CN1857435A - 护肝宁制剂的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种护肝宁制剂的质量控制方法，所述质量控制方法主要包括性状、鉴别、检查以及含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括对制剂中虎杖和灵芝的薄层色谱鉴别；含量测定是对制剂中虎杖所含大黄素和虎杖苷的含量测定；与现有技术相比，本发明质量控制方法研究并制订了虎杖中大黄素和虎杖苷的含量测定以及虎杖、灵芝的薄层色谱鉴别，所采用的方法精密度高，重现性好，稳定性好，回收率高，提高了护肝宁制剂的质量控制标准，从而确保了该制剂的临床疗效。
Description
技术领域：本发明涉及一种护肝宁制剂的质量控制方法，属于对药品进行质量控制的技术领域。
背景技术：护肝宁制剂具有清热利湿，益肝化瘀，舒肝止痛，理气助消化的作用，主要用于急性肝炎及慢性肝炎、肝硬化等症，其疗效确切可靠，无副作用。其中护肝宁片收录在部颁中药成方制剂第十三册中，已在临床上应用多年，取得了较满意的治疗效果。但经研究发现，现有护肝宁制剂存在质量控制标准简单、产品质量不易控制的缺点，在产品生产过程中，用该质量控制方法不能有效控制该制剂的质量，从而将影响其临床疗效。
发明内容：
本发明的目的在于：提供一种护肝宁制剂的质量控制方法，本发明针对原有护肝宁片质量控制标准简单、产品质量不易控制的缺点，对本制剂的质量控制方法进行了研究，拟订了虎杖中大黄素和虎杖苷的含量测定以及虎杖、灵芝的薄层色谱鉴别，提高了护肝宁制剂的质量控制标准，从而保证了该制剂的临床疗效。
本发明所述的护肝宁制剂是由垂盆草500～1000g、虎杖200～800g、丹参100～500g和灵芝100～500g制成的，其制备方法为：取垂盆草，粉碎成细粉，剩余的垂盆草加水煎煮，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏；取灵芝，加入乙醇浸渍，倾取上清液备用，药渣依次用65～90％乙醇、30～65％乙醇分别浸渍，各倾取上清液，最后压榨残渣，收集压出液，与三次上清液合并，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成稠膏，备用；丹参及虎杖照中国药典流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用75～95％乙醇作溶剂浸泡4小时后缓缓渗漉(流速每分钟8ml)，俟可溶性成分完全漉出，漉液回收乙醇并浓缩成稠膏；丹参、虎杖和灵芝的药渣加水煎煮，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏；取上述四种稠膏，加入垂盆草细粉，混匀，减压干燥，然后加入适当辅料制成不同的制剂。
本发明所述质量控制方法主要包括性状、鉴别、检查以及含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括对制剂中虎杖和灵芝的薄层色谱鉴别；含量测定是对制剂中虎杖所含大黄素和虎杖苷的含量测定。
虎杖的鉴别方法是分别以虎杖对照药材、大黄素对照品和大黄素甲醚对照品为对照，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂的薄层色谱法。
灵芝的鉴别方法是以灵芝对照药材为对照，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂的薄层色谱法。
所述的鉴别方法包括以下项目的部分或全部：
(1)取本制剂或其内容物，加入甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液，加热水解，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材，同法制成对照药材溶液；再取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，显相同的红色斑点。
(2)取本制剂或其内容物，加入乙醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
更具体的鉴别方法包括以下项目的部分或全部：
(1)取本制剂或其内容物0.5～5g，加甲醇10～100ml，超声处理5～100分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液1～20ml，加热水解10～100分钟，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～3ml使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材0.01～0.5g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.2～3mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，显相同的红色斑点。
(2)取本制剂或其内容物1～10g，加乙醇10～100ml，加热回流10～100分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5～5ml使溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材0.5～5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各2～15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
虎杖中大黄素的含量测定方法是以大黄素对照品为对照，以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10为流动相的高效液相色谱法。
虎杖中虎杖苷的含量测定方法是以虎杖苷对照品为对照，以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10为流动相的高效液相色谱法。
所述含量测定方法包括以下项目的部分或全部：
(1)大黄素 照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的大黄素对照品，加甲醇溶解，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，称定重量，超声提取，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液置烧瓶中，挥干溶剂，加入三氯甲烷和0.5～5mol/L硫酸溶液，置80℃水浴中加热回流，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于1.5mg/g；本片剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.5mg/g；本颗粒剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.1mg/g。
(2)虎杖苷 照中国药典高效液相色谱法测定，避光操作：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10为流动相；检测波长306nm；理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的虎杖苷对照品，加稀乙醇溶解，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物，精密称定，精密加入稀乙醇，称定重量，加热回流，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.5mg/g；本片剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.2mg/g；本颗粒剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.054mg/g。
更具体的含量测定方法包括以下项目的部分或全部：
(1)大黄素 照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含30～100μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物0.1～3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10～200ml，称定重量，在功率250W、频率33kHz下超声提取10～100分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5～50ml，置烧瓶中，挥干溶剂，加入三氯甲烷5～50ml和0.5～5mol/L硫酸溶液5～50ml，置80℃水浴中加热回流0.5～5小时，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～25μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于1.5mg/g；本片剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.5mg/g；本颗粒剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.1mg/g。
(2)虎杖苷 照中国药典高效液相色谱法测定，避光操作：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10为流动相；检测波长306nm；理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的虎杖苷对照品，加稀乙醇制成每1ml含10～50μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物0.05～5g，精密称定，精密加入稀乙醇10～200ml，称定重量，加热回流10～100分钟，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～25μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.5mg/g；本片剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.2mg/g；本颗粒剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.054mg/g。
所述质量控制方法包括：
性状：
对于胶囊剂：内容物为棕褐色的颗粒；味苦、微酸、涩；
对于片剂：药物显棕褐色；味苦、微酸、涩；
对于颗粒剂：药物为棕褐色的颗粒；味微甜、微酸、涩；
鉴别：
(1)取本制剂或其内容物，加入甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液，加热水解，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材，同法制成对照药材溶液；再取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，显相同的红色斑点。
(2)取本制剂或其内容物，加入乙醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定。
含量测定：
(1)大黄素 照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的大黄素对照品，加甲醇溶解，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，称定重量，超声提取，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液置烧瓶中，挥干溶剂，加入三氯甲烷和0.5～5mol/L硫酸溶液，置80℃水浴中加热回流，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于1.5mg/g；本片剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.5mg/g；本颗粒剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.1mg/g。
(2)虎杖苷 照中国药典高效液相色谱法测定，避光操作：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10为流动相；检测波长306nm；理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的虎杖苷对照品，加稀乙醇溶解，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物，精密称定，精密加入稀乙醇，称定重量，加热回流，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.5mg/g；本片剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.2mg/g；本颗粒剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.054mg/g。
经研究我们发现，采用以下质量控制方法将更容易控制这种制剂的质量，更利于保证制剂的临床疗效，故所述质量控制方法还可包括：
性状：
对于胶囊剂：内容物为棕褐色的颗粒；味苦、微酸、涩；
对于片剂：药物显棕褐色；味苦、微酸、涩；
对于颗粒剂：药物为棕褐色的颗粒；味微甜、微酸、涩；
鉴别：(1)取本制剂或其内容物0.5～5g，加甲醇10～100ml，超声处理5～100分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液1～20ml，加热水解10～100分钟，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～3ml使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材0.01～0.5g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.2～3mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，显相同的红色斑点。
(2)取本制剂或其内容物1～10g，加乙醇10～100ml，加热回流10～100分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5～5ml使溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材0.5～5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各2～15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定。
含量测定：
(1)大黄素 照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含30～100μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物0.1～3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10～200ml，称定重量，在功率250W、频率33kHz下超声提取10～100分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5～50ml，置烧瓶中，挥干溶剂，加入三氯甲烷5～50ml和0.5～5mol/L硫酸溶液5～50ml，置80℃水浴中加热回流0.5～5小时，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～25μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于1.5mg/g；本片剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.5mg/g；本颗粒剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.1mg/g。
(2)虎杖苷 照中国药典高效液相色谱法测定，避光操作：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10为流动相；检测波长306nm；理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的虎杖苷对照品，加稀乙醇制成每1ml含10～50μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物0.05～5g，精密称定，精密加入稀乙醇10～200ml，称定重量，加热回流10～100分钟，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～25μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.5mg/g；本片剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.2mg/g；本颗粒剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.054mg/g。
为了确保本发明质量控制方法科学、合理、可行，本申请人对方中各药材的鉴别和含量测定方法进行了研究，具体试验资料如下：
一、大黄素含量测定方法研究
1.流动相的选择：
流动相1：以甲醇、0.1％磷酸不同比例的混合溶液为流动相；
流动相2：以乙腈、0.1％磷酸不同比例的混合溶液为流动相；
流动相3：以甲醇、1％高氯酸不同比例的混合溶液为流动相。
结果：以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10为流动相，阴性样品色谱图在大黄素峰位置处无假阳性峰；特别是在甲醇-0.1％磷酸(82∶18)流动相条件下，大黄素色谱峰与其它色谱峰分离最好。
2.供试品溶液制备方法研究：
方法一：取药物0.5g，精密称定，加入甲醇50ml，超声提取(功率250W，频率33kHz)45分钟，滤过，取续滤液20ml，挥干溶剂，加入三氯甲烷25ml和2.5mol/L硫酸溶液20ml，置80℃水浴中加热回流2小时，冷却至室温，分取三氯甲烷液，酸液用三氯甲烷提取3次(20ml，10ml，10ml)，合并三氯甲烷提取液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
方法二、取药物0.5g，精密称定，精密加入三氯甲烷50ml和2.5mol/L硫酸溶液20ml，称定重量，置80℃水浴中加热回流2小时，冷却至室温，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀。分取三氯甲烷液，精密量取20ml，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
分别吸取上述二种供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按正文色谱条件，依法测定，结果见下表。
不同提取方法考察结果
| 提取方法 | 称样量(g) | 大黄素提取率(mg/g) |
| 方法一 | 0.5006 | 3.091 |
| 方法二 | 0.5011 | 2.893 |
试验结果表明，采用方法一，大黄素提取率较高。
3.精密度试验
精密吸取对照品溶液(49.25μg/ml)10μl，连续进样5次，计算得相对标准偏差：
| 实验次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD％ |
| 峰面积 | 1778.4 | 1782.2 | 1781.6 | 1783.7 | 1788.8 | 1782.9 | 0.21 |
试验结果表明，该方法精密度良好。
4.稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于制备后0、2、4、6、8小时依法测定。
| 实验次数 | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 平均值 | RSD％ |
| 峰面积 | 2145.8 | 2089.4 | 2142.8 | 2091.7 | 2139.3 | 2121.8 | 1.35 |
结果表明，供试品溶液在8小时内稳定。
5.重复性试验
按本发明中含量测定项下供试液的制备方法，分别称取同一批号样品0.5g，6份，进行测定，计算得相对标准偏差，结果如下。
| 次数 | 称样量(g) | 含量(mg/g) | 平均含量(mg/g) | RSD％ |
| 1 | 0.4974 | 3.054 | 3.097 | 1.87 |
| 2 | 0.5007 | 3.034 | ||
| 3 | 0.4936 | 3.185 | ||
| 4 | 0.4989 | 3.147 | ||
| 5 | 0.5003 | 3.070 | ||
| 6 | 0.4902 | 3.091 |
结果表明该方法重复性良好。
6.回收率试验
采取加样回收法(按1∶1加入)，取已知含量的同一批号样品约0.25g，精密称定，各置50ml具塞瓶中，分别精密加入大黄素对照品溶液(3.91mg→10ml)各2ml，精密加入甲醇48ml，其他操作同正文，并依法测定，按以下公式计算回收率，结果见下表。
| 序号 | 称样量(g) | 样品中含量(mg) | 加入量(mg) | 测定总量(mg) | 回收率(％) | 平均值(％) | RSD(％) |
| 1 | 0.2523 | 0.781 | 0.782 | 1.571 | 101.0 | 101.1 | 2.45 |
| 2 | 0.2514 | 0.779 | 0.782 | 1.564 | 100.4 | ||
| 3 | 0.2646 | 0.819 | 0.782 | 1.625 | 103.0 | ||
| 4 | 0.2605 | 0.807 | 0.782 | 1.625 | 104.6 | ||
| 5 | 0.2539 | 0.786 | 0.782 | 1.568 | 99.9 | ||
| 6 | 0.2491 | 0.771 | 0.782 | 1.534 | 97.5 |
试验结果表明，大黄素的平均加样回收率在95％～105％之间，加样回收良好。
二、虎杖苷含量测定方法研究
1.流动相的选择：
流动相1：以乙腈-水不同比例的混合溶液为流动相；
流动相2：以甲醇-0.1％磷酸不同比例的混合溶液为流动相；
流动相3：以甲醇-0.05％磷酸不同比例的混合溶液为流动相；
流动相4：以甲醇-5％磷酸不同比例的混合溶液为流动相；
流动相5：以乙腈-0.1％磷酸不同比例的混合溶液为流动相；
流动相6：以乙腈醇-0.05％磷酸不同比例的混合溶液为流动相；
流动相7：以乙腈-0.5％磷酸不同比例的混合溶液为流动相。
结果：以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10为流动相，阴性样品色谱图在虎杖苷峰位置处无假阳性峰；特别是在乙腈-0.1％磷酸(16∶84)流动相条件下，虎杖苷色谱峰与其它色谱峰均可达到较好分离(分离度为3.69)，且峰形对称、尖锐，保留时间适宜(约10分钟)。
2.供试品溶液制备方法研究：
由于虎杖苷含酚羟基，见光易发生氧化/聚合反应，故以下操作均为避光。
(1)采用加热回流，操作如下：取药物约0.15g，精密称定，精密加入稀乙醇50ml称定重量，加热回流提取，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，即得。
(2)采用超声处理法，操作如下：取药物约0.15g，精密称定，精密加入稀乙醇50ml称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，即得。
分别吸取上述二种供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，按正文色谱条件，依法测定。
| 提取方法 | 称样量(g) | 提取率(mg/g) |
| (1)加热回流 | 0.1513 | 6.731 |
| (2)超声处理 | 0.1522 | 6.706 |
试验结果表明，采用加热回流的提取方法，虎杖苷提取率较高。
3.精密度试验
精密吸取虎杖苷对照品溶液(23.2μg/ml)20μl，连续进样5次，计算得相对标准偏差。
| 实验次数 | 峰面积 | 平均值 | RSD％ |
| 1 | 1676.6 | 1673.2 | 0.14 |
| 2 | 1672.0 | ||
| 3 | 1670.3 | ||
| 4 | 1674.5 | ||
| 5 | 1672.7 |
试验结果表明，该方法精密度良好。
4.稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于制备后0、2、4、6、8小时依法测定，结果如下。
| 时间(hr) | 峰面积 | 平均值 | RSD％ |
| 0 | 1474.3 | 1465.6 | 0.84 |
| 2 | 1464.6 | ||
| 4 | 1476.6 | ||
| 6 | 1466.8 | ||
| 8 | 1445.5 |
结果表明，供试品溶液在8小时内稳定。
5.重复性试验
按本发明中含量测定项下供试液的制备方法，分别称取同一批号样品0.15g，6份，进行测定，计算得相对标准偏差，结果如下。
| 次数 | 称样量(g) | 含量(mg/g) | 平均含量(mg/g) | RSD％ |
| 1 | 0.1483 | 6.769 | 6.731 | 0.68 |
| 2 | 0.1497 | 6.710 | ||
| 3 | 0.1482 | 6.741 | ||
| 4 | 0.1486 | 6.692 | ||
| 5 | 0.1478 | 6.795 | ||
| 6 | 0.1496 | 6.677 |
结果表明该方法重复性良好。
6.回收率试验
采取加样回收法(按1∶1加入)，取已知含量的同一批号样品约0.075g，精密称定，分别精密加入虎杖苷对照品溶液(5.08mg→10ml)各1ml，其他按本发明含量测定项下供试品溶液制备方法及色谱条件测定，按以下公式计算回收率，结果如下表。
| 序号 | 称样量(g) | 样品中含量(mg) | 加入量(mg) | 测定总量(mg) | 回收率(％) | 平均值(％) | RSD(％) |
| 1 | 0.0750 | 0.505 | 0.508 | 1.004 | 98.3 | 97.8 | 1.09 |
| 2 | 0.0744 | 0.501 | 0.508 | 1.004 | 99.1 | ||
| 3 | 0.0748 | 0.503 | 0.508 | 0.999 | 97.5 | ||
| 4 | 0.0753 | 0.507 | 0.508 | 0.994 | 95.9 | ||
| 5 | 0.0751 | 0.505 | 0.508 | 1.004 | 98.1 | ||
| 6 | 0.0744 | 0.501 | 0.508 | 0.999 | 98.1 |
试验结果表明，虎杖苷的平均加样回收率在95％～105％之间，加样回收良好。
三、虎杖的薄层鉴别研究
对照品溶液的制备：取大黄素对照品和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
对照药材溶液的制备：取虎杖对照药材，按照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。
阴性对照液的制备：取处方中除虎杖外的其他药材饮片，按制备工艺制备缺虎杖阴性样品，以与供试品溶液相同的制备方法制备，即得。
供试品溶液的制备方法一：取药物1.5g，加甲醇50ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液5ml，加热水解30分钟，放冷，用三氯甲烷提取2次，合并氯仿液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液。
供试品溶液制备方法二：取药物1.5g，加0.25mol/L硫酸溶液5ml，加热水解30分钟，放冷，用三氯甲烷提取，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液。
展开剂选择：分别以30～60℃石油醚、乙酸丁酯、甲醇、冰醋酸不同比例的混合溶液；以30～60℃石油醚、甲酸乙酯、甲酸不同比例的混合溶液为展开剂。
结果：采用方法一制备供试品溶液，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液。
四、灵芝的薄层鉴别研究
对照药材溶液的制备：取灵芝对照药材，按照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。
阴性对照液的制备：取处方中除灵芝外的其他药材饮片，按制备工艺制备缺灵芝阴性样品，以与供试品溶液相同的制备方法制备，即得。
供试品溶液制备方法一：取本品内容物，加乙醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。
供试品溶液制备方法二：取本品内容物，加甲醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。
展开剂选择：分别以60～90℃石油醚、甲酸乙酯、甲酸不同比例的混合溶液；以30～60℃石油醚、乙酸丁酯、甲醇、冰醋酸不同比例的混合溶液为展开剂。
结果：采用方法一制备供试品溶液，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液。
与现有技术相比，本发明质量控制方法研究并制订了虎杖中大黄素和虎杖苷的含量测定以及虎杖、灵芝的薄层色谱鉴别，所采用的方法精密度高，重现性好，稳定性好，回收率高，提高了护肝宁制剂的质量控制标准，从而确保了该制剂的临床疗效。
具体实施方式：
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
本发明的实施例1：所述胶囊剂质量控制方法包括：
性状：内容物为棕褐色的颗粒；味苦、微酸、涩；
鉴别：(1)取本品内容物1.5g，加甲醇50ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液5ml，加热水解30分钟，放冷，用三氯甲烷提取2次，每次5ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5μl、对照品溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，显相同的红色斑点。
(2)取本品内容物3.5g，加乙醇30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：应符合中国药典胶囊剂项下有关的各项规定。
含量测定：
(1)大黄素 照中国药典高效液相色谱法测定
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶0.1％磷酸溶液＝82∶18为流动相；检测波长254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml中含55μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声提取(功率250W，频率33kHz)45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，置烧瓶中，挥干溶剂，加入三氯甲烷25ml和2.5mol/L硫酸溶液20ml，置80℃水浴中加热回流2小时，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取3次(20ml，10ml，10ml)，合并三氯甲烷提取液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本胶囊剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于1.5mg/g。
(2)虎杖苷 照中国药典高效液相色谱法测定，避光操作：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶0.1％磷酸＝16∶84为流动相；检测波长306nm，理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的虎杖苷对照品适量，加稀乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物0.15g，精密称定，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本胶囊剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.5mg/g。
本发明的实施例2：所述片剂质量控制方法可以包括：
性状：药物显棕褐色；味苦、微酸、涩；
鉴别：(1)取本制剂5g，加甲醇100ml，超声处理100分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液20ml，加热水解100分钟，放冷，用三氯甲烷提取5次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷3ml使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1ml含3mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5∶10∶0.5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，显相同的红色斑点；
(2)取本制剂10g，加乙醇100ml，加热回流100分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝30∶1∶5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：应符合中国药典片剂项下有关的各项规定；
含量测定：
(1)大黄素 照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶0.05％磷酸溶液＝90∶10为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥48小时的大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇200ml，称定重量，在功率250W、频率33kHz下超声提取100分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，置烧瓶中，挥干溶剂，加入三氯甲烷50ml和5mol/L硫酸溶液50ml，置80℃水浴中加热回流5小时，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取5次，合并三氯甲烷提取液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本片剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.5mg/g。
(2)虎杖苷 照中国药典高效液相色谱法测定，避光操作：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶5％磷酸＝90∶10为流动相；检测波长306nm；理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥48小时的虎杖苷对照品，加稀乙醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂5g，精密称定，精密加入稀乙醇200ml，称定重量，加热回流100分钟，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本片剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.2mg/g。
本发明的实施例3：所述颗粒剂质量控制方法可以包括：
性状：药物为棕褐色的颗粒；味微甜、微酸、涩；
鉴别：(1)取本制剂0.5g，加甲醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液1ml，加热水解10分钟，放冷，用三氯甲烷提取1次，三氯甲烷液蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材0.01g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝30∶1∶5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，显相同的红色斑点；
(2)取本制剂1g，加乙醇10ml，加热回流10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5∶10∶0.5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：应符合中国药典颗粒剂项下有关的各项规定；
含量测定：
(1)大黄素 照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶5％磷酸溶液＝10∶90为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12小时的大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，在功率250W、频率33kHz下超声提取10分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置烧瓶中，挥干溶剂，加入三氯甲烷5ml和0.5mol/L硫酸溶液5ml，置80℃水浴中加热回流0.5小时，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取1次，三氯甲烷提取液减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各25μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本颗粒剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.1mg/g。
(2)虎杖苷 照中国药典高效液相色谱法测定，避光操作：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶0.05％磷酸＝10∶90为流动相；检测波长306nm；理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12小时的虎杖苷对照品，加稀乙醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂0.05g，精密称定，精密加入稀乙醇10ml，称定重量，加热回流10分钟，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各25μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本颗粒剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.054mg/g。
本发明的实施例4：所述胶囊剂质量控制方法可以包括：
性状：内容物为棕褐色的颗粒；味苦、微酸、涩；
鉴别：(1)取本制剂内容物0.5g，加甲醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液1ml，加热水解10分钟，放冷，用三氯甲烷提取1次，三氯甲烷液蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材0.01g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝30∶1∶0.5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，显相同的红色斑点；
(2)取本制剂内容物1g，加乙醇10ml，加热回流10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5∶10∶5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：应符合中国药典胶囊剂项下有关的各项规定。
本发明的实施例5：所述片剂质量控制方法可以包括：
性状：药物显棕褐色；味苦、微酸、涩；
鉴别：取本制剂0.5g，加甲醇100ml，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液1ml，加热水解10分钟，放冷，用三氯甲烷提取1次，三氯甲烷液蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材0.01g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝30∶1∶5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，显相同的红色斑点；
含量测定：
大黄素照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶5％磷酸溶液＝30∶70为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12小时的大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，在功率250W、频率33kHz下超声提取10分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置烧瓶中，挥干溶剂，加入三氯甲烷5ml和0.5mol/L硫酸溶液5ml，置80℃水浴中加热回流0.5小时，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取1次，三氯甲烷提取液减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各25μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本片剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.5mg/g。
Claims (11)
1.一种护肝宁制剂的质量控制方法，所述制剂包括胶囊剂、片剂和颗粒剂，其特征在于：所述质量控制方法主要包括性状、鉴别、检查以及含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括对制剂中虎杖和灵芝的薄层色谱鉴别；含量测定是对制剂中虎杖所含大黄素和虎杖苷的含量测定。
2.按照权利要求1所述护肝宁制剂的质量控制方法，其特征在于：虎杖的鉴别方法是分别以虎杖对照药材、大黄素对照品和大黄素甲醚对照品为对照，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂的薄层色谱法。
3.按照权利要求1所述护肝宁制剂的质量控制方法，其特征在于：灵芝的鉴别方法是以灵芝对照药材为对照，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂的薄层色谱法。
4.按照权利要求1、2或3所述护肝宁制剂的质量控制方法，其特征在于：所述的鉴别方法包括以下项目的部分或全部：
(1)取本制剂或其内容物，加入甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液，加热水解，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材，同法制成对照药材溶液；再取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，显相同的红色斑点；
(2)取本制剂或其内容物，加入乙醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
5.按照权利要求4所述护肝宁制剂的质量控制方法，其特征在于：更具体的鉴别方法包括以下项目的部分或全部：
(1)取本制剂或其内容物0.5～5g，加甲醇10～100ml，超声处理5～100分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液1～20ml，加热水解10～100分钟，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～3ml使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材0.01～0.5g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.2～3mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，显相同的红色斑点；
(2)取本制剂或其内容物1～10g，加乙醇10～100ml，加热回流10～100分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5～5ml使溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材0.5～5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各2～15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
6.按照权利要求1所述护肝宁制剂的质量控制方法，其特征在于：虎杖中大黄素的含量测定方法是以大黄素对照品为对照，以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10为流动相的高效液相色谱法。
7.按照权利要求1所述护肝宁制剂的质量控制方法，其特征在于：虎杖中虎杖苷的含量测定方法是以虎杖苷对照品为对照，以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10为流动相的高效液相色谱法。
8.按照权利要求1、6或7所述护肝宁制剂的质量控制方法，其特征在于：所述含量测定方法包括以下项目的部分或全部：
(1)大黄素 照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的大黄素对照品，加甲醇溶解，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，称定重量，超声提取，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液置烧瓶中，挥干溶剂，加入三氯甲烷和0.5～5mol/L硫酸溶液，置80℃水浴中加热回流，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于1.5mg/g；本片剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.5mg/g；本颗粒剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.1mg/g；
(2)虎杖苷照 中国药典高效液相色谱法测定，避光操作：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10为流动相；检测波长306nm；理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的虎杖苷对照品，加稀乙醇溶解，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物，精密称定，精密加入稀乙醇，称定重量，加热回流，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.5mg/g；本片剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.2mg/g；本颗粒剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.054mg/g。
9.按照权利要求8所述护肝宁制剂的质量控制方法，其特征在于：更具体的含量测定方法包括以下项目的部分或全部：
(1)大黄素 照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含30～100μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物0.1～3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10～200ml，称定重量，在功率250W、频率33kHz下超声提取10～100分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5～50ml，置烧瓶中，挥干溶剂，加入三氯甲烷5～50ml和0.5～5mol/L硫酸溶液5～50ml，置80℃水浴中加热回流0.5～5小时，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～25μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于1.5mg/g；本片剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.5mg/g；本颗粒剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.1mg/g；
(2)虎杖苷 照中国药典高效液相色谱法测定，避光操作：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10为流动相；检测波长306nm；理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的虎杖苷对照品，加稀乙醇制成每1ml含10～50μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物0.05～5g，精密称定，精密加入稀乙醇10～200ml，称定重量，加热回流10～100分钟，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～25μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.5mg/g；本片剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.2mg/g；本颗粒剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.054mg/g。
10.按照权利要求1所述护肝宁制剂的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法包括：
性状：
对于胶囊剂：内容物为棕褐色的颗粒；味苦、微酸、涩；
对于片剂：药物显棕褐色；味苦、微酸、涩；
对于颗粒剂：药物为棕褐色的颗粒；味微甜、微酸、涩；
鉴别：
(1)取本制剂或其内容物，加入甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液，加热水解，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材，同法制成对照药材溶液；再取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，显相同的红色斑点；
(2)取本制剂或其内容物，加入乙醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
检查：应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定；
含量测定：
(1)大黄素 照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的大黄素对照品，加甲醇溶解，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，称定重量，超声提取，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液置烧瓶中，挥干溶剂，加入三氯甲烷和0.5～5mol/L硫酸溶液，置80℃水浴中加热回流，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于1.5mg/g；本片剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.5mg/g；本颗粒剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.1mg/g；
(2)虎杖苷 照中国药典高效液相色谱法测定，避光操作：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10为流动相；检测波长306nm；理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的虎杖苷对照品，加稀乙醇溶解，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物，精密称定，精密加入稀乙醇，称定重量，加热回流，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.5mg/g；本片剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.2mg/g；本颗粒剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.054mg/g。
11.按照权利要求10所述护肝宁制剂的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法包括：
性状：
对于胶囊剂：内容物为棕褐色的颗粒；味苦、微酸、涩；
对于片剂：药物显棕褐色；味苦、微酸、涩；
对于颗粒剂：药物为棕褐色的颗粒；味微甜、微酸、涩；
鉴别：(1)取本制剂或其内容物0.5～5g，加甲醇10～100ml，超声处理5～100分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液1～20ml，加热水解10～100分钟，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～3ml使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材0.01～0.5g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.2～3mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，显相同的红色斑点；
(2)取本制剂或其内容物1～10g，加乙醇10～100ml，加热回流10～100分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5～5ml使溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材0.5～5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各2～15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
检查：应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定；
含量测定：
(1)大黄素 照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含30～100μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物0.1～3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10～200ml，称定重量，在功率250W、频率33kHz下超声提取10～100分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5～50ml，置烧瓶中，挥干溶剂，加入三氯甲烷5～50ml和0.5～5mol/L硫酸溶液5～50ml，置80℃水浴中加热回流0.5～5小时，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～25μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于1.5mg/g；本片剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.5mg/g；本颗粒剂含虎杖以大黄素C15H10O5计，不得少于0.1mg/g；
(2)虎杖苷 照中国药典高效液相色谱法测定，避光操作：
色谱条件与***适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10为流动相；检测波长306nm；理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备：精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥12～48小时的虎杖苷对照品，加稀乙醇制成每1ml含10～50μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本制剂或其内容物0.05～5g，精密称定，精密加入稀乙醇10～200ml，称定重量，加热回流10～100分钟，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10～25μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本胶囊剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.5mg/g；本片剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.2mg/g；本颗粒剂含虎杖以虎杖苷C20H22O8计，不得少于0.054mg/g。
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