，再次过滤并收集吸附树脂，吸附树脂重量与pH值为5的水溶液体积的比例每次均为1∶10，每次搅拌洗涤的时间为30分钟。
3.按照权利要求1.所述的贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法，其特征在于一种贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法，其具体的方法步骤如下：
(1)连翘浸膏的制备
将贯叶连翘果实粉碎成连翘粉后，按连翘粉重量与95％的乙醇体积的比为1∶20的比例，在连翘粉中加95％的乙醇，在85℃温度下，回流提取6小时，再进行过滤，收集滤液，对滤渣，按滤渣重量与80％的乙醇体积的比为1∶10的比例，用80％的乙醇再进行回流提取3小时后，再过滤并收集滤液，弃滤渣，然后，将两次收集的滤液放置于蒸发器中，在-0.05MPa真空下浓缩成贯叶连翘浸膏并回收的乙醇，对回收蒸馏的乙醇用酒精度计测定其中乙醇浓度，再用无水乙醇调节成乙醇浓度为90％的溶液；
(2)金丝桃苷浓缩液的制备
①洗涤
在第(1)步制备的连翘浸膏中，加入***搅拌洗涤，再进行离心分离，分别收集脱脂连翘浸膏和***洗涤液，对脱脂连翘浸膏再次进行***搅拌洗涤及再分离，如此反复进行4次，每次加入的***洗涤液，按连翘浸膏的重量与***的体积的比例为1∶5；
②吸附
对第(2)-①步制备的脱脂连翘浸膏，在带搅拌器的液体回流装置中，用沸腾蒸馏水重复进行4次搅拌提取，每次提取时间为30分钟，收集金丝桃苷提取液，然后，将每次收集的金丝桃苷提取液合并后，待其温度降至50℃时，按吸附树脂重量与金丝桃苷提取液体积比为1∶25的比例，在金丝桃苷提取液中，加入HZ-841吸附树脂，搅拌吸附60分钟，弃滤液；
③洗脱
对第(2)-②步制备出的吸附有金丝桃苷的HZ-841吸附树脂，用6倍重量的蒸馏水进行洗涤后，再按吸附有金丝桃苷的HZ-841吸附树脂重量与80％乙醇的体积比为1∶15的比例，用80％的乙醇进行搅拌洗脱，搅拌洗脱时间为45分钟，再进行过滤，并分别收集滤液和滤渣，对收集的洗脱金丝桃苷后的HZ-841吸附树脂滤渣，再按吸附树脂重量与80％乙醇的体积比为1∶15的比例，用80％的乙醇再次进行搅拌洗脱，再次进行过滤，再次分别收集滤液和滤渣，如此重复4次；
④浓缩
对第(2)-③步收集并合并的金丝桃苷溶液，在真空浓缩器中、在-0.05MPa下进行真空浓缩，待浓缩成膏状后，再用pH值为9.0的蒸馏水溶解，然后进行过滤除去杂质，制备出金丝桃苷浓度为2.80％的金丝桃苷浓缩液；
⑤吸附树脂再生
将第(2)-③步收集的洗脱金丝桃苷后的HZ-841吸附树脂，先用重量为15倍的、pH值为6的水溶液搅拌洗涤再生，搅拌洗涤时间为60分钟，后进行过滤，弃滤液，收集再生吸附树脂滤渣；
(3)萃取剂的制备
按十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)阳离子表面活性剂重量∶正辛烷体积∶正庚烷体积∶蒸馏水体积为1∶27∶3∶0.6的比例，在CTAB阳离子表面活性剂中，先加入正辛烷和正庚烷，加热搅拌，其加热温度为60℃，后加入蒸馏水，继续搅拌至透明状，就制备出CTAB浓度为0.1mol/L的CTAB反胶束萃取剂；
(4)萃取分离
①萃取分离
在第(2)-④步制备的金丝桃苷浓缩液中，加入第(3)步制备的CTAB反胶束萃取剂，其金丝桃苷浓缩液∶CTAB反胶束萃取剂的体积比为1∶5，混合后，在转速为300转/分的转速下搅拌萃取1.5小时，然后用离心机在8000转/分的高转速下，离心分离20分钟，混合液分离为明显的上、下两相，分别收集上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液及下相金丝桃苷第一次萃余溶液；
②再萃取分离
在第(4)-①步收集的下相金丝桃苷第一次萃余溶液中，又加入第(3)步制备的CTAB反胶束萃取剂，其金丝桃苷第一次萃余溶液体积∶CTAB反胶束萃取剂的体积比为1∶3，混合后，在转速为300转/分的低转速下，再次搅拌萃取1.5小时，然后再用离心机在8000转/分的高速下，再次离心分离20分钟，混合液分离为明显的上、下两相，再次收集上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液及下相金丝桃苷第二次萃余溶液；
(5)金丝桃苷冻干粉的制备
①水反萃取分离
在第(4)-①和②步两次收集的上相萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液中，按水与萃取有金丝桃苷的反胶束萃取液的体积比为1∶3，加入水溶液反萃取剂并混合，先在转速为300转/分的低速下进行搅拌反萃取30分钟，后用离心机在8000转/分的高速下，离心分离60分钟，混合液明显分为上、下两相，分别收集上相反萃取后的反胶束萃取液及下相反萃取后的金丝桃苷溶液；
②浓缩冻干
对第(5)-①步收集的下相反萃取后的金丝桃苷溶液，先用蒸发器在-0.05MPa真空进行浓缩，后用冻干机在-60℃低温下，冻成金丝桃苷含量为87.3％、水份≤7.26％、灰分≤0.44％的金丝桃苷冻干粉；
③反胶束萃取液再生
对第(5)-①步收集的上相反萃取后的反胶束萃取液，按0.5mol/L碘化钾溶液与反胶束萃取液的体积比为1∶150的比例加入0.5mol/L KI溶液混合，在转速为300转/分的转速下，进行搅拌处理60分钟，然后在6000转/分转速下，离心分离30分钟，分别收集上层反胶束萃取液及下层KI溶液，对KI溶液，补充适量的KI，使其浓度为0.5mol/L；
(6)金丝桃素冻干粉的制备
①吸附洗涤
对第(2)-①步收集合并的***洗涤液，用温度为65℃的水蒸汽蒸馏回收***后，然后用1％NaHCO3水溶液溶解金丝桃素浸膏，金丝桃素浸膏重量与1％NaHCO3水溶液体积的比例为1∶25，将制备出的含金丝桃素的NaHCO3水溶液与第(4)-②步收集的下相金丝桃苷第二次萃余溶液合并为金丝桃素溶液，然后在金丝桃素溶液中加入HPD200非极性吸附树脂，在转速为300转/分的速度下，进行搅拌吸附，搅拌吸附的时间为2小时，非极性吸附树脂重量与金丝桃素溶液的体积比例为1∶15，然后过滤除去滤液后，收集吸附有金丝桃素的吸附树脂，再用pH值为9.50、浓度为95％的乙醇，在300转/分搅拌速度下进行搅拌洗脱，搅拌洗脱时间为60分钟，过滤，分别收集洗脱液滤液和吸附树脂滤渣，对收集的吸附树脂滤渣，再次用95％的乙醇进行搅拌洗脱，吸附树脂重量与乙醇体积的比例均为1∶15，再次过滤并分别收集滤液和滤渣，如此反复进行4次；
②浓缩冻干
对第(6)-①步收集的金丝桃素纯化溶液，先用蒸发器在-0.05Mpa的真空下，回收乙醇，浓缩成膏状金丝桃素，然后用1％的NaHCO3水溶液对膏状金丝桃素进行溶解，溶解成为金丝桃素NaHCO3水溶液，膏状金丝桃素重量与0.5～1％NaHCO3水溶液体积的比例为1∶30。对金丝桃素的NaHCO3水溶液，再进行过滤除去杂质，对其滤液用冻干机，在-60℃的低温下冻成金丝桃素含量为26.35％的金丝桃素冻干粉；
③吸附树脂再生
对第(6)-①步收集的洗脱金丝桃素的HPD200吸附树脂，用pH值为6的水溶液搅拌洗涤，再进行过滤分离，弃滤液，收集吸附树脂滤渣，对收集的吸附树脂再次用pH值为6的水溶液搅拌洗涤，再次过滤并收集吸附树脂，如此反复进行4次，吸附树脂重量与pH值为6的水溶液体积的比例每次均为1∶20，每次搅拌洗涤的时间为60分钟。
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