CN1338944A - 用于心血管适应症的胆固醇酯转移蛋白抑制剂和苯氧异丁酸类衍生物的联合形式 - Google Patents

用于心血管适应症的胆固醇酯转移蛋白抑制剂和苯氧异丁酸类衍生物的联合形式 Download PDF

Info

Publication number
CN1338944A
CN1338944A CN99816149A CN99816149A CN1338944A CN 1338944 A CN1338944 A CN 1338944A CN 99816149 A CN99816149 A CN 99816149A CN 99816149 A CN99816149 A CN 99816149A CN 1338944 A CN1338944 A CN 1338944A
Authority
CN
China
Prior art keywords
metering
chemical compound
treatment
cooperative programs
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN99816149A
Other languages
English (en)
Inventor
J·A·斯科尔斯基
K·C·格伦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GD Searle LLC
Original Assignee
GD Searle LLC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by GD Searle LLC filed Critical GD Searle LLC
Publication of CN1338944A publication Critical patent/CN1338944A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/216—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acids having aromatic rings, e.g. benactizyne, clofibrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Abstract

本发明提供用于预防或治疗心血管疾病的心血管治疗化合物的联合形式,所述心血管疾病包括高胆固醇血症、动脉粥样硬化或高脂血。所公开的联合形式包括与胆固醇酯转移蛋白(CETP)抑制剂联合的苯氧异丁酸类衍生化合物。

Description

用于心血管适应症的胆固醇酯转移蛋白抑制剂 和苯氧异丁酸类衍生物的联合形式
本申请请求以U.S.临时申请序列号60/142,616(1999年7月7日提交)和U.S.临时申请序列号60/113,955(1998年12月23日)为优先权。
发明背景
发明领域
本发明涉及心血管疾病的治疗方法，并且具体涉及化合物的联合形式、组合物及其在医学中应用的方法，特别是在预防和治疗哺乳动物中高脂血症中的应用，例如与动脉粥样硬化、高胆固醇血症和其他冠状动脉性疾病有关的高脂血症。更具体地，本发明涉及胆固醇酯转移蛋白(CETP)活性抑制化合物。本发明还涉及苯氧异丁酸(fibricacid)类衍生化合物(苯氧异丁酸酯(fibrates))
相关现有技术
与高浓度的总胆固醇和低密度脂蛋白(LDL)胆固醇有关的高脂血症被公认为是冠心病、特别是动脉粥样硬化的主要危险因素。许多研究已经证明，低血浆浓度的高密度脂蛋白(HDL)胆固醇是动脉粥样硬化恶化的一个强有力的危险因素(Barter和Rye，动脉粥样硬化(Atherosclerosis)121，1-12(1996)。HDL是脂蛋白的一个主要种类，其功能在于经血液转运脂质。和HDL密切相关建立的脂质主要包括胆固醇、胆固醇酯、甘油三酯、磷脂和脂肪酸。其他种类的、在血液中建立的脂蛋白是低密度脂蛋白(LDL)、中密度脂蛋白(IDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)。由于HDL胆固醇的低水平增加动脉粥样硬化的危险性，所以提高血浆HDL胆固醇的方法对于动脉粥样硬化和其他与血管中脂质蓄积有关的疾病的治疗具有治疗益处。这些疾病包括但不限于冠心病、外周血管疾病和中风。
动脉粥样硬化是多数冠状动脉疾病(CAD)的基础，已经成为现代社会中发病和死亡的一个主要原因。高LDL胆固醇(高于约180mg/dl)和低HDL胆固醇(低于35mg/dl)对于动脉粥样硬化的恶化已显示出重要作用。其他疾病或危险因素如外周血管疾病、中风和高胆固醇血症会受到不利HDL/LDL比例的消极影响。
人们发现干扰由肠道腔的胆酸的再循环可以因果性地降低血清胆固醇水平。业已累积的流行病学数据表明，这种降低作用可以在动脉粥样硬化的疾病状态中引起好转。Stedronsky在“胆酸和胆固醇与具有降胆固醇血症特性的非全身性药物的相互作用”(Biochimica etBiophysica Acta，1210，255-287(1994))中围绕胆酸类物质和胆固醇探讨了生物化学、生理学和已知的活性剂。
胆固醇酯转移蛋白(CETP)的抑制已经显示出对血浆HDL/LDL比例的有效修正，并且被期待能够制止某些心血管疾病的进程和/或形成。CETP是一种促进血液中胆固醇酯和甘油三酯在多种脂蛋白之间运动的血浆蛋白(Tall，J.Lipid Res.，34，1255-74(1993))。CETP作用下胆固醇酯自HDL向LDL的运动具有降低HDL胆固醇的作用。所以，CEPT的抑制应该引起血浆HDL胆固醇的升高和血浆LDL胆固醇的降低，由此提供治疗上有益的血脂分布。McCarthy在MedicinalRes.Revs.13，139-59(1993)中公开了这种效应的证据。Sitori在Pharmac.Ther.67，443-47(1995))中描述了这种效应的其他证据。这个现象首先是由Swenson等人(J.Biol.Chem.，264，14318(1989))利用特异性抑制CETP的单克隆抗体来证实的。在兔子中，所述抗体引起血浆HDL胆固醇升高和LDL胆固醇降低。Son等人(Biochim.Biophys.Acta，795，743-480(1984))描述了来自于抑制CETP的人血浆的蛋白质。U.S.专利5,519,001(在此作为参考，授权给Kushwaha等人)公开了由狒狒C-1蛋白(apo C-1)衍生的36个氨基酸肽能够抑制CETP活性。Cho等人(Biochim.Biophys.Acta1391，133144(1998))公开了由活猪血浆获得的抑制人CETP的肽。Bonin等人(J.Peptide Res.，51，216-225(1998))公开了一种CETP的十肽抑制剂。Hedge等人在Bioorg.Med.Chem.Lett.，8，1277-80(1998)中公开了作为CETP抑制剂的十肽真菌代谢产物。
现已有若干报导起CETP抑制剂作用的非肽化合物。Barrett等人(J.Am.Chem.Soc.188，7863-63(1996))描述了含有环丙烷的CETP抑制剂。Kuo等人(J.Am.Chem.Soc.117，10629-34(1995))描述了其他含有环丙烷的CETP抑制剂。Pietzonka等(Bioorg.Med.Chem.Lett.6，1951-54(1996))公开了作为CETP抑制剂的胆固醇酯的含硫酸酯(盐)类似物。Coval等人(Bioorg.Med.Chem.Lett.5,605-610(1995))描述了Wiedendiol-A和-B，和有关倍半萜化合物作为CETP抑制剂。Lee等人(J.Antibiotics 49，693-96(1996))描述了由昆虫真菌获得的CETP抑制剂。Busch等(Lipids 25，216-220，(1990))描述了胆固醇乙酰溴作为CETP抑制剂。Morton和Zilversmit(J.Lipid Res.35，836-47(1982))公开了对-氯汞苯基磺酸盐、对羟基汞苯甲酸盐和汞硫代水杨酸乙酯抑制CETP。Connolly等(Biochem.Biophys.Res.Comm.223，42-47(1996))描述了其他半胱氨酸改性试剂作为CETP抑制剂。Xia等描述了1，3，5-三嗪类化合物作为CETP抑制剂(Bioorg.Med.Chem.Lett.6，919-22(1996))。Bisgaier等(Lipids，29，811-8(1994))描述了4-苯基-5-十三烷基-4H-1，2，4-***-硫醇作为CETP抑制剂。其他***CETP抑制剂公开在U.S.专利申请序列号09/153,360(在此引入作为参考)中。Sikorski等进一步在PCT专利申请号WO 9914204中公开了新的CETP抑制剂。
取代2-巯基苯胺酰胺化合物可以作为CETP抑制剂使用，并且此类治疗化合物由H.Shinkai等人公开在PCT专利申请号WO 98/35937中。
一些取代杂烷基胺类化合物已知为CETP抑制剂。在欧洲专利申请号796846中，Schmidt等人描述了2-芳基取代吡啶类化合物可以用作心血管药物的胆固醇酯转移蛋白抑制剂。吡啶环的C3上的一个取代基可以是羟烷基。在欧洲专利申请号801060中，Dow和Wright描述了杂环类衍生物，其被烷基胺的醛加成产物取代得到1-羟基-1-胺类化合物。这些据称是可有效治疗糖尿病和其他疾病的β3-肾上腺素能受体激动剂。在英国专利申请号2305665中，Fisher等人公开了3-激动剂二级氨基醇取代吡啶类衍生物，其可有效治疗若干种疾病，包括胆甾醇水平和动脉粥样硬化疾病。在欧洲专利申请号818448(在此引入作为参考)中，Schmidt等描述了四氢喹啉类衍生物，作为胆固醇酯转移蛋白抑制剂。在欧洲专利申请号818197中，Schmek等描述了吡啶稠合杂环类化合物作为胆固醇酯转移蛋白抑制剂。
Brandes等在德国专利申请号19627430中描述了双环稠合吡啶衍生物，作为胆固醇酯转移蛋白抑制剂。在PCT专利申请号WO9839299中，Muller-Gliemann等描述了喹啉类衍生物作为胆固醇酯转移蛋白抑制剂。
A.Oomura等在日本专利号10287662中还公开了作为有效CETP抑制剂的多环类化合物。譬如，具有结构C-1和C-8的治疗化合物是通过培养青霉菌属制成的。
Schmidt等在欧洲专利号EP 818448中公开了作为CETP抑制剂的环烷基吡啶类化合物。譬如，公开了作为CETP抑制剂特别有效的、具有结构C-9的治疗化合物。
在PCT专利申请号WO 9914174中公开了作为CETP抑制剂的取代四氢萘类化合物。其中特别描述的有效CETP抑制剂是(8S)-3-环戊基-1-(4-氟苯基)-2-[(S)-氟(4-三氟甲基苯基)甲基]-8-羟基-6-螺环丁基-5，6，7，8-四氢萘。
一些作为CETP抑制剂的4-杂芳基-四氢喹啉类化合物公开在PCT专利申请号WO 9914215中。例如，该公开文献描述了3-(4-三氟甲基苯甲酰基)-5，6，7，8-四氢喹啉-5-酮作为CETP抑制剂。
苯氧异丁酸类衍生物包括另一种影响脂蛋白水平的药物。其中首先开发出的是氯贝丁酯，公开在U.S.专利号3,262,850，在此引入作为参考。氯贝丁酯是对氯苯氧基异丁酸的乙酯。此类被广泛应用的药物是吉非贝齐，公开在U.S.专利号3,674,836(在此引入作为参考)。吉非贝齐常常用于降低甘油三酯水平或提高HDL胆固醇浓度(治疗学的药理学基础，893页，在此引入作为参考)。非诺贝特(U.S.专利号4,058,552，在此引入作为参考)具有类似于吉非贝齐的效果，但另外可以降低LDL水平。环丙贝特(U.S.专利号3,948,973，在此引入作为参考)具有与非诺贝特类似的作用。此类这另一种药物是苯扎贝特(U.S.专利号3,781,328,在此引入作为参考)。应用苯氧异丁酸类衍生物应警惕的副作用包括胆囊疾病(胆石病)、横纹肌溶解和极性肾衰。当贝特类药物与HMG CoA还原酶抑制剂合用时会加剧一些副作用。
适合治疗心血管疾病的一些联合疗法业已公开在文献中。IBAT抑制剂和HMG CoA还原酶抑制剂的联合可以有效治疗心血管疾病，其公开在U.S.专利申请号09/037,308中，该申请在此引入作为参考。
J.Sasaki等(同上)公开了氟伐地汀和烟酸戊四醇酯的联合疗法。那些研究人员推断出氟伐地汀和烟酸戊四醇酯的联合形式“在750mg/天剂量给药下似乎不会增强或消弱氟伐地汀的有益效果”。
L.Cashin-Hemphill等(J.Am.Med.Assoc.，264(23)，3013-17(1990)，在此引入作为参考)描述了降胆宁和烟酸的联合疗法对于冠状动脉粥样硬化的有益效果。所述效果包括使天然冠状动脉损害不再进行并且消退。
阿西莫司和辛伐他汀(simvastatin)的联合疗法在具有高甘油三酯水平的患者中显示出有益的HDL效应(N.Hoogerbrugge等，J.Internal Med.，241，151-55(1997)，在此引入作为参考)。
谷甾醇酯人造奶油和普伐他汀联合疗法由H.Gylling等(J.Lipid Res.，37，1776-85(1996)，在此引入作为参考)公开。该疗法据报导可以在非胰岛素依赖型糖尿病男子中同时抑制胆固醇吸收，并且明显降低LDL胆固醇。
Brown等(New Eng.J.Med.，323(19)，1289-1339(1990)，在此引入作为参考)描述了洛伐他汀和考来替泊的联合疗法，其与洛伐他汀单用对比可以减少动脉粥样硬化损害进程，并且增强损害消退。
Chang等在PCT专利申请号WO9823593(在此引入作为参考)公开了apoB分泌抑制剂和CETP抑制剂的联合治疗。
Buch等(PCT专利申请号WO 9911263，在此引入作为参考)描述了含有氨氯地平和他汀类化合物的联合疗法用于治疗患有心绞痛、动脉粥样硬化、复合型高血压和高血脂的对象，并且用于治疗心搏停止的症状。Buch等在PCT专利申请号WO 9911259中描述了含有氨氯地平和阿托他汀(atorvastatin)的联合疗法。
Scott等(PCT专利申请号WO 9911260)描述了含有阿脱他汀和抗高血压药的联合疗法。
Dettmar和Gibson(UK专利申请号GB 2329334 A)主张一种有效降低血浆低密度脂蛋白和胆固醇水平的治疗组合物，其中该组合物含有HMG CoA还原酶抑制剂和胆汁络合剂。
上述参考文献表明始终需要安全、有效的药物用于预防或治疗心血管疾病。
发明概述
为了满足对用于预防和治疗心血管疾病的安全且有效药物的长期需求，现在报导心血管药物的联合疗法。
在其若干实施方式中，本发明提供了一种联合疗法，其包括第一计量的CETP抑制化合物和第二计量的另一种有效预防或治疗高血脂、动脉粥样硬化或高胆固醇血症的心血管治疗药物的应用，其中所述第一计量和第二计量均包括所述化合物的抗高血脂病症有效量、抗动脉粥样硬化病症有效量或抗高胆固醇血症有效量。譬如，本发明许多实施方式中的一种方式是包括治疗剂量的CETP抑制化合物和苯氧异丁酸类化合物的联合疗法。
本发明的另一个实施方式包括在此描述的任何心血管联合疗法在预防或治疗高胆固醇血症、动脉粥样硬化或高脂血症中的应用。所以，在一个实施方式中，本发明提供一种预防或治疗高脂血症的方法，该方法包括给需要的患者施用单位剂型的联合形式，其中该联合形式含有第一计量的苯氧异丁酸类衍生化合物和第二计量的CETP抑制化合物，其中该第一计量和第二计量均包括所述化合物的抗高血脂症有效量。
在另一实施方式中，本发明提供一种预防或治疗动脉粥样硬化病症的方法，该方法包括给需要的患者施用单位剂型的联合形式，其中所述联合形式含有第一计量的苯氧异丁酸类衍生化合物和第二计量的CETP抑制化合物，其中该第一计量和第二计量均包括所述化合物的抗动脉粥样硬化病症有效量。
在另一实施方式中，本发明提供预防或治疗高胆固醇血症的方法，所述方法包括给需要的患者施用单位剂型的联合形式，其中所述联合形式含有第一计量的苯氧异丁酸类衍生化合物和第二计量的CETP抑制化合物，其中第一计量和第二计量均包括所述化合物的抗高胆固醇血症有效量。
本发明的应用性的进一步范围从下文提供的详细说明会更加清楚。然而应理解，下列详述和实施例虽然表示本发明的优选实施方式，但它们仅仅是举例说明，因为所属技术领域的技术人员根据这些详述显然可以在本发明的实质和范围内进行多种变化和改进。
优选实施方式的详述
下面的详述为所属领域技术人员实施本发明提供帮助。即使如此，这些详述不应解释为对本发明的过度限定，因为所属领域普通技术人员在不脱离本发明发现的实质或范围下可以对在此探讨的实施方式进行改进和变化。
本申请引用的各个参考文献的内容，包括这些基本参考文献中引用的参考文献的内容，均在此全文引入作为参考。a.定义
提供下列定义的目的在于有助于读者理解本发明的详述：
“联合疗法”是指给予两种或多种治疗剂治疗高脂血症，例如动脉粥样硬化和高胆固醇血症。这种给药包括这些治疗剂以大体上同时的方式合并给药，例如在一个胶囊内含有固定比例的活性成分，或各种抑制剂药物分别存在于多个、分开的胶囊中。另外，所述给药也可以包括以顺序方式应用各种治疗剂。在上述两种情况中，治疗方案在高脂血症中应提供药物联合的有益效果。
短语“治疗有效”是指抑制剂的合并量在联合疗法中有效。这种合并量应达到减轻或消除高脂血症的目标。
“治疗化合物”是指可有效预防或治疗高脂血症，包括动脉粥样硬化和高胆固醇血症在内的化合物。b.联合形式
本发明的联合形式应具有多种用途。譬如，通过剂量调整和药物监测，治疗化合物在本发明联合形式中的独立剂量应小于该治疗化合物在单一药物疗法中所用的典型剂量。剂量的降低将提供多种优越性，包括各个治疗化合物比单一药物疗法低的副作用。另外，与单一药物疗法相比，联合疗法的副作用较小将为使用该治疗方案提供更高的患者依次性。
本发明的另一种应用在于具有互补效应或合并作用模式的联合形式。譬如，IBAT抑制剂通过抑制回肠内胆酸的重吸收来控制血清胆固醇水平。相反地，CETP抑制剂抑制胆固醇酯和甘油三酯在血液中多种脂蛋白之间的运动。
适用于本发明的化合物可以包括广泛的治疗化合物。某些适用于本发明的个别CET抑制剂化合物分别在下列各专利申请中描述，其分别在此引入作为参考。
R9.     U.S.专利申请序列号60/101661.
R10.    U.S.专利申请序列号60/101711.
R11.    U.S.专利申请序列号60/101660.
R12.    U.S.专利申请序列号60/101664.
R13.    U.S.专利申请序列号60/101668.
R14.    U.S.专利申请序列号60/101662.
R15.    U.S.专利申请序列号60/101663.
R16.    U.S.专利申请序列号60/101669.
R17.    U.S.专利申请序列号60/101667.
R18.    U.S.专利申请序列号09/401,916.
R19.    U.S.专利申请序列号09/405,524.
R20.    U.S.专利申请序列号09/404,638.
R21.    U.S.专利申请序列号09/404,638.
R22.    U.S.专利申请序列号09/400,915.
R23.    U.S.专利号5,932,587.
R24.    U.S.专利号5,925,645.
本发明中特别令人感兴趣的CETP抑制剂化合物包括表1所示的那些化合物，以及表1的CETP抑制剂的非对映体、对映体、消旋体、盐和互变异构体。
表1.
Figure A9981614900131
Figure A9981614900151
适用于本发明联合形式和方法的苯氧异丁酸类衍生物包括多种结构和官能度。本发明优选的苯氧异丁酸类衍生物如表2所示。表2的治疗化合物可以以多种形式应用于本发明，包括酸形式、盐形式、消旋体、对映体、两性离子和互变异构体。表2中各个U.S.专利参考文献分别在此引入作为参考。
表2.
化合物序号     通用名 CAS注册号    专利参考文献
    G-41   氯贝丁酯 637-07-0     U.S.3,262,850
    G-70   非诺贝特 49562-28-9     U.S.4,058,552
    G-38   环丙贝特 52214-84-3     U.S.3,948,973
    G-20   苯扎贝特 41859-67-0     U.S.3,781,328
    G-78   吉非贝齐 25182-30-1     U.S.3,674,836
    G-40   克利贝特 69047-39-8     U.S.3,716,583
    G-24   比尼贝特 30299-08-2     BE 884722
适用于本发明的化合物(例如，苯氧异丁酸类衍生化合物或CETP抑制化合物)可以不具有不对称碳原子，或者另外，所述有效化合物具有一个或多个不对称碳原子。当有效化合物具有一个或多个不对称碳原子时，它们包括消旋体和立体异构体，例如纯净形式或混合物形式的非对映体和对映体。利用常规技术、通过反应对映性起始原料或通过分离本发明化合物的异构体可以制备上述立体异构体。
异构体可以包括几何异构体，例如双键交叉的顺式异构体或反式异构体。所有这些异构体被认为是适于本发明的化合物。
本发明的化合物也包括互变异构体。
下文探讨的适用于本发明的化合物包括其盐、溶剂化物和前药。
剂量，剂型和给药途径
本发明的组合物可以通过任何方式、优选通过口服给药以预防和治疗高脂血疾病，令这些化合物与其机体中的作用位点相接触，譬如哺乳动物(如人体)的回肠、血浆或肝脏。
为了预防或治疗上述病症，适用于本发明组合物和方法的化合物可以利用化合物本身。药学可接受盐特别适用于医学用途，因为它们具有比其母体化合物更高的水溶性。所述的盐显然必须具有药学可接受阴离子或阳离子。当可行时，本发明化合物的适宜药学可接受酸加成盐包括那些：由无机酸衍生的的盐，如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸、磺酸和硫酸；和由有机酸衍生的盐，如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、乙醇酸、异硫碳酸(isothionic)、乳酸、乳糖酸马来酸、苹果酸、甲磺酸、琥珀酸、甲苯磺酸、酒石酸和三氟乙酸。从医学目的上考虑特别优选氯化物盐。适合的药学可接受碱性盐包括铵盐、碱金属盐(如钠和钾盐)，和碱土金属盐(如镁和钙盐)。
显然，适用于本发明的阴离子也必须是药学可接受的并且选自上述阴离子。
适用于本发明的化合物可以与可接受载体以药物组合物的形式存在。显然，载体必须是可接受的，换言之，应和组合物中的其他成分相容，同时必须对接受者无害。载体可以是固体或液体，或两者兼是，并且适宜与所述化合物配制成为单位剂型的组合物，譬如片剂，其可以含有0.05％-95％(重量)的活性化合物。其他药理学活性物质也可以存在，包括本发明的其他化合物。本发明的药物组合物可以通过任何已知制药技术制备，主要包括将成分混合。
任选地，本发明的联合形式可以包括一种组合物，该组合物含有苯氧异丁酸类衍生化合物和CETP抑制化合物。在所述组合物中，苯氧异丁酸类衍生化合物和CETP抑制化合物是以单剂量形式存在，例如含有两种化合物的丸剂、胶囊或液体。
这些化合物可以通过任何适于药物联合应用的常规方式给药，无论是分开的治疗化合物，还是治疗化合物的联合形式。
显然，获得预期生物效果所需要的化合物的量应取决于多种因素，如所选择的特定化合物、预期用途、给药的方式和接受者的临床症状。
苯氧异丁酸类衍生物的总的日剂量通常在约1000至约3000mg/天的范围内，一次性或分次给药。譬如，吉非贝齐(Gemfibrozil)或克利贝特(Clinofibrate)常常各自单独以1200mg/天的剂量给药。氯贝丁酯(Clofibrate)常常以2000mg/天剂量给药。比尼贝特(Binifibrate)常常以1800mg/天的剂量给药。
对于CETP抑制剂，约0.01至约100mg/kg体重/天、优选约0.5至约20mg/kg体重/天的总日剂量一般是适宜的。
上面段落中描述的多种治疗化合物的日剂量可以以单剂量给予患者，或以成比例的多个亚剂量给药。亚剂量可以每天给药2-6次。剂型可以是有效获得预期效果的缓释形式。
在药学可接受盐的情况中，上述重量是指由盐衍生的治疗化合物的酸当量或碱当量的重量。
本发明联合形式的口服给药可以包括所属技术领域熟知的、通过多种机理在胃肠道内提供长效或缓释给药的制剂。这些包括但不限于，基于小肠的变化pH剂型发生pH敏感性释放，片剂或胶囊的缓慢侵蚀，基于制剂的物理特性保留在胃中，使剂型生物粘着在肠道的粘膜内层，或剂型酶促释放出活性药物。对于一些适用于本发明的治疗化合物(例如，苯氧异丁酸类衍生物或CETP抑制剂)，预期效果经延长时间，在这段时间内活性药物分子通过剂型的处理传递到作用位点。因此，肠溶包衣和肠溶包衣控释制剂属于本发明的范围内。适合的肠溶包衣包括邻苯二甲酸乙酸纤维素、聚邻苯二甲酸乙酸酯、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素和甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯的阴离子聚合物。
本发明的联合形式可以以固体、半固体或液体形式口服给药。当是液体或半固体形式时，本发明的联合形式可以例如是液体、糖浆，或含在明胶胶囊(如明胶帽)中。在一个实施方式中，当本发明的联合形式中采用CETP抑制剂时，CETP抑制剂可以以液体、糖浆的形式提供，或含在明胶胶囊中。在另一实施方式中，当苯氧异丁酸类衍生物应用于本发明的联合形式中时，苯氧异丁酸类衍生物可以以液体、糖浆的形式提供，或含在明胶胶囊中。
对于CETP抑制剂，静脉内给药的剂量可以譬如是约0.003mg/kg体重至约1.0mg/kg体重，优选约0.01mg/kg体重至约0.75mg/kg体重，更优选约0.1mg/kg体重至约0.6mg/kg体重。
当静脉内给药时，苯氧异丁酸类衍生物的剂量譬如是约100mg/kg体重至约2000mg/kg体重，优选约300mg/kg体重至约1000mg/kg体重，更优选约400mg/kg体重至约750mg/kg体重。
任何这些治疗化合物的剂量一般是作为约每分钟10ng/kg体重至约100ng/kg体重的输注液给药。适合此目的的输注液可以含有如约0.1ng至约10mg，优选约1ng至约10mg/mL的治疗化合物。单位剂量可以含有例如约1mg至约10g的本发明化合物。因此，注射用安瓿可以含有例如约1mg至约100mg的本发明化合物。
本发明的药物组合物包括那些适合口服、局部、经颊(如舌下)和非肠道(如皮下、肌肉内、真皮内或静脉内)给药的组合物，而在任何指定情况中最恰当的途径应取决于被治疗病症的本质和严重性以及所用的特定化合物。在多数情况中，优选的给药途径是口服。
适合口服给药的药物组合物可以以不连续单位存在，例如胶囊、囊形片、锭剂或片剂，分别含有预定量的至少一种适用于本发明的治疗化合物；作为粉末或颗粒剂；作为存在于水或非水液体中的溶液或混悬液；或作为水包油或油包水乳液。如上所述，所述组合物可以通过适当的制药方法来制备，所述方法包括将活性化合物和载体(其可以组成一种或多种辅助成分)混合在一起的步骤。通常，通过均匀或紧密地混合活性化合物和液态或微粉化固体载体，或两者兼备，并且随后如果需要使产物成型可以制得所述组合物。譬如，通过压缩或模制化合物的粉末或颗粒和任选的一种或多种辅助成分可以制得片剂。通过在适当设备中压缩自由流动形式(如粉末或颗粒)的、与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂和/或表面活性剂和/或分散剂混合的化合物可以制得压缩片剂。在适当设备中通过模制用惰性液态稀释剂湿润的粉状化合物可以制得模制片剂。
适合经颊(舌下)给药的药物组合物包括：在矫味基质中含有本发明化合物的糖锭剂，所述矫味基质一般为蔗糖和***胶或黄芪胶；和在惰性基质如明胶和甘油或蔗糖和***胶中含有所述化合物的软锭剂。
适合非肠道给药的药物组合物一般包括本发明化合物的灭菌含水制剂。这些制剂适宜经静脉内给药，虽然给药也可以采取皮下、肌肉内或真皮下注射的方式。此类制剂一般通过将所述化合物与水混合合把所得溶液灭菌并与血液等渗制备。本发明的可注射组合物通常应含有0.1至5％(w/w)的本发明所公开的化合物。
适合直肠给药的药物制剂适宜作为单位剂量的栓剂提供。通过把本发明的化合物与一种或多种常规固态载体(如可可脂)混合且随后使所得混合物成型可以制备这些制剂。
适合局部涂敷在皮肤上的药物组合物优选采用软膏、霜剂、洗剂、糊剂、明胶、喷雾剂、气溶胶或油的形式。可利用的载体包括石油凝胶(例如凡士林)、羊毛脂、聚乙二醇、醇类，和它们两种或多种的混合物。活性化合物存在的浓度一般是该组合物的0.1至50％(w/w)，例如0.5至2％。
透皮给药也可行。适合透皮的药物组合物可以提供为不连续贴剂，该贴剂可以在长时间内保持与接受者的表皮紧密接触。此类贴剂适当地含有本发明的化合物，所述化合物存在于任选缓冲的水溶液中，溶解和/或分散在粘合剂中，或分散在聚合物中。活性化合物的适当浓度为约1％至35％，优选约3％至15％。作为一种特定的可能性，所述化合物可以由贴剂通过电转运或离子电渗疗法给药，如Pharmaceutical Research，3(6)，318(1986)中所述。
在任何情况中，可以与载体原料混合制成单剂量形式给药的活性成分的量应根据被治疗宿主和特定的给药方式而改变。
口服给药的固体剂型包括上述胶囊、片剂、丸剂、粉末、明胶囊和颗粒，其中含有一种或多种适用于本发明的、与至少一种惰性稀释剂如蔗糖、乳糖或淀粉混合的化合物。在普通实践中，所述剂型还包括除惰性稀释剂以外的附加物质，例如润滑剂如硬脂酸镁和增溶剂如环糊精。在胶囊、片剂、粉末、颗粒、明胶囊和丸剂的情况中，所述剂型还可以含有缓冲剂。片剂和丸剂可以另外利用肠溶包衣制成。
口服给药的液体剂型包括药学可接受乳液、溶液、糖浆剂和酏剂，其中含有所属领域常用的惰性稀释剂，如水。此类组合物还可以含有辅剂，例如湿润剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂。
可注射制剂，例如灭菌可注射水或油混悬液可以按照所属领域的已知方法、利用适当的分散或凝结剂和助悬剂来配制。灭菌可注射制剂也可以是存在于无毒肠胃外可接受稀释剂或溶剂中的灭菌可注射溶液或混悬液，例如存在于1，3-丁二醇中的溶液。在可接受载体和溶剂中可采用水，林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，灭菌、不挥发油一般用作溶剂或助悬介质。出于这个目的，可以采用任何温和的不挥发油，包括缓冲甘油一酯或二酯。此外，脂肪酸如油酸可用于可注射的制剂。
药学可接受载体包括所有上述载体及类似物。
在联合疗法中，一种或多种适于本发明的治疗剂的给药可以将分开的制剂顺序给药，或可以将单一制剂或分开制剂同时给药。给药可以通过口服途径，或通过静脉内、肌肉内，或皮下注射实施。制剂可以是快速浓注的形式，或含水或非水等渗灭菌注射溶液或混悬液的形式。这些溶液和混悬液可以由灭菌粉末或颗粒制成，其中具有一种或多种药学可接受载体或稀释剂，或粘合剂如明胶或羟丙基甲基纤维素，以及一种或多种润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。
为了口服给药，药物组合物可以采取例如片剂、胶囊、混悬液或液体的形式。胶囊、片剂等可以利用所属领域常规方法制成。药物组合物适宜被制成含有特定量的一种或多种活性成分的剂量单位。剂量单位的实例是片剂或胶囊。这些适宜含有一种或多种上述量的治疗化合物。例如，在CETP抑制剂的情况中，所属领域已知，剂量范围可以是约0.01mg至约500mg或任何剂量，该范围取决于具体的抑制剂。在苯氧异丁酸类衍生物的情况中，剂量范围可以是约0.01mg至约500mg或任何其他剂量，如所属领域所知，这取决于特定的抑制剂。
活性成分也可以通过注射、作为组合物给药，其中例如可以用盐水、葡萄糖或水作为适当载体。各种活性治疗化合物的适宜日剂量是指由于上述口服给药获得的同样血清水平的量。
治疗化合物可以进一步通过口服/口服、口服/非肠道，或非肠道/非肠道给药的联合途径给药。
本发明治疗方法中所用的药物组合物可以以口服形式给药或通过静脉内给药。优选联合疗法的口服给药。为了口服给药，给药可以是采取每天给药一次的方案，或每隔一天给药一次的方案，或全天中多次、间隔开给药。构成联合疗法的治疗化合物可以同时给药，或以组合剂型或以独立剂型用于基本上同时的口服给药。构成联合疗法的治疗化合物也可以顺序给药，通过两步式摄取的方案施用上述治疗化合物。因此，一种方案可以采取顺序施用治疗化合物，通过间隔开摄取分开的活性剂。多次摄取步骤的间隔间可以在数分钟至数小时内，这取决于各治疗化合物的特性如效价、溶解度、生物利用度、血浆半衰期和治疗化合物的动力学性能，并且取决于食物摄取的效应和患者的年龄和病症。靶向分子浓度的24小时生理节奏变化也可以测定出最佳给药间隔。无论是同时、基本上同时或是顺序给药，联合疗法的治疗化合物可以包括一种方案，该方案通过口服途径施用一种治疗化合物并且通过静脉内途径施用另一种治疗化合物。无论联合疗法的治疗化合物是通过单独或一起地口服或静脉内给药，各种所述治疗化合物应含在药学可接受赋形剂、稀释剂或其他制剂成分的适当药物制剂中。含有治疗化合物的口服给药的适当药学可接受制剂的实例如上所述。
治疗方案
利用本发明的化合物和/或组合物预防、缓解或改善具有高脂血作为疾病基础的病症(如动脉粥样硬化)，或者防护或治疗进一步的高胆固醇血浆或血液水平的给药方案是根据多种因素进行选择。这些因素包括患者的种族、年龄、重量、性别、饮食和临床症状，疾病的严重性，给药途径，药理学因素(如所用特定化合物的活性、功效、药动学和毒理学特性)，是否采用一种给药***，和化合物是否作为药物联合形式的组成部分给药。因此，实际采用的给药方案可以多样化，因而不同于上面给出的优选给药方案。
患有高脂血症的患者的起始治疗可以采用上述剂量。治疗一般将根据需要持续数周或数月或若干年直至高脂血症得到控制或消除。正在接受本发明所公开的化合物或组合物治疗的患者可以接受例行监测，譬如利用所属技术领域熟知的方法测量血清LDL和总胆固醇水平，从而判断联合疗法的有效性。此类数据的连续分析可以使治疗期间的治疗方案得到完善，由此及时在任何时间点施用各种治疗化合物的最佳有效量，还可以判断治疗的延续时间。因此，治疗方案和/或剂量计划表可以在治疗过程中合理改变，从而给予最低量且表现出令人满意的有效性的治疗化合物，并且只要必要就可以连续给药至成功治愈高脂血症。
在此公开的联合疗法的潜在优越性可以是减少各别治疗化合物或所有治疗化合物的用量，有效治疗高脂血症如动脉粥样硬化和高胆固醇血症。
本发明若干实施方式之一包括一种联合疗法，其中应用第一计量的CETP抑制剂和第二计量的另一种适于预防或治疗高脂血或动脉粥样硬化的心血管治疗剂，其中所述第一计量和第二计量均包括所述化合物的抗高脂血症有效量或抗动脉粥样硬化病症有效量。譬如，本发明的多种实施方式之一是一种联合疗法，其包括苯氧异丁酸类衍生物和CETP抑制剂的治疗剂量。
本发明的实施方式可以包括利用两种或多种此处所述或合并的治疗化合物的联合疗法。联合疗法可以包含两种或多种不同化学类型的治疗化合物，例如苯氧异丁酸类衍生物在治疗上可以与CETP抑制剂组合。治疗的联合形式可以包括两种以上的治疗化合物。譬如，该疗法可以包括苯氧异丁酸类衍生物、CETP抑制剂，和HMG CoA还原酶抑制剂的应用。另外，疗法可以包括两种或多种相同化学类型的治疗化合物，一种联合疗法包括两种或多种苯氧异丁酸衍生物或两种或多种CETP抑制剂。
本发明的另一实施方式包括任何本申请所述心血管联合疗法在高胆固醇血症、动脉粥样硬化或高脂血的预防或治疗中的应用。
下面的非限定实施例用以说明本发明的多个方面。c.实施例
表3举例说明本发明的联合形式的一些实施方式，其中所述联合形式包括第一计量的CETP抑制剂和第二计量的苯氧异丁酸类衍生物，其中所述第一计量和第二计量均包括所述化合物的抗高脂血症有效量和抗动脉粥样硬化病有效量。
表3.
实施例 成分1 成分2
1 C-1 氯贝丁酯
2 C-2 氯贝丁酯
3 C-3 氯贝丁酯
4 C-4 氯贝丁酯
5 C-5 氯贝丁酯
6 C-6 氯贝丁酯
7 C-7 氯贝丁酯
8 C-8 氯贝丁酯
9 C-9 氯贝丁酯
10 C-10 氯贝丁酯
11 C-11 氯贝丁酯
12 C-12 氯贝丁酯
13 C-13 氯贝丁酯
14 C-14 氯贝丁酯
15 C-15 氯贝丁酯
16 C-16 氯贝丁酯
17 C-17 氯贝丁酯
18 C-18 氯贝丁酯
19 C-19 氯贝丁酯
20 C-20 氯贝丁酯
21 C-1 非诺贝特
22 C-2 非诺贝特
23 C-3 非诺贝特
24 C-4 非诺贝特
25 C-5 非诺贝特
26 C-6 非诺贝特
27 C-7 非诺贝特
28 C-8 非诺贝特
29 C-9 非诺贝特
30 C-10 非诺贝特
31 C-11 非诺贝特
32 C-12 非诺贝特
33 C-13 非诺贝特
34 C-14 非诺贝特
35 C-15 非诺贝特
36 C-16 非诺贝特
37 C-17 非诺贝特
38 C-18 非诺贝特
39 C-19 非诺贝特
40 C-20 非诺贝特
41 C-1 环丙贝特
42 C-2 环丙贝特
43 C-3 环丙贝特
44 C-4 环丙贝特
45 C-5 环丙贝特
46 C-6 环丙贝特
47 C-7 环丙贝特
48 C-8 环丙贝特
49 C-9 环丙贝特
50 C-10 环丙贝特
51 C-11 环丙贝特
52 C-12 环丙贝特
53 C-13 环丙贝特
54 C-14 环丙贝特
55 C-15 环丙贝特
56 C-16 环丙贝特
57 C-17 环丙贝特
58 C-18 环丙贝特
59 C-19 环丙贝特
60 C-20 环丙贝特
61 C-1 苯扎贝特
62 C-2 苯扎贝特
63 C-3 苯扎贝特
64 C-4 苯扎贝特
65 C-5 苯扎贝特
66 C-6 苯扎贝特
67 C-7 苯扎贝特
68 C-8 苯扎贝特
69 C-9 苯扎贝特
70 C-10 苯扎贝特
71 C-11 苯扎贝特
72 C-12 苯扎贝特
73 C-13 苯扎贝特
74 C-14 苯扎贝特
75 C-15 苯扎贝特
76 C-16 苯扎贝特
77 C-17 苯扎贝特
78 C-18 苯扎贝特
79 C-19 苯扎贝特
80 C-20 苯扎贝特
81 C-1 吉非贝齐
82 C-2 吉非贝齐
83 C-3 吉非贝齐
84 C-4 吉非贝齐
85 C-5 吉非贝齐
86 C-6 吉非贝齐
87 C-7 吉非贝齐
88 C-8 吉非贝齐
89 C-9 吉非贝齐
90 C-10 吉非贝齐
91 C-11 吉非贝齐
92 C-12 吉非贝齐
93 C-13 吉非贝齐
94 C-14 吉非贝齐
95 C-15 吉非贝齐
96 C-16 吉非贝齐
97 C-17 吉非贝齐
98 C-18 吉非贝齐
99 C-19 吉非贝齐
100 C-20 吉非贝齐
101 C-1 克利贝特
102 C-2 克利贝特
103 C-3 克利贝特
104 C-4 克利贝特
105 C-5 克利贝特
106 C-6 克利贝特
107 C-7 克利贝特
108 C-8 克利贝特
109 C-9 克利贝特
110 C-10 克利贝特
111 C-11 克利贝特
112 C-12 克利贝特
113 C-13 克利贝特
114 C-14 克利贝特
115 C-15 克利贝特
116 C-16 克利贝特
117 C-17 克利贝特
118 C-18 克利贝特
119 C-19 克利贝特
120 C-20 克利贝特
121 C-1 比尼贝特
122 C-2 比尼贝特
123 C-3 比尼贝特
124 C-4 比尼贝特
125 C-5 比尼贝特
126 C-6 比尼贝特
127 C-7 比尼贝特
128 C-8 比尼贝特
129 C-9 比尼贝特
130 C-10 比尼贝特
131 C-11 比尼贝特
132 C-12 比尼贝特
133 C-13 比尼贝特
134 C-14 比尼贝特
135 C-15 比尼贝特
136 C-16 比尼贝特
137 C-17 比尼贝特
138 C-18 比尼贝特
139 C-19 比尼贝特
140 C-20 比尼贝特
生物学实验
通过下列实验可以显示出本发明的联合形式的实用性。这些实验是在体外和动物模型中进行，主要采用了显示本发明实用性的公认方法。化合物在H14细胞中抑制IBAT介导的[14C]-牛磺胆酸盐(TC)的摄取的体外试验(TC)
把用人体IBAT(H14细胞)的cDNA转染的幼仓鼠肾细胞(BHK)接种在96孔顶部计数(Top-Count)组织培养平板中，接种达到60,000细胞/孔可用于在接种的24小时内进行分析，达到30,000细胞/孔是用于在48小时内分析，和10,000细胞/孔用于在72小时内分析。
在试验当天，细胞单层轻轻用100μl试验缓冲液(Dulbecco改进的Eagle培养基和4.5g/L葡萄糖+0.2％(w/v)物脂肪酸牛血清白蛋白-(FAF)BSA)洗涤一次。向各孔中加入50μl试验化合物在试验缓冲液中的两倍浓缩物，同时加入50μl存在于试验缓冲液中的6μM[14C]-牛磺胆酸盐(终浓度为3M[14C]-牛磺胆酸盐)。把细胞培养平板在37℃下培养2小时，随后各孔轻轻用100μl 4℃的含有0.2％(w/v)(FAF)BSA的Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤两次。随后轻轻用不含有(FAF)BSA的100μl 4℃PBS洗涤一次。向各孔中加入200μl液体闪烁计数液，将平板热封，室温下振摇30分钟，随后在Packard顶部计数仪上测量各孔中放射性的量。化合物抑制[14C]-丙氨酸的摄取的体外实验
丙氨酸摄取试验是以和牛磺胆酸盐试验相同的方式进行，除了用标记丙氨酸代替标记牛磺胆酸盐。化合物抑制大鼠回肠[14C]-牛磺胆酸盐摄取进入胆汁的体内试验
(参见“3α，7β-二羟基-7α-甲基-5β-胆烷酸和3α，7β-二羟基-7α-甲基-5β-胆烷酸在仓鼠中的新陈代谢”Une等刊于Biochimica etBiophysica Acta 833，196-202(1985)，在此引入作为参考.)。
雄性Wistar大鼠(200-300g)用inactin@100mg/kg麻醉。向胆道中***长度10″的PE10管。暴露小肠并且摆在纱布垫上。插管(1/8″路厄氏锁(luer lock)，锥形雌性接合器)***距小肠和盲肠的接合点12cm处。在距同一接合点4cm处切出一条裂隙(利用长8cm的回肠)。用20ml热的Dulbecco磷酸盐缓冲盐水pH 6.5(PBS)冲洗肠节。远端开口***长20cm的聚硅氧烷管(0.02″I.D.x 0.037″O.D.)。近端插管钩在蠕动泵上，并且用热的PBS以0.25m；/分钟冲洗肠道20分钟。连续监测肠节的温度。试验开始时，用3ml注射器将2.0ml的对照样本([14C]-牛磺胆酸盐@0.05mCi/ml和5mM非放射标记牛磺胆酸盐)填充到肠节中并且开始收集胆汁样本。以0.25ml/分钟的速率注入对照样本21分钟。在该过程的首个27分钟内每3分钟收集一个胆汁样本的馏分。注入样本的21分钟后，回肠回路用20ml热的PBS(利用30ml注射器)冲洗，随后该回路用热的PBS、以0.25ml/分钟冲洗。按照上述方法开始第二次灌注，但这次灌注使用给药的试验化合物进行(给药21分钟，随后冲洗21分钟)并且在首个27分钟内每3分钟收集一次胆汁样本。如果必要，可进行第三次灌注，这次灌注一般含有对照样本。肝脏胆固醇(HEPATIC CHOL)浓度的测量
称重肝脏组织并且在氯仿∶甲醇(2∶1)中匀浆。匀浆和离心后分离出上清液并且在氮气下干燥。将残留物溶解在异丙醇中，通过酶促方法利用胆固醇氧化酶和过氧化物酶的组合物测定胆固醇含量，如Allain，C.A.等，Clin.Chem.，20，470(1974)(在此引入作为参考)所述。肝脏HMG CoA-还原酶活性(HMG COA)的测定
通过在磷酸盐/蔗糖缓冲液中匀浆肝脏样本、随后离心分离制得肝脏微粒体。将最后沉淀的物团重新悬浮在缓冲液中，通过在37℃、14C-HMG-CoA(Dupont-NEN)的存在下培养60分钟以便分析等份试样的HMG CoA还原酶活性。加入6N HCl终止反应，随后离心。利用薄层层析分离上清液的试样，刮下平板上相当于酶产物的斑点，提取且利用闪烁计数测定放射性(参考文献：Akerlund，J.and Bjorkhem，I.(1990)J.Lipid Res.31，2159)。血清胆固醇(SER.CHOL，HDL-CHOL，TGI和VLDL+LDL)的测定
利用Wako Fine Chemicals(Richmond，VA)；CholesterolC11(目录号Catalog No.276-64909)提供的市售试剂盒、采用酶促方法测量血清胆固醇(SER.CHOL)。使用相同的试剂盒、在用SigmaChemical Co.HDL胆固醇试剂(目录号352-3)沉淀VLDL和LDL之后(葡聚糖硫酸盐法)分析HDL胆固醇(HDL-CHOL)。总血清甘油三酯(空白)(TGI)是用Sigma Chemical Co.GPO-Trinder(目录号.337-B)通过酶促方法分析。由总的胆固醇和HDL胆固醇之差计算得到VLDL和LDL(VLDL+LDL)胆固醇浓度。肝脏胆固醇7-α-羟化酶活性(7a-OHase)的测量
通过在磷酸盐/蔗糖缓冲液中匀浆肝脏样本、随后离心分离制得肝脏微粒体。将最后沉淀的物团重新悬浮在缓冲液中，通过在37℃、于NADPH的存在下培养5分钟分析胆固醇7-α-羟化酶活性。随后提取到石油醚中，蒸发有机溶剂且将残余物溶解在乙腈/甲醇中。通过将等份的提取物注射在C18反相HPLC柱上来分离酶解产物，并且在240nm下UV检测定量分析洗脱物质(参考文献：Horton，J.D.，等(1994)J.Clin.Invest.93，2084)。粪便胆酸浓度(FBA)的测量
在24或48小时内收集单独圈养的仓鼠的全部粪便***物，在氮气流下干燥，粉碎和称重。称量出约0.1克，提取在有机溶剂(丁醇/水)中。随后分离和干燥，将残余物溶于甲醇中，利用3α-羟基胆固醇胆固醇脱氢酶反应通过酶促方法使胆酸还原为NAD测量出胆酸的含量(Mashige，F.等Clin.Chem..27，1352(1981)，在此引入作为参考)。兔子刷状缘膜囊(BBMV)中[3H]牛磺胆酸盐摄取
由冷冻回肠粘膜、按照Malathi等(Biochimica Biophysica Acta，554，259(1979)，在此引入作为参考)所述钙沉淀法制备兔子回肠刷状缘膜。除了分析体积是200μl而不是100μl，牛磺胆酸盐的测量方法基本上按照Kramer等(Biochimica Biophvsica Acta.1111，93(1992)，在此引入作为参考)所述方法进行。简单地说，室温下，令190μl含有2μM[3H]牛磺胆酸盐(0.75μCi)、20mM Tris、100mM NaCl、100mM甘露糖醇pH7.4的溶液和10μl刷状缘膜囊(60-120μg蛋白质)一起培养5秒。在涡流的同时加入BBMV引发该培养，通过加入5ml冰冷的缓冲液(20 mM Hepes-tris，150 mM KCl)终止该反应，随后立刻经尼龙滤膜(0.2μm)过滤并且用另外的5ml终止缓冲液冲洗。Acyl-CoA；胆固醇乙酰基转移酶(ACAT)
按照上述方法(J.Biol.Chem..255.9098(1980)，在此引入作为参考)且利用ACAT酶的原料由组织制备仓鼠肝脏和大鼠肠微粒体。试验将采用2.0ml的培养物，其中在50mM磷酸钠中含有24μM油酰基-CoA(0.05μCi)，2mM DTT pH 7.4缓冲液含有0.25％BSA和200μg微粒体蛋白。通过加入油酰基CoA引发该试验。反应在37℃下进行5分钟，加入8.0ml氯仿/甲醇(2∶1)终止该反应。向提取物中加入125μg存在于氯仿甲醇中的胆固醇油酸酯作为载体，在充分涡流后通过离心分离有机相和水相。干燥氯仿相，随后点在硅胶60TLC平板上，在己烷/乙酸乙酯(9∶1)中展开。通过点在TLC平板上的胆固醇油酸酯中掺杂放射性的量、利用Packard装置测定生成的胆固醇酯的量。用于评价降脂药物的狗模型
由卖主如Marshall farms获得体重6-12kg的雄性长耳短腿小猎犬，每天喂食一次，每次2小时并且随后获取水。将狗随机分配成分别由6-12只狗组成的给药组。譬如：赋形剂，i.g.(胃内)；1mg/kg，i.g.；2mg/kg，i.g.；4mg/kg，i.g.；2mg/kg，p.o.(粉末存在于胶囊内)。溶于水溶液中的治疗物质的胃内给药(例如0.2％吐温80溶液[聚氧化乙烯一油酸酯，Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO])可以利用饲管。在开始给药之前，可以在清晨进食之前由头侧静脉采集血样用来评估血清胆固醇(总胆固醇和HDL)和甘油三酯。在连续数天内，动物在清晨进食前给药。动物进食2个小时，随后取走剩余食物。在研究结束的2天内收集粪便，可以分析胆酸或脂质含量。在处理期结束时也采集血样，与研究之前的血清脂质水平比较。利用标准学生t试验测定显著性差异且p＜0.05。
狗血清脂质测量
由禁食狗的头侧静脉收集血液收集至血清分离器管(VacutainerSST，Becton Dickinson和Co.，Franklin Lakes，NJ)中。血液在2000rpm下离心20分钟并且倾析血清。
利用Wako酶诊断试剂盒(Cholesterol CII)(Wako Chemicals，Richmond，VA)、通过胆固醇氧化酶反应生成可用比色法测量的过氧化氢在96孔格板中测定总胆固醇。在平板的第一个两纵列中制备0.5至10μg胆固醇的标准曲线。将血清样本(20-40μl，取决于预期的脂质浓度)或已知的血清对照样本一式双份加入分开的孔中。加入水使各孔中的体积达到100μl。向各孔内加入100μl等份的着色试剂。37℃下培养15分钟后在500nm下读取平板。
HDL胆固醇可以利用Sigma试剂盒号352-3(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)分析，该试剂盒采用葡聚糖硫酸酯和Mg离子选择性沉淀LDL和VLDL。将体积为150μl的各种血清样本加入各个微免(microfuge)管中，随后加入15μl的HDL胆固醇试剂(Sigma 352-3)。将样本混合且在5000rpm下离心5分钟。随后将50μl等份上清液与200μl盐水混合，利用与总胆固醇测量相同的方法进行分析。
利用Sigma试剂盒号337在96孔平板格中测量甘油三酯。这种方法将测量出通过甘油三酯和脂蛋白酯酶的反应后释放出的甘油。用1-24μg的标准甘油溶液(Sigma 339-11)绘制标准曲线。将血清样本(20-40μl，取决于预期的脂质浓度)一式双份加入孔中。加入水使各孔中体积达到100μl。向各孔中肌肉100μl着色试剂。混合和培养15分钟后，在540nm下读取平板，由标准曲线计算出甘油三酯值。复制平板也利用空白酶试剂进行分析以修正血清样本中任何内源性甘油。狗粪便胆酸测量
收集粪便样本可以测定各动物的粪便胆酸(FBA)浓度。粪便收集是在研究的最后48小时内进行，也就是在每天给药和进食之前的上午9:00和10:00期间连续进行两个24小时。称量由各动物获得的单独两天的收集物，合并且在蒸馏水中、于处理机(Cuisinart)内均化得到匀浆。在37℃水浴中将约1.4g匀浆在终浓度为50％叔丁醇/蒸馏水(2∶0.6)中提取45分钟，在2000xg下离心13分钟。胆酸的浓度(mmoles/天)可以利用96孔酶分析体系(1，2)测定。将20μl等份的粪便提取物加入96孔分析平板中分别一式三份的孔中的两组孔内。另外，分析标准化牛磺胆酸钠溶液和标准化分别提取溶液(由合并样本预先制得并且对其胆酸浓度定性)用于定量对照。连续稀释得到标准曲线的20微升等份牛磺胆酸钠加入一式三份孔的两组中。向各孔中加入230μl反应混合物，该混合物含有1M水合肼、0.1M焦磷酸盐并且向各孔中加入0.46mg/ml NAD。将50μl等份的3α-羟基胆固醇脱氢酶(HSD；0.8单位/ml)或试验缓冲液(0.1M焦磷酸钠)加入一式三份的两组的一个中。所有试剂均可以得自Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO。随后室温下培养60分钟，测定340nm下的光密度，计算出各组一式三份样本的平均值。基于牛磺胆酸钠标准曲线，利用光密度±HSD酶之差可用来测定各样本的胆酸浓度(mM)。用提取物的胆酸浓度、粪便匀浆的重量(克)和动物的体重计算出相应的各动物的FBA浓度(mmoles/kg/天)，由各处理组的FBA浓度减去赋形剂组的平均FBA浓度(mmoles/kg/天)可以测定FBA浓度的增量(δ值)作为处理结果。人血浆中CETP活性试验(含氚胆固醇酯)
由健康志愿者获得血液。将血液收集在含有EDTA的管(EDTA血浆池)中。把预先储藏在20℃下的EDTA人体血浆池在室温下融化，离心5分钟除去任何微粒物。将按照Morton和Zilversmit(J.Biol.Chem.，256，11992-95(1981))所述胆固醇酯部分经放射标记的([3H]CE HDL)的含氚HDL加入血浆中达到终浓度(25μg/ml胆固醇)。按照下列方法向血浆加入抑制剂化合物：用移液管将等体积的含[3H]CE-HDL(396μl)的血浆加入微量管(Titertube，Bio-Radlaboratories，Hercules，CA)中。化合物一般溶解在DMSO中成为20-50mM储备液，将化合物在DMSO中连续稀释(或在某些情况中是另一种溶剂，如二甲基甲酰胺或乙醇)。随后将5μl的各种抑制剂化合物的连续稀释液和单独的DMSO加入各血浆管内。立刻混合管子。将各血浆管中一式三份的等份试样转移到96孔圆底聚苯乙烯微量滴定平板(Corning，Corning，NY)。平板用塑料膜密封，在37℃下培养4小时。试验孔含有血浆和抑制剂化合物的稀释液。对照孔含有血浆和单独的DMSO。空白孔含有血浆和单独的DMSO，空白孔在4℃的微量管中培养4小时且在培养结束时加入微量滴定孔中。通过向所有孔中加入10μl沉淀试剂(1％(w/v)葡聚糖硫酸酯(Dextralip50)/0.5M氯化镁，pH 7.4)沉淀VLDL和LDL。孔在平板混合器上混合，随后室温下培养10分钟。此后10℃下在1000xg下离心平板30分钟。进而将由各孔获得的上清液(50μl)转移到PicoplateTM96平板孔(Packard，Meriden，CT)，其中含有250：1 MicroscintTM-40(Packard，Meriden，CT)。按照制造商的说明将平板热封(TopSealTM-P，Packard，Meriden，CT)且混合30分钟。在微量平板闪烁计数器(TopCount，Packard，Meriden，CT)上测定放射性。IC50值为抑制剂化合物与对照孔获得的转移比较抑制50％[3H]CE由上清液[3H]CE-HDL转移到沉淀VLDL和LDL时的浓度。利用下列公式计算最大百分转移率(以对照孔计)：
Figure A9981614900361
在含有抑制剂化合物孔中测定的对照转移百分比计算如下：
Figure A9981614900362
由绘制的％对照-抑制剂化合物浓度的曲线计算出IC50。CETP的体外活性
利用测定放射标记胆固醇酯([3H]CE)自HDL供体微粒向LDL受体微粒的转移速率的体外试验来评价化合物抑制CETP活性的能力。试验的详细情况由Glenn等提供(Glenn和Melton，″胆固醇酯转移蛋白(CETP)的定量分析：A)CETP活性和B)CETP蛋白的免疫化学试验″Meth.Enzvmol.，263，339-351(1996))。CETP可以得自用cDNA转染CETP的CHP细胞的无血清条件培养基(Wang，S.等J.Biol.Chem.267，17487-17490(1992))。为了测量CETP活性，[3H]CE-标记的HDL、LDL、CETP和试验缓冲液(50mM三(羟甲基)氨基甲醇，pH 7.4；150mM氯化钠；2mM以乙二胺四乙酸；1％牛血清白蛋白)在37℃下以200μl的体积、于96孔平板中培养2小时。加入50μl的1％(w/v)葡聚糖硫酸酯/0.5M氯化镁可以特异性地沉淀出LDL，利用涡流混合，室温下培养10分钟。将该溶液(200μl)转移到过滤平板(微孔)。过滤后，利用液体闪烁计数测量沉淀LDL中存在的放射性。利用不含有CETP的样本对非特异转移或沉淀进行修正。利用这种方法测定的[3H]CE转移速率相对于时间和CETP浓度而言为线性，转移的[3H]CE最多达25-30％。
利用上述试验、在不同浓度试验化合物的存在下可以测定出试验化合物的效价，并且测定出抑制半数[3H]CE由HDL向LDL的转移所需的浓度。该值定义为IC50。当IC50大于10nM时，由该试验测定的IC50值十分精确。在其中化合物具有较高抑制效价的情况中，利用较长的培养时间(长达18小时)和较低的CETP浓度(＜50nM)可以测定出IC50的准确量度。CETP体内活性的抑制
通过静脉内注射或口饲管给动物施用化合物，测量氚标记胆固醇酯([3H]CE)由HDL转移至VLDL和LDL微粒的量，并且对比该转移量和由对照动物中观察的转移量可以测出试验化合物对CETP活性的抑制。
在研究之前，雄性金色叙利亚仓鼠接受含有0.24％胆固醇的食物至少2周。对于接受静脉内给药的动物，试验开始之前立刻用戊巴比妥麻醉动物。整个试验维持麻醉。将内置插管***颈静脉和颈动脉中。在试验开始时，动物接受0.2ml含有[3H]CE-HDL的溶液进入颈静脉中。[3H]CE-HDL是含有氚标记胆固醇酯的人HDL的制剂，并且按照Glenn等(Meth.Enzymol.，263，339-351(1996))所述方法制备。将试验化合物溶解在赋形剂(2％乙醇：98％PEG 400，SigmaChemical Company，St.Louis，Missouri，USA)中成为80mM储备液，通过快速浓注或连续输注给药。[3H]CE-HDL剂量给药2分钟后，动物接受0.1ml注射到颈静脉中的试验溶液。对照动物静脉内接受0.1ml不含有试验化合物的赋形剂溶液。5分钟后，由颈动脉采集第一个血样(0.5ml)并且收集在标准微量(microtainer)管中，管内含有乙二胺四乙酸。用注射盐水(0.5ml)冲洗插管并且置换血液体积。随后利用相同方法在2小时和4小时时采集血样。充分混合血样，保存在冰中制止试验完成。4℃下离心血样得到血浆。用5μl沉淀试剂(葡聚糖硫酸酯，10g/l；0.5M氯化镁)处理血浆(50μl)除去VLDL/LDL。离心后，利用液体闪烁计数器分析所得含有HDL的上清液(25μl)的放射性。
基于沉淀前当量血浆样本的总放射性计算出[3H]CE由HDL转移至LDL和VLDL(％转移)的百分率。通常，对照动物中由HDL转移LDL和VLDL的量在4小时后应为20％至35％。
另外，有意识、未麻醉动物可以接受口腔管饲剂量的试验化合物混悬液，该混悬液存在于含0.1％甲基纤维素的水中。在测定各化合物口服给药后试验物质的血浆水平达到其峰值(Cmax)的时候，用戊巴比妥麻醉动物，随后按照上述方法将0.2ml含有[3H]CE-HDL的溶液给药至颈静脉中。对照动物通过口腔饲管接受0.25ml不含有试验化合物的赋形剂溶液。4小时后，处死动物，收集血样，按照上述方法测定[3H]CE由HDL转移到LDL和VLDL的百分率(％转移)。
另外，试验化合物对CETP活性的抑制可以通过给小鼠施用化合物来测定，选择的小鼠是通过转基因处理来表达人CETP(hCETP)的小鼠(hCETP小鼠)。试验化合物可以通过静脉内注射或口腔管饲法给药，并且测定氚标记胆固醇酯([3H]CE)由HDL向VDL和LDL微粒转移的量，并且与在对照动物中观察到的转移量对比。在研究之前，纯合hCETP基因的C57B1/6小鼠持续接受高脂肪饮食如TD 88051至少两周，如Nishina等(J Lipid Res.，31，859-869(1990))所述。小鼠接受口腔管饲剂量的试验化合物混悬液，该混悬液存在于含0.1％甲基纤维素的水中，或给予试验化合物在10％乙醇和90％聚乙二醇中的静脉内快速浓注注射剂。对照动物通过口腔饲管或静脉内快速浓注接受不含有试验化合物的赋形剂溶液。试验开始时，动物接受含有0.05ml[3H]CE-HDL的溶液进入尾静脉。[3H]CE-HDL应是一种含氚标记胆固醇酯、按照Glenn等的方法制备(Meth.Enzymol.，263，339-351(1996))的人HDL制剂。30分钟后，将动物放血并且把血液收集在标准微量管中，管内含有乙二胺四乙酸。充分混合血样，保存在冰中制止试验完成。通过在4℃下离心血样得到血浆。分离血浆，利用凝胶过滤色谱法分析，测定出[3H]CE在VLDL、LDL和HDL区域中的相对比例。
基于沉淀前当量血浆样本的放射性，计算出[3H]CE由HDL转移至LDL和VLDL(％转移)的百分比。通常，在30分钟后对照动物中由HDL转移至LDL和VLDL的量为20％至35％。肠内胆固醇吸收试验
多种化合物显示出对肠道胆固醇吸收的抑制。这些化合物通过减少肠道对外源性(食物胆固醇)和内源性胆固醇(由胆囊分泌到肠道内)的胆固醇的吸收来降低血清胆固醇水平。
在仓鼠中，利用二元同位素血浆比例法测量肠道胆固醇吸收并且按照Turley等所述方法评价(J.Lipid Res.35，329-339(1994)，在此引入作为参考)。
重量80-100g的雄性仓鼠在具有12小时交替光照和黑暗期的室内接受食物和水。光照期4小时后，各个仓鼠首次接受2.5μCi[1，2-3H]胆固醇的静脉内给药，该胆固醇悬浮在Intralipid(20％)中，随后接受[4-14C]胆固醇的口服给药，该胆固醇存在于中链甘油三酯(MCT)的油中。静脉内给药是通过将体积0.4ml的Intralipid混合物注射至远侧股静脉。利用聚乙烯管通过管饲0.6ml体积的MCT油混合物口服给药到胃内。72小时后，由仓鼠取血，并且通过液体闪烁光谱测定法测定血浆中3H和14C的量和所施用标记的初始量。胆固醇吸收基于以下公式计算：
吸收胆固醇的百分比＝
Figure A9981614900391
微粒体甘油三酯转移蛋白(MTP)试验：
利用Ohringer等所述标准方法(Acta Crystallogr.D52，224225(1996)，在此引入作为参考)可以由肝组织或培养细胞(例如HepG2细胞)纯化MTP。
随后的MTP活性的分析可以按照Jamil等(Proc.Natl.Acad.Sci.93，11991-11995(1996)，在此引入作为参考)进行。
该试验的基础是测定标记甘油三酯由总的供体囊在MTP存在下向总的受体囊的转移。通过在引入MTP之前加入混合物中可以评价MTP的抑制剂。通过超声处理卵磷脂、心磷脂、3H标记磷脂和14C标记甘油三酯的含水混合物可以制备供体囊。受体囊是通过超声处理卵磷脂的含水混合物制成。将加入或未加入MTP抑制剂的囊溶液混合在一起，加入MTP引发转移反应。60分钟后通过加入0.5ml的DE-52纤维素终止该试验，随后离心沉淀出供体分子。利用液体闪烁光谱测定法测定沉淀中和初始量标记中的3H和14C量。基于一级动力学、利用以下表达法计算出脂质转移率：
[S]＝[S]0e-kt其中[S]0和[S]是14C标记物分别在0和t时在供体膜沉淀中的分数，术语k是每单位时间转移的标记物的分数。兔子中血浆脂质试验
按照R.Schuh等，J.Clin.Invest.91，1453-1458(1993)(在此引入作为参考)的报导、利用标准方法测定血浆脂质。多组的雄性、新西兰白兔接受标准饮食(100g/天)，食物中补充有0.3％胆固醇和2％玉米油(Zeigler Bothers，Inc.，-Gardners，PA)。兔子随意获取水。处理1和3个月后处死对照和处理动物的组。取出组织且对动脉粥样硬化损害定性。采集血样测定血脂浓度。
血浆脂质
由耳静脉采集血液至含EDTA的管(Vacutainer；BectonDickenson & Co.，Rutherford，NJ)中随后离心分离细胞可以获得脂质分析用的血浆。通过酶促方法、利用胆固醇氧化酶反应测定总胆固醇(C.A.Allain等，Clin.Chem.，20，470-475(1974)，在此引入作为参考)。在利用葡聚糖硫酸酯和镁选择性沉淀LDL和VLDL后，通过酶促方法测定HDL胆固醇(G.R.Warnick等，Clin.Chem.，28，1379-1388(1982)，在此引入作为参考)。通过测定由脂蛋白酯酶、经酶联试验释放的甘油量可以测出血浆甘油三酯水平(G.Bucolo等，Clin.Chem.19.476-482(1973)，在此引入作为参考)。
动脉粥样硬化
注射戊巴比妥处死动物。迅速取出胸主动脉，浸渍固定在10％中性缓冲***中，用油红0(0.3％)染色。在沿动脉开口相反的侧壁作一条纵向切口之后，将血管钉住以评价(硬化)斑面积。由被检查的总面积和染色面积通过阈值法、利用真色(true color)成像分析器(Videometric 150；American Innovision，Inc.，San Diego，CA)测定出斑覆盖百分率，该分析器与彩色照相机界面接触(Toshiba3CCD)，该照相机带有解剖显微镜。按照Folch等(J.Biol.Chem.，226，497-509(1957)，在此引入作为参考)所述方法用氯仿/甲醇(2∶1)提取后，通过上述酶促方法测定组织胆固醇。
体外血管反应
在注射戊巴比妥钠后，迅速切取腹部主动脉，置于充氧Krebs碳酸氢钠缓冲液中。除去血管周围组织后，切出3mm的环状段，置于37℃的含有Krebs碳酸氢钠缓冲液的肌肉浴中，并且悬挂在不锈钢线之间，一根不锈钢线和应力传感器(Grass Instrument Co.，Quincy，MA)相连。对加入该浴中的血管紧张素II的应力变化将记录在图表记录仪上。
通过更换概括或具体描述的治疗化合物或上述实施例所用惰性组分可以进行本申请的实施例。
根据本发明所述，显然同样的方案可以以多种方式变化。这些改变不脱离本发明的实质和范围，并且所有改进和等效方案对于所属领域技术人员而言是显而易见的，包含在下面的权利要求书的范围内。

Claims (12)

1.一种治疗联合形式，其中含有第一计量的苯氧异丁酸类衍生化合物和第二计量的胆固醇酯转移蛋白抑制化合物，其中所述第一计量和第二计量均含有抗高脂血症有效量、抗动脉粥样硬化症有效量或抗高胆固醇血症有效量的所述化合物。
2.权利要求1的治疗联合形式，其中苯氧异丁酸类衍生化合物含有氯贝丁酯。
3.权利要求1的治疗联合形式，其中苯氧异丁酸类衍生化合物含有非诺贝特。
4.权利要求1的治疗联合形式，其中苯氧异丁酸类衍生化合物含有环丙贝特。
5.权利要求1的治疗联合形式，其中苯氧异丁酸类衍生化合物含有苯扎贝特。
6.权利要求1的治疗联合形式，其中苯氧异丁酸类衍生化合物含有吉非贝齐。
7.权利要求1的治疗联合形式，其中苯氧异丁酸类衍生化合物含有克利贝特。
8.权利要求1的治疗联合形式，其中苯氧异丁酸类衍生化合物含有比尼贝特。
9.权利要求1的治疗联合形式，其中该联合形式包括一种组合物，该组合物含有苯氧异丁酸类衍生化合物和胆固醇酯转移蛋白抑制化合物。
10.一种预防或治疗高脂血症的方法，该方法包括给需要的患者施用单位剂型的联合形式，其中该联合形式含有第一计量的苯氧异丁酸类衍生化合物和第二计量的胆固醇酯转移蛋白抑制化合物，其中所述第一计量和第二计量均包括抗高脂血症有效量的所述化合物。
11.一种预防或治疗动脉粥样硬化症的方法，该方法包括给需要的患者施用单位剂型的联合形式，其中该联合形式含有第一计量的苯氧异丁酸类衍生化合物和第二计量的胆固醇酯转移蛋白抑制化合物，其中所述第一计量和第二计量均包括抗动脉粥样硬化症有效量的所述化合物。
12.一种预防或治疗高胆固醇血症的方法，该方法包括给需要的患者施用单位剂型的联合形式，其中该联合形式含有第一计量的苯氧异丁酸类衍生化合物和第二计量的胆固醇酯转移蛋白抑制化合物，其中所述第一计量和第二计量均包括抗高胆固醇血症有效量的所述化合物。
CN99816149A 1998-12-23 1999-12-17 用于心血管适应症的胆固醇酯转移蛋白抑制剂和苯氧异丁酸类衍生物的联合形式 Pending CN1338944A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11395598P 1998-12-23 1998-12-23
US60/113,955 1998-12-23
US14261699P 1999-07-07 1999-07-07
US60/142,616 1999-07-07

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1338944A true CN1338944A (zh) 2002-03-06

Family

ID=26811677

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN99816149A Pending CN1338944A (zh) 1998-12-23 1999-12-17 用于心血管适应症的胆固醇酯转移蛋白抑制剂和苯氧异丁酸类衍生物的联合形式

Country Status (23)

Country Link
US (2) US6458850B1 (zh)
EP (2) EP1340509A1 (zh)
JP (1) JP2002533410A (zh)
KR (1) KR20010099937A (zh)
CN (1) CN1338944A (zh)
AT (1) ATE242009T1 (zh)
AU (1) AU776664B2 (zh)
BR (1) BR9916485A (zh)
CA (1) CA2356157C (zh)
CZ (1) CZ20012341A3 (zh)
DE (1) DE69908645T2 (zh)
DK (1) DK1140186T3 (zh)
EA (2) EA004231B1 (zh)
ES (1) ES2201827T3 (zh)
HK (2) HK1040925B (zh)
HU (1) HUP0400886A2 (zh)
IL (1) IL143949A0 (zh)
MX (1) MXPA01006469A (zh)
NO (1) NO20013158L (zh)
NZ (1) NZ512534A (zh)
PL (1) PL348503A1 (zh)
PT (1) PT1140186E (zh)
WO (1) WO2000038724A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1891823B (zh) * 2005-07-05 2011-03-30 北京诺赛基因组研究中心有限公司 具有特定单核苷酸多态性的cetp基因及其检测方法和用途

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL161741A0 (en) * 2001-11-09 2005-11-20 Atherogenics Inc Methods of reversing and preventingcardiovascular pathologies
EP1603554A1 (en) 2003-03-17 2005-12-14 Japan Tobacco Inc. Method for increasing the oral bioavailability of s-[2-([[1-(2-ethylbutyl)cyclohexyl]carbonyl]amino)phenyl]-2-methylpropanethioate
US7264813B2 (en) * 2003-09-24 2007-09-04 Nikken Sohonsha Corporation Therapeutic uses of Dunaliella powder
SG146695A1 (en) 2003-09-26 2008-10-30 Japan Tobacco Inc Method of inhibiting remnant lipoprotein production
DK1809759T3 (da) 2004-10-06 2014-01-06 Brigham & Womens Hospital Relevans af opnåede niveauer af markører for systemisk inflammation efter behandling
BRPI0621942A2 (pt) 2006-08-04 2011-10-18 Aska Pharm Co Ltd preparação que reduz uma concentração de um ácido graxo livre e/ou fibrinogênio no sangue, agente para redução da quantidade de um ácido graxo livre no sangue, agente para redução da quantidade de fibrinogênio no sangue, método de prevenção ou tratamento de hiper-acidemia de ácido graxo livre, sìndrome metabólica, diabetes tipo ii, complicações causadas por diabetes tipo ii, lipotoxicidade, metabolismo anormal de lipìdeos, intoleráncia à glicose, secreção prejudicada de insulina, gordura hepática, lipoproteinemia de hipo-alta densidade, ou trombose, e uso de uma preparação
JP2012171911A (ja) 2011-02-22 2012-09-10 Kao Corp Ｐｐａｒ活性化剤
US9724336B2 (en) * 2011-11-30 2017-08-08 Daewoong Pharmaceutical Co., Ltd. Pharmaceutical composition for preventing or treating hyperlipidemia
US11266395B2 (en) 2014-06-17 2022-03-08 Ganihand, LLC Devices and methods to provide hands free scleral depression during ophthalmic procedures
TWI691331B (zh) * 2014-09-26 2020-04-21 日商興和股份有限公司 脂質異常症治療劑

Family Cites Families (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB860303A (en) 1958-06-20 1961-02-01 Ici Ltd Pharmaceutical compositions comprising ª‡-aryloxy-aliphatic carboxylic acids and/or ª
US3253157A (en) 1963-02-08 1966-05-24 Robotron Corp Timing circuit for actuating a load in accurate relationship to two inputs
US3389144A (en) 1965-06-08 1968-06-18 Mcneilab Inc 5-pyridyl-2, 3, 4, 5-tetrahydrobenzothiepin-5-ols
US3287370A (en) 1965-06-08 1966-11-22 Mcneilab Inc Tetrahydrobenzothiepins
DE1593760A1 (de) 1967-02-01 1972-06-08 Boehringer Sohn Ingelheim Verfahren zur Herstellung neuer Benz-epinderivate
US3444176A (en) 1967-04-28 1969-05-13 Mcneilab Inc Certain 4-diloweralkylamino-lower alkyl - 5 - pyridyl (or phenyl)-2,3-dihydro - 1 - benzothiepins and derivatives thereof
US3674836A (en) 1968-05-21 1972-07-04 Parke Davis & Co 2,2-dimethyl-{11 -aryloxy-alkanoic acids and salts and esters thereof
US4058552A (en) 1969-01-31 1977-11-15 Orchimed Sa Esters of p-carbonylphenoxy-isobutyric acids
FR2077733B1 (zh) 1970-02-10 1973-03-16 Roussel Uclaf
US3694446A (en) 1970-02-24 1972-09-26 William J Houlihan 5-(substituted-benzyl)-benzocycloheptenes and-1-benzthiepines
US3692895A (en) 1970-09-08 1972-09-19 Norman A Nelson Method of reducing hypercholesteremia in humans employing a copolymer of polyethylenepolyamine and a bifunctional substance, such as epichlorohydria
DE2230383C3 (de) 1971-10-01 1981-12-03 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Phenoxyalkylcarbonsäurederivate und Verfahren zur Herstellung derselben
US4002750A (en) 1972-04-28 1977-01-11 Carlo Erba S.P.A. Pyrazine 4-oxide derivatives and process for their preparation
US3948973A (en) * 1972-08-29 1976-04-06 Sterling Drug Inc. Halocyclopropyl substituted phenoxyalkanoic acids
DE2338394C2 (de) 1973-07-28 1975-05-22 Daimler-Benz Ag, 7000 Stuttgart Kupplungsscheibe für Kraftfahrzeug- Hauptkupplungen
US3962261A (en) 1974-02-04 1976-06-08 Warner-Lambert Company 2,3,4,5-tetra hydro-5-oxo-1-benzothiepi n-4-carboxamide 1,1-dioxides
FR2260569B1 (zh) 1974-02-08 1978-06-16 Ugine Kuhlmann
JPS5612114B2 (zh) 1974-06-07 1981-03-18
SE420725B (sv) 1974-09-26 1981-10-26 Ciba Geigy Ag Sett att framstella 2,3-dihydro-1-benstiepin-4-karboxylsyraamider
US4251526A (en) 1977-10-31 1981-02-17 Mccall John M 2-Benzothiepins and compositions and methods of use therefore
US4231938A (en) 1979-06-15 1980-11-04 Merck & Co., Inc. Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation
DE2928096A1 (de) 1979-07-12 1981-02-05 Basf Ag Magnetischer aufzeichnungstraeger
AU548996B2 (en) 1980-02-04 1986-01-09 Merck & Co., Inc. Tetrahydro-2h-pyran-2-one derivatives
US4444784A (en) 1980-08-05 1984-04-24 Merck & Co., Inc. Antihypercholesterolemic compounds
MX7065E (es) 1980-06-06 1987-04-10 Sankyo Co Un procedimiento microbiologico para preparar derivados de ml-236b
AU548253B2 (en) 1981-05-11 1985-12-05 Pierre Fabre S.A. Benzoxepine derivatives and sulphur and nitrogen analogues thereof
US5354772A (en) 1982-11-22 1994-10-11 Sandoz Pharm. Corp. Indole analogs of mevalonolactone and derivatives thereof
FI77669C (fi) 1983-04-13 1989-04-10 Ciba Geigy Ag 20-spiroxaner och analoger, som innehaoller en oeppen ring e, foerfarande foer deras framstaellning samt dessa innehaollande farmaceutiska preparat.
CA1247547A (en) 1983-06-22 1988-12-28 Paul Hadvary Leucine derivatives
EP0244364A3 (en) 1986-04-30 1992-04-01 Sandoz Ag Preparation of olefinic compounds
AU597671B2 (en) 1986-06-20 1990-06-07 Suntory Limited 2-Phenylbenzoxepin derivative
KR890701581A (ko) 1987-08-19 1989-12-21 제임스 제이.플라인 설포닐우레아 염의 제조방법
DE3835291A1 (de) 1988-04-19 1989-11-02 Bayer Ag 1,3-disubstituierte pyrrolidine
US5158943A (en) 1988-11-21 1992-10-27 Takeda Chemical Industries, Ltd. Sulfur-containing heterocyclic compounds
DE3901527A1 (de) 1989-01-20 1990-07-26 Hoechst Ag Alkylierte polyethyleniminderivate, verfahren zu ihrer herstellung, ihre verwendung als arzneimittel sowie pharmazeutische praeparate
FI94339C (fi) 1989-07-21 1995-08-25 Warner Lambert Co Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisen /R-(R*,R*)/-2-(4-fluorifenyyli)- , -dihydroksi-5-(1-metyylietyyli)-3-fenyyli-4-/(fenyyliamino)karbonyyli/-1H-pyrroli-1-heptaanihapon ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi
DE3930696A1 (de) 1989-09-14 1991-03-28 Hoechst Ag Gallensaeurederivate, verfahren zu ihrer herstellung, verwendung als arzneimittel
US5153184A (en) 1989-10-10 1992-10-06 Dowelanco ((N-heterocyclyl)carbonyl)phosphoramidothioate ester insecticides
US5075293A (en) 1989-10-10 1991-12-24 The Dow Chemical Company ((N-heterocyclyl)carbonyl)phosphoramidothioate ester insecticides
GB8926560D0 (en) 1989-11-24 1990-01-17 Zambeletti Spa L Pharmaceuticals
FR2661676A1 (fr) 1990-05-02 1991-11-08 Lipha Derives d'amino benzocycloalcanes, procedes de preparation et medicaments les contenant.
WO1992017467A1 (en) 1991-04-06 1992-10-15 Dr Lo. Zambeletti S.P.A. Substituted azacyclic compounds, process for their preparation and their use as analgesics
JPH0825973B2 (ja) 1991-04-12 1996-03-13 シェリング・コーポレーション アシル補酵素ａ：コレステロールアシルトランスフェラーゼの阻害剤としての二環式アミド
AU1532492A (en) 1991-04-18 1992-11-17 Dr. Lo Zambeletti S.P.A. Use of heterocyclic compounds for the treatment of inflammatory pain
PL166991B1 (pl) 1991-05-03 1995-07-31 Raision Margariini Oy Sposób wytwarzania substancji obnizajacej poziom cholesterolu w surowicy krwi PL PL PL
EP0526402B1 (en) 1991-07-30 1998-01-21 Novartis AG Heteroaryl substituted hydroxylamine derivatives as lipoxygenase inhibitors
US5334600A (en) 1991-07-30 1994-08-02 Ciba-Geigy Corporation Isoquinolyl substituted hydroxylamine derivatives
US5350761A (en) 1991-07-30 1994-09-27 Ciba-Geigy Corporation Indolyl substituted hydroxylamine derivatives
US5260316A (en) 1991-07-30 1993-11-09 Ciba-Geigy Corporation Isoquinolyl substituted hydroxylamine derivatives
US5356897A (en) 1991-09-09 1994-10-18 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. 3-(heteroaryl)-pyrazololi[1,5-a]pyrimidines
EP0534316A1 (de) 1991-09-21 1993-03-31 Hoechst Aktiengesellschaft Verwendung von alkylierten Polyethyleniminderivaten zur Anreicherung von Gallensäuren
US5519001A (en) 1991-12-19 1996-05-21 Southwest Foundation For Biomedical Research CETP inhibitor polypeptide antibodies against the synthetic polypeptide and prophylactic and therapeutic anti-atherosclerosis treatments
AU664059B2 (en) 1991-12-20 1995-11-02 Hoechst Aktiengesellschaft Ethylenically unsaturated bile acid derivatives, processes for their preparation and precursors
FI925734A (fi) 1991-12-20 1993-06-21 Hoechst Ag Polyaspartamidderivat som adsorptionsmedel foer gallsyra, polyaspartamidderivat innehaollande gallsyror och foerfarande foer framstaellning av dessa samt anvaendning av dessa som laekemedel
DE59205695D1 (de) 1991-12-20 1996-04-18 Hoechst Ag Polymere und Oligomere von Gallensäurederivaten, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
US5244887A (en) 1992-02-14 1993-09-14 Straub Carl D Stanols to reduce cholesterol absorption from foods and methods of preparation and use thereof
GB9203347D0 (en) 1992-02-17 1992-04-01 Wellcome Found Hypolipidaemic compounds
EP0559064B1 (de) 1992-02-29 2001-05-23 Aventis Research & Technologies GmbH & Co. KG Komplexe enthaltend Glykosyl-Phosphatidylinositol-Proteine und Cholansäurederivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
DK0563731T3 (da) 1992-03-28 1996-03-18 Hoechst Ag Lægemidler indeholdende polyhydromethylenderivater, fremgangsmåde til deres fremstilling og deres anvendelse
ATE307795T1 (de) 1992-04-22 2005-11-15 Ligand Pharm Inc Verbindungen mit retinoid x rezeptorselektivität
CA2093577C (en) 1992-05-07 2006-01-03 Michael Klaus Alkyl or alkoxy substituted s-heterocyclic retinoids
FR2698873B1 (fr) 1992-12-07 1995-02-24 Lipha Benzocycloheptènes, benzoxépines et benzothiépines activateurs des canaux potassiques, procédé de préparation, composition pharmaceutique les contenant.
WO1994009774A1 (en) * 1992-10-26 1994-05-11 Merck & Co., Inc. Biologically active compounds and process therefor
US5703165A (en) 1992-12-18 1997-12-30 Saynad Corporation Method of achieving superior dispersions of insoluble sulfur and products thereof
IL108634A0 (en) 1993-02-15 1994-05-30 Wellcome Found Hypolipidaemic heterocyclic compounds, their prepatation and pharmaceutical compositions containing them
IL108633A (en) 1993-02-15 1998-07-15 Wellcome Found History of Benzothiazepine Hypolipidemic Preparation and Pharmaceutical Preparations Containing Them
DE69411243T2 (de) 1993-04-16 1998-11-19 Shionogi & Co Verfahren zur herstellung eines lignan-derivats
TW289021B (zh) 1993-05-08 1996-10-21 Hoechst Ag
TW289020B (zh) 1993-05-08 1996-10-21 Hoechst Sktiengesellschaft
EP0624593A3 (de) 1993-05-08 1995-06-07 Hoechst Ag Gallensäurederivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verwendung dieser Verbindungen als Arzneimittel.
US5703188A (en) * 1993-06-02 1997-12-30 Geltex Pharmaceuticals, Inc. Process for removing bile salts from a patient and compositions therefor
US5631365A (en) 1993-09-21 1997-05-20 Schering Corporation Hydroxy-substituted azetidinone compounds useful as hypocholesterolemic agents
IT1273751B (it) 1994-02-11 1997-07-10 Smithkline Beecham Farma Derivati azaciclici
ZA956647B (en) 1994-08-10 1997-02-10 Wellcome Found Hypolipidaemic compounds.
ATE199718T1 (de) 1994-09-13 2001-03-15 Monsanto Co Benzothepines mit wirkung als inhibitoren des gallensäuretransports und der taurocholate- aufnahme
US5994391A (en) 1994-09-13 1999-11-30 G.D. Searle And Company Benzothiepines having activity as inhibitors of ileal bile acid transport and taurocholate uptake
US5705524A (en) 1994-11-04 1998-01-06 Gilead Sciences, Inc. Thiepane compounds
US6034118A (en) 1994-11-04 2000-03-07 Gilead Sciences, Inc. Thiepane compounds
GB9423172D0 (en) 1994-11-17 1995-01-04 Wellcom Foundation The Limited Hypolipidemic benzothiazepines
WO1996040255A2 (en) 1995-06-07 1996-12-19 G.D. Searle & Co. Method to treat cardiofibrosis with a combination therapy of an angiotensin ii antagonist and an epoxy-steroidal aldosterone antagonist
AU715762B2 (en) 1995-07-21 2000-02-10 Nycomed Austria Gmbh Derivatives of benzosulphonamides as inhibitors of the enzyme cyclooxygenase II
GB2305665A (en) 1995-09-26 1997-04-16 Merck & Co Inc Selective ß3 agonists for the treatment of diabetes aand obesity
DE19610932A1 (de) 1996-03-20 1997-09-25 Bayer Ag 2-Aryl-substituierte Pyridine
EP0801060A1 (en) 1996-04-09 1997-10-15 Pfizer Inc. Heterocyclic Beta-3 Adrenergenic Agonists
DE19627430A1 (de) 1996-07-08 1998-01-15 Bayer Ag Bicyclisch kondensierte Pyridine
DE19627431A1 (de) 1996-07-08 1998-01-15 Bayer Ag Heterocyclisch kondensierte Pyridine
HRP970330B1 (en) 1996-07-08 2004-06-30 Bayer Ag Cycloalkano pyridines
US6066653A (en) * 1997-01-17 2000-05-23 Bristol-Myers Squibb Co. Method of treating acid lipase deficiency diseases with an MTP inhibitor and cholesterol lowering drugs
EP0864582B1 (en) 1997-03-14 2003-06-04 Aventis Pharma Deutschland GmbH Hypolipidemic 1,4-benzothiazepine-1,-dioxides
JPH10287662A (ja) 1997-04-08 1998-10-27 Kitasato Inst:The Ｆｏ−５６３７ａ物質及びｂ物質並びにそれらの製造法
US5929062A (en) 1997-06-19 1999-07-27 University Of Western Ontario Oxysterol inhibition of dietary cholesterol uptake
WO1999014204A1 (en) * 1997-09-16 1999-03-25 G.D. Searle & Co. Substituted 1,2,4-triazoles useful for inhibiting cholesteryl ester transfer protein activity
GB2329334A (en) 1997-09-18 1999-03-24 Reckitt & Colmann Prod Ltd Cholesterol-lowering agents
DE19916108C1 (de) * 1999-04-09 2001-01-11 Aventis Pharma Gmbh Mit Zuckerresten substituierte 1,4-Benzothiazepin-1,1-dioxidderivate, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1891823B (zh) * 2005-07-05 2011-03-30 北京诺赛基因组研究中心有限公司 具有特定单核苷酸多态性的cetp基因及其检测方法和用途

Also Published As

Publication number Publication date
EP1340509A1 (en) 2003-09-03
MXPA01006469A (es) 2004-03-10
NZ512534A (en) 2003-11-28
ES2201827T3 (es) 2004-03-16
EA009466B1 (ru) 2007-12-28
CA2356157C (en) 2008-04-01
US20030166720A1 (en) 2003-09-04
JP2002533410A (ja) 2002-10-08
EA200300914A1 (ru) 2003-12-25
HK1040925B (zh) 2003-09-11
AU2157600A (en) 2000-07-31
CA2356157A1 (en) 2000-07-06
DE69908645T2 (de) 2004-05-13
NO20013158L (no) 2001-08-22
PT1140186E (pt) 2003-10-31
HK1040925A1 (en) 2002-06-28
US6458850B1 (en) 2002-10-01
EA004231B1 (ru) 2004-02-26
CZ20012341A3 (cs) 2001-12-12
IL143949A0 (en) 2002-04-21
HUP0400886A2 (hu) 2004-07-28
EA200100706A1 (ru) 2001-12-24
KR20010099937A (ko) 2001-11-09
DK1140186T3 (da) 2003-09-29
WO2000038724A1 (en) 2000-07-06
EP1140186A1 (en) 2001-10-10
EP1140186B1 (en) 2003-06-04
HK1045108A1 (zh) 2002-11-15
PL348503A1 (en) 2002-05-20
BR9916485A (pt) 2002-01-15
NO20013158D0 (no) 2001-06-22
AU776664B2 (en) 2004-09-16
ATE242009T1 (de) 2003-06-15
DE69908645D1 (de) 2003-07-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1338946A (zh) 用于心血管适应症的回肠胆汁酸转运抑制剂和烟酸类衍生物的联合形式
CN1338945A (zh) 适用于心血管疾病的回肠胆汁酸转运抑制剂和胆汁酸螯合剂组合
CN1342090A (zh) 适用于心血管疾病的回肠胆汁酸转运抑制剂和贝酸衍生物的组合
CN1342089A (zh) 适用于心血管疾病的回肠胆汁酸转运抑制剂和胆固醇酯转移蛋白抑制剂的组合
US6444665B1 (en) Method for treating pain
US20060183774A1 (en) Methods for treatment of cognitive and menopausal disorders with D-threo methylphenidate
KR20020002367A (ko) 심혈관 징후를 위한 조합물
JP2007517901A (ja) 体重の減少に作用する鎮痙剤及び抗精神病剤の組成物
EP2288345B1 (en) Psycho-pharmaceuticals
AU2002318302A1 (en) Methods for treatment of cognitive and menopausal disorders with D-threo methylphenidate
CN1338944A (zh) 用于心血管适应症的胆固醇酯转移蛋白抑制剂和苯氧异丁酸类衍生物的联合形式
ES2350330T3 (es) Tratamiento de la hiperactividad del músculo liso con (r)-oxibutinina y (r)-desetiloxibutinina.
CN1252722A (zh) 脱羰乙氧氯雷他定在治疗尿失禁、晕动病和眩晕药剂的制备中的应用
WO2001024792A9 (en) Synergistic combinations of an nk1 receptor antagonist and a gaba structural analog
CN100566719C (zh) 用于治疗尤其是在糖尿病患者中的肾的功能障碍、疾病或者病症的药物组合物
ES2203239T3 (es) Combinaciones de inhibidores de la proteina de transferencia de ester de colesterilo y de agentes secuestrantes de acidos biliares para indicaciones cardiovasculares.
JP5485704B2 (ja) 骨吸収と骨形成の不均衡を是正するための方法ならびにキット及び組成物

Legal Events

Date Code Title Description
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C06 Publication
PB01 Publication
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: WD

Ref document number: 1045108

Country of ref document: HK