CN115097141A - 一种脂联素试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种脂联素试剂盒及其制备方法，该脂联素试剂盒包括R1试剂、R2试剂，其中R1试剂包括：缓冲液A 25～100mM、稳定剂A 3～11g/L、防腐剂A 2～4g/L、反应增强剂2～7g/L、表面活性剂2～5g/L；R2试剂包括：缓冲液B 25～100mM、稳定剂B 3～11g/L、防腐剂B 2～4g/L、偶联有脂联素抗体的胶乳微球1～2mg/L。本发明的脂联素试剂盒灵敏度高、稳定性好、准确性高、线性范围宽，冷藏保存有效期18个月以上，操作简便，可用于临床检测，对肥胖、糖尿病、冠心病、心血管疾病等疾病进行防治。

Description

一种脂联素试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，尤其是一种脂联素试剂盒及其制备方法和应用。
背景技术
脂联素(Adiponectin/ADPN)是脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽或蛋白质。对人体的研究发现，脂联素水平能预示II型糖尿病和冠心病的发展，并在临床试验表现出抗糖尿病、抗动脉粥样和炎症的潜力。
人类脂联素含244个氨基酸，包括3个区域：氨基末端信号序列、胶原结构域和羧基末端的球形结构域。脂联素以三聚体、六聚体和高分子量聚合体三种亚型存在于血液中。临床研究显示，脂联素与II型糖尿病、冠心病、胰岛素抵抗密切相关，具有抗动脉粥样硬化形成、抗炎症和血管损伤后抗内膜增生的特性。根据国际糖尿病联会的资料，目前全球有超过3亿8千万的糖尿病患者，并且有46％的患者直到发生严重的糖尿病并发症之后才被发现。脂联素试剂盒可以检测人血中的脂联素水平，可以为糖尿病等疾病提供有价值的信息，实现对糖尿病早发现、早治疗，从而降低糖尿病的发病率。
目前，脂联素的检测方法主要有化学发光法、酶联免疫分析法、放射免疫法和胶乳免疫比浊法。化学发光法虽然灵敏简便，但是选择性差，会对一个系列的化合物做出反应，而不是针对单个的某一化合物，特异性较差。酶联免疫分析法灵敏度较高，但是操作繁琐，且难易实现自动化检测。放射免疫法优点是灵敏度较高，但是有着操作繁琐、耗时长、易受人为操作和外界因素干扰、自动化程度低等缺点，且放射性标记物会对操作者产生危害，对环境造成污染。胶乳增强免疫比浊法由于快速简便，精密度高、易于自动化、适于大批量标本同时检测等优点，被人广泛应用。然而，现有的胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒仍存在一些缺陷有待改进，如有的试剂盒灵敏度不够，有的则是稳定性不够，或者是生产效率低，成本大。
为了促进脂联素检测方法的推广应用，有必要研究一种准确度高、灵敏度高、稳定性好的脂联素试剂盒。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种脂联素试剂盒及其制备方法，该脂联素试剂盒具有准确度高、灵敏度高、稳定性好、生产效率高等优点。
为实现上述目的，本发明提供的方案如下：
一种脂联素试剂盒，包括R1试剂、R2试剂，溶剂为纯化水；其中，
所述的R1试剂包括：缓冲液A25～100mM、稳定剂A3～11g/L、防腐剂A2～4g/L、反应增强剂2～7g/L、表面活性剂2～5g/L；
所述的R2试剂包括：缓冲液B 25～100mM、稳定剂B 3～11g/L、防腐剂B 2～4g/L、偶联有脂联素抗体的胶乳微球1～2mg/L。
具体地，所述的缓冲液A和缓冲液B为甘氨酸缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液中的两种或三种结合。
优选地，所述的缓冲液A和缓冲液B为甘氨酸缓冲液10～50mM，MES缓冲液5～25mM，MOPS缓冲液10～25mM。
优选地，所述的稳定剂A和稳定剂B成分为：牛血清白蛋白1～3g/L、酪蛋白1～3g/L、甘露醇1～5g/L。
优选地，所述的防腐剂A和防腐剂B成分为：叠氮钠1～2g/L、Proclin300 1～2g/L。
优选地，所述R1试剂中的反应增强剂成分为：聚乙二醇6000 1～4g/L、聚乙二醇80001～3g/L。
优选地，所述R1试剂中的表面活性剂成分为：Tween20 1～2.5g/L、Triton-X100 1～2.5g/L。
优选地，所述的脂联素抗体为人脂联素单克隆抗体，抗体的加入量为0.1～0.5mg/L。
优选地，所述的偶联有脂联素抗体的胶乳微球的粒径为240nm。
具体地，所述脂联素试剂盒的制备方法为：
1)R1试剂的制备：按照脂联素R1试剂的组分含量，将各组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得脂联素R1试剂；
2)R2试剂的制备：
①活化：取缓冲液B总量的40-60％，加入胶乳微球，在37℃摇床搅拌10-15min混匀，再加入偶联剂，继续搅拌30-35min混匀，分别得到活化胶乳微球；
②标记：向活化胶乳微球中边搅拌边加入脂联素抗体，在37℃摇床搅拌60-120min混匀，得到偶联有脂联素抗体的胶乳微球；
③封闭：向偶联有脂联素抗体的胶乳微球加入防腐剂B和稳定剂B，充分溶解混合40-60min进行封闭，即得封闭胶乳微球；
④向封闭胶乳微球中加入剩余的缓冲液B，混合均匀，即得R2试剂；
3)将R1试剂以及R2试剂单独分装，密封保存，即得脂联素试剂盒。
具体地，所述的偶联剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，偶联剂的加入量为0.1-0.2g/L。添加偶联剂可将乳胶微球进行活化，提高欧联反应的效率。
本发明使用的脂联素单克隆抗体外购于南京立顶生物科技有限公司，胶乳微球外购于日本JSR公司，粒径为240nm。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明的脂联素试剂盒灵敏度高、稳定性好、准确性高、线性范围宽，2～8℃条件下保存有效期18个月以上，操作简便，可用于临床检测，对肥胖、糖尿病、冠心病、心血管疾病等疾病的防治具有积极的意义。
2、本发明的缓冲液体系由甘氨酸缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液按照科学合理的配比组成，既能够有效的起到体系的缓冲能力，又能够较好的保护产品中的组分不受外界环境的影响，提高产品的稳定性和准确性。
3、本发明的脂联素试剂盒最低检出限为0.33mg/L，灵敏度可达5mg/L，线性范围为2-40mg/L，具有灵活、普适的特点。
4、本发明的稳定剂由牛血清白蛋、酪蛋白、甘露醇配比组成，可有效提高试剂盒体系的稳定性。稳定性作为体外诊断试剂保持产品安全有效的重要指标，对产品的生产、运输、保存和使用等过程具有重要意义。
5、本发明R1试剂中加入由聚乙二醇6000、聚乙二醇8000配比组成的反应增强剂，可有效提高产品检测的灵敏度。
6、本发明通过化学交联的方法，将脂联素抗体与胶乳微球进行偶联，结合率高，原料损耗低，且稳定性高，可有效提高检测灵敏度。
附图说明
图1是本发明实施例1与对比例1的脂联素试剂盒的稳定性趋势图。
图2是本发明实施例1与对比例1的脂联素试剂盒的LOQ图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，本领域技术人员可以理解，以下实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
实施例1
一种脂联素试剂盒，包括R1试剂、R2试剂，溶剂为纯化水；其中，
R1试剂为：甘氨酸缓冲液30mM、MES缓冲液10mM、MOPS缓冲液10mM、牛血清白蛋2g/L、酪蛋白2g/L、甘露醇1g/L、叠氮钠1g/L、Proclin300 1.5g/L、聚乙二醇6000 2g/L、聚乙二醇8000 2g/L、Tween20 1.5g/L、Triton-X100 1g/L；
R2试剂为：甘氨酸缓冲液35mM、MES缓冲液10mM、MOPS缓冲液15mM、牛血清白蛋1g/L、酪蛋白1g/L、甘露醇3g/L、叠氮钠1g/L、Proclin300 1.5g/L、偶联有人脂联素单克隆抗体的胶乳微球1.5mg/L；抗体的加入量为0.3mg/L。
该脂联素试剂盒的制备方法为：
1)R1试剂的制备：按照脂联素R1试剂的组分含量，将各组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得脂联素R1试剂；
2)R2试剂的制备：
①活化：取R2试剂中的缓冲液总量的40％，加入胶乳微球，在37℃摇床搅拌10min混匀，按照0.15g/L加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，继续搅拌35min混匀，分别得到活化胶乳微球；
②标记：向活化胶乳微球中边搅拌边加入人脂联素抗体，在37℃摇床搅拌120min混匀，得到偶联有人脂联素抗体的胶乳微球；
③封闭：向偶联有人脂联素抗体的胶乳微球加入牛血清白蛋、酪蛋白、甘露醇、叠氮钠、Proclin300，充分溶解混合50min进行封闭，即得封闭胶乳微球；
④向封闭胶乳微球中加入剩余的缓冲液，混合均匀，即得R2试剂；
3)将R1试剂以及R2试剂单独分装，密封保存，即得脂联素试剂盒。
实施例2
一种脂联素试剂盒，包括R1试剂、R2试剂，溶剂为纯化水；其中，
R1试剂为：甘氨酸缓冲液10mM、MES缓冲液15mM、MOPS缓冲液20mM、牛血清白蛋1g/L、酪蛋白3g/L、甘露醇3g/L、叠氮钠1.5g/L、Proclin300 1.2g/L、聚乙二醇6000 1g/L、聚乙二醇8000 3g/L、Tween20 1.0g/L、Triton-X100 1.5g/L；
R2试剂为：甘氨酸缓冲液50mM、MES缓冲液5mM、MOPS缓冲液10mM、牛血清白蛋1g/L、酪蛋白3g/L、甘露醇3g/L、叠氮钠1.5g/L、Proclin300 1.2g/L、偶联有人脂联素单克隆抗体的胶乳微球1.2mg/L；抗体的加入量为0.4mg/L。
该脂联素试剂盒的制备方法为：
1)R1试剂的制备：按照脂联素R1试剂的组分含量，将各组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得脂联素R1试剂；
2)R2试剂的制备：
①活化：取R2试剂中的缓冲液总量的50％，加入胶乳微球，在37℃摇床搅拌15min混匀，按照0.2g/L加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，继续搅拌30min混匀，分别得到活化胶乳微球；
②标记：向活化胶乳微球中边搅拌边加入人脂联素抗体，在37℃摇床搅拌90min混匀，得到偶联有人脂联素抗体的胶乳微球；
③封闭：向偶联有人脂联素抗体的胶乳微球加入牛血清白蛋、酪蛋白、甘露醇、叠氮钠、Proclin300，充分溶解混合40min进行封闭，即得封闭胶乳微球；
④向封闭胶乳微球中加入剩余的缓冲液，混合均匀，即得R2试剂；
3)将R1试剂以及R2试剂单独分装，密封保存，即得脂联素试剂盒。
实施例3
一种脂联素试剂盒，包括R1试剂、R2试剂，溶剂为纯化水；其中，
R1试剂为：甘氨酸缓冲液30mM、MES缓冲液25mM、MOPS缓冲液15mM、牛血清白蛋3g/L、酪蛋白1g/L、甘露醇2g/L、叠氮钠1.6g/L、Proclin300 2g/L、聚乙二醇6000 4g/L、聚乙二醇8000 1g/L、Tween20 2.5g/L、Triton-X100 1.5g/L；
R2试剂为：甘氨酸缓冲液50mM、MES缓冲液10mM、MOPS缓冲液15mM、牛血清白蛋3g/L、酪蛋白1g/L、甘露醇4g/L、叠氮钠1.3g/L、Proclin300 1.2g/L、偶联有人脂联素单克隆抗体的胶乳微球1.0mg/L；抗体的加入量为0.5mg/L。
该脂联素试剂盒的制备方法为：
1)R1试剂的制备：按照脂联素R1试剂的组分含量，将各组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得脂联素R1试剂；
2)R2试剂的制备：
①活化：取R2试剂中的缓冲液总量的60％，加入胶乳微球，在37℃摇床搅拌12min混匀，按照0.1g/L加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，继续搅拌35min混匀，分别得到活化胶乳微球；
②标记：向活化胶乳微球中边搅拌边加入人脂联素抗体，在37℃摇床搅拌60min混匀，得到偶联有人脂联素抗体的胶乳微球；
③封闭：向偶联有脂联素抗体的胶乳微球加入牛血清白蛋、酪蛋白、甘露醇、叠氮钠、Proclin300，充分溶解混合50min进行封闭，即得封闭胶乳微球；
④向封闭胶乳微球中加入剩余的缓冲液，混合均匀，即得R2试剂；
3)将R1试剂以及R2试剂单独分装，密封保存，即得脂联素试剂盒。
实施例4
一种脂联素试剂盒，包括R1试剂、R2试剂，溶剂为纯化水；其中，
R1试剂为：甘氨酸缓冲液50mM、MOPS缓冲液20mM、牛血清白蛋1.5g/L、酪蛋白2g/L、甘露醇1.5g/L、叠氮钠1.2g/L、Proclin300 1.5g/L、聚乙二醇6000 1g/L、聚乙二醇80003g/L、Tween20 1.5g/L、Triton-X100 1.5g/L；
R2试剂为：甘氨酸缓冲液50mM、MOPS缓冲液25mM、牛血清白蛋1g/L、酪蛋白3g/L、甘露醇2g/L、叠氮钠2g/L、Proclin300 1.5g/L、偶联有人脂联素单克隆抗体的胶乳微球1.6mg/L；抗体的加入量为0.3mg/L。
该脂联素试剂盒的制备方法为：
1)R1试剂的制备：按照脂联素R1试剂的组分含量，将各组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得脂联素R1试剂；
2)R2试剂的制备：
①活化：取R2试剂中的缓冲液总量的40％，加入胶乳微球，在37℃摇床搅拌10min混匀，按照0.12g/L加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，继续搅拌35min混匀，分别得到活化胶乳微球；
②标记：向活化胶乳微球中边搅拌边加入人脂联素抗体，在37℃摇床搅拌120min混匀，得到偶联有人脂联素抗体的胶乳微球；
③封闭：向偶联有人脂联素抗体的胶乳微球加入牛血清白蛋、酪蛋白、甘露醇、叠氮钠、Proclin300，充分溶解混合50min进行封闭，即得封闭胶乳微球；
④向封闭胶乳微球中加入剩余的缓冲液，混合均匀，即得R2试剂；
3)将R1试剂以及R2试剂单独分装，密封保存，即得脂联素试剂盒。
实施例5
一种脂联素试剂盒，包括R1试剂、R2试剂，溶剂为纯化水；其中，
R1试剂为：甘氨酸缓冲液40mM、MES缓冲液25mM、牛血清白蛋2.5g/L、酪蛋白2.5g/L、甘露醇3g/L、叠氮钠1.5g/L、Proclin300 1g/L、聚乙二醇6000 1g/L、聚乙二醇8000 3g/L、Tween20 2g/L、Triton-X100 2.5g/L；
R2试剂为：甘氨酸缓冲液45mM、MES缓冲液20mM、牛血清白蛋1g/L、酪蛋白3g/L、甘露醇3g/L、叠氮钠1.3g/L、Proclin300 1.1g/L、偶联有人脂联素单克隆抗体的胶乳微球2mg/L；抗体的加入量为0.4mg/L。
该脂联素试剂盒的制备方法为：
1)R1试剂的制备：按照脂联素R1试剂的组分含量，将各组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得脂联素R1试剂；
2)R2试剂的制备：
①活化：取R2试剂中的缓冲液总量的40％，加入胶乳微球，在37℃摇床搅拌10min混匀，按照0.18g/L加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，继续搅拌35min混匀，分别得到活化胶乳微球；
②标记：向活化胶乳微球中边搅拌边加入人脂联素抗体，在37℃摇床搅拌120min混匀，得到偶联有人脂联素抗体的胶乳微球；
③封闭：向偶联有人脂联素抗体的胶乳微球加入牛血清白蛋、酪蛋白、甘露醇、叠氮钠、Proclin300，充分溶解混合50min进行封闭，即得封闭胶乳微球；
④向封闭胶乳微球中加入剩余的缓冲液，混合均匀，即得R2试剂；
3)将R1试剂以及R2试剂单独分装，密封保存，即得脂联素试剂盒。
对比例1
一种脂联素试剂盒，包括R1试剂、R2试剂，溶剂为纯化水；其中，
R1试剂为：甘氨酸缓冲液80mM、牛血清白蛋2g/L、Proclin300 5g/L、聚乙二醇60008g/L、Tween20 6g/L；
R2试剂为：甘氨酸缓冲液80mM、牛血清白蛋2g/L、Proclin300 5g/L、偶联有人脂联素单克隆抗体的胶乳微球2mg/L；抗体的加入量为0.1mg/L。
该脂联素试剂盒的制备方法为：
1)R1试剂的制备：按照脂联素R1试剂的组分含量，将各组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得脂联素R1试剂；
2)R2试剂的制备：
①活化：取甘氨酸缓冲液总量的40％，加入胶乳微球，在37℃摇床搅拌10min混匀，按照0.15g/L加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，继续搅拌35min混匀，分别得到活化胶乳微球；
②标记：向活化胶乳微球中边搅拌边加入人脂联素抗体，在37℃摇床搅拌120min混匀，得到偶联有人脂联素抗体的胶乳微球；
③封闭：向偶联有人脂联素抗体的胶乳微球加入牛血清白蛋和Proclin300，充分溶解混合50min进行封闭，即得封闭胶乳微球；
④向封闭胶乳微球中加入剩余的甘氨酸缓冲液，混合均匀，即得R2试剂；
3)将R1试剂以及R2试剂单独分装，密封保存，即得脂联素试剂盒。
对本发明实施例及对比例制备的脂联素试剂盒进行以下性能检测：
1、灵敏度(最低检出限)测试
使用实施例1-5及对比例1中制备的试剂，以零浓度参考品作为样本进行检测，重复测定10次，计算10次测量浓度值结果的平均值X和标准差SD，将X+2SD作为试剂的最低检出限。测试结果如表1所示，显示该试剂的最低检出限为0.33mg/L，低于1.5mg/L，满足要求。
表1实施例1制备的试剂盒灵敏度检测结果
检测次数 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 X SD X+2SD
实施例1 0.18 0.27 0.19 0.00 0.26 0.10 0.00 0.15 0.00 0.08 0.12 0.10 0.33
实施例2 0.18 0.29 0.26 0.03 0.28 0.15 0.00 0.22 0.02 0.10 0.15 0.11 0.38
实施例3 0.19 0.37 0.32 0.08 0.37 0.17 0.07 0.32 0.05 0.18 0.21 0.12 0.46
实施例4 0.24 0.37 0.32 0.16 0.37 0.18 0.10 0.41 0.15 0.20 0.25 0.10 0.47
实施例5 0.30 0.47 0.36 0.25 0.47 0.21 0.19 0.43 0.19 0.27 0.31 0.10 0.53
对比例1 1.58 0.48 1.84 1.39 1.46 0.76 0.57 1.87 1.20 1.13 1.23 0.49 2.22
由表1可得，本发明实施例1-5中的脂联素试剂盒的最低检出限能达到0.33mg/L。
2、线性范围测试
通过将高浓度(40mg/L)样本与低浓度(2mg/L)样本进行倍比稀释得到试验样本，配制方案如下表2。每份样本的浓度与体积单位统一，在进行液体吸取时应选择精密度与准确性好的移液装置；制备时将样本完全混合并避免蒸发或其他使样本变质的情况。检测结果如表3所示。
表2样本倍比稀释
样本号 1 2 3 4 5 6
低浓度血清(mL) 1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0.00
高浓度血清(mL) 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00
对实施例1及对比例1中制备的试剂盒进行线性范围的检测，用生化分析仪测试各稀释样本的浓度，每个样本测定3次。
表3线性范围检测结果
Figure BDA0003704506670000081
Figure BDA0003704506670000091
由表3可见，本发明实施例1试剂的线性范围结果满足试剂检测的要求，在[2，40]mg/L内，线性相关系数(r)≥0.990；线性绝对偏差不超过±0.5mg/L，线性相对偏差不超过±2％。而对比例1试剂的反应度过低，偏差较大，线性范围较窄。
3、稳定性测试
在2～8℃的储存条件下，分别采用实施例1以及对比例1的脂联素试剂盒，分别于第0月，第3月、第6月、第9月、第12月、第15月、第18月进行检测，每个样本检测5次，取平均值。稳定性检测结果如表4、5所示，图1为实施例1和对比例1的稳定性趋势图。
表4实施例1的试剂盒稳定性检测结果
Figure BDA0003704506670000092
表5对比例1的试剂盒稳定性检测结果
Figure BDA0003704506670000093
Figure BDA0003704506670000101
由表4、5及图1中实施例1和对比例1稳定性结果显示，实施例1试剂2-8℃储存18月，p＞0.05，趋势不显著，即实施例1试剂2-8℃储存18月，其检测结果的变化趋势不显著，处于稳定状态。而对比例1-2试剂p均小于0.05，其检测结果的变化趋势显著，处于不稳定状态，说明稳定剂的加入对试剂稳定性至关重要。
4、精密度试验
分别采用实施例1-5以及对比例1的脂联素检测试剂盒，对浓度为4.25mg/L和9.25mg/L的脂联素血清样本进行检测10次，并计算平均值(M)、标准差(SD)以及变异系数(CV)，检测结果如下表6、7所示。
表6精密度检测结果(4.25mg/L)
Figure BDA0003704506670000102
表7精密度检测结果(9.25mg/L)
Figure BDA0003704506670000103
Figure BDA0003704506670000111
由表6、7可得，本发明实施例1-5两个水平的精密度较高，重复性好，满足试剂检测的要求，变异系数CV为2.4-2.8％左右，而对比例1的试剂盒精密度的重复性较差，变异系数CV较高，为4％。
5、定量检出限LOQ验证试验
定量检出限LOQ是在规定可接受条件下，能定量检测出样本中分析物的最小量，对实施例1与对比例1试剂的LOQ进行验证比较，检测结果如下表8、9所示，脂联素试剂盒的LOQ图如图2所示。
表8实施例1的LOQ验证数据
Figure BDA0003704506670000112
表9对比例1的LOQ验证数据
Figure BDA0003704506670000113
Figure BDA0003704506670000121
由表8、9及图2可知，本发明实施例1的LOQ能达到0.7mg/L，而对比例的LOQ为1.1mg/L，实施例1要比对比例1有更低的LOQ，说明本发明具有更高的灵敏度。
上述虽然对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种脂联素试剂盒，其特征在于：包括R1试剂、R2试剂，溶剂为纯化水；其中，
所述的R1试剂包括：缓冲液A 25～100mM、稳定剂A 3～11g/L、防腐剂A 2～4g/L、反应增强剂2～7g/L、表面活性剂2～5g/L；
所述的R2试剂包括：缓冲液B 25～100mM、稳定剂B 3～11g/L、防腐剂B 2～4g/L、偶联有脂联素抗体的胶乳微球1～2mg/L。
2.根据权利要求1所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述的缓冲液A和缓冲液B为甘氨酸缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液中的两种或三种结合。
3.根据权利要求2所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述的缓冲液A和缓冲液B成分为：甘氨酸缓冲液10～50mM，MES缓冲液5～25mM，MOPS缓冲液10～25mM。
4.根据权利要求1所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂A和稳定剂B成分为：牛血清白蛋白1～3g/L、酪蛋白1～3g/L、甘露醇1～5g/L。
5.根据权利要求1所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述的防腐剂A和防腐剂B成分为：叠氮钠1～2g/L、Proclin300 1～2g/L。
6.根据权利要求1所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述R1试剂中的反应增强剂成分为：聚乙二醇6000 1～4g/L、聚乙二醇8000 1～3g/L。
7.根据权利要求1所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述R1试剂中的表面活性剂成分为：Tween20 1～2.5g/L、Triton-X100 1～2.5g/L。
8.根据权利要求1所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述的脂联素抗体为人脂联素单克隆抗体，抗体的加入量为0.1～0.5mg/L。
9.根据权利要求1-8任一项所述的脂联素试剂盒，其特征在于：其制备方法为：
1)R1试剂的制备：按照脂联素R1试剂的组分含量，将各组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得脂联素R1试剂；
2)R2试剂的制备：
①活化：取缓冲液B总量的40-60％，加入胶乳微球，在37℃摇床搅拌10-15min混匀，再加入偶联剂，继续搅拌30-35min混匀，分别得到活化胶乳微球；
②标记：向活化胶乳微球中边搅拌边加入脂联素抗体，在37℃摇床搅拌60-120min混匀，得到偶联有脂联素抗体的胶乳微球；
③封闭：向偶联有脂联素抗体的胶乳微球加入防腐剂B和稳定剂B，充分溶解混合40-60min进行封闭，即得封闭胶乳微球；
④向封闭胶乳微球中加入剩余的缓冲液B，混合均匀，即得R2试剂；
3)将试剂R1以及试剂R2单独分装，密封保存，即得脂联素试剂盒。
10.根据权利要求9所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述的偶联剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，偶联剂的加入量为0.1-0.2g/L。
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