CN114806931A - 贝莱斯芽孢杆菌yq-1-8及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及微生物技术领域，具体公开一株贝莱斯芽孢杆菌YQ‑1‑8及其应用。所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)YQ‑1‑8的菌种保藏编号为CGMCC No.24438，其可用于作为植物促生和盐碱地改良产品。本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌YQ‑1‑8具有显著的盐碱地改良和植物促生作用，可以实现在设施退化盐碱土壤环境下促进植物的快速生长，在设施种植领域具有重要的应用价值。

Description

贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8及其应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8及其应用。
背景技术
设施种植是保证蔬菜周年供应、提高农业种植效益的现代农业生产方式。但设施内部土壤由于受到封闭性棚室结构、过量施肥和盲目灌溉等因素的影响，常会出现土壤板结和次生盐渍化等问题，造成农作物产量和质量的下降。因此，亟待进行设施退化土壤的改良修复，以有效保障设施蔬菜产业的可持续发展。
经过多年的研究与实践应用，针对设施蔬菜退化土壤的改良建立了轮换倒茬、以水排盐、换土降盐和增施有机肥等拯救措施，但这些措施在设施蔬菜集约种植区均有较大的生产限制，难以持续地改善土壤，且无法从根本上解决土壤的退化导致的影响植物生长的问题。因此，寻找新的策略以降低土壤盐渍化对作物生长的危害具有重要的意义。
微生物对土壤理化性状改善、植物养分供应均具有重要的作用。采用具有一定功能的微生物菌剂与土壤改良措施相结合，可以更为有效的改良退化土壤，从而使设施蔬菜退化土壤的修复更为有效。设施退化土壤的主要表现是土壤盐渍化程度增加和由于养分供应不平衡造成的植物生长受限，然而大部分微生物在上述盐渍化程度高的退化土壤环境中难以生长，作用效果并不理想，无法对植物生长受限的情况进行有效的改善。
发明内容
针对现有对设施退化土壤的改良措施存在的上述等问题，本发明提供一种贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8及其应用，该贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8具有良好的耐盐特性，能在盐渍化程度较高的设施退化土壤中正常繁殖，实现了在盐渍化土壤中良好的植物促生效果，可保证植物在设施退化土壤中的正常生长。
为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：
一种贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8，所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)YQ-1-8的菌种保藏编号为CGMCC No.24438。该贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8于2022年2月28日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
相对于现有技术，本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8具有较宽范围的盐浓度环境下的生存能力，同时，所述贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8还能有效的降解土壤中的有机磷，并可产生大量的吲哚-3-乙酸和胞外聚合物EPS，实现对植物的促生作用，保证植物在盐渍化或者板结的退化土壤中快速生长。因此，该贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8实现了在设施退化土壤中促进植物生长的作用，在设施种植领域具有重要的应用价值。
本发明提供了所述贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8在作为盐碱土壤改良产品中的应用。
本发明提供了所述贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8在作为植物促生产品中的应用。
本发明提供了所述贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8在作为降解有机磷产品中的应用。
本发明提供了所述贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8在生产吲哚-3-乙酸IAA中的应用。
本发明还提供了所述贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8在生产胞外聚合物EPS中的应用。
本发明还提供了一种微生物菌剂，该微生物菌剂包括所述的贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8。
优选的，所述微生物菌剂还包括微生物载体。
优选的，所述微生物载体包括硅藻土、凹凸棒土和海藻酸钠中的至少一种。
本发明还提供了所述的微生物菌剂的制备方法，该制备方法包括：将所述贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8活化后，接种于LB液体培养基中，25-28℃摇培20-30h，得到培养液；然后将所述培养液接种到发酵培养基中，25-28℃摇培70-75h，得到发酵液；将所述发酵液与微生物载体混合，干燥，得到活菌浓度为2×108cfu/g-2×109cfu/g的微生物菌剂；每升所述发酵培养基的配方为：蛋白胨7-9g、葡萄糖8-12g、牛肉浸膏4-5g、酵母粉0.8-1.2g，用水补足至1000mL，调节pH值至6.8-7.2。
附图说明
图1是本发明实施例2中YQ-1-8菌液处理后的黄瓜种子和空白对照组的黄瓜种子的生长情况图；
图2是本发明实施例6中菌株YQ-1-8的菌落形态特征图；
图3是本发明实施例6中贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8的***发育树构建图；
图4是本发明实施例7中菌株YQ-1-8解有机磷的测试结果图；
图5是本发明实施例7中菌株YQ-1-8产IAA能力测试结果图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下实施例中所采用的实验方法如无特殊说明，均为本领域的常规方法。
以下实施例中所采用的原料、试剂等，如无特殊说明，均从商业途径获得。
以下实施例中：
LB固体培养基的配方为：胰蛋白胨10g、酵母粉5g、NaCl 10g、琼脂15g、蒸馏水补足至1L，pH调至7.0，115℃灭菌30min。
LB液体培养基的配方为：胰蛋白胨10g、酵母粉5g、NaCl 10g、蒸馏水补足至1L，pH调至7.0，115℃灭菌30min。
发酵培养基的配方为：蛋白胨8g、葡萄糖10g、牛肉浸膏4.5g、酵母粉1g，蒸馏水补足至1L，调节pH值至7.0，115℃灭菌30min。
解钾培养基的配方为：蔗糖5g，Na2HPO42g，MgSO4 0.5g，FeCl3 0.005g，CaCO3 0.1g，钾长石粉(300目)1g，琼脂15g，蒸馏水补足至1L，115℃灭菌30min。
无机磷培养基的配方为：葡萄糖10g，(NH4)2SO4 0.5g，酵母粉0.5g，NaCl 0.3g，MgSO4 0.3g，KCl 0.3g，FeSO4 0.03g，MnSO4 0.03g，Ca3(PO4)25g，琼脂15g，蒸馏水补足至1L，115℃灭菌30min。
有机磷培养基的配方为：葡萄糖10g，(NH4)2SO4 0.5g，酵母粉0.5g，NaCl 0.3g，MgSO4 0.3g，KCl 0.3g，FeSO4 0.03g，MnSO4 0.03g，卵磷脂0.2g，CaCO31g，琼脂15g，蒸馏水补足至1L，115℃灭菌30min。
IAA培养基的配方为：K2HPO41.15g，蛋白胨20g，丙三醇15ml，L-色氨酸0.1g，MgSO41.5g，蒸馏水补足至1L，115℃灭菌30min。
产铁载体培养基(CAS培养基)的配方为：铬天青60.5mg，十六烷基三甲基溴化铵(HDTMA)72.9mg，FeCl3 2.645g，二水磷酸二氢钠295.25mg，十二水磷酸二氢钠1213.5mg，NH4Cl 125mg，KH2PO437.5mg，NaCl 62.5mg，琼脂9g，蒸馏水补足至1L，116℃灭菌30min。
固氮培养基的配方为：KH2PO40.2g，MgSO4 0.2g，NaCl 0.2g，CaCO3 5g，甘露醇10g，CaSO4 0.1g，琼脂15g，蒸馏水补足至1L，121℃灭菌15min。
产EPS培养基的配方为：蔗糖20g，K2HPO40.2g，KH2PO40.5g，NaCl 100g，MgSO4 0.5g，酵母粉3g，蒸馏水补足至1L，121℃灭菌15min。
实施例1
贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8的筛选过程
利用五点采样法采集我国邯郸永年、廊坊永清与沧州肃宁种植十年以上的设施土壤样品共32个。采用含盐量为10wt％的LB培养基进行耐盐微生物的筛选。取5g供试土壤加入装有45mL无菌水的锥形瓶中，200r/min振荡30min，得到土壤混合液。将土壤混合液按梯度进行稀释，选择稀释的浓度梯度为10-4、10-5、10-6的土壤混合液，分别吸取100μL土壤混合液涂布于含有10wt％的NaCl的LB固体培养基中用于分离耐盐微生物，每个稀释度3个平板。将平板倒置放入28℃恒温培养箱中培养96h，在平板上挑取菌落形态各异、且菌落直径较大的菌株，经3次划线纯化，共纯化获得菌株40株，编号如表1所示，纯化后的菌株用25％的甘油储存于-80℃冰箱保藏备用。
实施例2
耐盐菌株促生效果初筛
将实施例1中-80℃保存的40株耐盐菌株在LB平板上活化，之后将活化好的菌株接种到LB液体培养基中，28℃培养24h。将菌液10000rpm离心10min，去掉上清液并加入10ml无菌水震荡，将菌体重悬，并用无菌水重悬菌体至OD600为0.1，得到菌液。将黄瓜种子置于该OD600为0.1的菌液中浸泡4h，整齐地摆放在已灭菌的滤纸上并加入4mL的含有1wt％的NaCl的无菌盐水(充分浸湿即可)，放入28℃培养箱中培养72h，测定黄瓜种子的简化活力指数增长率，统计菌株对黄瓜的促生结果(以同批次的未经该菌液处理的黄瓜种子作为空白对照)。
简化活力指数＝(平均根长+平均茎长)×种子的发芽率
简化活力指数增长率＝(处理组简化活力指数-对照组简化活力指数)/对照组简化活力指数×100％
初筛结果如表1所示，1A-3、2A-2、YN4-2等10株菌未表现出促生效果，2A-1、2A-7、YQ-3-1等21株菌的简化活力指数增长率在0-10％之间。3A-3、YQ-1-3和SN-1-5等9株菌的简化活力指数增长率大于10％，其中YQ-1-8菌株的简化活力指数增长率最高，达到15.18％。
表1菌株的简化活力指数增长率％
菌株编号 增长率/％ 菌株编号 增长率/％ 菌株编号 增长率/％
1A-3 - YN-2-3 - SN-1-2 10.75
2A-1 9.45 YN-2-6 2.79 SN-1-5 10.62
2A-2 - YN-2-2 8.36 YQ-8-3 2.79
2A-7 7.82 YN-3-6 1.33 YQ-8-4 7.96
3A-3 11.40 YN-3-4 2.92 YQ-1-1 4.88
YQ-1-3 11.89 SN-4-2 5.04 YQ-1-4 2.66
YQ-3-1 4.07 YN-4-3 - YQ-1-5 13.58
SN-1-6 2.44 SN-4-4 - YQ-8-1 10.18
SN-13-3 5.70 SN-13-2 - YQ-1-8 15.18
YN-4-2 - YN-4-5 3.45 YQ3-2 10.19
1A-2 - SN-4-3 - SN-4-6 8.81
YQ-3-3 2.78 YQ-1-7 - SN-13-4 12.92
YQ-3-4 6.07 YQ-8-2 9.51
YN-3-2 0.54 YN-3-5 2.36
其中，YQ-1-8菌液处理后的黄瓜种子和空白对照组的黄瓜种子的生长情况如图1所示。
实施例3
对实施例2中筛选得到的简化活力指数增长率大于10％的9株菌株的耐盐特性进行测定
将促生能力大于10％的9株菌在LB培养基上活化，之后将活化好的菌株接种于NaCl质量浓度为5％、7％、10％、15％、20％的LB固体培养基上，28℃恒温培养7d，每个菌株3次重复，观察菌株在不同盐浓度梯度下的生长情况。生长非常旺盛记为“++++”，生长旺盛记为“+++”，生长较旺盛的记为“++”，生长一般的记为“+”，生长受到抑制的记为“-”。结果如表2所示，可以看出，9株促生菌株中YQ-1-3、YQ-8-1、YQ-3-2、SN-13-4、YQ-1-8和3A-3的耐盐能力较强，其中YQ-1-8菌株在含盐量达到20％的LB培养基中依然能够正常生长。
表2促生菌在不同盐浓度下的生长情况
菌株编号 5％ 7％ 10％ 15％ 20％
YQ-1-3 +++ ++ ++ + -
YQ-1-5 ++ ++ + - -
YQ-1-8 ++ ++ ++ ++ ++
YQ-8-1 +++ ++ ++ + -
YQ-3-2 ++ ++ ++ + -
SN-1-2 ++++ ++++ ++ - -
SN-1-5 ++++ ++++ ++ - -
SN-13-4 ++++ ++++ ++ + -
3A-3 ++ ++ ++ + -
实施例4
选取促生效果好、且具有良好耐盐能力的菌株3A-3和YQ-1-8菌株，测定其土壤定殖能力
将YQ-1-8菌株活化后，接种于LB液体培养基中，26℃摇培24h，得到培养液；然后将培养液接种到发酵培养基中，26℃摇培72h，得到发酵液；将发酵液与硅藻土混合，喷雾干燥，得到活菌浓度为1×109cfu/g的微生物菌剂。
用同样的方法得到包含3A-3菌株的微生物菌剂。
采用盆栽试验测定3A-3菌株和YQ-1-8菌株在土壤中定殖情况的测定。选择黄瓜作为栽培作物，在口径约7cm、高7cm的花盆中进行实验。将上述微生物菌剂与灭菌土壤进行掺混(掺混后土壤中的活菌浓度如表3所示)，之后分别在接种后的1d、3d、5d、7d、14d、28d、60d测定土壤中3A-3菌株和YQ-1-8菌株的活菌数，结果如表3所示，可以看出，YQ-1-8菌株的定殖能力较强，其1、3、5、7、14、28、60d土壤中的数量变化较小。菌株YQ-1-8具有良好的土壤定殖能力，接种60d后，土壤中菌YQ-1-8的数量为2.19×107cfu/g，可以用于作为微生物制剂或肥料在农作物上应用。
表3菌株在土壤中的定殖情况
接种时间(d) 菌株YQ-1-8(×10<sup>7</sup>cfu/g) 菌株3A-3(×10<sup>7</sup>cfu/g)
1 2.61 16.53
3 2.06 10.12
5 0.94 6.20
7 1.46 2.44
14 1.53 0.89
28 1.68 0.90
60 2.19 0.85
实施例5
耐盐促生菌株YQ-1-8对黄瓜的促生作用
菌株YQ-1-8在LB固体培养基上划线活化，28℃培养48h，挑取菌苔接种于100mL已灭菌的LB液体培养基中，在28℃、200rpm/min摇床条件下培养12h，将菌液10000rpm离心10min，去掉上清液并加入10mL无菌水震荡，将菌体重悬，并用无菌水重悬菌体并调OD600为0.1，得到菌液。
3A-3菌株的菌液制备方法同上。
采用盆栽试验进行，土壤为设施蔬菜种植土壤，调整至土壤含盐总量为0.5％，将土壤加入直径7cm、高7cm的花盆中进行试验，将土壤与浓度为OD600为0.1菌液混合(10kg土壤：1L菌液)，以添加等量无菌水的处理为对照组，将清洗干净的大小一致的黄瓜种子种植在花盆中，每盆3粒种子，待黄瓜发芽后保留长势一致的幼苗，每盆保留1株黄瓜幼苗，培养4周后测量黄瓜茎粗、株高、地上鲜质量与干质量、叶绿素含量。测定结果如表4所示，与3A-3菌株相比，YQ-1-8能够更明显的促进黄瓜在盐渍土壤的生长。
表4菌株对黄瓜幼苗生长的影响
Figure BDA0003575679590000091
注：数据由平均值±标准差(SD)表示，不同小写字母表示p<0.05水平差异。
实施例6
菌株YQ-1-8的鉴定
形态学鉴定：
从低温冰箱中取出菌株YQ-1-8接种于LB固体培养基上，28℃培养箱中培养48h，观察菌落生长情况及其形态特征如图2所示：菌株生长较快，椭圆形，白色，不透明，凸陷，边缘褶皱。
分子生物学鉴定：
将菌株编号为YQ-1-8的菌株接种到LB培养基，28℃摇床培养24h，采用天根生化科技(北京)有限公司基因组DNA提取试剂盒提取该菌株的基因组DNA，然后以提取的总DNA作为模板，以27f(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′，SEQ ID NO.1)和1492r(5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′，SEQ ID NO.2)引物对进行PCR扩增。PCR反应体系为25μL，反应体系为：基因组DNA 1μL，10×PCR buffer 2.5μL，27f引物0.5μL，1492r引物0.5μL，dNTPs 2μL，Taq酶(5U/μL)0.5μL，ddH2O补足25μL。反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性1min，50℃退火1min，72℃延伸2min，循环35次；72℃延伸10min。PCR产物用1％琼脂糖凝胶进行电泳检测，将PCR条带大小约为1500bp的PCR产物送上海生工生物技术有限公司测序后，获得16S rDNA序列(如SEQ ID NO.3所示)。
登录NCBI网站(www.ncbi.nlm.nih.gov)将获得16S rDNA基因序列与GenBank中己知的序列进行同源性比对分析，选择同源性相近的序列进行***进化分析，序列先进行多重比对，之后使用MEGA 7软件采用邻接法(Neigh bor-Joining)构建***发育树，如图3所示，最终明确菌株的***发育学地位。经过序列分析显示，该菌株属于的一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。该贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8于2022年2月28日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为CGMCC No.24438，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
实施例7
菌株YQ-1-8的促生机理分析：
将初筛得到的菌株YQ-1-8于LB固体培养基上进行划线，28℃培养箱倒置培养2d备用。将活化好的菌株接入到50mL的LB液体培养基中，28℃摇床培养24h，得到试验所需菌液。将该菌液5μL分别接种到制备好的解钾培养基、无机磷培养基、有机磷培养基、产铁载体培养基、固氮培养基平板上，28℃条件下培养7d，观察并记录试验结果，如表5所示。该菌株在有机磷培养基上生长并在菌株周围出现浑浊斑，如图4所示，具有降解土壤中有机磷的能力。
另外将菌液按5％接种量接种于IAA培养基中，28℃摇床培养48h后，10000×g离心10min，取1ml上清液与2ml Salkowski试剂(浓硫酸15ml，双蒸水25ml，0.5mol/l FeCl30.75ml)混匀后，黑暗30min，观察IAA培养基的颜色发现颜色变为粉红色，如图5所示，说明该菌株有产IAA能力。另外，将菌株按5％接种量接种于EPS培养基，28℃摇床培养48h，取10ml培养液10000r/min离心10min，去除上清液，菌体烘干称重；同时，向上清液中加入30mL95％乙醇进行醇沉，放置4℃冰箱过夜，混合液10000r/min离心10min，去除上清液，沉淀进行烘干称重，EPS干重与菌体干重的比值即为菌株的EPS产量，测定结果表明该菌株能够产生胞外聚合物，产生数量为0.467g/g。
表5菌株YQ-1-8促生机理分析结果
促生机理种类 促生效果
解钾 -
解无机磷 -
解有机磷 +
产IAA +
产铁载体 -
固氮 -
产EPS +(0.467g/g)
注：“+”：具有该功能；“-”：无此项功能。
实施例8
贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8菌剂对盐渍化土壤改良的效果
将贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8菌剂与凹凸棒土进行复合，制备有效菌数为2亿的微生物菌剂(将贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8活化后，接种于LB液体培养基中，26℃摇培24h，得到培养液；然后将培养液接种到发酵培养基中，26℃摇培72h，得到发酵液；将发酵液与凹凸棒土混合，干燥后得到活菌浓度为2×108cfu/g的微生物菌剂)，进行土壤改良试验。试验设常规管理、施用YQ-1-8菌剂和凹凸棒土(对照组)三个处理，以黄瓜为试验作物，在种植10年以上的温室中进行试验，YQ-1-8菌剂在整地前撒施，亩用量6kg/亩，每个处理3次重复，随机排列。在黄瓜移植后30天，进行盐碱地土质盐分改良指标检测，采用浸出液烘干法测定土壤总盐含量、采用电导率仪测定土壤的电导率，于收获期测定黄瓜的产量。结果如表6所示，通过施用贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8菌剂可降低土壤的含盐量11.39％，电导率降低16.38％，产量提高11.91％。说明YQ-1-8微生物具有较好的降低土壤盐含量和提高其作物产量的作用。
表6 YQ-1-8菌剂对土壤盐分含量及产量的影响
处理 总盐含量(g/kg) 电导率(μS/cm) 产量(kg/亩)
常规管理 8.95 460.2 7424
YQ-1-8 7.93 384.8 8308
凹凸棒土 8.12 440.3 7942
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 河北科技大学
<120> 贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8及其应用
<130> 2022
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 27f
<400> 1
agagtttgat cctggctcag 20
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 1492r
<400> 2
tacggctacc ttgttacgac tt 22
<210> 3
<211> 1448
<212> DNA
<213> 16S rDNA
<400> 3
gcgggcgcgt gctatacatg caagtcgagc ggacagatgg gagcttgctc cctgatgtta 60
gcggcggacg ggtgagtaac acgtgggtaa cctgcctgta agactgggat aactccggga 120
aaccggggct aataccggat ggttgtttga accgcatggt tcagacataa aaggtggctt 180
cggctaccac ttacagatgg acccgcggcg cattagctag ttggtgaggt aacggctcac 240
caaggcaacg atgcgtagcc gacctgagag ggtgatcggc cacactggga ctgagacacg 300
gcccagactc ctacgggagg cagcagtagg gaatcttccg caatggacga aagtctgacg 360
gagcaacgcc gcgtgagtga tgaaggtttt cggatcgtaa agctctgttg ttagggaaga 420
acaagtgccg ttcaaatagg gcggcacctt gacggtacct aaccagaaag ccacggctaa 480
ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg ttgtccggaa ttattgggcg 540
taaagggctc gcaggcggtt tcttaagtct gatgtgaaag cccccggctc aaccggggag 600
ggtcattgga aactggggaa cttgagtgca gaagaggaga gtggaattcc acgtgtagcg 660
gtgaaatgcg tagagatgtg gaggaacacc agtggcgaag gcgactctct ggtctgtaac 720
tgacgctgag gagcgaaagc gtggggagcg aacaggatta gataccctgg tagtccacgc 780
cgtaaacgat gagtgctaag tgttaggggg tttccgcccc ttagtgctgc agctaacgca 840
ttaagcactc cgcctgggga gtacggtcgc aagactgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg 900
cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt 960
cttgacatcc tctgacaatc ctagagatag gacgtcccct tcgggggcag agtgacaggt 1020
ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc 1080
aacccttgat cttagttgcc agcattcagt tgggcactct aaggtgactg ccggtgacaa 1140
accggaggaa ggtggggatg acgtcaaatc atcatgcccc ttatgacctg ggctacacac 1200
gtgctacaat ggacagaaca aagggcagcg aaaccgcgag gttaagccaa tcccacaaat 1260
ctgttctcag ttcggatcgc agtctgcaac tcgactgcgt gaagctggaa tcgctagtaa 1320
tcgcggatca gcatgccgcg gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcaca 1380
ccacgagagt ttgtaacacc cgaagtcggt gaggtaacct tttaggagcc agccgccgaa 1440
ggtacaga 1448

Claims (10)

1.一株贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8，其特征在于：所述贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)YQ-1-8的菌种保藏编号为CGMCC No.24438。
2.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8在作为盐碱土壤改良产品中的应用。
3.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8在作为植物促生产品中的应用。
4.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8在作为降解有机磷产品中的应用。
5.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8在生产吲哚-3-乙酸IAA中的应用。
6.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8在生产胞外聚合物EPS中的应用。
7.一种微生物菌剂，其特征在于：包括权利要求1中所述的贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8。
8.如权利要求7所述的微生物菌剂，其特征在于：还包括微生物载体。
9.如权利要求8所述的微生物菌剂，其特征在于：所述微生物载体包括硅藻土、凹凸棒土和海藻酸钠中的至少一种。
10.权利要求7-9任一项所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：包括：将所述贝莱斯芽孢杆菌YQ-1-8活化后，接种于LB液体培养基中，25-28℃摇培20-30h，得到培养液；然后将所述培养液接种到发酵培养基中，25-28℃摇培70-75h，得到发酵液；将所述发酵液与微生物载体混合，干燥，得到活菌浓度为2×108cfu/g-2×109cfu/g的微生物菌剂；每升所述发酵培养基的配方为：蛋白胨7-9g、葡萄糖8-12g、牛肉浸膏4-5g、酵母粉0.8-1.2g，用水补足至1000mL，调节pH值至6.8-7.2。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115820461A (zh) * 2022-08-11 2023-03-21 上海市农业科学院 一种高产吲哚乙酸菌株jb0319及其应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109554317A (zh) * 2018-12-29 2019-04-02 陕西省微生物研究所 贝莱斯芽孢杆菌及其在小麦纹枯病防病促生中的应用
CN109749968A (zh) * 2019-03-04 2019-05-14 河北省科学院生物研究所 一株生物催化合成(r)-1,3-丁二醇的贝莱斯芽孢杆菌菌株及其应用
CN113480383A (zh) * 2021-07-08 2021-10-08 东营市垦利区万隆农林经贸有限公司 一种适用于盐碱土壤的微生物肥料及其制备方法
CN113801826A (zh) * 2021-10-29 2021-12-17 广西科学院 贝莱斯芽孢杆菌菌株hyl-1及其应用
CN113969254A (zh) * 2021-12-07 2022-01-25 山东农业大学 田菁内生芽孢杆菌zh60、复合菌剂及玉米种培养方法
CN114196563A (zh) * 2021-08-25 2022-03-18 广西民族大学 一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109554317A (zh) * 2018-12-29 2019-04-02 陕西省微生物研究所 贝莱斯芽孢杆菌及其在小麦纹枯病防病促生中的应用
CN109749968A (zh) * 2019-03-04 2019-05-14 河北省科学院生物研究所 一株生物催化合成(r)-1,3-丁二醇的贝莱斯芽孢杆菌菌株及其应用
CN113480383A (zh) * 2021-07-08 2021-10-08 东营市垦利区万隆农林经贸有限公司 一种适用于盐碱土壤的微生物肥料及其制备方法
CN114196563A (zh) * 2021-08-25 2022-03-18 广西民族大学 一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN113801826A (zh) * 2021-10-29 2021-12-17 广西科学院 贝莱斯芽孢杆菌菌株hyl-1及其应用
CN113969254A (zh) * 2021-12-07 2022-01-25 山东农业大学 田菁内生芽孢杆菌zh60、复合菌剂及玉米种培养方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FATMA MASMOUDI: "Endophytic halotolerant Bacillus velezensis FMH2 alleviates salt stress on tomato plants by improving plant growth and altering physiological and antioxidant responses", PLANT PHYSIOL BIOCHEM, pages 217 - 227 *
安婉宁: "海洋生境贝莱斯芽孢杆菌CT2628的促生长抗逆作用研究", 中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑, pages 043 - 121 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115820461A (zh) * 2022-08-11 2023-03-21 上海市农业科学院 一种高产吲哚乙酸菌株jb0319及其应用
CN115820461B (zh) * 2022-08-11 2024-02-02 上海市农业科学院 一种高产吲哚乙酸菌株jb0319及其应用

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