CN112342165B - 一种胶质芽孢杆菌及其在农业生产中的应用 - Google Patents

一种胶质芽孢杆菌及其在农业生产中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112342165B
CN112342165B CN202011276630.3A CN202011276630A CN112342165B CN 112342165 B CN112342165 B CN 112342165B CN 202011276630 A CN202011276630 A CN 202011276630A CN 112342165 B CN112342165 B CN 112342165B
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacillus
bacillus mucilaginosus
mucilaginosus
llh08
soil
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202011276630.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112342165A (zh
Inventor
代庆海
孙春龙
王丽宁
李倩倩
林俊荣
王凌云
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Qingdao Lilihui Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Qingdao Lilihui Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Qingdao Lilihui Biotechnology Co ltd filed Critical Qingdao Lilihui Biotechnology Co ltd
Priority to CN202011276630.3A priority Critical patent/CN112342165B/zh
Publication of CN112342165A publication Critical patent/CN112342165A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112342165B publication Critical patent/CN112342165B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers
    • C05F11/08—Organic fertilisers containing added bacterial cultures, mycelia or the like
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
    • C05G3/60—Biocides or preservatives, e.g. disinfectants, pesticides or herbicides; Pest repellants or attractants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
    • C05G3/80—Soil conditioners
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Fertilizers (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明涉及功能微生物筛选与应用技术领域，具体一种新型胶质芽孢杆菌及其在农业生产中的应用。所述胶质芽孢杆菌保藏编号为CCTCC NO:M2020163，能有效提升土壤肥力，促进作物生长，提高产量，并且对苹果轮纹病、褐斑病、黄瓜根结线虫病等植物病害具有很好的防治效果，应用前景广泛。

Description

一种胶质芽孢杆菌及其在农业生产中的应用
技术领域
本发明涉及功能微生物的筛选与应用技术领域，具体涉及一种胶质芽孢杆菌及其在农业生产中的应用。
背景技术
微生物肥料是一种新型肥料，亦被称作生物菌肥、菌剂、细菌肥料。在微生物肥料内包括许多具有重要作用的微生物。微生物肥料具有减轻土壤板结、提高土壤保肥能力、增强土壤内碱解氮等物质的利用率、提高作物产量以及提高品质的优势。与无机肥和有机肥对比，微生物肥料有着根本上的差异，因此不能将微生物肥料全部替代现有的肥料。
早在二十世纪五十年代，苏联微生物学家就在解钾菌、解磷菌和固氮菌方面有所发现。近年来，较多科学家将目光转向到复合菌根。由美国研制的“生物1号”接种剂以及日本研发的“EM”均是由多种微生物构成的复合微生物肥料。二十世纪五十年代苏联陆续向我国输入解磷菌、解钾菌等细菌肥料用于农业生产中。六十年代扩大“5406”抗生菌肥料和固氮蓝绿藻肥的施用面积。伴随着产业规模扩大，生产和检验体系完善，菌种和剂型也不断的开发新品种。早在二十世纪七十至八十年代中期，有研究发现施入真菌制成的菌根后，土壤水分利用率和植物磷素营养条件显著提高。于是，微生物肥料的定位深入到了细菌、真菌、放线菌以及绿藻各类微生物。
目前，微生物肥料在市场上种类多样。微生物肥料有多种归类方法，能够依照作用机制划成解磷菌类肥料、根瘤菌类、硅酸盐类、固氮菌类肥料等；或依照肥料内特定的微生物品种能够划成真菌类、细菌类、放线菌类肥料等；还能依据组成元素为单一微生物肥料和复合微生物肥料。
硅酸盐细菌是一类特有的土壤细菌，又称为钾细菌，其同时还具备固氮的功效。某些自然状态下产生的，如造岩矿物、长石族矿物等，硅酸盐能够将其分解，同时将土壤内难以被植物利用的K、Si、P等物质转变为可溶性物质，还能产生供植物生长的活性物质，主要包括胶质类芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)、土壤类芽孢杆菌(Paenibacillusedaphicus)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)等。
1930年原苏联学者亚历山罗夫从土壤中分离到一种细菌，能分解正长石和磷灰石而释放出磷、钾，称之为硅酸盐细菌。1950年Alexandrov将其命名为胶质芽胞杆菌硅酸盐亚种(Bacillus mucilaginosus sub sp.nov Silieeus)，但一般只简称为硅酸盐细菌。1986年，Avakyan等对亚历山罗夫报道的胶质芽孢杆菌做了进一步的研究，通过形态学及生理生化特性将其命名为胶质芽孢杆菌新种(Bacillus mucilaginosus sp.nov.)。1997年，Shelobolina等通过生理生化实验、DNA同源性分析、16SrDNA序列分析以及脂肪酸组成对11株胶质芽孢杆菌进行了研究，并肯定了Avankyan命名的正确性。该结果于1998 年发表于International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology，至此胶质芽孢杆菌在国际上正式得到承认。
在农业上，胶质芽孢杆菌能将土壤中植物难以利用的钾、磷元素变为有效钾、磷以供植物利用，同时该菌还具有一定的固氮能力，并且能够分泌如赤霉素、生长激素和酶类等物质以促进植物的生长发育，是一种常用的微生物肥料添加菌种。在畜牧业上，该菌在生长过程中生成的蛋白质、有机酸等物质可用于饲料业中生产饲料补充物。在工业上，胶质芽孢杆菌在胞外形成的肥大荚膜和产生的小分子有机酸能够分解硅酸盐矿物，使其释放出硅、铁等杂质，近年来常用于在生物浸矿和冶金等领域。由于该菌胞外的荚膜主要成分为酸性多糖，具有良好的絮凝活性，在污水处理方面也展示了良好的应用前景。此外，胶质芽孢杆菌作为陶瓷添加剂可提高和改善瓷器和陶器的性能。
2000年，林启美等将分离得到的一株胶质芽孢杆菌RGBc13接种到砂土和以不同的硅酸盐为唯一钾源的培养基中，并进行培养，发现这株细菌具有明显的解钾和解磷作用，使砂土中磷、钾和硅的含量大幅度提高，硅酸盐矿物中的钾释放出来，改变为可提取的形态。2007年，Li等在烟草盆栽试验上接种胶质芽孢杆菌和其转基因菌株NKTS-3后证明，与对照组相比两株菌均能提高烟草的生长(干重分别增加183％和235％)。2014 年，常文智等的研究结果表明，施用胶质类芽孢杆菌可以有效提高土壤酶活和增加细菌数量，同时其所用3016菌株配合减量50％化肥的处理方法对花生的产量增加最为明显，增产率达到10.4％。2019年，何鹏搏等用有效活菌数为1.0×107cfu/mL以上的胶质芽孢杆菌菌株YN2011及其微生物制剂浸泡樱桃和番茄果实杀死其表面上附着或已侵入果实的霉烂病病菌，能使在运输和贮藏过程中的樱桃和番茄果实霉烂病的防效达到100％。
胶质芽孢杆菌从发现至今已有100多年的历史，人们对该菌应用于微生物肥料、矿物分解和生物絮凝等方面已有了深入的研究，也取得了一定的成就，但对其生物防治方面的研究还比较缺乏。本发明筛选出一株可防治植物病害的胶质芽孢杆菌，为其在生物防治方面的进一步应用提供借鉴。
发明内容
本发明为解决现有技术问题，提供了一种新型胶质芽孢杆菌及其在农业生产中的应用。所述胶质芽孢杆菌能有效提升土壤肥力，促进作物生长，提高产量，并且对苹果轮纹病、褐斑病、黄瓜根结线虫病等植物病害具有很好的防治效果，应用前景广泛。
本发明一方面提供了一种胶质芽孢杆菌LLH08(Bacillus mucilaginosusLLH08)，已于2020年6月1日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏号为 CCTCC NO：M2020163。
所述胶质芽孢杆菌在生物肥中的应用。
所述胶质芽孢杆菌在植物病害防治中的应用。
本发明另一方面提供了一种微生物制剂，包含上述胶质芽孢杆菌LLH08。
所述微生物制剂还包含芽孢杆菌、乳酸菌、假单胞菌、土壤杆菌、固氮菌、根瘤菌、木霉菌、酵母菌、青霉菌、曲霉菌、根霉菌、链霉菌中的任意一种或两种或多种的组合。
所述的芽孢杆菌优选枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、海洋芽孢杆菌、内生芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌中的一种或多种。
所述的木霉菌优选哈茨木霉。
所述的青霉菌优选淡紫拟青霉。
所述的假单胞菌优选沼泽红假单胞菌。
所述微生物制剂中胶质芽孢杆菌LLH08的活菌量至少为109CFU/g。
本发明还提供了上述微生物制剂在生物肥中的应用。
本发明还提供了上述微生物制剂在植物病害防治中的应用。
所述植物病害包括轮纹病、褐斑病、炭疽病、根结线虫病中的任意一种。
有益效果
本发明筛选到的胶质芽孢杆菌LLH08能将难溶磷(Ca3(PO4)2)分解成可溶性的有效磷，解磷效率超过90％；具有较强的解钾能力，在钾长石液体培养基中培养72h后，发酵液中有效钾含量高达77.4μg/mL；在0.1％～1.0％盐浓度下生长，在1.1％～1.5％盐浓度下不生长，最大耐受盐浓度为1.0％，有利于其在盐碱地中的应用。
所述胶质芽孢杆菌LLH08能产植酸酶，其发酵上清液中植酸酶酶活达8.3U/mL，而现有公开的多株胶质芽孢杆菌均不产植酸酶，因此本发明提供的胶质芽孢杆菌LLH08 与现有菌株存在明显区别。
所述胶质芽孢杆菌LLH08能极显著提高土壤中有效磷和有效钾的含量，提升土壤肥力，从而有利于种植作物的生长，显著提高作物产量。其中，胶质芽孢杆菌LLH08 处理组油菜的平均鲜重和干重比空白对照组分别提高了355.2％和290.5％，有效磷和有效钾含量比空白处理组分别提高了61.3％和69.1％；在盐碱地种植小麦，胶质芽孢杆菌 LLH08菌粉的处理组小麦产量普遍提高26.8％-33.3％；胶质芽孢杆菌LLH08对苹果叶片的生长、果实的发育及着色都有明显的促进作用，与对照组相比，处理组苹果叶片深绿，叶片较厚，叶重增加8％以上，苹果产量提高14％左右，增产效果明显；处理组苹果的着色率和含糖量也普遍高于对照组，苹果的品质也得到显著提高。
此外，胶质芽孢杆菌LLH08对苹果轮纹病有明显的防治效果，防治效率高达91.2％。胶质芽孢杆菌LLH08还能有效防治苹果的褐斑病和炭疽病，防治效率超过80％，效果显著。
所述胶质芽孢杆菌LLH08对根结线虫幼虫具有很强的杀伤作用，处理24h后，根结线虫幼虫的致死率达到87.6％。胶质芽孢杆菌LLH08对黄瓜根结线虫病具有良好的防治效果，胶质芽孢杆菌LLH08菌粉处理组黄瓜的根结数减少了42.3％，虫口密度降低了50.7％，卵囊数减少了78.3％，综合防治效果与化学农药处理组相当，取得了意料不到的技术效果。
本发明提供的胶质芽孢杆菌LLH08可单独使用或与其他具有解磷功效或生防功效的微生物组合，作为生物肥和生防菌剂，改善土壤环境，提高土壤肥力，防治植物常见病害，而且对环境友好，有利于提升农作物的品质，推动传统农业向生态农业、绿色农业的转变，实现农业健康、可持续的发展。
附图说明
图1为PCR扩增产物的1％琼脂糖凝胶电泳图谱；
图2为胶质芽孢杆菌LLH08菌落图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐述本发明。对于实施例中所用到的具体方法或材料，本领域技术人员可以在本发明技术思路的基础上，根据已有的技术进行常规的替换选择，而不仅限于本发明实施例的具体记载。本发明所选用的设备和试剂可以选自市售任意一种。
实施例中使用的培养基配方如下：
难溶性无机磷固体培养基：葡萄糖10g,(NH4)2SO4 0.5g,NaCl 0.3g,KC1 0.3g,MgSO4·7H20 0.3g,FeSO4.7H20 0.03g,MnSO4.4H20 0.03g,Ca3(PO4)25.0g,蒸馏水1000ml, pH7.0-7.5，琼脂20g,115℃灭菌30min；
难溶性无机磷液体培养基：葡萄糖10g,(NH4)2SO4 0.5g,NaCl 0.3g,KC1 0.3g,MgSO4.7H20 0.3g,FeSO4.7 H20 0.03g,MnSO4.4H20 0.03g，Ca3(PO4)25.0g,蒸馏水1000 ml,pH 7.0-7.5，115℃灭菌30min；
硅酸盐细菌固体培养基为：蔗糖5.0g/L，磷酸钠2.0g/L，七水硫酸镁0.5g/L，碳酸钙0.1g/L，六水氯化铁5.0mg/L，琼脂粉15g/L，pH 7.0；
钾长石液体培养基：蔗糖5g，葡萄糖5g，(NH4)2SO4 0.5g，酵母粉0.5g， MgSO4·7H2O0.3g，磷酸氢二钠2g，FeSO4·7H2O 0.03g，MnSO4·7H2O 0.03g，钾长石2g，蒸馏水1000mL，pH7.2，115℃灭菌20min；
硅酸盐细菌液体培养基为：蔗糖5.0g/L，磷酸钠2.0g/L，七水硫酸镁0.5g/L，碳酸钙0.1g/L，六水氯化铁5.0mg/L，pH 7.0。
实施例1土壤中解磷微生物的分离与筛选
1、土壤样品：山东省青岛市平度大泽山区葡萄根际土壤。
2、土壤稀释液的制备：
除去地表植物残体和表层土5cm-10cm，用多点采集的方法在每个采样点从土壤中采集10g样品，放入样品袋中。经阴干后，采用四分法将土壤样品缩分至约50g左右；然后置于含有250ml灭菌PB缓冲液的500ml三角瓶中；30℃、180rpm震荡30min，静置沉淀，取上清液；取100ml上清液，12000rpm离心10min，取沉淀；将沉淀悬浮于 50ml灭菌PB缓冲液中再次12000rpm离心10min；重复两次以后，将沉淀悬浮于10ml 的无菌水中，制得土壤悬浮液。
取0.1ml土壤悬浮液均匀涂布于难溶性无机磷固体培养基上，30℃培养箱中倒置培养3天，观察培养基上长出的菌落，其中有15个菌落周围有透明圈产生，将其分别命名为A1，A2，A3，……，A15。
将初筛得到的15株解磷菌分别接种到难溶性无机磷固体培养基上，30℃培养3天后，观察菌落周围透明圈的大小，结果发现透明圈最大的五株菌分别为A4，A7，A11， A14，A15。
将上述透明圈最大的五株菌分别接种到50mL难溶性无机磷液体培养基中，30℃，200rpm，培养6天，同时以不加任何菌的液体解磷培养基作为对照组。
(1)磷标准曲线的绘制
依次吸取5mg/l的磷标准溶液0.0、0.2、0.4、0.8、1.6、2.0、3.2、4.0ml于试管中，然后各加入钼锑抗显色剂2ml，蒸馏水定容至20ml，摇匀静置20min，700nm波长下测定吸光度。此时各管中磷的浓度分为：0.00、0.05、0.10、0.20、0.40、0.50、0.80、1.00mg/l。以磷浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制磷标准曲线。
(2)培养液有效磷含量测定
在无菌条件下分别取上述五株菌的培养液各5ml，8000rpm，离心5min，取上清液，稀释到合适的浓度，吸取0.5ml稀释液至试管中，加5ml蒸馏水，加2滴2,4-二硝基酚指示剂，加2ml钼锑抗显色剂，然后用蒸馏水定容至20ml，摇匀静置20min，于700nm 波长下比色，吸光度值代入标准曲线计算上清液中的有效磷含量，具体结果见表1。
表1不同菌株的解磷效果
样品 有效磷含量(mg/L)
空白对照组 0
A4 311
A7 179
A11 262
A14 914
A15 433
从表1中的结果可以看出，本发明筛选到的五株菌均具有较强的解磷能力，能将培养基中的难溶磷(Ca3(PO4)2)分解成可溶性的有效磷，效果非常显著。其中，A11菌株的解磷效率最高，有效磷含量高达914mg/L，取得了意料不到的效果。
实施例2A11菌株的鉴定
1、分子生物学鉴定
挑取平板上A11菌株的单菌落于营养肉汤培养基中，37℃培养24小时，然后取500ul 菌株发酵液，利用试剂盒提取该菌株的基因组。以该基因组为模板，设计引物序列，PCR 扩增16s rDNA序列。
1)引物序列:
A11F：AGGGTTTGATCCTGGCTCC；
A11R：GGTGGATTCTTGTTACGACTT。
2)反应体系(50μL)
表2 16s rDNA PCR扩增体系
Figure BDA0002779272720000071
3)PCR扩增产物的1％琼脂糖凝胶电泳图谱如图1所示，扩增得到的16s rDNA片段的长度为1500bp左右，符合常规的16s rDNA序列长度。
4)PCR产物测序
将扩增后的PCR产物送至上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序。测序结果显示A11菌株的16srDNA序列为SEQ ID NO:1。将该序列在NCBI数据库中进行 BLAST比对，其与胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)的相似性最高。因此，初步确定A11菌株为胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)。
SEQ ID NO:1如下所示：
gtttgattct ggctcaggac gaacggtggc ggcgtgccta atacaagcaa gtcgagcggagcacttcggt gcttagcggc ggacgggtga gtaacacgta ggcaacctgc ctgtaagatc gggataactaccggaaacgg tagctaagac cggatagctg gtttccgtgc atgccggaat catgaaacac ggggcaacctgtggcttacg gatgggcctg cggcgcatta gctagttggc ggggtaacgg cccaccaagg cgacgatgcgtagccgacct gagagggtga tcgtccacac tgggactgag acacggccca gactcctacg ggaggcagcagtagggaatc ttccgcaatg ggcgcaagcc tgacggagca acgccgcgtg agtgaagaag gttttcggatcgtaaagctc tgttgccagg gaagaatgtc gtggagagta actgctctgc gaatgacggt acctgagaagaaagccccgg ctaactacgt gccaggagcc gcggtaatac gtagggggca agcgttgtcc ggaattattgggcgtaaagc gcgcgcaggc ggtcttttaa gtctggtgtt taagcccggg gctcaacccc ggttcgcaccggaaactgga agacttgagt gcaggagagg aaagcggaat tccacgtgta gcggtgaaat gcgtagagatgtggaggaac accagtggcg aaggcggctt tctggactgt aacggacgct gaggcgcgaa agcgtggggagcaaacagga ttagataccc tggtagtcca cgccgtaaac gatgagtgct aggtgttagg ggtttcgatacccttggtgc cgaagtaaac acaataagca ctccgcctgg ggagtacgct cgcaagagtg aaactcaaaggaattgacgg ggacccgcac aagcagtgga gtatgtggtt taattcgaag caacgcgaag aaccttaccaggtcttgaca tccctctgaa agccctagag atagggtcct ccttcgggac agaggtgaca ggtggtgcatggttgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt gactttagttgccagcattg agttgggcac tctagagtga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaaatcatcatgc cccttatgac ctgggctaca cacgtactac aatggccggt acaacgggaa gcgaagtcgcgagatggagc gaatccttag aagccggtct cagttcggat tgcaggctgc aactcgcctg catgaagtcggaattgctag taatcgcgga tcagcatgcc gcggtgaata cgttcccggg tcttgtacac accgcccgtcacaccacgag agtttacaac acccgaagcc ggtggggtaa cccgcaaggg ggccagccgt cgaaggtggggtagatgatt ggggtgaagt cgtaacaagg taaccg。
2、菌落形态
将A11菌株接种于硅酸盐细菌固体培养基上，37℃培养3天。该菌株生长良好，菌落如图2所示：菌落***，呈玻璃半球状，透明或半透明，边缘平坦，表面光滑，比较粘稠，弹性大，可以拉成丝状；菌体呈粗杆状，有荚膜，大小为3～6μm×1.2～1.6μm，革兰氏染色不定；产芽孢，芽孢为椭圆形，中生。
结合A11菌株的16srDNA比对结果和菌落形态，申请人确认A11菌株为胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)，命名为胶质芽孢杆菌LLH08(Bacillus mucilaginosusLLH08)。
申请人已于2020年6月1日将上述胶质芽孢杆菌LLH08(Bacillus mucilaginosusLLH08)保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2020163。
实施例3胶质芽孢杆菌LLH08解钾能力测定
3.1测定方法
配制钾长石液体培养基，按95mL分装于250mL三角瓶。将胶质芽孢杆菌LLH08 菌悬液以5％的接种量接入摇瓶，同时做三个平行，并设置无接种对照组，30℃摇床震荡培养72h。
3.2发酵液的处理
从每个摇瓶中各取发酵液20mL，4℃、5 000r/min离心15min；将全部离心上清液放入50mL消煮管中；加入5mL浓硫酸与2mL的过氧化氢溶液在消煮炉消煮，并反复加几次20％过氧化氢溶液，至粘性物质完全消化后，用蒸馏水定容至50mL。使用火焰光度计测定其中K+含量。
结果显示，胶质芽孢杆菌LLH08发酵液中钾含量达到77.4μg/mL，从而说明，本发明筛选到的胶质芽孢杆菌LLH08具有较强的解钾能力，可广泛应用于生物肥领域。
实施例4胶质芽孢杆菌LLH08耐盐能力测定
在无菌条件下，取适量新鲜的胶质芽孢杆菌LLH08发酵液，5000rpm/min离心5min，用PBS缓冲液洗2次，再用同体积PBS缓冲液重菌体后稀释50倍，作为接种液。
在无菌条件下，向96孔板中分别加入190μL盐浓度为0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％的硅酸盐细菌液体培养基，每个盐浓度做3个平行，然后再加入10μL接种液，不接菌的孔作为对照。每孔加入50μL高压灭菌过的石蜡油以防止培养过程中水分蒸发。置于37℃恒温培养，观察培养基是否变浑浊。
结果显示，胶质芽孢杆菌LLH08菌株在0.1％～1.0％盐浓度下生长，在1.1％～1.5％盐浓度下不生长，最大耐受盐浓度为1.0％，因此有利于其在盐碱地中的应用。
实施例5胶质芽孢杆菌LLH08的产酶活力测定
5.1发酵菌液的制备
(1)菌种活化
将胶质芽孢杆菌LLH08接种于斜面培养基进行活化，温度控制在30-35℃，培养24-48小时，得到原始斜面种子；
(2)摇瓶培养
将斜面种子接种于100mL摇瓶培养基中，33℃、220r/min摇床培养8-12小时，得种子液备用；
(3)种子罐培养
将种子液接种于种子罐培养基中，装料系数0.7-0.8，121℃蒸汽灭菌20分钟，接种量5％，培养温度31～33℃，通气量为1：0.6～0.8(v/v·min)，控制溶氧饱和度DO值为15％～30％，pH控制在7.2±0.2，培养8～12小时，获得对数生长期种子液；
(4)发酵培养
第一阶段：将种子罐种子液接种于发酵基础培养基中，装料系数0.7-0.8，121℃蒸汽灭菌20分钟，接种量5％～10％，控制参数：温度30～33℃，pH值7.0～7.2，通气量1：0.8～1.2(v/v·min)，以搅拌转速控制溶氧饱和度DO值20％～30％，以植物油为消泡剂控制泡沫；每间隔4小时取一次样，立即作镜检观察菌数及菌体形态，化验糖、氨态氮；根据检验结果适时补料，控制糖剂量为2.2g/L～3.4g/L、以NH4Cl控制氮源 0.5g/L～0.1g/L，接近对数生长末期时停止补氮；
第二阶段：控制参数：温度33～37℃，pH值7.2～8.0，通气量为1：1.0～0.8(v/v·min)，以搅拌转速控制溶氧饱和度DO值5％～10％，加入0.1g/L碳酸钙，促进芽孢形成，每间隔4小时取样，立即作镜检观察菌体形态，当镜检视野中的菌体形态全部芽孢时即为发酵终点，停止发酵，此时发酵液中活菌数高达109～1010CFU/mL。
5.2酶活检测
将胶质芽孢杆菌LLH08发酵液在4℃条件下，8000rpm，离心5min，取上清，按照下述方法测定发酵上清液中的植酸酶酶活。检测结果显示，所述胶质芽孢杆菌LLH08 发酵上清液中植酸酶酶活达8.3U/mL。
而现有公开的多株胶质芽孢杆菌均不产植酸酶，因此本发明提供的胶质芽孢杆菌LLH08与现有菌株存在明显区别，取得了意料不到的技术效果。
(1)植酸酶酶活测定方法
酶活单位的定义：在30℃、pH值为5.0的条件下，每分钟从浓度为5mg/ml的植酸钠溶液中释放1μmol无机磷所需要的酶量即为一个酶活力单位U。
测定方法：取4ml浓度为7.5mmol/L的植酸钠溶液(pH5.0 0.25mol/L乙酸缓冲液配制)，加入到比色管中，30℃平衡5min，再加入2ml经pH5.0 0.25mol/L乙酸缓冲液适当稀释并经30℃平衡好的植酸酶酶液，混匀于30℃精确保温反应30min。反应结束后，加入4ml终止液(2份硝酸溶液(硝酸：水＝1:2)、1份100g/L钼酸铵溶液、1份 2.35g/L钒酸铵溶液)，混匀以终止反应。然后室温放置10min显色，分光光度计415nm 处测定吸光值。
酶活计算公式：
U＝(A-A0-0.0016)×F/(0.0415×30)
式中：A为样品的吸光值；A0为空白样品的吸光值；F为实际样液反应前的总稀释倍数；30为酶解反应时间，min。
实施例6胶质芽孢杆菌LLH08在油菜大田栽培实验中的应用
1、实验地点：
青岛市平度油菜种植大棚，土壤整体状况较为均匀。
2、实验过程
设置20个实验区，每个实验区为3m×3m的方形区域，且每个实验区之间保持1米的间隔。
实验共设2个组：①空白对照组：不添加任何物质；②胶质芽孢杆菌LLH08处理组：在每个实验区中按30mL/m2的比例均匀喷洒实施例4所述胶质芽孢杆菌LLH08发酵菌液，然后将表层5-10cm厚的土壤进行有效混匀。每个组随机选择10个实验区。
1)种子处理：用5％的次氯酸钠表面灭菌油菜种子10min，用蒸馏水清洗3-4次除去次氯酸钠后在常温下放置30min自然干燥；
2)播种与收获：在每个实验区均匀播种50g油菜种子，定时浇水和管理，不施加肥料。播种50天后，收获全部油菜，并分别检测每个实验区油菜的鲜重和干重，计算每个处理组油菜的平均鲜重和平均干重，进行比较；
3)收获油菜的同时，分别采集每个实验区的土样，分别检测土样中有效磷和有效钾的含量，并进行比较。
试验结果表明：与空白对照组相比，胶质芽孢杆菌LLH08处理组油菜的平均鲜重和干重比空白对照组分别提高了355.2％和290.5％，有效磷和有效钾含量比空白处理组分别提高了61.3％和69.1％。
上述结果表明，本发明提供的胶质芽孢杆菌LLH08能极显著提高土壤中有效磷和有效钾的含量，提升土壤肥力，从而有利于种植作物的生长，显著提高作物产量，因此可广泛应用于生物肥领域。
实施例7胶质芽孢杆菌LLH08在盐碱地种植小麦中的应用
1、菌粉制备
将实施例4所述胶质芽孢杆菌LLH08发酵液进行喷雾干燥，制备得到活菌量约为10亿/g的菌粉。
2、实验地点：
青岛市胶州李哥庄盐碱地小麦种植区，该种植区内土壤盐度约为0.4％，小麦播种时间相同，当前处于苗期，小麦长势相近。
小麦耐盐品种：青麦6号。
3、小麦种植实验：
选取10m×50m的区域作为一个实验区，共设置30个实验区，且每个实验区之间保持1米的间隔。每个处理组随机选择10个实验区进行实验。
(1)空白对照组：清水浇施小麦根部；
(2)菌粉处理组：将胶质芽孢杆菌LLH08菌粉随水浇施于小麦的根部，间隔10 天用一次，连续使用三次。其中：
处理组1：菌粉用量为2.0kg/亩；
处理组2：菌粉用量为4.0kg/亩。
在小麦成熟期，统一进行收割、脱粒和晾晒，统计各实验区小麦的产量，计算小麦的平均产量和增产率，具体结果见表3。
增产率＝(处理组小麦产量-空白对照组小麦产量)/空白对照组小麦产量×100％。
表3胶质芽孢杆菌LLH08对盐碱地小麦产量的影响
实验分组 平均产量kg/亩 增产率
对照组 475.2 -
处理组1 602.6 26.8％
处理组2 633.4 33.3％
从表3的实验数据可以看出，与对照组相比，施用本发明所述胶质芽孢杆菌LLH08菌粉的处理组小麦产量普遍提高26.8％-33.3％。从而说明，胶质芽孢杆菌LLH08能有效适应盐碱地的环境，提高土壤肥力，进而促进小麦生长，显著增加产量，取得了意料不到的技术效果。
实施例8胶质芽孢杆菌LLH08对苹果的增产效果实验
在青岛市崂山区苹果园选择土壤性状一致、肥力均匀中等、往年苹果轮纹病发病相对均匀的平地和山区果园(果实不套袋)，进行促增产效果实验，每个处理区面积为2 亩。
将胶质芽孢杆菌LLH08菌粉加水稀释至终浓度为0.5g/L和1.0g/L，分别在开花前、落花后至幼果期、套袋前和果实膨大期均匀的喷施到果树树体上，滴水为度。同时以不喷施任何菌剂的果树作为对照。
在每个处理区内采用五点取样法，按照东、西、南、北、中五个方位每点选择1株果树，从每株果树的东、南、西、北4个方位齐胸高处各选5个新稍，每个新梢从第4 片叶起连续摘取5片叶，每树共计100片叶混在一起称重。计算百叶重和增重效果，统计分析差异显著性，具体结果见表4。产量调查分别从处理区和对照区的东、南、西、北、中5个方各选4株树，共20棵，将所有果实采摘称重，计算产量，同时考察果实的着色情况和含糖量，具体结果见表5。
平均单株百叶重和增重效果的计算方法如下：
平均单株百叶重(g)＝5株树百叶重的和/5，
增重效果(％)＝(处理区平均单株百叶重-对照区平均单株百叶重)/对照区平均单株百叶重×100％。
表4胶质芽孢杆菌LLH08对苹果叶片增重的效果
处理 调查叶片总数 总叶重g 单叶重g 增重率
对照组 500 430.8 0.862 -
0.5g/L处理组 500 465.4 0.931 8.03％
1.0g/L处理组 500 466.8 0.934 8.36％
表5胶质芽孢杆菌LLH08对苹果增产的效果
处理 测定产量(Kg/亩) 增产率 着色率 含糖量
对照组 6806 - 35.2％ 12.6％
0.5g/L处理组 7782 14.3％ 73.2％ 13.9％
1.0g/L处理组 7755 13.9％ 79.1％ 14.1％
从表4和5的数据可以看出，胶质芽孢杆菌LLH08对苹果叶片的生长、果实的发育及着色都有明显的促进作用，与对照组相比，处理组苹果叶片深绿，叶片较厚，叶重增加8％以上，苹果产量提高14％左右，增产效果明显。此外，处理组苹果的着色率和含糖量也普遍高于对照组，苹果的品质也得到显著提高。
实施例9胶质芽孢杆菌LLH08对苹果轮纹病的防治效果实验
在青岛市平度大泽山果园和烟台市栖霞霞山果园选择土壤性状一致、肥力均匀中等、往年苹果轮纹病发病相对均匀的果园(均为套袋果园)，进行轮纹病防治效果实验，每个处理区面积为2亩。
将胶质芽孢杆菌LLH08菌粉加水稀释至终浓度为0.5g/L，分别在开花前(3月29日)、落花后至幼果期(5月2日)、套袋前(5月26日)、果实膨大期(7月5日)、8月5日和9月5日共6次均匀的喷施到果树树体上，滴水为度。同时以不喷施任何菌剂的果树作为对照。
苹果摘袋后，在每个处理区内采用五点取样法，按照东、西、南、北、中五个方位选择树势及挂果量比较一致的果树，每点选1株果树摘无病果混在一起装箱(果实于10 月23日采摘)，箱子上标明所摘树的编号。将果实放入室内常温诱发，观察果实的发病情况，分别记载不同种类病害的发病率，计算防治效果，统计差异显著性。每次调查时凡是病果一律剔除，只计发病率不计病情指数，无病果继续诱发，统计和计算发病率和防治效果。
发病率(％)＝发病果数/调查总果数×100％，
防治效果(％)＝(对照区发病率—处理区发病率)/对照区发病率×100％。
分别于11月7日、11月25日和12月30日共3次调查上述苹果的发病情况，结果见表6所示。
表6胶质芽孢杆菌LLH08对苹果轮纹病的防治效果
Figure BDA0002779272720000141
从表6的数据可以看出，苹果采摘2个月内，施用胶质芽孢杆菌LLH08菌粉的处理组果树的苹果轮纹病发病率显著低于对照组，防治效率高达91.2％。从而说明，本发明提供的胶质芽孢杆菌LLH08对苹果轮纹病有明显的防治效果，取得了意料不到的技术效果。
除了轮纹病外，本发明所述胶质芽孢杆菌LLH08还能有效防治苹果的褐斑病和炭疽病，防治效率超过80％，效果显著。
实施例10胶质芽孢杆菌LLH08杀线虫能力测定
将活化的胶质芽孢杆菌LLH08种子液按5％的接种量接种到硅酸盐细菌液体培养基中，37℃、220r/min摇床培养48h后得发酵液。
取0.2mL(约80条左右)线虫悬液和0.8mL的发酵液加入1.5mL离心管中，30℃培养24h后，小心吸去0.8mL上清，并加入0.2mL浓度为1mol/L的NaOH溶液混匀，立刻在显微镜下观察，计算线虫致死率。线虫死活判断标准：线虫活跃、弯曲，加入NaOH 溶液后变弯曲，线虫为活；僵直不动，加入NaOH溶液后仍然僵直，线虫为死。
实验结果显示：胶质芽孢杆菌LLH08发酵液处理24h后，根结线虫幼虫的致死率达到87.6％，从而说明本发明筛选到的胶质芽孢杆菌LLH08对根结线虫幼虫具有很强的杀伤作用。
实施例11胶质芽孢杆菌LLH08对黄瓜根结线虫病的防治效果实验
1、实验地点：
青岛市平度田庄镇黄瓜种植大棚。黄瓜、大蒜轮作，连续种植多年，黄瓜根结线虫病比较严重。
2、实验设计
本实验共三个处理组，每个处理组10垄黄瓜，共1000株，每个处理组之间设立保护行；
(1)空白组处理：不作任何处理；
(2)胶质芽孢杆菌LLH08处理：作底施处理，在黄瓜定植前开沟施入，菌粉使用量：8kg/亩，施用后浇水处理；
(3)化学农药处理：使用阿维菌素2000倍稀释液在黄瓜移栽时作灌根处理，黄瓜定植后覆土，阿维菌素使用量：2kg/亩。
黄瓜收获后统计根结指数、卵囊数、虫口密度等指标。
结果显示，与空白对照组相比，胶质芽孢杆菌LLH08菌粉处理组黄瓜的根结数减少了42.3％，虫口密度降低了50.7％，卵囊数减少了78.3％，综合防治效果与化学农药处理组相当。从而说明本发明提供的胶质芽孢杆菌LLH08对黄瓜根结线虫病具有良好的防治效果，其对根结线虫的发生与发展具有很强的抑制作用。
综上所述，本发明提供的胶质芽孢杆菌LLH08可单独作为防治苹果轮纹病、褐斑病、炭疽病、根结线虫等植物病害的生防菌剂、生物肥等，广泛应用于农业生产领域，还可与其他芽孢杆菌、固氮菌、链霉菌等进行组合，用于其他常见植物病害的防治，防治效率达到68％以上，促生增产效果达到10％以上，效果显著，应用前景广阔。
序列表
<110> 青岛力力惠生物科技股份有限公司
<120> 一种胶质芽孢杆菌及其在农业生产中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1496
<212> DNA
<213> 胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)
<400> 1
gtttgattct ggctcaggac gaacggtggc ggcgtgccta atacaagcaa gtcgagcgga 60
gcacttcggt gcttagcggc ggacgggtga gtaacacgta ggcaacctgc ctgtaagatc 120
gggataacta ccggaaacgg tagctaagac cggatagctg gtttccgtgc atgccggaat 180
catgaaacac ggggcaacct gtggcttacg gatgggcctg cggcgcatta gctagttggc 240
ggggtaacgg cccaccaagg cgacgatgcg tagccgacct gagagggtga tcgtccacac 300
tgggactgag acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtagggaatc ttccgcaatg 360
ggcgcaagcc tgacggagca acgccgcgtg agtgaagaag gttttcggat cgtaaagctc 420
tgttgccagg gaagaatgtc gtggagagta actgctctgc gaatgacggt acctgagaag 480
aaagccccgg ctaactacgt gccaggagcc gcggtaatac gtagggggca agcgttgtcc 540
ggaattattg ggcgtaaagc gcgcgcaggc ggtcttttaa gtctggtgtt taagcccggg 600
gctcaacccc ggttcgcacc ggaaactgga agacttgagt gcaggagagg aaagcggaat 660
tccacgtgta gcggtgaaat gcgtagagat gtggaggaac accagtggcg aaggcggctt 720
tctggactgt aacggacgct gaggcgcgaa agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc 780
tggtagtcca cgccgtaaac gatgagtgct aggtgttagg ggtttcgata cccttggtgc 840
cgaagtaaac acaataagca ctccgcctgg ggagtacgct cgcaagagtg aaactcaaag 900
gaattgacgg ggacccgcac aagcagtgga gtatgtggtt taattcgaag caacgcgaag 960
aaccttacca ggtcttgaca tccctctgaa agccctagag atagggtcct ccttcgggac 1020
agaggtgaca ggtggtgcat ggttgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc 1080
ccgcaacgag cgcaaccctt gactttagtt gccagcattg agttgggcac tctagagtga 1140
ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa atcatcatgc cccttatgac 1200
ctgggctaca cacgtactac aatggccggt acaacgggaa gcgaagtcgc gagatggagc 1260
gaatccttag aagccggtct cagttcggat tgcaggctgc aactcgcctg catgaagtcg 1320
gaattgctag taatcgcgga tcagcatgcc gcggtgaata cgttcccggg tcttgtacac 1380
accgcccgtc acaccacgag agtttacaac acccgaagcc ggtggggtaa cccgcaaggg 1440
ggccagccgt cgaaggtggg gtagatgatt ggggtgaagt cgtaacaagg taaccg 1496

Claims (8)

1.一种胶质芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus），其特征在于，所述胶质芽孢杆菌的保藏号为CCTCC NO：M2020163。
2.权利要求1所述的胶质芽孢杆菌在生物肥中的应用。
3.权利要求1所述的胶质芽孢杆菌在制备用于防治苹果轮纹病、苹果褐斑病、苹果炭疽病、黄瓜根结线虫病的制剂中的应用。
4.一种微生物制剂，其特征在于，所述的微生物制剂包含权利要求1所述的胶质芽孢杆菌。
5.如权利要求4所述的微生物制剂，其特征在于，所述的微生物制剂还包含芽孢杆菌、乳酸菌、假单胞菌、土壤杆菌、固氮菌、根瘤菌、木霉菌、酵母菌、青霉菌、曲霉菌、根霉菌、链霉菌中的任意一种或多种。
6.如权利要求5所述的微生物制剂，其特征在于，所述的芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、海洋芽孢杆菌、内生芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌中的一种或多种。
7.如权利要求5或6所述的微生物制剂，其特征在于，所述的木霉菌为哈茨木霉，所述的青霉菌为淡紫拟青霉，所述的假单胞菌为沼泽红假单胞菌。
8.权利要求4-7任一所述的微生物制剂在生物肥中的应用。
CN202011276630.3A 2020-11-16 2020-11-16 一种胶质芽孢杆菌及其在农业生产中的应用 Active CN112342165B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011276630.3A CN112342165B (zh) 2020-11-16 2020-11-16 一种胶质芽孢杆菌及其在农业生产中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011276630.3A CN112342165B (zh) 2020-11-16 2020-11-16 一种胶质芽孢杆菌及其在农业生产中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112342165A CN112342165A (zh) 2021-02-09
CN112342165B true CN112342165B (zh) 2022-07-19

Family

ID=74362814

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011276630.3A Active CN112342165B (zh) 2020-11-16 2020-11-16 一种胶质芽孢杆菌及其在农业生产中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112342165B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114097459B (zh) * 2021-10-19 2023-06-13 中国农业科学院油料作物研究所 兼具防控黄曲霉及毒素与增加固氮酶活根瘤数方法及应用
CN114437965B (zh) * 2021-12-31 2022-12-20 河北科技师范学院 一种花生根际微生物菌系及其生物菌肥在土壤改良修复上的方法
CN115725452B (zh) * 2022-09-21 2023-07-07 山东佰渥康生物科技有限公司 一株奥托类芽孢杆菌、菌剂及其应用
CN116162577B (zh) * 2023-03-22 2023-08-04 湖北同光生物科技有限公司 一株胶质芽孢杆菌及其应用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1733902A (zh) * 2005-07-01 2006-02-15 南开大学 一种植酸酶分泌型转基因芽孢杆菌菌株及其应用
RU2408722C1 (ru) * 2009-06-24 2011-01-10 ООО "Промышленные Инновации" ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus mucilaginosus Bac 1208, ОБЛАДАЮЩИЙ ПОВЫШЕННЫМИ ФОСФОР И КАЛИЙ МОБИЛИЗУЮЩИМИ СВОЙСТВАМИ И УДОБРЕНИЕ НА ЕГО ОСНОВЕ
CN105274026B (zh) * 2015-10-30 2019-01-29 湖北大学 一种解钾微生物及其在作物种植中的应用
CN107227265B (zh) * 2016-10-28 2019-11-15 武汉合缘绿色生物股份有限公司 一种胶质芽孢杆菌菌株及微生物菌剂
CN110106126B (zh) * 2019-06-10 2021-03-09 山东省农业科学院农业资源与环境研究所 一株胶质芽孢杆菌及其在制备盐碱土壤改良剂中的应用
CN110423713B (zh) * 2019-08-07 2020-11-27 云南农业大学 一种樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的生物防治方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN112342165A (zh) 2021-02-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112342165B (zh) 一种胶质芽孢杆菌及其在农业生产中的应用
CN113755381B (zh) 一种防治植物病害的地衣芽孢杆菌及其应用
CN101845410B (zh) 一株植物内生枯草芽胞杆菌tr21及其应用
CN101760438B (zh) 一株广谱抗真菌植物内生枯草芽胞杆菌及其应用
CN110205273B (zh) 一种具有促生长及抗病作用的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN114437982B (zh) 一种提高土壤肥效的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN110724648B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用
CN110734871B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其在农业生产中的应用
CN109810924B (zh) 一种重度盐碱地改良方法
CN110734872B (zh) 一种甲基营养型芽孢杆菌及其在农业生产中的应用
CN109554319B (zh) 一种芽孢杆菌菌株及其应用
CN101012444A (zh) 水生拉恩氏菌hx2及其应用
CN110079484B (zh) 一种枯草芽孢杆菌及其在农业生产中的应用
CN112342173B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN109182219B (zh) 一株促梭罗草生长的莫海威芽孢杆菌及其应用
CN113862189A (zh) 玉米促生、益生、生防菌肥一体化制剂及其制备方法
CN112006035B (zh) 用于防治植物病害的微生物源杀菌剂及其制备方法
CN113832060B (zh) 一种抗重茬微生物菌剂及其在农业生产中的应用
CN108795797B (zh) 一株玉米根系内生阴沟肠杆菌及其应用
JP5374260B2 (ja) 農業用資材
CN112358992B (zh) 一种高效复合微生物肥及其在农业生产中的应用
CN114703098A (zh) 一种用于棉花枯萎病防治的贝莱斯芽孢杆菌菌剂的发酵制备及应用
CN111909863B (zh) 一株解淀粉芽孢杆菌及其用途
CN108587986B (zh) 一种具有防病和降解有机磷双重作用的解淀粉芽孢杆菌
CN114436698B (zh) 一种液体复合微生物肥及其在农业生产中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant