CN1785267A - 复方胆通固体制剂的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了复方胆通固体制剂的质量控制方法，具体涉及复方胆通胶囊、颗粒剂和片剂的质量控制方法。该方法用薄层色谱法对大黄、羟甲香豆素和穿心莲内酯固体制剂中其他药物的进行定性鉴别，并用高效液相色谱法测定该药物中羟甲香豆素和大黄素、大黄酚的含量，使样品处理更加简便，保证本复方制剂较高的质量标准水平。本发明质量控制方法对产品的质量控制较为稳定、精密度高、重现性良好，并且鉴别全面，能较好地控制产品质量，确保了产品质量的“均一、稳定、有效、可控”。
Description
发明领域：
本发明涉及药物领域，特别涉及复方胆通固体制剂的质量控制方法。具体涉及复方胆通胶囊、颗粒剂和片剂的质量控制方法。
背景技术：
复方胆通固体制剂是由药典收载品种复方胆通片、胶囊改变剂型而来，该固体制剂原料药由羟甲香豆素、溪黄草、茵陈、穿心莲、大黄组成，临床上用于急、慢性胆囊炎，胆管炎，胆囊、胆道结石合并感染，胆囊手术后综合症，胆道功能性等疾病的治疗，有较好的效果。该方配伍精简合理，为使服用的药物迅速发挥疗效，我们将以前的片剂、胶囊通过采用新型辅料及新的成型工艺成功开发了“复方胆通胶囊”等新的固体制剂。该产品具有清热利胆，解痉止痛的功能，使用该药物能迅速发挥疗效，用于胆道、胆管功能性等疾病。现有的“复方胆通片”及“复方胆通胶囊”的质量标准(WS3-B-0973-91)及(WS3-B-0974-91)中鉴别(1)为大黄药材的理化鉴别，缺乏显微鉴别，质量标准中鉴别(2)和(3)为羟甲香豆素的薄层色谱鉴别方法，其中方法(3)缺少阴性对照，检出结果有时呈阴性，杂质干扰大。质量标准中还缺少对其他药材或成分(如穿心莲和大黄素)的鉴别，由于该鉴别方法缺乏专属性，给鉴别造成一定困难。另外，质量标准中【含量测定】项还缺少其他主要药物成分的含量测定，不能很好的控制成品质量。
中药制剂长期以来，质量难以有效控制，有效控制中药产品的质量是一个重大的课题，现有技术中采用的方法不完整，少数针对性不强，使用这些方法难以达到真正控制质量的目的。现有技术由于缺少质量控制方法，难以控制剂的质量；给正常的生产经营带来了困难，利用已知的一些技术难以对该制剂产品提供好的质量控制方法，本发明针对现有技术的不足，采用新的手段对复方胆通固体制剂的质量进行控制，特别是增加制剂中含量测定检测方法，用高效液相色谱法测定该药物中羟甲香豆素和大黄素、大黄酚的含量，使样品处理更加简便，保证本复方制剂较高的质量标准水平。
为有效控制产品质量，我们针对现有质量标准的上述不足，改进并建立了新的复方胆通固体制剂质量控制方法，该质量控制方法较为稳定、精密度高、重现性良好，并且鉴别全面，能较好地控制产品质量，确保产品质量的“均一、稳定、有效、可控”。
发明内容：
本发明的目的在于公开复方胆通固体制剂的质量控制方法。本发明是针对复方胆通固体制剂提出质量控制方法的，该复方胆通固体制剂具体包括胶囊、颗粒剂和片剂等。
本发明的所述的复方胆通固体制剂是由如下重量/份的中药原料制成的：
羟甲香豆素100g、溪黄草900g、茵陈600g、穿心莲300g、大黄30g。
本发明复方胆通固体制剂的制备方法可以采用以下方法：
通过将上述配方的中药原料经过提取或其他方式加工，制成药物活性物质，随后，以该物质为原料，需要时加入药物可接受的载体，按照制剂学的常规技术制成胶囊、颗粒剂、片剂。所述活性物质可以通过选自以下方式的方法得到，如：通过粉碎、压榨、煅烧、研磨、过筛、渗漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、层析等方法得到、这些活性物质可以是浸膏形式的物质，可以是干浸膏也可以是流浸膏，根据制剂的不同需要决定制成不同的浓度。
本发明的固体制剂，在制成制剂时根据需要可以加入药物可接受的载体，这些载体可以是任何适合制成固体制剂的载体，如：甘露醇、山梨醇、山梨酸或钾盐、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素A、维生素C、维生素E、维生素D、氮酮、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、丙二醇、乙醇、土温60-80、司班-80、蜂蜡、羊毛脂、液体石蜡、十六醇、没食子酸酯类、琼脂、三乙醇胺、碱性氨基酸、尿素、尿囊素、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。
本发明的固体制剂，优选的是经过如下方法制备的：
其中胶囊剂制法为：
以上五味，除羟甲香豆素、大黄外，其余溪黄草等三味加水煎煮二次，加水量为12，10倍，每次2小时，滤过，合并滤液，静置，取上清液，浓缩成相对密度为1.31(80℃)的稠膏，减压干燥，粉碎成细粉；大黄粉碎成细粉，与羟甲香豆素细粉及上述干膏粉混匀，用乙醇制粒，干燥，分装成1000粒，即得。
其中颗粒剂制法为：
以上五味，除羟甲香豆素、大黄外，其余溪黄草等三味加水煎煮二次，加水量为12，10倍，每次2小时，滤过，合并滤液，静置，取上清液，浓缩成相对密度为1.31(80℃)的稠膏，减压干燥，粉碎成细粉；大黄粉碎成细粉，与羟甲香豆素细粉及上述干膏粉混匀，用乙醇制粒，干燥，分装成1000粒，即得。
其中片剂制法为：
以上五味，除羟甲香豆素、大黄外，其余溪黄草等三味加水煎煮二次，加水量为12，10倍，每次2小时，滤过，合并滤液，静置，取上清液，浓缩成相对密度为1.31(80℃)的稠膏，减压干燥，粉碎成细粉；大黄粉碎成细粉，与羟甲香豆素细粉及上述干膏粉混匀，用乙醇制粒，干燥，整粒，按常规方法压片，制成1000片，即得。
本发明的固体制剂，其中药配方中，部分中药可以用同等作用的中药进行替换，替换后疗效不会改变。
本发明的质量控制方法，包括采用薄层色谱法和理化方法对大黄及其有效成分、羟甲香豆素和穿心莲内酯进行鉴别，采用分光光度法测定羟甲香豆素，高效液相色谱法测定大黄素和大黄酚的含量。
本发明的质量控制方法，包括以下步骤：
对【性状】的观察，
对内容物中的成分进行【鉴别】，
对固体制剂进行【检查】，
对有效成分进行【含量测定】。
所述对【性状】的观察包括：
本品为胶囊剂时，棕褐色的粉末或颗粒；味苦、涩。
本品为颗粒剂时，内容物呈棕色至棕褐色的颗粒；味甜、微涩。
本品为片剂时，内容物为棕色片；味苦、涩。
所述对制剂内容物中的成分进行【鉴别】包括：
对大黄、羟甲香豆素和穿心莲内酯等成分的鉴别，其方法如下：
(1)取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物，研细，置显微镜下观察：草酸钙簇晶直径20～160μm，有的至190μm。具缘纹孔、网纹、螺纹及环纹导管非木化。淀粉粒甚多，单粒类球形或多角形，直径3～45μm，脐点星状；复粒由2～8分粒组成；
(2)取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物0.5g，研细，加乙醇15ml，置水浴上加热10-15分钟，滤过，滤液加盐酸液(1mol/L)5ml，水浴上加热10-30分钟，放冷，用***10ml振摇，分取醚液，加氢氧化钠液(0.1mol/L)5ml，振摇，水层呈棕红色，加稀盐酸数滴，红色褪去；
(3)取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，研细，加氯仿20-40ml，加热回流10-20分钟，滤过，取滤液5ml，挥去氯仿，残渣用甲醇5ml溶解，加三氯化铁试液1滴，显黄色，再加氨试液1滴，显红色，并有蓝紫色荧光环；
(4)取鉴别(3)项下的滤液15ml，挥去氯仿，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液，另取羟甲香豆素对照品10mg，用甲醇2ml溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-丙酮(1.2-1.8∶0.8-1.1)为展开剂，展开，取出，晾干，熏碘蒸气。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕黄色斑点；
(5)取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，研细，加乙醇20ml，加热回流5-15分钟，滤过，滤液加活性炭少许，温热后滤过，取滤液2ml，蒸干，加1％枸橼酸丙酮溶液及硼酸的饱和丙酮溶液各1ml，蒸干，置紫外光灯(365nm)下观察，显绿黄色荧光。另取滤液少许，滴于滤纸上，置紫外光灯(365nm)下观察，显紫蓝色荧光。滴加1％三氯化铝乙醇溶液，显亮蓝色荧光；
(6)取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物1g，加乙醇30ml，浸泡30分钟，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇5ml使溶解，滤过，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取脱水穿心莲内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇(3.4-4.5∶2.6-3.4∶0.3-0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％3，5-二硝基苯甲酸乙醇溶液与2mol/L氢氧化钾溶液的等量混合液(临用时配制)，立即在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(7))取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，置具塞锥形瓶中，加甲醇20ml超声20-40分钟，滤过，滤液蒸干，加水30ml使溶解，再加盐酸3ml，置水浴中加热20-40分钟，立即冷却，用***分2次提取，每次20ml，合并***液，蒸干，残渣加氯仿4ml使溶解，滤过，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.05g，同法制备对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(11-18∶4.3-7.5∶0.8-1.1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
优选的【鉴别】方法为：
(1)取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物，研细，置显微镜下观察：草酸钙簇晶直径20～160μm，有的至190μm。具缘纹孔、网纹、螺纹及环纹导管非木化。淀粉粒甚多，单粒类球形或多角形，直径3～45μm，脐点星状；复粒由2～8分粒组成；
(2)取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物0.5g，研细，加乙醇15ml，置水浴上加热10分钟，滤过，滤液加盐酸液(1mol/L)5ml，水浴上加热20分钟，放冷，用***10ml振摇，分取醚液，加氢氧化钠液(0.1mol/L)5ml，振摇，水层呈棕红色，加稀盐酸数滴，红色褪去；
(3)取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，研细，加氯仿30ml，加热回流10分钟，滤过，取滤液5ml，挥去氯仿，残渣用甲醇5ml溶解，加三氯化铁试液1滴，显黄色，再加氨试液1滴，显红色，并有蓝紫色荧光环；
(4)取鉴别(3)项下的滤液15ml，挥去氯仿，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液，另取羟甲香豆素对照品10mg，用甲醇2ml溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-丙酮(1.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，熏碘蒸气。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕黄色斑点；
(5)取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，研细，加乙醇20ml，加热回流10分钟，滤过，滤液加活性炭少许，温热后滤过，取滤液2ml，蒸干，加1％枸橼酸丙酮溶液及硼酸的饱和丙酮溶液各1ml，蒸干，置紫外光灯(365nm)下观察，显绿黄色荧光。另取滤液少许，滴于滤纸上，置紫外光灯(365nm)下观察，显紫蓝色荧光。滴加1％三氯化铝乙醇溶液，显亮蓝色荧光；
(6)取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物1g，加乙醇30ml，浸泡30分钟，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇5ml使溶解，滤过，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取脱水穿心莲内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇(4∶3∶0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％3，5-二硝基苯甲酸乙醇溶液与2mol/L氢氧化钾溶液的等量混合液(临用时配制)，立即在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(7))取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，置具塞锥形瓶中，加甲醇20ml超声30分钟，滤过，滤液蒸干，加水30ml使溶解，再加盐酸3ml，置水浴中加热30分钟，立即冷却，用***分2次提取，每次20ml，合并***液，蒸干，残渣加氯仿4ml使溶解，滤过，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.05g，同法制备对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
所述对制剂进行【检查】包括：
对于胶囊剂，应符合胶囊剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版一部附录IL)；
对于颗粒剂，应符合颗粒剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版一部附录IC)；
对于片剂，应符合片剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版一部附录ID)。
所述对制剂有效成分进行【含量测定】包括对其中的羟甲香豆素和大黄素、大黄酚含量的测定：
其中羟甲香豆素的含量测定方法如下：
1、本发明固体制剂中羟甲香豆素的含量测定方法：照分光光度法(中国药典2000年版二部 附录IV A)测定。
对照品溶液的制备 避光操作。精密称取在105℃干燥至恒重的羟甲香豆素对照品0.1g，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液[取氢氧化钠液(0.1mol/L)20ml，加乙醇稀释至1000ml]约70ml，使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，立即测定。
供试品溶液的制备 避光操作。取装量差异项下内容物，研细，精密称取本品适量(约相当于羟甲香豆素0.1g)，置具塞棕色瓶中，精密加入碱性乙醇液90-110ml，密塞，振摇提取45-75分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置50ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，立即测定。
测定法 分别取对照品溶液与供试品溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部 附录IV A)在372±2nm波长处测定吸收度，计算，即得。
上述测定吸收度波长最好选在372nm处；供试品溶液的制备最好加入碱性乙醇液100ml，振摇提取60分钟。
本品每粒含羟甲香豆素(C10H8O3)应为标示量的90.0％～110.0％。
其中对大黄素、大黄酚的含量测定方法如下：
照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱；甲醇0.1％磷酸溶液(53-121∶11-22)为流动相；检测波长254±3nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品10-14mg、大黄酚对照品14-18mg，分别置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取大黄素及大黄酚溶液各2ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(大黄素每1ml中含9.6μg、大黄酚每1ml中含12.8μg)。
供试品溶液的制备 取装量差异项下内容物约2.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液20ml，超声处理5，10分钟，再加氯仿20ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次10ml，合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，氯仿液移至100ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
上述色谱条件流动相的优选比例数值范围为甲醇0.1％磷酸溶液(83∶17)；检测波长最好为254nm；对照品溶液的制备最好精密称取大黄素对照品12mg、大黄酚对照品16mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度。
本品每粒含大黄以大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)的总量计，不得少于0.15mg。
本发明质量控制方法对产品的质量控制较为稳定、精密度高、重现性良好，并且鉴别全面，能较好地控制产品质量，确保了产品质量的“均一、稳定、有效、可控”。
本发明实验例供试品所用制剂均采用本发明实施例1所述的胶囊剂，可采用本发明实施例2或3所述的颗粒或片剂，还可用与各个实施例中所述的固体制剂具有相同原料组成的其他制剂。
本发明实验例1复方胆通固体制剂对药材定性鉴别的研究
1.鉴别：(1)取本品，置显微镜下观察：草酸钙簇晶直径20～160μm，有的至190μm。具缘纹孔、网纹、螺纹及环纹导管非木化。淀粉粒甚多，单粒类球形或多角形，直径3～45μm，脐点星状；复粒由2～8分粒组成。此为方中大黄药材的特征鉴别。
(2)取本品适量，研细，加乙醇15ml，置水浴上加热10分钟，滤过，滤液加盐酸液(1mol/L)5ml，水浴上加热20分钟，放冷，用***10ml振摇，分取醚液，加氢氧化钠液(0.1mol/L)5ml，振摇，水层呈棕红色，加稀盐酸数滴，红色褪去。此为方中大黄药材的特征鉴别。经多次试验，结果均呈阳性。
(3)取本品适量，研细，加氯仿30ml，微沸，滤过，取滤液5ml，挥去氯仿，残渣用甲醇5ml溶解，加三氯化铁试液1滴，显黄色，再加氨试液1滴，显红色，并有蓝紫色荧光环。此为方中羟甲香豆素的理化特征鉴别。经多次试验，结果均呈阳性。
(4)取鉴别(3)项下的滤液15ml，挥去氯仿，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液。同法制备缺羟甲香豆素的阴性供试品溶液。另取羟甲香豆素对照品10mg，用甲醇2ml溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部 附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-丙酮(1.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，熏碘蒸气。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕黄色斑点。此为方中羟甲香豆素的定性鉴别。经多次试验，结果均呈阳性，阴性对照无干扰。
(5)取本品内容物2g，研细，加乙醇20ml，微沸，滤过，滤液加活性炭少许，温热后滤过；取滤液2ml，蒸干，加1％枸橼酸丙酮溶液及硼酸的饱和丙酮溶液各1ml，蒸干，置紫外光灯(365nm)下观察，显绿黄色荧光。另取滤液少许，滴于滤纸上，置紫外光灯(365nm)下观察，显紫蓝色荧光。滴加1％三氯化铝乙醇溶液，显亮蓝色荧光。此为方中具有黄酮苷元结构的物质鉴别。经多次试验，结果均呈阳性。
(6)据文献资料显示，穿心莲含穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯等成份，由于受组方、生产工艺等条件影响，穿心莲内酯有可能转化为脱水穿心莲内酯。在试验过程中，曾以脱水穿心莲内酯及穿心莲内酯鉴别方中穿心莲药材，但由于穿心莲内酯的不稳定性，在生产工艺中已发生转化，制剂中无法检出穿心莲内酯，因此以脱水穿心莲内酯对照品鉴别方中穿心莲药材。取本品内容物适量加乙醇浸泡，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇适量使溶解，滤过，浓缩至1ml制得供试品溶液。同法制备缺穿心莲药材的阴性供试品溶液。另取脱水穿心莲内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部 附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇(4∶3∶0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％3，5-二硝基苯甲酸乙醇溶液与2mol/L氢氧化钾溶液的等量混合液，立即在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。经多次试验，结果均呈阳性，阴性对照无干扰，故列入本发明质量标准正文。
(7)以大黄对照药材和大黄素对照品鉴别方中大黄药材。取本品内容物置具塞锥形瓶中，加甲醇超声，滤过，滤液蒸干，加水、盐酸使溶解，置水浴中加热30分钟，立即冷却，用***提取，提取液蒸干，残渣加适量氯仿溶解，滤过，浓缩至1ml制得供试品溶液。同法制备缺大黄药材的阴性供试品溶液。另取大黄对照药材同法制备对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。分别以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(30∶10∶0.5)及石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开。结果表明，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂展开的分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，故列入本发明质量标准正文。
2.检查：可按《中国药典》2000年版一部附录制剂通则中胶囊剂(附录IL)项下的规定。
分别进行水分、装量差异、崩解时限、重金属检查、砷盐检查、微生物限度检查(结果见表1)。
表1 复方胆通胶囊三批样品检查结果
| 检查项目 | 检查结果 | ||
| 20010701 | 20010711 | 20010720 | |
| 水分(％)装量差异崩解时限(分钟)重金属检查砷盐检查微生物限度细菌数霉菌数大肠杆菌活满检查 | 4.8符合规定5＜百万分之五＜百万分之一＜10个/g＜10个/g未检出未检出 | 5.0符合规定6＜百万分之五＜百万分之一＜10个/g＜10个/g未检出未检出 | 4.7符合规定6＜百万分之五＜百万分之一＜10个/g＜10个/g未检出未检出 |
本发明实验例2复方胆通固体制剂中羟甲香豆素的含量测定方法研究
3.含量测定的研究
3.1羟甲香豆素的含量测定 采用紫外分光光度法测定本品羟甲香豆素的含量。据文献资料报道，羟甲香豆素含量测定方法有紫外分光光度法、高效液相色谱法等。在试验过程中，我们曾采用高效液相色谱法对羟甲香豆素含量测定进行方法学考察[其色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40∶60)为流动项；流速为1.0ml/min；温度为40℃；检测波长为370nm]，但发现该方法非常不稳定，在相同条件下所测对照品溶液峰面积差异较大，无法精确测定羟甲香豆素含量。后用紫外分光光度法对其进行测定，经过方法学考察，确定紫外分光光度法是一较为稳定、精密度高、重现性良好的方法，能较好地控制产品质量。因此，我们参考“复方胆通胶囊”原质量标准及有关文献资料对羟甲香豆素含量测定方法，对制剂中羟甲香豆素的含量进行了测定，并对测定的方法学进行了研究。
3.1.1仪器与试药
3.1.1.1仪器 日本岛津UV-2501型紫外-可见光分光光度计；电子天平AG135型(瑞士梅特列·托勒多)。
3.1.1.2试药 氢氧化钠(分析纯)，乙醇(分析纯)；羟甲香豆素对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：10241-200002)。
3.1.2吸收光谱的绘制
分别取羟甲香豆素对照品溶液、供试品溶液、缺羟甲香豆素的阴性供试品溶液，在300～500nm范围内以碱性乙醇液为空白扫描。从扫描可得，羟甲香豆素对照品和供试品的碱性乙醇溶液最大吸收峰均为372nm，阴性供试液在372nm处吸收度仅为0.001，可视阴性供试液无吸收。
3.1.3线性关系考察
3.1.3.1标准溶液的制备 避光操作。精密称取105℃干燥至恒重的羟甲香豆素对照品适量，配制成97.2μg/ml的碱性乙醇溶液。
3.1.3.2精密吸取上述溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置50ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液定容至刻度，摇匀，以碱性乙醇液作空白于372nm处测定吸收度(表2)，以吸收度(A)对浓度(μg/ml)进行线性回归计算，回归方程为：A＝0.1217C-0.0211，r＝0.9999。精密量取97.2μg/ml的标准溶液2.5ml，置50ml棕色容量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。在372nm处测定吸收度为0.571。将一供试品溶液所得吸收度分别用回归方程和一点法计算，结果的相对偏差为0.022％，故本发明质量标准采用一点法进行比色测定。线性范围：1.944～9.720μg/ml。
表2 羟甲香豆素线性关系考察
| 浓度(μg/ml) | 吸收度(A) |
| 1.9443.8885.8327.7769.720 | 0.2160.4490.6880.9321.157 |
3.1.4供试品溶液提取时间的选择 提取方法：研细，加碱性乙醇液振摇提取，测定结果见表3。
表3 碱性乙醇液不同提取时间的考察(n＝3)
| 提取时间(min) | 15 | 30 | 60 | 90 | 120 |
| 含量(％)RSD(％) | 22.621.43 | 23.040.98 | 23.630.51 | 23.600.91 | 23.640.73 |
从表3可见，研细，加碱性乙醇液振摇提取60分钟可将制剂中的羟甲香豆素提取完全，故选择振摇提取60分钟。
3.1.5精密度试验
取样品(批号：20010508)内容物，按本发明质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备供试液，以碱性乙醇液作空白于372nm处重复测定5次，记录吸收度，计算结果列入表4，平均含量为23.74％，RSD为0.328％。
表4 制剂供试品中羟甲香豆素的精密度试验
| 测定次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD(％) |
| 含量(％) | 23.68 | 23.75 | 23.64 | 23.79 | 23.83 | 23.74 | 0.328 |
3.1.6重现性试验
取样品(批号：20010508)内容物，按本发明质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备5份供试液，分别于372nm处以碱性乙醇液为空白测定吸收度，计算结果列入表5，平均含量为23.64％，RSD＝0.68％。
表5 制剂供试品中羟甲香豆素的重现性试验
| 测定次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD(％) |
| 含量(％) | 23.72 | 23.43 | 23.71 | 23.82 | 23.51 | 23.64 | 0.68 |
3.1.7供试品溶液稳定性考察
精密称取样品(批号：20010508)内容物，按本发明质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备一供试液，分别于0、0.5、1.0、1.5、2.0小时在372nm处以碱性乙醇液为空白测定吸收度(表6)，结果表明，羟甲香豆素的碱性乙醇溶液在2h内相对稳定。
表6 制剂供试品中羟甲香豆素的稳定性考察
| 测定时间(h) | 0 | 0.5 | 1 | 1.5 | 2 | RSD(％) |
| 吸收度(A)含量(％) | 0.60523.69 | 0.60123.54 | 0.59823.42 | 0.60323.61 | 0.60123.54 | 0.4330.423 |
3.1.8回收率试验
采用加样回收法，精密称取已测定含量的样品(批号：20010508平均含量为23.64％)适量，置具塞棕色瓶中，精密加入羟甲香豆素对照品溶液(0.4760mg/ml)100ml，密塞，振摇提取30分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置50ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，制得供试液。分别制备5份，以碱性乙醇液为空白于372nm处测定吸收度，计算回收率，结果见表7，平均回收率为99.90％，RSD为1.47％。
表7 供试品溶液中羟甲香豆素的回收率试验
| 实验次数 | 样品量(mg) | 含羟甲香豆素(mg) | 加入羟甲香豆素(mg) | 测得量(mg) | 回收率(％) | 平均回收率(％) | RSD(％) |
| 12345 | 204.2210.5207.9203.0212.0 | 48.2749.7649.1547.9950.12 | 47.60 | 95.2098.0096.5296.3697.01 | 98.59101.399.52101.698.51 | 99.90 | 1.47 |
3.1.9样品测定
按本发明质量标准制备供试液和对照品溶液，以碱性乙醇液为空白于372nm处测定吸收度，按下式计算含量：
式中：Ai：供试品溶液吸收度；
As：对照品溶液吸收度；
Cs：对照品溶液浓度(mg/ml)；
W1：平均粒重(mg)；
W2：称样量(mg)；
W3：标示量(100mg)。
3批样品中羟甲香豆素含量测定结果(见表8)。
表8 3批样品中羟甲香豆素含量测定结果
| 批号 | 含量/标示量(％) | 平均含量/标示量(％) | |
| 1 | 2 | ||
| 200107012001071120010720 | 96.1100.294.8 | 96.799.095.9 | 96.499.695.4 |
根据方法学考察结果及3批样品测定结果[样品羟甲香豆素含量(C10H8O3)均在标示量范围(90.0％～110.0％)]可见，紫外分光光度法是一较为稳定、完善的方法，能精确测定出制剂中羟甲香豆素含量，完全可以确保产品质量，因此该制剂中羟甲香豆素的含量测定采用紫外分光光度法。
本发明实验例3复方胆通固体制剂中大黄素、大黄酚的含量测定方法研究
4大黄含量测定 采用高效液相色谱法测定方中大黄素、大黄酚的含量。据文献资料报道，大黄中主要含大黄素、大黄酚、葡萄糖苷、双蒽酮苷、大黄苷、没食子葡萄糖苷、没食子酸等。对大黄中大黄素、大黄酚的含量测定方法，文献报道较多的是高效液相色谱法、薄层扫描法、比色法、容量法等。参考有关文献资料对大黄中大黄素、大黄酚的含量测定方法，对制剂中大黄素、大黄酚的含量进行了测定，并对测定的方法学进行了考察。
4.1仪器 岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪，LC-10ATvp输液泵；SPD-M10Avp二级阵列检测器；SCL-10Avp***控制器；CTO-10ASvp恒温柱箱；CLASS-VP6.1工作站数据处理***；微量进样器(25μl)，HAMILTON公司；超声波清洗机(250W，北京市医疗设备二厂)。
4.2试药 甲醇(分析纯)、磷酸(分析纯)、纯净水、大黄素对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：0756-200010)、大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：0796-200015)
4.3色谱条件 色谱柱：Description：C18(200×4.6mm)；流动相：甲醇-0.1％磷酸溶液(83∶17)；检测波长：254nm；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；进样量：10μl。
4.4***适用性试验
分别取大黄素、大黄酚混合对照品溶液、供试品溶液和缺大黄的阴性供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱。可知大黄素的保留时间(tR)约为10.1分钟，大黄酚的保留时间(tR)约为13.5分钟，阴性样品色谱图在大黄素、大黄酚峰位置处无假阳性峰，大黄素、大黄酚和相近的杂质峰分离完全(分离度＞1.5)，即本试验条件下大黄素、大黄酚与其他组分分离完全。理论塔板数以大黄素、大黄酚峰计算分别为4000、3500。
4.5线性关系考察
4.5.1标准溶液的制备
精密称取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1ml含大黄素9.44μg、大黄酚12.72μg的混合对照品溶液。
4.5.2标准曲线的绘制
精密吸取混合对照品溶液4、8、10、12、16μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱(表9、10，以峰面积A(μV·s)对质量数x(μg)进行线性回归计算，得大黄素线性回归方程为：A＝3623736.7585×X+1192.9500，r＝0.9999，大黄酚线性回归方程为：A＝6422869.4969×X+341.4000，r＝0.9999，精密量取对照品溶液10μl注入液相色谱仪，所得大黄素峰面积为343082、大黄酚峰面积为813784，将一供试品溶液进样分析所得峰面积分别用回归方程和一点法计算含量，结果的相对偏差大黄素0.46％、大黄酚0.24％，故本发明质量标准采用一点法计算含量。线性范围：大黄素0.03776～0.15104μg，大黄酚0.05088～0.20352μg。
表9 大黄素线性关系考察
| 进样量(μg) | 大黄素峰面积(μV·s) |
| 0.037760.075520.094400.113280.15104 | 135217271978343082408267545895 |
表10 大黄酚线性关系考察
| 进样量(μg) | 大黄酚峰面积(μV·s) |
| 0.050880.101760.127200.152640.20352 | 3261636594508137849728141311027 |
4.6甲醇回流提取时间的选择 用甲醇回流提取，测定的结果见表11、12。
表11 回流提取时间的考察(大黄素)(n＝3)
| 回流时间 | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 |
| 含量(％)RSD(％) | 0.013252.59 | 0.015882.04 | 0.017331.66 | 0.017251.88 | 0.017361.97 |
表12 回流提取时间的考察(大黄酚)(n＝3)
| 回流时间 | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 |
| 含量(％)RSD(％) | 0.020112.97 | 0.021731.95 | 0.022981.41 | 0.022881.89 | 0.023022.01 |
从表中可见回流提取30分钟与40分钟、50分钟的结果无显著差异，因此在本发明质量标准中将回流提取时间定为30分钟。
4.7氯仿回流提取时间的选择 用氯仿回流提取，测定的结果见表13、14。
表13 回流提取时间的考察(大黄素)(n＝3)
| 回流时间 | 30 | 45 | 60 | 75 | 90 |
| 含量(％)RSD(％) | 0.014131.94 | 0.015622.08 | 0.017511.52 | 0.017591.56 | 0.017491.97 |
表14 回流提取时间的考察(大黄酚)(n＝3)
| 回流时间 | 30 | 45 | 60 | 75 | 90 |
| 含量(％)RSD(％) | 0.021052.77 | 0.021981.89 | 0.023141.58 | 0.023061.68 | 0.022892.11 |
从表中可见回流提取60分钟与75分钟、90分钟的结果无显著差异，因此在本发明质量标准中将回流提取时间定为60分钟。
4.8提取样品溶液的次数与大黄素、大黄酚含量测定结果考察 用氯仿提取，合并氯仿液，其提取次数和大黄素、大黄酚含量测定的结果见表15、16。
表15 提取样品溶液的次数和大黄素含量测定结果(n＝3)
| 回流时间 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 含量(％)RSD(％) | 0.014781.98 | 0.016241.85 | 0.017691.68 | 0.017571.71 | 0.017722.07 |
表16 提取样品溶液的次数和大黄酚含量测定结果(n＝3)
| 回流时间 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 含量(％)RSD(％) | 0.020432.88 | 0.022091.75 | 0.023311.49 | 0.023181.43 | 0.023281.66 |
从表中可见提取3次与4次、5次的结果无显著差异，因此在本发明质量标准中将萃取次数定为3次。
4.9精密度试验
取本品内容物，按本发明质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备供试液，重复进样5次，测定峰面积(表17、18)。
表17 制剂供试品中大黄素的精密度试验
| 进样次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD(％) |
| 峰面积 | 338815 | 339075 | 336719 | 338475 | 337926 | 338202 | 0.28 |
表18 制剂供试品中大黄酚的精密度试验
| 进样次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD(％) |
| 峰面积 | 734172 | 731577 | 733243 | 735611 | 732947 | 733510 | 0.20 |
结果可见，该法精密度良好。
4.10重现性试验
取本品内容物，按本发明质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备5份供试液，分别进样，测定峰面积，计算结果列入表19、20，平均含量为大黄素0.01765％，RSD为2.26％，大黄酚0.02329％。RSD为2.20％重现性良好。
表19 制剂供试品中大黄素的重现性试验
| 测定次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD(％) |
| 含量(％) | 0.01736 | 0.01717 | 0.01799 | 0.01810 | 0.01761 | 0.01765 | 2.26 |
表20 制剂供试品中大黄酚的重现性试验
| 测定次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD(％) |
| 含量(％) | 0.02242 | 0.02340 | 0.02372 | 0.02360 | 0.02331 | 0.02329 | 2.20 |
4.11供试品溶液中大黄素、大黄酚稳定性试验
取本品内容物，按本发明质量标准中含量测定项下供试液的制备方法制备供试液，分别于0、2、4、6、8小时测定大黄素、大黄酚含量(见表21、22)，结果表明，供试品溶液中大黄素、大黄酚在8小时内稳定。
表21 制剂供试品中大黄素的稳定性试验
| 时间(小时) | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 平均值 | RSD(％) |
| 峰面积 | 326319 | 326296 | 324953 | 322144 | 321964 | 324335.2 | 0.66 |
表22 制剂供试品中大黄酚的稳定性试验
| 时间(小时) | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 平均值 | RSD(％) |
| 峰面积 | 734459 | 738402 | 737697 | 734572 | 736597 | 736345.4 | 0.24 |
4.12回收率试验
采用加样回收法，分别精密称取5份已测定含量的样品(平均含量为大黄素0.01765％，大黄酚0.02329％)适量，置具塞锥形瓶中，精密加混合对照品溶液(其中每ml含大黄素4.5ug，大黄酚5.6ug)50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液20ml，超声处理5分钟，再加氯仿20ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次10ml，合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，氯仿液移至100ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，制得供试液。分别精密吸取10ul注入液相色谱仪，记录色谱，测定含量，计算回收率(结果见表23、24)，大黄素平均回收率为98.82％，RSD为1.63％，大黄酚平均回收率为99.51％，RSD为1.85％。
表23 供试品溶液中大黄素测定回收率试验
| 实验次数 | 样品量(g) | 含大黄素(mg) | 加入大黄素(mg) | 测得量(mg) | 回收率(％) | 平均回收率(％) | RSD(％) |
| 12345 | 1.27311.33481.33261.26971.3275 | 0.22470.23560.23520.22410.2343 | 0.225 | 0.44550.45940.45660.45180.4524 | 98.1399.4698.39101.296.92 | 98.82 | 1.63 |
表24 供试品溶液中大黄酚测定回收率试验
| 实验次数 | 样品量(g) | 含大黄酚(mg) | 加入大黄酚(mg) | 测得量(mg) | 回收率(％) | 平均回收率(％) | RSD(％) |
| 12345 | 1.21641.22951.25811.24141.2244 | 0.28330.28640.29300.28910.2852 | 0.28 | 0.57010.56220.56640.56940.5622 | 102.498.5097.64100.198.93 | 99.51 | 1.85 |
4.13样品测定
按质量标准制备供试液和对照品溶液，分别进样10μl，记录色谱，测定峰面积，按下式计算含量：
式中：Ai：供试品溶液峰面积
As：对照品溶液峰面积
Cs：对照品溶液浓度(μg/ml)
W：供试品称样量(g)
W1：平均粒重(g)
根据严格按照生产工艺制备的3批样品，测定样品中大黄素、大黄酚含量，测定结果见表25。
表25 3批样品中大黄素、大黄酚含量测定结果
| 样品 | 含量(mg/粒) | 平均值(mg/粒) | |
| 1 | 2 | ||
| 200107012001071120010720 | 0.2720.2620.269 | 0.2800.2540.275 | 0.2760.2580.272 |
制剂中大黄素、大黄酚含量限度计算如下：
大黄素、大黄酚总含量低限＝制剂含大黄(g/g)×药材含大黄素、大黄酚总量低限(药典规定)＝(30/420)×0.5％＝3.5714×10-4。每粒含量低限＝3.5714×10-4×0.42g/粒×103＝0.15mg/粒。
故定本品每粒含大黄以大黄素、大黄酚总量不得少于0.15mg。根据样品测定结果，3批样品中的大黄素、大黄酚总含量均在该限度范围内。
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
下述实施例均能达到上述实验例的效果。
实施例1复方胆通胶囊的质量控制
[处方]羟甲香豆素100g、溪黄草900g、茵陈600g、穿心莲300g和大黄30g。
[制法]以上五味，除羟甲香豆素、大黄外，其余溪黄草等三味加水煎煮二次，加水量为12，10倍，每次2小时，滤过，合并滤液，静置，取上清液，浓缩成相对密度为1.31(80℃)的稠膏，减压干燥，粉碎成细粉；大黄粉碎成细粉，与羟甲香豆素细粉及上述干膏粉混匀，用乙醇制粒，干燥，装入胶囊，制成1000粒，即得。
[性状]本品为胶囊剂，棕褐色的粉末或颗粒；味苦、涩。
[鉴别](1)取本品内容物，研细，置显微镜下观察：草酸钙簇晶直径20～160μm，有的至190μm。具缘纹孔、网纹、螺纹及环纹导管非木化。淀粉粒甚多，单粒类球形或多角形，直径3～45μm，脐点星状；复粒由2～8分粒组成。
(2)取本品内容物0.5g，研细，加乙醇15ml，置水浴上加热10分钟，滤过，滤液加盐酸液(1mol/L)5ml，水浴上加热20分钟，放冷，用***10ml振摇，分取醚液，加氢氧化钠液(0.1mol/L)5ml，振摇，水层呈棕红色，加稀盐酸数滴，红色褪去。
(3)取本品内容物2g，研细，加氯仿30ml，加热回流10分钟，滤过，取滤液5ml，挥去氯仿，残渣用甲醇5ml溶解，加三氯化铁试液1滴，显黄色，再加氨试液1滴，显红色，并有蓝紫色荧光环。
(4)取鉴别(3)项下的滤液15ml，挥去氯仿，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液，另取羟甲香豆素对照品10mg，用甲醇2ml溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-丙酮(1.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，熏碘蒸气。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕黄色斑点。
(5)取本品内容物2g，研细，加乙醇20ml，加热回流10分钟，滤过，滤液加活性炭少许，温热后滤过，取滤液2ml，蒸干，加1％枸橼酸丙酮溶液及硼酸的饱和丙酮溶液各1ml，蒸干，置紫外光灯(365nm)下观察，显绿黄色荧光。另取滤液少许，滴于滤纸上，置紫外光灯(365nm)下观察，显紫蓝色荧光。滴加1％三氯化铝乙醇溶液，显亮蓝色荧光。
(6)取本品内容物1g，加乙醇30ml，浸泡30分钟，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇5ml使溶解，滤过，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取脱水穿心莲内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇(4∶3∶0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％3，5-二硝基苯甲酸乙醇溶液与2mol/L氢氧化钾溶液的等量混合液(临用时配制)，立即在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(7)取本品内容物2g，置具塞锥形瓶中，加甲醇20ml超声30分钟，滤过，滤液蒸干，加水30ml使溶解，再加盐酸3ml，置水浴中加热30分钟，立即冷却，用***分2次提取，每次20ml，合并***液，蒸干，残渣加氯仿4ml使溶解，滤过，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.05g，同法制备对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
[检查]应符合胶囊剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版一部附录IL)
[含量测定]羟甲香豆素 对照品溶液的制备 避光操作。精密称取在105℃干燥至恒重的羟甲香豆素对照品0.1g，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液[取氢氧化钠液(0.1mol/L)20ml，加乙醇稀释至1000ml]约70ml，使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，立即测定。
供试品溶液的制备 避光操作。取装量差异项下内容物，研细，精密称取本品适量(约相当于羟甲香豆素0.1g)，置具塞棕色瓶中，精密加入碱性乙醇液100ml，密塞，振摇提取60分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置50ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，立即测定。
测定法 分别取对照品溶液与供试品溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部 附录IV A)在372nm波长处测定吸收度，计算，即得。
本品每粒含羟甲香豆素(C10H8O3)应为标示量的90.0％～110.0％。
大黄素、大黄酚 照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱；甲醇-0.1％磷酸溶液(83∶17)为流动相；检测波长：254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品12mg、大黄酚对照品16mg，分别置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取大黄素及大黄酚溶液各2ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(大黄素每1ml中含9.6μg、大黄酚每1ml中含12.8μg)。
供试品溶液的制备 取装量差异项下内容物约2.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液20ml，超声处理5分钟，再加氯仿20ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次10ml，合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，氯仿液移至100ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。本品每粒含大黄以大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)的总量计，不得少于0.15mg。
实施例2复方胆通颗粒剂的质量控制
[处方]羟甲香豆素100g、溪黄草900g、茵陈600g、穿心莲300g和大黄30g。
[制法]以上五味，除羟甲香豆素、大黄外，其余溪黄草等三味加水煎煮二次，加水量为12，10倍，每次2小时，滤过，合并滤液，静置，取上清液，浓缩成相对密度为1.31(80℃)的稠膏，减压干燥，粉碎成细粉；大黄粉碎成细粉，与羟甲香豆素细粉及上述干膏粉混匀，用乙醇制粒，干燥，整粒，按常规方法压片，制成1000片，即得。
[性状]本品为颗粒剂，内容物呈棕色至棕褐色的颗粒；味甜、微涩。
[检查]应符合颗粒剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版一部附录IC)；
【质量控制方法】鉴别、含量测定方法同实施例1，其中本品每片含羟甲香豆素(C10H8O3)应为标示量的90.0％～110.0％。本品每片含大黄以大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)的总量计，不得少于0.15mg。
实施例3复方胆通片剂的质量控制
[处方]羟甲香豆素100g、溪黄草900g、茵陈600g、穿心莲300g和大黄30g。
[制法]以上五味，除羟甲香豆素、大黄外，其余溪黄草等三味加水煎煮二次，加水量为12，10倍，每次2小时，滤过，合并滤液，静置，取上清液，浓缩成相对密度为1.31(80℃)的稠膏，减压干燥，粉碎成细粉；大黄粉碎成细粉，与羟甲香豆素细粉及上述干膏粉混匀，用乙醇制粒，干燥，整粒，按常规方法压片，制成1000片，即得。
[性状]本品为片剂，内容物为棕色片；味苦、涩。
[检查]应符合片剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版一部附录ID)。
【质量控制方法】鉴别、含量测定方法同实施例1，其中本品每片含羟甲香豆素(C10H8O3)应为标示量的90.0％～110.0％。本品每片含大黄以大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)的总量计，不得少于0.15mg。
实施例4
[处方]羟甲香豆素100g、溪黄草900g、茵陈600g、穿心莲300g和大黄30g。
[制法]以上五味，除羟甲香豆素、大黄外，其余溪黄草等三味加水煎煮二次，加水量为12，10倍，每次2小时，滤过，合并滤液，静置，取上清液，浓缩成相对密度为1.31(80℃)的稠膏，减压干燥，粉碎成细粉；大黄粉碎成细粉，与羟甲香豆素细粉及上述干膏粉混匀，用乙醇制粒，干燥，装入胶囊，制成1000粒，即得。
【检查】应符合胶囊剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版一部附录IL)；
【性状】本品为棕褐色的粉末或颗粒；味苦、涩。
【鉴别】
(1)大黄药材的显微鉴别。取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物，研细，置显微镜下观察：草酸钙簇晶直径20～160μm，有的至190μm。具缘纹孔、网纹、螺纹及环纹导管非木化。淀粉粒甚多，单粒类球形或多角形，直径3～45μm，脐点星状；复粒由2～8分粒组成；
(2)大黄药材的理化鉴别。取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物0.5g，研细，加乙醇15ml，置水浴上加热10分钟，滤过，滤液加盐酸液(1mol/L)5ml，水浴上加热10分钟，放冷，用***10ml振摇，分取醚液，加氢氧化钠液(0.1mol/L)5ml，振摇，水层呈棕红色，加稀盐酸数滴，红色褪去；
(3)羟甲香豆素的鉴别。取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，研细，加氯仿20ml，加热回流10分钟，滤过，取滤液5ml，挥去氯仿，残渣用甲醇5ml溶解，加三氯化铁试液1滴，显黄色，再加氨试液1滴，显红色，并有蓝紫色荧光环；
(4)羟甲香豆素的鉴别。取鉴别(3)项下的滤液15ml，挥去氯仿，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液，另取羟甲香豆素对照品10mg，用甲醇2ml溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-丙酮(1.2∶0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，熏碘蒸气。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕黄色斑点；
(5)对方中具有黄酮苷元结构的物质鉴别。取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，研细，加乙醇20ml，加热回流5分钟，滤过，滤液加活性炭少许，温热后滤过，取滤液2ml，蒸干，加1％枸橼酸丙酮溶液及硼酸的饱和丙酮溶液各1ml，蒸干，置紫外光灯(365nm)下观察，显绿黄色荧光。另取滤液少许，滴于滤纸上，置紫外光灯(365nm)下观察，显紫蓝色荧光。滴加1％三氯化铝乙醇溶液，显亮蓝色荧光；
(6)穿心莲药材的鉴别。取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物1g，加乙醇30ml，浸泡30分钟，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇5ml使溶解，滤过，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取脱水穿心莲内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇(3.4∶2.6∶0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％3，5-二硝基苯甲酸乙醇溶液与2mol/L氢氧化钾溶液的等量混合液(临用时配制)，立即在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(7))以大黄对照药材和大黄素对照品鉴别方中大黄药材。取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，置具塞锥形瓶中，加甲醇20ml超声20分钟，滤过，滤液蒸干，加水30ml使溶解，再加盐酸3ml，置水浴中加热20分钟，立即冷却，用***分2次提取，每次20ml，合并***液，蒸干，残渣加氯仿4ml使溶解，滤过，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.05g，同法制备对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(11∶4.3∶0.8)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
含量测定：
1、羟甲香豆素：照分光光度法(中国药典2000年版二部 附录IV A)测定。
对照品溶液的制备 避光操作。精密称取在105℃干燥至恒重的羟甲香豆素对照品0.1g，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液[取氢氧化钠液(0.1mol/L)20ml，加乙醇稀释至1000ml]约70ml，使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，立即测定。
供试品溶液的制备 避光操作。取装量差异项下内容物，研细，精密称取本品适量(约相当于羟甲香豆素0.1g)，置具塞棕色瓶中，精密加入碱性乙醇液90ml，密塞，振摇提取45分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置50ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，立即测定。
测定法 分别取对照品溶液与供试品溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部 附录IV A)在370nm波长处测定吸收度，计算，即得。
本品每粒含羟甲香豆素(C10H8O3)应为标示量的90.0％～110.0％。
2、大黄素、大黄酚：
照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱；甲醇0.1％磷酸溶液(53∶11)为流动相；检测波长251nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品10mg、大黄酚对照品14mg，分别置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取大黄素及大黄酚溶液各2ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(大黄素每1ml中含9.6μg、大黄酚每1ml中含12.8μg)。
供试品溶液的制备 取装量差异项下内容物约2.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液20ml，超声处理5分钟，再加氯仿20ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次10ml，合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，氯仿液移至100ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
本品每粒含大黄以大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)的总量计，不得少于0.15mg。
实施例5
[处方]羟甲香豆素100g、溪黄草900g、茵陈600g、穿心莲300g和大黄30g。
[制法]以上五味，除羟甲香豆素、大黄外，其余溪黄草等三味加水煎煮二次，加水量为12，10倍，每次2小时，滤过，合并滤液，静置，取上清液，浓缩成相对密度为1.31(80℃)的稠膏，减压干燥，粉碎成细粉；大黄粉碎成细粉，与羟甲香豆素细粉及上述干膏粉混匀，用乙醇制粒，干燥，装入胶囊，制成1000粒，即得。
【检查】应符合胶囊剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版一部附录IL)；
【性状】本品为棕褐色的粉末或颗粒；味苦、涩。
【鉴别】(1)大黄药材的显微鉴别。取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物，研细，置显微镜下观察：草酸钙簇晶直径20～160μm，有的至190μm。具缘纹孔、网纹、螺纹及环纹导管非木化。淀粉粒甚多，单粒类球形或多角形，直径3～45μm，脐点星状；复粒由2～8分粒组成；
(2)大黄药材的理化鉴别。取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物0.5g，研细，加乙醇15ml，置水浴上加热15分钟，滤过，滤液加盐酸液(1mol/L)5ml，水浴上加热30分钟，放冷，用***10ml振摇，分取醚液，加氢氧化钠液(0.1mol/L)5ml，振摇，水层呈棕红色，加稀盐酸数滴，红色褪去；
(3)羟甲香豆素的鉴别。取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，研细，加氯仿40ml，加热回流20分钟，滤过，取滤液5ml，挥去氯仿，残渣用甲醇5ml溶解，加三氯化铁试液1滴，显黄色，再加氨试液1滴，显红色，并有蓝紫色荧光环；
(4)羟甲香豆素的鉴别。取鉴别(3)项下的滤液15ml，挥去氯仿，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液，另取羟甲香豆素对照品10mg，用甲醇2ml溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-丙酮(1.8∶1.1)为展开剂，展开，取出，晾干，熏碘蒸气。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕黄色斑点；
(5)对方中具有黄酮苷元结构的物质鉴别。取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，研细，加乙醇20ml，加热回流15分钟，滤过，滤液加活性炭少许，温热后滤过，取滤液2ml，蒸干，加1％枸橼酸丙酮溶液及硼酸的饱和丙酮溶液各1ml，蒸干，置紫外光灯(365nm)下观察，显绿黄色荧光。另取滤液少许，滴于滤纸上，置紫外光灯(365nm)下观察，显紫蓝色荧光。滴加1％三氯化铝乙醇溶液，显亮蓝色荧光；
(6)穿心莲药材的鉴别。取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物1g，加乙醇30ml，浸泡30分钟，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇5ml使溶解，滤过，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取脱水穿心莲内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇(4.5∶3.4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％3，5-二硝基苯甲酸乙醇溶液与2mol/L氢氧化钾溶液的等量混合液(临用时配制)，立即在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(7))以大黄对照药材和大黄素对照品鉴别方中大黄药材。取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，置具塞锥形瓶中，加甲醇20ml超声40分钟，滤过，滤液蒸干，加水30ml使溶解，再加盐酸3ml，置水浴中加热40分钟，立即冷却，用***分2次提取，每次20ml，合并***液，蒸干，残渣加氯仿4ml使溶解，滤过，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.05g，同法制备对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(18∶7.5∶1.1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
含量测定：
1、羟甲香豆素：照分光光度法(中国药典2000年版二部 附录IV A)测定。
对照品溶液的制备 避光操作。精密称取在105℃干燥至恒重的羟甲香豆素对照品0.1g，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液[取氢氧化钠液(0.1mol/L)20ml，加乙醇稀释至1000ml]约70ml，使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，立即测定。
供试品溶液的制备 避光操作。取装量差异项下内容物，研细，精密称取本品适量(约相当于羟甲香豆素0.1g)，置具塞棕色瓶中，精密加入碱性乙醇液110ml，密塞，振摇提取75分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置50ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，立即测定。
测定法 分别取对照品溶液与供试品溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部 附录IV A)在374nm波长处测定吸收度，计算，即得。
本品每粒含羟甲香豆素(C10H8O3)应为标示量的90.0％～110.0％。
2、大黄素、大黄酚：
照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱；甲醇0.1％磷酸溶液(121∶22)为流动相；检测波长257nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品14mg、大黄酚对照品18mg，分别置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取大黄素及大黄酚溶液各2ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(大黄素每1ml中含9.6μg、大黄酚每1ml中含12.8μg)。
供试品溶液的制备 取装量差异项下内容物约2.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液20ml，超声处理10分钟，再加氯仿20ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次10ml，合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，氯仿液移至100ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。本品每粒含大黄以大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)的总量计，不得少于0.15mg。
Claims (10)
1、一种复方胆通固体制剂的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：
对性状的观察，
对内容物中的成分进行鉴别，
对固体制剂进行检查，
对有效成分进行含量测定。
2、权利要求1的质量控制方法，其特征在于，所述对性状的观察，包括以下内容：
所述复方胆通固体制剂为胶囊剂时，其内容物为棕褐色的粉末或颗粒；味苦、涩。
所述复方胆通固体制剂为颗粒剂时，内容物呈棕色至棕褐色的颗粒；味甜、微涩。
所述复方胆通固体制剂为片剂时，内容物为棕色片；味苦、涩。
3、权利要求1的质量控制方法，其特征在于，对内容物中的成分进行鉴别，包括以下内容：对大黄、羟甲香豆素和穿心莲内酯成分的鉴别。
4、权利要求3的质量控制方法，其特征在于，所述对复方胆通固体制剂内容物中大黄、羟甲香豆素和穿心莲内酯成分的鉴别步骤如下：
a.取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物，研细，置显微镜下观察：草酸钙簇晶直径20～160μm，有的至190μm。具缘纹孔、网纹、螺纹及环纹导管非木化。淀粉粒甚多，单粒类球形或多角形，直径3～45μm，脐点星状；复粒由2～8分粒组成；
b.取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物0.5g，研细，加乙醇15ml，置水浴上加热10-15分钟，滤过，滤液加1mol/L盐酸液5ml，水浴上加热10-30分钟，放冷，用***10ml振摇，分取醚液，加0.1mol/L氢氧化钠液5ml，振摇，水层呈棕红色，加稀盐酸数滴，红色褪去；
c.取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，研细，加氯仿20-40ml，加热回流10-20分钟，滤过，取滤液5ml，挥去氯仿，残渣用甲醇5ml溶解，加三氯化铁试液1滴，显黄色，再加氨试液1滴，显红色，并有蓝紫色荧光环；
d.取鉴别a项下的滤液15ml，挥去氯仿，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液，另取羟甲香豆素对照品10mg，用甲醇2ml溶解，作为对照品溶液。照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1.2-1.8∶0.8-1.1石油醚-丙酮为展开剂，其中石油醚温度为60～90℃，展开，取出，晾干，熏碘蒸气。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕黄色斑点；
e.取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，研细，加乙醇20ml，加热回流5-15分钟，滤过，滤液加活性炭少许，温热后滤过，取滤液2ml，蒸干，加1％枸橼酸丙酮溶液及硼酸的饱和丙酮溶液各1ml，蒸干，置365nm的紫外光灯下观察，显绿黄色荧光。另取滤液少许，滴于滤纸上，置365nm的紫外光灯下观察，显紫蓝色荧光。滴加1％三氯化铝乙醇溶液，显亮蓝色荧光；
f.取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物1g，加乙醇30ml，浸泡30分钟，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇5ml使溶解，滤过，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取脱水穿心莲内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以3.4-4.5∶2.6-3.4∶0.3-0.5的氯仿-醋酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以临用时配制的2％3，5-二硝基苯甲酸乙醇溶液与2mol/L氢氧化钾溶液的等量混合液，立即在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
g.取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，置具塞锥形瓶中，加甲醇20ml超声20-40分钟，滤过，滤液蒸干，加水30ml使溶解，再加盐酸3ml，置水浴中加热20-40分钟，立即冷却，用***分2次提取，每次20ml，合并***液，蒸干，残渣加氯仿4ml使溶解，滤过，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.05g，同法制备对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以11-18∶4.3-7.5∶0.8-1.1的石油醚-甲酸乙酯-甲酸上层溶液为展开剂，其中石油醚温度为60～90℃，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
5、权利要求3的质量控制方法，其特征在于，所述对复方胆通固体制剂内容物中大黄、羟甲香豆素和穿心莲内酯成分的鉴别步骤如下：
a.取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物，研细，置显微镜下观察：草酸钙簇晶直径20～160μm，有的至190μm。具缘纹孔、网纹、螺纹及环纹导管非木化。淀粉粒甚多，单粒类球形或多角形，直径3～45μm，脐点星状；复粒由2～8分粒组成；
b.取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物0.5g，研细，加乙醇15ml，置水浴上加热10分钟，滤过，滤液加1mol/L盐酸液5ml，水浴上加热20分钟，放冷，用***10ml振摇，分取醚液，加0.1mol/L氢氧化钠液5ml，振摇，水层呈棕红色，加稀盐酸数滴，红色褪去；
c.取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，研细，加氯仿30ml，加热回流10分钟，滤过，取滤液5ml，挥去氯仿，残渣用甲醇5ml溶解，加三氯化铁试液1滴，显黄色，再加氨试液1滴，显红色，并有蓝紫色荧光环；
d.取鉴别c项下的滤液15ml，挥去氯仿，残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液，另取羟甲香豆素对照品10mg，用甲醇2ml溶解，作为对照品溶液。照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1.5∶1的石油醚-丙酮为展开剂，其中石油醚温度为60～90℃，展开，取出，晾干，熏碘蒸气。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕黄色斑点；
e.取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，研细，加乙醇20ml，加热回流10分钟，滤过，滤液加活性炭少许，温热后滤过，取滤液2ml，蒸干，加1％枸橼酸丙酮溶液及硼酸的饱和丙酮溶液各1ml，蒸干，置365nm紫外光灯下观察，显绿黄色荧光。另取滤液少许，滴于滤纸上，置365nm紫外光灯下观察，显紫蓝色荧光。滴加1％三氯化铝乙醇溶液，显亮蓝色荧光；
f.取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物1g，加乙醇30ml，浸泡30分钟，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇5ml使溶解，滤过，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取脱水穿心莲内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以4∶3∶0.4的氯仿-醋酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以临用时配制的2％3，5-二硝基苯甲酸乙醇溶液与2mol/L氢氧化钾溶液的等量混合液，立即在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
g.取本品胶囊或颗粒剂或片剂的内容物2g，置具塞锥形瓶中，加甲醇20ml超声30分钟，滤过，滤液蒸干，加水30ml使溶解，再加盐酸3ml，置水浴中加热30分钟，立即冷却，用***分2次提取，每次20ml，合并***液，蒸干，残渣加氯仿4ml使溶解，滤过，浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.05g，同法制备对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以15∶5∶1的石油醚-甲酸乙酯-甲酸上层溶液为展开剂，其中石油醚温度为30～60℃，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。
6、权利要求1的质量控制方法，其特征在于，所述对制剂进行检查包括：包括以下内容：
对于胶囊剂，应符合中国药典2000年版一部附录IL胶囊剂项下有关的各项规定；
对于颗粒剂，应符合中国药典2000年版一部附录IC颗粒剂项下有关的各项规定；
对于片剂，应符合中国药典2000年版一部附录ID片剂项下有关的各项规定。
7、权利要求1的质量控制方法，其特征在于，对有效成分进行含量测定包括对其中的羟甲香豆素和大黄素、大黄酚含量的测定。
8、权利要求7的质量控制方法，其特征在于，所述对其中的羟甲香豆素的含量测定经过以下步骤：
对照品溶液的制备避光操作。精密称取在105℃干燥至恒重的羟甲香豆素对照品0.1g，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液约70ml，加乙醇稀释至1000ml，使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，立即测定。其中碱性乙醇液由0.1mol/L氢氧化钠液20ml配制而成。
供试品溶液的制备避光操作。取装量差异项下内容物，研细，精密称取本品适量(，约相当于羟甲香豆素0.1g，置具塞棕色瓶中，精密加入碱性乙醇液90-110ml，密塞，振摇提取45-75分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置50ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置100ml棕色量瓶中，加碱性乙醇液稀释至刻度，摇匀，立即测定。
测定法分别取对照品溶液与供试品溶液，照中国药典2000年版二部附录IV A分光光度法在372±2nm波长处测定吸收度，计算，即得。
9、权利要求7的质量控制方法，其特征在于，所述对其中的大黄素、大黄酚含量的测定经过以下步骤
照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定。
色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱；用比例53-121∶11-22的甲醇0.1％磷酸溶液为流动相；检测波长254±3nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备精密称取大黄素对照品10-14mg、大黄酚对照品14-18mg，分别置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取大黄素及大黄酚溶液各2ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得，其中大黄素每1ml中含9.6μg、大黄酚每1ml中含12.8μg。
供试品溶液的制备取装量差异项下内容物约2.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液20ml，超声处理5，10分钟，再加氯仿20ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次10ml，合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，氯仿液移至100ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
10、权利要求7的质量控制方法，其特征在于，其中的羟甲香豆素和大黄素、大黄酚的含量为每粒胶囊含羟甲香豆素C10H8O3应为标示量的90.0％～110.0％；每粒胶囊含大黄以大黄素C15H10O5)和大黄酚C15H10O4的总量计，不得少于0.15mg。
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