CN117825345A - 一种血液分析仪及分析方法 - Google Patents

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Abstract

一种血液分析仪及其血液分析方法，血液分析仪包括试样制备部件、流动室、测定部件和数据处理器，该方法采用白细胞测量通道，对被测血液样本溶血和荧光染色后进行检测，利用血影区域的数据识别网织红粒子，从而使得不需要在血液分析仪中单独设计一个光学检测通道即可实现网织红细胞和大血小板的区分以及网织红细胞的更精细分类和计数。本发明同时还公开了一种计算机可读存储介质，该介质中存储有程序，所述程序能够被数据处理器执行以实现上述的方法。

Description

一种血液分析仪及分析方法
技术领域
本发明涉及一种血液分析仪及其分析方法。
背景技术
血细胞分为红细胞(Red Blood Cell，RBC)、白细胞(White Blood Cell，WBC)、血小板(Platelet，PLT)等三类细胞，血常规检查时经常需要检测白细胞分类及数量、红细胞数量和血小板数量。
对血液中白细胞的检测，一般需要对血液细胞进行溶血处理，然后使用流式细胞技术或者阻抗法对白细胞进行检测。例如采用流式细胞技术对白细胞进行检测的检测过程是：对血液样本进行溶血，使红细胞裂解成碎片，经溶血处理后的样本通过流式技术检测细胞粒子的散射光，根据散射光强度来区分白细胞。红细胞由于被裂解成体积较小的碎片，因此在检测过程中不易被检测到，在识别白细胞时可减少红细胞对白细胞的干扰。
对于红细胞和血小板的计数，目前医用粒子分析仪(包括血液细胞分析仪)中，多数采用的是微孔阻抗原理(以下称为电阻抗法)进行检测。电阻抗法的基本依据是库尔特原理，其通常的检测过程是：悬浮在电解液中的颗粒随电解液通过检测微孔时，检测微孔处的等效电阻会发生变化，在微孔两侧恒流源的作用下，检测微孔两侧的电压会发生变化，通过电路***采集此电压变化，形成电压脉冲波形。脉冲波形的高度反映了细胞的体积大小，表征了粒子的体积信息，因此仪器会据此提供所检测粒子的体积分布情况，即提供所测粒子的体积分布直方图。对细胞体积直方图进行分析，即可进行细胞分类与计数等操作，其中体积较大的细胞被识别为红细胞，体积较小的细胞被识别为血小板。
但电阻抗法无法在识别出红细胞结果中区分成熟红细胞和网织红细胞(reticulocyte，RET)，更无法区分不同成熟程度的网织红细胞。目前的研究认为，网织红细胞作为红细胞成熟过程中的一个重要阶段也应被重视。
网织红细胞(reticulocyte，RET)是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞，略大于成熟红细胞。网织红细胞是有核红细胞刚刚失去核的阶段，仍属未完全成熟的红细胞，其胞质中尚有核糖体、核糖核酸等嗜碱性物质残存,经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染包后,胞质中可见蓝或蓝绿色枝点状甚至网织状结构，故名网织红细胞。
近年来，采用流式分析技术进行RET计数的仪器相继问世，其测试方法是使用染料对RET进行染色，采用鞘流技术和射频技术等原理进行检测。例如，中国专利CN 97110727公布了一种流式细胞仪测定方法，其通过测定前向散射光强度和荧光强度可测定网织红细胞。因这种检测方案具有重复性好、准确度高、省时等优点，正被越来越多的医院所采用。
但是，当前采用流式分析技术进行网织红细胞的检测时都需要在细胞分析仪中设计一个单独的检测通道，从而增加了仪器和试剂的检测成本。
发明内容
本发明提出一种针对网织红细胞的新的检测方案。
根据第一方面，一种实施例中提供一种血液分析仪,包括：
试样制备部件，试样制备部件用于制备出测试用试样，所述试样制备部件至少包括反应池，所述反应池用于为被测血液样本、荧光染色剂和溶血剂提供混合孵育的场所，所述混合孵育使被测血液样本中的红细胞裂解并使样本中的细胞粒子被染色；
流动室，用于为试样中的细胞粒子提供逐个通过并接受光照的区域；
测定部件，其包括光源和光检测装置，所述光源用于发射照射流动室的光束，所述光检测装置用于接收细胞粒子在光照射下的散射光和荧光，并输出散射光信息和荧光信息，所述散射光信号中至少包括第一角度散射光信息，第一角度散射光信息用于反映细胞粒子的体积大小信息；
数据处理器，用于根据细胞粒子的第一角度散射光信息和荧光信息识别网织红粒子。
根据第二方面，一种实施例中提供一种血液分析方法,包括:
采用荧光染色剂对被测血液样本进行染色，采用溶血剂对被测血液样本进行溶血反应，从而制备出测定用试样；
使试样中的细胞粒子逐个通过流动室并接受光照；
接收细胞粒子在光照射下的散射光和荧光，并输出散射光信息和荧光信息，所述散射光信息中至少包括第一角度散射光信息，第一角度散射光信息用于反映细胞粒子的体积大小信息；
根据细胞粒子的第一角度散射光信息和荧光信息识别网织红粒子。
根据第三方面，一种实施例中提供一种血液分析方法,用于对试样进行分析，所述试样为被测血液样本经荧光染色和溶血反应后生成，所述方法包括:
获取表征细胞粒子的第一角度散射光信息和荧光信息的数据，所述第一角度散射光信息和荧光信息基于试样中的细胞粒子逐个通过流动室并接受光照时产生的第一角度散射光和荧光生成，所述第一角度散射光信息用于反映细胞粒子的体积大小信息；
根据所述数据获得网织红信息。
根据第四方面，一种实施例中提供一种计算机可读存储介质,包括程序，所述程序能够被数据处理器执行以实现上述的方法。
根据第五方面，一种实施例中提供一种血液分析仪，包括：
存储器，用于存储程序；
数据处理器，用于通过执行所述存储器存储的程序以实现上述方法。
本发明实施例中，采用白细胞测量通道，对被测血液样本溶血后进行检测，利用血影区域的数据识别网织红粒子，从而使得不需要在血液分析仪中单独设计一个光学检测通道即可实现网织红细胞和大血小板的区分以及网织红粒子的更精细分类和计数。
附图说明
图1为迈瑞BC-6800的网织红通道(RET通道)散点图；
图2为一种实施例中血液分析仪的相关部分的结构示意图；
图3a为侧向散射光-荧光散点图；
图3b为前向散射光-荧光散点图；
图3c为血影区域的放大图；
图3d为通过前向散射光-荧光散点图在识别网织红粒子的同时识别有核红细胞的示意图；
图4a为一种实施例中识别网织红粒子的流程图；
图4b为一种实施例中识别大血小板和网织红粒子的流程图；
图5为一种实施例中网织红细胞分区示意图；
图6为一种实施例中大血小板的体积分布直方图；
图7a-7d是采用本发明方案和BC-6800血液细胞分析仪所得出的大血小板计数信息的对比图；
图7e-7h是采用本发明方案和BC-6800血液细胞分析仪所得出的网织红细胞计数信息的对比图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。其中不同实施方式中类似元件采用了相关联的类似的元件标号。在以下的实施方式中，很多细节描述是为了使得本申请能被更好的理解。然而，本领域技术人员可以毫不费力的认识到，其中部分特征在不同情况下是可以省略的，或者可以由其他元件、材料、方法所替代。在某些情况下，本申请相关的一些操作并没有在说明书中显示或者描述，这是为了避免本申请的核心部分被过多的描述所淹没，而对于本领域技术人员而言，详细描述这些相关操作并不是必要的，他们根据说明书中的描述以及本领域的一般技术知识即可完整了解相关操作。
另外，说明书中所描述的特点、操作或者特征可以以任意适当的方式结合形成各种实施方式。同时，方法描述中的各步骤或者动作也可以按照本领域技术人员所能显而易见的方式进行顺序调换或调整。因此，说明书和附图中的各种顺序只是为了清楚描述某一个实施例，并不意味着是必须的顺序，除非另有说明其中某个顺序是必须遵循的。
本文中为部件所编序号本身，例如“第一”、“第二”等，仅用于区分所描述的对象，不具有任何顺序或技术含义。而本申请所说“连接”、“联接”，如无特别说明，均包括直接和间接连接(联接)。
在血液细胞分析仪中，白细胞分类和网织红细胞检测虽然都是采用流式技术，但两者无法共用测量通道。原因是：在白细胞测量通道中，为了减少红细胞对白细胞的干扰，设计了对血液样本进行溶血处理的环节，目的是使红细胞在溶血剂的作用下裂解成体积较小的碎片，以不构成对白细胞测量的影响。而在检测网织红细胞时，理论上不希望对网织红细胞进行破坏，由于溶血剂也会对网织红细胞具有裂解作用，因此已有的采用流式技术的网织红细胞测量通道中没有设计对血液样本进行溶血处理的环节。
本发明的贡献在于发现了可利用白细胞测量通道来检测网织红细胞和/或大血小板的方案，该方案可检测大血小板的数量或其它信息，也可检测网织红细胞的数量或其它信息，例如对网织红细胞进行更精细分类和计数。本发明的关键在于发现了血影区域数据的新用途。
请参考图2，图2示出了本发明具体实施例的血液细胞分析仪的相关部分的结构示意图，包括试样制备部件、测定部件22、数据处理器25和显示器26。
试样制备部件包括加样装置(图中未示出)和反应池21，加样装置可以是采样针或采样阀，采样针或采样阀通过吸排动作，将吸取的被测血液样本或试剂排出到反应池21中，可以是样本和试剂单独使用各自的采样针或采样阀，也可以是样本和试剂共用采样针或采样阀。加样装置还可以包括采样针和液压管路，采样针用于通过吸排动作，将吸取的被测血液样本排出到反应池21中，液压管路用于通过正压力或负压力将试剂注入到反应池21中。本发明实施例中，试剂至少包括荧光染色剂和溶血剂。反应池21为被测血液样本和荧光染色剂、溶血剂提供混合孵育的场所，样本和荧光染色剂、溶血剂混合时，可以将两者或三者同时加入，也可以先后加入。样本和荧光染色剂、溶血剂混合后，在溶血剂的作用下，被测血液样本中的红细胞裂解，而含有核酸的细胞被荧光染色剂染色。被测血液样本和荧光染色剂、溶血剂提供混合孵育后得到测定用试样。
测定部件22包括光源22a、流动室22c和光检测装置22f、22k、22g。流动室22c为测定用试样中的细胞粒子提供逐个通过并接受光照的区域。通常情况下，流动室22c和反应池21之间通过管路27连通。当测定用试样制备好后，试样通过管路27到达流动室22c的入口，然后在鞘液的裹挟下试样中的细胞粒子逐个通过流动室22c。光源22a发出的光经光准直透镜22b后会聚到流动室22c的光学检测区域，当有细胞粒子流过流动室22c的光学检测区域时，光束照射在细胞粒子上。不同类型的细胞发出不同的散射光，另外被荧光染色剂染色后的细胞还发出荧光。光检测装置收集两个散射角度的光和荧光，第一角度散射光是与光轴夹角比较小的散射光，例如第一角度散射光包括与光轴的夹角处于1-6°范围的散射光，第二角度散射光是与光轴夹角比较大的散射光，例如第二角度散射光包括与光轴垂直方向的夹角处于1-6°范围的散射光。第一角度散射光信号用于反映细胞粒子的体积大小信息，第二角度散射光信号用于反映细胞粒子的复杂程度信息。通常情况下，第一角度散射光为前向散射光，第二角度散射光为侧向散射光，前向散射光是指在光束直射方向上(即光轴方向上)收集的散射光，侧向散射光是指在与光轴垂直方向的方向上收集的散射光。应当理解，在其它的实施例中，本领域技术人员也可以根据需要设定第一角度和第二角度是其它角度范围，只要使两者分别反映细胞的体积大小和复杂程度即可。本发明实施例中，也可以只检测第一角度散射光信号和荧光信号，或者只检测第一角度散射光信号。光检测装置22f、22k、22g例如可以是光电传感器，其感应光的强度并将光信号转换为电信号输出，输出的电信号经放大器23放大后输入到数据处理器25。
在如图2所示的实施例中，细胞发出的前向散射光经会聚透镜22d和微孔板22e后照射在光检测器22f上，光检测器22f感应光的强度并将光信号转换为电信号输出，称为前向散射光信号；细胞发出的侧向散射光和侧向荧光经分光镜22h分光后分成侧向散射光和荧光两路，侧向散射光入射到光检测器22g上，光检测器22g感应光的强度并将光信号转换为电信号输出，称为侧向散射光信号；荧光经会聚透镜22i和滤波器22j后照射在光检测器22k上，光检测器22k感应荧光的强度并将光信号转换为电信号输出，称为荧光信号。前向散射光信号、荧光信号和侧向散射光信号分别经放大器23a、23b、23c放大后传输给数据处理器25。
数据处理器25用于对数据进行运算，得到所要求的结果，例如，根据收集的细胞粒子的各种光信号可生成二维散点图，也可以生成三维的散点图，并在散点图上根据设门的方法进行白细胞分析或其它分析。数据处理器25还可以对中间运算结果或最终运算结果进行可视化处理，然后通过显示器27显示出来。
本发明实施例中，数据处理器25根据细胞粒子的第一角度散射光信号和荧光信号识别大血小板和/或网织红细胞，或根据细胞粒子的第一角度散射光信号识别大血小板和/或网织红细胞，并进而得到大血小板信息和/或网织红细胞信息。
在研究过程中，发明人利用白细胞通道检测了细胞粒子的前向散射光信号(FSC)、侧向散射光信号(SSC)和荧光信号(FL)，生成了侧向散射光-荧光散点图和前向散射光-荧光散点图，如图3a所示为侧向散射光-荧光散点图，图3b所示为前向散射光-荧光散点图。在图3a和3b的散点图中，细胞粒子基本可分为两个大的粒子区域，即荧光信号比较大的白细胞区域31a、31b和荧光信号比较小的血影区域32a、32b，血影区域也被认为是非白细胞区域，是血液中的红细胞和血小板被溶血后的剩余物，通常被称为血影，在各种分析中血影区域的数据往往被作为废弃数据不予考虑。发明人发现，在前向散射光-荧光散点图中，血影区域32b呈现出特殊形状，将血影区域32b放大在图3c中，血影区域32b呈现出两个分支，即沿前向散射光方向延伸的第一分支33和沿荧光方向延伸的第二分支34。发明人经过理论分析和实验后认为可利用这两个分支来区分大血小板和网织红细胞。
已有的研究结果认为，虽然红细胞的原始体积大于血小板的原始体积，但经过溶血剂溶血后，红细胞被裂解成体积很小的碎片。对于小血小板(例如体积小于10fL的血小板)而言，由于本身体积较小，溶血试剂处理之后体积进一步降低。对于这些体积较小的粒子一方面受***检测低限限制，另一方面小血小板和红细胞碎片体积相仿，因此很难准确将两者区分开来。
本发明人经过研究认识到，血液经过溶血剂溶血后，成熟的红细胞被溶解，成为体积较小的碎片，由于体积较小，不易被识别。但网织红细胞胞质中含有嗜碱性的点状甚至网织状结构颗粒，这些颗粒不易溶解，因此网织红细胞溶血之后的体积将略大于成熟红细胞溶解之后的体积。同时由于这些颗粒中含有核酸物质，在经染色处理后，其荧光信息将大于血小板的荧光信息，并且嗜碱性颗粒越多，荧光越强。并且，发明人认为，血液样本经过溶血处理之后，血小板的体积有所减小，但相对大小几乎保持不变，即原本大体积的血小板溶血之后体积依然较大，而体积大的血小板能够在溶血通道通过流式细胞技术被检测出来。综合以上分析，可以认为沿前向散射光方向延伸的第一分支33是大血小板，而沿荧光方向延伸的第二分支34是网织红粒子，网织红粒子可能是经溶血剂处理后的细胞膜包裹着的嗜碱性颗粒，也可能是细胞膜被破坏后释放出来的嗜碱性颗粒，由于上述颗粒中含有核酸物质，其荧光信息也将大于普通的成熟红细胞，且嗜碱性颗粒越多，荧光越强。本文中的网织红粒子指表征网织红细胞的粒子，本发明人研究发现，这些粒子的数量与样本中网织红细胞数量具有相关性。血影的左下角区域是成熟红细胞碎片和小血小板的混合物。
基于此结论，设想在第一分支33上通过设门的方法设定一合适的区域，例如第二区域35，使得该区域内的粒子是大血小板，第二区域35是指血影区域中荧光信号强度较小且第一角度散射光信号强度较大的区域，实践操作中，第二区域35的位置和大小可以根据理论和/或本领域技术人员的经验所认识到的大血小板应该或可能出现的区域来设定，即在第二区域35内，细胞粒子可以被识别为大血小板，且沿前向散射光FSC向右，前向散射光信号越强，血小板的体积越大。同样在第二分支34上也通过设门的方法设定一合适的区域，例如第一区域36，使得该区域内的粒子是网织红细胞，第一区域36是指血影区域中荧光信号强度较大且第一角度散射光信号强度较小的区域，第一区域36的位置和大小也可以根据理论和/或本领域技术人员的经验所认识到的网织红细胞应该或可能出现的区域来设定，即在第一区域36内，细胞粒子可以被识别为网织红粒子，且沿荧光FL向上，荧光信号越强，网织红细胞内的嗜碱性颗粒越多，网织红细胞越不成熟。
以下通过具体实施例对各种应用进行说明。
本实施例中以分析细胞粒子的前向散射光信号和荧光信号为例进行说明，对被测血液样本进行分析的处理流程如图4a所示，包括以下步骤：
步骤100，采集被测血液样本。通过采样针或采样阀定量采集被测血液样本，将一定量的被测血液样本注入反应池。
步骤101，采用溶血剂对血液样本进行溶血反应。将溶血剂加入反应池，使溶血剂和血液样本混合。溶血剂是使血液中的红细胞溶血的试剂。因此红细胞在溶血剂作用下被溶解，体积变小，成为细胞碎片。
步骤102，采用荧光染色剂对被测血液样本进行荧光染色。将荧光染色剂加入反应池，使荧光染色剂和血液样本混合。荧光染色剂是对核酸进行染色的试剂，白细胞因含有核酸，因此被染色。
在另外的实施例中，也可以将溶血剂和荧光染色剂同时加入反应池21中，另外，根据检测的需要，也可以加入其它种类的试剂。
步骤103，对分别加入反应池21中的被测血液样本、溶血剂和荧光染色剂进行混合，孵育一定时间后制备出测试用试样。
本文中的荧光染色剂，可以是常规的用于白细胞或有核红细胞检测染料，例如申请号为CN200910177186.7的中国专利申请中提到的染料，或者申请号为CN200910238927.8的中国专利申请中提到的染料。溶血剂可以是常规的溶血剂，例如这两个专利中提到的表面活性剂可以配制为溶血剂。步骤104，采用流式光学检测法检测试样。通过液路控制，使反应池中的一定量试样流向流动室，在流动室入口处与鞘液混合，试样中的细胞粒子在鞘液的裹挟下逐个通过流动室的光检测区域。光源发出的光束照射在光检测区域，细胞粒子对照射的光产生散射，不同类型的细胞粒子其散射光不同。同时由于细胞粒子被染色，当光照射被荧光染色剂染色的细胞粒子时，细胞粒子产生波长比照射光波长更长的荧光，核酸物质越多，染色越强，发出的荧光越强。
步骤105，收集细胞粒子在光照射下的散射光和荧光，光检测装置根据收集的散射光和荧光的光强输出散射光信号和荧光信号。一种实施例中，可采用如图2所示的光收集***，散射光信号包括前向散射光信号和侧向散射光信号，通过前向散射光收集装置收集前向散射光，通过侧向散射光收集装置收集侧向散射光，前向散射光信号用于反映细胞粒子的体积大小信息，侧向散射光信号用于反映细胞粒子的复杂程度。
步骤106，得到表征细胞粒子的数据。在每个细胞粒子经过光检测区域时，都会产生前向散射光信号、侧向散射光和荧光信号三个数据，即每个细胞粒子采用三个数据来表征。
这些表征细胞粒子的数据可暂存在缓存器中，也可保存在存储器中，例如将每个细胞粒子的三个数据存储成一个三维的数据组，每个数据组中包括前向散射光信息、侧向散射光信息和荧光信息三个数据，多个细胞粒子的数据组可形成一个数据矩阵，数据处理器从缓存器或存储器中读取细胞粒子的数据以进行后续处理。当然这些表征细胞粒子的数据也可以直接传输给数据处理器。数据处理器根据表征细胞粒子的数据组中的至少两维可进行粒子识别，例如本实施例中，数据处理器可根据前向散射光信息和荧光信息识别网织红粒子，例如将前向散射光信息和荧光信息分别与对应的预设标准进行比较，根据比较结果，将落入预定范围的粒子识别成网织红粒子。再例如还可采用下面的散点图法识别粒子。
在有的实施例中，如果识别粒子只需要两维数据，光收集***也可以只收集前向散射光信息、侧向散射光信息和荧光信息中的两个。
步骤108，基于表征细胞粒子的数据生成散点图，例如根据前向散射光信息、侧向散射光信息和荧光信息生成前向散射光-荧光散点图，如图3b所示。
步骤113，将第一区域36内的粒子识别为网织红粒子。
在进一步的实施例中，当需要对网织红粒子进行进一步统计和/或应用时，还可以执行以下步骤。
步骤114，根据识别出的网织红粒子得到网织红信息。网织红信息包括网织红标志物信息、网织红细胞计数信息(RET)、高荧光网织红细胞计数信息、中荧光网织红细胞计数信息、低荧光网织红细胞计数信息、未成熟网织红细胞计数信息和网织红细胞内核酸物质含量中的至少一个。
网织红细胞计数信息包括网织红细胞的数量(RET#)和/或网织红细胞的比率(RET％)，对第一区域内的粒子数进行统计可得到网织红细胞的数量，网织红细胞的比率为同一测定样本中网织红细胞的数量和红细胞数量的比值。
在第一区域36内，沿荧光FL向上，荧光信号越强，说明网织红细胞内的核酸越多，嗜碱性颗粒越多，网织红细胞越不成熟，数据处理器可根据第一区域36中粒子的荧光信号强度分布获取高荧光网织红细胞计数信息、中荧光网织红细胞计数信息和低荧光网织红细胞计数信息。例如，在第一区域36内还可以通过设门的方法设定第三区域37、第四区域38和第五区域39，如图5所示。
第三区域37为高荧光强度网织红细胞，其位置根据理论和/或本领域技术人员的经验所认识到的幼稚网织红细胞应该或可能出现的区域来设定。高荧光网织红细胞计数信息包括高荧光网织红细胞的比率(High fluorescent ratio，HFR)和/或高荧光网织红细胞的计数值(HFR#)，对第三区域37内的粒子数进行统计可得到高荧光网织红细胞的计数值HFR#，高荧光网织红细胞的比率HFR为同一测定样本中高荧光网织红细胞的数量和网织红细胞数量的比值。
第四区域38为中荧光强度网织红细胞，其位置根据理论和/或本领域技术人员的经验所认识到的不太成熟网织红细胞应该或可能出现的区域来设定。中荧光网织红细胞计数信息包括中荧光网织红细胞的计数值和/或中荧光网织红细胞的比率(Middlefluorescent ratio，MFR)，对第四区域38内的粒子数进行统计可得到中荧光网织红细胞的计数值MFR#，中荧光网织红细胞的比率MFR为同一测定样本中中荧光网织红细胞的数量和网织红细胞数量的比值。
第五区域39为低荧光强度网织红细胞，其位置根据理论和/或本领域技术人员的经验所认识到的成熟网织红细胞应该或可能出现的区域来设定，低荧光网织红细胞计数信息包括低荧光网织红细胞的计数值和/或低荧光网织红细胞的比率(Low fluorescentratio，LFR)，对第五区域39内的粒子数进行统计可得到低荧光网织红细胞的计数值LFR#，低荧光网织红细胞的比率LFR为同一测定样本中低荧光网织红细胞的数量和网织红细胞数量的比值。
未成熟网织红细胞计数信息包括未成熟网织红细胞的计数值和/或未成熟网织红细胞的比例(IRF，Immature reticulocyte fraction)，未成熟网织红细胞的比例等于为MFR和HFR之和，通过换算可得到未成熟网织红细胞计数值IRF#＝RET#*IRF。或根据高荧光网织红细胞和中荧光网织红细胞的数量可得到未成熟网织红细胞的计数值IRF#。未成熟网织红细胞的比例为同一测定样本中未成熟网织红细胞的数量和网织红细胞数量的比值。
另外，网织红粒子的荧光信号强度可以表征网织红细胞的核酸物质含量，核酸物质越多，荧光越强。因此，累加网织红粒子的荧光信号可计算出网织红细胞内核酸物质含量，核酸物质含量的计算公式如下：
其中，NRET为网织红细胞内的核酸物质含量表征量，FLRET-i为第i个网织红细胞的荧光信号强度。核酸物质含量表征量可能可以用于监控红细胞的成熟过程。核酸物质含量越高，说明在血液中检测到的未成熟的网织红细胞越多或者网织红细胞越不成熟，越接近于晚幼红细胞。一定程度上，核酸物质含量表征量能够反映血液病的严重程度。
网织红标志物信息是指检测出网织红粒子的信息，或者网织红标志物信息也可以是指检测出某种成熟程度的网织红细胞的信息。网织红标志物信息是一个定性的指标，例如当检测到网织红粒子或某种成熟程度的网织红细胞时，即将网织红标志物信息置为1，当没有检测到预定类型的网织红粒子时，网织红标志物信息置为0。
在有的实施例中，还可以根据网织红信息进行报警。例如，根据网织红标志物信息进行报警，即当网织红标志物信息置为1时就进行报警。或者根据网织红细胞计数信息进行报警，即当网织红细胞计数信息超过设定阈值时进行报警。或者根据高荧光网织红细胞计数信息或网织红细胞内核酸物质含量进行报警。
在另一实施例中，数据处理器还可以根据前向散射光和荧光散点图识别大血小板，其流程如图4b所示，在图4a的基础上还包括以下步骤：
步骤109，在散点图上识别出血影区域32b。血影区域通常位于散点图的左下角区域，可以根据经验采用设门的方法在散点图上设置血影区域，这种方案中，血影区域是预先设定好，且固定不变的。血影区域也可以不采用预先设定的方式，例如，根据白细胞分布区域来确定血影区域，白细胞分布区域可以是预先设定的区域，也可以是根据实际检测的白细胞分布情况确定的区域。这种方案中，数据处理器先读取白细胞分布区域，然后利用白细胞分布区域来确定血影区域，例如将白细胞分布区域的中心向左下方偏移预定距离后得到血影区域的中心，然后根据血影区域的中心和预定的半径画圆或椭圆，从而得到血影区域。
步骤110，根据血影区域得到第二区域35和第一区域36。根据理论和经验，可将血影区域的第一分支的某特定区域设定为第二区域35，第二分支的某特定区域设定为第一区域36，如图3c所示，第二区域35和第一区域36位于血影区域内。
步骤111，将第二区域35内的粒子识别为大血小板。
步骤112，根据识别出的大血小板得到大血小板信息。大血小板信息包括大血小板的体积大小、大血小板的体积分布和大血小板的计数信息中的至少一个。
大血小板的计数信息包括大血小板的数量和/或大血小板的比率，通过对第一区域内的粒子数进行统计可得到大血小板的数量，大血小板的比率为同一试样中大血小板的数量和血小板总数的比值。
大血小板的体积大小至少根据大血小板的前向散射光信号来计算，例如可通过以下方法中的任一种进行计算：
1.如果同时检测了粒子的前散(FSC)和侧散光信息(SSC)，大血小板的体积大小可利用mie散射理论计算获得,具体可参考文献《红细胞的前向光散射》，1996年6月激光生物学第5卷第2期刊。
2.可以只检测前散光信息，可利用公式(1)计算大血小板的体积大小,其中k是一个常数，Vol为大血小板的体积大小，FSC为粒子的前向散射光。
Vol＝k*FSC------(1)
或者也可利用公式(2)计算大血小板的体积大小，其中k,b是常数。
Vol＝k*exp(b*FSC)--------(2)
3.可以只检测前散光信息，利用公式(3)计算大血小板的体积大小，其中μ和σ是常数。
Vol＝[1/(FSC*σ(2π)1/2)]exp(-(lnFSC-μ)2/2σ2)-----(3)
根据大血小板的体积大小，可得到大血小板的体积分布，例如生成大血小板的体积分布直方图，如图6所示。在有的实施例中，还可以通过在前向散射光轴上分段统计的方法得到大血小板的体积分布信息。
为检验本方案的效果，将采用本发明实施例所得出的结果和采用BC-6800血液细胞分析仪所得出的结果进行比对，如图7a-7h所示，图7a-7d展示了采用本发明实施例所得出的大血小板计数信息和采用BC-6800血液细胞分析仪所得出的大血小板计数信息的相关性，图7e-7h展示了采用本发明实施例所得出的网织红细胞计数信息和采用BC-6800血液细胞分析仪所得出的网织红细胞计数信息的相关性。
实施例
使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产的BC-6800血液细胞分析仪(本文简称BC-6800血液细胞分析仪)的白细胞检测通道检测血液样本。BC-6800血液细胞分析仪的网织红通道采用流式分析技术，能够通过前向散射光和荧光检测出网织红细胞计数值，其散点图如图1所示。
另外，从图1可见，用前向散射光和荧光信号识别出血小板，并获得血小板的总数。基于血小板粒子的前向散射光信号和侧向散射光信号，利用Mie散射理论(张伟,路远,杜石明等,球形粒子Mie散射特性分析,光学技术,2010年11月:第36卷第6期:936-939.)计算得到每个血小板的体积，从而得到不同体积的血小板数量。
请参考图7a-7d，对比实验选取样本82例，其中经过人工镜检确认的红细胞碎片样本15例，小红细胞样本5例，大血小板样本5例，正常样本57例，使用本发明所述方案，在迈瑞BC-6800血液细胞分析仪白细胞检测通道进行检测，获得第二区域35中粒子的前向散射光信号，得到大血小板的体积分布数据。具体地，可以通过公式(1)将前向散射光信号FSC转换为该区域中每一粒子的体积，从而得到大血小板的体积分布数据，例如图6所示。所述体积分布数据可以是数字形式，也可以是图形形式，如体积直方图。进一步地，基于该大血小板的体积分布数据分别测得10fL,12fL,15fL,20fL以上体积的大血小板计数信息。相同的血样样本在迈瑞BC-6800血液细胞分析仪的网织红通道进行检测，用前述的方法计算不同体积的血小板数量图中，横轴表示采用BC-6800血液细胞分析仪分别测得的10fL,12fL,15fL,20fL以上体积的大血小板计数信息，图中简称为BC-6800，纵轴表示采用本发明方案分别测得的10fL,12fL,15fL,20fL以上体积的大血小板计数信息，图中简称为本发明。由图可知，两种检测方法的相关系数的平方分别达到了0.94、0.945、0.935、0.924。
请参考图7e-7h，对比实验选取样本88例，其中采用BC-6800血液细胞分析仪检测RET％<0.5％的25例，0.5≤RET％<3％的19例，RET％>3％的44例。分别使用本发明所述方案和BC-6800血液细胞分析仪进行检测，BC-6800血液细胞分析仪的网织红测量通道能够检测网织细胞百分比和计数值(RET％/RET#),低荧光强度网织红细胞百分比(Low fluorescentratio，LFR)，中荧光强度网织红细胞百分比(Middle fluorescent ratio，MFR)，高荧光强度网织红细胞百分比(High fluorescent ratio，HFR)，未成熟网织红细胞比例(IRF，Immature reticulocyte fraction，其值为MFR和HFR之和)。通过换算可以得到低荧光强度网织红细胞计数值LFR#＝RET#*LFR、中荧光强度网织红细胞计数值MFR#＝RET#*MFR、高荧光强度网织红细胞计数值HFR#＝RET#*HFR、未成熟网织红细胞计数值IRF#＝RET#*IRF。另外通过累加使用BC-6800血液细胞分析仪检测的网织红细胞的荧光信号强度，可以表征网织红细胞的核酸物质含量NRET。图中，横轴表示采用BC-6800血液细胞分析仪分别测得的RET#、IRF#、HFR#、荧光之和的统计信息，图中简称为BC-6800，纵轴表示采用本发明方案分别测得的RET#、IRF#、HFR#、荧光之和的统计信息，图中简称为本发明。由图可知，两种检测方法的相关系数的平方分别达到了0.847、0.746、0.737、0.864。从比较结果可以看到，特定区域内的粒子数能有效的表征血液中网织红信息。
在其他实施例中，本发明的方案还可以在BC-6800血液细胞分析仪的有核红细胞检测通道上进行，也可以和白细胞通道类似，得到网织红信息和大血小板数量。
在进一步完善的实施例中，还可以根据上述实施例得出的大血小板的计数信息进行报警，例如当大血小板数量超过设定阈值时，可通过声音进行报警提示，或在显示屏上通过文字或突出显示的方式进行报警提示，或者在打印出的报告单上通过文字或突出显示的方式进行报警提示。
本领域技术人员应当理解，在另外的具体实施方式中，也可以只收集前向散射光信号和荧光信号两个数据，即每个细胞粒子采用两个数据来表征。第一区域、第二区域、第三区域、第四区域和第五区域可以根据经验预先设定，也可以根据已确定的区域来确定，例如，当血影区域确定后，可将距血影区域的中心第一距离和方位的特定区域确定为区分大血小板的第一区域，将距血影区域的中心第二距离和方位的特定区域确定为区分网织红细胞的第二区域，将第二区域中上三分之一的区域确定为区分高荧光网织红细胞的第三区域，将第二区域中中间三分之一的区域确定为区分中荧光网织红细胞的第四区域，将第二区域中下三分之一的区域确定为区分低荧光网织红细胞的第五区域。在有的具体实施例中，还可以将散点图显示在显示屏上，由用户根据经验采用手动设门的方式确定各区域，这种实施例中，也可以不确定血影区域，即不执行步骤109，而直接在散点图上指定第一区域、第二区域、第三区域、第四区域和第五区域。
在有的实施例中，还可以根据前向散射光信息、侧向散射光信息和荧光信息生成三维散点图。然后根据散点图中粒子在前向散射光维度和荧光维度的分布识别网织红粒子和/或大血小板。
本实施例中，主要阐述了采用在散点图上设门的方式来区分网织红细胞和大血小板，在有的实施例中，也可以采用与阈值对比的方式来识别判断哪些粒子属于网织红细胞，哪些粒子属于大血小板，例如，对前向散射光设置第一阈值范围和第二阈值范围，对荧光设置第三阈值范围和第四阈值范围，将前向散射光落入第一阈值范围且荧光落入第三阈值范围的粒子识别为大血小板，将前向散射光落入第二阈值范围且荧光落入第四阈值范围的粒子识别为网织红细胞。这种实施例中，不需要生成散点图。
另外，在有的实例中，也可以只进行大血小板的识别和分析，或者只进行网织红细胞的识别和分析。
申请人经深入研究发现，在对血液样本的红细胞进行溶血处理后，网织红细胞会形成网织红粒子，在前向散射光-荧光散点图上至少可以部分与红细胞碎片区分开，得到包括网织红粒子数量在内的网织红粒子信息，其与样本中的网织红细胞信息有相关性。
由于本发明实施例采用的是需要溶解红细胞的白细胞测量通道，因此在有的实施例中，可利用同一次测定数据进行白细胞分析，包括对白细胞进行分类和计数，例如进行白细胞四分类(如图3a所示，白细胞被区分为四种亚群，分别是淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞)、嗜碱性粒细胞分类、有核红细胞分类等。可根据前向散射光、侧向散射光和荧光中的任意两个信号生成散点图，然后采用在散点图上设门的方法进行白细胞进行分类和计数。本领域技术人员能够理解，其他检测时需要溶解红细胞的测量通道，例如有核红通道，也可以适用本发明的方法，在识别网织红粒子的同时识别有核红细胞(如图3d所示)。
在另一个实施例中，还可以是对红细胞具有较强溶血能力的溶血剂配合荧光染料进行网织红细胞的检测。溶血剂可以为选自烷基糖苷、三萜皂苷、甾族皂苷中的至少一种。这类溶血剂能更好地减少红细胞裂解后的碎片对大血小板和网织红粒子的干扰。
一种具体的溶血剂可为具有通式I的糖苷类化合物：
R-(CH2)n-CH3(I)
其中，R选自由单糖、去氧单糖和多糖所组成的组，n为5～17的整数。
上述糖苷类化合物能够起到快速溶解红细胞的作用。糖苷类化合物是由糖(或多糖)的半缩醛羟基同烷醇的羟基脱水形成的化合物。本发明的溶血剂中糖苷类化合物可以是单一的化合物，也可以是符合上述通式的两种或更多种糖苷类化合物的混合物。
通式(I)中，单糖没有特别限制，常用的可选自五碳糖、甲基五碳糖和六碳糖，但不限于此。五碳糖诸如***糖、木糖、核糖、来苏糖等。甲基五碳糖诸如夫糖、鼠李糖、鸡那糖等。六碳糖诸如葡萄糖、甘露糖、果糖、半乳糖、山梨糖。去氧单糖也没有特别限制，诸如去氧核糖、去氧葡萄糖等，但不限于此。多糖诸如麦芽糖、蔗糖等，但不限于此。n优选为6～14的整数，更优选为7～11的整数。
所述通式I的糖苷类化合物具体可为辛基葡萄糖苷，壬基葡萄糖苷，葵基葡萄糖苷，十二烷基麦芽糖苷，十四烷基麦芽糖苷，十二烷基葡萄糖苷，优选辛基葡萄糖苷，壬基葡萄糖苷，葵基葡萄糖苷，十二烷基麦芽糖苷，更优选葵基葡萄糖苷，十二烷基麦芽糖苷。
所述通式I的糖苷类化合物在本实施例的溶血剂中的浓度根据所选糖苷的性质、反应时间、反应温度和其他成分的使用量而有所不同，通常用量为0.025g/L～10g/L范围内，优选0.1g/L～5.0g/L。
该第一实施方式中的溶血剂，优选进一步包括具有通式II的非离子型表面活性剂：
R1-R2-(CH2CH2O)m-H (II)
其中，R1为C8-C23的烷基，R2为-O-、或-COO-，m为10～50的整数；和
可选地，至少一种有机酸或其盐，其中所述有机酸或其盐选自由具有至少一个羧基或磺酸基的有机酸及其碱金属的盐所组成的组中。
通式II的非离子型表面活性剂，在一定程度上能够与白细胞的细胞膜结合，起到保护白细胞和血小板的细胞膜不受前述糖苷类化合物的影响而保持或基本保持其细胞形态的作用。
根据优选的实施方式，所述通式II的非离子型表面活性剂中，R1为C8-C18的直链烷基。C8-C18的直链烷基具体可为辛基、葵基、月桂基、十四烷基、十六烷基或硬脂基。更优选R1为C12-C16的直链烷基，具体可为月桂基、十四烷基或十六烷基。R2优选为-O-。m为10～50，优选为15～30。
所述通式II的非离子型表面活性剂具体实例可为十六烷醇聚氧乙烯(15)醚、十二烷醇聚氧乙烯(21)醚、十六烷醇聚氧乙烯(23)醚、十六烷醇聚氧乙烯(25)醚、十六烷醇聚氧乙烯(30)醚，但不限于此。
通式II的非离子型表面活性剂的浓度没有特别限制，但可为0.03～1.5g/L，优选0.05～1.0g/L。
在本实施例中，该非离子表面活性剂可以以单一物质使用，也可以两者或更多种的混合物来使用。取决于所使用的非离子表面活性剂的种类，其在溶血剂中的浓度也是不同的。通常来说，烷基链越长、聚氧乙烯部分的重复单元数目越多的非离子型表面活性剂，其浓度相对较低。
在本实施例中，通式I和通式II的化合物配合使用，一方面能够获得对红细胞的快速深度裂解的效果，另一方面，为了能够有效检测血小板，起到对血小板细胞膜的保护作用。
根据所选取的通式I和通式II的化合物，二者之间的用量比例也有所不同。但是，通常来说，通式I和通式II的化合物的用量比为1:100～1:3，优选1:25～1:5，更优选1:10～1:5。
根据本实施例的优选实施方式，所述溶血剂可进一步包括至少一种有机酸或其盐以使白细胞侧散射光的区分度更好。所述有机酸优选为未取代的或被羟基或氨基取代的C1-6烷基的一元、二元或三元羧酸；未取代的或被羟基或氨基取代的C1-6烷基的磺酸；C6-10芳基C1-6烷基酸；C6-10芳基二(C1-6烷基酸)；和C6-10芳基磺酸所组成的组中。
所述有机酸及其盐的具体实例可为甲酸、乙酸、苯甲酸、柠檬酸(3-羟基-1,3,5-戊三酸)、苹果酸(2－羟基丁二酸)、苯二甲酸、苯磺酸、α-萘磺酸、牛磺酸等及它们的碱金属盐，诸如钠盐、钾盐，但不限于此。
所述有机酸或有机酸盐在溶血剂中的浓度为0.05g/L到2g/L，优选0.1g/L到0.5g/L。
本实施例的溶血剂还可进一步包括常规的添加剂。这些添加剂可根据需要选择性加入，例如(但不限于)缓冲剂、金属螯合剂、渗透压调节剂、防腐剂等。这些试剂均为本领域常用的试剂，只要不妨碍本实施例溶血剂中的上述成分发挥作用即可。缓冲剂，例如可以为选自磷酸及其盐、柠檬酸及其盐、TRIS等中一种，通常为两种或更多种构成的缓冲体系。金属螯合剂，用作抗凝剂，常见的如EDTA钠。渗透压调节剂，通常为无机盐类，诸如氯化钠、硫酸钠、硫酸钾，硼酸钠等。防腐剂，例如异噻唑啉酮、叠氮钠，咪唑烷基脲。
溶血剂与血液样本的混合比例并没有特别限制。举例来说，血液样本与溶血剂的体积混合比可为1:40～1:60。溶血反应在诸如40～60℃的温度下，反应15～100秒，优选反应40～80秒。反应温度和时间可根据具体条件进行调节。
一种具体的试剂的组分如下：
荧光染料结构式：
本发明对现有技术的贡献在于发现了可利用白细胞测量通道等要对红细胞进行溶血的测量通道来检测网织红细胞和/或大血小板的方案，该方案可检测大血小板的数量或其它信息，也可检测网织红细胞的数量或其它信息，例如对网织红细胞进行更精细分类和计数，从而使得白细胞分类和计数、网织红信息和大血小板信息可根据一次检测收集的散射光和荧光信息得到，因此本发明的技术方案具有以下效果：
第一，节约了测量通道，有利于血液分析仪的小型化。
第二，降低了检测成本。一方面，白细胞、网织红粒子和大血小板可根据一次检测收集的散射光和荧光信息识别出，节约了检测用试剂的用量，另一方面，检测白细胞分类和计数的试剂价格相较于网织红信息精细化检测的试剂价格要低很多，首先将大批量样本采用本发明的方案检测出可疑的样本，然后再根据需要对可疑样本进行精细化检测，从而可降低大批量样本的检测成本。
第三，节约了检测时间，在一个检测通道中，提供白细胞、网织红细胞、血小板信息。
本领域技术人员可以理解，上述实施方式中各种方法的全部或部分步骤可以通过程序来指令相关硬件完成，该程序可以存储于一计算机可读存储介质中，存储介质可以包括：只读存储器、随机存储器、磁盘或光盘等。例如，将程序存储在分析仪的存储器中，当需要对样本检测时，通过处理器执行存储器中程序，即可实现上述步骤。尤其是在本发明实际实施过程中，上述实施例中的步骤107-114可编写成独立的程序，步骤206-211也可以编写成独立的程序，该程序可存储在服务器、磁盘、光盘、闪存盘上，通过下载保存到本地分析仪的存储器中，或通过下载对本地分析仪的***进行版本更新，当需要对样本检测时，通过处理器执行存储器中程序，即可实现步骤107-114和步骤206-211的功能。
以上应用了具体个例对本发明进行阐述，只是用于帮助理解本发明，并不用以限制本发明。对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，可以对上述具体实施方式进行变化。

Claims (34)

1.一种血液分析仪,特征在于包括：
试样制备部件，试样制备部件用于制备出测试用试样，所述试样制备部件至少包括反应池，所述反应池用于为被测血液样本、荧光染色剂和溶血剂提供混合孵育的场所，所述混合孵育使被测血液样本中的红细胞裂解并使样本中的细胞粒子被染色；
流动室，用于为试样中的细胞粒子提供逐个通过并接受光照的区域；
测定部件，其包括光源和光检测装置，所述光源用于发射照射流动室的光束，所述光检测装置用于接收细胞粒子在光照射下的散射光和荧光，并输出散射光信息和荧光信息，所述散射光信号中至少包括第一角度散射光信息，第一角度散射光信息用于反映细胞粒子的体积大小信息；
数据处理器，用于根据细胞粒子的散射光信息或荧光信息进行白细胞分类和/或计数；
还用于根据细胞粒子的第一角度散射光信息和荧光信息生成散点图，从所述散点图的血影区域中识别出网织红粒子；或者，还用于将第一角度散射光信息和荧光信息分别与对应的预设标准进行比较，根据比较结果，将落入预定范围的粒子识别成网织红粒子。
2.如权利要求1所述的血液分析仪，其特征在于，所述数据处理器从所述散点图的血影区域中识别出网织红粒子包括：将散点图中第一区域内的粒子识别为网织红粒子，所述第一区域是指血影区域中荧光信号强度较大且第一角度散射光信号强度较小的区域。
3.如权利要求1所述的血液分析仪，其特征在于，数据处理器还根据识别出的网织红粒子获得网织红信息。
4.如权利要求3所述的血液分析仪，其特征在于，所述网织红信息包括网织红标志物信息、网织红细胞计数信息、高荧光网织红细胞计数信息、中荧光网织红细胞计数信息、低荧光网织红细胞计数信息、未成熟网织红细胞计数信息和网织红细胞的核酸物质含量中的至少一个。
5.如权利要求4所述的血液分析仪，其特征在于，数据处理器根据网织红粒子的荧光信号强度分布获取高荧光网织红细胞计数信息、中荧光网织红细胞计数信息和低荧光网织红细胞计数信息。
6.如权利要求4所述的血液分析仪，其特征在于，数据处理器通过对网织红粒子的荧光信号强度进行累加得到核酸物质含量。
7.如权利要求3-6任一项所述的血液分析仪，其特征在于，数据处理器还至少根据网织红信息进行报警。
8.如权利要求1-6中任一项所述的血液分析仪，其特征在于，数据处理器还根据细胞粒子的第一角度散射光信息和荧光信息识别大血小板。
9.如权利要求8所述的血液分析仪，其特征在于，所述数据处理器将散点图中第二区域内的粒子识别为大血小板，所述第二区域是指血影区域中荧光信号强度较小且第一角度散射光信号强度较大的区域。
10.如权利要求8所述的血液分析仪，其特征在于，数据处理器还根据识别出的大血小板获得大血小板信息。
11.如权利要求10所述的血液分析仪，其特征在于，大血小板信息包括大血小板的体积大小、大血小板的体积分布和大血小板的计数信息中的至少一个。
12.如权利要求11所述的血液分析仪，其特征在于，数据处理器至少根据大血小板的第一角度散射光信息计算大血小板的体积。
13.如权利要求11所述的血液分析仪，其特征在于，数据处理器还根据大血小板的计数信息进行报警。
14.如权利要求1所述的血液分析仪，其特征在于，数据处理器基于白细胞分布区域确定血影区域。
15.一种血液分析方法,特征在于包括：
采用荧光染色剂对被测血液样本进行染色，采用溶血剂对被测血液样本进行溶血反应，从而制备出测定用试样；
使试样中的细胞粒子逐个通过流动室并接受光照；
接收细胞粒子在光照射下的散射光和荧光，并输出散射光信息和荧光信息，所述散射光信息中至少包括第一角度散射光信息，第一角度散射光信息用于反映细胞粒子的体积大小信息；
根据细胞粒子的散射光信息或荧光信息进行白细胞分类和/或计数；
根据细胞粒子的第一角度散射光信息和荧光信息生成散点图，从所述散点图的血影区域中识别出网织红粒子；或者，将第一角度散射光信息和荧光信息分别与对应的预设标准进行比较，根据比较结果，将落入预定范围的粒子识别成网织红粒子。
16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，从所述散点图的血影区域中识别出网织红粒子包括：将散点图中第一区域内的粒子识别为网织红粒子，所述第一区域是指血影区域中荧光信号强度较大且第一角度散射光信号强度较小的区域。
17.如权利要求15所述的方法，其特征在于还包括：根据识别出的网织红粒子获得网织红信息。
18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述网织红信息包括网织红标志物信息、网织红细胞计数信息、高荧光网织红细胞计数信息、中荧光网织红细胞计数信息、低荧光网织红细胞计数信息、未成熟网织红细胞计数信息和网织红细胞的核酸物质含量中的至少一个。
19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，根据网织红粒子的荧光信号强度分布获取高荧光网织红细胞计数信息、中荧光网织红细胞计数信息、低荧光网织红细胞计数信息。
20.如权利要求18所述的方法，其特征在于，通过对网织红粒子的荧光信号强度进行累加得到核酸物质含量。
21.如权利要求17-20任一项所述的方法，其特征在于，还至少根据网织红信息进行报警。
22.如权利要求15-20中任一项所述的方法，其特征在于还包括，根据细胞粒子的第一角度散射光信息和荧光信息识别大血小板。
23.如权利要求22所述的方法，其特征在于，根据细胞粒子的第一角度散射光信息和荧光信息识别大血小板包括：根据细胞粒子的第一角度散射光信息和荧光信息生成散点图，将散点图中第二区域内的粒子识别为大血小板，所述第二区域是指血影区域中荧光信号强度较小且第一角度散射光信号强度较大的区域。
24.如权利要求22所述的方法，其特征在于还包括，根据识别出的大血小板获得大血小板信息。
25.如权利要求24所述的方法，其特征在于，大血小板信息包括大血小板的体积大小、大血小板的体积分布和大血小板的计数信息中的至少一个。
26.如权利要求25所述的方法，其特征在于，至少根据大血小板的第一角度散射光信息计算大血小板的体积。
27.如权利要求25所述的方法，其特征在于，根据大血小板的计数信息进行报警。
28.如权利要求15所述的方法，其特征在于还包括，基于白细胞分布区域确定血影区域。
29.一种血液分析方法,用于对试样进行分析，所述试样为被测血液样本经荧光染色和溶血反应后生成，其特征在于所述方法包括：
获取表征细胞粒子的第一角度散射光信息和荧光信息的数据，所述第一角度散射光信息和荧光信息基于试样中的细胞粒子逐个通过流动室并接受光照时产生的第一角度散射光和荧光生成，所述第一角度散射光信息用于反映细胞粒子的体积大小信息；
根据细胞粒子的散射光信息或荧光信息进行白细胞分类和/或计数；
根据细胞粒子的第一角度散射光信息和荧光信息生成散点图，从所述散点图的血影区域中识别出网织红粒子，根据识别出的网织红粒子得到网织红信息；或者，将第一角度散射光信息和荧光信息分别与对应的预设标准进行比较，根据比较结果，将落入预定范围的粒子识别成网织红粒子，根据识别出的网织红粒子得到网织红信息。
30.如权利要求29所述的方法，其特征在于，从所述散点图的血影区域中识别出网织红粒子，根据识别出的网织红粒子得到网织红信息，包括：
获取散点图中第一区域内的粒子信息，将第一区域内的粒子信息表征血液中的网织红信息，所述第一区域是指血影区域中荧光信号强度较大且第一角度散射光信号强度较小的区域。
31.如权利要求29所述的方法，其特征在于还包括，根据细胞粒子的第一角度散射光信息和荧光信息获取大血小板信息。
32.如权利要求31所述的方法，其特征在于包括，根据细胞粒子的第一角度散射光信息和荧光信息获取大血小板信息包括：获取第一角度散射光信息和荧光信息的散点图中第二区域内的粒子信息，将第二区域内的粒子信息表征血液中的大血小板信息，所述第二区域是指血影区域中荧光信号较小且第一角度散射光信号较大的区域。
33.一种计算机可读存储介质，其特征在于，包括程序，所述程序能够被数据处理器执行以实现如权利要求15-32中任一项所述的方法。
34.一种血液分析仪，其特征在于包括：
存储器，用于存储程序；
数据处理器，用于通过执行所述存储器存储的程序以实现如权利要求15-32中任一项所述的方法。
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