CN114295840A

CN114295840A - 一种高灵敏度定量测定脂联素的试剂盒及其制备方法

Info

Publication number: CN114295840A
Application number: CN202111643683.9A
Authority: CN
Inventors: 温路新; 徐正源; 刘雨薇
Original assignee: Zhongyuan Huiji Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Zhongyuan Huiji Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2021-12-29
Filing date: 2021-12-29
Publication date: 2022-04-08
Anticipated expiration: 2041-12-29
Also published as: CN114295840B

Abstract

本发明公开了一种高灵敏度定量测定脂联素的试剂盒，包括试剂R1以及试剂R2，其中试剂R2中包括包被有脂联素单克隆抗体的胶乳微球，所述包被有脂联素单克隆抗体的胶乳微球的制备过程包括：在胶乳微球与脂联素单克隆抗体标记的过程中同时加入BSA。本发明通过选用大粒径胶乳微球，改善了脂联素检测试剂盒低值精密度不高的技术问题，同时通过在胶乳微球与抗体标记过程中加入BSA的方式，解决了由于使用大粒径微球带来的检测线性范围较差的问题。通过上述改进措施配合本发明的反应体系，有效提升了脂联素胶乳试剂盒的检测性能，充分满足临床需求。

Description

一种高灵敏度定量测定脂联素的试剂盒及其制备方法

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体涉及一种高灵敏度定量测定脂联素的试剂盒及其制备方法。

背景技术

脂联素是脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽或蛋白质，作为一种特异的脂肪因子，脂联素在胰岛素抵抗、Ⅱ型糖尿病、心血管疾病及代谢综合征的发生发展过程中发挥着重要的作用。研究发现I型糖尿病与Ⅱ型糖尿病患者血清脂联素水平有显著性差异，通过检测血浆脂联素水平可以帮助区别Ⅰ型糖尿病和Ⅱ型糖尿病。肥胖患者、Ⅱ型糖尿病患者、脂肪营养障碍患者、高血压患者等都普遍存在着低水平脂联素。于此同时，血清脂联素水平与机体的胰岛素敏感性呈显著正相关。因此，脂联素含量的监测在临床上具有重要意义。

人体中ADPN水平含量相对较高，脂联素的血浆浓度为5～30mg/mL。针对ADPN相关疾病的特殊性，无论是糖尿病、心血管疾病还是炎症等，与脂联素浓度呈负相关，疾病发生时，体内含量降低。因此，对于ADPN，其检测试剂需要尽量提高其低值灵敏度，但同时也需要兼顾检测范围。于此同时，由于脂联素在血清中，存在一系列的多聚体复合物,通过其胶原结构域形成三个主要的低聚物形式:低分子量脂联素(LMW-三聚体)、中分子量脂联素(MMW-六聚体)及高分子量脂联素(HMW-多聚体),它们通过不同的信号途径发挥生理作用。脂联素重组单抗对脂联素单体或二聚体识别力弱，反应度低；对多聚体识别力强，但在缓冲液中，常规重组多聚体易降解，稳定性极差。

目前市面上检测人体中ADPN的试剂盒主要采用的方法学为胶乳增强免疫比浊法，而脂联素的血浆浓度决定了胶乳微球常选用小粒径微球(100-150nm)，但该粒径范围的微球不能完全满足检测所需的低值灵敏度。反之，若采用大粒径微球，虽然能显著提升试剂的灵敏度，却不能达到较优的检测线性范围，最终造成现有试剂盒的检测在低值精密度以及线性范围上难以兼顾的问题。同时由于脂联素常规重组多聚体易降解，稳定性较差的问题，市面厂家多采用冻干粉的形式进行校准品的保存，进而增加了试剂的制备成本及工艺复杂度。

发明内容

本发明通过选用大粒径胶乳微球，改善了脂联素检测试剂盒低值精密度不高的技术问题，同时通过在胶乳微球与抗体标记过程中加入BSA的方式，解决了由于使用大粒径微球带来的检测线性范围较差的问题。通过上述改进措施配合本发明的反应体系，有效提升了脂联素胶乳试剂盒的检测性能，充分满足临床需求。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术手段：一种高灵敏度定量测定脂联素的试剂盒，其特征在于，包括试剂R1以及试剂R2；

所述试剂R1包括的成分及相应的含量为：50-150mmol/L缓冲液、0.1-1mol/L无机盐离子以及2-10g/L表面活性剂；

所述试剂R2包括的成分及相应的含量为：70-120mmol/L缓冲液、0.1-1mol/L无机盐离子以及包被有脂联素单克隆抗体的胶乳微球；

所述包被有脂联素单克隆抗体的胶乳微球的制备过程包括：在胶乳微球与脂联素单克隆抗体标记的过程中同时加入BSA。

优选地，所述试剂R1中还包括5-20g/L促凝剂、0.5-1.5g/L防腐剂；所述试剂R2中还包括20-80g/L封闭蛋白以及10-30g/L糖类物质。

优选地，所述胶乳微球的粒径为150-250nm，优选为200-230nm。

优选地，所述脂联素单克隆抗体为重组单克隆抗体。

优选地，所述包被有脂联素单克隆抗体的胶乳微球的制备过程中，胶乳微球、脂联素单克隆抗体以及BSA的质量比为1:(0.01-0.1)：(0.01-0.1)，优选为1:(0.05-0.1)：(0.05-0.1)。

优选地，所述试剂R1中缓冲液选自一水合柠檬酸、MOPS、甘氨酸、Tris或HEPES中的至少一种，无机盐离子选自氯化钠或氯化钾中的至少一种，促凝剂选自PEG6000或PEG8000中的至少一种，表面活性剂选自吐温-20、Brij58、TX-100或A90中的至少一种，防腐剂选自PC-300或叠氮钠中的至少一种；所述试剂R2中缓冲液选自MOPS、甘氨酸、TRIS或HEPES中的至少一种，无机盐离子选自选自氯化钠或氯化钾中的至少一种，封闭蛋白选自BSA或酪蛋白中的至少一种，糖类物质选自海藻糖或蔗糖中的至少一种。

优选地，所述试剂R1的pH为5.0-7.0，优选为6.0-7.0；所述试剂R2的pH为5.0-7.0，优选为6.0-7.0。

一种高灵敏度定量测定脂联素试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)试剂R1的制备

试剂R1按照下述配方进行配置：

缓冲液50-150mmol/L、无机盐离子0.1-1.0mmo/L、促凝剂5-20g/L、表面活性剂2-10g/L以及防腐剂0.5-1.5g/L；

所述缓冲液选自一水合柠檬酸、MOPS、甘氨酸、Tris或HEPES中的至少一种，无机盐离子选自氯化钠或氯化钾中的至少一种，促凝剂选自PEG6000或PEG8000中的至少一种，表面活性剂选自吐温-20、Brij58、TX-100或A90中的至少一种，防腐剂选自PC-300或叠氮钠中的至少一种；

(2)试剂R2的制备

①R2标记缓冲液制备

R2标记缓冲液按照下述配方进行配制：

缓冲液70-120mmoL、无机盐离子0.1-1mol/L以及糖类物质10-30g/L；

所述标记缓冲液选自硼酸缓冲液、甘氨酸或Tris缓冲液中的至少一种，所述无机盐离子选自选自氯化钠或氯化钾中的至少一种，所述糖类物质选自海藻糖或蔗糖中的至少一种；

②试剂R2的制备

将胶乳微球胶乳加入标记缓冲液中，随后加入活化剂EDC，混匀后孵育20-60min；同时加入脂联素单克隆抗体、胶乳微球以及BSA，混匀后孵育5-20h；加入封闭剂BSA，孵育0.5-2h，离心去上清后超声即得试剂R2；

优选地，在所述步骤②中，胶乳微球、脂联素单克隆抗体以及BSA的质量比为1:(0.01-0.1)：(0.01-0.1)，优选为1:(0.05-0.1)：(0.05-0.1)。

优选地，所述脂联素单克隆抗体为重组单抗。

本发明的有益效果在于：本发明通过采用大粒径微球，重组单抗与小分子蛋白BSA同时进行标记，保证试剂线性范围的同时，大大提升了试剂的精密度，尤其是针对低值样本的检测精密度。同时本发明通过采用重组单抗，相较于传统腹水抗体具有纯度更高、杂蛋白更少以及产量更高等优点，使得原料批间差异小，能严格控制试剂批间差异，使试剂盒具有更优的批间差以及检测稳定性。

附图说明

图1为本发明实施例3所述的A组以及B组试剂盒检测值与样本理论值的线性相关性分析图；

图2为本发明实施例5所述的A组、B组C组以及D组试剂盒检测值与样本理论值的线性相关性分析图；

图3为本发明实施例6所述的A组、B组C组以及D组试剂盒检测值与样本理论值的线性相关性分析图。

具体实施例

本文包括以下的实施例，用于以例证的方式更清楚、明确地阐述本发明的技术方案。本领域技术人员根据本文的公开应当理解，可以在所公开的特定的实施方式中进行许多改变但是仍然获得相似或类似的结果，而不偏离本发明的思想和范围。本发明的具体实施方式仅用于解释本发明，而非意图通过任何方式限制本发明。

实施例1脂联素检测试剂盒的制备

本发明的脂联素(ADPN)检测试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分。

1.试剂R1的制备

按照下述配方进行配制，充分搅拌混匀后，放于2-8℃保存。

2.试剂R2的制备

(1)标记缓冲液的制备

(2)R2试剂标记制备：

①量取1.25mL标记缓冲液(硼酸缓冲液、甘氨酸)，加入100μL胶乳微球(固含量10％)；

②加入8μL活化剂EDC，快速混匀后，孵育30min，活化胶乳微球；

③加入标记终浓度为0.4mg/mL的抗体以及0.4mg/mL的BSA，快速混匀后，置于摇床上进行交联反应(大于6h)；

④加入800μL40g/L BSA，封闭1h；

⑤12000rpm离心20min去除上清液，超声分散；

⑥试剂制备完成，放入烘箱进行老化2d，即得试剂R2。

实施例2试剂盒的使用方法

本实施例中，使用全自动生化分析仪(日立7180)配合本发明试剂盒进行样本检测。

(1)仪器参数设置

(2)测定方案

(3)计算方式

使用两点线性校准模式，以线性函数为计算模式，根据校准品的值与吸光度变化值作剂量/响应曲线，样品中特异性生长因子的含量可根据其吸光度变化值在剂量/响应曲线上计算出。

其中，本发明的检测原理为：血清样品中ADPN可与试剂中的抗ADPN抗体结合形成抗原-抗体-微球复合物，产生一定浊度，该浊度高低在一定抗体存在时与抗原的含量成正比，在一定波长下测定浊度并通过多点定标曲线可进行ADPN的定量测定。

样本中ADPN(mg/L)＝CS×ΔAT/ΔAS(mg/L)

(式中：ΔAT以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值，ΔAS以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值，CS校准液中ADPN的浓度)

实施例3试剂盒的性能测试

为验证本发明试剂盒的各项性能，共设置4组试剂盒进行性能验证：

A组：本发明实施例1制备得到的试剂盒；

B组：市售试剂盒；

其中A组试剂盒按照实施例2所述的使用方法进行测试，B组按照其说明书进行测试。

(1)准确度验证

使用两组试剂盒分别对临床赋值样本进行准确度测试，设2个重复，通过全自动生化分析仪(日立7180)读取信号，计算测定均值与靶值得相对偏差进行准确度验证。检测结果如下表所示：

表1准确度验证

由上述实验结果可知，两组试剂盒测试值1与靶值1的相对偏差分别为0.80％以及-3.80％，测试值2与靶值2的相对偏差分别为0.88％以及3.50％。其中本发明实施例1制备得到的试剂盒(A组)检测准确度较优于市售(B组)试剂盒。

(2)精密度验证

选取临床脂联素低值样本、中值样本以及高值样本，使用两组试剂盒分别对样本进行测试，每个样本分别重复测定10次，通过全自动生化分析仪(日立7180)读取信号，分别计算测定均值和标准差，计算变异系数进行精密度考察。检测结果如下表所示：

表2精密度验证

由上述实验结果可知，两组试剂盒在低值样本检测时的变异系数分别为0.60％以及6.38％，中值样本检测时的变异系数分别为1.29％以及1.52％，高值样本检测时的变异系数分别为0.91％以及0.98％，实验结果说明，本发明实施例1制备得到的试剂盒(A组)在检测低值样本时的精密度显著优于市售(B组)试剂盒。

(3)线性范围验证

选择临床超高值样本以及低值样本，随后利用高值样本以及低值样本按比例配置各浓度梯度样本，使用两组试剂盒分别对样本进行测试，每个样本分别重复测定2次，通过全自动生化分析仪(日立7180)读取信号，分别计算测定均值进行线性范围考察。检测结果如下表所示：

表3线性范围验证

注：相对偏差为均值与理论值的相对偏差。

由上述实验结果可知，本发明实施例1制备得到的试剂盒(A组)以及市售试剂盒(B组)在样本浓度为1.5-52.4mg/L线性范围内，其检测值与理论值的相对偏差均较小。同时，将两组试剂盒的检测结果与样本浓度理论值进行相关性分析(如附图1所示)：其中A组检测值与理论值的相关性R²为0.9991，B组R²为0.9985。实验结果说明本发明实施例1制备得到的试剂盒(A组)较市售试剂盒(B组)均具有较好的线性范围。

(4)批间差

以实施例1制备的本发明两批试剂盒A、C，选取临床赋值样本，每个样本重复测定两次，通过全自动生化分析仪(日立7180)读取信号，进行批间差考察，检测结果如下表所示：

表4批间差验证

注：ABS为样本检测反应度。

由上述实验结果可知，本发明实施例1制备得到的两个批次试剂盒A以及试剂盒C的批间差可以控制在4％以内，实验结果说明本发明所述的试剂盒批间差较小，具有很好的制造稳定性。

实施例4微球粒径对试剂盒检测性能的影响

为了验证微球粒径对试剂盒检测性能的影响，共设置6组试剂盒：

A组：本发明实施例1制备得到的试剂盒；

B组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，胶乳微球的粒径为100nm；

C组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，胶乳微球的粒径为150nm；

D组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，胶乳微球的粒径为230nm；

E组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，胶乳微球的粒径为250nm；

F组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，胶乳微球的粒径为300nm。

(1)精密度验证

选取临床脂联素低值样本，使用六组试剂盒分别对样本进行测试，每个样本分别重复测定10次，通过全自动生化分析仪(日立7180)读取信号，分别计算测定均值和标准差，计算变异系数进行精密度考察。检测结果如下表所示：

表5精密度验证

样本	A组	B组	C组	D组	E组	F组
							1	2.12	2.73	2.03	2.10	2.22	1.98
2	2.13	2.34	2.22	2.09	2.14	2.32
							3	2.13	2.89	2.15	2.13	2.09	2.43
4	2.09	2.12	2.00	2.08	2.06	2.22
							5	2.12	2.23	2.03	2.14	2.24	2.09
6	2.11	2.34	2.11	2.03	2.12	2.04
							7	2.12	2.53	2.00	2.10	2.53	2.42
8	2.12	2.32	2.27	2.15	2.34	2.31
							9	2.10	2.22	2.13	2.05	2.11	2.07
10	2.13	2.13	2.07	2.11	2.20	2.20
							均值	2.12	2.39	2.10	2.10	2.21	2.21
SD	0.01	0.26	0.09	0.04	0.14	0.16
							CV	0.63％	10.73％	4.42％	1.81％	6.41％	7.25％

由上述实验结果可知，六组试剂盒在低值样本检测时的变异系数分别为0.63％、10.73％、4.42％、1.81％、6.41％以及7.25％，实验结果说明，采用粒径范围在150-230nm内的胶乳微球制备得到的脂联素检测试剂盒具有较好的低值精密度，尤其是胶乳微球的粒径在200-230nm范围内时，低值样本的检测CV值可以控制在2％以内。

实施例5标记蛋白对试剂盒性能的影响

为了验证标记蛋白对试剂盒检测性能的影响，共设置4组试剂盒：

A组：本发明实施例1制备得到的试剂盒；

B组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，标记过程中未添加BSA；

C组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，标记过程中未添加BSA，添加终浓度为0.4mg/mL的酪蛋白；

D组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，标记过程中未添加BSA，添加0.4mg/mL的丙氨酸；

(1)线性范围验证

选择临床超高值样本以及低值样本，随后利用高值样本以及低值样本按比例配置各浓度梯度样本，使用上述四组试剂盒分别对样本进行测试，每个样本分别重复测定2次，通过全自动生化分析仪(日立7180)读取信号，分别计算测定均值进行线性范围考察。检测结果如下表所示：

表6试剂盒线性范围验证

注：相对偏差为均值与理论值的相对偏差。

将四组试剂盒的检测结果与样本浓度理论值进行相关性分析(如附图2所示)：A组试检测值与理论值的相关性R²为0.9997，B组R²为0.9879，C组R²为0.9927，D组R²为0.9994。实验结果说明，在胶乳微球与抗体的标记过程中加入BSA，可以有效解决由于使用大粒径微球带来的线性范围不好的技术问题。

实施例6胶乳微球、抗体以及BSA的标记配比对试剂盒检测性能的影响

为验证胶乳微球、抗体以及BSA的标记配比对试剂盒检测性能的影响，设置以下4组试剂盒：

A组：本发明实施例1制备得到的试剂盒；

B组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，胶乳微球抗体标记过程中，胶乳微球、抗体、BSA的质量比为1:0.01:0.01；

C组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，胶乳微球抗体标记过程中，胶乳微球、抗体、BSA的质量比为1:0.1:0.1；

D组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的区别仅在于，胶乳微球抗体标记过程中，胶乳微球、抗体、BSA的质量比为1:0.5:0.5；

(1)精密度验证

选取临床脂联素低值样本、中值样本以及高值样本，使用四组试剂盒分别对样本进行测试，每个样本分别重复测定10次，通过全自动生化分析仪(日立7180)读取信号，分别计算测定均值和标准差，计算变异系数进行精密度考察。检测结果如下表所示：

表7精密度验证

由上述实验结果可知，四组试剂盒在低值样本检测时的变异系数分别为0.75％、10.75％、1.25％以及7.81％，实验结果说明，在胶乳微球与抗体标记过程，胶乳微球、抗体以及BSA的质量比在1：(0.05-0.1)：(0.05-0.1)范围内时，检测试剂盒的低值精密度最高。

(2)线性范围验证

表8试剂盒线性范围验证

将4组试剂盒的检测结果与样本浓度理论值进行相关性分析(如附图3所示)：A组试检测值与理论值的相关性R²为0.9997，B组R²为0.9895，C组R²为0.9958，D组R²为0.9782。实验结果说明，在胶乳微球与抗体标记过程，胶乳微球、抗体以及BSA的配比在1：(0.05-0.1)：(0.05-0.1)范围内时，检测试剂盒的线性范围较好。

实施例7重组单抗对试剂盒批间差的影响

为了验证重组单抗对试剂盒检测性能的影响，共设置3组试剂盒：

A组：本发明实施例1制备得到的试剂盒；

B组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的制备方法区别仅在于，未包含重组单抗组分，采用常规腹水注射制备得到的抗体；

C组：所述试剂盒与实施例1试剂盒的制备方法区别仅在于，未包含重组单抗组分，采用常规发酵方法制备得到的抗体。

(1)批间差

使用上述三组试剂盒测定同一低值临床赋值样本以及高值临床赋值样本，每个水平重复测定三次，通过全自动生化分析仪(日立7180)读取信号，进行批间差考察，实验结果显示本发明实施例1制备得到的试剂盒A其批间差可以控制在4％以内，而B组试剂盒的批间差仅能控制在10％以内，C组试剂盒的批间差能控制在8％以内，实验结果说明本发明采用重组单抗制备脂联素检测试剂盒可以有效提升试剂盒的批间差，保证试剂盒制备的稳定性。

综上所述，本发明通过采用大粒径微球，重组单抗与小分子蛋白BSA同时进行标记，保证试剂线性范围的同时，大大提升了试剂的精密度，尤其是针对低值样本的检测精密度。同时本发明通过采用重组单抗，相较于传统腹水抗体具有纯度更高、杂蛋白更少以及产量更高等优点，使得原料批间差异小，能严格控制试剂批间差异，使试剂盒具有更优的批间差以及检测稳定性。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变形。

Claims

1.一种高灵敏度定量测定脂联素的试剂盒，其特征在于，包括试剂R1以及试剂R2；

2.根据权利要求1所述的一种高灵敏度定量测定脂联素的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中还包括5-20g/L促凝剂、0.5-1.5g/L防腐剂；所述试剂R2中还包括20-80g/L封闭蛋白以及10-30g/L糖类物质。

3.根据权利要求1-2任一项所述的一种高灵敏度定量测定脂联素的试剂盒，其特征在于，所述胶乳微球的粒径为150-250nm，优选为200-230nm。

4.根据权利要求3所述的一种高灵敏度定量测定脂联素的试剂盒，其特征在于，所述脂联素单克隆抗体为重组单克隆抗体。

5.根据权利要求4所述的一种高灵敏度定量测定脂联素的试剂盒，其特征在于，所述包被有脂联素单克隆抗体的胶乳微球的制备过程中，胶乳微球、脂联素单克隆抗体以及BSA的质量比为1:(0.01-0.1)：(0.01-0.1)，优选为1:(0.05-0.1)：(0.05-0.1)。

6.根据权利要求5所述的一种高灵敏度定量测定脂联素的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中缓冲液选自一水合柠檬酸、MOPS、甘氨酸、Tris或HEPES中的至少一种，无机盐离子选自氯化钠或氯化钾中的至少一种，促凝剂选自PEG6000或PEG8000中的至少一种，表面活性剂选自吐温-20、Brij58、TX-100或A90中的至少一种，防腐剂选自PC-300或叠氮钠中的至少一种；所述试剂R2中缓冲液选自MOPS、甘氨酸、Tris或HEPES中的至少一种，无机盐离子选自氯化钠或氯化钾中的至少一种，封闭蛋白选自BSA或酪蛋白中的至少一种，糖类物质选自海藻糖或蔗糖中的至少一种。

7.根据权利要求1-6任一项所述的一种高灵敏度定量测定脂联素的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的pH为5.0-7.0，优选为6.0-7.0；所述试剂R2的pH为5.0-7.0，优选为6.0-7.0。

8.一种如权利要求1-6任一项所述的一种高灵敏度定量测定脂联素试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)试剂R1的制备

试剂R1按照下述配方进行配置：

(2)试剂R2的制备

①R2标记缓冲液制备

R2标记缓冲液按照下述配方进行配制：

缓冲液70-120mmoL、无机盐离子0.1-1mol/L以及糖类物质10-30g/L；

②试剂R2的制备

将胶乳微球胶乳加入标记缓冲液中，随后加入活化剂EDC，混匀后孵育20-60min；同时加入脂联素单克隆抗体、胶乳微球以及BSA，混匀后孵育5-20h；加入封闭剂BSA，孵育0.5-2h，离心去上清后超声即得试剂R2。

9.根据权利要求8所述的一种高灵敏度定量测定脂联素试剂盒的制备方法，其特征在于，在所述步骤②中，胶乳微球、脂联素单克隆抗体以及BSA的质量比为1:(0.01-0.1)：(0.01-0.1)，优选为1:(0.05-0.1)：(0.05-0.1)。

10.根据权利要求9所述的一种高灵敏度定量测定脂联素试剂盒的制备方法，其特征在于，所述脂联素单克隆抗体为重组单抗。