CN117467582A - 一种利用酸化油废水的微生物菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种利用酸化油废水的微生物菌剂及其制备方法和应用，属于微生物技术领域。本发明筛选分离得到一株地衣芽孢杆菌，其具有优异的解磷作用，可以将废水中的磷脂充分转化为植物可吸收的磷形态。而使用的铜绿假单胞菌可以高效的降解有机物，沙上黄杆菌具有良好的生物发酵效果，在混合发酵过程中，能够产生物表面活性剂，促进与固态吸附料的发酵效果，同时可以加强地衣芽孢杆菌以及铜绿假单胞菌的分解效果，因此三者等比例混合后，复合菌剂具有较高的降解和发酵效率。本发明提供的复合菌剂能够在好氧及兼氧条件下均有较好发酵效果，无需翻堆，简化了处理工艺，所得有机肥技术标准高于相关标准。

Description

一种利用酸化油废水的微生物菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种利用酸化油废水的微生物菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
酸化油是生产工业油酸、脂肪酸和生物柴油等日化产品的主要原料，植物油精炼过程中的副产物（废油、皂脚、油脚等）用工业硫酸酸化加工后得到植物酸化油，加工过程中油水分离工序会产生大量废水——植物酸化油废水。植物酸化油废水中含有高浓度的有机物，最典型的中性油脂、长链脂肪酸和甘油等，会导致水体的COD、BOD5的值迅速升高‚若直接排放会严重污染环境。因此‚对酸化油水解废水的处理工艺进行研究有着重要意义。
当前，国内外关于植物酸化油废水的处理的研究还比较少，随着植物酸化油的生产工艺的日渐成熟，关于该种类型的废水处理措施也逐渐受到研究者和工程师们的关注。早年关于植物酸化油废水的研究主要是集中在从酸化油水解废水中提取甘油和回收利用，国内关于植物酸化油废水的处理研究也是在近几年才出现。目前植物酸化油废水处理的研究主要包括物理化学法、生化法和高级氧化法。
物理化学法处理植物酸化油废水主要集中在传统的投加化学药剂的化学法和物化混凝法，此类方法在传统的废水处理工艺中非常常见，此类方法操作简单，效果稳定，不足之处在于成本较高。除了传统的工艺研究外，还有学者将电化学法应用于植物酸化油的废水处理过程中，一定程度降低了运行成本。
当前对植物酸化油废水的生化处理研究还比较少，且近几年才出现相关研究，研究的还仅停留在整个生化工艺的处理效能的层面，对生化工艺中各个单元的影响因素分析、参数优化及机理解释等方面还较为欠缺。相较于物理化学法和高级氧化法，生化法处理植物酸化油废水有明显的经济优势，运行成本很低，对企业有非常大的吸引力。
而现有技术对于酸化油废水的处理，基本集中与如何降低水中COD、BOD5以及水中氨氮等指标的含量，以期水质达到排放标准，对于如何资源化利用废水，目前这一领域的研究非常少。
发明内容
本发明针对现有技术存在的问题，开发一种微生物发酵菌剂，其可以高效利用酸化油产生的废水，资源化利用废水中的氮磷资源，将其制备为生物有机肥，实现废水的资源化利用。
为实现上述技术目的，本发明所采用的技术方案为：
一种利用酸化油废水的微生物菌剂，包含复合微生物菌粉和载体。
进一步的，所述复合微生物菌粉包含地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、沙上黄杆菌（Flavobacterium sasangense）和铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。
进一步的，所述地衣芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.28445，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2023年09月12日。
本发明地衣芽孢杆菌为发明人于2022年在山东省临沂市费县某农田土壤中分离得到，分离方法为：采用5点取样法，取土壤后分别装入灭菌的容器中，将土样7g加入50mL无菌水中，200r/min下于摇床振荡培养2h后，使用无菌纱布过滤得悬浮液并采用10倍系列稀释法得到10倍稀释液。分别取100μL稀释液均匀涂布于分离培养基上，于28-30℃恒温培养箱中培养48h后，挑取颜色、光泽度、大小和类型不同的单菌落，划线纯化菌株，统一编号后转入LB斜面培养基中，用80％灭菌甘油保存，置于-70℃保存备用。
分离培养基：蔗糖5.0g，KH2PO40.5 g，MgSO4·7H2O0.5g，CaCO35g，琼脂20g，去离子水1.0L，pH7.2-7.5，121℃灭菌20 min。
菌株筛选：将分离得到的菌株活化后转接到装有100mL磷脂液体培养基中，恒温培养3d，涂布，记录菌数，同时测量溶磷圈的大小，选取溶磷圈大的菌株为目标菌。菌株单菌落呈水滴装，菌落无色透明，边缘光滑，表面湿润且黏稠，菌落直径约为0.5mm。
磷脂液体培养基：蔗糖（葡萄糖)10.0g，（NH4)2SO4 0.5g，NaCl0.3g，MgSO4·7H2O0.3g，FeSO4·7H2O（微量)0.03g，NaCl0.3g，MnSO4·7H2O（微量)0.03g，CaCO35.0g，磷脂1.0g（磷脂用时先溶于75%乙醇中)，去离子水1L，琼脂18-20g，pH7.2-7.4。
进一步的，所述沙上黄杆菌的保藏编号为CGMCC No.1.12366，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCCNo.1.15148，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
进一步的，所述复合微生物菌粉的制备方法为：将地衣芽孢杆菌、沙上黄杆菌和铜绿假单胞菌三种菌株活化后分别接种到LB培养基中，培养12h，培养液在8000r/min离心10min，收集菌体用无菌水洗涤后再离心1次，去掉上清液后加磷酸缓冲液制成OD600为0.7的菌悬液，再将三种菌悬液按照体积比1:1:1混合后，得到混合菌液，将混合菌液按照接种质量比0.05:100，接种于麸皮中，拌匀，28-30℃培养2d，取出室温烘干，得活菌指数是2亿-3亿/g复合微生物菌粉。所述磷酸盐缓冲液为市售产品，也可自行配制，配制方法为：称取8.0gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4、0.24g KH2PO4溶于800mL蒸馏水中，用HCl调节溶液至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可得。
更进一步的，所述LB培养基的组成为：NaCl10g/L，酵母膏5g/L，胰蛋白胨10g/L，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2。
进一步的，所述载体为硅藻土。
一种利用酸化油废水的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将硅藻土置于质量浓度为8％-12％的盐酸溶液中浸泡40-60分钟，抽滤后将所得物料烘干，在680-720℃下进行高温煅烧30-50min，取出冷却到室温后，通过研磨机研磨成120-160目的细粉；
(2)制备复合微生物菌粉；
(3)将微生物菌粉和载体按照质量比1:10充分混合均匀后得到微生物菌剂。
一种利用酸化油废水的微生物菌剂的应用，利用酸化油废水经过酶解、配料发酵后制备生物有机肥。
进一步的，酸化油废水指的是，粮油的脂肪酸废水，优选大豆油的脂肪酸废水。
应用本发明微生物菌剂制备生物有机肥的方法为：
（1）将酸化油的废水，静置后去除浮油，负压变温蒸发去除部分水分，再降温结晶后离心分离，得到液体，其富含磷脂，即称为磷脂液；
（2）向磷脂液中加入碱液调节体系pH为7左右，再加入复合酶，进行酶解后，再加入固态吸附料，最后加入本发明微生物菌剂，进行混合后静置发酵即可，发酵温度28-32℃，发酵时间24-30h。
步骤（2）中复合酶为蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和磷脂酶的混合，质量比为1:1:1:1，复合酶的加入量为磷脂液质量的0.5-1%；
步骤（2）固态吸附料为草木灰和稻壳粉，两者质量比为3:10，固态吸附料和磷脂液的固液比为100g:50mL。
按质量比微生物菌剂的加入量为，微生物菌剂：固态吸附料=1g：50g。
脂肪酸工业生产过程中会产生大量氮磷含量高的酸化油废水。目前，我国有关酸化油废水的处理工艺尚不完善，导致仍有部分酸化油废水未经处理直接排放入自然水体中，造成周边湖泊、水库等地表水体的富营养化问题，严重危害到了饮用水源的安全问题。另一方面，磷作为一种不可再生的资源在人类、动植物等生命活动中起着不可或缺的作用。因此，对酸化油废水中氮磷的回收不仅能缓解水资源短缺的危机，且有利于资源的可持续发展。
有益效果：本发明筛选分离得到一株地衣芽孢杆菌，其具有优异的解磷作用，可以将废水中的磷脂充分转化为植物可吸收的磷形态。而使用的铜绿假单胞菌同样可以高效的降解有机磷，沙上黄杆菌具有良好的生物发酵效果，在混合发酵过程中，能够产生物表面活性剂，促进与固态吸附料的发酵效果，同时可以加强地衣芽孢杆菌以及铜绿假单胞菌的分解效果，因此三者等比例混合后，复合菌剂具有较高的降解和发酵效率。本发明提供的复合菌剂能够在好氧及兼氧条件下均有较好发酵效果，即使在实际生物堆肥发酵过程中堆体底部氧含量不足，也不会影响本发明的降解效率，无需翻堆，简化了处理工艺，节省人力及成本。所得有机肥技术标准高于相关标准。
附图说明
图1为本发明三种菌株的溶磷圈照片，其中A为地衣芽孢杆菌、B为沙上黄杆菌、C为铜绿假单胞菌。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但不限于此。
实施例1
一种利用酸化油废水的微生物菌剂，包含复合微生物菌粉和载体。
所述复合微生物菌粉包含地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、沙上黄杆菌（Flavobacterium sasangense）和铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。
所述地衣芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.28445，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2023年09月12日。
本发明地衣芽孢杆菌为发明人于2022年在山东省临沂市费县某农田土壤中分离得到，分离方法为：采用5点取样法，取土壤后分别装入灭菌的容器中，将土样7g加入50mL无菌水中，200r/min下于摇床振荡培养2h后，使用无菌纱布过滤得悬浮液并采用10倍系列稀释法得到10倍稀释液。分别取100μL稀释液均匀涂布于分离培养基上，于28-30℃恒温培养箱中培养48h后，挑取颜色、光泽度、大小和类型不同的单菌落，划线纯化菌株，统一编号后转入LB斜面培养基中，用80％灭菌甘油保存，置于-70℃保存备用。
分离培养基：蔗糖5.0g，KH2PO40.5 g，MgSO4·7H2O0.5g，CaCO3 5g，琼脂20g，去离子水1.0L，pH7.2-7.5，121℃灭菌20 min。
菌株筛选：将分离得到的菌株活化后转接到装有100mL磷脂液体培养基中，恒温培养3d，涂布，记录菌数，同时测量溶磷圈的大小，选取溶磷圈大的菌株为目标菌。菌株单菌落呈水滴装，菌落无色透明，边缘光滑，表面湿润且黏稠，菌落直径约为0.5mm。
磷脂液体培养基：蔗糖（葡萄糖)10.0g，（NH4)2SO4 0.5g，NaCl0.3 g，MgSO4·7H2O0.3g，FeSO4·7H2O（微量)0.03 g，NaCl0.3g，MnSO4·7H2O（微量)0.03g，CaCO35.0g，磷脂1.0g（磷脂用时先溶于75%乙醇中)，去离子水1L，琼脂18-20g，pH7.2-7.4。
所述沙上黄杆菌的保藏编号为CGMCC No.1.12366，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCC No.1.15148，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
所述复合微生物菌粉的制备方法为：将地衣芽孢杆菌、沙上黄杆菌和铜绿假单胞菌三种菌株活化后分别接种到LB培养基中，培养12h，培养液在8000r/min离心10min，收集菌体用无菌水洗涤后再离心1次，去掉上清液后加磷酸缓冲液制成OD600为0.7的菌悬液，再将三种菌悬液按照体积比1:1:1混合后，得到混合菌液，将混合菌液按照接种质量比0.05:100，接种于麸皮中，拌匀，28-30℃培养2d，取出室温烘干，得活菌指数是2亿-3亿/g复合微生物菌粉。所述磷酸盐缓冲液为市售产品，也可自行配制，配制方法为：称取8.0gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4、0.24g KH2PO4溶于800mL蒸馏水中，用HCl调节溶液至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可得。
所述LB培养基的组成为：NaCl10g/L，酵母膏5g/L，胰蛋白胨10g/L，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2。
所述载体为硅藻土。
一种利用酸化油废水的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将硅藻土置于质量浓度为8％的盐酸溶液中浸泡40分钟，抽滤后将所得物料烘干，在680℃下进行高温煅烧30min，取出冷却到室温后，通过研磨机研磨成120-160目的细粉；
(2)制备复合微生物菌粉；
(3)将微生物菌粉和载体按照质量比1:10充分混合均匀后得到微生物菌剂。
一种利用酸化油废水的微生物菌剂的应用，利用酸化油废水经过酶解、配料发酵后制备生物有机肥。
酸化油废水指的是大豆油的脂肪酸废水。
应用本实施例微生物菌剂制备生物有机肥的方法为：
将酸化油的废水，静置后去除浮油，负压变温蒸发去除部分水分，再降温结晶后离心分离，得到液体，其富含磷脂，即称为磷脂液；
向磷脂液中加入碱液调节体系pH为7左右，再加入复合酶，进行酶解后，再加入固态吸附料，最后加入本发明微生物菌剂，进行混合后静置发酵即可，发酵温度28-32℃，发酵时间24h。
步骤（2）中复合酶为蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和磷脂酶的混合，质量比为1:1:1:1，复合酶的加入量为磷脂液质量的0.5%；
步骤（2）固态吸附料为草木灰和稻壳粉，两者质量比为3:10，固态吸附料和磷脂液的固液比为100g:50mL。
按质量比微生物菌剂的加入量为，微生物菌剂：固态吸附料=1g：50g。
实施例2
一种利用酸化油废水的微生物菌剂，包含复合微生物菌粉和载体。
所述复合微生物菌粉包含地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、沙上黄杆菌（Flavobacterium sasangense）和铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。
所述地衣芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.28445，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2023年09月12日。
本实施例地衣芽孢杆菌为发明人于2022年在山东省临沂市费县某农田土壤中分离得到，分离筛选方法同实施例1。
所述沙上黄杆菌的保藏编号为CGMCC No.1.12366，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCC No.1.15148，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
所述复合微生物菌粉的制备方法为：将地衣芽孢杆菌、沙上黄杆菌和铜绿假单胞菌三种菌株活化后分别接种到LB培养基中，培养12h，培养液在8000r/min离心10min，收集菌体用无菌水洗涤后再离心1次，去掉上清液后加磷酸缓冲液制成OD600为0.7的菌悬液，再将三种菌悬液按照体积比1:1:1混合后，得到混合菌液，将混合菌液按照接种质量比0.05:100，接种于麸皮中，拌匀，28-30℃培养2d，取出室温烘干，得活菌指数是2亿-3亿/g复合微生物菌粉。所述磷酸盐缓冲液为市售产品，也可自行配制，配制方法为：称取8.0gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4、0.24g KH2PO4溶于800mL蒸馏水中，用HCl调节溶液至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可得。
所述LB培养基的组成为：NaCl10g/L，酵母膏5g/L，胰蛋白胨10g/L，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2。
所述载体为硅藻土。
一种利用酸化油废水的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将硅藻土置于质量浓度为10％的盐酸溶液中浸泡50分钟，抽滤后将所得物料烘干，在700℃下进行高温煅烧40min，取出冷却到室温后，通过研磨机研磨成120-160目的细粉；
(2)制备复合微生物菌粉；
(3)将微生物菌粉和载体按照质量比1:10充分混合均匀后得到微生物菌剂。
一种利用酸化油废水的微生物菌剂的应用，利用酸化油废水经过酶解、配料发酵后制备生物有机肥。
酸化油废水指的是，大豆油的脂肪酸废水。
应用本实施例微生物菌剂制备生物有机肥的方法为：
（1）将酸化油的废水，静置后去除浮油，负压变温蒸发去除部分水分，再降温结晶后离心分离，得到液体，其富含磷脂，即称为磷脂液；
（2）向磷脂液中加入碱液调节体系pH为7左右，再加入复合酶，进行酶解后，再加入固态吸附料，最后加入本发明微生物菌剂，进行混合后静置发酵即可，发酵温度28-32℃，发酵时间28h。
步骤（2）中复合酶为蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和磷脂酶的混合，质量比为1:1:1:1，复合酶的加入量为磷脂液质量的0.7%；
步骤（2）固态吸附料为草木灰和稻壳粉，两者质量比为3:10，固态吸附料和磷脂液的固液比为100g:50mL。
按质量比微生物菌剂的加入量为，微生物菌剂：固态吸附料=1g：50g。
实施例3
一种利用酸化油废水的微生物菌剂，包含复合微生物菌粉和载体。
所述复合微生物菌粉包含地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、沙上黄杆菌（Flavobacterium sasangense）和铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。
所述地衣芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.28445，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2023年09月12日。
本实施例地衣芽孢杆菌为发明人于2022年在山东省临沂市费县某农田土壤中分离得到，分离筛选方法同实施例1。
所述沙上黄杆菌的保藏编号为CGMCC No.1.12366，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCC No.1.15148，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
所述复合微生物菌粉的制备方法为：将地衣芽孢杆菌、沙上黄杆菌和铜绿假单胞菌三种菌株活化后分别接种到LB培养基中，培养12h，培养液在8000r/min离心10min，收集菌体用无菌水洗涤后再离心1次，去掉上清液后加磷酸缓冲液制成OD600为0.7的菌悬液，再将三种菌悬液按照体积比1:1:1混合后，得到混合菌液，将混合菌液按照接种质量比0.05:100，接种于麸皮中，拌匀，28-30℃培养2d，取出室温烘干，得活菌指数是2亿-3亿/g复合微生物菌粉。所述磷酸盐缓冲液为市售产品，也可自行配制，配制方法为：称取8.0gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4、0.24g KH2PO4溶于800mL蒸馏水中，用HCl调节溶液至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可得。
所述LB培养基的组成为：NaCl10g/L，酵母膏5g/L，胰蛋白胨10g/L，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2。
所述载体为硅藻土。
一种利用酸化油废水的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将硅藻土置于质量浓度为12％的盐酸溶液中浸泡60分钟，抽滤后将所得物料烘干，在720℃下进行高温煅烧50min，取出冷却到室温后，通过研磨机研磨成120-160目的细粉；
（2）制备复合微生物菌粉；
（3）将微生物菌粉和载体按照质量比1:10充分混合均匀后得到微生物菌剂。
一种利用酸化油废水的微生物菌剂的应用，利用酸化油废水经过酶解、配料发酵后制备生物有机肥。
酸化油废水指的是，大豆油的脂肪酸废水。
应用本实施例微生物菌剂制备生物有机肥的方法为：
（1）将酸化油的废水，静置后去除浮油，负压变温蒸发去除部分水分，再降温结晶后离心分离，得到液体，其富含磷脂，即称为磷脂液；
（2）向磷脂液中加入碱液调节体系pH为7左右，再加入复合酶，进行酶解后，再加入固态吸附料，最后加入本发明微生物菌剂，进行混合后静置发酵即可，发酵温度28-32℃，发酵时间24-30h。
步骤（2）中复合酶为蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和磷脂酶的混合，质量比为1:1:1:1，复合酶的加入量为磷脂液质量的1%；
步骤（2）固态吸附料为草木灰和稻壳粉，两者质量比为3:10，固态吸附料和磷脂液的固液比为100g:50mL。
按质量比微生物菌剂的加入量为，微生物菌剂：固态吸附料=1g：50g。
对比例1
一种利用酸化油废水的微生物菌剂，包含复合微生物菌粉和载体。
所述复合微生物菌粉包含沙上黄杆菌（ Flavobacterium sasangense）和铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。
所述沙上黄杆菌的保藏编号为CGMCC No.1.12366，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCC No.1.15148，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
所述复合微生物菌粉的制备方法为：将沙上黄杆菌和铜绿假单胞菌两种菌株活化后分别接种到LB培养基中，培养12h，培养液在8000r/min离心10min，收集菌体用无菌水洗涤后再离心1次，去掉上清液后加磷酸缓冲液制成OD600为0.7的菌悬液，再将两种菌悬液按照体积比1:1混合后，得到混合菌液，将混合菌液按照接种质量比0.05:100，接种于麸皮中，拌匀，28-30℃培养2d，取出室温烘干，得活菌指数是2亿-3亿/g复合微生物菌粉。
本对比例，除了在复合微生物菌粉的制备中，不使用地衣芽孢杆菌外，其余原料和工艺步骤均同实施例3。
对比例2
一种利用酸化油废水的微生物菌剂，包含复合微生物菌粉和载体。
所述复合微生物菌粉包含地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）和铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。
所述地衣芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.28445，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2023年09月12日。
本对比例地衣芽孢杆菌为发明人于2022年在山东省临沂市费县某农田土壤中分离得到，分离筛选方法同实施例1。
所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCC No.1.15148，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
所述复合微生物菌粉的制备方法为：将地衣芽孢杆菌和铜绿假单胞菌两种菌株活化后分别接种到LB培养基中，培养12h，培养液在8000r/min离心10min，收集菌体用无菌水洗涤后再离心1次，去掉上清液后加磷酸缓冲液制成OD600为0.7的菌悬液，再将两种菌悬液按照体积比1:1混合后，得到混合菌液，将混合菌液按照接种质量比0.05:100，接种于麸皮中，拌匀，28-30℃培养2d，取出室温烘干，得活菌指数是2亿-3亿/g复合微生物菌粉。
本对比例，除了在复合微生物菌粉的制备中，不使用沙上黄杆菌外，其余原料和工艺步骤均同实施例3。
对比例3
一种利用酸化油废水的微生物菌剂，包含复合微生物菌粉和载体。
所述复合微生物菌粉包含地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、沙上黄杆菌（ Flavobacterium sasangense）。
所述地衣芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.28445，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2023年09月12日。
本对比例地衣芽孢杆菌为发明人于2022年在山东省临沂市费县某农田土壤中分离得到，分离筛选方法同实施例1。
所述沙上黄杆菌的保藏编号为CGMCC No.1.12366，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
所述复合微生物菌粉的制备方法为：将地衣芽孢杆菌、沙上黄杆菌两种菌株活化后分别接种到LB培养基中，培养12h，培养液在8000r/min离心10min，收集菌体用无菌水洗涤后再离心1次，去掉上清液后加磷酸缓冲液制成OD600为0.7的菌悬液，再将两种菌悬液按照体积比1:1混合后，得到混合菌液，将混合菌液按照接种质量比0.05:100，接种于麸皮中，拌匀，28-30℃培养2d，取出室温烘干，得活菌指数是2亿-3亿/g复合微生物菌粉。
本对比例，除了在复合微生物菌粉的制备中，不使用铜绿假单胞菌外，其余原料和工艺步骤均同实施例3。
解磷能力测定
待测菌液为：实施例1-3、对比例1-3在复合微生物菌粉制备中所得混合菌液。
解磷能力的定性评价应用点培养法。使用灭菌的牙签，将地衣芽孢杆菌、沙上黄杆菌和铜绿假单胞菌分别点接种于以磷脂为磷源的有机磷固体培养基平板上，每个平板接种3个点，3组平行试验，置于28-30℃恒温培养10d，观察有无透明圈的产生，并每天测量透明圈直径(含菌落)与菌落直径，计算解磷指数，解磷指数A/B，其中A是包括菌落在内的透明圈直径，B是菌落直径。解磷指数大于1表明菌株在平板上有解磷活性。三种菌株的溶磷圈照片如图1所示。
有机磷固体培养基：
解磷能力的定量评价应用钼锑抗比色法，将实施例1-3、对比例1-3在复合微生物菌粉制备中所得混合菌液接种到磷脂为唯一磷源的有机磷液体培养基中，180r/min，28-30℃培养。定期取培养液用钼锑抗比色法测定其可溶磷的含量。
表1解磷能力定性评价效果
所选三种菌株，地衣芽孢杆菌具有优良的解磷效果，而其他两种菌株相对较弱。
表2解磷能力定量评价效果
将混合菌液接种到磷脂为唯一磷源的有机磷液体培养基中，可溶性磷含量在发酵4d后达到最大值，实施例组最大可溶磷含量不低于3.2mg/L，而对比例组，在1.6mg/L以下。可见，三种菌的菌悬液等比例混合后，具有相互促进的作用。
制备生物有机肥
实验用废水：自于粮油(大豆油)的脂肪酸废水，其主要水质指标为：pH=3.05，总磷为4650mg/L，氨氮501mg/L，总氮1758mg/L。
实验菌剂：实施例1-3、对比例1-3所得菌剂。
应用本发明微生物菌剂制备生物有机肥的方法为：
（1）将酸化油的废水，静置后去除浮油，负压变温蒸发去除部分水分，再降温结晶后离心分离，得到液体，其富含磷脂，即称为磷脂液；
（2）向磷脂液中加入碱液调节体系pH为7左右，再加入复合酶，进行酶解后，再加入固态吸附料，最后加入微生物菌剂，进行混合后静置发酵即可，发酵温度28-32℃，发酵时间30h。发酵完成后阴干，控制水分含量小于20%，粉碎后过筛，得终产品，封装即可。
步骤（2）中复合酶为蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和磷脂酶的混合，质量比为1:1:1:1，复合酶的加入量为磷脂液质量的0.5%；
步骤（2）固态吸附料为草木灰和稻壳粉，两者质量比为3:10，固态吸附料和磷脂液的固液比为100g:50mL。
按质量比微生物菌剂的加入量为，微生物菌剂：固态吸附料=1g：50g。
性能测定
有效活菌数、有机质等指标：参照NY 884—2012生物有机肥的测定方法进行。
种子发芽指数测定：以NY/T 525—2021对本试验生物有机肥进行腐熟度“种子发芽指数（GI）”测定，以萝卜籽发芽进行测试，公式如下。种子发芽指数GI（%）=（处理种子发芽率×处理种子根长）（/对照种子发芽率×对照种子根长）×100。
参考标准：农用微生物菌剂GB20287—2006和有机肥料NY/T 525—2021标准。
表3有机肥性能指标
从表中数据我们可以看出，本发明菌剂发酵得到的有机肥，各项性能指标符合国标要求，而改变了菌剂组成的对比例1-3，其各项性能呈现弱化趋势，这是由于三种菌株间的协同作用失衡，降解发酵效果下降。因此，本发明菌株的选择对本发明技术效果的实现至关重要，缺一则效弱。
需要说明的是，上述实施例仅仅是实现本发明的优选方式的部分实施例，而非全部实施例。显然，基于本发明的上述实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的其他所有实施例，都应当属于本发明保护的范围。

Claims (8)

1.一种利用酸化油废水的微生物菌剂，其特征在于，包含复合微生物菌粉和载体。
2.根据权利要求1所述利用酸化油废水的微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌粉包含地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、沙上黄杆菌（Flavobacteriumsasangense）和铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。
3.根据权利要求2所述利用酸化油废水的微生物菌剂，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.28445，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述沙上黄杆菌的保藏编号为CGMCC No.1.12366，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCC No.1.15148，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
4.根据权利要求2所述利用酸化油废水的微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌粉的制备方法为：将地衣芽孢杆菌、沙上黄杆菌和铜绿假单胞菌三种菌株活化后分别接种到LB培养基中，培养12h，培养液在8000r/min离心10min，收集菌体用无菌水洗涤后再离心1次，去掉上清液后加磷酸缓冲液制成OD600为0.7的菌悬液，再将三种菌悬液按照体积比1:1:1混合后，得到混合菌液，将混合菌液按照接种质量比0.05:100，接种于麸皮中，拌匀，28-30℃培养2d，取出室温烘干，得活菌指数是2亿-3亿/g复合微生物菌粉。
5.根据权利要求4所述利用酸化油废水的微生物菌剂，其特征在于，所述LB培养基的组成为：NaCl10g/L，酵母膏5g/L，胰蛋白胨10g/L，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2。
6.根据权利要求1所述利用酸化油废水的微生物菌剂，其特征在于，所述载体为硅藻土。
7.一种权利要求1-6任意一项所述利用酸化油废水的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将硅藻土置于质量浓度为8％-12％的盐酸溶液中浸泡40-60分钟，抽滤后将所得物料烘干，在680-720℃下进行高温煅烧30-50min，取出冷却到室温后，通过研磨机研磨成120-160目的细粉；
(2)制备复合微生物菌粉；
(3)将微生物菌粉和载体按照质量比1:10充分混合均匀后得到微生物菌剂。
8.一种权利要求1-6任意一项所述利用酸化油废水的微生物菌剂的应用，其特征在于，利用酸化油废水经过酶解、配料发酵后制备生物有机肥。
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Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20020069556A (ko) * 2001-02-26 2002-09-05 변유량 유지함유폐수의 생물학적 처리방법
JP2011182782A (ja) * 2010-02-09 2011-09-22 Sekisui Aqua System Kk 油脂分解微生物、微生物固定化担体、廃水の処理方法、並びに、廃水処理システム
CN103756941A (zh) * 2014-01-26 2014-04-30 北京绿色能量环境工程有限公司 一种微生物复合菌剂及其处理方法和应用
CN105779365A (zh) * 2016-05-17 2016-07-20 山东省林业科学研究院 一株景天根际促生铜绿假单胞菌及其应用
CN105859060A (zh) * 2016-06-21 2016-08-17 呼伦贝尔东北阜丰生物科技有限公司 一种污水脱磷脱氮的处理方法
CN110143732A (zh) * 2019-07-01 2019-08-20 临沂明英工贸有限公司 一种植物油副产品加工废水处理方法
CN110616179A (zh) * 2019-11-13 2019-12-27 东莞市农业科学研究中心 一株铜绿假单胞菌dgnk-jl2及其应用
CN111304128A (zh) * 2020-03-09 2020-06-19 西南交通大学 餐厨油脂废水处理复合微生物菌剂及其制备方法与应用
CN112551830A (zh) * 2020-12-28 2021-03-26 江苏禾丰粮油工业有限公司 一种外加式电场强化复合微生物菌剂处理油脂加工废水的方法
CN113136354A (zh) * 2021-06-07 2021-07-20 阳煤丰喜肥业（集团）有限责任公司闻喜复肥分公司 一种促进小麦生长的微生物菌剂及其制备方法
CN115992063A (zh) * 2022-08-29 2023-04-21 甘肃省科学院生物研究所 一种抗盐碱复合微生物菌剂、制备方法及应用

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20020069556A (ko) * 2001-02-26 2002-09-05 변유량 유지함유폐수의 생물학적 처리방법
JP2011182782A (ja) * 2010-02-09 2011-09-22 Sekisui Aqua System Kk 油脂分解微生物、微生物固定化担体、廃水の処理方法、並びに、廃水処理システム
CN103756941A (zh) * 2014-01-26 2014-04-30 北京绿色能量环境工程有限公司 一种微生物复合菌剂及其处理方法和应用
CN105779365A (zh) * 2016-05-17 2016-07-20 山东省林业科学研究院 一株景天根际促生铜绿假单胞菌及其应用
CN105859060A (zh) * 2016-06-21 2016-08-17 呼伦贝尔东北阜丰生物科技有限公司 一种污水脱磷脱氮的处理方法
CN110143732A (zh) * 2019-07-01 2019-08-20 临沂明英工贸有限公司 一种植物油副产品加工废水处理方法
CN110616179A (zh) * 2019-11-13 2019-12-27 东莞市农业科学研究中心 一株铜绿假单胞菌dgnk-jl2及其应用
CN111304128A (zh) * 2020-03-09 2020-06-19 西南交通大学 餐厨油脂废水处理复合微生物菌剂及其制备方法与应用
CN112551830A (zh) * 2020-12-28 2021-03-26 江苏禾丰粮油工业有限公司 一种外加式电场强化复合微生物菌剂处理油脂加工废水的方法
CN113136354A (zh) * 2021-06-07 2021-07-20 阳煤丰喜肥业（集团）有限责任公司闻喜复肥分公司 一种促进小麦生长的微生物菌剂及其制备方法
CN115992063A (zh) * 2022-08-29 2023-04-21 甘肃省科学院生物研究所 一种抗盐碱复合微生物菌剂、制备方法及应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HWAN SIK YOON ET AL.: "Flavobacterium sasangense sp. nov., isolated from a wastewater stream polluted with heavy metals", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF SYSTEMATIC AND EVOLUTIONARY MICROBIOLOGY 》, vol. 59, 31 December 2009 (2009-12-31), pages 1162 *
王雪郦等: "不良环境解磷微生物研究进展", 《河南农业科学》, vol. 49, no. 7, 31 December 2020 (2020-12-31), pages 8 - 17 *

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