CN114908025A - 一株胶质类芽孢杆菌hb-02菌株及其促作物生长的应用 - Google Patents

一株胶质类芽孢杆菌hb-02菌株及其促作物生长的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一株胶质类芽孢杆菌HB‑02菌株及其促作物生长的应用，该菌株已于2022年04月06日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.24636；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该胶质类芽孢杆菌HB‑02菌株溶磷、解钾、固氮能力较强，并具有较强的产生IAA的能力，可制成微生物肥料，有利于减少化肥的使用，并进而减轻化肥对土壤营养结构、农产品品质以及生态环境造成的不良影响，同时，该胶质类芽孢杆菌HB‑02菌株还能促进作物生产，提高作物产量。

Description

一株胶质类芽孢杆菌HB-02菌株及其促作物生长的应用
技术领域
本发明涉及微生物与微生物肥料技术领域，特别是涉及一株胶质类芽孢杆菌HB-02菌株及其促作物生长的应用。
背景技术
农业生产过程中大量使用化肥会造成土壤营养结构失调、农产品品质下降以及严重的生态环境污染，以上副作用已经引起人们的高度重视，微生物肥料因其具有可以提高作物营养水平、促进土壤中物质的转化、促进作物产量和作物品质提高、防治有害微生物等优点，且弥补了化学肥料的不足，被广泛应用于多种作物的生产，使得微生物肥料的研究应用成为热点。微生物肥料中特定的微生物通过自身的生命活动分解土壤中难以利用的物质，促进植物对营养元素的吸收，分泌各种生长激素或合成利于植物生长发育的物质，抑制病原菌的生长，间接或直接提高植物的质量和产量。
植物根际促生菌（plant growth promoting rhizobacteria，PGPR）是生活于植物根际或定殖于根系表面的一类促进植物生长的有益菌株。有些PGPR生活在植物体内、附生于根系或根周土壤中，通过向胞外释放有机酸溶解难溶性无机磷，这被称为无机磷的酸解作用；而有机磷则主要通过一些PGPR合成的磷酸酶催化磷酸酯的水解而转变为可溶性磷，这被称为有机磷的矿化作用。有些PGPR可以同时进行酸解和矿化作用，以提高植物对磷的利用率。同时，有些PGPR能借助自身荚膜包围岩石矿物颗粒，将土壤中的长石、云母及磷灰石中的磷钾营养元素分解为植物可直接吸收利用的形式。固氮微生物定殖于植物根系表面，有时会入侵植物根内部，通过促进植物根系生长，从而促进植物获取更多矿物与养分，最终促进植物生长。有些PGPR分泌的IAA可以通过改变植物的内源IAA库干扰植物的各种生理过程，如促进植物细胞的***、延伸和分化；控制营养生长进程；促进种子和块茎萌发；提高木质部和根的生长速度；刺激侧根和不定根的形成等。但是并非所有PGPR都具有理想的溶磷、解钾、固氮、促进IAA分泌等功能。
发明内容
针对上述技术问题，本发明提供一株胶质类芽孢杆菌HB-02菌株及其促作物生长的应用。该胶质类芽孢杆菌HB-02菌株具有较强的溶磷、解钾、固氮能力，并具有较强的产生3-吲哚乙酸（IAA）的能力，既能够减少化肥的使用从而减轻化肥对环境的不良影响，又能促进农作物生长。
为解决上述技术问题，本发明实施例采用了如下的技术方案：
一方面，本发明实施例提供一株胶质类芽孢杆菌HB-02菌株，其分类名称为胶质类芽孢杆菌（Paenibacillus mucilaginosus），于2022年04月06日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No. 24636；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明所提供的胶质类芽孢杆菌HB-02菌株从小麦种植区健壮麦苗根际土壤中分离得到，属于芽孢杆菌属，溶磷、解钾、固氮能力较强，并具有较强的产生IAA的能力，可制成微生物肥料，一方面有利于作物从土壤中吸收磷、钾、氮，从而减少化肥的使用，并进而减轻化肥对土壤营养结构、农产品品质以及生态环境造成的不良影响，另一方面，该菌株能促进作物生产，提高作物产量。该菌株的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。
该胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的筛选方法具体包括以下步骤：
①从小麦种植区健壮麦苗根际土壤分离单菌落，然后从中筛选具有明显溶磷解钾能力的菌株；
②将步骤①得到的菌株分别进行溶磷能力、解钾能力、固氮能力的定量测定，从中筛选出溶磷、解钾、固氮综合能力最好的菌株；
③将步骤②得到的菌株进行合成IAA能力的检测；
④将步骤②得到的菌株应用于田间，考察其对农作物生长的影响。
通过以上实验步骤，筛选得到胶质类芽孢杆菌HB-02菌株。
第二方面，本发明实施例还提供上述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株在促作物生长中的应用。
本发明提供的胶质类芽孢杆菌HB-02菌株具有较强的溶磷、解钾、固氮能力以及合成IAA的能力，能够有效促进作物生长。田间试验数据证明，将胶质类芽孢杆菌HB-02菌株用于小麦拌种、浇灌，出苗时叶色浓绿，麦苗粗壮健壮，过冬返青后长势较好，叶色绿，拔节期植株健壮、稠密，叶片浓绿、肥厚，能够使小麦的株高和产量增加显著。
第三方面，本发明实施例还提供一种促作物生长的方法，用上述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的发酵菌液对作物种子拌种后再进行播种。
优选地，所述作物为小麦。
优选地，所述发酵菌液中所述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的含量为0.5×1010~1.5×1010 cfu/mL。在该浓度下，拌种时菌种的接种量优选为15~25mL/kg种子。
优选地，所述方法还包括在返青期以浇灌的方式施用所述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的发酵菌液。
优选地，浇灌所用的所述发酵菌液中胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的含量为0.5×108~1.5×108 cfu/mL。在该浓度下，浇灌的接种剂量以1000 mL/m2为宜。
优选地，所述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的发酵菌液的制备方法包括：将所述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株接种到胶质固体培养基，36℃恒温培养12~24h进行活化，挑取单菌落接入胶质液体培养基中，36℃恒温振荡培养12~24h，以10%的接种量将培养物接种到胶质液体培养基，36℃恒温振荡培养48~60h，离心回收菌体，用无菌水调节芽孢浓度至0.5×108~1.5×1010cfu/mL，即得所述发酵菌液。
第四方面，本发明实施例还提供一种菌剂，所述菌剂包括上述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的发酵物。
该菌剂可用于处理作物的拌种、灌溉，以达到改善作物长势、促进作物生长、提高产量的作用。
优选地，所述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的发酵物的制备方法包括：将所述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株接种到胶质固体培养基，36℃恒温培养12~24h进行活化，挑取单菌落接入胶质液体培养基中，36℃恒温振荡培养12~24h，以10%的接种量将培养物接种到胶质液体培养基，36℃恒温振荡培养48~60h。
附图说明
图1为实施例1中HB-02菌株产生IAA能力检测结果；
图2为实施例1中HB-02菌株菌落形态；
图3为实施例1中HB-02菌株菌体形态；
图4为实施例1中HB-02菌株的***发育树。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下实施例中所采用的实验方法如无特殊说明，均为本领域的常规方法。
以下实施例中所采用的原料、试剂等，如无特殊说明，均从商业途径获得。
以下实施例中试验数据采用SPSS13.0软件进行分析，用单因素ANOVA进行方差分析，结果均以平均数±标准差表示，并用Duncan法进行多重比较。
实施例1
本发明实施例提供了一株胶质类芽孢杆菌HB-02菌株，该菌株通过以下步骤筛选得到：
1 试验方法
1.1 培养基及试剂配制
PKO无机磷培养基：葡萄糖10.0 g，Ca3(PO4)2 5 g，(NH4)2SO4 0.5 g，NaCl 0.2 g，KCl 0.2 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，MnSO4·H2O 0.03 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，酵母浸粉0.5 g，加水补充至1000 mL，pH 6.8~7.0，115℃灭菌20 min。
蒙金娜有机磷培养基：葡萄糖10.0 g，(NH4)2SO4 0.5 g，NaCl 0.3 g，KCl 0.3 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，MnSO4·H2O 0.03 g，CaCO3 5.0 g，酵母浸粉0.4 g，蛋黄卵磷脂0.2 g，去离子水1 000 mL，pH 7.0，115℃灭菌20 min。
解钾培养基：蔗糖10.0 g，七水硫酸镁0.5 g，碳酸钙1.0 g，硫酸铵1.0 g，氯化钠0.l g，酵母膏0.5 g，磷酸氢二钠2.0 g，钾长石粉10.0 g，去离子水1 000 mL，pH 7.2～7.4，115℃灭菌20 min。
YMA培养基：称取磷酸二氢钾0.5 g、酵母粉1.0 g、甘露醇10.0 g、硫酸镁0.2 g、氯化钠0.1 g、色氨酸100 mg、蒸馏水1000 mL，pH 6.8~7.2，121℃灭菌15 min。
阿须贝无氮液体培养基：葡萄糖10.0g，K2HPO4 0.2g，NaCl 0.2g，MgSO4·H2O0.2g，K2SO4 0.2g，CaCO3 5.0g，酵母浸粉0.5g，pH7.0，水1000 mL，115℃灭菌20 min。
阿须贝无氮固体培养基：在阿须贝无氮液体培养基中加入琼脂，每1000 mL液体培养基中加入琼脂20 g，115℃灭菌20 min。
胶质液体培养基：白糖5 g，Na2HPO4 2 g，MgSO4 0.5 g，CaCO3 0.1 g，FeCl3 0.1 g，水1000 mL，pH 7.2-7.5，115℃灭菌20 min。
胶质固体培养基：在胶质液体培养基中加入琼脂，每1000 mL液体培养基中加入琼脂20 g，115℃灭菌20 min。
钼锑贮存液：将126 mL浓硫酸缓慢加入400 mL水中，搅拌冷却后称取10 g钼酸铵加入约60℃的300 mL水中，搅拌至完全溶解并冷却。将稀释后的硫酸溶液缓慢加入钼酸铵溶液中，边加边搅拌。加入100 mL的0.5%酒石酸锑钾溶液，蒸馏水定容至1 L，避光保存。
钼锑抗显色剂：1.50 g抗坏血酸完全溶于100 mL钼锑贮存液中。
2,4-二硝基苯酚溶液：称取2,4-二硝基苯酚0.25 g溶于100 mL蒸馏水。
磷标准溶液：称取经45℃干燥6 h的KH2PO4 0.4394 g，溶于400 mL蒸馏水中，加入5mL浓硫酸，用蒸馏水定容到1000 mL，此溶液浓度为100 mg/L，继续稀释可以得到5.0 mg/L的磷标准溶液。
钾标准溶液：准确称取经105℃烘干4~6 h的分析纯KCl 1.5830 g，溶于蒸馏水中，定容到1000 mL，即为含K2O 1000 mg/L的钾标准溶液。将此溶液进一步稀释得到100 mg/L的钾标准溶液。
PC比色液的配制：称取12 g FeCl3溶于300 mL蒸馏水中，缓缓加入429.7 mL浓硫酸，冷却后定容至1000 mL。
1.2筛选方法
1.2.1土样采集
选取河北农业大学农业园小麦种植区健壮麦苗根际土壤，称取10 g放入含有90mL无菌水和玻璃珠的灭菌三角瓶中，摇床振荡1 h，将悬浊液用无菌水进行10倍系列梯度稀释，选取合适梯度的稀释液100 μL涂布于胶质培养基平板，36℃恒温倒置培养40 h分离单菌落。共分离获得细菌菌株863株。
1.2.2溶磷解钾细菌的分离培养
将1.2.1分离的菌株点接于蒙金娜有机磷培养基、PKO无机磷培养基、解钾培养基平板上，36℃培养5~7 d，观察平板中菌株的生长情况，有无分解圈出现，并根据分解圈的直径初步判断菌株溶磷解钾能力，共筛选得到作用效果显著的细菌18株。
将具有溶磷解钾能力的上述18株菌株进一步纯化后保存，进行溶磷、解钾、固氮能力定量检测。
1.2.3细菌溶磷能力的定量测定
细菌溶解无机磷的检测采用钼锑抗比色法进行。将1.2.2筛出的菌株在胶质液体培养基中于36℃摇床振荡培养过夜进行活化，按1%接种量接种于50 mL PKO液体培养基中，36℃摇床培养7 d。将发酵液于10 000 r/min离心10 min，吸取5 mL上清液于50 mL容量瓶中，滴加两滴2,6-二硝基苯酚溶液之后再滴加稀盐酸调至溶液无色，填加钼锑抗显色液5mL并定容，以空白培养基为对照，在室温下反应30 min后在720 nm测定吸光度。细菌溶解有机磷的检测采用蒙金娜有机磷培养基，检测方法同上。分别吸取0、0.5、1.0、1.5、3、5、10和15 mL的5 mg/L的磷标准溶液于50 mL容量瓶中，添加双蒸水至刻度后混匀，检测方法同上，以吸光值为纵坐标，标准磷浓度为横坐标绘制标准曲线。
1.2.4细菌解钾能力的定量测定
将1.2.2筛出的菌株在胶质液体培养基于36℃摇床振荡培养过夜进行活化，按1%接种量接种于50 mL解钾液体培养基中，36℃摇床培养7 d。将发酵液10 000 r/min离心15min，回收上清液，以无菌培养基为空白对照，使用原子吸收分光光度计检测钾离子含量。向50 mL容量瓶分别加入适量的钾标准液，用蒸馏水定容，得到0、10、20、30、40、50、60、70 mg/L的钾离子浓度梯度溶液，使用原子吸收分光光度计进行检测，以钾离子浓度为横坐标，检测读数为纵坐标，绘制钾标准曲线。
1.2.5细菌固氮能力检测
将1.2.2筛出的菌株接入胶质固体培养基斜面，36℃恒温培养过夜进行活化。使用接种环在阿须贝固体培养基上划线，36℃培养箱中进行培养。观察菌株在阿须贝固体平板生长情况。
采用细菌固氮酶试剂盒（ELISA）检测固氮菌的固氮酶活性，具体步骤：将板条室温放置20min，之后从铝箔袋中取出，每个孔加入样品50μL，标准系列溶液同上加50μL，每个处理3次重复。每孔加辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，封板膜封好，37℃恒温孵育60min，除去水分。每孔加洗涤液350μL，静置1min后尽量除去水分，重复5次。每孔依次加入该试剂盒中的底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。每孔加入终止液50μL，立即在450nm波长测定各孔的OD值。将系列浓度的吸光值作为纵坐标，固氮酶活性作为横坐标，获得回归方程，并计算样品的固氮酶活性。
上述1.2.3~1.2.5的实验结果如表1所示。
表1 筛选的细菌溶磷、解钾、固氮能力检测
菌株编号 有机磷含量（μg/mL） 无机磷含量（μg/mL） 钾含量（μg/mL） 固氮酶活性（U/L）
HB-01 12.17 16.53 7.49 15.67
HB-02 79.54 112.13 37.42 26.53
HB-35 68.43 77.42 18.37 21.48
HB-68 16.79 13.58 23.62 15.69
HB-84 8.22 36.16 26.33 19.56
HB-125 35.27 123.58 10.11 23.49
HB-168 79.89 37.63 19.58 24.21
HB-224 62.36 95.21 37.54 20.16
HB-276 81.36 58.71 23.74 34.29
HB-297 63.17 36.89 15.43 8.54
HB-351 39.22 89.58 13.58 27.59
HB-465 32.16 25.97 26.52 31.85
HB-477 68.73 59.22 25.79 20.01
HB-534 47.28 35.42 29.16 21.33
HB-673 44.29 76.28 36.21 18.76
HB-725 59.37 43.25 21.69 23.58
HB-798 62.41 59.72 35.57 27.00
HB-829 13.19 28.93 40.71 23.69
综合分析4个检测指标可见，编号为HB-02的菌株溶磷、解钾、固氮的综合能力最强，对无机磷的溶解能力达112.13μg/mL，对有机磷的溶解能力为79.54μg/mL，对钾的释放量为37.42μg/mL，固氮酶活力为26.53 U/L，所以选择该菌株进行后续试验检测。
1.2.6 HB-02菌株合成3-吲哚乙酸（IAA）检测
配制IAA标准溶液，浓度依次为2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5和20.0 mg/L，分别取上述各3-吲哚乙酸标准溶液4 mL加入PC比色液4 mL，黑暗中静置0.5 h，取出立即测定OD530，另取4 mL蒸馏水加入PC比色液4 mL用于调零，重复测定3次，获得的数据分别取平均值绘制标准曲线。
将HB-02菌株转接到胶质液体培养基中，36℃摇床振荡培养24 h，按照1%接种量转接到YMA培养基中，36℃摇床振荡培养4 d。将培养菌液于10 000 r/min离心15 min，取上清液4 mL加入等量PC比色液，在黑暗中静置0.5 h，取出后立即用紫外分光光度计测定OD530，用离心并加入PC比色液的YMA培养基作为对照调零，测得各处理样品OD530值并记录，根据标准曲线计算菌株产3-吲哚乙酸的量。
结果表明HB-02菌株合成IAA的浓度为69.87μg/mL（如图1所示）。
1.2.7 HB-02菌株促生效果田间试验
将HB-02菌株划线接种于胶质固体培养基，36℃恒温培养过夜进行活化，挑取单菌落于胶质液体培养基中36℃振荡培养过夜，按照10%接种量接种于新鲜胶质液体培养基，36℃振荡培养48 h。将发酵液10 000×g离心10 min回收菌体，用无菌水悬浮稀释成HB-02菌株活菌浓度约为1×108 cfu/mL或1×1010 cfu/mL的菌悬液，细菌计数采用细菌计数板进行。
在河北农业大学实验农场选取小麦种植地块，地块面积约666.7 m2，分为3小块，每小块约222.2 m2，分别设为对照组，处理1组和处理2组。对照组不接种菌剂；处理1组和处理2组均采用HB-02菌株活菌浓度约为1.0×1010 cfu/mL的菌悬液拌种，接种量为20 mL/kg种子；在返青期，处理2组采用以HB-02菌株活菌浓度约为1.0×108 cfu/mL的菌悬液浇灌的方式接种促生菌，接种剂量为1000 mL/m2。对照组和处理组均不施肥，采用机械播种，管理方式同一般大田。
在小麦拔节期，采取5点取样法，每点连续选取10株，每个处理选取50株，选取最上部完全伸展开的叶片中部同一位置，使用便携式叶绿素含量测定仪测量叶绿素相对含量（SPAD值），计算平均值。测量株高并计算平均值。将小麦植株地上部分带回实验室烘干称量，测定地上部干重。在小麦乳熟期，采取5点取样法进行取样，每点取连续3行，每行取0.4m，调查统计株高、平均穗粒数（每个随机取样点30株，每组取样150株），种子晾干后称千粒重，并单打单收测定每平方米的产量。
经对小麦生长效果进行调查可见，小麦播种后7 d开始出苗，10 d后基本上全部出苗。对试验小区麦田的出苗情况调查结果发现，菌剂处理组出苗情况较好，叶色浓绿，麦苗粗壮健壮。小麦过冬返青后，处理组小麦植株长势较好，叶色绿；对照组小麦长势较弱，叶尖泛黄。在拔节期对小麦植株的生长情况进行调查发现，处理组麦苗长势较好，植株健壮、稠密，叶片浓绿、肥厚，株高较对照组明显增高。处理1组株高比对照组高8.65%，处理2组比对照组高9.21%，两个处理组和对照组相比差异显著。处理1组叶绿素相对含量比对照组高8.25%，处理2组比对照组高11.14%，两处理组和对照组相比差异显著。处理1组干重比对照组高7.03%，处理2组比对照组高10.46%，两个处理组和对照组相比差异显著。在株高、叶绿素相对含量和干重等指标检测中，处理2组均高于处理1组，但差异不显著，表明两次接种HB-02菌株有利于促进小麦的生长（如表2所示）。
表2胶质类芽孢杆菌HB-02菌株在小麦拔节期促生长效果检测
组别 株高/cm 叶绿素相对含量 干重/g
对照组 28.57±1.27b 40.75±1.23b 21.04±1.12a
处理1组 31.04±1.31a 44.11±2.13a 22.52±1.01b
处理2组 31.69±1.49a 45.29±2.89a 23.24±2.35b
注：表中数据为平均数±标准差。同列数据后不同字母表示同一检测指标、不同组别的数据经LSD法检验在P<0.05水平差异显著。
在小麦乳熟期，通过对株高、穗数、穗粒数、千粒重和产量等指标进行调查，分析了促生菌对小麦的促生效果。和对照组相比，处理1组和处理2组小麦的上述指标均有增加，其中穗数、穗粒数和千粒重增加不显著，株高和产量增加显著，小麦产量由709.86 g/m2增加到830.68 g/m2，促生效果显著。在株高、穗粒数、千粒重和产量等指标检测中，处理2组均优于处理1组，但两组之间差异不显著（如表3所示）。表明接种HB-02菌株能显著提高小麦产量，接种两次的效果更优。
表3 胶质类芽孢杆菌HB-02菌株在小麦乳熟期促生长效果检测
组别 株高/cm 穗数/m2 穗粒数 千粒重/g 产量/（g/m2）
对照 80.14±2.03b 768.24±48.75a 31.28±2.72a 29.54±2.35a 709.86±33.27b
处理1组 84.38±2.11a 813.54±55.71a 32.17±2.96a 30.82±3.43a 806.61±40.15a
处理2组 85.76±3.54a 815.36±49.72a 32.79±3.03a 31.07±2.94a 830.68±36.27a
注：表中数据为平均数±标准差。同列数据后不同字母表示同一检测指标、不同组别的数据经LSD法检验在P<0.05水平差异显著。
2、HB-02菌株的种属鉴定
将各方面性能较为良好的HB-02菌株进行种属的鉴定。
2.1 菌落和菌体形态观察
将HB-02菌株在胶质固体培养基划线接种，36℃恒温培养过夜，观察菌落形态。菌体形态观察利用结晶紫染色，在100×物镜显微镜下观察菌体形态。
在胶质固体培养基上，HB-02菌株菌落圆形或者椭圆形，呈乳白色或淡黄色，菌落透明或者半透明，边缘整齐，菌落***呈馒头状，湿润黏稠，呈脓状（如图2所示）。菌体呈杆状，染色均匀，可形成内生芽孢，芽孢中生，椭圆形（如图3所示）。
2.2 16S rDNA基因序列***发育分析
提取细菌基因组DNA为模板，16S rDNA序列扩增采用通用引物27f：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG和1495r：CTACGGCTACCTT GTTACGA。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。根据设计的引物的退火温度和扩增片段大小设计PCR反应程序。反应体系为5 μL 10×PCR Buffer，4 μL dNTP，引物各2 μL，0.25 μL DNA聚合酶，1 μL DNA模板，加ddH2O至50 μL。PCR反应条件：95℃预变性5 min；95℃变性45 s，50℃退火30 s，72℃延伸1min 30 s，35个循环；72℃饱和延伸10 min。反应结束后，用1 %琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果。PCR产物由北京华大基因有限公司进行测序。将测序的16S rDNA序列在GenBank核酸数据库中进行Blast比对及同源性比较，用MegAlign软件中的Clustal算法进行序列排序，Kimura双参数模型计算进化距离，Neighbor-Joining法构建***进化树（如图4所示）。
根据16S rDNA序列相似性分析，确定HB-02菌株为胶质类芽孢杆菌（Paenibacillus mucilaginosus）。
将该胶质类芽孢杆菌HB-02菌株于2022年04月06日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No. 24636；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
实施例2
本实施例提供了一种菌剂，该菌剂为胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的发酵物，该发酵物的制备方法为：将实施例1所得胶质类芽孢杆菌HB-02菌株接种到胶质固体培养基，36℃恒温培养过夜（16h）进行活化，挑取单菌落接种于胶质液体培养基，36℃恒温振荡培养过夜（16h），以10%接种量将菌液接种于胶质液体培养基中，36℃恒温振荡培养48h，发酵液10000×g离心10 min回收菌体，用无菌水调节芽孢浓度至所需浓度，如0.5×108~1.5×108cfu/mL或0.5×1010~1.5×1010cfu/mL，灌封，即得。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 河北冀微生物技术有限公司，河北农业大学
<120> 一株胶质类芽孢杆菌HB-02菌株及其促作物生长的应用
<130> 20220518
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1492
<212> DNA
<213> 16SrDNA
<400> 1
aagagtttga tcatggctca ggacgaacgc tggcggcgtg cctaatacat gcaagtcgag 60
cggagcactt cggtgcttag cggcggacgg gtgagtaaca cgtaggcaac ctgcctgtaa 120
gatcgggata actaccggaa acggtagcta agaccggata gctggtttcg gtgcatgccg 180
gaatcatgaa acacggggca acctgtggct tacggatggg cctgcggcgc attagctagt 240
tggcggggta atggcccacc aaggcgacga tgcgtagccg acctgagagg gtgatcggcc 300
acactgggac tgagacacgg cccagactcc tacgggaggc agcagtaggg aatcttccgc 360
aatgggcgca agcctgacgg agcaacgccg cgtgagtgat gaaggttttc ggatcgtaaa 420
gctctgttgc cagggaagaa tgtcgtggag agtaactgct ctgcgaatga cggtacctga 480
gaagaaagcc ccggctaact acgtgccagc agccgcggta atacgtaggg ggcaagcgtt 540
gtccggaatt attgggcgta aagcgcgcgc aggcggtctt ttaagtctgg tgtttaagcc 600
cggggctcaa ccccggttcg caccggaaac tggaagactt gagtgcagga gaggaaagcg 660
gaattccacg tgtagcggtg aaatgcgtag agatgtggag gaacaccagt ggcgaaggcg 720
gctttctgga ctgtaactga cgctgaggcg cgaaagcgtg gggagcaaac aggattagat 780
accctggtag tccacgccgt aaacgatgag tgctaggtgt taggggtttc gatacccttg 840
gtgccgaagt aaacacaata agcactccgc ctggggagta cgctcgcaag agtgaaactc 900
aaaggaattg acggggaccc gcacaagcag tggagtatgt ggtttaattc gaagcaacgc 960
gaagaacctt accaggtctt gacatccctc tgaaagccct agagataggg ccctccttcg 1020
ggacagaggt gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta 1080
agtcccgcaa cgagcgcaac ccttgacttt agttgccagc attgagttgg gcactctaga 1140
gtgactgccg gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc atgcccctta 1200
tgacctgggc tacacacgta ctacaatggc cggtacaacg ggaagcgaag tcgcgagatg 1260
gagcgaatcc ttagaagccg gtctcagttc ggattgcagg ctgcaactcg cctgcatgaa 1320
gtcggaattg ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc cgggtcttgt 1380
acacaccgcc cgtcacacca cgagagttta caacacccga gtaacccgta agggagccag 1440
ccgtcgaagg tggggtagat gattggggtg aagtcgtaac aaggtagccg ta 1492

Claims (10)

1.一株胶质类芽孢杆菌HB-02菌株，其特征在于，其分类名称为胶质类芽孢杆菌（Paenibacillus mucilaginosus），于2022年04月06日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No. 24636；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.权利要求1所述的胶质类芽孢杆菌HB-02菌株在促作物生长中的应用。
3.一种促作物生长的方法，其特征在于，用权利要求1所述的胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的发酵菌液对作物种子拌种后再进行播种。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述作物为小麦。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述发酵菌液中所述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的含量为0.5×1010~1.5×1010 cfu/mL。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在返青期以浇灌的方式施用所述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的发酵菌液。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，浇灌所用的所述发酵菌液中所述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的含量为0.5×108~1.5×108 cfu/mL。
8.根据权利要求3、4或6所述的方法，其特征在于，所述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的发酵菌液的制备方法包括：将所述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株接种到胶质固体培养基，36℃恒温培养12~24h进行活化，挑取单菌落接入胶质液体培养基中，36℃恒温振荡培养12~24h，以10%的接种量将培养物接种到胶质液体培养基，36℃恒温振荡培养48~60h，离心回收菌体，用无菌水调节芽孢浓度至0.5×108~1.5×1010cfu/mL，即得所述发酵菌液。
9.一种菌剂，其特征在于，所述菌剂包括权利要求1所述的胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的发酵物。
10.根据权利要求9所述的菌剂，其特征在于，所述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株的发酵物的制备方法包括：
将所述胶质类芽孢杆菌HB-02菌株接种到胶质固体培养基，36℃恒温培养12~24h进行活化，挑取单菌落接入胶质液体培养基中，36℃恒温振荡培养12~24h，以10%的接种量将培养物接种到胶质液体培养基，36℃恒温振荡培养48~60h。
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