CN114276395A - 具有胰脂肪酶抑制活性的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷及其制备方法 - Google Patents
具有胰脂肪酶抑制活性的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及具有抑制胰脂肪酶活性的N6‑羟乙基‑5’‑乙酰基‑β‑核糖腺苷及制备方法，属于生物制品的提取制备技术领域。N6‑羟乙基‑5’‑乙酰基‑β‑核糖腺苷为白色粉末状物质，经一维和二维核磁共振、精确质谱鉴定分别得到N6‑羟乙基‑5’‑乙酰基‑β‑核糖腺苷结构式。本发明的N6‑羟乙基‑5’‑乙酰基‑β‑核糖腺苷通过培养蝉花，然后提取分离得到。本发明的N6‑羟乙基‑5’‑乙酰基‑β‑核糖腺苷可用于制备胰脂肪酶抑制剂，具有治疗肥胖作用的潜力，同时还可能对糖尿病有潜在作用。本发明的制备方法采取微生物发酵生产，环境友好，不受自然环境和资源影响，易实现工业化、自动化、连续化生产。
Description
技术领域
本发明属于生物制品的提取制备技术领域，涉及具有胰脂肪酶抑制活性的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷的提取、纯化、结构鉴定和活性测定。
背景技术
N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷是从一种蝉花(Cordyceps chanhua)培养物中分离制备得到的具有胰脂肪酶抑制活性的新型生物活性物质。
蝉花(Cordyceps chanhua)为麦角菌科(Clavicipitaceae)、虫草属(Cordyceps)的真菌，有多个同物异名：蝉虫草(Cordyceps cicadae),辛克莱蝉花(Cordycepssinclairii),辛克莱棒束孢(Isaria sinclairii),蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)和蝉棒束孢(Isaria cicadae)。是蝉花真菌感染昆虫后形成的虫草复合体，并作为冬虫夏草的代用品，具有重要经济价值。
抑制胰脂肪酶活性：胰脂肪酶是消化***中吸收脂肪最重要的酶，在吸收过程中起关键作用。具有抑制胰脂肪酶活性的生物活性物质可通过抑制胰脂肪酶活性而抑制脂肪的吸收，因而可用来预防和治疗肥胖等，蝉花作为一种药用真菌，其在日常保健、降脂降血糖方面有着很大的作用。在医药领域有着广阔的应用前景。
发明内容
为寻找新型天然高效的具有胰脂肪酶抑制活性的物质，发明人通过安徽农业大学微生物防治重点实验室蝉花RECF5833菌株代谢物进行活性研究，发现了蝉花培养物中提取的新化合物N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷具有明显的抑制胰脂肪酶活性的作用。
一种具有抑制胰脂肪酶活性的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷是从蝉花(Cordyceps chanhua)培养物中分离制备得到的，其结构式如下：
所述N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷呈白色粉末状，对胰脂肪酶的半抑制浓度IC50为200μg/mL。
所述具有抑制胰脂肪酶活性的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷的制备操作步骤如下：
(1)制备固体培养物
取国际菌库号WDCM1031的蝉花菌株，经过液体培养、固体培养，具体操作工序如下：
(1.1)一级种子培养
将所述蝉花菌株液体原种接种于萨氏(SDAY)固体平板培养基，每个培养皿接种100～300μL，于22～29℃恒温、培养8～16d，得到一级菌种；
萨氏(SDAY)固体平板培养基的配方为葡萄糖40g、蛋白胨10g、酵母浸出粉10g和琼脂20g，加水定容至1000mL；
(1.2)二级液体种子培养
将一级菌种的菌块按0.5～2cm2/100mL打散，接种至液体摇瓶培养基中；
液体摇瓶培养基：葡萄糖30～50g/L，蛋白胨8～12g/L，酵母浸出粉8～12g/L，蒸馏水定容；
在大于等于100mL三角瓶中加入30～50％三角瓶体积的液体培养基，每个三角瓶接种打散处理的固体平板上菌块，恒温振荡培养，温度22～29℃、转速180～240rpm，培养3～5d，即得到二级液体种子；
(1.3)固体培养
将二级液体种子接种到萨氏(SDAY)固体培养基上，接种量为每个培养皿150～300μL，涂布均匀，22～29℃恒温、培养4～8天，收集菌丝，在温度-50～130℃条件下干燥，得到干燥的固体培养物；
(2)培养物中有效成分的提取和精制
具体操作如下：
(2.1)固体培养物中有效成分的提取
用乙酸乙酯提取剂对固体培养物进行超声提取、滤膜过滤或离心分离、真空减压去除溶剂，得到有效成分提取物；
(2.2)提取物初步纯化
采用半制备型反相高效液相色谱对有效成分提取物进行初步纯化，在第四个组分中存在所需的化合物；在真空度-0.1～-0.08MP、温度10～60℃条件下减压蒸去提取剂，在低于150℃条件下干燥，得到白色的初步纯化物；
(2.3)精制
采用半制备型反相高效液相色谱对黄棕色初步纯化物进行精制，在乙腈溶液洗脱条件下，收集第一个最高峰值对应的化合物，得到N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷洗脱液，真空减压去除溶剂，干燥，得到白色粉末状的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷。
进一步限定的制备操作步骤如下：
步骤(2.1)中，将固体培养物按重量体积比1g：0.5～5mL加入乙酸乙酯，40KHz超声提取20～200分钟；经0.20～2.5μm滤膜过滤或4000～15000转/分钟条件下离心，得滤液或离心上清；滤液或离心上清在真空度-0.1～-0.08MP、温度10～60℃条件下减压蒸去乙酸乙酯，得到有效成分提取物。
步骤(2.2)中，利用半制备液相色谱，流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；洗脱条件：0到20min用5％升至60％流动相B洗脱；进样体积20～100μL；柱温20～40℃；流速2～5mL/min；检测波长为260nm；色谱柱：反相C-18柱；按峰收集，得到八个组分，其中第四个组分中具有所需的化合物；在真空度-0.1～-0.08MP、温度10～60℃条件下减压蒸去提取剂，在小于等于130℃条件下干燥，得到白色的初步纯化物。
步骤(2.3)中，色谱分离制备条件为：流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；洗脱条件：0到20min用15％流动相B洗脱；进样体积20～100μL；柱温20～40℃；流速2～5mL/min；检测波长为260nm，色谱柱：反相C-18柱；收集第一个最高峰值对应的化合物，得到N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷洗脱液，真空减压去除溶剂，干燥，得到白色粉末状的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷。
本发明的分析研究说明如下：
1、用液相色谱的方法对蝉花菌丝乙酸乙酯提取物进行了处理，得到权利要求中所说的蝉花提取物，具有生物活性的纯化物，即N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷。
2、活性试验发现N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷对胰脂肪酶的半数抑制浓度(IC50)为：200μg/mL。
3、活性化合物的化学结构分析
高分辨液质联用分析显示N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷，正离子354.1472(M+H)、负离子352.1396(M-H)，计算出的分子式为C14H19N5O6；
核磁共振分析数据见下表。
综质液质联用分析和核磁共振分析得出化学结构见下图：
本发明的有益技术效果体现在下述几个：
1、为了寻找新型天然高效的具有抑制胰脂肪酶活性的物质，发明人首先对大量蝉花菌株进行了培养，然后对培养物有效成分进行了提取和活性测定，发现一株蝉花培养物提取物具有抑制胰脂肪酶抑制活性。在大量培养和提取的基础上利用半制备色谱分离纯化出N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷，该化合物呈白色粉末状，经一维和二维核磁共振、精确质谱鉴定分别得到结构式。N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷具有较强的胰脂肪酶抑制活性，开拓了蝉花的一个新的应用领域。
2、本发明制备的胰脂肪酶抑制剂用途广泛，可作为医疗药物，起降脂、降血糖、抗老化等作用。
3、本发明由于采取微生物发酵生产，不受环境和资源影响，易实现工业化、自动化，不受环境和自然资源的影响。
4、按本发明工艺方法生产的产品成本低，工艺简便、工艺稳定、易调控、成功率高。
5、本发明生产设备投资可大可小，生产灵活，适合多种规模的企业投资。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步地描述。
实施例1
具有抑制胰脂肪酶活性的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷的制备操作步骤如下：
(1)制备固体培养物
取国际菌库号WDCM1031的蝉花菌株，经过液体培养、固体培养，具体操作工序如下：
(1.1)一级种子培养
将蝉花菌株液体原种接种于萨氏(SDAY)固体平板培养基，每个平板接种300μL，于29℃恒温、培养16d，得到一级菌种；
(1.2)二级液体种子培养
将一级菌种菌块按2cm2/100mL打散后接种至液体摇瓶培养基中培养。
液体摇瓶培养基：葡萄糖50g/L，蛋白胨12g/L，酵母浸出粉12g/L，蒸馏水定容；
在500mL三角瓶中加入50％三角瓶体积的液体培养基，每个三角瓶接种固体平板上菌块5cm2，接种后置于恒温振荡培养箱，温度29℃、转速240rpm，培养5d，即得到二级菌种；
(1.3)固体培养
将二级液体种子接种到萨氏(SDAY)固体培养基上，接种量为每个培养皿300μL，涂布均匀，放入29℃恒温培养箱培养8天，收集菌丝，在温度130℃条件下干燥，得到干燥的固体培养物。
(2)培养物中有效成分的提取和精制
具体操作如下：
(2.1)固体培养物中有效成分的提取
在固体培养物中按重量体积比1g：5mL加入乙酸乙酯提取，40KHz超声提取200分钟；经2.5μm滤膜过滤，得滤液；滤液在真空度-0.1MP、温度60℃条件下减压蒸去提取剂，得到有效成分提取物。
(2.2)提取物的初步纯化
利用半制备液相色谱，流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；洗脱条件：0到20min用5～60％流动相B洗脱；进样体积100μL；柱温40℃；流速5mL/min；检测波长为260nm；色谱柱：反相C-18柱；按峰收集，得到8个组分，所需要的化合物在第4组分中。在真空度-0.1MP、温度60℃条件下减压蒸去提取剂，在130℃条件下干燥，得到白色的初步纯化物。
(2.3)初步纯化物的精制
色谱分离制备条件为：流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；洗脱条件：0到20min用15％流动相B洗脱；进样体积100μL；柱温40℃；流速5mL/min；检测波长为260nm，色谱柱：反相C-18柱；收集第一个最高峰值对应的化合物，得到N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷洗脱液，真空减压去除溶剂，干燥，得到白色粉末状的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷。经HPLC-MS分析得出纯度在90％以上，其结构如下：
从蝉花提取物中纯化出来的一种核苷类化合物：N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷，经活性实验发现，该化合物对胰脂肪酶活性有明显的抑制作用，半数抑制浓度(IC50)为200μg/mL。
实施例2
具有抑制胰脂肪酶活性的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷的制备操作步骤如下：
(1)制备固体培养物
取国际菌库号WDCM1031的蝉花菌株，经过液体培养、固体培养，具体操作工序如下：
(1.1)一级种子培养
将蝉花菌株液体原种接种于萨氏(SDAY)固体平板培养基，每个平板接种100μL，于22℃恒温、培养8d，得到一级菌种。
(1.2)二级液体种子培养
将一级菌种的菌块按0.5cm2/100mL打散，接种至液体摇瓶培养基中培养；
液体摇瓶培养基：葡萄糖30g/L，蛋白胨8g/L，酵母浸出粉8g/L，蒸馏水定容；
在100mL三角瓶中加入30％三角瓶体积的液体培养基，每个三角瓶接种固体平板0.15cm2菌块，置于恒温振荡培养箱，温度22℃、转速180rpm，培养3d，即得到二级液体种子。
(1.3)固体培养
将二级液体种子接种到萨氏(SDAY)固体培养基上，接种量为每个培养皿150μL，涂布均匀，放入22℃恒温培养箱培养4天，收集菌丝，在温度-50℃条件下干燥，得到干燥的固体培养物；
(2)培养物中有效成分的提取和精制
具体操作如下：
(2.1)固体培养物中有效成分的提取
在固体培养物中按重量体积比1g：0.5mL加入乙酸乙酯提取剂，40KHz超声提取20分钟；经0.20μm滤膜过滤，得滤液；滤液在真空度-0.08MP、温度10℃条件下减压蒸去提取剂，得到有效成分提取物。
(2.2)有效成分提取物的初步纯化
利用半制备液相色谱，流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；洗脱条件：0到20min用5％升至60％流动相B洗脱；进样体积20μL；柱温20℃；流速2mL/min；检测波长为260nm；色谱柱：反相C-18柱；按峰收集，分为8个组分，所述化合物在组分4中。在真空度-0.08MP、温度10℃条件下减压蒸去提取剂，在-50℃条件下干燥，得到白色的初步纯化物。
(2.3)初步纯化物的精制
色谱分离制备条件为：流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；洗脱条件：0到20min用15％流动相B洗脱；进样体积20μL；柱温20℃；流速2mL/min；检测波长为260nm，色谱柱：反相C-18柱；收集第一个最高峰值对应的化合物，得到N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷洗脱液，真空减压去除溶剂，干燥，得到白色粉末状的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷。经HPLC-MS分析得出纯度在90％以上，其结构如下：
从蝉花提取物中纯化出来的一种核苷类化合物：N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷，经活性实验发现，该化合物对胰脂肪酶活性有明显的抑制作用，半数抑制浓度(IC50)为200μg/mL。
实施例3
具有抑制胰脂肪酶活性的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷的制备操作步骤如下：
(1)制备固体培养物
取国际菌库号WDCM1031的蝉花菌株，经过液体培养、固体培养，具体操作工序如下：
(1.1)一级种子培养
将蝉花菌株液体原种接种于萨氏(SDAY)固体平板培养基，每个平板接种200μL，于25℃恒温、培养12d，得到一级菌种。
(1.2)二级液体种子培养
将一级菌种的菌块按1cm2/100mL打散，接种至液体摇瓶培养基中培养；
液体摇瓶培养基：葡萄糖40g/L，蛋白胨10g/L，酵母浸出粉10g/L，蒸馏水定容；
在250mL三角瓶中加入40％三角瓶体积的液体培养基，每个三角瓶接种固体平板菌块1cm2，接种后置于恒温振荡培养箱，温度25℃、转速200rpm，培养4d，即得到二级液体种子。
(1.3)固体培养
将二级液体种子接种到萨氏(SDAY)固体培养基上，接种量为每个培养皿225μL，涂布均匀，放入25℃恒温培养箱培养6天，收集菌丝，在温度70℃条件下干燥，得到干燥的固体培养物。
(2)培养物中有效成分的提取和精制
具体操作如下：
(2.1)固体培养物中有效成分的提取
在固体培养物中按重量体积比1g：3mL加入乙酸乙酯提取剂，40KHz超声提取120分钟；经15000转/分钟条件下离心，得离心上清；离心上清在真空度-0.09MP、温度40℃条件下减压蒸去乙酸乙酯，得到有效成分提取物。
(2.2)有效成分提取物的初步纯化
利用半制备液相色谱，流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；洗脱条件：0到20min用5％升至60％流动相B洗脱；进样体积60μL；柱温30℃；流速3.5mL/min；检测波长为260nm；色谱柱：反相C-18柱；按峰收集，分为8个组分，所述化合物在组分4中。在真空度-0.09MP、温度40℃条件下减压蒸去提取剂，在-30℃条件下干燥，得到白色的初步纯化物。
(2.3)初步纯化物的精制
色谱分离制备条件为：流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；洗脱条件：0到20min用15％流动相B洗脱；进样体积60μL；柱温30℃；流速3.5mL/min；检测波长为260nm，色谱柱：反相C-18柱；收集第一个最高峰值对应的化合物，得到N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷洗脱液，真空减压去除溶剂，干燥，得到白色粉末状的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷。经HPLC-MS分析得出纯度在90％以上，其结构如下：
从蝉花提取物中纯化出来的一种核苷类化合物：N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷，经活性实验发现，该化合物对胰脂肪酶活性有明显的抑制作用，半数抑制浓度(IC50)为200μg/mL。
实施例4
具有抑制胰脂肪酶活性的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷的制备操作步骤如下：
(1)制备固体培养物
取国际菌库号WDCM1031的蝉花菌株，经过液体培养、固体培养，具体操作工序如下：
(1.1)一级种子培养
将蝉花菌株液体原种接种于萨氏(SDAY)固体平板培养基，每个平板接种200μL，于25℃恒温、培养12d，得到一级菌种。
(1.2)二级液体种子培养
将一级菌种的菌块按1cm2/100mL打散，接种至液体摇瓶培养基中培养；
液体摇瓶培养基：葡萄糖40g/L，蛋白胨10g/L，酵母浸出粉10g/L，蒸馏水定容；
在250mL三角瓶中加入40％三角瓶体积的液体培养基，每个三角瓶接种固体平板菌块1cm2，置于恒温振荡培养箱，温度25℃、转速200rpm，培养4d，即得到二级液体种子。
(1.3)固体培养
将二级液体种子接种到萨氏(SDAY)固体培养基上，接种量为每个培养皿225μL，涂布均匀，放入25℃恒温培养箱培养6天，收集菌丝，在温度60℃条件下干燥，得到干燥的固体培养物。
(2)培养物中有效成分的提取和精制
具体操作如下：
(2.1)固体培养物中有效成分的提取
在固体培养物中按重量体积比1g：3mL加入乙酸乙酯提取剂，40KHz超声提取120分钟；经4000转/分钟条件下离心，得离心上清；离心上清在真空度-0.09MP、温度40℃条件下减压蒸去乙酸乙酯，得到有效成分提取物。
(2.2)有效成分提取物的初步纯化
利用半制备液相色谱，流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；洗脱条件：0到20min用5％升至60％流动相B洗脱；进样体积60μL；柱温30℃；流速3.0mL/min；检测波长为260nm；色谱柱：反相C-18柱；按峰收集，分为8个组分，所需要的化合物在第4个组分中。在真空度-0.09MP、温度40℃条件下减压蒸去提取剂，在-30℃条件下干燥，得到白色的初步纯化物。
(2.3)初步纯化物的精制
色谱分离制备条件为：流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；洗脱条件：0到20min用15％流动相B洗脱；进样体积60μL；柱温30℃；流速3.0mL/min；检测波长为260nm，色谱柱：反相C-18柱；收集第一个最高峰值对应的化合物，得到N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷洗脱液，真空减压去除溶剂，干燥，得到白色粉末状的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷。经HPLC-MS分析得出纯度在90％以上，其结构如下：
从蝉花提取物中纯化出来的一种核苷类化合物：N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷，经活性实验发现，该化合物对胰脂肪酶活性有明显的抑制作用，半数抑制浓度(IC50)为200μg/mL。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种具有抑制胰脂肪酶活性的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷，其特征在于：是从蝉花(Cordyceps chanhua)培养物中分离制备得到的，其结构式如下：
所述N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷呈白色粉末状，对胰脂肪酶的半抑制浓度IC50为200μg/mL。
2.根据权利要求1所述N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷的制备方法，其特征在于操作步骤如下：
(1)制备固体培养物
取国际菌库号WDCM1031的蝉花菌株，经过液体培养、固体培养，具体操作工序如下：
(1.1)一级种子培养
将所述蝉花菌株液体原种接种于萨氏(SDAY)固体平板培养基，每个培养皿接种100～300μL，于22～29℃恒温、培养8～16d，得到一级菌种；
萨氏(SDAY)固体平板培养基的配方为葡萄糖40g、蛋白胨10g、酵母浸出粉10g和琼脂20g，加水定容至1000mL；
(1.2)二级液体种子培养
将一级菌种的菌块按0.5～2cm2/100mL打散，接种至液体摇瓶培养基中；
液体摇瓶培养基：葡萄糖30～50g/L，蛋白胨8～12g/L，酵母浸出粉8～12g/L，蒸馏水定容；
在大于等于100mL三角瓶中加入30～50％三角瓶体积的液体培养基，每个三角瓶接种打散处理的固体平板上菌块，恒温振荡培养，温度22～29℃、转速180～240rpm，培养3～5d，即得到二级液体种子；
(1.3)固体培养
将二级液体种子接种到萨氏(SDAY)固体培养基上，接种量为每个培养皿150～300μL，涂布均匀，22～29℃恒温、培养4～8天，收集菌丝，在温度-50～130℃条件下干燥，得到干燥的固体培养物；
(2)培养物中有效成分的提取和精制
具体操作如下：
(2.1)固体培养物中有效成分的提取
用乙酸乙酯提取剂对固体培养物进行超声提取、滤膜过滤或离心分离、真空减压去除溶剂，得到有效成分提取物；
(2.2)提取物初步纯化
采用半制备型反相高效液相色谱对有效成分提取物进行初步纯化，在第四个组分中存在所需的化合物；在真空度-0.1～-0.08MP、温度10～60℃条件下减压蒸去提取剂，在低于150℃条件下干燥，得到白色的初步纯化物；
(2.3)精制
采用半制备型反相高效液相色谱对黄棕色初步纯化物进行精制，在乙腈溶液洗脱条件下，收集第一个最高峰值对应的化合物，得到N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷洗脱液，真空减压去除溶剂，干燥，得到白色粉末状的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(2.1)中，将固体培养物按重量体积比1g：0.5～5mL加入乙酸乙酯，40KHz超声提取20～200分钟；经0.20～2.5μm滤膜过滤或4000～15000转/分钟条件下离心，得滤液或离心上清；滤液或离心上清在真空度-0.1～-0.08MP、温度10～60℃条件下减压蒸去乙酸乙酯，得到有效成分提取物。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(2.2)中，利用半制备液相色谱，流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；洗脱条件：0到20min用5％升至60％流动相B洗脱；进样体积20～100μL；柱温20～40℃；流速2～5mL/min；检测波长为260nm；色谱柱：反相C-18柱；按峰收集，得到八个组分，其中第四个组分中具有所需的化合物；在真空度-0.1～-0.08MP、温度10～60℃条件下减压蒸去提取剂，在小于等于130℃条件下干燥，得到白色的初步纯化物。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(2.3)中，色谱分离制备条件为：流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；洗脱条件：0到20min用15％流动相B洗脱；进样体积20～100μL；柱温20～40℃；流速2～5mL/min；检测波长为260nm，色谱柱：反相C-18柱；收集第一个最高峰值对应的化合物，得到N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷洗脱液，真空减压去除溶剂，干燥，得到白色粉末状的N6-羟乙基-5’-乙酰基-β-核糖腺苷。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114057806A (zh) * | 2021-11-12 | 2022-02-18 | 贵州大学 | 一种分离纯化蝉拟青霉5704s菌丝体中HEA的方法 |
| NL2033899B1 (en) * | 2022-10-21 | 2024-05-08 | Univ Anhui Agricultural | Four nucleosides of chanhua having activity of promoting proliferation of macrophages and renal cells and preparation method thereof |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113480587A (zh) * | 2021-05-20 | 2021-10-08 | 徐州工程学院 | 一种高效提取蝉花虫草子实体中n6-(2-羟乙基)腺苷的方法 |
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Patent Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN113480587A (zh) * | 2021-05-20 | 2021-10-08 | 徐州工程学院 | 一种高效提取蝉花虫草子实体中n6-(2-羟乙基)腺苷的方法 |
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