CN1785347A - 一种小儿高热不退的中药制剂质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种小儿高热不退的中药制剂质量控制方法，该方法克服了现有质量控制方法的不完整，针对性不强等不足，本发明针对小儿退热制剂的特点以及本发明配方，采用高效液相色谱法测定该药物中连翘苷的含量和用薄层色谱法鉴别成品中的中药材，方法简便易行，而且精密度、灵敏度、稳定性均较高。
Description
技术领域：
本发明涉及一种具有退热功效，治疗小儿高热不退的中药制剂质量控制方法，特别是涉及小儿退热制剂如小儿退热口服液、糖浆和颗粒剂等的质量控制方法。
背景技术：
小儿脏腑娇嫩，肌肤疏薄，卫外不固，复感风热之邪，或寒从热化，故发热恶风；风热之邪上拢并客于肺则头痛咽肿；如热毒蕴结则有痄腮肿胀，高热等症。故小儿感冒一旦出现高热，急需退热，同时也需宣透疏泄，使邪有出路。目前，根据上述病理治疗小儿高热的主要有小儿退热口服液及小儿退热颗粒剂，已列入《***药品标准·中药成方制剂》第六册(WS3-B-1089-92)中，但由于该方中药组分复杂，其质量控制是一大难题，现有技术只提出了相对密度检查，理化鉴别，并无含量指标和定性鉴别。因此，有必要对该中药制剂的质量控制方法进行了定性定量探究。
中药制剂长期以来，质量难以有效控制，有效控制中药产品的质量是一个重大的课题，现有技术中采用的方法不完整，少数针对性不强，使用这些方法难以达到真正控制质量的目的。以上小儿退热制剂由于缺少质量控制方法，难以控该制剂的质量；给正常的生产经营带来了困难，利用已知的一些技术难以对该制剂产品提供好的质量控制方法，本发明针对现有技术的不足，采用新的手段对小儿退热制剂的质量进行控制，特别是采用用高效液相色谱法测定该药物中连翘苷的含量和用薄层色谱法鉴别成品中中药材，解决了该制剂质量控制的难题。本发明针对小儿退热制剂的特点以及本发明配方，提供了一种实用的质量控制方法。
发明内容：
本发明的目的在于提供一种治疗小儿高热不退的中药制剂质量控制方法，本发明质量控制方法对产品的质量控制更为有效，方法精密度、灵敏度、稳定性均较高。该方法包括下列薄层色谱法鉴别和/或含量测定方法。
本发明是针对一种治疗小儿高热不退的中药制剂提出质量控制方法的，该制剂具体包括口服液、颗粒剂和糖浆剂等。
本发明所述的一种治疗小儿高热不退的中药制剂是由如下重量配比的中药原料制成的：
大青叶150g、板蓝根90g、金银花90g、连翘90g、栀子90g、牡丹皮90g、黄芩90g、淡竹叶60g、地龙60g、重楼45g、柴胡90g、白薇60g及适量辅料。
本发明的小儿退热制剂的可以采用以下方法制备：
通过将上述配方的中药原料经过提取或其他方式加工，制成药物活性物质，随后，以该物质为原料，需要时加入药物可接受的载体，按照制剂学的常规技术制成胶囊、颗粒剂、片剂。所述活性物质可以通过选自以下方式的方法得到，如：通过粉碎、压榨、煅烧、研磨、过筛、渗漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、层析等方法得到、这些活性物质可以是浸膏形式的物质，可以是干浸膏也可以是流浸膏，根据制剂的不同需要决定制成不同的浓度。
本发明的制剂，在制成制剂时根据需要可以加入药物可接受的载体，这些载体可以是任何适合制成本发明制剂的载体。
本发明的小儿退热制剂优选的制备方法采用以下方法：
本发明制剂采用以下方法制得：以上原料，将牡丹皮、柴胡、连翘药材粉碎至全部通过45目，但不能过30目，按药粉与水比率1/10加水，用水蒸汽蒸馏2h，收集蒸馏液；药渣与其余青叶等九味加10倍水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加乙醇使含醇量为70％，静置。取上清液回收乙醇，浓缩至约200ml，加水搅匀，静置，取上清液，滤过，滤液浓缩至适量。按常规制剂方法，加入不同的辅料，可分别制成口服液、颗粒剂和糖浆剂。
本发明的质量控制方法可用于以上方法制成的中药制剂，其步骤包括鉴别和含量测定。
其中所述鉴别是利用中药制剂的有效成分的特殊性对制剂的成分进行定性检测，本发明的鉴别是针对本发明的中药的进行的，其鉴别方法包括以下方法中的一种或几种：
(1)取本品，加水，用***提取，加水洗涤，取***层，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液。另取靛玉红对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-丙酮为展开剂，展开，取出，凉干。
(2)取本品，加水，用***提取，弃***液，水层用水饱和的正丁醇提取，取正丁醇液，加0.25％氢氧化钠溶液洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材，加乙醇，置水浴回流提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水微热溶解，滤过，滤液用***提取，余下步骤同供试品制备方法，制成对照药材溶液。照(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。
(3)取本品，加水，用醋酸乙酯提取，弃醋酸乙酯液，水层用正丁醇提取，取正丁醇液，蒸干，残渣加无水乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮苯-甲酸为展开剂，展开，取出，凉干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。
(4)取本品，加水，用***提取，弃***液，用水洗涤，将水洗***提取液挥至近干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，凉干，喷以3％三氯化铁乙醇试液，热风吹至斑点显色清晰。
优选的鉴别方法包括以下方法中的一种或几种：
(1)取本品10-25ml，加水30-50ml，用***提取1-3次，每次15-25ml，合并***提取液，加水洗涤1-3次，每次20-40ml，取***层，蒸干，残渣加甲醇1-3ml溶解，作为供试品溶液。另取靛玉红对照品，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液5-10ul、对照品溶液1-5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-丙酮(2.5-7∶2-5∶0.8-1.3)为展开剂，展开，取出，凉干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品5-15ml，加水15-25ml，用***提取1-3次，每次15-25ml，弃***液，水层用水饱和的正丁醇提取1-3次，每次15-25ml，合并正丁醇液，加0.25％氢氧化钠溶液洗涤1-3次，每次15-25ml，再用正丁醇饱和的水洗涤1-3次，每次10-30ml，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1-3ml溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材1.0-3.0g，加乙醇40-60ml，置水浴回流提取20-40min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20-40ml微热溶解，滤过，滤液用***提取1-3次，每次10-30ml，余下步骤同供试品制备方法，制成对照药材溶液。照(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液5-10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮-甲酸(10-14∶1-3∶1.9-2.8∶0.16-0.24)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取本品10-30ml，加水5-20ml，用醋酸乙酯提取1-3次，每次15-25ml，弃醋酸乙酯液，水层用正丁醇提取1-2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加无水乙醇20ml超声处理5-15min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮1-3ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5-10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮苯-甲酸(7-11∶2.2-2.8∶1.8-3.4∶0.17-0.24)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品5-15ml，加水15-25ml，用***提取1-2次，每次15-25ml，弃***液，用水洗涤2次，每次20ml，将水洗***提取液挥至近干，残渣加甲醇1-3ml溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各1-5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(3.5-7∶0.7-1.4)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以3％三氯化铁乙醇试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
更优选的鉴别方法包括以下方法中的一种或几种：
(1)取本品20ml，加水40ml，用***提取3次，每次20ml，合并***提取液，加水洗涤2次，每次30ml，取***层，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取靛玉红对照品，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10ul、对照品溶液5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-丙酮(5∶4∶1)为展开剂，展开，取出，凉干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品10ml，加水20ml，用***提取3次，每次20ml，弃***液，水层用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，加0.25％氢氧化钠溶液洗涤3次，每次20ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材2.0g，加乙醇50ml，置水浴回流提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml微热溶解，滤过，滤液用***提取2次，每次20ml，余下步骤同供试品制备方法，制成对照药材溶液。照(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮-甲酸(12∶2∶2.5∶0.2)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取本品20ml，加水10ml，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml，弃醋酸乙酯液，水层用正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加无水乙醇20ml超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮2ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮苯-甲酸(9∶2.5∶3∶0.2)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品10ml，加水20ml，用***提取2次，每次20ml，弃***液，用水洗涤2次，每次20ml，将水洗***提取液挥至近干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(5∶1)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以3％三氯化铁乙醇试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明的质量控制方法，还包括含量测定的方法，所述含量测定是对本发明药物制剂中的连翘苷含量进行的的测定，其方法为：
照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VII D)测定；色谱条件与***适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-水(21-27∶66-83)；流速：1.0ml/min；柱温：28-32℃；检测波长230±2nm。理论塔板数以连翘苷(C29H36O15)峰计，应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取连翘苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.06-0.08mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 精密量取装量项下的本品10ml，加水20ml，用***提取至***层无色，取水层，加水饱和的正丁醇提取6-8次(每次30ml或20ml)，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置蒸发皿中，蒸至近干，加中性氧化铝1g拌匀，加于中性氧化铝柱上，用80％或70％或60％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加甲醇溶解后转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每支含连翘以连翘苷(C29H36O15)计，不得少于0.456mg。
上述色谱条件流动相的数值范围优选的乙腈-水比例(24∶76)为最佳；柱温30℃为最佳；检测波长230nm为最佳。对照品溶液的制备最好制成1ml甲醇含0.07mg连翘苷对照品的溶液；供试品溶液的制备最好选用水饱和的正丁醇为提取剂。且提取最好6次(30ml、20ml、20ml、20ml、20ml、20ml)，加入的中性氧化铝柱最好为200～300目，2g，内径1.5cm即可将连翘苷提取完全，在样品上氧化铝柱的洗脱过程中，选用80％的乙醇120ml进行作洗脱剂洗脱为最佳。
本发明质量控制方法对产品的质量控制更为有效，方法精密度、灵敏度、稳定性均较高。
以上所述制剂优选的是口服液、糖浆和颗粒剂。所述颗粒剂，每1g含连翘以连翘苷(C29H36O15)计，不得少于0.456mg。
，所述口服液每支含连翘以连翘苷(C29H36O15)计，不得少于0.456mg。
，所述糖浆每10ml含连翘以连翘苷(C29H36O15)计，不得少于0.456mg。
以上所述本品为口服液、糖浆和颗粒剂，对于固体制剂，测定时需要将其溶解于溶剂中，作为供试液，常规的方法是，取颗粒1-10g加10-100ml溶剂溶解。
本发明各个实验例供试品所用制剂均可采用实施例1、2和3所述的口服液、糖浆剂和颗粒剂，也可以与上述实施例所述的口服液、糖浆剂和颗粒剂具有相同原料组成的其他制剂。
以下是本发明质量控制方法的实验例，用于进一步说明。
实验例1本发明质控方法对制剂所含成分含量测定的研究
“小儿退热制剂”系由十二味中药组方而成，经对每一味药材进行资料查阅，并结合该药的制备工艺，进行了金银花中绿原酸、连翘中连翘苷和栀子中栀子苷的含量研究。
金银花主要含绿原酸、异绿原酸、挥发油及微量元素等成分。在制剂的含量测定研究过程中，我们曾对多批样品中绿原酸进行含量测定，但由于栀子药材亦含绿原酸，其***适用性试验中阴性样品有干扰，故未将绿原酸含量测定列入质量标准正文。
栀子主要含栀子苷等环烯醚萜苷类、栀子素、藏红花素等色素及绿原酸等有机酸。对栀子的含量测定，文献报道较多的是栀子中栀子苷的含量测定，多采用高效液相色谱法。根据工艺追踪，发现栀子苷在煎煮及醇沉后损失较大，总收率约为18％，故未进行栀子中栀子苷的含量测定。
综合考虑以上因素，决定采用高效液相色谱法测定连翘中连翘苷的含量。
实验例2连翘苷的含量测定方法研究
据文献资料报道，连翘中主要含连翘苷、连翘酚、连翘酯苷、齐墩果酸、松脂素、樟脑、龙脑等成分。对连翘的含量测定，文献报道较多的是连翘中连翘苷的含量测定，其含量测定方法有高效液相色谱法、薄层扫描法、薄层—分光光度发等。参考有关文献资料，对制剂中连翘苷的含量进行了测定，并对测定的方法学进行了考察。
7.1仪器岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪，LC-10Atvp输液泵；SPD-M10Avp二级阵列检测器；SCL-10Avp***控制器；CTO-10Asvp恒温柱箱；CLASS-VP6.1工作站数据处理***；微量进样器(25μL)，HAMILTON公司；超声波清洗机(250W，北京市医疗设备二厂)。
7.2试药***(分析纯)、正丁醇(分析纯)、甲醇(分析纯)、乙醇(分析纯)、乙腈(色谱醇)，水为重蒸馏水，连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：0821-200104)。
7.3色谱条件色谱柱：Hypersil ODS2(5.0×200mm)大连伊利特；流动相：乙腈-水(24∶76)；检测波长：230nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量：5μl。
7.4***适用性试验
分别取连翘苷对照品溶液、供试品溶液和缺连翘药材的阴性供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱。从图中可见，连翘苷的保留时间(tR)约为13分钟，阴性样品色谱图在连翘苷峰位置处无假阳性峰，连翘苷和相近的杂质峰分离完全(分离度＞1.5)，即本实验条件下连翘苷与其他组分分离完全。理论塔板数以连翘苷峰计算为7000。
7.5线性关系考察
7.5.1标准溶液的制备
精密称取连翘苷对照品14.24mg，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成连翘苷标准溶液(0.1424mg/ml)。
7.5.2标准曲线的绘制
精密吸取0.1424mg/ml的连翘苷标准溶液2.0、4.0、6.0、8.0ml、10.0ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。分别精密吸取上述五种溶液各5μl注入液相色谱仪，记录色谱(表1)，以峰面积A(μV·s)对质量数X(μg)进行线性回归计算，得线性回归方程为：A＝2714056.18×X+6622.80，r＝0.99998，精密量取0.1424mg/ml的标准溶液5.0ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得对照品溶液(0.0712mg/ml)。精密量取该对照品溶液5μl注入液相色谱仪，所得峰面积为974638，将一供试品溶液进样分析所得峰面积分别用回归方程和一点法计算含量，结果的相对偏差为0.11％，故本发明采用一点法计算含量。连翘苷线性范围：0.1424μg～0.712μg。
表1 连翘苷线性关系考察
| 连翘苷进样量(μg) | 连翘苷峰面积(μV·s) |
| 0.14240.28480.42720.56960.712 | 392656776721117253315500071938421 |
7.6提取剂选择由于连翘苷不溶于***，在样品处理过程中，先用***除去部分杂质，后分别选用常用于提取苷类的醋酸乙酯和正丁醇为提取液，经多次提取后测定含量，测定结果见表2。试验结果表明，用水饱和的正丁醇为提取剂能将连翘苷提取完全，因此本发明选用水饱和的正丁醇为提取剂。
表2 不同提取溶剂对连翘苷含量测定的影响(n＝2)
| 提取方法 | 醋酸乙酯 | 水饱和的正丁醇 |
| 含量(mg/ml)RSD(％) | 0.03952.51 | 0.07231.37 |
7.7提取液的提取次数与连翘苷含量测定结果考察取“小儿退热口服液”样品，用***提取至***层无色，加水饱和的正丁醇提取，其提取次数和连翘苷含量测定的结果见表3。
表3 提取次数和连翘苷的含量测定结果(n＝2)
| 提取次数 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| 含量(mg/ml)RSD(％) | 0.06443.65 | 0.07092.31 | 0.07261.36 | 0.07222.06 | 0.07292.43 |
从表中可见提取6次与7次、8次的结果无显著性差异，证明提取6次即可将连翘苷提取完全，因此在本发明质量标准中将提取次数定为6次。
7.8洗脱剂的选择
根据样品可溶于乙醇的性质，在样品上氧化铝柱的洗脱过程中，分别选用不同浓度的乙醇120ml进行洗脱，收集洗脱液，定容，滤过(0.45μm)，取样测定连翘苷含量，其含量测定结果见表4。
表4 不同洗脱剂对制剂中连翘苷含量测定的影响(n＝2)
| 洗脱剂 | 无水乙醇 | 90％乙醇 | 80％乙醇 | 70％乙醇 | 60％乙醇 |
| 含量(mg/ml)RSD(％) | 0.03323.83 | 0.06232.61 | 0.07241.76 | 0.07212.16 | 0.07272.24 |
从表4可见，采用80％、70％、60％的乙醇均可将制剂中连翘苷洗脱完全，但70％及60％乙醇由于含水量较高，洗脱出的杂质较多，连翘苷峰分离度较差，因此选用80％乙醇作洗脱剂。
7.9精密度试验
本发明质量标准中含量测定项下色谱条件，精密吸取连翘苷对照品溶液(0.0712mg/ml)5μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，重复进样5次，结果列入表5，平均峰面积为974977，RSD为0.53％。
表5 连翘苷对照品的精密度试验
| 进样次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD(％) |
| 峰面积 | 974638 | 968693 | 975645 | 973002 | 982908 | 974977 | 0.53 |
7.10重现性试验
精密量取本品10ml，按本发明质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备5份供试液，分别进样，测定峰面积，计算结果列入表6，平均含量为0.0731mg/ml，RSD为1.05％。
表6 制剂供试品中连翘苷的重现性试验
| 进样次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD(％) |
| 含量(mg/ml) | 0.0731 | 0.0718 | 0.0736 | 0.0733 | 0.0737 | 0.0731 | 1.05 |
7.11稳定性试验
精密量取本品10ml，本发明质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备供试液，分别于0、1、2、4、8小时测定连翘苷峰面积，结果列入表7，结果表明，供试品在8小时内稳定性良好。
表7 制剂供试品中连翘苷的稳定性试验
| 进样次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD(％) |
| 峰面积 | 1003429 | 990826 | 1003239 | 1004843 | 1004623 | 1001392 | 0.59 |
7.12回收率试验
采用加样回收法，精密量取5份已测定含量的样品(平均含量为0.0731mg/ml)各5ml，分别精密加入连翘苷对照品溶液(以水作溶剂，0.01748mg/ml)20ml，摇匀，用***提取至***层无色，取水层，加水饱和的正丁醇提取6次(30ml、20ml、20ml、20ml、20ml、20ml)，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置蒸发皿中，蒸至近干，加中性氧化铝1g拌匀，加于中性氧化铝柱(200～300目，2g，内径1.5cm)上，用80％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加甲醇溶解后转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，制成供试液。分别精密吸取上述5份样品各5μl注入液相色谱仪，记录色谱，测定含量，计算回收率(结果见表8。平均回收率为99.40％，RSD为2.17％。
表8 制剂供试品中连翘苷的回收率试验
| 试验次数 | 样品量(ml) | 含连翘苷(mg) | 加入连翘苷(mg) | 测得量(mg) | 回收率(％) | 平均回收率(％) | RSD(％) |
| 12 | 55 | 0.36550.3655 | 0.70260.7119 | 96.4299.08 |
| 345 | 555 | 0.36550.36550.3655 | 0.3496 | 0.71020.72200.7182 | 98.60102.0100.9 | 99.40 | 2.17 |
7.13样品测定
按本发明质量标准制备供试品溶液和对照品溶液，分别进样5μl，记录色谱，测定峰面积，按下式计算含量：
式中：Ai：供试品溶液峰面积
As：对照品溶液峰面积
Cs：对照品溶液浓度(mg/ml)
L：供试品取样量(10ml)
3批样品中连翘苷含量测定结果(见表9)
表9 3批样品中连翘苷含量测定结果(n＝2)
| 批号 | 含量(mg/ml) | 平均含量(mg/ml) | |
| 1 | 2 | ||
| 031107031108031109 | 0.07200.07660.0775 | 0.07070.07500.0767 | 0.07140.07580.0771 |
根据多批小试及三批中试样品测定结果，样品中连翘苷的煎煮收率、醇沉收率及水沉收率分别约在75％、60％、75％，因此制剂中连翘苷含量限度计算如下：
连翘苷含量限度＝制剂含连翘药材(mg/ml)×药材含连翘苷限度(药典规定)×收率×每支装量(ml)＝90000/1000×0.15％×75％×60％×75％×10＝0.456mg。
故本品每支含连翘以连翘苷(C29H36O15)计，不得少于0.456mg。
具体实施方式：
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
实施例1一种治疗小儿高热不退的口服液质量控制方法
【处方】大青叶150g、板蓝根90g、金银花90g、连翘90g、栀子90g、牡丹皮90g、黄芩90g、淡竹叶60g、地龙60g、重楼45g、柴胡90g、白薇60g、阿斯巴甜400g、羧甲基纤维钠8g及苯甲酸钠1g
【制法】以上十二味，将牡丹皮、柴胡、连翘药材粉碎至全部通过45目，但不能过30目，按药粉与水比率1/10加水，即加水2700ml，用水蒸汽蒸馏2h，收集蒸馏液；药渣与其余青叶等九味加水7350ml煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加乙醇使含醇量为70％，静置。取上清液回收乙醇，浓缩至200ml，加水搅匀，静置，取上清液，滤过，滤液浓缩至适量。另取阿斯巴甜制成糖浆，与上述药液及蒸馏液合并，再加入羧甲基纤维钠、苯甲酸钠，调整总量至1000ml，搅匀滤过，灌装，按每支10ml分装，灭菌，即得。
【鉴别】(1)取本品20ml，加水40ml，用***提取3次，每次20ml，合并***提取液，加水洗涤2次，每次30ml，取***层，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取靛玉红对照品，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10ul、对照品溶液5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-丙酮(5∶4∶1)为展开剂，展开，取出，凉干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品10ml，加水20ml，用***提取3次，每次20ml，弃***液，水层用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，加0.25％氢氧化钠溶液洗涤3次，每次20ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材2.0g，加乙醇50ml，置水浴回流提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml微热溶解，滤过，滤液用***提取2次，每次20ml，余下步骤同供试品制备方法，制成对照药材溶液。照(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮-甲酸(12∶2∶2.5∶0.2)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取本品20ml，加水10ml，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml，弃醋酸乙酯液，水层用正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加无水乙醇20ml超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮2ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮苯-甲酸(9∶2.5∶3∶0.2)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品10ml，加水20ml，用***提取2次，每次20ml，弃***液，用水洗涤2次，每次20ml，将水洗***提取液挥至近干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-甲醇-醋酸乙酯(5∶1)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以3％三氯化铁乙醇试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】连翘苷的含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-水(24∶76)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长230nm。理论塔板数以连翘苷(C29H36O15)峰计，应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取连翘苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.07mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备精密量取装量项下的本品10ml，加水20ml，用***提取至***层无色，取水层，加水饱和的正丁醇提取6次(30ml、20ml、20ml、20ml、20ml、20ml)，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置蒸发皿中，蒸至近干，加中性氧化铝1g拌匀，加于中性氧化铝柱(200～300目，2g，内径1.5cm)上，用80％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加甲醇溶解后转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每支含连翘以连翘苷(C29H36O15)计，不得少于0.456mg。
实施例2一种治疗小儿高热不退的糖浆剂质量控制方法
【处方】大青叶150g、板蓝根90g、金银花90g、连翘90g、栀子90g、牡丹皮90g、黄芩90g、淡竹叶60g、地龙60g、重楼45g、柴胡90g、白薇60g、蔗糖400g、羧甲基纤维钠8g及苯甲酸钠1g
【制法】以上十二味，将牡丹皮、柴胡、连翘药材粉碎至全部通过45目，但不能过30目，按药粉与水比率1/10加水，即加水2700ml，用水蒸汽蒸馏2h，收集蒸馏液；药渣与其余青叶等九味加水7350ml煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加乙醇使含醇量为70％，静置。取上清液回收乙醇，浓缩至200ml，加水搅匀，静置，取上清液，滤过，滤液浓缩至适量。另取蔗糖400g制成单糖浆，与上述药液及蒸馏液合并，再加入羧甲基纤维钠、苯甲酸钠，调整总量至1000ml，搅匀滤过，灌装，按每支10ml分装，灭菌，即得。
【质量控制方法】
鉴别、含量测定方法同实施例1，其中每支含甘草以甘草酸(C42H62O16)计不得少于4.38mg。
实施例3小儿退热颗粒
【处方】大青叶150g、板蓝根90g、金银花90g、连翘90g、栀子90g、牡丹皮90g、黄芩90g、淡竹叶60g、地龙60g、重楼45g、柴胡90g、白薇60g、蔗糖400g、羧甲基纤维钠8g及苯甲酸钠1g
【制法】以上十二味，将牡丹皮、柴胡、连翘药材粉碎至全部通过45目，但不能过30目，按药粉与水比率1/10加水，即加水2700ml，用水蒸汽蒸馏2h，收集蒸馏液；药渣与其余青叶等九味加水7350ml煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加乙醇使含醇量为70％，静置。取上清液回收乙醇，浓缩至200ml，加水搅匀，静置，取上清液，滤过，浓缩成相对密度约1.20(50℃)的浸膏。另将适量蔗糖与上述浸膏混匀，干燥，粉碎，制粒，烘干，混匀，制成颗粒1000g，分装，即得。
【质量控制方法】鉴别、含量测定方法同实施例1，其中每克颗粒含甘草以甘草酸(C42H62O16)计不得少于4.38mg。
【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VII D)测定。
色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-水(24∶76)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长230nm。理论塔板数以连翘苷(C29H36O15)峰计，应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取连翘苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.07mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备精密量取装量项下的本品10ml，加水20ml，用***提取至***层无色，取水层，加水饱和的正丁醇提取6次(30ml、20ml、20ml、20ml、20ml、20ml)，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置蒸发皿中，蒸至近干，加中性氧化铝1g拌匀，加于中性氧化铝柱(200～300目，2g，内径1.5cm)上，用80％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加甲醇溶解后转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每支含连翘以连翘苷(C29H36O15)计，不得少于0.456mg。
实施例4一种治疗小儿高热不退的糖浆剂质量控制方法
【处方】大青叶150g、板蓝根90g、金银花90g、连翘90g、栀子90g、牡丹皮90g、黄芩90g、淡竹叶60g、地龙60g、重楼45g、柴胡90g、白薇60g、阿斯巴甜400g、羧甲基纤维钠8g及苯甲酸钠1g
【制法】以上十二味，将牡丹皮、柴胡、连翘药材粉碎至全部通过45目，但不能过30目，按药粉与水比率1/10加水，即加水2700ml，用水蒸汽蒸馏2h，收集蒸馏液；药渣与其余青叶等九味加水7350ml煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加乙醇使含醇量为70％，静置。取上清液回收乙醇，浓缩至200ml，加水搅匀，静置，取上清液，滤过，滤液浓缩至适量。另取阿斯巴甜制成糖浆，与上述药液及蒸馏液合并，再加入羧甲基纤维钠、苯甲酸钠，调整总量至1000ml，搅匀滤过，灌装，按每支10ml分装，灭菌，即得。
【质量控制方法】(1)取本品10ml，加水30ml，用15ml***提取，取***提取液，加20ml水洗涤，取***层，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取靛玉红对照品，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液5ul、对照品溶液1ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-丙酮(2.5∶2∶0.8)为展开剂，展开，取出，凉干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品5ml，加水15ml，用15ml***提取，弃***液，水层用15ml水饱和的正丁醇提取，取正丁醇液，加15ml0.25％氢氧化钠溶液洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材1.0g，加乙醇40ml，置水浴回流提取20min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml微热溶解，滤过，滤液用***提取3次，每次10ml，余下步骤同供试品制备方法，制成对照药材溶液。照(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮-甲酸(10∶1∶1.9∶0.16)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取本品10ml，加水5ml，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml，弃醋酸乙酯液，水层用20ml正丁醇提取，取正丁醇液，蒸干，残渣加无水乙醇20ml超声处理5min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮苯-甲酸(7∶2.2∶1.8∶0.17)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品5ml，加水15ml，用15ml***提取，弃***液，用水洗涤2次，每次20ml，将水洗***提取液挥至近干，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各1ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(3.5∶0.7)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以3％三氯化铁乙醇试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VII D)测定。
色谱条件与***适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-水(21∶66)；流速：1.0ml/min；柱温：28℃；检测波长228nm。理论塔板数以连翘苷(C29H36O15)峰计，应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取连翘苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.06mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备精密量取装量项下的本品10ml，加水20ml，用***提取至***层无色，取水层，加水饱和的正丁醇提取7次(每次30ml)，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置蒸发皿中，蒸至近干，加中性氧化铝1g拌匀，加于中性氧化铝柱上，用70％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加甲醇溶解后转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每支含连翘以连翘苷(C29H36O15)计，不得少于0.456mg。
实施例5一种治疗小儿高热不退的颗粒剂质量控制方法
大青叶150g、板蓝根90g、金银花90g、连翘90g、栀子90g、牡丹皮90g、黄芩90g、淡竹叶60g、地龙60g、重楼45g、柴胡90g、白薇60g、蔗糖400g、羧甲基纤维钠8g及苯甲酸钠1g
【制法】以上十二味，将牡丹皮、柴胡、连翘药材粉碎至全部通过45目，但不能过30目，按药粉与水比率1/10加水，即加水2700ml，用水蒸汽蒸馏2h，收集蒸馏液；药渣与其余青叶等九味加水7350ml煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加乙醇使含醇量为70％，静置。取上清液回收乙醇，浓缩至200ml，加水搅匀，静置，取上清液，滤过，浓缩成相对密度约1.20(50℃)的浸膏。另将适量蔗糖与上述浸膏混匀，干燥，粉碎，制粒，烘干，混匀，制成颗粒1000g，分装，即得。
【质量控制方法】鉴别方法包括以下方法中的一种或几种：
(1)取本品25ml，加水50ml，用***提取3次，每次25ml，合并***提取液，加水洗涤3次，每次40ml，取***层，蒸干，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液。另取靛玉红对照品，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10ul、对照品溶液5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-丙酮(7∶5∶1.3)为展开剂，展开，取出，凉干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品15ml，加水25ml，用***提取3次，每次25ml，弃***液，水层用水饱和的正丁醇提取3次，每次25ml，合并正丁醇液，加0.25％氢氧化钠溶液洗涤3次，每次25ml，再用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次30ml，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材3.0g，加乙醇60ml，置水浴回流提取40min，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml微热溶解，滤过，滤液用***提取3次，每次30ml，余下步骤同供试品制备方法，制成对照药材溶液。照(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮-甲酸(14∶3∶2.8∶0.24)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取本品30ml，加水20ml，用醋酸乙酯提取3次，每次25ml，弃醋酸乙酯液，水层用正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加无水乙醇20ml超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮3ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮苯-甲酸(11∶2.8∶3.4∶0.24)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品15ml，加水25ml，用***提取2次，每次25ml，弃***液，用水洗涤2次，每次20ml，将水洗***提取液挥至近干，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(7∶1.4)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以3％三氯化铁乙醇试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】色谱条件与***适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-水(27∶83)；流速：1.0ml/min；柱温：32℃；检测波长232nm。理论塔板数以连翘苷(C29H36O15)峰计，应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取连翘苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.08mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备精密量取装量项下的本品10ml，加水20ml，用***提取至***层无色，取水层，加水饱和的正丁醇提取8次(每次20ml)，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置蒸发皿中，蒸至近干，加中性氧化铝1g拌匀，加于中性氧化铝柱上，用60％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加甲醇溶解后转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每支含连翘以连翘苷(C29H36O15)计，不得少于0.456mg。
实施例6一种治疗小儿高热不退的口服液质量控制方法
【处方】大青叶150g、板蓝根90g、金银花90g、连翘90g、栀子90g、牡丹皮90g、黄芩90g、淡竹叶60g、地龙60g、重楼45g、柴胡90g、白薇60g、阿斯巴甜400g、羧甲基纤维钠8g及苯甲酸钠1g
【制法】同实施例1
【质量控制方法】
鉴别方法包括以下方法中的一种或几种：
(1)取本品20ml，加水45ml，用***提取2次，每次20ml，合并***提取液，加水洗涤2次，每次35ml，取***层，蒸干，残渣加甲醇2.5ml溶解，作为供试品溶液。另取靛玉红对照品，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液8ul、对照品溶液4ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-丙酮(6∶4.0∶1.2)为展开剂，展开，取出，凉干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品8ml，加水25ml，用***提取2次，每次18ml，弃***液，水层用水饱和的正丁醇提取2次，每次18ml，合并正丁醇液，加0.25％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次20ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25ml，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材2.5g，加乙醇55ml，置水浴回流提取35min，滤过，滤液蒸干，残渣加水35ml微热溶解，滤过，滤液用***提取2次，每次25ml，余下步骤同供试品制备方法，制成对照药材溶液。照(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液8ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮-甲酸(13∶2.5∶2.6∶0.19)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取本品25ml，加水18ml，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml，弃醋酸乙酯液，水层用正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加无水乙醇20ml超声处理8min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮2ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各8ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮苯-甲酸(9∶2.7∶3.0∶0.19)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品10ml，加水15ml，用***提取1次，每次20ml，弃***液，用水洗涤2次，每次20ml，将水洗***提取液挥至近干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各4ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(6∶1.2)为展开剂，展开，取出，凉干，喷以3％三氯化铁乙醇试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VII D)测定；色谱条件与***适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-水(26∶80)；流速：1.0ml/min；柱温：29℃；检测波长231nm。理论塔板数以连翘苷(C29H36O15)峰计，应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取连翘苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.065mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备精密量取装量项下的本品10ml，加水20ml，用***提取至***层无色，取水层，加水饱和的正丁醇提取7次(每次25ml)，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置蒸发皿中，蒸至近干，加中性氧化铝1g拌匀，加于中性氧化铝柱上，用80％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加甲醇溶解后转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各4μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
Claims (9)
1、一种小儿退热制剂的质量控制方法，其特征在于，其特征在于，包括鉴别和含量测定的步骤。
2、权利要求1的方法，其特征在于，所述小儿退热制剂是口服制剂。
3、权利要求2的方法，其特征在于，所述口服制剂是口服液，糖浆或颗粒剂。
4、权利要求1的方法，其特征在于，所述鉴别方法选自以下方法中的一种或几种：
a.取本品，加水，用***提取，加水洗涤，取***层，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液。另取靛玉红对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-丙酮为展开剂，展开，取出，凉干；
b.取本品，加水，用***提取，弃***液，水层用水饱和的正丁醇提取，取正丁醇液，加0.25％氢氧化钠溶液洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材，加乙醇，置水浴回流提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水微热溶解，滤过，滤液用***提取，余下步骤同供试品制备方法，制成对照药材溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；
c.取本品，加水，用醋酸乙酯提取，弃醋酸乙酯液，水层用正丁醇提取，取正丁醇液，蒸干，残渣加无水乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮苯-甲酸为展开剂，展开，取出，凉干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰；
d.取本品，加水，用***提取，弃***液，用水洗涤，将水洗***提取液挥至近干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液。照中国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，凉干，喷以3％三氯化铁乙醇试液，热风吹至斑点显色清晰；
其中所述含量测定的方法，步骤如下：
照中国药典2000年版一部附录VII D高效液相色谱法测定；色谱条件与***适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-水21-27∶66-83；流速：1.0ml/min；柱温：28-32℃；检测波长230±2nm；理论塔板数以连翘苷C29H36O15峰计，应不低于3000；
对照品溶液的制备 精密称取连翘苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.06-0.08mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 精密量取装量项下的本品10ml，加水20ml，用***提取至***层无色，取水层，加水饱和的正丁醇提取6-8次，每次30ml或20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置蒸发皿中，蒸至近干，加中性氧化铝1g拌匀，加于中性氧化铝柱上，用80％或70％或60％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加甲醇溶解后转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜0.45μm滤过，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每支含连翘以连翘苷C29H36O15计，不得少于0.456mg。
5、权利要求1的方法，其特征在于，所述鉴别方法选自以下方法中的一种或几种：
a.取本品10-25ml，加水30-50ml，用***提取1-3次，每次15-25ml，合并***提取液，加水洗涤1-3次，每次20-40ml，取***层，蒸干，残渣加甲醇1-3ml溶解，作为供试品溶液。另取靛玉红对照品，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5-10ul、对照品溶液1-5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-丙酮2.5-7∶2-5∶0.8-1.3为展开剂，展开，取出，凉干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
b.取本品5-15ml，加水15-25ml，用***提取1-3次，每次15-25ml，弃***液，水层用水饱和的正丁醇提取1-3次，每次15-25ml，合并正丁醇液，加0.25％氢氧化钠溶液洗涤1-3次，每次15-25ml，再用正丁醇饱和的水洗涤1-3次，每次10-30ml，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1-3ml溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材1.0-3.0g，加乙醇40-60ml，置水浴回流提取20-40min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20-40ml微热溶解，滤过，滤液用***提取1-3次，每次10-30ml，余下步骤同供试品制备方法，制成对照药材溶液。照中国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液5-10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮-甲酸10-14∶1-3∶1.9-2.8∶0.16-0.24为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
c.取本品10-30ml，加水5-20ml，用醋酸乙酯提取1-3次，每次15-25ml，弃醋酸乙酯液，水层用正丁醇提取1-2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加无水乙醇20ml超声处理5-15min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮1-3ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮苯-甲酸7-11∶2.2-2.8∶1.8-3.4∶0.17-0.24为展开剂，展开，取出，凉干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
d.取本品5-15ml，加水15-25ml，用***提取1-2次，每次15-25ml，弃***液，用水洗涤2次，每次20ml，将水洗***提取液挥至近干，残渣加甲醇1-3ml溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1-5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯3.5-7∶0.7-1.4为展开剂，展开，取出，凉干，喷以3％三氯化铁乙醇试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
6、权利要求1的方法，其特征在于，所述鉴别方法选自以下方法中的一种或几种：
a.取本品20ml，加水40ml，用***提取3次，每次20ml，合并***提取液，加水洗涤2次，每次30ml，取***层，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取靛玉红对照品，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10ul、对照品溶液5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-丙酮5∶4∶1为展开剂，展开，取出，凉干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
b.取本品10ml，加水20ml，用***提取3次，每次20ml，弃***液，水层用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，加0.25％氢氧化钠溶液洗涤3次，每次20ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材2.0g，加乙醇50ml，置水浴回流提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml微热溶解，滤过，滤液用***提取2次，每次20ml，余下步骤同供试品制备方法，制成对照药材溶液。照中国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-丙酮-甲酸12∶2∶2.5∶0.2为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
c.取本品20ml，加水10ml，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml，弃醋酸乙酯液，水层用正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加无水乙醇20ml超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮2ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以9∶2.5∶3∶0.2氯仿-甲醇-丙酮苯-甲酸为展开剂，展开，取出，凉干，喷以香草醛硫酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
d.取本品10ml，加水20ml，用***提取2次，每次20ml，弃***液，用水洗涤2次，每次20ml，将水洗***提取液挥至近干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯5∶1为展开剂，展开，取出，凉干，喷以3％三氯化铁乙醇试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
7、根据权利要求4-6任何一项的方法，其特征在于，所述制剂选自口服液，糖浆和颗粒剂。
8、根据权利要求7的方法，其特征在于，所述口服液每支含连翘以连翘苷C29H36O15计，不得少于0.456mg；所述糖浆每10ml含连翘以连翘苷C29H36O15计，不得少0.456mg；所述颗粒剂，每1g含连翘以连翘苷C29H36O15计，不得少于0.456mg。
9、根据权利要求1的方法，其特征在于，所述小儿退热制剂由如下重量配比的中药原料制成的：
大青叶150g、板蓝根90g、金银花90g、连翘90g、栀子90g、牡丹皮90g、黄芩90g、淡竹叶60g、地龙60g、重楼45g、柴胡90g、白薇60g。
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Legal Events
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| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
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Granted publication date: 20080521 Termination date: 20211121 |